CN121038800A - 包含卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌和2’-岩藻糖基乳糖的组合物 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种包含卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌和2’‑岩藻糖基乳糖的组合物，其用于作为支持孕妇中健康阴道微生物群的补充剂使用。

Description

包含卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌和 2’-岩藻糖基乳糖的组合物

技术领域

本公开涉及包含经选择的乳杆菌和2’-岩藻糖基乳糖（2’-FL）的组合物。还考虑了所述组合物支持阴道微生物群以及阴道内有益微生物群的生长的用途。

背景技术

据估计，每年全球有超过10亿女性患有泌尿生殖道感染（例如尿路感染（UTI)、细菌性阴道病（BV）和酵母阴道炎）。虽然抗微生物剂可以有效地提供临床补救，但使用此类药剂可能会导致不良影响，诸如破坏使用者的微生物群并增加耐抗生素病原体。

据了解，泌尿生殖道病原体的作用方式涉及肠道中微生物群的形成。肠道微生物群随后成为侵入泌尿生殖道的泌尿生殖道病原体的储存库。泌尿生殖道微生物群随后成为阴道感染（例如由引起阴道病的酵母和细菌引起）和尿路感染（例如由引起尿路感染的生物体引起）的储存库。研究表明，插入到阴道中的子宫托中提供的经特殊选择的益生菌乳杆菌，可以定植（Reid等人，1994）并且与肠球菌和其它尿路病原体的定植竞争（Bruce&Reid，1998）。本领域还描述了乳杆菌用来预防和治疗泌尿生殖道感染的用途（Gardiner等人，Clin Diagn Lab Immunol. 2002 Jan; 9(1): 92–96; EP2509610）。在绝经期，阴道内乳杆菌的数量会下降。

由于阴道感染是导致早产的重要疾病机制，因此在怀孕期间维持阴道内乳杆菌菌群的自然、健康平衡特别重要。乳杆菌缺乏会搅乱阴道内的微生物平衡，可能导致细菌性阴道病综合征，这可能与正常存在的乳杆菌在数量和质量上转变为以厌氧细菌为主的混合菌群有关。细菌性阴道病的特征是乳杆菌的丧失和革兰氏可变杆和革兰氏阴性杆的伴随增加，其中主要包括阴道加德纳菌以及拟杆菌、普雷沃氏菌和动弯杆菌菌种。阴道乳杆菌的丧失也会使非孕女性容易受到感染，从而导致子宫内膜炎或甚至盆腔炎疾病。在绝经期，乳杆菌可能会耗尽，并且与细菌性阴道病和尿路感染相关的致病微生物的定植可能会增加。在绝经后女性中，阴道雌三醇疗法可减少大肠杆菌定植并且增加乳杆菌的数量，从而使复发性泌尿道和生殖道感染的发病率显著下降。

选择性地刺激有益微生物群的方法是众所周知的。例如，给药活的有益细菌（益生菌）、给药有益微生物群在其上生长的底物（益生元）或其组合。人乳低聚糖（HMO）是一种不可消化的低聚糖（NDO），它形成益生元分子的混合物，为有益微生物群提供底物。HMO是母乳的一部分，有助于婴儿建立最佳健康所需的有益微生物群。然而，HMO也可用于成年受试者。人乳中最丰富的HMO是2’-岩藻糖基乳糖。

需要可用于支持健康的阴道微生物群并有助于缓解孕妇中阴道细菌失衡的组合物。此外，对阴道微生物群具有有益影响的益生菌组合物也令人感兴趣。

发明内容

本公开提供了用于支持孕妇中健康阴道微生物群的组合物、用途、方法等。特别地，本组合物包含卷曲乳杆菌（DSM 22566）、鼠李糖乳杆菌（DSM 22560）、詹氏乳杆菌（DSM22567）和格氏乳杆菌（DSM 22583）以及2’-岩藻糖基乳糖。

已知包含卷曲乳杆菌（DSM 22566）、鼠李糖乳杆菌（DSM 22560）、詹氏乳杆菌（DSM22567）和格氏乳杆菌（DSM 22583）的组合物支持阴道健康，并且可以品牌名称ASTARTE™商业上获得。已知包括2’-岩藻糖基乳糖的HMO为婴儿的微生物群提供支持，并且在某些情况下，还为成人的微生物群提供支持。然而，一般认为2’-岩藻糖基乳糖不是乳杆菌的良好底物（参见例如Salli等人，J. Agric. Food Chem. 2021, 69, 170182）。

尽管不希望受理论的束缚，但可以相信的是，本组合物以支持健康肠道微生物群的方式为孕妇提供了益生菌来源，导致了有益于阴道健康的微生物的健康储存库。本组合物还可用于其它女性群体，诸如例如患有反复泌尿生殖道问题/感染的女性、正在服用抗生素或其它破坏阴道微生物群的药物的女性、或绝经期/绝经后的女性。

具体实施方式

除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本领域技术人员通常理解的相同含义。尽管在本公开的实践中可以使用与本文中描述的方法和材料等效或类似的任何方法和材料，但是描述了典型的方法和材料。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法均可按任何合适的顺序进行。

除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，在描述本发明的上下文中（特别是在以下权利要求的上下文中），术语“a（一）”和“an（一）”和“所述（该，the）”以及类似的指称的使用应解释为涵盖单数和复数。术语“包含（comprising）”、“具有（having）”、“包括（including）”和“含有（containing）”应解释为开放式术语（即是指“包括但不限于”），除非另有说明。本文中对数值范围的叙述仅是为了用作一种用于单独引用落入包括两个端值在内的范围内的每个单独值的简便方法，除非本文另有说明，并且每个单独的值都并入说明书中，就好像它在本文中被单独叙述一样。本文提供的任何和所有示例或示例性语言（例如“诸如”）的使用仅旨在更好地阐明本发明，并且除非另有声明，否则不对本发明的范围构成限制。

如本文所用，术语“和/或”旨在是指组合（“和”）和排他（“或”）使用，即“A和/或B”旨在是指“单独的A，或单独的B，或A和B一起”。

如本文使用的，术语“有效量”、“有效浓度”或“有效剂量”定义为足以改善动物整体健康并带来与实施例中所证实的类似益处的细菌菌株的量、浓度或剂量。实际有效剂量的绝对数取决于多种因素，包括讨论中的受试者的健康状况以及存在的其它成分。细菌菌株的“有效量”、“有效浓度”或“有效剂量”可以通过本领域技术人员已知的常规测定来确定。

如本文使用的，术语“分离的”是指本文描述的细菌菌株处于自然界中不存在的形式或环境中，即，该菌株至少部分地从自然界中与其相关的一种或多种或所有天然存在的成分中取出。

本文所用的细菌“菌株”是指在生长或繁殖时基因保持不变且源自单一分离物或纯培养物的细菌。益生菌按其属（例如双歧杆菌）、种和亚种（例如动物乳亚种）和菌株（例如DSM 15954和/或BB-12^®）进行分类。FAO/WHO指出，益生菌效应是菌株特异性的，因此特定菌株的大多数益生菌特性不能推广到同一物种的其它菌株。

如本文使用的，术语“益生菌”是指活的或冻干的微生物的培养物、死的微生物、微生物碎片以及微生物提取物或上清液，当应用于人或动物时，会有益地影响宿主（Hill等人（2014）专家共识文件，国际益生菌和益生元科学协会。关于术语益生菌的范围和适当用途的共识声明（Hill et al. (2014) Expert Consensus Document, The InternationalScientific Association for Probiotics and Prebiotics. Consensus statement onthe scope and appropriate use of the term probiotic））。

说明书中的任何语言都不应被解释为表明任何未要求保护的要素对于本发明的实践是必要的。

已经参考各种实施方式、方面、示例等描述了本发明。无意彼此孤立地解读这些要素。因此，本公开提供了两个或更多个所述实施方式、方面、示例等的组合。

本文描述的所有实施方式均旨在落入所公开的本发明的范围之内。从下面参考整个说明书对优选实施方式的详细描述，本发明的这些和其它实施方式对本领域技术人员而言将变得显而易见，本发明不限于所公开的任何特定优选实施方式。

本公开提供了一种组合物，包含卷曲乳杆菌（DSM 22566）、鼠李糖乳杆菌（DSM22560）、詹氏乳杆菌（DSM 22567）和格氏乳杆菌（DSM 22583）以及2’-岩藻糖基乳糖。

本组合物包含有效量的益生菌。例如，每种前述的乳杆菌物种存在的浓度范围为0.05 x 10⁹CFU/g至30 x 10⁹CFU/g，优选0.5 x 10⁹CFU/g至25 x 10⁹CFU/g。根据一个实施方式，本组合物包含在3 x 10⁹至22 x 10⁹CFU/g浓度范围内的卷曲乳杆菌（DSM 22566）、在3x 10⁹至22 x 10⁹CFU/g浓度范围内的鼠李糖乳杆菌（DSM 22560）、在0.7 x 10⁹至6 x10⁹CFU/g浓度范围内的詹氏乳杆菌（DSM 22567）、在1 x 10⁹至8 x 10⁹CFU/g浓度范围内的格氏乳杆菌（DSM 22583）。

本组合物可以包含下表中列出的成分：

*2’-岩藻糖基乳糖，具有使用符合DIN ISO 3310-1的筛子测量的粒径：

通过#230目（63 µm）的百分比 -<15%。

通过#100目（150 µm）的百分比 - ≥60%。

通过#45目（355 µm）的百分比 - ≥90%。

通过#20目（850 µm）的百分比 - 100%。

本组合物可以包含附加组分。例如，至少一种其它细菌菌株、维生素、矿物质、益生元、纤维或其组合。其它组分可以是例如果糖低聚糖（FOS）、半乳糖低聚糖（GOS）、人乳低聚糖（HMO）或其组合。

本组合物可以包含生物素。例如，所述组合物可以包含至少约1 μg、至少约2 μg、至少约5 μg、至少约10 μg、至少约15 μg、至少约17 μg生物素。

本组合物可以包含至少一种其它细菌菌株，例如乳酸乳球菌乳亚种双乙酰型（Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis）、乳酸乳球菌乳脂亚种（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、乳酸乳球菌乳亚种（Lactococcus lactis subsp. lactis）、属于乳杆菌属的任何菌株（包括但不限于嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种、德氏乳杆菌保加利亚亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、乳酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌）、属于双歧杆菌属的任何菌株（包括但不限于青春双歧杆菌、角双歧杆菌、动物双歧杆菌乳亚种、两歧双歧杆菌、短双岐杆菌、链状双歧杆菌（Bifidobacterium catenulatum）、齿双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、长双歧杆菌长亚种、大双歧杆菌、假小链双歧杆菌）、或者阿克曼菌属、厌氧棒状菌属（Anaerostipes）、丁酸球菌属（Butyricicoccus）、克里斯滕森氏菌属（Christensenella）、梭菌属、粪球菌属、Dorea、真杆菌属、粪杆菌属或罗斯氏菌属或红蝽菌科的任何菌株，以及前述的适当组合。

本组合物可以包含选自以下的细菌的至少一种菌株：以DSM 15954保藏的动物双歧杆菌乳亚种、以DSM 13241保藏的嗜酸乳杆菌、以ATCC 53103保藏的鼠李糖乳杆菌、以ATCC 55544保藏的副干酪乳杆菌副干酪亚种、以LMG-17806保藏的副干酪乳杆菌、以DSM15957保藏的嗜热链球菌、以NM02/31074保藏的发酵乳杆菌、以CCTCC M204012保藏的副干酪乳杆菌副干酪亚种及其合适的组合。

本组合物可以包含任何适合给药于受试者的形式的益生菌。在优选实施方式中，所述组合物可以包含干燥形式的细菌，其可以通过冷冻干燥、喷雾干燥、冻干等获得。

如果将细菌冷冻干燥，一般在冷冻干燥前将其与冷冻保护剂混合。本文使用的术语“冷冻保护剂”是指能够提高细菌在冷冻和/或干燥过程中的存活率并提高其储存稳定性的物质。本文使用的冷冻保护剂优选包含糖类和/或糖醇，诸如肌醇。

糖类可以是单糖、二糖、低聚糖或多糖，或至少两种糖类的混合物。有用的单糖包括例如葡萄糖（也称为右旋糖）、果糖、核糖和半乳糖，并且有用的二糖包括例如蔗糖、海藻糖、麦芽糖和乳糖。所述组合物可以包含一种或多种单糖或二糖，诸如一种、两种或三种或甚至更多种不同的糖类。

冷冻保护剂可以包含二糖（诸如蔗糖）和多糖（诸如麦芽糊精）的混合物。

冷冻保护剂可以进一步包含肽、蛋白质、蛋白质水解物或其混合物。要用的肽和蛋白质的示例是酪蛋白、豌豆、乳清、白蛋白、谷氨酸或明胶，以及它们的任何分离物或水解产物。还可以存在其它添加剂，例如抗氧化剂，诸如抗坏血酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸三钠二水合物和半胱氨酸盐酸盐。脱脂奶粉和酵母提取物也可以是成分。

目前，存在约200种已知的、结构各异的HMO。它们可分为岩藻糖基化、唾液酸化和中性核心HMO。母乳中HMO的组成因母亲而异，并且在哺乳期间有所不同。80%所有女性体内的主要低聚糖是2’-岩藻糖基乳糖，其在人类母乳中的浓度约为2.5 g/L，其它丰富的低聚糖包括乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖和乳糖-N-岩藻糖五糖。已经发现，每种单独的HMO的浓度在哺乳的不同时期（初乳、过渡乳、成熟乳和晚期乳）都会发生变化，并且取决于母亲的遗传分泌状态和妊娠期长度等各种因素。

一般来说，HMO来源于乳糖，可以被四种单糖（N-乙酰基-D-葡萄糖胺、D-半乳糖、唾液酸和/或L-岩藻糖）修饰以形成低聚糖。

本组合物包含2’-岩藻糖基乳糖。所述组合物可以被配制成益生菌菌株和HMO的组合或单独组合物。所述组合物可以包含其它人乳低聚糖（HMO），诸如例如3-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖及其组合。HMO可以是任何合适的组合。例如，2’-岩藻糖基乳糖可以与3-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖、乳糖-N-四糖和乳糖-N-新四糖中的任意一种、两种、三种、四种或五种组合。在一个实施方式中，HMO混合物包含2’-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖和乳糖-N-四糖。

本组合物可以包含任何合适量的2’-岩藻糖基乳糖，诸如例如至少约0.001 g、至少约0.01 g、至少约0.05 g、至少约0.1 g、至少约0.5 g重量。所述组合物可以包含例如少于约20 g、少于约10 g、少于约5 g、少于约4 g、少于约3 g、少于约2 g、少于约1.5 g的2’-岩藻糖基乳糖。

用HMO配制组合物可能会有问题。已经发现，通过控制HMO的粒径分布（PSD），可以获得更可重复且更一致的组成。虽然不希望受理论的束缚，但可以相信的是，略窄的PSD可以提高HMO的流动性，使其能够更有效地与其它成分混合。此外，可以相信的是，在一定范围内的PSD提供了更好的溶解度曲线。可以使用标准方法确定HMO的粒径，诸如使用筛塔，其使用预定的振幅在预定的时间后将粉末分离成不同的级分。此方法中使用的筛子可以是符合DIN ISO 3310-1的筛子。

优选本组合物中使用的2’-岩藻糖基乳糖（或其它HMO）具有以下粒径特征：

通过#230目（63 µm）的百分比-小于约20%、小于约18%、小于约16%、小于或等于约15%。

通过#100目（150 µm）的百分比-大于约75%、大于约70%、大于约65%、大于或等于约60%。

通过#45目（355 µm）的百分比-大于约95%、大于约92%、大于或等于约90%。

通过#20目（850 µm）的百分比-100%。

优选本公开的组合物通过口服给药。因此，所述组合物通常为适合口服给药的形式。所述组合物可以是固体或液体组合物。所述组合物可以是单位剂量形式。例如，所述组合物可以是胶囊、锭剂、丸剂、片剂、软凝胶、小袋、棒、棒粉，或更一般的组合物，诸如油滴、乳剂或糊剂，或本领域技术人员确定对活生物体是有效载体的任何其它合适的载体。

可以例如使用合适的聚合物基质来封装组合物，以改善组合物的长期稳定性和储存。本领域技术人员将理解，可以使用本领域技术人员已知的任何合适的封装材料或基质以及封装方法和技术。

所述组合物可以包括在膳食补充剂或药物组合物中，或者可以是饲料产品或食品产品（诸如发酵乳制品，例如酸奶）的一部分。

本领域技术人员将理解，可以根据情况和受试者的状况，按照所需的剂量水平和给药方案来给药本文所公开的组合物。可以基于本申请的教导确定合适的剂量方案。可以调整剂量方案来为受试者的阴道微生物群提供最佳支持。可以理解的是，给药的确切量和速率将取决于许多因素，诸如受试者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食要求。基于本文的教导，本领域技术人员可以通过常规试验和实验，根据具体情况确定合适的剂量方案。

在示例性实施方式中，可以每天给药所述组合物，持续至少1天。替代地，可以每天给药所述组合物一次或多次，持续至少1天、2天、4天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周或更长时间。

本组合物可以包含任何合适量的2’-岩藻糖基乳糖，诸如例如，每天摄入至少约0.001 g、每天摄入至少约0.01 g、每天摄入至少约0.05 g、每天摄入至少约0.1 g、每天摄入至少约0.5 g。例如，所述组合物可以包含每天摄入少于约20 g、每天摄入少于约10 g、每天摄入少于约5 g、每天摄入少于约4 g、每天摄入少于约3 g、每天摄入少于约2 g、每日摄入少于约1.5 g的2’-岩藻糖基乳糖。

本公开提供了一种支持怀孕受试者的阴道微生物群的方法。所述方法包括向所述受试者提供有效量的本组合物。例如，可以每天一次向受试者提供本组合物，持续一周或更长时间，优选一个月或更长时间。

本公开提供了本组合物用于支持怀孕受试者的阴道微生物群的用途。

Claims (9)

1. 一种组合物，包含卷曲乳杆菌（DSM 22566）、鼠李糖乳杆菌（DSM 22560）、詹氏乳杆菌（DSM 22567）、格氏乳杆菌（DSM 22583）和2’-岩藻糖基乳糖，用于作为支持孕妇中健康阴道微生物群的补充剂使用。

2. 根据权利要求1所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物包含至少0.5 x 10⁹CFU/g的卷曲乳杆菌（DSM 22566）、鼠李糖乳杆菌（DSM 22560）、詹氏乳杆菌（DSM 22567）、格氏乳杆菌（DSM 22583）。

3. 根据权利要求1或2所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物包含至少0.1 g的2’-岩藻糖基乳糖。

4. 根据前述任一项权利要求所述的用于使用的组合物，其中，所述2’-岩藻糖基乳糖具有使用符合DIN ISO 3310-1的筛子测量的如下粒径分布：小于约20%通过#230目（63 μm），大于约65%通过#100目（150 μm），大于约92%通过#45目（355 μm），以及100%通过#20目（850 μm）。

5.根据前述任一项权利要求所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物为口服剂型。

6.根据前述任一项权利要求所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物为胶囊形式。

7.根据前述任一项权利要求所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物为干粉形式。

8. 根据权利要求1或2所述的用于使用的组合物，其中，所述组合物包含至少0.1 g每天摄入的2’-岩藻糖基乳糖。

9.一种支持孕妇的阴道微生物群的方法，所述方法包括向所述女性给药有效量的根据前述任一项权利要求所述的组合物。