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CN121021476A - 吡嗪甲酰胺类化合物及其制备方法、药物组合物和应用 - Google Patents

吡嗪甲酰胺类化合物及其制备方法、药物组合物和应用

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CN121021476A
CN121021476A CN202410659941.XA CN202410659941A CN121021476A CN 121021476 A CN121021476 A CN 121021476A CN 202410659941 A CN202410659941 A CN 202410659941A CN 121021476 A CN121021476 A CN 121021476A
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CN
China
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compound
isomer
heterocyclic group
trans
pharmaceutically acceptable
Prior art date
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Pending
Application number
CN202410659941.XA
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张阔军
肖易倍
蒋晟
王淋
伍昱星
倪翔
章翔宇
王天雨
王振凯
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China Pharmaceutical University
Original Assignee
China Pharmaceutical University
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Publication date
Application filed by China Pharmaceutical University filed Critical China Pharmaceutical University
Priority to CN202410659941.XA priority Critical patent/CN121021476A/zh
Publication of CN121021476A publication Critical patent/CN121021476A/zh
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Abstract

本发明公开了一种吡嗪甲酰胺类化合物及其药物组合物和应用。本发明的吡嗪甲酰胺类化合物(式I)能够高效、高选择性地降解造血祖细胞激酶1，而对同家族的其他蛋白无降解活性。相对于造血祖细胞激酶1小分子抑制剂，其能够更高效地刺激T细胞抗肿瘤免疫应答，释放效应细胞因子，具有更强的抗肿瘤活性。

Description

吡嗪甲酰胺类化合物及其制备方法、药物组合物和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种吡嗪甲酰胺类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。
背景技术
免疫疗法彻底改变了癌症的治疗方式，特别是，针对PD-1和CTLA-4通路的免疫检查点抑制剂表现出显著的临床效果，但它们只对特定的病患群体、特定类型的肿瘤有效，肿瘤应答率较低，并且大多数病人没有表现出持久的症状缓解、用药一段时间后出现耐药性。因此，亟需发现新的肿瘤免疫治疗靶点，改善免疫检查点的临床效果。
造血祖细胞激酶1(HPK1，MAP4K1)是MAP4K家族的成员之一，它是一种Ste20丝/苏氨酸蛋白激酶。HPK1主要表达在造血细胞，如T细胞、B细胞、中性粒细胞、树突细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞和巨噬细胞。HPK1是T细胞受体和B细胞受体的负调控因子。TCR激活后，细胞质中的HPK1被招募到质膜中，其氨基酸残基Y381、S171和T165磷酸化，获得完全的激酶激活的HPK1激酶。活化的HPK1使其接头蛋白SLP76的氨基酸残基S376磷酸化，为负调控因子14-3-3提供结合位点，促进SLP76发生蛋白酶体降解，最终破坏了TCR信号复合体的稳定，进而阻碍了下游促进T细胞激活和增殖的激酶信号通路。除了TCR信号外，HPK1还通过前列腺素E2(PGE2)受体负调控T细胞信号。在生长因子、压力、炎症因子和分化因子等刺激下，HPK1也可以在B细胞、NK细胞和树突细胞中传递免疫抑制性信号。HPK1的激酶活性抑制多种细胞的免疫功能，包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞和树突细胞，并且表明抑制HPK1的激酶活性足以诱导抗肿瘤免疫应答。另外，抑制HPK1激酶活性可以进一步促进了T细胞效应功能，显著增加PD-L1单抗的治疗效果。HPK1基因缺失、HPK1抑制剂或HPK1 protac降解剂，均可以增强CAR-T细胞为基础的免疫疗法，在各种临床前血液学和实体瘤小鼠模型中表现出更好的抗肿瘤活性。值得注意的是，HPK1基因敲除和失活激酶敲入小鼠均未表现出致死性炎症反应，而这些在一些其他免疫负调控因子缺失时表现显著，比如CTLA-4和Cbl-b，这说明HPK1抑制剂具有较高的安全性。综上所述，HPK1是一个潜在有效的肿瘤免疫疗法新靶点，HPK1抑制剂的研究与开发对于改善肿瘤免疫疗法当前面临的关键问题具有重要意义。
目前有4个HPK1抑制剂处于早期临床研究阶段，包括Treadwell Therapeutics公司的CFI-402411、百济神州的BGB-15025、珠海宇繁的PRJ1-3024和Nimbus Therapeutics的NDI-101150。尽管多种HPK1抑制剂被报道，但是目前还没有相关药物上市。HPK1抑制剂开发所面临的挑战主要是HPK1家族成员功能不同，但是结构同源性非常高，设计高选择性抑制剂难度较大。
与传统的药物相比，PROTAC具有显著优势：作用范围更广、活性更高、可靶向“不可成药”靶点；提高选择性、活性和安全性；克服肿瘤药物耐药性等。PROTAC在某些靶点上可实现小分子难以实现的选择性，因此开发HPK1 PROTAC分子有望解决HPK1抑制剂选择性低、药效无法剂量依赖等问题，而目前HPK1 PROTAC分子鲜有报道。
发明内容
发明目的：针对HPK1小分子抑制剂选择性较低的问题，本发明的第一目的是提供一种吡嗪甲酰胺类HPK1PROTAC降解剂，利用PROTAC可以实现小分子难以实现的选择性的优势，开发靶向HPK1的PROTAC分子。本发明的PROTAC能够高效、高选择性地降解HPK1蛋白，而对同家族的其他蛋白无降解活性。相对于HPK1小分子抑制剂，能够更高效地刺激T细胞抗肿瘤免疫应答，释放效应细胞因子，具有更强地抗肿瘤活性。本发明的第二目的是提供一种所述化合物的制备方法，第三目的是提供一种含有所述化合物的药物组合物，第四目的是提供一种所述化合物及其药物组合物的药物应用。
技术方案：为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种如式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物，
式I中：
R1为C1-4烷基、C3-6环烷基、氘代(C1-4烷基)；
R2为C1-4烷基或氘代(C1-4烷基)；
B为C3-10亚环烷基、4-10元亚单环杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
E为
R3为氘、卤素、氰基、C1-4烷基、卤代(C1-4烷基)、C1-4烷氧基或卤代(C1-4烷氧基)；
a为0、1、2或3；
W为-CH2-、-C(CH3)2或
L1为化学键、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L2为化学键、-(CH2)r1-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L3为化学键、-(CH2)r2-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L4为化学键、-O-、-(CH2)r3-、-(CH2)r4(C＝O)-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
r1为0、1、2、3、4、5或6；r2为0、1、2、3、4、5或6；
r3为0、1、2、3、4、5或6；r4为0、1、2、3、4、5或6。
在一些实施方案中，R1为甲基、乙基、环丙基或-CD3。
在一些实施方案中，R2为甲基、乙基或-CD3。
在一些实施方案中，B为亚哌啶基、亚哌嗪基、
在一些实施方案中，E为
R3为氟；
a为0或1；
W为-CH2-或
在一些实施方案中，E为
在一些实施方案中，L1为化学键、且左侧与L2相连，右侧与E相连。
在一些实施方案中，L2为化学键、-(CH2)r1-、C4-6亚环烷基、且左侧与L3相连，右侧与L1相连；
在一些实施方案中，L3为化学键、-(CH2)r2-、C4-6亚环烷基、且左侧与L4相连，右侧与L2相连；
在一些实施方案中，L4为化学键、-(CH2)r3-、-(CH2)r4(C＝O)-、且左侧与B相连，右侧与L3相连。
在一些实施方案中，n1为1、2、3或4。
在一些实施方案中，n2为1、2、3或4。
在一些实施方案中，n3为1、2或3。
在一些实施方案中，n4为1、2或3。
在一些实施方案中，n5为1、2或3。
在一些实施方案中，n6为1、2或3。
在一些实施方案中，n7为0、1、2或3。
在一些实施方案中，n8为0、1、2或3。
在一些实施方案中，n9为0、1、2或3。
在一些实施方案中，n10为0、1、2或3。
在一些实施方案中，Q1为CRQ1或N，RQ1为卤素、羟基或C1-4烷基。
在一些实施方案中，Q为CH或N。
在一些实施方案中，Q2为CH或N。
在一些实施方案中，Q3为CH或N。
在一些实施方案中，Ra为卤素、-(C＝O)或C1-3烷基。
在一些实施方案中，c为0、1、2或3。
在一些实施方案中，r1为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，r2为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，r3为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，r4为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，L1为化学键、且左侧与L2相连，右侧与E相连。
在一些实施方案中，L2为化学键、-(CH2)r1-、且左侧与L3相连，右侧与L1相连。
在一些实施方案中，L3为化学键、-(CH2)r2、且左侧与L4相连，右侧与L2相连。
在一些实施方案中，L4为化学键、-(CH2)r3或-(CH2)r4(C＝O)-；且左侧与B相连，右侧与L3相连。
在一些实施方案中，n1为1、2或3。
在一些实施方案中，n2为1、2或3。
在一些实施方案中，n3为1或2。
在一些实施方案中，n4为1或2。
在一些实施方案中，n5为1或2。
在一些实施方案中，n6为1或2。
在一些实施方案中，n7为0、1或2。
在一些实施方案中，n8为0、1或2。
在一些实施方案中，n9为0、1或2。
在一些实施方案中，n10为0、1或2。
在一些实施方案中，Q1为CRQ1或N，RQ1为氟、羟基或甲基。
在一些实施方案中，Q为CH或N。
在一些实施方案中，Q2为CH或N。
在一些实施方案中，Q3为CH或N。
在一些实施方案中，Ra为氟或-(C＝O)。
在一些实施方案中，c为0、1或2。
在一些实施方案中，r1为0、1、2或3。
在一些实施方案中，r2为0、1、2或3。
在一些实施方案中，r3为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，r4为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，-L4-L3-L2-L1-为化学键、
且左侧与B相连，右侧与E相连；
n1为1或2；n2为1或2；n3为1或2；n4为1或2；n5为1或2；n6为1或2；n7为0、1或2；n8为0、1或2；n9为0、1或2；n10为0、1或2；
Q1为N或CRQ1，RQ1为氢或氟；Q为CH或N；Q2为CH或N；Q3为CH或N；
Ra为氟；c为0、1或2；
r1为0、1或2；r2为0、1或2；r3为0、1、2或3；r4为0、1或2。
在一些实施方案中，L1为化学键、
且左侧与L2相连，右侧与E相连。
在一些实施方案中，L2为化学键、-(CH2)r1-、
且左侧与L3相连，右侧与L1相连；
r1为0、1或2。
在一些实施方案中，L3为化学键、-(CH2)r2、
且左侧与L4相连，右侧与L2相连；
r2为0、1或2。
在一些实施方案中，L4为化学键、-(CH2)r3-或-(CH2)r4(C＝O)-；且左侧与L3相连，右侧与E相连；r3为0、1、2或3；r4为0、1、2或3。
在一些实施方案中，-L1-L2-L3-L4-为化学键、
且左侧与E相连，右侧与B相连；
r2为1或2；
r3为0、1、2或3；
r4为1或2。
在一些实施方案中，-L1-L2-L3-L4-为化学键、
且左侧与E相连，右侧与B相连。
在一些实施方案中，-L1-L2-L3-L4-为化学键、
且左侧与E相连，右侧与B相连。
在一些实施方案中，所述的式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物或者其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物为式I-1、I-2、I-2A’、I-3或者I-4所示的化合物，或者其药学上可接受的盐、异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，
其中：
环B’为含氮杂环基；
环L3’为含氮杂环基；
R1、R2、L1、L2、L3、B、E、r2、r3、r4的定义如上所述。
在一些实施方案中，式I所示的化合物选自以下任一的化合物：
本发明提供了一种式I-2所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的制备方法，包括以下步骤：
在溶剂中，式I-2A所示的化合物或其盐与式I-2B所示的化合物在酸性条件下，还原剂存在下经过还原胺化反应得到式I-2所示的化合物；
将以上方法制得的式I-2化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中，环B’、环L3’、R1、R2、L1、L2、E、r3、r3-1、X的定义如上所述。
本发明提供了一种式I-2’所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的方法，包括以下步骤：
在溶剂中，式I-2A所示的化合物或其盐与式I-2A”所示的化合物在碱性条件下经SNAr取代反应得到式I-2A’所示的化合物；
将以上方法制得的式I-2A’化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中，环B’、R1、R2、E的定义如上所述。
本发明提供了一种式I-1所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的方法，包括以下步骤：
在溶剂中，式I-1A所示的化合物或其盐与式I-1B所示的化合物在酸性条件下，还原剂存在下经过还原胺化反应得到式I-1所示的化合物；
将以上方法制得的式I-1化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中，环B’、环L3’、R1、R2、L1、L2、E、r3、r3-1、X的定义如上所述。
本发明提供了一种式I-3所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的方法，包括以下步骤：
在溶剂中，式I-3A所示的化合物或其盐与式I-3B化合物在碱性条件下，缩合剂存在下进行缩合反应得到式I-3所示的化合物；
将以上方法制得的式I-3化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中，环B’、R1、R2、L1、L2、L3、E、r4的定义如上所述。
本发明提供了一种式I-4所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的方法，包括以下步骤：
在溶剂中，式I-4A所示的化合物或其盐与式I-4B所示的化合物在碱性条件下，缩合剂存在下进行缩合反应得到式I-4所示的化合物；
将以上方法制得的式I-4化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中，环L3’、B、R1、R2、L1、L2、E、r4的定义如上所述。
以上缩合反应和SNAr取代反应中提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、正丁基锂、二异丙基氨基锂、醋酸钠、醋酸钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾或1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)；所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化锂和氢氧化钾；优选N,N-二异丙基乙胺。
上述反应中所述的缩合剂包括但不限于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N’-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N’-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAt)、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲脲六氟磷酸酯(HBTU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)；优选HATU、BOP或PyBOP。
上述合成方案中，提供酸性条件的试剂包括但不限于氯化氢、氯化氢的1,4-二氧六环溶液、盐酸的1,4-二氧六环溶液、三氟醋酸、甲酸、乙酸、冰乙酸、盐酸、浓硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸；优选乙酸或冰乙酸。
具体的，上述还原胺化反应中，提供酸性条件的试剂可以是直接加入的酸试剂；和/或加入碱性盐试剂，由该碱性盐与原料的酸性盐形式带入的酸在反应过程中生成的酸。所述的碱性盐包括但不限于乙酸钠、无水乙酸钠，优选无水乙酸钠；原料的酸性盐优选为盐酸盐或三氟乙酸盐；具体的，当原料是酸性盐的形式时，则提供酸性条件的方式可以是：加入试剂乙酸钠，在反应过程中由乙酸钠与原料中的酸一起形成醋酸。
上述合成方案中，所述的还原剂包括但不限于三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化钠、硼氢化锂、醋酸硼氢化钠、氰基硼氢化钠和乙酰硼氢化钠等，优选三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠。
上述步骤的反应所用的溶剂包括但不限于：吡啶、乙二醇、二甲醚、醋酸、甲醇、乙醇、乙腈、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、1,2-二溴乙烷及其混合物。
本发明提供了一种如式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物在制备用于调节造血祖细胞激酶1泛素化和降解的药物中的应用。
本发明提供了一种如式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
在一些实施方案中，所述的癌症为骨癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、膜腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、膀肮癌、宫颈癌、辜丸癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、食管癌、淋巴癌、白血病或皮肤癌中的一种或多种。
本发明提供了一种药物组合物，其含有如式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物，及药学上可接受的载体或辅料。
在一些实施方案中，在所述的药物组合物中，所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的用量为治疗有效量。
本发明提供了一种药物组合物在制备用于调节造血祖细胞激酶1泛素化、降解的药物中的应用。
本发明提供了一种药物组合物在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
在一些实施方案中，所述的癌症为骨癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、膜腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、脑癌、膀肮癌、宫颈癌、辜丸癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、食管癌、淋巴癌、白血病或皮肤癌中的一种或多种。
所述的药学上可接受的载体可为药物生产领域中广泛采用的辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望的速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体pH值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或缓释剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干粉制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂，如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或Z和E)异构体、(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体、非对映异构体、(D)-和(L)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体和(D)-和(L)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者手性助剂来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。
本公开所述化合物的化学结构中，键“/”表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键“/”可以为或或者同时包含或两种构型。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的游离体形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的游离体形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸(形成碳酸盐或碳酸氢盐)、磷酸(形成磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、硫酸(形成硫酸盐或硫酸氢盐)、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；有机酸盐还包括氨基酸(如精氨酸等)、葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的游离体形式。化合物的游离体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本发明的“药学上可接受的盐”可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
术语“代谢产物”是指式I所示化合物或其盐通过体内代谢产生的药学活性产物。这种产物可以从例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯、葡糖醛酸化、酶促裂解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢产物，包括使本发明的化合物与哺乳动物接触足够得到其代谢产物的一段时间的方法而产生的化合物。
代谢产物的鉴定典型地通过制备本发明化合物的放射性标记的同位素、将其以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)非肠道给予动物，例如大鼠、小鼠、豚鼠、猴、或人，允许充分的时间以发生代谢(典型地约30秒到30小时)和从尿、血液或其它生物样本分离其转化产物。这些产物容易分离，因为它们是被标记的(其它通过利用能够结合存在于代谢物中的抗原表位的抗体分离)。以常规的方式确定代谢物结构，例如，通过MS，LC/MS或NMR分析。通常，代谢物的分析是以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相同的方法进行的。只要代谢物产物不是以其它方式在体内不能被发现，否则它们可用于本发明化合物的治疗剂量给药的检定测定法。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。可在体内转化以提供生物活性物质(即式I所示化合物)的任何化合物是在本发明的范围和主旨内的前药。例如，含有羧基的化合物可形成生理上可水解的酯，其通过在体内水解以得到式I所示化合物本身而充当前药。所述前药优选口服给药，这是因为水解在许多情况下主要在消化酶的影响下发生。当酯本身具有活性或水解发生在血液中时，可使用肠胃外给药。
本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，本申请描述基团的结构式中所使用的是指相应的基团通过该位点与式I所示化合物中的其它片段、基团进行连接。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“烷基”是指具有指定的碳原子数的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基或仲丁基。
术语“氘代烷基”是指被一个或者多个氘取代的烷基，烷基的定义如上所述。氘代烷基的实例包括但不限于-CD3。
术语“烷氧基”是指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基。
术语“卤代烷基”是指一个或者多个卤素取代的烷基，烷基的定义如上所述。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基、三氟乙基、二氟甲基、二氟乙基。
术语“卤代烷氧基”是指指一个或者多个卤素取代的烷氧基，烷氧基的定义如上所述。烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、三氟以氧基。
术语“环烷基”是指饱和或部分不饱和的单环全碳环，其具有3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元环烷基)。所述环烷基优选具有3至12个环原子的环烷基(即3至12元环烷基)或3至10个环原子的环烷基(即3至10元环烷基)，更优选具有3至8个环原子的环烷基(即3至8元环烷基)，最优选具有3至6个环原子的环烷基(即3至6元环烷基)，更优选具有5或6个环原子的环烷基(即5或6元环烷基)。术语“亚环烷基”是指在上述“环烷基”的基础上另一个氢原子被移除而形成的二价基团，亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环杂环(即单环杂环基)或多环杂环系统(即多环杂环基)，其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，且具有4至20个(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即4至20元杂环基)，包括4-10元单杂环基、6-20元螺杂环基、6-18元稠杂环基、7-10元桥环杂烷基。所述杂环基优选具有4至16个环原子的杂环基(即4至16元杂环基)，其中1或2个原子为氮原子；进一步优选具有4至11个环原子的杂环基(即4至11元杂环基)，其中1或2个原子为氮原子。“螺杂环基”指环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，条件是至少含有一个单环杂环基且连接点在该单环杂环基上，其具有6至20个(例如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即6至20元螺杂环基)。所述螺杂环基优选具有6至14个环原子的螺杂环基(即6至14元螺杂环基)，更优选具有7至14个环原子的螺杂环基(即7至14元螺杂环基)或具有7至11个环原子的螺杂环基(即7至11元螺杂环基)。所述螺杂环基包括单螺杂环基和多螺杂环基(如双螺杂环基等)，优选单螺杂环基或双螺杂环基，更优选4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元单螺杂环基。“稠杂环基”指环之间共享毗邻的两个原子的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其为单环杂环基与一个或多个单环杂环基稠合，或者单环杂环基与环烷基、芳基或杂芳基中的一个或多个稠合，其中连接点在单环杂环基上，且具有6至18个(例如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18)环原子(即6至20元稠杂环基)。所述稠杂环基优选具有6至14个环原子的稠杂环基(即6至14元稠杂环基)，更优选具有7至10个环原子的稠杂环基(即7至10元稠杂环基)。所述稠杂环基包括双环和多环稠杂环基(如三环稠杂环基、四环稠杂环基等，优选双环稠杂环基或三环稠杂环基，更优选3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠杂环基。术语“桥杂环基”指环之间共用两个不直接连接的原子的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，并且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元桥杂环基)。所述桥杂环基优选具有6至14个环原子的桥杂环基(即6至14元桥杂环基)，更优选具有7至10个环原子的桥杂环基(即7至10元桥杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环桥杂环基和多环桥杂环基(如三环桥杂环基、四环桥杂环基等)，优选双环桥杂环基或三环桥杂环基。术语“亚杂环基”是指在上述“杂环烷基”的基础上另一个氢原子被移除而形成的二价基团，包括亚单杂环烷基、亚螺杂环烷基、亚稠杂环基、亚桥杂环基。实例包括但不限于
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
本发明设计的吡嗪甲酰胺类化合物能够高效、高选择降解HPK1蛋白(DC50达到纳摩尔浓度水平)，而对同家族的GLK和HGK等蛋白无降解活性；同时更高效地刺激T细胞抗肿瘤免疫应答(EC50达到纳摩尔浓度水平)，对癌症具有良好的治疗作用。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1：中间体3的合成
a)将原料1(5.0g，25.38mmol)溶于四氢呋喃溶液(50mL)中，0℃下加分批入60％氢化钠(1.5g，38.07mmol)，0℃搅拌0.5h后向反应体系中加入CD3I(4.41g，30.45mmol)，室温反应12h。TLC检测反应结束后，用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应用并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层用饱和食盐水洗涤三次除水，无水硫酸钠干燥后过滤并减压浓缩，经柱层析纯化得中间体2(3.24g，60％)。MS(ESI,m/z):214(M++1)。
b)称取中间体2(1.0g，4.7mmol)、甲磺酸[正丁基二(1-金刚烷基)膦](2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(0.4g，0.5mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(0.2g，0.5mmol)及4,4,4',4',5,5'-六甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(3.0g，11.8mmol)以及醋酸钾(1.4g，14.22mmol)于双颈烧瓶中。氩气条件下向反应体系中加入无水环戊基甲醚(24mL)，100℃反应12h。反应结束后将反应冷却至室温并用硅藻土抽滤，收集滤液，浓缩后得到中间体3的粗品，直接投下一步。MS(ESI,m/z):262(M++1).
实施例2：中间体5的合成
中间体5的合成方法与实施例1的步骤b合成方法相同，仅将中间体2更换为原料4即可。MS(ESI,m/z):259(M++1).
实施例3：中间体14的合成
a)将原料6(11.0g，50.0mmol)和甲基胺盐酸盐(12.6g，0.2mol)溶于甲醇(25mL)后向反应体系中滴加三乙胺(25.5mL，0.2mol)，室温反应24h。反应结束后减压旋蒸除去甲醇，加水50mL搅拌15分钟后抽滤，取滤饼，烘干后得到中间体7(9.4g，87％)。MS(ESI,m/z):217(M++1).
b)称取中间体7(3.7g，16.9mmol)和亚硝酸钠(1.2g，17.8mmol),在-10℃条件下向反应体系中缓慢滴加氢氟酸吡啶盐(7.47mL)，转移至室温，搅拌反应2h。反应结束后加水(30mL)淬灭反应，搅拌15分钟后抽滤，取滤饼，烘干后得到中间体8(3.4g，92％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ5.92(s,1H),3.94(s,3H),3.12(d,J＝5.0Hz,3H).MS(ESI,m/z):220(M++1).
c)将中间体8(481.8mg，2.2mmol)、中间体5(2.2mmol)及PdCl2(PPh3)2(140.2mg，0.2mmol)和氟化铯(1g，6.6mmol)在氩气条件下溶于1,4-二氧六环(7.5mL)和水(2.5mL)中，95℃搅拌反应8h。反应结束后将反应液冷却至室温，浓缩后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层饱和食盐水洗涤除水，无水硫酸钠干燥后过滤并浓缩有机相，柱层析纯化分离得到中间体9(499.0mg，72％)1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.87(s,1H),7.65-7.60(m,2H),7.45-7.36(m,2H),3.84(s,3H),3.83(s,3H),2.94(d,J＝4.8Hz,3H).MS(ESI,m/z):316(M++1).
d)将中间体9(1.4g，4.6mmol)和原料10(1.5g，5.5mmol)溶于DMF(4.0mL),在搅拌条件下向反应体系中缓慢加入DIPEA(1.2g，9.1mmol),在100℃条件下反应10h。反应结束后向反应体系中加水(15mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层用饱和食盐水洗涤三次除水，无水硫酸钠干燥后过滤并减压浓缩，经柱层析纯化分离得到淡黄色固体11(1.1g，43％)1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.46(s,1H),7.91(s,1H),7.81-7.75(m,3H),7.73(dd,J＝6.9,1.7Hz,1H),7.48-7.40(m,2H),7.20-7.14(m,2H),4.24(s,2H),3.93(s,3H),3.89(s,3H),3.08(d,J＝4.7Hz,3H),2.80(t,J＝12.5Hz,2H),2.62(tt,J＝12.1,3.6Hz,1H),1.84(d,J＝12.7Hz,2H),1.67-1.58(m,2H),1.48(s,9H).MS(ESI,m/z):572(M++1).
e)将中间体11(856.5mg，1.5mmol)溶于甲醇(2.5mL)和四氢呋喃(2.5mL)中，待化合物完全溶解后缓慢滴加2M氢氧化钾水溶液(5mL)，50℃条件下反应3h。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，用2M HCl水溶液调pH至4，有棕黄色固体析出，抽滤并收集滤饼，干燥后得到中间体12粗品，直接投下一步。MS(ESI,m/z):558(M++1).
f)将中间体12(779.8mg，1.4mmol)、氯化铵(144.5mg，2.7mmol)以及BOP(884.0mg，2.0mmol)。在氩气条件下向体系中加入无水DMF(5.0mL)，搅拌条件下向反应体系中加入DIPEA(1.1g，8.2mmol)，在室温条件下反应4h。反应结束后用纯净水(10mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次后合并有机层并饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤并减压浓缩经柱层析分离得到淡黄色固体中间体13(762.8mg，98％)1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),8.35(s,1H),8.17(d,J＝4.8Hz,1H),7.80-7.58(m,5H),7.53-7.35(m,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),4.07(d,J＝11.9Hz,2H),3.91(s,3H),2.95(d,J＝4.5Hz,3H),2.80(s,2H),2.64(t,J＝12.0Hz,1H),1.76(d,J＝13.0Hz,2H),1.55-1.43(m,2H),1.42(s,9H).MS(ESI,m/z):557(M++1).
g)将13(278mg，0.5mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，向反应体系内缓慢滴加三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应3h。反应结束后，浓缩反应液并加入适量乙醚淬灭，搅拌15分钟后抽滤并收集滤饼，干燥后得到黄色固体中间体14的三氟乙酸盐。(377.3mg，95％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.42(s,1H),8.35(s,1H),8.17(q,J＝4.5Hz,1H),7.77-7.60(m,5H),7.45-7.35(m,2H),7.18(d,J＝8.3Hz,2H),3.91(s,3H),3.03(d,J＝12.4Hz,2H),2.95(d,J＝4.5Hz,3H),2.66-2.52(m,3H),1.70(d,J＝12.1Hz,3H),1.51(tt,J＝12.5,6.2Hz,2H).MS(ESI,m/z):457(M++1).
实施例4：中间体16a和16b的合成
a)在氩气保护条件下，将中间体14(400.0mg，0.87mmol)溶于无水乙腈(5.0mL)中，0℃条件下加入DIPEA(0.5mL)，在缓慢滴加溴乙酸叔丁酯(171mg，0.87mmol)，0℃反应1h，反应结束后减压浓缩后并水稀释，乙酸乙酯萃取三遍，合并有机层用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得中间体15a(447.0mg，45％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.01(s,1H),7.95(s,1H),7.79(d,J＝8.5Hz,2H),7.69(d,J＝5.2Hz,1H),7.66(dd,J＝5.6,3.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.49-7.42(m,2H),7.19(d,J＝8.4Hz,2H),3.92(s,3H),3.24-3.03(m,7H),2.40(d,J＝70.9Hz,4H),1.86(s,3H),1.49(s,9H).MS(ESI,m/z):571(M++1).同样的方法，仅将原料换为溴丙酸叔丁酯，得到中间体15b。MS(ESI,m/z):585(M++1).
b)将中间体15a(387.4mg，1mmol)溶于二氧甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(148μL)，25℃反应8h，直接旋干，得到中间体16a粗品，直接投下一步。MS(ESI,m/z):515(M++1).同样的方法，仅将原料换为溴丙酸叔丁酯，得到中间体16b。MS(ESI,m/z):529(M++1).
实施例5：中间体25的合成
a)将原料17(3.0g，21.3mmol)，哌啶-4-甲醇(2.94g，25.5mmol)和碳酸钾(5.9g，42.5mmol)在氩气保护条件下溶于DMF(35mL)中，80℃反应12h，待反应结束后将反应液冷却至室温，加水(100mL)使产物析出，抽滤并用水洗涤滤饼，取滤饼烘干，得到中间体18(3.7g，73％)。MS(ESI,m/z):237(M++1).
b)将中间体18(500.0mg，2.12mmol)和碳酸氢钠(355.6mg，4.2mmol)溶于DCM(10mL)，0℃下向反应体系中分批加入将戴斯-马丁氧化剂(1.1g，2.5mmol)，室温反应1h，待反应结束后用20％的Na2S2O3水溶液(15mL)淬灭反应，再用二氯甲烷萃取三次，合并有机相用饱和氯化钠洗涤三次除水，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得中间体19(184.9，79％)。MS(ESI,m/z):235(M++1).
c)将中间体19(200.0mg，853.8μmol)，对甲基苯磺酸(14.7mg，85.4μmol)和丙二醇(324.8mg，4.3mmol)溶于甲苯(6mL)中，130℃回流反应6h，待反应结束将反应液冷却到室温减压浓缩溶剂，用水稀释，乙酸乙酯萃取三遍，合并有机层用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得中间体20(177mg，71％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.16-8.02(m,2H),6.86-6.76(m,2H),4.31(d,J＝5.4Hz,1H),4.15-4.07(m,2H),3.96(dq,J＝13.3,2.2,1.6Hz,2H),3.81-3.70(m,2H),2.93(td,J＝12.8,2.7Hz,2H),2.14-2.00(m,1H),1.94-1.74(m,3H),1.51-1.32(m,3H).MS(ESI,m/z):293(M++1).
d)将中间体20(210.0mg，718.4μmol)溶于甲醇(2mL)中，向反应体系中加入Pd/C(20％in Water，42mg，0.2mmol，)，氢气条件下室温反应12h，待反应结束后抽滤，旋干得到中间体21粗品，直接投下一步。MS(ESI,m/z):263(M++1).
e)中间体22的合成方法与实施例3的步骤d合成方法相同，仅将原料10更换为中间体21即可。MS(ESI,m/z):558(M++1).
f)中间体23的合成方法与实施例3的步骤e合成方法相同，仅将中间体11更换为中间体22即可。MS(ESI,m/z):544(M++1).
g)中间体24的合成方法与实施例3的步骤f合成方法相同，仅将中间体12更换为中间体23即可。MS(ESI,m/z):543(M++1).
h)将中间体24(380mg，0.7mmol),甲酸钠(95.3mg，1.4mmol)称于两颈瓶中，氮气保护条件下向反应体系加入甲酸(5mL)，70℃反应4h，反应结束后向反应体系中加水稀释，再用二氯甲烷萃取三次，合并有机相用饱和氯化钠洗涤三次除水，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得中间体25(257.5mg，76％)。MS(ESI,m/z):485(M++1).
实施例6：中间体26的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):458(M++1).
实施例7：中间体27的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为3-(4-氨基苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):429(M++1).
实施例8：中间体28的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为6-(4-氨基苯基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):470(M++1).
实施例9：中间体29的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为2-(4-氨基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):498(M++1).
实施例10：中间体30的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为2-(4-氨基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):526(M++1).
实施例11：中间体31的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤d的原料10换为5-(4-氨基苯基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯即可。MS(ESI,m/z):484(M++1).
实施例12：中间体32的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤a中的甲基胺盐酸盐换为氘代甲氨盐酸盐即可。MS(ESI,m/z):460(M++1).
实施例13：中间体33的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤a中的甲基胺盐酸盐换为氘代甲氨盐酸盐，步骤c中间体5换为中间体3即可。MS(ESI,m/z):463(M++1).
实施例14：中间体34的合成
参考实施例3中的中间体14的合成方法，只需将步骤c中间体5换为中间体3即可。MS(ESI,m/z):460(M++1).
实施例15：中间体38，41和44的合成
a)将原料35(1.2g，12.0mmol)和原料36(1.9g，10.9mmol)溶于无水二氯甲烷(50mL)中，室温搅拌4h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.6g，21.8mmol)，继续在室温搅拌16h，反应结束后用硅藻土过滤反应液，取滤液并浓缩。经柱层析纯化后得到中间体37(697.0mg，25％)。MS(ESI,m/z):257(M++1).同样的方法仅将原料36换为原料39即可得到中间体40.MS(ESI,m/z):271(M++1).将原料35换为原料42即可得到中间体43.MS(ESI,m/z):271(M++1).
b)将中间体37(650mg，2.5mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，0℃下加入4M HCl的二氧六环溶液(1.5mL)，室温反应4h，反应完全后将反应液旋干，得中间体38的盐酸盐。MS(ESI,m/z):157(M++1).同样的方法仅将中间体37换为中间体40即可得到中间体41.MS(ESI,m/z):171(M++1).将中间体37换为原料43即可得到中间体44.MS(ESI,m/z):171(M++1).
实施例16：中间体51的合成
a)采用专利申请“WO2022232536中说明书第98页的实施例1”公开的方法制备原料45。原料45(2.0g，5.9mmol)，原料46(5.5g，17.7mmol)和Pd(t-Bu3P)2(603.0mg，1.18mmol)溶于1,4二氧六环(18mL)和水(6mL)中，在氮气保护条件下向反应体系中加入DIPEA(1.9g，14.8mmol))，100℃反应8h。反应结束后将反应液用硅藻土抽滤，取滤液浓缩，通过柱层析纯化后的中间体47(1.5g，58％)。MS(ESI,m/z):440(M++1).
b)将中间体47(1.2g，2.7mmol)溶于DMF(15mL)中，向反应体系中分批加入10％Pd/C(227.9mg，2.7mmol)后在氢气条件下室温反应8h。反应结束后将反应液用硅藻土抽滤，取滤液浓缩，通过柱层析纯化后的中间体48(952.6mg，80％)。MS(ESI,m/z):442(M++1).
c)合成方法参考与实施例14的步骤b，只需将中间体37换为中间体48即可得到中间体49的盐酸盐.MS(ESI,m/z):342(M++1).
d)合成方法参考实施例4的步骤a，只需将中间体14换为中间体49即可得到中间体50.MS(ESI,m/z):456(M++1).
e)合成方法参考实施例4的步骤b，只需将中间体15a换为中间体49即可得到中间体51.MS(ESI,m/z):400(M++1).
实施例17：中间体52的合成
参考实施例16中的中间体51的合成方法，只需将步骤a中的原料46换为3,3-二氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯即可得到中间体52.MS(ESI,m/z):436(M++1).
实施例18：化合物S1的合成
a)采用专利申请“WO2022243365中说明书第23页的实施例2”公开的方法制备原料53。53(830mg，3.0mmol)和原料54(262.8mg，3.6mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)中，向反应体系中加入DIPEA(580.5mg，4.5mmol)，90℃搅拌反应过夜。反应完全后，将反应液减压浓缩后加水稀释，乙酸乙酯萃取三遍，合并有机层用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得相应中间体55(246.8mg，25％)。MS(ESI,m/z):330(M++1).
b)参考实施例5的合成步骤b，只需更换相应原料即可得到中间体56.MS(ESI,m/z):328(M++1).
c)将中间体14(100mg，0.2mmol)，中间体56(245.2mg，0.75mmol)溶于无水甲醇(0.5mL)和无水二氯甲烷(0.5mL)中，氮气保护条件下向反应体系中滴加1滴醋酸，室温搅拌15分钟后向反应体系中加入三乙酰氧基硼氢化钠(88.4mg，0.4mmol)和氰基硼氢化钠(1.3mg，0.02mmol)，50℃反应1h，反应完全后用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷萃取三遍，合并有机层用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得化合物S1(29mg，19％)。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.51-3.44(m,1H),3.16-2.96(m,5H),2.94-2.67(m,5H),2.51(s,1H),2.10-2.09(m,1H),1.87(s,4H).MS(ESI,m/z):782(M++1).
实施例19：化合物S2的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将a步骤的原料54换为2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-醇(54a)即可得到化合物S2。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.16-2.96(m,5H),2.94-2.67(m,5H),2.60(p,J＝6.8Hz,1H),2.52(s,H),2.10-2.09(m,1H),2.01-1.98(m,4H),1.92-1.80(m,4H).MS(ESI,m/z):808(M++1).
实施例20：化合物S3的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54换为7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-醇(54b)即可得到化合物S3。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.00-3.92(m,5H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.66(m,9H),2.69(p,J＝6.8Hz,1H),2.52(s,1H),2.14-2.09(m,1H),2.01-1.98(m,4H),1.92-1.80(m,4H),1.52-1.44(m,4H).MS(ESI,m/z):836(M++1).
实施例21：化合物S4的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-醇(54c)即可得到化合物S4。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.16-2.68(m,10H),2.52(s,1H),2.10-2.09(m,2H),1.71-1.68(m,4H),1.52-1.43(m,4H).MS(ESI,m/z):836(M++1).
实施例22：化合物S5的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换换为哌啶-4-醇(54d)即可得到化合物S5。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.02-3.91(s,5H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,9H),2.73(p,J＝5.8Hz,1H),2.30-2.19(m,2H),2.17-2.08(m,1H),2.01-1.91(m,2H),1.90-1.58(m,6H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例23：化合物S6的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为哌啶-4-甲醇(54e)即可得到化合物S6。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.02-3.91(s,5H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,9H),2.55-2.30(m,1H),2.38-2.19(m,2H),2.17-2.08(m,1H),2.01-1.91(m,2H),1.89-1.77(m,3H),1.39-1.26(m,4H).MS(ESI,m/z):810(M++1).
实施例24：化合物S7的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为氮杂环丁烷-3-甲醇(54f)即可得到化合物S7。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.87-7.53(m,6H),7.45(s,2H),7.18(s,2H),6.79(s,1H),6.51(s,1H),5.21(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.18-2.94(m,6H),3.93-2.65(m,5H),2.51(s,1H),2.26-2.09(m,3H),1.93-1.80(m,4H).MS(ESI,m/z):782(M++1).
实施例25：化合物S8的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(S)-吡咯烷-3-甲醇(54g)即可得到化合物S8。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.52(s,1H),7.93(s,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,2H),7.76(q,J＝4.7Hz,1H),7.64(dd,J＝11.7,7.4Hz,2H),7.58(s,1H),7.44(d,J＝6.5Hz,2H),7.19(d,J＝8.2Hz,2H),6.94(d,J＝2.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),5.37(s,1H),4.93(dd,J＝12.4,5.4Hz,1H),3.89(s,3H),3.57(t,J＝8.7Hz,1H),3.49-3.43(m,1H),3.38(q,J＝8.4Hz,1H),3.20-3.15(m,1H),3.14-3.05(m,4H),2.99(d,J＝11.1Hz,1H),2.92-2.58(m,5H),2.50-2.38(m,3H),2.24-2.03(m,4H),1.89-1.75(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例26：化合物S9的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(R)-吡咯烷-3-甲醇(54h)即可得到化合物S9。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝4.4Hz,1H),7.68-7.62(m,2H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.69(d,J＝9.1Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.41(q,J＝8.6,8.0Hz,1H),3.25-3.17(m,1H),3.14-3.05(m,4H),3.00(d,J＝4.9Hz,1H),2.94-2.58(m,5H),2.56-2.37(m,3H),2.27-2.03(m,4H),1.84(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例27：化合物S10的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为2-(哌啶-4-基)乙-1-醇(54i)即可得到化合物S10。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.02-3.91(s,5H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,9H),2.52(s,1H),2.38-2.19(m,2H),2.17-2.08(m,1H),2.01-1.91(m,2H),1.89-1.77(m,2H),1.55-1.43(m,3H),1.39-1.26(m,4H).MS(ESI,m/z):824(M++1).
实施例28：化合物S11的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为3-(哌嗪-4-基)丙-1-醇(54j)即可得到化合物S11。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.93(s,3H),3.39(t,J＝5.7Hz,3H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,9H),2.72-2.66(m,2H),2.52(s,1H),2.48-2.32(m,2H),2.17-2.08(m,1H),2.01-1.91(m,2H),1.89-1.77(m,2H),1.62-1.53(m,2H).MS(ESI,m/z):839(M++1).
实施例29：化合物S12的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为3-(哌啶-4-基)丙-1-醇(54k)即可得到化合物S12。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.02-3.91(s,5H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,9H),2.52(s,1H),2.38-2.19(m,2H),2.17-2.08(m,1H),2.01-1.91(m,2H),1.89-1.77(m,3H),1.49-1.26(m,9H).MS(ESI,m/z):838(M++1).
实施例30：化合物S13的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲醇(54l)即可得到化合物S13。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.87-7.53(m,6H),7.45(s,2H),7.18(s,2H),6.79(s,1H),6.51(s,1H),5.21(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),4.38-4.22(m,2H),4.13-4.01(m,2H),3.92(s,3H),3.18-2.94(m,7H),3.93-2.65(m,5H),2.53(s,1H),2.17-2.09(m,1H),1.93-1.80(m,4H).MS(ESI,m/z):800(M++1).
实施例31：化合物S14的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(R)-(3-氟吡咯烷-3-基)甲醇(54m)即可得到化合物S14。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝4.4Hz,1H),7.68-7.62(m,2H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.69(d,J＝9.1Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.41(q,J＝8.6,8.0Hz,1H),3.25-3.17(m,1H),3.14-2.90(m,5H),2.96-2.62(m,7H),2.56-2.48(s,3H),1.84(m,4H).MS(ESI,m/z):814(M++1).
实施例32：化合物S15的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(S)-(3-氟吡咯烷-3-基)甲醇(54n)即可得到化合物S15。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(d,J＝4.4Hz,1H),7.68-7.62(m,2H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.69(d,J＝9.1Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.41(q,J＝8.6,8.0Hz,1H),3.25-3.17(m,1H),3.14-2.90(m,5H),2.96-2.62(m,7H),2.56-2.48(s,3H),1.84(m,4H).MS(ESI,m/z):814(M++1).
实施例33：化合物S16的合成
合成方法参考实例18中合物S1的合成方法，只需将步骤a中的原料54替换为(4-氟哌啶-4-基)甲醇(54o)即可得到化合物S16。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.32-4.11(m,2H),3.91(s,3H),3.44-3.30(m,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,7H),2.66-2.58(m,2H),2.55-2.40(m,1H),2.17-2.09(m,3H),1.98-1.88(m,2H),1.78-1.63(m,4H).MS(ESI,m/z):828(M++1).
实施例34：化合物S17的合成
a)中间体58的合成方法与实施例18中的中间体55相同，只需将步骤a中的原料54换为原料57即可得到中间体58。MS(ESI,m/z):443(M++1).
b)中间体59的合成方法与实施例15中的中间体38相同，只需将步骤b的中间体37换为中间体58即可得到中间体59的盐酸盐。MS(ESI,m/z):343(M++1).
c)将中间体16a(154.2mg，0.3mmol)、原料中间体59(94.1mg，0.28mmol)和BOP(165.8mg，0.38mmol)溶于无水DMF(1.5mL)中，氩气保护条件下向反应体系中加入DIPEA(116.1mg，0.9mmol)，室温反应4h，反应完全后，加水稀释，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，抽滤除盐，减压浓缩经柱层析纯化得化合物S17(75.4mg，30％)。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.51-3.45(m,2H),3.38-3.20(m,2H),3.15(t,J＝5.3Hz,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),2.98-2.63(m,11H),2.55-2.43(m,1H),2.17-2.09(m,1H),1.98-1.88(m,4H).MS(ESI,m/z):839(M++1).
实施例35：化合物S18的合成
合成方法参考实例34中合物S17的合成方法，只需将步骤c中16a的换为中间体16b即可得到化合物S18。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.51-3.45(m,2H),3.38-3.20(m,2H),3.15(t,J＝5.3Hz,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.02-2.67(m,11H),2.55-2.43(m,1H),2.17-2.00(m,3H),1.89-1.78(m,4H).MS(ESI,m/z):853(M++1).
实施例36：化合物S19的合成
合成方法参考实例34中合物S17的合成方法，只需将实施例34步骤c中的原料换为中间体14和中间体51即可得到化合物S19。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.63(m,13H),2.60-2.40(m,2H),2.17-2.00(m,1H),1.92-1.76(m,8H).MS(ESI,m/z):838(M++1).
实施例37：化合物S20的合成
合成方法参考实例34中合物S17的合成方法，只需将实施例34步骤c中的原料换为中间体14和中间体52即可得到化合物S20。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝10.9Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.18-2.63(m,17H),2.50-2.40(m,1H),2.17-2.00(m,1H),1.92-1.76(m,6H).MS(ESI,m/z):874(M++1).
实施例38：化合物S21的合成
化合物S21与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中的原料53换为原料60(采用专利申请“WO2023088245中说明书第48页的中间体化合物物R1A-1的合成”公开的方法制备而得)，原料54换为氮杂环丁烷-3-甲醇即可得到化合物S21。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.02(s,1H),8.07(s,1H),7.95(s,1H),7.79(d,J＝7.9Hz,2H),7.74-7.62(m,2H),7.58(s,1H),7.45(d,J＝6.4Hz,3H),7.17(dd,J＝15.9,7.3Hz,3H),6.59(d,J＝8.3Hz,1H),5.19(s,1H),4.93(dd,J＝12.7,5.3Hz,1H),4.42(s,2H),3.94(d,J＝17.0Hz,4H),3.10(d,J＝3.7Hz,3H),3.05-2.92(m,3H),2.91-2.60(m,6H),2.54-2.44(m,1H),2.13(d,J＝8.8Hz,3H),1.89-1.74(m,4H).MS(ESI,m/z):782(M++1).
实施例39：化合物S22的合成
化合物S22与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中的原料53换为原料60，原料54换为吡咯烷-3-甲醇即可得到化合物S22。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.01(s,1H),8.18(s,1H),7.95(s,1H),7.79(d,J＝7.7Hz,2H),7.68(d,J＝21.1Hz,2H),7.58(s,1H),7.45(s,3H),7.19(d,J＝7.1Hz,3H),6.96(d,J＝8.7Hz,1H),5.26(s,1H),4.95(dd,J＝12.4,5.5Hz,1H),3.91(s,3H),3.77-3.59(m,3H),3.44(s,1H),3.10(m,5H),2.97-2.37(m,8H),2.15(m,4H),1.86(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例40：化合物S23的合成
化合物S23与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中的原料54换为哌啶-4-甲醇，中间体14换为中间体26即可得到化合物S23。MS(ESI,m/z):811(M++1).
实施例41：化合物S24的合成
化合物S24与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为氮杂环丁烷-3-甲醇，步骤c的中间体14换为中间体26即可得到化合物S24。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.91(s,3H),3.79-3.70(m,2H),3.26-3.16(m,4H),3.15-2.58(m,13H),2.17-2.09(m,1H).MS(ESI,m/z):783(M++1).
实施例42：化合物S25的合成
化合物S25与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为(S)-吡咯烷-3-甲醇，步骤c中的中间体14换为中间体26即可得到化合物S25。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.59(dd,J＝10.1,7.2Hz,1H),3.51(m,1H),3.47-3.38(m,1H),3.26-3.14(m,5H),3.08(d,J＝4.5Hz,3H),2.90-2.58(m,8H),2.52-2.41(m,2H),2.26-2.18(m,1H),2.15-2.08(m,1H),1.88-1.80(m,1H).MS(ESI,m/z):797(M++1).
实施例43：化合物S26的合成
化合物S26与实施例18中的化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为(R)-吡咯烷-3-甲醇，步骤c的中间体14换为中间体26即可得到化合物S26.1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.59(dd,J＝10.1,7.2Hz,1H),3.51(m,1H),3.47-3.38(m,1H),3.26-3.14(m,5H),3.08(d,J＝4.5Hz,3H),2.90-2.58(m,8H),2.52-2.41(m,2H),2.26-2.18(m,1H),2.15-2.08(m,1H),1.88-1.80(m,1H).MS(ESI,m/z):797(M++1).
实施例44：化合物S27的合成
化合物S27与实施例36中的化合物S19的合成方法相同，只需将实施例36中的中间体14换为中间体26即可得到化合物S27。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),4.07-3.96(m,4H),3.92(t,2H),3.54-3.26(m,2H),3.08(d,J＝4.5Hz,3H),2.90-2.58(m,9H),2.50-2.40(m,1H),2.15-2.08(m,1H),1.98-1.76(m,4H).MS(ESI,m/z):839(M++1).
实施例45：化合物S28的合成
化合物S28与实施例36中的化合物S19的合成方法相同，仅将实施例36中的中间体51换为中间体52，中间体14换为中间体26即可得到化合物S28。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),4.07-3.96(m,4H),3.92(t,2H),3.54-3.26(m,2H),3.08(d,J＝4.5Hz,3H),3.03-2.50(m,10H),2.15-2.08(m,1H),1.98-1.86(m,2H).MS(ESI,m/z):875(M++1).
实施例46：化合物S29的合成
a)中间体62的合成方法与中间体55相同，只需将实施例18步骤a中的原料54换为原料61即可得到中间体62。MS(ESI,m/z):483(M++1).
b)中间体63的合成方法与中间体38相同，只需将实施例15的步骤b的中间体37换为中间体62即可得到中间体63的盐酸盐。MS(ESI,m/z):383(M++1).
c)化合物S29与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18步骤c中的中间体14换为中间体63，中间体56换为中间体25即可得到化合物S29。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.47-7.43(m,2H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(s,1H),4.94(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),4.11-4.02(m,2H),3.91(s,3H),3.82-3.77(m,2H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,8H),2.50-2.40(m,1H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.16-2.08(m,1H),1.89-1.78(m,4H),1.68-1.57(m,1H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):851(M++1).
实施例47：化合物S30的合成
化合物S30与化合物S29的合成方法相同，只需将实施例46中步骤a的中间体61换为中间体57即可得到化合物S30。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.47-7.43(m,2H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(s,1H),4.94(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.43(t,J＝5.0Hz,3H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,5H),2.58(t,J＝5.1Hz,4H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.16-2.08(m,1H),1.68-1.57(m,1H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):811(M++1).
实施例48：化合物S31的合成
化合物S30与化合物S29的合成方法相同，只需将实施例46中步骤c的中间体63换为中间体49即可得到化合物S31。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.47-7.43(m,2H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(s,1H),4.94(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,9H),2.50-2.40(m,1H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.16-2.08(m,1H),1.89-1.78(m,4H),1.68-1.57(m,1H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):810(M++1).
实施例49：化合物S32的合成
化合物S32与化合物S29的合成方法相同，只需将实施例46中步骤a的中间体61换为2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-羧酸叔丁酯即可得到化合物S32。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.47-7.43(m,2H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(s,1H),4.94(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.78-3.67(m,2H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,11H),2.50-2.40(m,3H),2.16-2.08(m,1H),1.89-1.68(m,8H).MS(ESI,m/z):851(M++1).
实施例50：化合物S33的合成
化合物S33与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18步骤a中的原料54换为中间体38即可得到化合物S33。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),3.93(s,3H),3.78-3.70(m,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,13H),2.50-2.40(m,1H),2.17-2.08(m,1H),1.98-1.88(m,4H),1.78-1.65(m,4H).MS(ESI,m/z):851(M++1).
实施例51：化合物S34的合成
化合物S34与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18步骤a中的原料54换为中间体38，c步骤中的中间体14换为中间体27即可得到化合物S34。化合物S33与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18步骤a中的原料54换为中间体38即可得到化合物S33。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),3.93(s,3H),3.78-3.70(m,2H),3.56-3.43(m,2H),3.10-2.64(m,15H),2.17-2.08(m,1H),1.78-1.65(m,4H).MS(ESI,m/z):823(M++1).
实施例52：化合物S35的合成
化合物S35与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为中间体44即可得到化合物S35。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),3.93(s,3H),3.78-3.70(m,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),3.08-2.64(m,12H),2.50-2.40(m,1H),2.20-2.08(m,4H),1.98-1.88(m,4H),1.54-1.44(m,4H).MS(ESI,m/z):865(M++1).
实施例53：化合物S36的合成
化合物S36与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为中间体41即可得到化合物S36。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),6.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.51(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),3.93(s,3H),3.78-3.70(m,2H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),2.98-2.64(m,14H),2.50-2.40(m,2H),2.17-2.08(m,1H),1.98-1.88(m,4H),1.78-1.65(m,4H).MS(ESI,m/z):865(M++1).
实施例54：化合物S37的合成
将原料53(69.0mg，0.25mmol)和中间体28(140.7mg，0.3mmol)溶于1,4-二氧六环(1.5mL)中，向反应体系中加入DIPEA(193.5mg，1.5mmol)，90℃搅拌反应过夜。反应完全后，将反应液减压浓缩后加水稀释，乙酸乙酯萃取三遍，合并有机层用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，经柱层析纯化得化合物S37(43.5mg，24％)。δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.73-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,2H),7.28(s,1H),7.28(d,J＝2.1Hz,1H),7.05(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),4.32-4.03(m,4H),3.93(s,3H),3.82-3.65(m,4H),3.10(d,J＝4.6Hz,3H),2.17-2.08(m,1H).MS(ESI,m/z):726(M++1).
实施例55：化合物S38的合成
化合物S38与化合物S37的合成方法相同，只需将实施例54中的中间体28换为中间体29即可得到化合物S38。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.61(s,3H),3.58-3.43(m,4H),3.20-2.96(m,4H),2.94-2.67(m,3H),2.27-2.10(m,1H)，1.60-1.56(t,J＝5.3Hz,4H).MS(ESI,m/z):754(M++1).
实施例56：化合物S39的合成
化合物S39与化合物S37的合成方法相同，只需将实施例54中的中间体28换为中间体30即可得到化合物S39。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.71-3.53(m,4H),3.20-2.96(m,3H),2.94-2.67(m,3H),2.46(t,J＝5.3Hz,4H),2.27-2.10(m,1H),1.61-1.41(m,8H).MS(ESI,m/z):782(M++1).
实施例57：化合物S40的合成
化合物S40与化合物S37的合成方法相同，只需将实施例54中的中间体28换为中间体31即可得到化合物S40。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.69-3.61(m,2H),3.45-3.37(m,2H),3.20-3.08(m,3H),3.04-2.67(m,5H),2.53-2.51(m,2H),2.46-2.41(m,2H),2.27-2.10(m,1H).MS(ESI,m/z):740(M++1).
实施例58：化合物S41的合成
化合物S41与化合物S37的合成方法相同，只需将实施例54中的中间体28换为中间体14即可得到化合物S41。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.26-3.14(m,4H),3.08(d,J＝4.5Hz,3H),2.93-2.58(m,7H),2.13-2.04(m,1H).MS(ESI,m/z):714(M++1).
实施例59：化合物S42的合成
化合物S42与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54换为(R)-吡咯烷-3-甲醇，步骤c的中间体14换为中间体28即可得到化合物S42。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.64-3.56(m,5H),3.54-3.47(m,1H),3.44-3.38(m,1H),3.26-3.14(m,1H),3.08-3.03(m,7H),2.93-2.58(m,4H),2.54-2.42(m,2H),2.28-2.18(m,1H),2.17-2.08(m,1H),1.92-1.80(m,1H).MS(ESI,m/z):809(M++1).
实施例60：化合物S43的合成
化合物S43与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54替换为(S)-吡咯烷-3-甲醇，步骤c的中间体14换为中间体28即可得到化合物S43。1HNMR(600MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.32(s,1H),7.93(d,J＝2.5Hz,1H),7.74(d,J＝8.2Hz,2H),7.70(s,1H),7.64(t,J＝6.6Hz,2H),7.56(s,1H),7.49-7.39(m,2H),6.97-6.88(m,3H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.0,5.9Hz,1H),3.90(d,J＝2.4Hz,3H),3.61-3.58(m,5H),3.49(s,1H),3.46-3.33(m,1H),3.22-3.12(m,1H),3.07-3.03(m,7H),2.92-2.55(m,4H),2.52-2.41(m,2H),2.26-2.17(m,1H),2.14-2.08(m,1H),1.88-1.79(m,1H).MS(ESI,m/z):809(M++1).
实施例61：化合物S44的合成
化合物S44与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54替换为4-羟甲基哌啶，步骤c的中间体14换为中间体28即可得到化合物S44。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.61(s,4H),3.18-2.66(m,12H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H).MS(ESI,m/z):823(M++1).
实施例62：化合物S45的合成
化合物S45与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料54替换为3-氮杂环丁烷甲醇，步骤c的中间体14换为中间体31即可得到化合物S45。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.74(m,2H),3.69-3.61(m,2H),3.45-3.37(m,2H),3.20-3.08(m,4H),3.04-2.67(m,5H),2.53-2.51(m,2H),2.46-2.41(m,2H),2.27-2.10(m,3H).MS(ESI,m/z):809(M++1).
实施例63：化合物S46的合成
化合物S46与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18步骤a的步骤a的原料54替换为3-氮杂环丁烷甲醇，步骤c的中间体14换为中间体30即可得到化合物S46。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.19(s,1H),7.95(s,1H),7.85-7.76(m,2H),7.75-7.54(m,4H),7.45(s,2H),7.24-7.09(m,2H),6.79(s,1H),6.50(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(s,1H),4.99-4.87(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),4.18(t,J＝7.3Hz,2H),3.92(s,3H),3.74-3.53(m,6H),3.20-2.96(m,4H),2.94-2.67(m,3H),2.46(t,J＝5.3Hz,4H),2.27-2.10(m,3H),1.61-1.41(m,8H).MS(ESI,m/z):851(M++1).
实施例64：化合物S47的合成
化合物S47与化合物S1的合成方法相同，只需将实施例18中步骤a的原料53换为原料64(采用专利申请“WO2020012337中说明书第319页的实施例23的合成”公开的方法制备而得)，原料54替换为4-羟甲基哌啶即可得到化合物S47。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.18-2.66(m,12H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):828(M++1).
实施例65：化合物S48的合成
a)采用专利申请“WO2020012337中说明书第303页的实施例2的合成”公开的方法制备原料65。65(2.0g，6.0mmol)，4-哌啶基甲醇(712.7mg，6.0mmol)，Cs2CO3(4.0g，12.7mmol)和PEPPSI-IPr(602.0mg，0.6mmol)溶于1,4二氧六环(3mL)溶液中，氩气保护条件下100℃反应12h，反应结束后将反应液硅藻土抽滤，浓缩滤液并通过柱层析纯化，得到中间体66(1.2g，57％)。MS(ESI,m/z):358(M++1).
b)与实施例5的步骤b相同，更换相应原料即可得到中间体67。MS(ESI,m/z):356(M++1).
c)化合物S48与实施例18中化合物S1的合成步骤c相同，更换相应原料即可得到化合物S48。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.56-7.51(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05-7.01(m,2H),5.21(s,1H),5.11(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.55-4.33(m,2H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.18-2.66(m,12H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例66：化合物S49的合成
化合物S49与化合物S48的合成方法相同，只需将实施例65中步骤a的原料65替换为原料68(采用专利申请“WO2024077244中说明书第98页的实施例10的合成”公开的方法制备而得)即可得到化合物S49。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.56-7.51(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05-7.01(m,2H),5.25(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),5.21(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.18-2.66(m,12H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例67：化合物S50的合成
化合物S50与化合物S48的合成方法相同，只需将实施例65中步骤a的原料65替换为原料69(采用专利申请“WO2021126973中说明书第88页的实施例C48018的合成”公开的方法制备而得)即可得到化合物S50。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50(s,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.18(d,J＝8.5Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.15(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),5.25(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),5.21(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.18-2.66(m,12H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):796(M++1).
实施例68：化合物S51的合成
化合物S51与化合物S47的合成方法相同，仅将实施例64中步骤c的中间体14替换为中间体26即可得到化合物S51。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.48-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),6.98(d,J＝8.5Hz,2H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.19(t,J＝5.4Hz,4H),3.18-2.66(m,12H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.93(m,1H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):829(M++1).
实施例69：化合物S52的合成
化合物S52与化合物S49的合成方法相同，只需将实施例66中步骤c的中间体14替换为中间体26即可得到化合物S52。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.56-7.51(m,2H),7.05-7.01(m,2H),6.98(d,J＝8.5Hz,2H),5.25(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),5.21(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.19(t,J＝5.4Hz,4H),3.18-2.66(m,12H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.93(m,1H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):797(M++1).
实施例70：化合物S53的合成
a)与实施例65的步骤a相同，只需将原料65替换为原料69，4-哌啶基甲醇替换为原料57，即可得到中间体70。MS(ESI,m/z):429(M++1).
b)与实施例15的步骤b相同，只需将中间体37替换为中间体70即可得到中间体71的盐酸盐。MS(ESI,m/z):329(M++1).
c)与实施例18的步骤c相同，只需将中间体14换为中间体71，中间体56换为中间体25即可得到化合物S53。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.50(s,1H),7.43(d,J＝1.8Hz,1H),7.18(d,J＝8.5Hz,1H),7.15(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),5.25(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.91(s,3H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.43(t,J＝5.0Hz,3H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,5H),2.58(t,J＝5.1Hz,3H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.13(m,1H),2.04-1.97(m,1H),1.89(dd,J＝9.4,5.7Hz,2H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):797(M++1).
实施例71：化合物S54的合成
化合物S54与化合物S53的合成方法相同，只需将实施例70中的原料69换为原料68即可得到化合物S54。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.54-7.51(m,2H),7.05-7.01(m,2H),6.98-6.93(m,2H),5.25(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),5.25(s,1H),4.55-4.33(m,2H),3.91(s,3H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.43(t,J＝5.0Hz,3H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,5H),2.58(t,J＝5.1Hz,3H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.13(m,1H),2.04-1.97(m,1H),1.89(dd,J＝9.4,5.7Hz,2H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):797(M++1).
实施例72：化合物S55的合成
a)与实施例18的步骤a相同，只需将原料53替换为原料64，将原料54替换为原料57即可得到中间体72。MS(ESI,m/z):461(M++1).
b)与实施例15的步骤b相同，只需将中间体37替换为中间体72即可得到中间体73的盐酸盐。MS(ESI,m/z):361(M++1).
c)与实施例18的步骤c相同，只需将中间体14替换为中间体73，中间体56替换为中间体25即可得到化合物S55。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.86(s,1H),8.30(s,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(dt,J＝7.7,3.9Hz,2H),7.56(s,1H),7.47-7.43(m,2H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),6.98-6.93(m,2H),5.25(s,1H),4.94(dd,J＝12.2,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.64(dt,J＝12.1,3.6Hz,2H),3.43(t,J＝5.0Hz,3H),3.07(d,J＝4.6Hz,3H),2.95-2.63(m,5H),2.58(t,J＝5.1Hz,3H),2.29(d,J＝7.1Hz,2H),2.13(m,1H),2.04-1.97(m,1H),1.89(dd,J＝9.4,5.7Hz,2H),1.43-1.32(m,4H).MS(ESI,m/z):829(M++1).
实施例73：化合物S56的合成
化合物S56与化合物S6的合成方法相同，只需将实施例23步骤c的中间体14替换为中间体32即可得到化合物S56。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.92(s,3H),3.18-2.66(m,9H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):813(M++1).
实施例74：化合物S57的合成
化合物S57与化合物S6的合成方法相同，只需将实施例23步骤c的中间体14替换为中间体33即可得到化合物S57。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.18-2.66(m,9H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):816(M++1).
实施例75：化合物S58的合成
化合物S58与化合物S6的合成方法相同，只需将实施例23中步骤c的中间体14替换为中间体34即可得到化合物S58。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.06(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72-7.63(m,3H),7.58(s,1H),7.50-7.44(m,2H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),5.21(s,1H),4.94(dd,J＝12.3,5.3Hz,1H),3.96(d,J＝13.1Hz,2H),3.18-2.66(m,12H),2.52(s,1H),2.29(s,2H),2.12(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),2.01-1.83(m,5H),1.39-1.25(m,4H).MS(ESI,m/z):813(M++1).
实施例76：化合物S59的合成
化合物S59与化合物S8的合成方法相同，只需将实施例25中的中间体14替换为中间体33即可得到化合物S59。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72(d,J＝4.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,4.1Hz,2H),7.58(s,1H),7.50-7.41(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),5.26(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.63-3.54(m,1H),3.49(td,J＝9.0,8.1,3.9Hz,1H),3.41(q,J＝7.9Hz,1H),3.20(dd,J＝9.9,7.3Hz,1H),3.10-3.05(m,1H),3.00(d,J＝6.0Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.53-2.37(m,3H),2.27-2.07(m,3H),1.90-1.77(m,5H).MS(ESI,m/z):802(M++1).
实施例77：化合物S60的合成
化合物S60与化合物S8的合成方法相同，只需将实施例25步骤c的中间体14换为中间体32即可得到化合物S60。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72(d,J＝4.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,4.1Hz,2H),7.58(s,1H),7.50-7.41(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),5.26(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.63-3.54(m,1H),3.49(td,J＝9.0,8.1,3.9Hz,1H),3.41(q,J＝7.9Hz,1H),3.20(dd,J＝9.9,7.3Hz,1H),3.10-3.05(m,1H),3.00(d,J＝6.0Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.53-2.37(m,3H),2.27-2.07(m,3H),1.90-1.77(m,5H).MS(ESI,m/z):799(M++1).
实施例78：化合物S61的合成
化合物S61与化合物S8的合成方法相同，只需将实施例25步骤c的中间体14换为中间体34即可得到化合物S61。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,2H),7.72(d,J＝4.5Hz,1H),7.65(dd,J＝8.5,4.1Hz,2H),7.58(s,1H),7.50-7.41(m,2H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),5.26(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.63-3.54(m,1H),3.49(td,J＝9.0,8.1,3.9Hz,1H),3.41(q,J＝7.9Hz,1H),3.20(dd,J＝9.9,7.3Hz,1H),3.13-3.05(m,4H),3.00(d,J＝6.0Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.53-2.37(m,3H),2.27-2.07(m,3H),1.90-1.77(m,5H).MS(ESI,m/z):799(M++1).
实施例79：化合物S62的合成
化合物S62与化合物S9的合成方法相同，只需将实施例26步骤c的中间体14换为中间体33即可得到化合物S62。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.74-7.62(m,3H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝2.2Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.46-3.38(m,1H),3.25-3.17(m,1H),3.09-3.03(m,1H),3.00(d,J＝10.2Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.57-2.36(m,3H),2.23-2.08(m,3H),1.93-1.76(m,5H).MS(ESI,m/z):802(M++1).
实施例80：化合物S63的合成
化合物S63与化合物S9的合成方法相同，只需将实施例26步骤c的中间体14换为中间体32即可得到化合物S63。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.74-7.62(m,3H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝2.2Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.46-3.38(m,1H),3.25-3.17(m,1H),3.09-3.03(m,1H),3.00(d,J＝10.2Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.57-2.36(m,3H),2.23-2.08(m,3H),1.93-1.76(m,5H).MS(ESI,m/z):799(M++1).
实施例81：化合物S64的合成
化合物S63与化合物S9的合成方法相同，只需将实施例26步骤c的中间体14换为中间体34即可得到化合物S64。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.03(s,1H),8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.74-7.62(m,3H),7.58(s,1H),7.49-7.43(m,2H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝2.2Hz,1H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.23(s,1H),4.94(dd,J＝12.0,5.3Hz,1H),3.92(s,3H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.46-3.38(m,1H),3.25-3.17(m,1H),3.09-3.03(m,1H),3.00(d,J＝10.2Hz,1H),2.95-2.59(m,5H),2.57-2.36(m,3H),2.23-2.08(m,3H),1.93-1.76(m,5H).MS(ESI,m/z):799(M++1).
实施例82：化合物S65的合成
化合物S65与实施例42中化合物S25的合成方法相同，只需将实施例42中步骤c的中间体26替换为中间体74即可得到化合物S65。MS(ESI,m/z):803(M++1).
中间体74的合成方法与实施例3的中间体14的合成方法相同，只需将实施例3步骤a中甲胺盐酸盐换为氘代甲胺盐酸盐，步骤c的中间体5替换为中间体3即可得到中间体74。1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.32(s,1H),7.93(d,J＝2.5Hz,1H),7.74(d,J＝8.2Hz,2H),7.70(s,1H),7.64(t,J＝6.6Hz,2H),7.56(s,1H),1.49-7.39(m,2H),6.97-6.88(m,3H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),4.93(dd,J＝12.0,5.9Hz,1H),3.58(t,J＝8.9Hz,1H),3.49(s,1H),3.46-3.33(m,1H),3.22-3.12(m,5H),2.92-2.55(m,8H),2.52-2.41(m,2H),2.26-2.17(m,1H),2.14-2.08(m,1H),1.88-1.79(m,1H).MS(ESI,m/z):464(M++1).
实施例83：化合物S66的合成
化合物S66与实施例43中化合物S26的合成方法相同，只需将实施例43中步骤c的中间体26替换为中间体74即可得到化合物S66。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.87(s,1H),8.08(s,1H),7.94(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,2H),7.70-7.63(m,3H),7.57(s,1H),7.47-7.43(m,2H),6.98-6.90(m,3H),6.69(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.93(dd,J＝12.1,5.4Hz,1H),3.64-3.56(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.47-3.38(m,1H),3.26-3.14(m,5H),2.93-2.58(m,8H),2.54-2.42(m,2H),2.28-2.18(m,1H),2.17-2.08(m,1H),1.92-1.80(m,1H).MS(ESI,m/z):803(M++1).
实施例84：本发明化合物对HPK1激酶的活性评价
1、实验方法
HPK1激酶结构域(1-307aa)溶解在激酶buffer(20mM HEPES pH7.5,10mM MgCl2,1mM EGTA,0.5mM TCEP,0.01％BriJ-35,0.05％BSA)中加到96孔板中，终浓度为20nM，然后加入梯度稀释的待测本发明化合物(每个化合物设置10个浓度点)，HPK1激酶与本发明化合物预孵30min，然后向每孔中加入20μL底物溶液(终浓度为0.5mg/mL SLP76-SH2结构域和10μMATP)启动酶促反应。室温下孵育1h，然后按照Luminescent Kinase Assay Kit(BeyotimeBiotechnology Company)说明书测定每个浓度下本发明化合物对HPK1激酶活性的抑制率。采用GraphPad拟合计算本发明化合物对HPK1激酶的抑制活性IC50值。实验结果如表1所示。
2、实验结果
表1本发明化合物对HPK1蛋白的激酶抑制活性(IC50nM)
由表1可见，以专利WO2023001794第114页公开的实施例化合物7作为阳性对照，本发明化合物与阳性对照活性基本相当，这说明本发明化合物基本保持了HPK1抑制活性，与HPK1蛋白具有较好的结合。
实施例85：本发明化合物对HPK1蛋白的降解活性和选择性评价
1、实验方法
(1)收集细胞：Jurkat细胞贴壁培养12h，将不同浓度的本发明部分化合物与细胞共孵育12h。
(2)提取蛋白：弃去原培养基，用预冷的PBS清洗细胞三次，加入适量裂解液，混合均匀置于冰上裂解30min，于4℃下12000rpm离心5min，将离心后的上清转移倒新的离心管中，准备定量。
(3)蛋白定量：采用BCA法定量蛋白，将A液与B液按照50:1的比例混匀后得到BCA工作液。将100μLBCA工作液与9μL三蒸水和1μL蛋白样品加入96孔板中，混匀后37℃孵育30min，用全波长酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算蛋白浓度。定量后的蛋白以4:1的比例与5×loadingbuffer混合，沸水中变性8min，放置冰上冷却后储存在-20℃备用。
(4)配制SDS-PAGE凝胶，浓缩胶的电压为90V，分离胶的电压为120V，4℃条件下，100V电压转膜1h，转膜完毕后，立即把蛋白膜放置预先准备好的5％BSA溶液中，在摇床上缓慢摇动，室温封闭1h。
(5)参考HPK1 Antibody(4472SCST)、GLK(D1L4G)RabbitmAb(92427SCST)、HGKAntibody(3485SCST)、RabbitmAb(92711TCST)、β-actin Mouse Monoclonal antibody(BE0021 easybio)的说明书，按照适当比例稀释一抗，4℃缓慢摇动孵育过夜，再用PBST洗涤3次，10min/次。
(6)根据一抗选择Goat Anti-Rabbit IgG(H&L)-HRP Conjugated(BE0101easybio)或Goat Anti-Mouse IgG(H&L)-HRP Conjugated(BE0102 easybio)，参考二抗的说明书，按照适当比例稀释二抗，室温缓慢摇动孵育1h，用PBST洗涤3次，10min/次。
(7)加入ECL发光液，通过显影仪观察结果，利用ImageJ软件对Western结果进行定量，通过与不加化合物的对照组进行对比计算对HPK1、GLK和HGK的蛋白降解率，通过GraphPad拟合计算降解DC50。对HPK1的最大降解率(Dmax)是浓度为1μM时的降解率。实验结果如表2所示。
2、实验结果
表2本发明化合物对HPK1的降解活性和选择性
由表2可见，本发明化合物对HPK1蛋白具有较好的降解活性，而本发明化合物对同家族的GLK和HGK蛋白在10μM下无降解活性，这说明本发明化合物能够高效、高选择性降解HPK1蛋白。
实施例86：T细胞细胞因子释放量的评价
1、实验方法
HPK1激酶抑制T细胞效应细胞因子释放，因而通过ELISA法检测本发明化合物是否能够增强T细胞细胞因子释放能力。人PBMC细胞解冻混悬于含有10％牛胎盘血清的RPMI1640(Gibco)培养基中，细胞接种于96孔板中(1×105/孔)。梯度稀释的本发明化合物加到96孔板中，于37℃，5％CO2培养箱中孵育1h。加入100μL ofanti-CD3/CD28抗体(终浓度1μg/mL)激活PBMCs细胞，然后于37℃，5％CO2培养箱中孵育48h。采用8倍PBS稀释上清液，取稀释的上清100μL，采用人源IL-2ELISA试剂盒(4abio)检测本发明化合物每个浓度下细胞因子IL-2的释放量。采用GraphPad拟合计算本发明化合物的EC50值。实验结果如表3所示。
2、实验结果
表3本发明化合物刺激PBMC释放IL-2细胞因子活性测试结果
由表3可见，以专利WO2023001794第114页公开的实施例化合物7作为阳性对照，本发明化合物能够显著增强PBMC细胞释放IL-2，且优于阳性对照化合物。这说明本发明化合物能够通过降解HPK1蛋白，从而增强T细胞效应细胞因子释放，进而恢复或增强抗肿瘤免疫应答。

Claims (14)

1.一种如式I所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，
式I中：
R1为C1-4烷基、C3-6环烷基或氘代(C1-4烷基)；
R2为C1-4烷基或氘代(C1-4烷基)；
B为C3-10亚环烷基、4-10元亚单环杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
E为
R3为氘、卤素、氰基、C1-4烷基、卤代(C1-4烷基)、C1-4烷氧基或卤代(C1-4烷氧基)；
a为0、1、2或3；
W为-CH2-、-C(CH3)2或
L1为化学键、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L2为化学键、-(CH2)r1-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L3为化学键、-(CH2)r2-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
L4为化学键、-O-、-(CH2)r3-、-(CH2)r4(C＝O)-、C3-10亚环烷基、4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基，所述的4-10元亚单杂环基、6-20元亚螺杂环基、6-18元亚稠杂环基或7-10元亚桥杂环基至少含有1个、2个或3个选自氮、氧或硫的杂原子；
r1为0、1、2、3、4、5或6；
r2为0、1、2、3、4、5或6；
r3为0、1、2、3、4、5或6；
r4为0、1、2、3、4、5或6。
2.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，R1为甲基、乙基、环丙基或-CD3；
和/或，R2为甲基、乙基或-CD3；
和/或，B为亚哌啶基、亚哌嗪基、
3.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体和非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，E为
R3为氟；
a为0或1；
W为-CH2-或
4.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，L1为化学键、且左侧与L2相连，右侧与E相连；
和/或，L2为化学键、-(CH2)r1-、C4-6亚环烷基、且左侧与L3相连，右侧与L1相连；
和/或，L3为化学键、-(CH2)r2-、C4-6亚环烷基、且左侧与L4相连，右侧与L2相连；
和/或，L4为化学键、-(CH2)r3-、-(CH2)r4(C＝O)-、且左侧与B相连，右侧与L3相连；
和/或，n1为1、2、3或4；
和/或，n2为1、2、3或4；
和/或，n3为1、2或3；
和/或，n4为1、2或3；
和/或，n5为1、2或3；
和/或，n6为1、2或3；
和/或，n7为0、1、2或3；
和/或，n8为0、1、2或3；
和/或，n9为0、1、2或3；
和/或，n10为0、1、2或3；
和/或，Q1为CRQ1或N，RQ1为卤素、羟基或C1-4烷基；
和/或，Q为CH或N；
和/或，Q2为CH或N；
和/或，Q3为CH或N；
和/或，Ra为卤素、-(C＝O)或C1-3烷基；
和/或，c为0、1、2或3；
和/或，r1为0、1、2、3或4；
和/或，r2为0、1、2、3或4；
和/或，r3为0、1、2、3或4；
和/或，r4为0、1、2、3或4。
5.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，L1为化学键、且左侧与L2相连，右侧与E相连；
和/或，L2为化学键、-(CH2)r1-、且左侧与L3相连，右侧与L1相连；
和/或，L3为化学键、-(CH2)r2、且左侧与L4相连，右侧与L2相连；
和/或，L4为化学键、-(CH2)r3或-(CH2)r4(C＝O)-；且左侧与B相连，右侧与L3相连；
和/或，n1为1、2或3；
和/或，n2为1、2或3；
和/或，n3为1或2；
和/或，n4为1或2；
和/或，n5为1或2；
和/或，n6为1或2；
和/或，n7为0、1或2；
和/或，n8为0、1或2；
和/或，n9为0、1或2；
和/或，n10为0、1或2；
和/或，Q1为CRQ1或N，RQ1为氟、羟基或甲基；
和/或，Q为CH或N；
和/或，Q2为CH或N；
和/或，Q3为CH或N；
和/或，Ra为氟或-(C＝O)；
和/或，c为0、1或2；
和/或，r1为0、1、2或3；
和/或，r2为0、1、2或3；
和/或，r3为0、1、2、3或4；
和/或，r4为0、1、2、3或4。
6.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，-L4-L3-L2-L1-为化学键、
且左侧与B相连，右侧与E相连；
n1为1或2；
n2为1或2；
n3为1或2；
n4为1或2；
n5为1或2；
n6为1或2；
n7为0、1或2；
n8为0、1或2；
n9为0、1或2；
n10为0、1或2；
Q1为N或CRQ1，RQ1为氢或氟；
Q为CH或N；
Q2为CH或N；
Q3为CH或N；
Ra为氟；
c为0、1或2；
r1为0、1或2；
r2为0、1或2；
r3为0、1、2或3；
r4为0、1或2。
7.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，L1为化学键、
且左侧与L2相连，右侧与E相连；
和/或，L2为化学键、-(CH2)r1-、
且左侧与L3相连，右侧与L1相连；
r1为0、1或2；
和/或，L3为化学键、-(CH2)r2、
且左侧与L4相连，右侧与L2相连；
r2为0、1或2；
和/或，L4为化学键、-(CH2)r3-或-(CH2)r4(C＝O)-；且左侧与L3相连，右侧与E相连；
r3为0、1、2或3；
r4为0、1、2或3。
8.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，-L1-L2-L3-L4-为化学键、
且左侧与E相连，右侧与B相连；
r2为1或2；
r3为0、1、2或3；
r4为1或2。
9.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，为式I-1、I-2、I-2A’、I-3或者I-4所示的化合物，或者其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，
其中：
环B’为含氮杂环基；
环L3’为含氮杂环基；
R1、R2、L1、L2、L3、B、E、r2、r3、r4的定义如权利要求1-8任一项所述。
10.根据权利要求1所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、氘代物或者水合物，其特征在于，选自以下任一的化合物：
11.一种权利要求9所述的式I-2所示的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
在溶剂中，式I-2A所示的化合物或其盐与式I-2B所示的化合物经过还原胺化反应得到式I-2所示的化合物；
将以上方法制得的式I-2化合物与药学上可接受的酸成盐，即得所述药学上可接受的盐；
其中：
r3-1为0或1；
X为单键或CH；
环B’、环L3’、R1、R2、L1、L2、E、r3的定义如权利要求1-8任一项所述。
12.一种药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1-10任一项所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物，以及药学上可接受的载体或辅料。
13.一种权利要求1-10任一项所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物，或者权利要求12所述的药物组合物在制备用于调节造血祖细胞激酶1泛素化、降解的药物中的应用。
14.一种权利要求1-10任一项所述的吡嗪甲酰胺类化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体、代谢产物、前药、溶剂合物或者水合物，或者权利要求12所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
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