CN120987936A - 一种苯并吡唑类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种苯并吡唑类化合物及其制备方法和应用。所述苯并吡唑类化合物为式I所示的化合物、光学异构体或药学上可用的盐：其中，R₁选自氢、C1‑C8直链或支链烷基、芳基、取代芳基、C3‑C8脂肪环基、取代C3‑C8脂肪环基、C3‑C8脂杂环基、取代C3‑C8脂杂环基、‑(CH2)nNR₄R₅；取代芳基、取代C3‑C8脂肪环基、取代C3‑C8脂杂环基上的取代基独立的选自C1‑C8直链或支链烷基。本发明首次合成了一种含有噻唑烷‑2，4‑二酮的苯并吡唑类化合物，并将其用于AMPK的激活剂和治疗急性肾损伤的药物上，其表现出良好的效果。

Description

一种苯并吡唑类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及一种含有噻唑烷-2，4-二酮的苯并吡唑类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)是以血肌酐和血尿素氮异常上升和肾功能下降为特段常见的临床综合征，每年影响约1330万例患者。肾损伤后，小管细胞通过自噬产生FGF2，导致成纤维细胞活化和肾纤维化。进而导致肾细胞的异常增值，从而导致纤维化(Cell Death Dis.2021Oct 9；12(10):925.)，最终导致病人死亡。目前尚无有效的药物治疗方法。

腺苷酸活化蛋白激酶(Adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可作为代谢燃料计，感知细胞和整个生物体的能量状态。激活AMPK可以通过调节能量代谢、氧化应激、线粒体功能、自噬、炎症反应和内质网应激等多种下游信号通路来发挥抑制纤维化的作用。

现有技术CN118359575A从杜鹃属植物中分离得到的式(I)和式(II)结构的杂萜类化合物：

所述化合物对脂多糖以及缺血再灌诱导的小鼠急性肾损伤具有显著的保护作用。但其效果尚待提高。

现有技术CN114028378A公开了迁移型松香烷二萜类化合物在制备肾脏保护方面的药物的用途：

如式I所示的化合物对肾缺血诱发的肾损伤的效果优于环孢素、丹参酮IIa、地塞米松和氨磷汀，对肾损伤具有明显的保护作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种苯并吡唑类化合物及其制备方法和其在治疗急性肾损伤上的应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种苯并吡唑类化合物，其为式I所示的化合物、光学异构体或药学上可用的盐：

其中，R₁选自氢、C1-C8直链或支链烷基、芳基、取代芳基、C3-C8脂肪环基、取代C3-C8脂肪环基、C3-C8脂杂环基、取代C3-C8脂杂环基、-(CH2)nNR₄R₅；

取代芳基、取代C3-C8脂肪环基、取代C3-C8脂杂环基上的取代基独立的选自C1-C8直链或支链烷基；

n为0-4的整数，R₄、R₅独立的选自C1-C5直链或支链烷基；

R₂为X为氮或CH；

R₆选自氢、C3-C8含氮脂杂环基、

R₇选自氢、C1-C3烷基；

R₈选自氢、C1-C8直链或支链烷基羰基、C1-C8直链或支链烷基酯基；

R₃选自氢、卤素。

根据本发明的实施例，还可以对本发明作进一步的优化，以下为优化后形成的技术方案：

在其中一个优选的实施例中，所述芳基为苯基。

在其中一个优选的实施例中，R₁选自C1-C5直链或支链烷基、芳基、取代芳基、C3-C6脂肪环基、取代C3-C6脂肪环基、C3-C6脂杂环基、取代C3-C6脂杂环基；

取代芳基、取代C3-C6脂肪环基、取代C3-C6脂杂环基上的取代基独立的选自C1-C3直链或支链烷基。

在其中一个优选的实施例中，R₁选自取代吗啉基；取代基选自C1-C3直链或支链烷基。

在其中一个优选的实施例中，R₁选自

在其中一个优选的实施例中，R₄、R₅独立的选自C1-C3直链或支链烷基。

在其中一个优选的实施例中，R₂选自：

在其中一个优选的实施例中，R₈选自C1-C4直链或支链烷基羰基、C1-C4直链或支链烷基酯基。

在其中一个优选的实施例中，R₈选自叔丁氧羰基、叔丁碳羰基。

在其中一个优选的实施例中，所述苯并吡唑类化合物，其为下式所示的化合物、光学异构体或药学上可用的盐：

基于同一发明构思，本发明还要求保护所述苯并吡唑类化合物的制备方法，包括以下步骤：

5-溴-6-卤-1H-吲哚-3-甲醛依次进行开环反应、关环反应，得到5-溴-6-卤-1H-吲唑-3-甲醛；然后与硼酸酯发生铃木反应，在5位引入吡啶联哌嗪或者苯联哌嗪的杂环片段；然后通过克脑文格尔反应，在3位引入噻唑烷二酮官能团，得到苯并吡唑类化合物。

基于同一发明构思，本发明还要求保护所述苯并吡唑类化合物的合成路线，如下所示：

基于同一发明构思，本发明还要求保护所述苯并吡唑类化合物在制备治疗或者预防急性肾损伤的药物中的应用。

在其中一个优选的实施例中，所述急性肾损伤为缺血性致急性肾损伤、药物毒性致急性肾损伤或病菌感染致急性肾损伤。

在其中一个优选的实施例中，所述药物毒性致急性肾损伤为顺铂导致的急性肾损伤。

在其中一个优选的实施例中，所述病菌感染致急性肾损伤为病菌的内毒素脂多糖导致的急性肾损伤。

基于同一发明构思，本发明还要求保护所述苯并吡唑类化合物在制备AMPK激活剂中的应用。

基于同一发明构思，本发明还要求保护一种治疗或者预防急性肾损伤的药物组合物，所述药物组合物包括所述苯并吡唑类化合物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明首次合成了一种含有噻唑烷-2，4-二酮的苯并吡唑类化合物，并将其用于AMPK的激活剂和治疗急性肾损伤的药物上，其表现出良好的效果，有望成为一类新的AMPK的激活剂和治疗急性肾损伤的药物。

附图说明

图1是不同浓度的24f和991对AMPKα1β1γ1酶活性的影响的；

图2是24f和991对AMPK及其下游蛋白的影响；其中，图2A为Western blot检测经不同浓度的化合物24f处理后AMPK及其下游蛋白的表达结果图；图2B为p-AMPK蛋白的Westernblot数据的定量分析的柱形图；图2C为p-ACC蛋白的Western blot数据的定量分析的柱形图；

图3是化合物24f处理后各组小鼠肾组织HE染色图(100μm)。

具体实施方式

本发明不局限于下列具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

本发明所使用的术语“不被取代”是指无取代基或仅被氢取代。

本发明所使用的部分术语定义如下：

“卤素”是指氟、氯、溴和碘。

“＝O”是指氧基。

“-CO-NH-”是“-酰胺-”。

“羰基”是指

“烷基”当作一基团或一基团的部分时是指直链或者带有支链的脂肪烃基团。优先选择烷基为C1-C14的烷基；更优先选择为：C1-C10烷基；最优先选择为C1-C6，除非另有指明。直链或和带有支链的C1-C8烷基的实例包括，但不限于：甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、特丁基、己基、戊基、赓基、辛基等。直链或和带有支链的C1-C6烷基的实例包括，但不限于：甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、特丁基、己基、戊基等。C1-C3烷基的实例包括，但不限于：甲基、乙基、正丙基、2-丙基。

“脂肪环”是指饱和或部分饱和的单环、稠环或螺环之碳环。以3-9个碳原子组成的环为优先选择。实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

“脂杂环”是指上文定义的“环烷基”中的一个或多个(优选1、2或3个)碳原子被氧、氮、磷、硼、硒、硅或硫原子(优选氧、硫或氮)代替而形成的基团。其中，杂环烷基和烷基部分见本文有关定义。优选含有1-3个杂原子。优选的环为3-14元环(即，3-14元杂环烷基)，更优选的环为4-7元环(即，4-7元杂环烷基)。杂环烷基包括但不限于：吡咯烷基、二氢吡咯基、四氢吡咯基、二氢吡唑基、哌啶基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢硫代呋喃基、四氢吡喃基、氧杂环丙基、氮杂环丙基或2-吡唑啉基，以及内酰胺、内酯、环状亚胺和环状酸酐等。杂环烷基可被一个或多个取代基取代。

“双环基”是指上文定义的“环烷基”或者“杂环烷基”的环系中至少有两个原子为双环的共有原子。

桥环(三环)基是指上文定义的“环烷基”或者“杂环烷基”的环系中，至少有1个原子为桥原子。

螺环基是指至少有1个原子为双环的共用原子。

“杂环烷基烷基”是指：(杂环烷基-烷基)-的基团。其中，杂环烷基和烷基部分见本文有关定义。杂环烷基烷基基团包括但不限于：(2-四氢呋喃基)甲基、(2-四氢硫代呋喃基)甲基等。

“烷基氨基”包括单烷基氨基和二烷基氨基两种，除非另有指明。“单烷基氨基”是指：(烷基-NH)-的基团；“二烷基氨基”是指：((烷基)₂N)-的基团。其中，烷基见本文有关定义。该烷基基团优先选择C1-C6的烷基基团。实例包括，但不限于：N-甲胺基、N-乙胺基、N-异丙胺基、N,N-(二乙基)胺基等。

“杂烷氨基”是指：单-杂烷基氨基和二-杂烷基氨基两种，除非另有说明。单-杂烷基氨基是指：(杂烷基-)NH-的基团；二-杂烷基氨基是指(杂烷基)₂N-的基团。其中的“杂烷基”部分的定义见本文相关部分。

“氨基烷基”是指：(氨基-烷基)-的基团。其中的“烷基”部分见本文有关定义。该氨基烷基优选为氨基C1-C6烷基。应予说明，“氨基-C1-C6烷基”是指被“氨基”取代了的C1-C6烷基，其实例包括但不限于：氨基乙基、1-氨基丙基、2-氨基丙基等。

“芳基氨基”包括单-芳基氨基和二-芳基氨基两种，除非另有说明。单-芳基氨基是指：(芳基-)NH-的基团；二-芳基氨基是指式(芳基)₂N-的基团；芳基的定义见本文相关部分。

“酰基”包括(烷基-CO)-的基团和(芳基-CO)-的基团，除非另有说明。其中烷基或芳基均见本文中的有关定义。酰基的实例包括，但不限于：乙酰基、丙酰基、异丁酰基、苯甲酰基等。

“酰胺基”包括(烷基-CONH)-的基团和(芳基-CONH)-的基团，除非另有说明。其中，烷基或芳基均见本文中的有关定义。酰胺基的实例包括，但不限于：乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰胺基、异丁酰胺基、苯甲酰胺基等。

“烯基”作为一基团或一基团的一部分时是指至少含有一个碳-碳双键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链。优先选择具有C2-C14的烯基。C2-C12则更好；最为优先选择的是C2-C6的烯基。该基团可在其主链中含有多个双键且其构象可各自为E或Z。烯基基团的例子包括，但不限于：乙烯基、丙烯基等。

“炔基”作为一基团或一基团的一部分时是指至少含有一个碳-碳三键的脂肪烃基团，可为直链或支链。优选为C2-C14炔基，更优选为C2-C12炔基，最优选为C2-C6炔基。所述炔基的例子包括，但不限于：乙炔基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-3-炔-1-基、1-甲基丙-2-炔-1-基、戊-1-炔-1-基、戊-4-炔-1-基、己-1-炔-1-基、己-5-炔-1-基等。

“烷氧基”是指(烷基-O)-的基团。其中的“烷基”部分见本文有关定义。所述烷氧基优选为C1-C8烷氧基，更优选为C1-C6烷氧基。所述烷氧基的实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、1-甲基丁氧基、1-乙基丙氧基、正己氧基、异己氧基、3-甲基戊氧基、2-甲基戊氧基、1-甲基戊氧基、3,3-二甲基丁氧基、2,2-二甲基丁氧基、1,1-二甲基丁氧基、1,2-二甲基丁氧基、1,3-二甲基丁氧基、2,3-二甲基丁氧基、1-乙基丁氧基、2-乙基丁氧基等。另外，“烷氧基羰基”表示上述定义的“烷氧基”与羰基键合的基团，例如可举出甲氧基羰基、乙氧基羰基等。

“烯氧基”是指(烯基-O)-的基团。其中，烯基见本文有关定义。C1-C6的烯氧基为优先选择。

“炔氧基”是指(炔基-O)-的基团。其中，炔基见本文有关定义。C1-C6的炔氧基为优先选择。

“烷氧羰基”是指(烷基-C(O))-的基团。其中，烷基见本文有关定义。优先选择的烷基基团为C1-C6烷基。其实例包括但不限于：甲羰基、乙羰基等。

“烷氧酯基”是指(烷基-O-C(O))-的基团。其中，烷基见本文有关定义。优先选择的烷基基团为C1-C6烷基。其实例包括但不限于：甲氧羰基、乙氧羰基等。

“烷基亚磺酰基”是指(烷基-S(O))-的基团。其中，烷基见本文有关定义。优先选择的烷基为C1-C6烷基基团。烷基亚磺酰基基团包括但不限于：甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基等。

“烷基磺酰基”是指(烷基-S(O)₂-O)-的基团。其中，烷基见本文有关定义。该优先选择的烷基为C1-C6烷基基团。其实例包括，但不限于：甲磺酰基、乙磺酰基等。

“烷基氨基羰基”是指烷基氨基-羰基基团。其中，烷基氨基见本文有关定义。

“环烷基烷基”是指环烷基-烷基基团。其中，环烷基和烷基部分见本文有关定义。单环烷基基团包括但不限于：环丙基甲基，环戊基甲基，环己基甲基、环庚基甲基等。

“杂环烯基”是指至少含有一个双键的杂环烷基。杂环烷基见本文有关定义。

“芳基”作为一基团或一基团的部分是指：(1)芳香性的单环或稠环；优先选择具有5-12个碳原子的芳香性碳环(环原子均为碳的环状构造)。芳基的实例包括，但不限于：苯基，萘基；(2)可以连接部分饱和的碳环，例如：苯基和C5-7环烷基或C5-7环烯基基团系互相稠合而形成一环状结构。实例包括，但不限于：四氢萘基，茚基或氢茚基等。芳基基团可被一个或多个取代基取代。

“芳基烯基”是指：(芳基-烯基)-的基团。其中，芳基和烯基见本文有关定义。示例性的芳基烯基基团包括，但不限于：苯基丙烯基等。

“芳烷基”是指：(芳基-烷基)-的基团。其中，芳基和烷基部分见本文有关定义。示例性的芳烷基基团包括，但不限于：苯甲基，苯乙基、1-萘甲基等。

“环烯基”是指非芳香性单环或多环环系。其至少含有一个碳-碳双键且每环优选具有5-10个碳原子。示例性的单环状环烯基环包括，但不限于：环戊烯，环己烯或环庚烯。环烯基团可被一个或多个取代基取代。

“杂芳基”是指单环的或稠合多环的芳香杂环基，优选其是具有一个或多个(优选3至14个、更优选5至10个、尤其优选5或6个)碳原子、和一个或多个(优选1、2、3或4个)氧、氮、磷或硫环原子(优选O、S或N)作为成环原子的芳族基团，优选该芳族基团为4-15元杂芳基，更优选为5-7元杂芳基。所述杂芳基的实例可以列举例如：呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯并咪唑基、吡啶基、咪唑基、3-苯基吡咯基、噻唑基-噁唑基、四唑基、异噁唑基、吲唑基、哒嗪基、喹啉基、嘌呤基、咔唑基、吖啶基、嘧啶基、2，3’-联呋喃基和异喹啉基。

“杂芳基烷基”是指：(杂芳基-烷基)-的基团。其中，杂芳基和烷基部分见本文有关定义。示例性的杂芳烷基基团包括，但不限于：2-呋喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等。

“烷基醚基”是指：(烷基)-O-的基团。其中的“烷基”部分见本文有关定义。

“环烷醚基”是指：(环烷基)-O-的基团。其中的“环烷基”部分见本文有关定义。

“杂烷醚基”是指：(杂烷基)-O-的基团。其中的“杂烷基”部分见本文有关定义。

“芳醚基”是指：(芳基)-O-的基团。其中的“芳基”部分见本文有关定义。

“芳基烷醚基”是指：(芳基-烷基)-O-的基团。其中的“芳基”和“烷基”部分见本文有关定义。

“杂芳醚基”是指：(杂芳基)-O-的基团。其中的“杂芳基”部分见本文有关定义。

“杂芳基烷醚基”是指：(杂芳基-烷基)-O-的基团。其中的“杂芳基”和“烷基”部分见本文有关定义。

“杂环烷醚基”是指：(杂环烷基)-O-的基团。其中的“杂环烷基”部分见本文有关定义。

“杂环烷氨基”是指：单-杂环烷基氨基和二-杂环烷基氨基两种，除非另有说明。单-杂环烷基氨基是指：(杂环烷基-)NH-的基团；二-杂环烷基氨基是指(杂环烷基)₂-N-的基团。其中的“杂环烷基”部分的定义见本文相关部分。

“芳基烷氨基”是指：单-芳基烷基氨基和二-芳基烷基氨基两种，除非另有说明。单-芳基烷基氨基是指：(芳基-烷基)-NH-的基团；二-芳基烷基氨基是指(芳基-烷基)₂-N-的基团。其中的“芳基”和“烷基”部分的定义见本文相关部分。

“环烷基氨基”是指：单-环烷基氨基和二-环烷基氨基两种，除非另有说明。单-环烷基氨基是指：(环烷基)-NH-的基团；二-芳基烷基氨基是指(环烷基)₂-N-的基团。其中的“环烷基”部分的定义见本文相关部分。

“芳基氨基”是指：单-芳基氨基和二-芳基氨基两种，除非另有说明。单-芳基氨基是指：(芳基)-NH-的基团；二-芳基氨基是指(芳基)₂-N-的基团。其中的“芳基”部分的定义见本文相关部分。

“杂芳基氨基”是指：单-杂芳基氨基和二-杂芳基氨基两种，除非另有说明。单-杂芳基氨基是指：(杂芳基)-NH-的基团；二-杂芳基氨基是指(杂芳基)₂-N-的基团。其中的“杂芳基”部分的定义见本文相关部分。

“杂芳基烷基氨基”是指：单-杂芳基烷基氨基和二-杂芳基烷基氨基两种，除非另有说明。单-杂芳基烷基氨基是指：(杂芳基-烷基)-NH-的基团；二-杂芳基烷基氨基是指(杂芳基-烷基)₂-N-的基团。其中的“杂芳基”和“烷基”部分的定义见本文相关部分。

除非另有说明，本发明的亚基是指二价基团，即是指一价基团中一个氢原子被化合价替代的基团。例如，“亚杂烷基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂烷基；“亚杂环基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂环基；“亚芳基”是指其中一个氢原子被化合价替代的芳基；“亚烷基”是指其中一个氢原子被化合价替代的烷基；“亚烯基”是指其中一个氢原子被化合价替代的烯基；“亚环烷基”是指其中一个氢原子被化合价替代的环烷基；“亚杂芳基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂芳基；“亚杂环烷基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂环烷基；“亚杂环烯基”是指其中一个氢原子被化合价替代的杂环烯基；“亚烷氧基”是指其中一个氢原子被化合价替代的烷氧基；“亚烯氧基”是指其中一个氢原子被化合价替代的烯氧基；“亚炔氧基”是指其中一个氢原子被化合价替代的炔氧基等。其中，上述杂环基、芳基、烷基、烯基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、杂环烯基、烷氧基、烯氧基、炔氧基等的定义见本文的相关定义。

本发明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的各种异构型式。包括：非镜像异构体、镜像异构体、互变异构体和“E”或“Z”构型异构体的几何异构体等。任何具有一定基础的化学工作者均可以分离出上述光学纯或者立体异构纯的化合物。

术语“药学上可接受的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。通式(I)所表示的化合物的药学上可接受的盐有两种形成形式：一是与酸形成的盐；另一是与碱或者碱金属形成的盐。与通式(I)所表示的化合物形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸和有机酸。合适的无机酸包括：盐酸，硫酸和磷酸。合适的有机酸可选自脂肪族、环脂肪族、芳香性、杂环羧酸和磺酸类有机酸；其实例包括但不限于：甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、甘醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、甘氨酸、精氨酸、柠檬酸、反丁烯二酸、烷基磺酸、芳级磺酸等。与通式(I)所表示的化合物形成药学上可接受的盐的碱金属包括：锂、钠、钾、镁、钙、铝、锌等；与通式(I)所表示的化合物形成药学上可接受的盐的碱包括：胆碱、二乙醇胺、吗啉等。

本发明的化合物可单独使用，也可以与其它一种或者多种药物联合使用；或者与手术或者放疗联合使用；或与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂做成一定的剂型给药。具体的剂型依据给药途径而定。

本发明的非肠道注射用药物配方包括药学上可接受的无菌水剂或非水溶液、分散剂、悬浮剂或乳化剂以及使用前才配成可注射的无菌水溶液的粉针剂。

若需要，并为了更有效的分布，可将本发明的化合物并至缓慢释放或目标传送系统，例如：聚合物基质，脂质体和微球体内。

口服给药的固态型剂型包括：胶囊，药锭，药片，粉末和颗粒。在这些固体剂型中，含有通式(I)所表示的活性化合物与至少一种惰性并且药学上可接受的赋形剂或载剂混合。这些赋形剂或载剂包括柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂，例如：淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和水杨酸；b)结合剂，例如：羧甲基纤维素，褐藻酸盐，明胶聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和阿拉伯胶；c)崩解剂，例如：洋菜胶，碳酸钙，马铃薯或树薯淀粉，褐藻酸，某些硅酸盐和碳酸钠；d)溶解延迟剂，例如：石蜡；e)吸收加速剂，例如：季铵化合物；f)湿润剂，例如：鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；g)吸附剂，例如：高龄土和皂土；和h)润滑剂，例如：滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固态聚乙二醇。

固态剂型的药锭，糖衣锭，胶囊，药片和颗粒可制备成具有涂层或外壳。

活性化合物亦可呈微胶囊形式给药。如需要，可具备一或多种上述提及的赋形剂。

用口给药的液态剂型包括药学上可接受的乳化剂、溶液、悬浮剂、糖浆等。除了活性化合物以外，该液态剂型可含有普遍用于此项技艺中的惰性稀释剂，例如：水或其他溶剂，稳定剂和乳化剂，例如：乙基醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲酸醇，苯甲酸苯甲酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油类(特别是棉籽，落花生，玉米，胚芽，橄榄，蓖麻和芝麻油)，甘油，四氢呋喃醇，聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯类等。

除了惰性稀释剂的外，口服组合物亦可包括：辅剂，例如：湿润剂，乳化剂和悬浮剂，甜味剂，香料和调香剂。

悬浮液中，除了活性化合物的外，可含有悬浮剂，例如：乙氧化异硬脂基醇类，聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酐酯等。

用于直肠或阴道给予的组合物优选为栓剂。制备可由将本发明的化合物与适当的非刺激性赋形剂或载体混合而得。

本发明化合物的局部给药用的剂型包括粉末，贴片，喷剂，油膏和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和所需的任何防腐剂，缓冲剂或推进剂混合而得。

本发明的化合物的合成路线如下：

条件和试剂:(a)Bromide or methyl iodide,K₂CO₃,acetone or DMF,TBAI,45℃or 90℃,12h,yield 33％-85％；(b)NaNO₂,2N HCl,DMF,-5℃-rt,12h,yield

55％-57％；(c)Corresponding boric acid ester,Pd(dppf)₂Cl₂,1,4-Dioxane:H₂O＝3:1,

N₂ atmosphere,reflux,12h,yield 46％-52％；(d)Corresponding N-substituted

1,3-thiazolane-2,4-dione,Piperdine,isopropanol,reflux,5h,yield 82％-91％；(e)CF₃COOH,CH₂Cl₂,rt,2h,yield 88％-90％.

以下详细说明：

以2，4-噻唑烷二酮为起始原料，以碳酸钾作为缚酸剂，以丙酮或者DMF作为反应溶剂，以TBAI作为催化剂，在45℃或者90℃的条件下发生亲核取代反应，得到化合物19c-h。以化合物20a或者20b为原料，以2N HCl作为反应溶剂，经历一个开环、关环的反应历程，得到化合物21a-b。化合物21a-b与相应的硼酸酯发生铃木反应，得到化合物22a-e。化合物22a-e与相应的噻唑烷二酮发生克脑文格尔反应，得到化合物23a-r。以二氯甲烷为溶剂，23a-r与三氟乙酸反应得到化合物24a-l，24o-q。

条件和试剂:3,3-dimethylbutanoyl chloride,triethylamine,CH₂Cl₂,roomtemperature,yield 65％.

为了制备化合物24r，以24k为原料，以二氯甲烷为溶剂，以三乙胺为催化剂，在室温的条件下，与3，3-二甲基丁酰氯反应得到化合物24r。

为了合成硼酸酯26，以5-溴-2-吡啶甲醛和吗啉为原料，发生醛胺缩合反应得到中间体25，然后以双(三环己基膦)二氯化钯(29934-17-6)为催化剂，与双(频哪醇合)二硼发生铃木反应得到硼酸酯26。以化合物20a为起始原料，与相应的硼酸酯发生铃木反应得到化合物27a-g，与3-甲基噻唑烷-2，4-二酮发生克脑文格尔反应，在3位引入3-甲基噻唑烷-2，4-二酮官能团，进而得到目标化合物28a-g。

条件和试剂:(a)STAB,CH₂Cl₂,rt,12h,yield 90％；(b)29934-17-6,Bis(pinacolato)diboron,1,4-Dioxane,KOAc,12h；(c)Corresponding boric acid ester,Pd(dppf)₂Cl₂,1, 4-Dioxane: H₂O＝3:1, N₂ atmosphere, reflux, 12h, yield 46％-52％； (d)3-methyl-1,3-thiazolane-2,4-dione,Piperdine,isopropanol,reflux,5h,yield 82％-91％.

3-丙基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19c)

将2,4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)加入到30mL丙酮中，再加入1-溴丙烷(2.5g,20.4mmol)和碳酸钾(2.8g,20.4mmol)，油浴锅温度设定为90℃，搅拌反应10h。反应完毕后，待反应瓶温度降至室温，过滤除去碳酸钾，收集滤液，旋干得到黄色油状物。加入60毫升乙酸乙酯溶解，加入20mL饱和食盐水，洗涤3次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥过夜后，过滤除去无水硫酸钠，旋干有机溶剂，为淡黄色油状物，称重为1.5g，收率55.56％。产物未经纯化，直接投下一步。

3-苄基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19d)

以2，4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)和溴苄(2.9g,17.0mmol)为原料，使用上述制备化合物19c的方法，制备得到化合物19d，为白色固体粉末，收率80.12％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.50–7.11(m,5H),4.69(d,J＝2.1Hz,2H),3.93–3.66(m,2H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.88,171.35,135.29,128.89,128.73,128.28,45.20,33.81.

3-环戊基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19e)

将2,4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)加入到30mL丙酮中，再加入1-溴丙烷(2.5g,20.4mmol)、碳酸钾(2.8g,20.4mmol)和TBAI(1.9g,5.1mmol)，油浴锅温度设定为90℃，搅拌反应10h。反应完毕后，待反应瓶温度降至室温，过滤除去碳酸钾，收集滤液。旋干得到黄色油状物，加入60毫升乙酸乙酯溶解，然后加入20mL饱和食盐水，洗涤3次，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥过夜后，过滤除去无水硫酸钠，旋干有机溶剂，为淡黄色油状物，使用硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得黄色油状物1.1g，收率34.98％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.51(p,J＝8.5Hz,1H),3.83(s,2H),2.09–1.59(m,6H),1.63–1.30(m,2H).¹³C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ171.84,171.64,54.77,33.33,28.30,25.20.

3-(环戊基甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19f)

以2，4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)和溴甲基环己烷(2.9g,17.0mmol)为原料，使用上述制备化合物19c的方法，使用上述制备化合物19c的方法，制备得到化合物19f，为白色固体粉末，收率30.12％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ3.83(s,2H),3.28(d,J＝7.4Hz,2H),1.66–1.35(m,6H),1.03(h,J＝11.6Hz,3H),0.93–0.70(m,2H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ172.02,171.76,48.00,36.06,33.65,30.53,26.12,25.55.

3-(2-(二乙基胺基)乙基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19g)

以2，4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)和1-溴-3-乙基戊烷(3.0g,17.0mmol)为原料，使用上述制备化合物19c的方法，制备得到化合物19g,为淡黄色固体粉末，收率45.17％。¹H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ3.91(d,J＝2.2Hz,2H),3.66(td,J＝7.1,2.2Hz,2H),2.58(td,J＝7.0,2.1Hz,2H),2.49(td,J＝7.1,2.3Hz,4H),0.95(td,J＝7.2,2.2Hz,6H).¹³C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ171.74,171.47,49.22,47.10,39.89,33.66,12.00.

3-(2-吗啉乙基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物19h)

以2，4-噻唑烷二酮(2.0g,17.0mmol)和2-(4-吗啉)乙基溴(3.3g,17.0mmol)为原料，使用上述制备化合物19c的方法，制备得到化合物19h，未经纯化，直接投下一步。

5-溴-6-氯-1H-吲哚的制备(化合物21a)

将亚硝酸钠(14.4g，208.7mmol)加入500mL三颈瓶中，向三颈瓶中依次加入104.4mL水和78.3mL DMF，将反应瓶放置在冷肼中，冷肼温度设定为-10℃。将33mL浓盐酸稀释6倍备用。整个反应体系抽真空，待温度降低为-5℃的时候，氩气保护下缓慢将35.2mL 2N盐酸滴入到反应体系中，整个过程控制温度为-5℃。

滴完后，将5-溴-6-氯-1H-吲哚(6.0g,26.0mmol)溶于到78.3mL DMF溶液备用。整个反应体系温度控制在-5℃，氩气保护下将5-溴-6-氯-1H-吲哚的DMF溶液缓慢滴入到反应体系中，反应液由无色透明溶液变为棕红色透明溶液，滴加完毕后，室温搅拌过夜反应。

第二天，反应液中有大量红棕色固体产生，抽滤，得到约4.1g粗品。收集滤液，前后分别加入3次100mL乙酸乙酯，萃取，合并有机相。无水Na₂SO₄干燥有机层并放置4h。将抽滤得到的固体用适量乙酸乙酯溶解后，与滤液合并，旋干，得红棕色油状物，用硅胶柱层析进一步分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得红棕色固体5.1g，收率76.12％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.36(s,1H),10.17(s,1H),8.43(s,1H),8.04(s,1H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ187.44,143.12,140.90,132.39,125.44,120.86,117.23,113.41.HRMS(ESI)m/z calcdfor[C₈H₄BrClN₂O+H]⁺:258.9196；found:258.9253[M+H]⁺.

实施例1

叔丁基-4-(5-(6-氯-3-甲酰基-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物22a)

将化合物21a(0.2g,0.8mmol)，6-(4-Boc-1-哌嗪基)吡啶-3-硼酸频哪醇酯(0.7g，2.0mmol)，[1,1-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(0.07g，0.09mmol)，碳酸铯(1.6g,4.9mmol)依次加入到100mL圆底烧瓶中，向圆底烧瓶中加入30mL 1，4-二氧六环和10mL水，整个装置抽真空，氮气保护下，加热回流反应过夜。然后，将反应瓶放置在室温下自然冷却，旋干1，4-二氧六环，向反应液中加入40mL水和20毫升乙酸乙酯，萃取3次，合并乙酸乙酯层。用20毫升饱和食盐水洗涤有机相3次，合并有机相。无水Na₂SO₄干燥有机相24h。抽滤，旋干有机溶剂，得到红黑色油状物，使用硅胶柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得黄色固体0.2g，收率56.66％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.31(s,1H),10.18(s,1H),8.19(d,J＝2.5Hz,1H),8.02(s,1H),7.93(s,1H),7.66(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),3.56(dd,J＝6.9,3.7Hz,4H),3.45(dd,J＝6.7,3.8Hz,4H),1.43(s,10H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ187.65,158.34,154.41,148.11,143.89,141.03,139.27,133.65,132.29,124.40,122.74,120.09,112.53,106.66,79.49,44.73,28.52.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₄ClN₅O₃+H]⁺:442.1640；found:442.1656[M+H]⁺.

实施例2

叔丁基-4-(4-(6-氯-3-甲酰基-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物22b)

以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和4-(4-Boc-1-哌嗪基)苯硼酸频哪醇酯(0.3g,0.8mmol)为原料，使用上述实施例1的方法，制备得到化合物22b，为灰白色固体粉末，收率51.25％。¹H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ11.70(s,1H),10.29(d,J＝2.0Hz,1H),8.29(d,J＝1.9Hz,1H),7.71(d,J＝1.9Hz,1H),7.41(dd,J＝8.6,2.1Hz,2H),7.01(d,J＝8.2Hz,2H),3.67(t,J＝5.1Hz,4H),3.26(t,J＝5.2Hz,4H),1.55(s,9H).¹³C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ187.25,155.01,150.48,144.69,140.61,137.12,133.64,130.78,123.58,120.14,115.70,111.02,49.00,28.51.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₃H₂₅ClN₄O₃+H]⁺:441.1688；found:441.1699[M+H]⁺.

实施例3

叔丁基-4-(4-(6-氯-3-甲酰基-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物22c)

以化合物21b(0.18g,0.8mmol)和6-(4-Boc-1-哌嗪基)吡啶-3-硼酸频哪醇酯(0.3g,0.8mmol)为原料，使用上述实施例1的方法，制备得到化合物22c，为淡黄色固体粉末，收率61.40％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.20(s,1H),10.22(s,1H),8.48(d,J＝2.4Hz,1H),8.25(s,1H),7.90(dt,J＝8.7,2.0Hz,1H),7.75(s,2H),6.94(d,J＝8.9Hz,1H),3.55(t,J＝5.1Hz,4H),3.45(t,J＝5.2Hz,4H),1.43(s,10H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ187.77,158.44,154.42,146.16,144.08,140.86,136.67,134.23,126.79,125.70,121.72,117.40,112.23,107.71,79.47,67.47,44.92,28.53,25.58.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₅N₅O₃+H]⁺:408.2030；found:408.2040[M+H]⁺.

实施例4

叔丁基-4-(4-(3-甲酰基-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物22d)

以化合物21b(0.18g,0.8mmol)和4-(4-Boc-1-哌嗪基)苯硼酸频哪醇酯(0.3g,0.8mmol)为原料，使用上述实施例1的方法，制备得到化合物22d，为灰白色固体粉末，收率41.40％，¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.20(s,1H),10.22(s,1H),8.26(s,1H),7.75(s,2H),7.59(d,J＝8.1Hz,2H),7.06(d,J＝8.2Hz,2H),3.48(t,J＝5.2Hz,4H),3.16(t,J＝5.2Hz,4H),1.43(s,10H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ187.90,154.35,150.66,144.09,140.79,136.75,131.21,128.01,127.08,121.74,117.36,116.66,112.08,79.50,48.52,28.52.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₃H₂₆N₄O₃+H]⁺:407.2078；found:407.2086[M+H]⁺.

实施例5

叔丁基-4-(4-(6-氯-3-甲酰基-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物22e)

以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和(R)-2-甲基-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.3g,0.8mmol)为原料，使用上述实施例1的方法，制备得到化合物22e，为白色固体粉末，收率51.25％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.32(s,1H),10.19(s,1H),8.17(d,J＝2.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.94(s,1H),7.66(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.91(d,J＝8.9Hz,1H),4.41–4.03(m,3H),3.82(dt,J＝13.3,3.3Hz,1H),3.24–3.08(m,2H),2.92(td,J＝12.1,3.8Hz,1H),1.43(s,9H),1.13(d,J＝6.6Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ187.69,158.71,154.35,148.07,143.90,141.02,139.24,133.73,132.34,124.01,122.72,120.12,112.53,106.23,79.38,48.34,44.64,28.54,16.28.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₃H₂₆ClN₅O₃+H]⁺:456.1797；found:456.1809[M+H]⁺.

实施例6

叔丁基(Z)-4-(5-(3-((2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23a)

将0.4g化合物22c(0.9mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.12g,1mmol)，20mL异丙醇分别加入到50mL的圆底烧瓶中，滴入3滴哌啶，加热回流反应5h后，反应液析出黄色固体。停止加热，待反应瓶温度降至室温，抽滤，得到黄色固体0.2g，收率43.95％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.96(s,1H),12.41(s,1H),8.58(s,1H),8.45(s,1H),8.27(s,1H),7.99(d,J＝8.7Hz,1H),7.81–7.56(m,2H),6.92(d,J＝8.7Hz,1H),3.54(s,5H),3.45(s,5H),1.43(s,9H).¹³CNMR(126MHz,DMSO-d₆)δ170.87,167.82,158.31,154.42,146.12,140.41,139.84,136.50,132.17,126.17,125.71,124.36,123.52,120.78,116.64,111.70,107.60,79.48,44.95,28.53.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₅H₂₆N₆O₄S+H]⁺:507.1809；found:507.1828[M+H]⁺.

实施例7

叔丁基(Z)-4-(5-(3-((3-甲基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23b)

以化合物22c(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23b，为黄色固体粉末，收率75.42％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.99(s,1H),8.58(d,J＝2.6Hz,1H),8.48(s,1H),8.37(s,1H),8.01(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.82–7.70(m,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),6.94(d,J＝8.9Hz,1H),3.54(dd,J＝6.9,3.6Hz,4H),3.45(s,4H),3.10(s,3H),1.43(d,J＝4.3Hz,9H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.20,166.28,158.32,154.43,146.12,140.39,139.84,136.52,132.23,126.20,125.67,124.35,121.50,121.46,116.67,111.73,107.62,79.51,44.96,28.53,27.84.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₂₆H₂₈N₆O₄S+H]⁺:521.1966；found:521.1985[M+H]⁺.

实施例8

叔丁基(Z)-4-(4-(3-((2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23c)

以化合物22d(0.4g,0.9mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.12g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23c，为黄色固体粉末，收率79.42％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.34(s,1H),8.07(s,1H),7.79–7.53(m,4H),7.04(d,J＝8.3Hz,2H),3.48(t,J＝5.0Hz,4H),3.15(d,J＝10.4Hz,4H),1.43(s,9H).¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ154.33,150.42,140.54,140.34,134.21,131.55,127.88,126.35,124.22,116.58,111.38,79.46,48.63,44.16,28.53,22.69,22.11.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₆H₂₇N₅O₄S+H]⁺:506.1857；found:506.1867[M+H]⁺.

实施例9

叔丁基(Z)-4-(4-(3-((3-甲基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23d)

以化合物22d(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23d，为黄色固体粉末，收率79.52％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.97(s,1H),8.44(d,J＝26.2Hz,2H),7.69(td,J＝19.7,8.7Hz,4H),7.04(d,J＝8.3Hz,2H),3.54–3.43(m,4H),3.16(t,J＝5.2Hz,4H),3.11(s,3H),1.43(s,9H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.23,166.29,154.35,150.51,140.36,139.87,134.77,131.31,127.91,126.59,124.38,121.61,121.38,116.71,116.53,111.53,79.48,48.61,28.53,27.84.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₂₇H₂₉N₅O₄S+H]⁺:520.2013；found:520.2027[M+H]⁺.

实施例10

叔丁基(Z)-4-(4-(6-氯-3-((2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23e)

以化合物22a(0.4g,0.9mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.12g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23e，为黄色固体粉末，收率85.42％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.04(s,1H),12.43(s,1H),8.20(s,2H),7.80(s,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.02(d,J＝8.5Hz,2H),3.49(t,J＝5.0Hz,4H),3.22–3.13(m,4H),1.43(s,9H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.69,167.62,154.34,150.52,140.42,139.95,134.50,131.91,130.96,130.18,124.28,122.70,122.35,115.59,111.82,79.49,48.52,36.28,28.52.HRMS(ESI)m/z calcd for[C28H31ClN6O4S+H]⁺:540.1467；found:540.1479[M+H]⁺.

实施例11

叔丁基(Z)-4-(4-(6-氯-3-((3-甲基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23f)

以化合物22a(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23f，为黄色固体粉末，收率88.42％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.07(s,1H),8.34(s,1H),8.27(s,1H),7.81(s,1H),7.43–7.30(m,2H),7.14–6.95(m,2H),3.49(t,J＝5.0Hz,4H),3.18(dd,J＝6.4,3.9Hz,4H),3.10(s,3H),1.44(s,8H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ170.07,166.16,154.33,150.57,140.43,140.00,134.59,131.96,130.97,130.15,122.73,122.49,122.33,121.14,115.59,111.84,79.48,48.54,28.54,27.88.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₇H₂₈ClN₅O₄S+H]⁺:554.1623；found:554.1641[M+H]⁺.

实施例12

叔丁基(Z)-4-(4-(6-氯-3-((2，4-二氧-3-丙基噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23g)

以化合物22a(0.4g,0.9mmol)，化合物19c(0.16g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23g，为黄色固体粉末，收率71.23％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(s,1H),8.25(s,1H),7.81(s,1H),7.49–7.27(m,2H),7.14–6.94(m,2H),3.61(dd,J＝7.9,6.4Hz,2H),3.49(t,J＝5.1Hz,4H),3.18(dd,J＝6.2,4.3Hz,4H),1.61(h,J＝7.4Hz,2H),1.44(s,9H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H).¹³CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.04,166.06,154.34,150.58,140.49,140.00,134.62,131.96,130.96,130.15,122.76,122.44,122.00,121.40,115.59,111.87,79.48,48.53,43.08,28.54,25.96,21.08,11.53.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₂₉H₃₂ClN₅O₄S+H]⁺:582.1936；found:582.1953[M+H]⁺.

实施例13

叔丁基(Z)-4-(4-(6-氯-3-((3-环戊基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23h)

以化合物22a(0.4g,0.9mmol)，化合物19e(0.19g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23h，为黄色固体粉末，收率58.13％。¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.04(s,1H),8.30(s,1H),8.22(s,1H),7.81(s,1H),7.53–7.27(m,2H),7.13–6.89(m,2H),4.69(p,J＝8.4Hz,1H),3.49(t,J＝4.9Hz,4H),3.18(t,J＝5.2Hz,4H),2.00(qd,J＝13.3,11.6,6.5Hz,2H),1.86(qd,J＝9.9,9.0,5.2Hz,4H),1.65–1.52(m,2H),1.44(s,9H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ169.89,166.01,154.36,150.58,140.45,140.07,134.62,131.99,130.96,130.15,122.72,122.38,121.87,121.13,115.59,111.84,79.48,54.06,48.53,28.89,28.54,25.39.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₃₁H₃₄ClN₅O₄S+H]⁺:608.2093；found:608.2110[M+H]⁺.

实施例14

叔丁基(Z)-4-(4-(3-((3-苄基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-6-氯-1H-吲唑-5-基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23i)

以化合物22a(0.4g,0.9mmol)，化合物19d(0.21g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23i，为黄色固体粉末，收率62.43％。¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.02(s,1H),8.39(s,1H),8.25(s,1H),7.82(s,1H),7.44–7.22(m,7H),7.11–6.91(m,2H),4.84(s,2H),3.49(t,J＝5.1Hz,4H),3.18(t,J＝5.2Hz,4H),1.44(s,9H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ169.97,165.87,154.34,150.59,140.51,139.96,136.17,134.69,132.00,130.96,130.14,129.13,128.21,128.03,126.84,122.79,122.44,122.01,121.70,115.59,111.91,79.48,48.53,44.69,28.54,25.96.HRMS(ESI)m/z calcd for[C33H32ClN5O4S+H]⁺:630.1936；found:630.1953[M+H]⁺.

实施例15

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23j)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.12g,1mmol)为原料，使用上述实施例6的方法，制备得到化合物23j，为黄色固体粉末，收率62.63％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.05(s,1H),12.44(s,1H),8.30–8.17(m,3H),7.82(s,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,1H),3.56(t,J＝4.9Hz,4H),3.45(t,J＝5.2Hz,4H),1.43(s,8H).¹³CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.71,167.75,158.25,154.44,148.39,140.60,140.02,139.44,132.02,131.64,124.60,122.75,122.48,120.20,111.94,106.56,79.51,44.81,28.54.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₅H₂₅ClN₆O₄S+H]⁺:541.1419；found:541.1431[M+H]⁺.

实施例16

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-甲基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23k)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23k，为黄色固体粉末，收率80.42％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.08(s,1H),8.30(d,J＝2.2Hz,2H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),7.82(s,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,1H),3.56(dd,J＝7.0,3.7Hz,4H),3.46(t,J＝5.2Hz,4H),3.09(s,3H),1.44(s,9H).¹³CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.94,166.15,158.39,154.69,148.33,140.81,140.09,139.33,132.25,131.96,124.68,122.73,122.68,122.16,120.84,111.97,106.58,79.65,44.95,43.55,28.60,27.75.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₆H₂₇ClN₆O₄S+H]⁺:555.1576；found:555.1548[M+H]⁺.

实施例17

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((2，4-二氧-3-正丙基噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23l)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19c(0.16g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23l，为黄色固体粉末，收率65.43％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.26–13.95(m,1H),8.33(d,J＝7.3Hz,2H),8.25(d,J＝2.5Hz,1H),7.84(s,1H),7.72(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),3.62(t,J＝7.1Hz,2H),3.57(dd,J＝6.9,3.8Hz,4H),3.46(t,J＝5.2Hz,4H),1.61(h,J＝7.4Hz,2H),1.44(s,8H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.01,166.07,158.26,154.43,148.40,140.61,140.04,139.44,132.08,131.76,124.57,122.78,122.57,122.17,121.27,111.99,106.58,79.51,44.82,43.11,28.55,21.08,11.53.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₈H₃₁ClN₆O₄S+H]⁺:583.1889；found:583.1909[M+H]⁺.

实施例18

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-环戊基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23m)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19e(0.19g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23m，为黄色固体粉末，收率55.43％。¹H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ11.76(s,1H),8.31(d,J＝2.7Hz,1H),8.06(d,J＝2.3Hz,1H),7.79(d,J＝2.3Hz,1H),7.72(s,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),6.87–6.60(m,1H),4.80(q,J＝8.4Hz,1H),3.64(d,J＝8.0Hz,8H),2.20–2.05(m,2H),2.02–1.89(m,4H),1.64(p,J＝8.3,6.8Hz,2H),1.53(d,J＝2.2Hz,9H).¹³C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ170.45,166.46,158.39,155.00,148.32,140.66,140.43,139.10,133.47,132.52,124.85,123.40,122.50,121.03,119.59,111.35,106.19,54.53,45.06,28.77,28.48,25.26.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₃₀H₃₃ClN₆O₄S+H]⁺:609.2045；found:609.2066[M+H]⁺.

实施例19

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-苄基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23n)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19d(0.21g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23n，为黄色固体粉末，收率75.43％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.12(s,1H),8.33(s,1H),8.28–8.20(m,2H),7.80(s,1H),7.69(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.33(tt,J＝11.3,5.6Hz,5H),6.90(d,J＝8.9Hz,1H),4.83(s,2H),3.55(dd,J＝7.0,3.7Hz,4H),1.43(s,9H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.91,165.84,158.21,154.45,148.30,140.61,139.93,139.42,136.12,132.10,131.79,129.11,128.20,128.03,124.56,122.77,122.42,121.82,121.79,111.98,106.57,79.51,74.02,70.75,44.82,44.70,32.09,28.53,25.39.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₃₂H₃₁ClN₆O₄S+H]⁺:631.1889；found:631.1911[M+H]⁺.

实施例20

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-(2-(二乙基胺基)乙基)-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23o)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19g(0.21g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23o，为黄色固体粉末，收率45.43％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ12.91(s,1H),8.18(d,J＝2.5Hz,1H),7.90(s,1H),7.67(d,J＝10.1Hz,2H),7.46(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),3.87(t,J＝6.7Hz,2H),3.62(d,J＝4.3Hz,8H),2.80(t,J＝6.7Hz,2H),2.67(q,J＝7.1Hz,4H),1.53(s,9H),1.07(t,J＝7.1Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ170.73,166.39,158.24,154.96,148.29,140.42,140.13,138.97,133.04,132.19,124.75,122.77,122.52,120.81,119.92,111.52,106.07,49.47,49.18,47.12,46.96,45.03,39.79,39.25,33.75,28.48,11.92,11.57.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₃₁H₃₈ClN₇O₄S+H]⁺:640.2467；found:640.2490[M+H]⁺.

实施例21

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-(环己基甲基)-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23p)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19f(0.21g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23p，为黄色固体粉末，收率35.43％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.57(s,1H),8.31(d,J＝2.5Hz,1H),8.09(s,1H),7.81(s,1H),7.77–7.65(m,2H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),3.65(p,J＝4.8,4.0Hz,10H),1.84(tt,J＝7.7,3.5Hz,1H),1.78–1.64(m,6H),1.53(s,9H),1.24(d,J＝23.2Hz,4H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ170.75,166.65,154.94,140.57,140.42,133.47,124.81,123.42,122.49,121.05,119.95,111.43,80.24,47.69,45.12,36.38,30.59,28.47,26.17,25.60.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₃₂H₃₇ClN₆O₄S+H]⁺:637.2358；found:637.2379[M+H]⁺.

实施例22

叔丁基(Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-(2-吗啉乙基)-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23q)

以化合物22b(0.4g,0.9mmol)，化合物19h(0.23g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23q，为黄色固体粉末，收率36.73％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.86(s,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),8.02(s,1H),7.73(d,J＝11.1Hz,2H),7.56(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),3.93(t,J＝6.2Hz,2H),3.70(t,J＝4.6Hz,4H),3.63(q,J＝6.9,5.7Hz,8H),2.71(t,J＝6.3Hz,2H),2.59(s,4H),1.53(s,10H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ170.47,166.36,158.31,154.94,148.27,140.50,140.33,139.00,133.47,132.55,124.66,123.29,122.47,120.97,119.88,111.36,106.09,66.91,55.48,53.50,45.02,38.34,29.72,28.48.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₃₁H₃₆ClN₇O₅S+H]⁺:654.2260；found:654.2280[M+H]⁺.

实施例23

叔丁基(S,Z)-4-(5-(6-氯-3-((3-甲基-2，4-二氧噻唑烷-5-亚基)甲基)-1H-吲唑-5-基)吡啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-羧酸酯的制备(化合物23r)

以化合物22e(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，使用上述实施例6方法，制备得到化合物23r，为黄色固体粉末，收率26.71％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.88(s,1H),8.30(dd,J＝2.5,0.7Hz,1H),8.12(s,1H),7.84(d,J＝0.6Hz,1H),7.73(d,J＝0.5Hz,1H),7.66(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.72(dd,J＝8.9,0.8Hz,1H),3.29(s,3H),1.62(s,7H),1.53(s,8H),1.28(d,J＝4.8Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ170.20,166.42,158.69,154.86,148.32,140.79,140.28,138.95,133.82,132.95,124.14,123.85,122.52,121.08,119.79,111.17,105.59,79.95,48.63,44.90,29.71,28.49,27.69,16.34.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₇H₂₉ClN₆O₄S+H]⁺:569.1732；found:569.1750[M+H]⁺.

实施例24

(Z)-5-((5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24a)

将化合物23a(0.3g,0.5mmol)加入到50mL的圆底烧瓶中，加入10mL二氯甲烷，然后加入2mL三氟乙酸，常温搅拌反应2h。反应完毕后，旋干二氯甲烷和三氟乙酸，反应液呈黄色油状物，搅拌下加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，有淡黄色固体析出，抽滤，得到0.18g产物，收率88.67％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝2.5Hz,1H),8.27(d,J＝1.6Hz,1H),8.02(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),7.85(s,1H),7.75–7.56(m,2H),6.96(d,J＝8.9Hz,1H),3.64(t,J＝5.1Hz,4H),3.04(t,J＝5.1Hz,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ180.19,177.52,158.16,146.04,141.22,140.41,136.62,134.00,131.19,126.26,125.82,124.08,116.61,113.47,111.47,107.70,44.24.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₁₉N₆O₂S+H]⁺:407.1285；found:407.1303[M+H]⁺.

实施例25

(Z)-3-甲基-5-((5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24b)

以化合物23b(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24b，为淡黄色固体粉末，收率82.78％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.34(d,J＝5.4Hz,2H),7.96(d,J＝8.9Hz,1H),7.79–7.42(m,2H),6.88(d,J＝8.9Hz,1H),3.43(s,4H),3.10(s,3H),2.80(t,J＝5.0Hz,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ166.42,158.77,145.99,139.39,136.28,131.40,125.83,125.67,124.02,122.70,115.87,113.85,107.26,46.40,45.92,27.67.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₂₀N₆O₂S+H]⁺:421.1441；found:421.1451[M+H]⁺.

实施例26

(Z)-5-((5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24c)

以化合物23c(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24c，为淡黄色固体粉末，收率81.58％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.21(s,1H),7.81(s,1H),7.68(dd,J＝8.9,4.3Hz,2H),7.60(d,J＝8.7Hz,1H),7.04(d,J＝8.3Hz,2H),3.18(s,4H),3.03(s,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ180.93,177.68,150.55,141.33,140.30,134.90,133.71,131.55,127.85,126.08,124.04,116.42,116.23,112.73,111.20,48.41,45.06.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₁₉N₅O₂S+H]⁺:406.1332；found:406.1337[M+H]⁺.

实施例27

(Z)-3-甲基-5-((5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24d)

以化合物23d(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24d，为淡黄色固体粉末，收率83.48％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝4.7Hz,2H),7.67(d,J＝8.9Hz,4H),7.01(d,J＝8.2Hz,2H),3.11(d,J＝6.6Hz,7H),2.86(d,J＝6.1Hz,3H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ170.64,166.38,151.19,139.60,134.41,131.03,127.79,125.42,125.10,122.27,116.21,115.90,112.70,49.70,46.08,27.76.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₂₂H₂₁N₅O₂S+H]⁺:420.1489；found:420.1495[M+H]⁺.

实施例28

(Z)-5-((6-氯-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24e)

以化合物23e(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24e，为淡黄色固体粉末，收率75.78％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(s,1H),7.73(s,1H),7.59(s,1H),7.35(d,J＝8.3Hz,2H),6.99(d,J＝8.3Hz,2H),3.14(t,J＝5.0Hz,4H),2.88(t,J＝4.9Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ182.87,178.45,151.09,141.75,140.38,137.73,133.36,131.26,130.88,129.84,122.44,121.89,115.01,111.42,110.74,49.33,45.91.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₁₈ClN₅O₂S+H]⁺:440.0942；found:440.0951[M+H]⁺.

实施例29

(Z)-5-((6-氯-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24f)

以化合物23f(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24f，为淡黄色固体粉末，收率80.78％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.30(s,1H),8.15(s,1H),7.80(s,1H),7.34(d,J＝8.3Hz,2H),6.99(d,J＝8.4Hz,2H),3.12(d,J＝4.8Hz,6H),2.86(t,J＝5.0Hz,3H),1.85(s,1H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ170.60,166.32,151.22,144.14,144.13,139.60,130.81,130.14,123.72,121.98,121.34,114.98,113.42,49.80,46.07,27.61.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₀ClN₅O₂S+H]⁺:454.1099；found:454.1102[M+H]⁺。

实施例30

(Z)-5-((6-氯-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-正丙基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24g)

以化合物23g(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24g，为淡黄色固体粉末，收率93.18％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),8.21(s,1H),7.80(s,1H),7.44–7.21(m,2H),7.11–6.84(m,2H),3.68–3.53(m,2H),3.22–3.07(m,4H),2.92(t,J＝5.0Hz,4H),1.60(h,J＝7.4Hz,2H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.06,166.05,151.10,140.56,139.92,134.65,131.90,130.90,129.63,122.78,122.29,121.80,121.39,115.01,111.90,49.05,45.69,43.06,21.08,11.52.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₄H₂₄ClN₅O₂S+H]⁺:482.1412；found:482.1424[M+H]⁺.

实施例31

(Z)-5-((6-氯-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-环戊基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24h)

以化合物23h(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24h，为黄色固体粉末，收率82.16％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.28(s,1H),8.18(s,1H),7.79(s,1H),7.40–7.21(m,2H),7.04–6.92(m,2H),4.69(p,J＝8.3Hz,2H),3.18–3.06(m,4H),2.88(dd,J＝6.3,3.6Hz,4H),1.99(p,J＝8.9,7.4Hz,2H),1.90–1.76(m,4H),1.66–1.50(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ169.95,166.02,151.23,140.68,139.97,134.62,131.83,130.88,129.55,122.80,122.20,121.44,121.19,114.94,111.95,54.01,49.36,45.93,28.88,25.40.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₆H₂₆ClN₅O₂S+H]⁺:508.1568；found:508.1584[M+H]⁺.

实施例32

(Z)-3-苯基-5-((6-氯-5-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24i)

以化合物23i(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例24方法，制备得到化合物24i，为黄色固体粉末，收率72.56％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),8.24(s,1H),7.82(s,1H),7.51–7.19(m,7H),7.00(d,J＝8.2Hz,2H),4.84(s,2H),3.16(t,J＝5.1Hz,4H),2.92(t,J＝5.2Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.01,165.88,151.06,140.60,139.91,136.17,134.71,131.93,130.91,129.66,129.13,128.20,128.01,122.83,122.38,122.05,121.52,115.05,111.97,48.91,45.60,44.66.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₈H₂₄ClN₅O₂S+H]⁺:530.1412；found:530.1421[M+H]⁺.

实施例32

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24j)

将化合物23j(0.3g,0.5mmol)加入到50mL的圆底烧瓶中，加入10mL二氯甲烷，然后加入2mL三氟乙酸，常温搅拌反应2h。反应完毕后，旋干二氯甲烷和三氟乙酸，得到黄色油状物，搅拌下加入10mL饱和碳酸钠溶液，有黄色固体析出，抽滤，得到0.2g黄色固体粉末，收率83.33％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.05(s,1H),7.78(s,1H),7.76–7.63(m,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),3.64–3.62(m,4H),3.00(t,J＝4.5Hz,4H),1.35(s,1H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ181.20,177.75,158.16,148.34,141.57,140.58,139.53,131.42,130.49,124.95,122.51,122.21,111.95,111.62,106.59,44.45,44.23.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C₂₀H₁₇ClN₆O₂S+H]⁺:441.0895；found:441.0914[M+H]⁺.

实施例33

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24k)

以化合物23k(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例32方法，制备得到化合物24k，为淡黄色固体粉末，收率70.12％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.17(s,1H),8.95(s,1H),8.35(d,J＝7.2Hz,1H),8.30(d,J＝2.5Hz,1H),7.87(s,1H),7.80(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,1H),3.81(t,J＝5.2Hz,4H),3.24(q,J＝4.8Hz,4H),3.11(s,3H).¹³CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.03,166.18,157.49,148.16,140.70,140.06,139.88,131.97,131.43,125.42,122.75,122.71,122.53,120.97,112.07,107.08,42.99,42.23,27.90.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₁₉ClN₆O₂S+H]⁺:455.1051；found:455.1060[M+H]⁺.

实施例34

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-正丙基噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24l)

以化合物23l(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例32方法，制备得到化合物24l，为淡黄色固体粉末，收率82.78％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.34–8.19(m,3H),7.84(s,1H),7.74(d,J＝8.6Hz,1H),6.98(d,J＝8.8Hz,1H),3.11(t,J＝5.3Hz,5H),1.59(h,J＝7.3Hz,2H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.03,166.09,157.97,148.34,140.68,139.99,139.60,132.01,131.61,125.03,122.72,122.48,122.13,121.19,112.05,106.77,43.84,43.34,43.10,21.06,11.49.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₃H₂₃ClN₆O₂S+H]⁺:483.1364；found:483.1377[M+H]⁺.

实施例35

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-(2-(二乙基胺基)乙基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24o)

以化合物23o(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例32方法，制备得到化合物24o，为淡黄色固体粉末，收率78.78％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.27(d,J＝2.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.77(s,1H),7.71(s,1H),7.59(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),3.88(t,J＝6.7Hz,2H),3.75(q,J＝7.0Hz,2H),3.63(t,J＝5.1Hz,3H),3.07(dd,J＝6.1,3.9Hz,4H),2.76(t,J＝6.8Hz,2H),2.62(d,J＝7.1Hz,2H),1.05(t,J＝7.1Hz,5H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.84,166.03,158.26,148.39,140.70,140.04,139.46,132.06,131.74,124.69,122.80,122.60,122.18,121.16,112.04,106.56,52.51,49.28,47.14,44.49,44.28,12.54,7.64.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₆H₃₀ClN₇O₂S+H]⁺:540.1943；found:540.1960[M+H]⁺.

实施例36

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-(环己基甲基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24p)

以化合物23p(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例32方法，制备得到化合物24p，为淡黄色固体粉末，收率92.78％。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.28(s,1H),8.22(s,1H),8.15(s,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝8.9Hz,1H),6.87(d,J＝8.9Hz,1H),3.46(t,J＝13.9Hz,6H),2.81(s,2H),1.67(d,J＝11.2Hz,2H),1.60(d,J＝12.7Hz,3H),1.13(dq,J＝26.6,13.7Hz,3H),0.95(q,J＝12.2Hz,2H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ170.74,166.35,158.69,148.33,144.16,139.56,139.27,130.85,130.08,124.61,123.79,122.31,121.73,118.01,113.63,106.20,47.13,46.22,45.91,36.36,31.01,30.58,26.23,25.97,25.59.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₇H₂₉ClN₆O₂S+H]⁺:537.1834；found:537.1850[M+H]⁺.

实施例37

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-(2-吗啉乙基)噻唑烷-2，4-二酮的制备(化合物24q)

以化合物23q(0.3g,0.5mmol)为原料，使用上述实施例32方法，制备得到化合物24q，为淡黄色固体粉末，收率72.78％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝15.3Hz,2H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.70(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),3.79(t,J＝6.3Hz,2H),3.51(d,J＝4.1Hz,8H),2.86(t,J＝4.9Hz,4H),2.54(d,J＝6.3Hz,2H),2.41(t,J＝4.7Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.90,166.00,158.68,148.39,140.77,139.30,132.05,131.87,122.86,122.53,121.91,121.41,112.08,106.30,66.69,55.29,53.57,45.75,45.58,38.64.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₆H₂₈ClN₇O₃S+H]⁺:554.1736；found:554.1756[M+H]⁺.

实施例38

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(4-(3,3-二甲基丁酸酐)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物24r)

将化合物24k(0.3g,0.5mmol)加入到50mL的圆底烧瓶中，加入10mL二氯甲烷，滴入2滴三乙胺作为催化剂，室温下搅拌均匀，缓慢滴加叔丁基乙酰氯(1mmol)的二氯甲烷溶液，半小时后滴加完毕，室温反应过夜。第二天，停止搅拌，减压下旋干反应液，得到黄色油状物，用硅胶柱层析进一步分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得红棕色固体0.2g，收率76.12％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.10(s,1H),8.34(d,J＝1.7Hz,2H),8.26(d,J＝2.5Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.95(d,J＝8.9Hz,1H),3.72–3.51(m,8H),3.11(s,3H),2.30(s,2H),1.02(s,9H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.14,170.06,166.18,158.24,148.40,140.62,140.05,139.47,132.08,131.76,124.58,122.77,122.59,122.49,121.02,111.99,106.58,45.95,45.25,45.02,44.19,31.49,30.23,27.90.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₇H₂₉ClN₆O₃S+H]⁺:553.1783；found:553.1798[M+H]⁺.

实施例39

4-((5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环己硼烷-2-基)吡啶-2-基)甲基)吗啉(化合物26)

将5-溴吡啶-2-甲醛(1.0g,5.4mmol)，吗啉(0.9g,10.0mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(2.1g,10.0mmol)，20mL二氯甲烷依次加入到50mL圆底烧瓶中，室温搅拌反应过夜。反应完毕，用20mL饱和食盐水洗涤反应液2次，合并有机相，无水Na₂SO₄干燥有机层并放置4h。过滤除去无水Na₂SO₄，旋干有机相，为黄色油状物，称重为0.9g，收率为69.23％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.77(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),3.76–3.68(m,4H),3.59(s,2H),2.64–2.41(m,4H).¹³C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ156.55,150.34,139.09,124.65,119.19,66.81,64.11,53.65.

向一个50mL的圆底烧瓶中依次加入中间体25(0.9g,3.5mmol)，4，4，4'，4'，5，5，5'，5'-八甲基-2,2'-bi(1,3,2-二氧杂硼烷)(1.2g,4.7mmol)，醋酸钾(0.6g，5.8mmol)，[1,1-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(0.06g,0.08mmol)，30mL 1，4-二氧六环。抽真空，氮气保护下，加热回流反应12h后反应完毕。提起反应瓶，待反应瓶温度降至室温，旋干反应液，加入15mL甲醇，有大量醋酸钾析出，抽滤除去醋酸钾，收集滤液。旋干甲醇，呈油状物，称重为1.2g。无需纯化，直接投下一步。

实施例40

6-氯-5-(吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27a)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)吡啶(0.2g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27a，为灰白色固体粉末，收率81.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.41(s,1H),10.21(s,1H),8.73–8.60(m,2H),8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.93(dt,J＝7.8,2.0Hz,1H),7.53(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ187.75,150.19,149.33,144.05,141.41,137.65,135.11,133.15,131.78,123.73,123.40,119.97,112.76.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₃H₈ClN₃O+H]⁺:258.0429；found:258.0432[M+H]⁺.

实施例41

6-氯-5-(6-吗啉吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27b)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和6-(吗啉-4-基)吡啶-3-硼酸频哪醇酯(0.2g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27b，为白色固体粉末，收率71.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ14.25(s,1H),10.14(s,1H),8.17(d,J＝2.5Hz,1H),7.98(s,1H),7.86(s,1H),7.62(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.8Hz,1H),3.76–3.65(m,4H),3.48(d,J＝5.2Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ187.49,158.70,148.10,143.86,140.98,139.13,133.54,132.21,124.59,122.69,120.04,112.40,106.37,74.03,66.42,45.42,25.35.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₇H₁₅ClN₄O₂+H]⁺:343.0956；found:343.0957[M+H]⁺.

实施例42

6-氯-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27c)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和6-(4-甲基-1-哌嗪基)吡啶-3-硼酸频哪醇酯(0.3g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27c，为白色固体粉末，收率81.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.18(s,1H),8.18(d,J＝2.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.95(s,1H),7.65(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),3.56(d,J＝5.0Hz,4H),2.43(t,J＝5.0Hz,4H),2.24(s,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d₆)δ187.67,158.61,148.11,143.88,141.14,139.18,133.74,132.29,124.14,122.71,120.14,112.60,106.54,54.81,46.21,44.86.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₈H₁₈ClN₅O+H]⁺:356.1273；found:356.1277[M+H]⁺.

实施例43

6-氯-5-(6-(吗啉甲基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27d)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和4-((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)甲基)吗啉(0.3g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27d，为灰白色固体粉末，收率41.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.56(d,J＝2.4Hz,1H),8.06(s,1H),7.96(s,1H),7.86(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),3.66(s,2H),3.60(t,J＝4.5Hz,4H),2.45(d,J＝9.6Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ187.59,157.85,149.36,143.94,141.34,137.99,133.42,133.01,131.75,123.29,122.56,119.93,112.69,66.66,64.27,53.80.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₈H₁₇ClN₄O₂+H]⁺:357.1113；found:357.1122[M+H]⁺.

实施例44

6-氯-5-(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27e)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和2-(哌啶-1-基)吡啶-5-硼酸频哪醇酯(0.2g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27e，为白色固体，收率76.89％。¹HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ14.31(s,1H),10.19(s,1H),8.17(d,J＝2.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.95(s,1H),7.62(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.89(d,J＝8.8Hz,1H),3.58(t,J＝5.3Hz,4H),1.60(dq,J＝34.2,5.7,5.2Hz,6H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ187.70,158.54,148.18,143.91,141.00,139.09,133.92,132.38,123.29,122.65,120.17,112.54,106.28,45.91,25.52,24.78.HRMS(ESI)m/zcalcd for[C18H17ClN4O+H]⁺:341.1164；found:341.1168[M+H]⁺.

实施例45

6-氯-5-(6-(吡咯-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27f)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和2-(吡咯烷-1-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.2g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27f，为白色固体，收率66.89％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.27(s,1H),10.16(s,1H),8.12(d,J＝2.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.88(s,1H),7.55(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),6.47(d,J＝8.7Hz,1H),3.40(d,J＝6.8Hz,4H),1.93(d,J＝6.4Hz,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ187.56,156.53,148.44,143.82,140.93,138.54,134.16,132.43,122.52,122.34,120.12,112.42,105.85,46.86,25.48.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₇H₁₅ClN₄O+H]⁺:327.1007；found:327.1009[M+H]⁺.

实施例46

6-氯-5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基)苯基)-1H-吲唑-3-甲醛(化合物27g)

使用上述实施例1方法，以化合物21a(0.2g,0.8mmol)和1-甲基-4-((4-(4,4,5,5--四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)磺酰基)哌嗪(0.3g,0.8mmol)为原料，制备得到化合物27g，为白色固体，收率81.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.39(s,1H),10.20(s,1H),8.11(s,1H),8.01(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,2H),7.74(d,J＝7.9Hz,2H),2.38(t,J＝4.9Hz,4H),2.14(s,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ187.69,144.05,143.92,141.42,134.84,134.50,131.25,131.10,127.95,123.25,119.89,112.87,53.89,46.26,45.72.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₉H₁₉ClN₄O₃S+H]⁺:419.0939；found:419.0944[M+H]⁺.

实施例47

(Z)-5-((6-氯-5-(吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28a)

使用上述实施例6的方法，以化合物27a(0.23g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28a，为黄色固体，收率71.75％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.18(s,1H),8.71(d,J＝2.3Hz,1H),8.64(dd,J＝4.8,1.7Hz,1H),8.49(s,1H),8.39(s,1H),8.02-7.88(m,2H),7.53(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),3.11(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ170.01,166.17,150.46,149.05,140.96,140.32,137.81,135.20,131.53,131.18,123.55,122.78,122.66,120.94,112.16,27.93.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₁₇H₁₁ClN₄O₂S+H]⁺:371.0364；found:371.0367[M+H]⁺.

实施例48

(Z)-5-((6-氯-5-(6-吗啉吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28b)

使用上述实施例6的方法，以化合物27b(0.3g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28b，为黄色固体，收率61.25％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.09(s,1H),8.36(d,J＝2.9Hz,2H),8.27(d,J＝2.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.73(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),3.74(t,J＝4.7Hz,4H),3.52(t,J＝4.8Hz,4H),3.11(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ170.06,166.18,158.68,148.40,140.62,140.05,139.40,132.07,131.75,124.79,122.78,122.65,122.47,121.04,111.99,106.42,66.81,66.45,45.52,27.91.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₁₈ClN₅O₃S+H]⁺:456.0892；found:456.0899[M+H]⁺.

实施例49

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28c)

使用上述实施例6的方法，以化合物27c(0.3g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28c，为黄色固体，收率70.75％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.04(s,1H),8.35(s,2H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),7.85(s,1H),7.70(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.93(d,J＝8.9Hz,1H),3.56(t,J＝5.0Hz,4H),3.11(s,3H),2.43(t,J＝5.0Hz,4H),2.24(s,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.05,166.19,158.55,148.41,140.62,140.07,139.32,132.12,131.87,124.28,122.81,122.61,122.51,121.06,111.99,106.42,54.86,46.27,44.99,27.91,25.96.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₁ClN₆O₂S+H]⁺:469.1208；found:469.1215[M+H]⁺.

实施例50

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(吗啉甲基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28d)

使用上述实施例6的方法，以化合物27d(0.3g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28d，为黄色固体，收率71.25％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.14(s,1H),8.62(s,1H),8.46(s,1H),8.36(s,1H),8.01–7.82(m,2H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),3.67(s,2H),3.62(t,J＝4.7Hz,4H),3.10(s,3H),2.47(d,J＝5.2Hz,4H).¹³CNMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.01,166.16,157.62,149.64,140.90,140.25,138.18,133.55,131.57,131.12,123.46,122.69,122.47,120.92,112.13,66.70,64.32,62.47,53.82,27.91,25.96.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₀ClN₅O₃S+H]⁺:470.1048；found:470.1055[M+H]⁺.

实施例51

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28e)

使用上述实施例6的方法，以化合物27e(0.3g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28e，为黄色固体，收率85.25％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.08(s,1H),8.36(d,J＝4.4Hz,2H),8.24-8.19(m,1H),7.85(s,1H),7.67(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.91(d,J＝8.9Hz,1H),3.59(t,J＝5.3Hz,4H),3.11(s,3H),1.74-1.47(m,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.07,166.19,158.43,148.47,140.56,140.03,139.27,132.13,131.98,123.45,122.83,122.52,122.43,121.09,111.97,106.17,45.98,27.91,25.50,24.81.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₂H₂₀ClN₅O₂S+H]⁺:454.1099；found:454.1106[M+H]⁺.

实施例52

(Z)-5-((6-氯-5-(6-(吡咯-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28f)

使用上述实施例6的方法，以化合物27f(0.3g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28f,为黄色固体，收率88.75％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.08(s,1H),8.35(s,1H),8.32(s,1H),8.19(d,J＝2.5Hz,1H),7.83(s,1H),7.65(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),6.53(d,J＝8.7Hz,1H),3.49-3.39(m,4H),3.11(s,3H),2.03-1.92(m,4H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.07,166.18,156.48,148.74,140.50,139.98,138.79,132.33,132.26,122.82,122.50,122.38,121.11,111.92,105.77,46.92,27.90,25.52.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₁H₁₈ClN₅O₂S+H]⁺:440.0942；found:440.0949[M+H]⁺.

实施例53

(Z)-5-((6-氯-5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基)苯基)-1H-吲唑-3-基)亚甲基)-3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(化合物28g)

使用上述实施例6的方法，以化合物27g(0.4g,0.9mmol)，3-甲基噻唑烷-2，4-二酮(0.13g,1mmol)为原料，制备得到化合物28g,为黄色固体，收率81.75％。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.08(s,1H),8.39(d,J＝57.5Hz,2H),7.82(dd,J＝31.4,23.4Hz,5H),3.08(s,3H),2.93(s,4H),2.38(s,4H),2.14(s,3H).¹³C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ169.82,166.09,144.17,141.17,140.48,135.47,133.12,131.21,131.16,127.62,123.12,123.04,122.62,120.78,112.17,54.09,46.22,45.66,27.79.HRMS(ESI)m/z calcd for[C₂₃H₂₂ClN₅O₄S₂+H]⁺:532.0874；found:532.0886[M+H]⁺.

实施例54

急性肾损伤后，小管细胞通过自噬产生FGF2，导致成纤维细胞活化和肾纤维化，使得体内生成大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)。

对所合成的化合物进行抗大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)增殖实验，具体如下：

1.实验材料

(1)细胞株：NRK-49F细胞

(2)试剂与仪器：96孔板(Corning)；DMEM培养基(BI)；生物安全柜，二氧化碳培养箱(ESCO)；Counting Kit-8(CCK-8)细胞活力检测试剂盒(南京恩晶生物科技有限公司)；Cytation 5多功能成像仪(Bio-Tek)。

2.实验方法

(1)根据CCK-8染色法，取活细胞比例达90％以上的细胞进行实验，细胞增殖抑制试验采用CCK-8细胞活力检测试剂盒。

(2)细胞消化、计数、制成浓度为1×10⁵个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100μL细胞悬液(每孔1×10⁴个细胞)，加入10ng/μL的TGF-β。

(3)96孔板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养24小时；每孔加入100μL相应的含药物的培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组，每组5复孔。

(4)96孔板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养48小时后；每孔加入10μL CCK-8溶液,将培养板在培养箱内孵育4小时，小心吸去孔内培养液。

(5)用酶标仪测定在450nm处的OD值，分别计算化合物对NRK-49F细胞的抑制率及IC₅₀值。

(6)剂量设置：剂量1组：100μM；剂量2组：50μM；剂量3组：25μM；剂量4组：12.5μM；剂量5组：6.25μM；剂量6组：3.125μM；剂量7组：1.5625μM；剂量8组：0.78125μM；剂量9组：0.390625μM；剂量10组：0.1953125μM。

(7)数据处理：数据以mean和SD表示，应用GraphPad Prism 5.0统计软件，两组组间比较采用t-test检验。以浓度为横坐标，抑制率为纵坐标拟合曲线，计算化合物的IC₅₀值。酶标仪上于450nm处测定每孔的吸光度OD值，细胞生长抑制率按下式计算：

抑制率(％)＝[(对照孔平均OD值-实验孔平均OD)/对照孔平均OD值]*100％。

结果如下表所示。

表1化合物抗NRK-49F异常增殖活性的结果数据表

如表1显示，本发明的化合物对NRK-49F细胞具有很好的抗增殖作用，并且抗增殖作用要优于阳性药991。

阳性药991的结构为：

实施例55

对所合成的化合物进行AMPK的激活活性实验

1、实验材料和仪器

实验所用的ATP、MgCl₂、DTT均购自Sigma公司；人重组磷酸化AMPKɑ1β1γ1和AMPKɑ2β1γ1购自Carna公司，HTRF试剂盒购自Cisbio公司，多功能酶标仪购自Bio Tek公司，384孔板购自Thermo Fisher公司。

2、实验方法

第一步首先配置工作液，配制比例为1×Buffer:MgCl₂:DTT＝97:2:1。然后将化合物配制浓度为2.5μM，对应的工作浓度为1μM。用工作液分别稀释ATP和STK-S1 20倍和10倍。

第二步进行酶浓度的探索，将酶设置为不同的浓度(0.002,0.02,0.2,0.5,2,20ng/μL)，向384孔板中每孔分别加入工作液、稀释的ATP和STK-S1以及不同浓度的酶各4μL、2μL、2μL、2μL。37℃下孵育1h后检测，制作酶标准曲线进而确定最佳酶作用浓度。

第三步向200μL EP管中加入4μL的药物，浓度为1μM。再分别向管壁上加入2μL稀释好的ATP和STK-S1以及特定浓度的酶，加完以后离心混匀，放入37℃烘箱中孵育1小时。

第四步用工作液将Streptavidin-XL665稀释33.3倍，将稀释好的Streptavidin-XL665和STK-antibody按1:1比例混合均匀即得到检测液。向EP管壁上加入10μL检测液，离心混合均匀后避光常温静置1h。将EP管中的液体转移到384孔板中，用酶标仪检测665nm及620nm波长下的OD值，计算两者OD值的比值(Ratio)：

计算化合物在1μM浓度下的激活率：

Activation Efficacy＝[Ratio(Sample)-Ratio(Standard)]/Ratio(Standard)×100％。

选择活性和选择性均较好的化合物24f，以991为阳性对照化合物。测试化合物分别在不同浓度下对AMPKα1β1γ1和AMPKα2β1γ1的激活率，在各浓度下的Efficacy，使用Graphpad软件拟合激活曲线。

如图1A所示，24f对AMPKα1β1γ1的激活活性分别为35.1±1.2nM。如图1B所示，991对AMPKα1β1γ1的激活活性分别为60.2±2.3nM。和阳性对照药991相比，化合物24f活性提高了一倍。

实施例56

化合物对AMPK下游蛋白的影响

1.实验材料

(1)样品：NRK-52E细胞

(2)抗体：AMPK、p-AMPK、ACC、p-ACC均购自CST公司。

(3)药品及试剂：超敏ECL化学发光试剂购自Abbkine公司；羊抗兔一抗购自CellSignaling Technology公司、羊抗兔二抗购自Abbkine公司；显影液、定影液、转膜缓冲液购自Abbkine公司、封闭液购自Abbkine公司、RIPA裂解液、BSA、BCA蛋白浓度检测试剂盒、预染蛋白marker均购自南京恩晶生物科技有限公司。

(4)仪器及耗材：微型垂直电泳槽(Bio-RAD)；转移电泳槽(Bio-RAD)；电泳仪(君意有限公司)；脱色摇床(华利达有限公司)。

2.实验方法

(1)蛋白样本制备

处理完的细胞倒掉培养液，PBS洗涤三次。加入100μL的RIPA裂解液裂解30min，转移到0.5mL的离心管中，用蛋白定量测定试剂盒测定上清液中蛋白的浓度，将上清液放于-20℃中保存，电泳上样前要将样品蛋白变性。

(2)SDS-PAGE电泳

分离胶沿玻璃缓慢灌入，然后胶上加一层无水乙醇进行液封。胶凝后就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。加入浓缩胶插入梳子。浓缩胶凝固后，将梳子竖直向上轻轻将拔出，上样，在加入足够的电泳缓冲液后上样。先用70V电泳20min，等到蛋白聚集到分离胶界限的时候将电压换成130V，电泳至溴酚兰刚跑出时终止电泳，进行转膜。

(3)转膜

将浸泡好了的PVDF膜贴在所需目标条带的地方，小心去除气泡后不能再移动。盖上海绵垫合上转膜板。按照PVDF膜在正极胶在负极的方式放置转模板，在转膜槽中加入转膜缓冲液，80V条件下转膜45min。转膜完成后取出PVDF膜，用TBS浸润后放入封闭液中，4℃过夜封闭。封闭完后，孵育一抗以及孵育二抗，行化学发光显影。

3.实验结果

结果如图2所示。其中图2A是用Western blot检测经不同浓度的化合物24f处理后AMPK及其下游蛋白的表达；图2B、图2C分别是对p-AMPK、p-ACC蛋白的Western blot数据的定量分析的柱形图。###表示与阴性对照组(0/-)相比p<0.001，##表示与阴性对照组(0/-)相比p<0.01，****表示与阳性对照组(0/+)相比p<0.0001，***表示与阳性对照组(0/+)相比p<0.001，**表示与阳性对照组(0/+)相比p<0.01。由图可知，目标化合物可以有效地调节AMPK下游蛋白的水平。和991相比，化合物具有更好的AMPK激活作用。

实施例57

化合物对小鼠急性肾损伤的体内药效学研究

1.实验材料

实验所需要的雄性健康C57BL/6小鼠(16-18g)从湖南斯莱克景达实验动物有限公司购买。手术所需要带针缝线、镊子、剪刀购自河南省百合医疗器械销售有限公司。从上海毕得医药科技有限公司购买阳性对照药物991。实验所需的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂从北京索莱宝科技有限公司购买。RIPA裂解液购自碧云天生物技术公司。

2.实验方法

首先配制动物实验所需要的药物溶液。称取0.25g羧甲基纤维素钠，加入50mLddH₂O，置于室温摇床上振摇过夜得到均一的0.5％的羧甲基纤维素钠溶液，防止药物颗粒快速沉降，确保给药的均匀性和剂量准确性。称取44.1mg的24f，加入7.05mL 0.5％羧甲基纤维素钠溶液，在研钵上碾磨均匀得到6.25mg/mL的药物溶液。称取86.9mg的24f，加入6.952mL 0.5％羧甲基纤维素钠溶液，在研钵上碾磨均匀得到12.5mg/mL的药物溶液。称取77.9mg的991，加入6.232mL 0.5％羧甲基纤维素钠溶液，在研钵上碾磨均匀得到12.5mg/mL的991的药物溶液。

第二步，将小鼠放置在20-25℃和相对湿度为50-60％的环境下进行饲养，并且提供了标准的食物和饮用水，适应性喂养两周后，本研究将30只雄性健康C57BL/6小鼠随机分为5组，进行称重和编号。依次为假手术组(两侧肾蒂暴露于侧切口下，不夹闭，放回小鼠腹部，缝上伤口)，手术组(肾蒂暴露于侧切口下，同时，取出左、右两肾夹闭30分钟后，放回小鼠的腹部，缝上伤口)，手术+100mg/kg 991治疗组，手术+50mg/kg 24f治疗组，手术+100mg/kg 24f治疗组。其中药物进行口服灌胃。每只小鼠按照组别和体重给予对应的药物溶液，给药4天。

第三步，依次对小鼠进行麻醉。按照6mg/kg的给药量腹腔注射戊巴比妥钠，待小鼠麻醉后，踢去小鼠腹部的毛，用酒精棉球擦去残留的毛。两侧肾蒂暴露于侧切口下，同时，取出左、右两肾夹闭30分钟后，放回小鼠的腹部，缝上伤口。其中假手术组，两侧肾蒂暴露于侧切口下，不夹闭，放回小鼠腹部，缝上伤口。

第四步，再灌注24小时后，在麻醉下对小鼠实施安乐死。取出小鼠的双肾，置于4％的多聚甲醛溶液中室温保存，进行H&E染色评价肾组织损伤的程度。

3.实验结果

如图3所示，模型组组织出现特征性的缺血再灌注损伤病理改变，且损伤程度(如坏死细胞比例、病变范围评分)显著重于假手术组，说明造模成功。假手术组肾细胞完整，组织学外观正常；然而在手术组，组织学损伤和免疫细胞浸润增加，说明通过手术建立缺血急性肾损伤的模型成功。与手术组相比，991组减轻了手术诱导的肾损伤。24f同样可以剂量依赖地减轻了手术诱导的肾损伤，且相同剂量下，24f减轻的程度更明显。

4.结论

本发明的一类苯并吡唑类化合物可以缓解缺血急性性肾损伤。

需要说明的是，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡属于本发明技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明保护范围之列。

Claims (10)

1.一种苯并吡唑类化合物，其特征在于，其为式I所示的化合物、光学异构体或药学上可用的盐：

其中，R₁选自氢、C1-C8直链或支链烷基、芳基、取代芳基、C3-C8脂肪环基、取代C3-C8脂肪环基、C3-C8脂杂环基、取代C3-C8脂杂环基、-(CH2)nNR₄R₅；

取代芳基、取代C3-C8脂肪环基、取代C3-C8脂杂环基上的取代基独立的选自C1-C8直链或支链烷基；

n为0-4的整数，R₄、R₅独立的选自C1-C5直链或支链烷基；

R₂为X为氮或CH；

R₆选自氢、C3-C8含氮脂杂环基、

R₇选自氢、C1-C3烷基；

R₈选自氢、C1-C8直链或支链烷基羰基、C1-C8直链或支链烷基酯基；

R₃选自氢、卤素。

2.根据权利要求1所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，所述芳基为苯基。

3.根据权利要求1所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，R₁选自C1-C5直链或支链烷基、芳基、取代芳基、C3-C6脂肪环基、取代C3-C6脂肪环基、C3-C6脂杂环基、取代C3-C6脂杂环基；取代芳基、取代C3-C6脂肪环基、取代C3-C6脂杂环基上的取代基独立的选自C1-C3直链或支链烷基。

4.根据权利要求1所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，R₁选自取代吗啉基；

取代基选自C1-C3直链或支链烷基。

5.根据权利要求1所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，R₁选自

6.根据权利要求1所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，R₄、R₅独立的选自C1-C3直链或支链烷基；R₂选自：

R8选自C1-C4直链或支链烷基羰基、C1-C4直链或支链烷基酯基。

7.根据权利要求1-6任一项所述的苯并吡唑类化合物，其特征在于，所述苯并吡唑类化合物，其为下式所示的化合物、光学异构体或药学上可用的盐：

8.根据权利要求1-7任一项所述的苯并吡唑类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5-溴-6-卤-1H-吲哚-3-甲醛依次进行开环反应、关环反应，得到5-溴-6-卤-1H-吲唑-3-甲醛；然后与硼酸酯发生铃木反应，在5位引入吡啶联哌嗪或者苯联哌嗪的杂环片段；然后通过克脑文格尔反应，在3位引入噻唑烷二酮官能团，得到苯并吡唑类化合物。

9.根据权利要求1-7任一项所述的苯并吡唑类化合物在制备治疗或者预防急性肾损伤的药物或制备AMPK激活剂中的应用。

10.一种治疗或者预防急性肾损伤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括根据权利要求1-7任一项所述的苯并吡唑类化合物。