CN120939079B - 外用抗炎中药组合物及其应用、抗炎凝胶贴膏及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种外用抗炎中药组合物及其应用、抗炎凝胶贴膏及其制备方法，属于中药技术领域。所述的外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤30～120份以及冬青油0.35～1.4份；通过活性组分青风藤和冬青油的复配，发挥协同增效作用，保证了活性成分功效的发挥；通过药效实验研究发现，本发明的外用抗炎中药组合物在减轻骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛相关生物指标方面均表现出显著疗效，这对于改善患者的生活质量具有重要意义。

Description

外用抗炎中药组合物及其应用、抗炎凝胶贴膏及其制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及外用抗炎中药组合物及其应用，抗炎凝胶贴膏及其制备方法。

背景技术

青风藤作为传统中药用于治疗风湿痹证在我国已有1000多年，单用即有明显效果，亦常与防己配伍，加酒煮饮（《普济方》）；或与红藤、防风、桂枝等同用；肩臂痛可配姜黄、羌活等；腰膝痛可伍独活、牛膝等。《本草纲目》：“治风湿流注，历节鹤膝，麻痹瘙痒，损伤疮肿。入药酒中用。” 《本草汇言》：“青风藤，散风寒湿痹之药也，能舒筋活血，正骨利髓，故风病软弱无力，并劲强偏废之证，久服常服，大建奇功”。

现代研究发现，青风藤的主要成分为青藤碱及青风藤碱、白兰花碱，光千金藤碱，木兰花碱，四氢表小檗碱，异青藤碱，土藤碱等生物碱，青风藤中提取的异喹啉生物碱单体，即青藤碱，具有镇痛、镇静和局部麻醉等药理作用，还可以降低高血压、抗炎、抗风湿、类风湿性关节炎等。临床使用的青藤碱制剂主要用其盐酸盐，即盐酸青藤碱，用于治疗类风湿性关节炎，并且其治疗效果较显著。目前已上市的盐酸青藤碱制剂主要为正清风痛宁片、正清风痛宁胶囊、正清风痛宁缓释片和正清风痛宁注射液。口服给药时，由于盐酸青藤碱的生物半衰期较短，口服剂量很大，正清风痛宁片每日需用药12片，正清风痛宁胶囊每日需用药9粒，正清风痛宁缓释片每日需用药4片；注射给药时，由于青藤碱对光、热不稳定，易分解，容易出现疗效下降，也难于保存。另外，盐酸青风藤制剂治疗类风湿性关节炎时，其镇痛作用起效时间较慢，研究提示患者一般服药后2周起效，1个月才明显好转。同时，青藤碱本身作为强组胺释放剂，口服后会释放大量的组胺，引发胃肠道不良反应如胃痛、恶心、腹泻等，个别严重者可能会出现胃溃疡、出血等；皮肤不良反应如皮肤潮红、瘙痒、灼热、皮疹等；其他不良反应如头昏、头痛、多汗等，少数患者还会发生白细胞减少和血小板减少。注射给药时，许多患者在注射后1~10分钟即出现瘙痒、潮红、出汗、肿痛加重等现象，需要0.5~1小时才能缓解，如果反应很严重，需要注射地塞米松或异丙嗪进行对抗；另外，还有发生过敏性休克的病例报道。

冬青油，又名冬绿油，主要成分为水杨酸甲酯。冬青油的来源广泛，滇白珠、地檀香和冬青等多种植物中均可提取冬青油（水杨酸甲酯）。水杨酸甲酯，为非甾体抗炎药，主要通过抑制环氧酶而降低前列腺素的合成，从而发挥抗炎镇痛活性，可以缓解扭伤、挫伤、拉伤、劳损等引起的肌肉、筋膜炎，创伤性关节滑膜炎及韧带损伤等引起的局部肿胀和疼痛。

中药传统的外用剂型由于制备工艺粗放，基质选用不尽合理，透皮吸收机制研究不透；而中药复方制剂由于成分复杂，通常由多种成分共同发挥治疗作用，且用药剂量一般较大，所以一直以来，中药外用新剂型的发展比较缓慢。青风藤和冬青油组成中药复方，以现代药物制剂技术开发为外用剂型，例如凝胶剂、凝胶贴膏剂、软膏、搽剂和涂膜剂等，适用于风寒湿痹证，症见肌肉酸痛、关节肿胀、疼痛、屈伸不利、麻木僵硬及风湿与类风湿性关节炎具有上述证候者，鉴于这些疾病的症状主要表现局部关节上，因此开发一种青风藤和冬青油薄荷脑的经皮局部给药制剂非常合适。

目前未见有直接以青风藤和冬青油为主药成分制备外用剂型的相关研究和报道。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种外用抗炎中药组合物及其制备方法、应用，本发明的外用抗炎中药组合物通过青风藤、冬青油相互配合，在抗炎发挥协同增效作用，保证了活性成分功效的发挥。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种外用抗炎中药组合物，包括以下组分制成：青风藤和冬青油。

本发明中的青风藤为君药，性苦、辛，平，入肝、脾经，善祛风湿，通经络，尤常用于风湿痹痛，关节肿胀；冬青油主要为滇白珠的提取物，滇白珠辛，温，可祛风除湿，行气活血，通络止痛，治风湿痹痛，为臣药。薄荷脑是薄荷的提取物，薄荷味辛，辛能发散，外用取其气香而利窍，善走肌表，引表药入营卫以疏结滞之气，为使药。诸药合用，共奏祛风除湿，活血通络，行气止痛之功。

在一些优选的实施例中，以重量份数计，本发明的外用抗炎中药组合物中青风藤的用量为30～120份，优选为30份、60份、90份、120份或上述数值之间的任一数值。更优选为60～90份。

在一些优选的实施例中，以重量份数计，本发明的外用抗炎中药组合物中冬青油的用量为0.35～1.4份，优选为0.35份、0.7份、1.05份、1.4份或上述数值之间的任一数值。更优选为0.7～1.05份。

在另一些优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤30～120份、冬青油0.35～1.4份。

在另一些优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤60～90份以及冬青油0.7～1.05份。

在一些优选的实施例中，以重量份数计，本发明的外用抗炎中药组合物，包括以下组分制成：青风藤、冬青油和薄荷脑。

在一些优选的实施例中，以重量百分比计，本发明的外用抗炎中药组合物中，以重量份数计，薄荷脑的用量为0.3～1.2份，优选为0.3份、0.6份、0.9份、1.2份或上述数值之间的任一数值。

在另一些优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤30～120份、冬青油0.35～1.4份以及薄荷脑0.3～1.2份。

在另一些优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤60～90份、冬青油0.7～1.05份以及薄荷脑0.6～1.2份。

在更为优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物，以重量份数计，包括以下组分制成：青风藤120份、冬青油1.4份以及薄荷脑1.2份。

在另一些优选的实施例中，所述冬青油包括合成来源和提取来源；其中，所述合成来源包括合成水杨酸甲酯；所述提取来源包括自植物进行提取制得提取物，所述提取物包括滇白珠提取物、平铺白珠提取物、芳香白珠提取物、地檀香提取物、冬青提取物和桦树提取物中的任意一种或多种。

在另一些优选的实施例中，所述冬青油中水杨酸甲酯的含量90%以上。

在另一些优选的实施例中，所述外用抗炎中药组合物中青风藤经乙醇水溶液提取、浓缩、干燥，制得青风藤提取物。

优选地，所述的乙醇水溶液的浓度为20～80%。

本发明还提供了上述外用抗炎中药组合物在制备治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品中的应用。

优选地，所述治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品的剂型为凝胶剂、凝胶贴膏剂、软膏、搽剂和涂膜剂。本领域技术人员知晓，所述剂型由上述外用抗炎中药组合物加入对应剂型制剂的一些功能性辅料后制备而成。

更优选地，所述治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品的剂型为凝胶贴膏剂。

本发明还提供了一种抗炎凝胶贴膏，包含上述外用抗炎中药组合物。

优选地，所述的抗炎凝胶贴膏，还包括凝胶基质，所述凝胶基质包括高分子骨架材料、增粘剂、保湿剂、pH调节剂、交联剂、交联调节剂、表面活性剂、填充剂和水。

本发明中的高分子骨架材料为本领域常规使用的，皮肤刺激性小的生物黏附材料，包括聚丙烯酸钠、部分中和聚丙烯酸钠、卡波姆、聚乙烯醇中的一种或两种以上。优选为部分中和聚丙烯酸钠与聚乙烯醇的组合；本发明使用的增粘剂为明胶、羧甲基纤维素钠、丙烯酸甲酯-丙烯酸-2-乙基己基共聚物树脂乳剂、聚丙烯酸溶液、聚维酮溶液、丙烯酸接枝淀粉、聚乙烯比咯烷酮中的一种或两种以上，优选增粘剂为明胶、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸溶液、丙烯酸甲酯-丙烯酸-2-乙基己基共聚物树脂乳剂中的一种或两种以上；本发明使用的保湿剂为甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、尿素、山梨醇、聚乙二醇中的一种或两种以上，优选为甘油；本发明使用的pH调节剂为为酒石酸、乳酸、苹果酸、L-酒石酸、枸橼酸、磷酸的一种或两种以上，优选酒石酸；本发明使用的交联剂为甘羟铝、氢氧化铝、氧化铝、氢氧化铝凝胶、三氯化铝中的一种或两种以上，优选甘羟铝、氢氧化铝；本发明使用的交联调节剂为依地酸二钠、依地酸四钠中的一种或两种以上，优选依地酸二钠；本发明使用的表面活性剂为司盘20、司盘40、司盘60、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80的一种或两种以上，优选聚山梨酯80；本发明使用的填充剂为高岭土、滑石粉、二氧化钛、微粉硅胶、二氧化硅、硅藻土中的一种或两种以上，优选为高岭土。

本发明还提供了上述抗炎凝胶贴膏的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备青风藤提取物：青风藤粉碎，用乙醇水溶液提取，浓缩、干燥，制得青风藤提取物；

（2）配制水相混合物：将交联调节剂、保湿剂、乳化剂及部分增粘剂加至水中，再加入青风藤提取物，混匀，得水相混合物；

（3）配制油相混合物：将骨架材料、交联剂及填充剂添加至甘油中，混匀，得油相混合物；

（4）配制主药混合物：将表面活性剂、冬青油、薄荷脑，混合均匀，得主药混合物；

（5）配制pH调节剂溶液：将pH调节剂溶解于水中；

（6）混合制膏：将油相混合物、水相混合物和主药混合物混合均匀，再加入pH调节剂溶液和增粘剂，混合均匀，得总混膏体；

（7）涂布及分切：将总混膏体均匀涂布、分切，即得凝胶贴膏。

优选地，步骤（1）中提取过程中不加酸或碱。

优选地，所述步骤（1）的乙醇水溶液的浓度为20～80%。

本发明还涉及所述的凝胶贴膏在制备治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛药物中的应用。

本发明还涉及冬青油在制备抗炎凝胶贴膏中的应用。冬青油在抗炎凝胶贴膏中能够同时起到活性成分和促渗透的作用，因此作为活性成分和促渗剂应用在抗炎凝胶贴膏中。在某些实施方案中，本发明涉及冬青油作为活性成分和促渗剂在制备抗炎凝胶贴膏中的应用。

采用以上技术方案，本发明的有益效果在于：

（1）本发明的外用抗炎中药组合物主药是青风藤、冬青油（兼促渗剂），任选添加薄荷脑（兼促渗剂），其中，冬青油利用其自身的脂溶性特性，一定程度上破坏了角质层脂质结构，改变表层角质层的致密排列，降低皮肤屏障作用，从而促进药物的吸收。

（2）本发明的抗炎凝胶贴膏，通过添加冬青油，使得产品具有高强的渗透性，根据12个月长期稳定性考察和体外释放试验，本发明的抗炎凝胶贴膏的体外释放稳定，质量稳定，符合药用标准。

（3）采用本发明的抗炎中药提取物制备的产品，相比已上市的同类产品（正清风痛宁注射液），疗效相当，并且副作用小，安全可靠。

术语定义

本发明中，术语“青风藤提取物”指防己科植物青藤或毛青藤的干燥藤茎粉碎后，经乙醇溶液提取（包括但不限于回流提取、浸提或渗漉提取中的一种或两种以上）后，将提取液浓缩、干燥制得的青风藤提取物。

本发明中，术语“冬青油”，又名冬绿油，主要成分为水杨酸甲酯，含量在90%以上。优选90%～100%，在一些实施例中，冬青油中水杨酸甲酯的含量为90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%或其中任意两值之间的范围中的任意值。

冬青油的来源广泛，主要分为合成来源和提取来源，合成来源包括但不限于合成水杨酸甲酯，例如市售冬绿油（又名：冬青油）或市售合成水杨酸甲酯；或者所述冬绿油的制备方法包括将植物，例如滇白珠、平铺白珠、地檀香、芳香白珠、和/或冬青切碎，水蒸气蒸馏提取，收集下层挥发油，得所述冬绿油。提取来源包括但不限于：植物进行提取制得提取物，所述提取物包括滇白珠提取物、平铺白珠提取物、芳香白珠提取物、地檀香提取物、冬青提取物和桦树提取物中的任意一种或多种。

附图说明

图1为抗炎凝胶贴膏的青藤碱12小时累积释放曲线。

图2为青风藤提取物的HPLC色谱图。

图3为冬青油的GC色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。

本发明所用的试剂和原辅料均市售可得。

实施例1～4及对比例1～5

实施例1～4及对比例1～5的凝胶剂的处方如表1所示。

表1

制法

（1）制备青风藤提取物：

S1提取：青风藤粉碎，青风藤粉碎，用40%乙醇润湿2小时，再加入适量40%乙醇浸泡24小时，渗漉得渗漉液，备用。

S2浓缩：渗漉液转入浓缩器中，减压浓缩至1.0~1.3g/cm³。

S3制膏：浓缩液经减压干燥至水分低于10%，得青风藤提取物。

（2）配制主药混合物：将冬青油、薄荷脑，4份聚山梨酯80加至40份甘油中，混合均匀。

（3）制备凝胶剂：将3份羧甲基纤维素钠加至50份水中，溶胀；再加入青风藤提取物，混合均匀，再加入主药混合物，混合均匀制得。

实施例5～8及对比例6～10

实施例5～8及对比例6~10的抗炎凝胶贴膏的处方如表2所示。

表2

制法

（1）制备青风藤提取物：同实施例1~4。

（2）配制水相混合物：将明胶、依地酸二钠、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇加至水中，再加入青风藤提取物，混匀，得水相混合物。

（3）配制油相混合物：将部分中和聚丙烯酸钠、甘羟铝及高岭土添加至部分甘油中，混匀，得油相混合物。

（4）配制主药混合物：将聚山梨酯80、冬青油、薄荷脑加至部分甘油中，搅拌均匀。

（5）配制酒石酸溶液：将酒石酸溶解于水中。

（6）混合制膏：将油相混合物、水相混合物和主药混合物混合均匀，再加入酒石酸溶液和聚丙烯酸溶液，混合均匀，得总混膏体。

（7）涂布及分切：将总混膏体均匀涂布、分切，即得凝胶贴膏。

应用例

通过生物化学法构建大鼠骨关节炎模型，探讨抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎模型的治疗作用，同时设置阳性对照药组作为对照，以评价并比较抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎痛阈值的影响，对骨关节肿胀周长的影响，探索不同给药方式、不同给药剂量对骨关节炎的药效作用。

抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎模型的影响

选取检疫合格SPF级雄性SD大鼠132只，分为正常组（12只）和模型组（120只），模型组大鼠分别于第1、4、7天在其右后膝关节腔一次性注射4%木瓜蛋白酶溶液0.1mL/只，正常组注射等量的0.9%氯化钠注射液，共计注射3次。造模结束后继续喂养1周后，各组随机选取2只动物安乐死取软骨组织进行组织病理学检查。选取造模部位肿胀明显的大鼠110只，按体重随机分为11组，分别为模型对照组、正清风痛宁注射液组、实施例1~4组、对比例1~5组，每组10只动物。注射液组按5mg/kg肌肉注射正清风痛宁注射液，每天给药2次；其余各组用相应受试物直接涂抹于大鼠右膝关节前方，面积大小为2.5cm×2.5cm，采用玻璃纸固定12h防止药物挣脱。正常对照组和模型对照组给予等量的空白基质，同样每日固定右骨关节12h。连续给药7天，末次给药后次日，测定大鼠关节肿胀周长；采用痛觉压力计测量各组大鼠骨关节的痛阈值；取骨关节液，对PGE、COX-2、IL-1β、TNF-α等标志物检测。

实验结果

（1）对大鼠骨关节肿胀的影响

如表3所示，与正常对照组比较，模型对照组骨关节肿胀周长显著增加（P ≤0.01）；与模型对照组比较，除对比例5组外，其余各给药组大鼠骨关节肿胀周长显著减少（P≤ 0.01）；与对比例5组比较，其他给药组组大鼠骨关节肿胀周长均显著减少；与对比例1~4组比较，实施例1~4组大鼠骨关节肿胀周长显著降低；与正清风痛宁注射液组相比，实施例1~4组大鼠骨关节肿胀周长无显著差别，处于同一水平。

表3 抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎模型肿胀周长的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较，⁺ P ≤ 0.01；与模型对照组比较， ^** P ≤ 0.01。

（2）对大鼠骨关节炎模型疼痛阈值的影响

如表4所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠给药前、末次给药后次日骨关节痛阈值均显著降低（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，除对比例5组外，其余各给药组末次给药后次日骨关节痛阈值均显著升高（P<0.01）；与对比例5组比较，其他给药组末次给药后次日骨关节痛阈值均显著升高；与正清风痛宁注射液组相比，实施例1~2组末次给药后次日骨关节痛阈值略微偏低，实施例3~4组末次给药后次日骨关节痛阈值无显著区别；与实施例1~4组比较，对比例1~4组末次给药后次日骨关节痛阈值显著偏低。

表4 抗炎凝胶剂对大鼠骨关节痛阈值的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较⁺ P≤0.01；与模型对照组比较^** P≤0.01。

（3）骨关节腔液炎症因子

如表5所示，与正常对照组比较，模型对照组IL-1β、TNF-α水平显著升高（P ≤0.05）；与模型对照组比较，对比例5组IL-1β、TNF-α水平无显著变化，正清风痛宁注射液组、实施例1~4组、对比例1~4组IL-1β和TNF-α水平均显著减少（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01）。

表5 抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎模型炎症因子的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较，⁺ P ≤ 0.05，⁺⁺ P ≤ 0.01；与模型对照组比较，^* P ≤0.05，^** P ≤ 0.01。

（4）骨关节腔液PGE、COX-2变化

如表6所示，与正常对照组比较，模型对照组PGE、COX-2水平均显著增加（P ≤0.01）；与模型对照组比较，对比例5组PGE、COX-2水平无显著变化，正清风痛宁注射液组、实施例1~4组、对比例1~4组PGE、COX-2水平显著减少（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01）；与正清风痛宁注射液组比较，实施例1组、对比例1~4组PGE、COX-2水平显著增高，实施例2~4组PGE、COX-2水平略微降低。

表6 抗炎凝胶剂对大鼠骨关节炎模型PGE、COX-2的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较，⁺ P ≤ 0.01；与模型对照组比较，^* P ≤ 0.05，^** P ≤0.01。

本次研究通过生物化学法诱导实验大鼠骨关节炎模型，同时设置阳性对照药组作为对照，以评价并比较中药组合物对骨关节炎的药效作用。

观察结果如下

（1）骨关节痛阈值的影响：对比例5组升高痛阈值效果显著低于其他给药组，说明单冬青油的止痛效果显著弱于单青风藤和青风藤冬青油复方；实施例1~4组大鼠末次给药后次日骨关节痛阈值升高效果均显著优于对比例1~4组，说明添加冬青油有助于提高抗炎凝胶剂的止痛效果，与正清风痛宁注射液相比，实施例1的骨关节痛阈值升高效果略差，实施例2~4的骨关节痛阈值升高效果基本相当。

（2）骨关节肿胀周长的影响：对比例5组降低骨关节肿胀周长效果显著低于其他给药组，说明单冬青油的消肿效果显著弱于单青风藤和青风藤冬青油复方；实施例1~4组大鼠末次给药后次日骨关节肿胀周长降低效果均显著优于对比例1~4组，说明添加冬青油有助于提高抗炎凝胶剂的消肿效果，与正清风痛宁注射液相比，实施例1~4降低骨关节肿胀周长的效果基本相当。

（3）对大鼠骨关节炎症因子的影响：对比例5组关节炎症因子无显著变化；正清风痛宁注射液组、实施例1~4组、对比例1~4组均可有效降低大鼠骨关节炎症因子水平，降低效果无显著区别。

（4）对大鼠骨关节腔液PGE、COX-2的影响：对比例5组骨关节腔液PGE、COX-2无显著变化；正清风痛宁注射液组、实施例1~4组、对比例1~4组均可有效降低大鼠骨关节腔液PGE、COX-2水平，正清风痛宁注射液组、实施例2~4组效果基本相当，实施例1组、对比例1~4组略差。

抗炎凝胶贴膏初黏力试验

参照《中国药典》(2020年版)四部通则0952黏附力测定法第一法(初黏力的测定)，初黏力采用滚球斜坡停止法测定。取供试品3片，除去保护层，置于倾斜角为30°的倾斜板中央，其中供试品上端应位于倾斜板的水平线下线位置，黏性面向上且沿斜面方向的实验长度不超过5cm。取不同直径的钢球放在水平线上线位置上，自斜面顶端自由滚下，根据黏性面能粘住的最大钢球的球号，评价其初黏性的大小。结果显示实施例5、6、7、8和对比例6、7、8、9中青风藤凝胶贴膏分别黏住25、26、24、26、22、22、21、23号的钢球，表明初黏力性能良好。

抗炎凝胶贴膏赋形性实验

取实施例5~8和对比例6~9中制备的青风藤凝胶贴膏各一贴，置37℃、相对湿度64％的恒温恒湿箱中30分钟，取出，用夹子将供试品固定在一平整钢板上，钢板与水平面的倾斜角为60℃，放置24小时，膏面应无流淌现象。

结果显示各批样品均无流淌现象，符合《中国药典》2020年版赋形性检查要求。

抗炎凝胶贴膏稳定性考察

按稳定性方案计划，对留样观察的四批自制样品（选用实施例5、6、7、8的样品测试）进行了12个月的稳定性考察，统计的样品质量稳定情况见表7。

表7 12个月的稳定性考察

由以上实验结果可得出:本发明的抗炎凝胶贴膏长期稳定性非常好，储存12个月后质量稳定，保质期长，符合药用标准。

抗炎凝胶贴膏体外释放测定法考察

选取实施例5~8、对比例6~9的抗炎凝胶贴膏进行体外释放实验，实验仪器为：透皮仪TK-24BL。

试验操作：以聚醚砜膜（孔径0.45μm）为隔离膜、32±0.5℃的pH7.4 PBS为接收介质，测定各样品经立式扩散池的体外释放特性，分别于1、2、4、6、8、12h取出全部接收液，同时补充等量接收液，将取出的接收液用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。测定溶液中主成分含量，计算即得。

图1是抗炎凝胶贴膏体外释放结果示意图，由图1可知，实施例抗炎凝胶贴膏的体外释放速度显著优于对比例，说明本发明的抗炎凝胶贴膏体的起效速度优于单一的青风藤提取物凝胶贴膏。

抗炎凝胶贴膏剂的药效研究

本发明通过弗氏完全佐剂诱导实验大鼠肩周炎模型，同时设置阳性对照药组作为对照，以评价并比较抗炎凝胶贴膏贴敷对大鼠肩关节痛阈值的影响、对大鼠肩关节肿胀周长的影响，探索不同给药方式、不同给药剂量对骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛的药效作用。

抗炎凝胶贴膏对实验大鼠肩关节炎模型的影响

选取检疫合格SPF级雄性SD大鼠132只，分为正常组（12只）和模型组（120只），各组以面积为5cm×5cm对大鼠右肩部外侧进行脱毛处理，模型组大鼠分别于第1、5、9、13天在其右前肩关节腔一次性注射弗氏完全佐剂0.1mL/只，正常对照组注射等量的0.9%氯化钠注射液，共计注射4次。造模结束后各组随机选取2只动物安乐死取肩关节滑膜及周围韧带肌腱组织进行组织病理学检查。选取造模部位肿胀明显的大鼠110只，按体重随机分为11组，分别为模型对照组、正清风痛宁注射液组、实施例5~8组、对比例6~10组，每组10只动物。注射剂组按 5mg/kg肌肉注射正清风痛宁注射液，每天给药2次；其余各组用相应的受试物直接贴敷于右前肩关节部位，采用医用透气橡皮膏固定膏药以防脱落，每天给药2次，第二次给药于次日给药前撤药，2次给药间隔12h；正常对照组和模型对照组按相同给药方法贴敷给予等面积的空白贴膏，连续给药7天。

分别于给药前及末次给药后次日采用针刺仪测量各组大鼠肩关节痛阈值。

分别于给药前及末次给药后次日采用线敷法测量关节周长，观察动物肩关节肿胀情况。

于末次撤药后各组大鼠异氟烷吸入麻醉后腹主动脉放血安乐死，切开大鼠造模部位皮肤，解剖取右前股二头肌组织，用0.9%氯化钠注射液按1：9制备组织匀浆，采用ELISA法测定股二头肌组织中TNF-α、IL-6、PGE-2、TGF-β1含量。

实验结果

（1）对肩关节肿胀周长的影响

如表8所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠给药前、末次给药后次日肩关节肿胀周长均显著增加（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，除对比例10组外，其余给药组大鼠末次给药后次日肩关节肿胀周长均显著减少（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01），正清风痛宁注射液组、实施例6~8组降低肿胀周长效果基本相当，实施例5组、对比例6~9组略差，对比例10组降低肿胀周长效果最差。

表8 抗炎凝胶贴膏对大鼠肩关节肿胀周长的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较⁺ P≤0.05；与模型对照组比较^* P≤0.05，^** P≤0.01。

（2）对肩关节痛阈值的影响

如表9所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠给药前、末次给药后次日肩关节痛阈值均显著降低（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，除对比例10组外，其余给药组大鼠末次给药后次日肩关节痛阈值均显著增高（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01），正清风痛宁注射液组、实施例6~8组增加痛阈值效果基本相当，实施例5组、对比例6~9组略差，对比例10组增加痛阈值效果最差。

表9 抗炎凝胶贴膏对大鼠肩关节痛阈值的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较⁺⁺ P≤0.01；与模型对照组比较^* P≤0.05，^** P≤0.01。

（3） 对肩关节股二头肌组织细胞因子的影响

如表10所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠组织中TNF-α、IL-6、PGE-2、TGF-β1含量均显著增加（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，给药组大鼠组织中TNF-α、IL-6、PGE-2、TGF-β1含量均显著减少（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01）。

表10 抗炎凝胶贴膏对大鼠肩关节股二头肌组织细胞因子的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较⁺⁺ P≤0.01；与模型对照组比较^* P≤0.05，^** P≤0.01。

本次研究通过持续完全弗氏佐剂法诱导大鼠肩周炎模型，同时设置阳性对照药组作为对照，以评价并比较青风藤提取物凝胶贴膏对肩周炎的药效作用。

观察结果如下

（1）肩关节痛阈值的影响：实施例5~8组大鼠末次给药后次日肩关节痛阈值升高效果均显著优于对比例6~9组，说明添加冬青油有助于提高青风藤提取物凝胶贴膏止痛效果；对比例10大鼠肩关节痛阈值升高效果最差，说明单冬青油处方止痛效果弱于青风藤提取物单方或复方；实施例6~8组大鼠末次给药后次日肩关节痛阈值与正清风痛宁注射液组基本相当，说明对应处方的青风藤提取物凝胶贴膏的止痛效果优秀。

（2）肩关节肿胀周长的影响：实施例5~8组大鼠末次给药后次日肩关节肿胀周长显著低于对比例6~9组，说明添加冬青油有助于提高青风藤提取物凝胶贴膏消肿效果；对比例10大鼠肩关节肿胀度降低效果最差，说明单冬青油处方消肿效果弱于青风藤提取物单方或复方；实施例6~8组大鼠末次给药后次日肩关节肿胀周长与正清风痛宁注射液组基本相当，说明对应处方的青风藤提取物凝胶贴膏的消肿效果优秀。

（3）肩关节股二头肌组织细胞因子的影响：实施例5~8组大鼠末次给药后次日肩关节肌肉组织细胞因子显著低于对比例6~9组，说明添加冬青油有助于提高青风藤提取物凝胶贴膏抗炎效果；对比例10肩关节肌肉组织细胞因子降低效果最差，说明单冬青油处方抗炎效果弱于青风藤提取物单方或复方；实施例6~8组大鼠末次给药后次日肩关节肌肉组织细胞因子与正清风痛宁注射液组基本相当，说明对应处方的青风藤提取物凝胶贴膏的抗炎效果优秀。

抗炎凝胶贴膏对实验大鼠软组织损伤模型的影响

采用机械冲击法造成大鼠腿部肌肉损伤建立大鼠软组织损伤模型，通过检测不同时间大鼠痛阈值及软组织损伤程度，考察抗炎凝胶贴膏不同给药时长对大鼠软组织损伤模型的药效作用。

选取检疫合格，且皮肤完整、无骨折表现的SPF级SD大鼠76只，雌雄各半，分为正常对照组（10只）和模型组（66只），正常组不做处理，模型组大鼠采用异氟烷吸入麻醉（2%～4%诱导麻醉，0.25%～2%维持麻醉），采用撞击法诱导大鼠软组织损伤模型。造模后次日，选取造模部位肿胀明显的大鼠60只，随机分为6组，分别为模型对照组、实施例6给药1、2、3、4、5组，每组10只动物。每日给药前将实施例6、空白贴膏均裁剪至面积为3.0cm×3.0cm，各组定期对腿部肌肉进行备皮，给药组大鼠直接贴敷于左后肢外侧肌肉部位，采用医用透气橡皮膏固定膏药以防脱落，其中实施例6给药1、3、5组动物分别给药接触时长分别为8h、12h、24h撤药，每天给药1次，实施例6给药2、4组动物分别给药接触时长分别为8h、12h撤药，每天给药2次，连续给药7天。正常对照组和模型对照组按相同给药方法贴敷给予等面积的实施例6的空白贴膏。分别于给药D4及及末次给药后次日观察各组动物软组织损伤程度，并按下表的标准评分。分别于给药前、给药D4及末次给药后次日检测痛阈值。

表11 软组织损伤程度观察指标及评分标准

实验结果

（1）对大鼠软组织损伤程度的影响

如表12所示，与正常对照组比较，模型对照组给药前、给药D4及给药后D7内的软组织损伤评分均显著增加（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，实施例6给药2～5组大鼠末次给药后次日软组织损伤评分均明显减少（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01）。

表12 实施例6不同给药时长对大鼠软组织损伤程度的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较++P ≤ 0.01；与模型对照组比较*P ≤ 0.05，**P ≤0.01。

（2）对大鼠软组织痛阈值的影响

如表13所示，与正常对照组比较，模型对照组给药前、给药D4及给药后D7内的软组织痛阈值均显著减少（P ≤ 0.01）；与模型对照组比较，实施例6给药2～5组大鼠末次给药后次日软组织痛阈值均明显增加（P ≤ 0.05或P ≤ 0.01）。

表13 实施例6不同给药时长对大鼠痛阈值的影响（，n=10）

注：与正常对照组比较++P ≤ 0.01；与模型对照组比较*P ≤ 0.05，**P ≤0.01。

以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。

Claims (11)

1.一种外用抗炎中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由以下组分制成：青风藤30～120份、冬青油0.35～1.4份以及薄荷脑0.3～1.2份。

2.根据权利要求1所述的外用抗炎中药组合物，其特征在于，以重量份数计，由以下组分制成：青风藤60～90份、冬青油0.7～1.05份以及薄荷脑0.3～1.2份。

3.根据权利要求1或2所述外用抗炎中药组合物，其特征在于，所述冬青油包括合成来源和提取来源；其中，所述合成来源包括合成水杨酸甲酯；所述提取来源包括自植物进行提取制得提取物，所述提取物包括滇白珠提取物、平铺白珠提取物、芳香白珠提取物、地檀香提取物、冬青提取物和桦树提取物中的任意一种或多种。

4.根据权利要求1或2所述外用抗炎中药组合物，其特征在于，所述冬青油中水杨酸甲酯的含量90%以上。

5.根据权利要求1或2所述外用抗炎中药组合物，其特征在于，所述青风藤经乙醇水溶液提取、浓缩、干燥，制得青风藤提取物。

6.根据权利要求1～5任一所述外用抗炎中药组合物在制备治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品的剂型为凝胶剂、软膏、搽剂和涂膜剂。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述治疗骨关节炎、肩周炎、软组织损伤和肌肉痛产品的剂型为凝胶贴膏剂。

9.一种抗炎凝胶贴膏，其特征在于，包含权利要求1～5任一项所述的外用抗炎中药组合物。

10.根据权利要求9所述的抗炎凝胶贴膏，其特征在于，还包括凝胶基质，所述凝胶基质包括高分子骨架材料、增粘剂、保湿剂、pH调节剂、交联剂、交联调节剂、表面活性剂、填充剂和水。

11.根据权利要求10所述的抗炎凝胶贴膏的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备青风藤提取物：青风藤粉碎，用乙醇水溶液提取，浓缩、干燥，制得青风藤提取物；

（2）配制水相混合物：将交联调节剂、保湿剂、乳化剂及部分增粘剂加至水中，再加入青风藤提取物，混匀，得水相混合物；

（3）配制油相混合物：将骨架材料、交联剂及填充剂添加至甘油中，混匀，得油相混合物；

（4）配制主药溶液：将乳化剂、冬青油、薄荷脑加至甘油中，搅拌均匀；

（5）配制pH调节剂溶液：将pH调节剂溶解于水中；

（6）混合制膏：将油相混合物、水相混合物和主药溶液混合均匀，再加入pH调节剂溶液和增粘剂，混合均匀，得总混膏体；

（7）涂布及分切：将总混膏体均匀涂布、分切，即得凝胶贴膏。