CN120827606A - 茉莉根中具有抗炎镇痛作用的多肽的制法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了茉莉根中富含半胱氨酸多肽分离纯化和/或治疗疼痛或抗炎药物中的应用，属于医药技术领域。

Description

茉莉根中具有抗炎镇痛作用的多肽的制法与用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及茉莉根中一种富含半胱氨酸多肽制备方法，在制备预防和/或治疗疼痛，炎症药物中的用途。

背景技术

疼痛作为一种复杂的生理活动，是临床上最常见的症状之一，疼痛通常由导致组织损伤的伤害性刺激引起。包括机械性刺激和物理化学因素等引起的伤害性刺激，导致组织细胞发炎或损伤，向细胞外液释放钾离子、5-羟色胺、乙酰胆碱、缓激肽、组胺等生物活性物质，引起疼痛或痛觉过敏。因此痛觉可作为机体受到伤害的一种警告，引起机体一系列防御性保护反应。但另一方面，某些长期的剧烈疼痛，对机体已成为一种难以忍受的折磨。而炎症是机体受致炎因子损伤后而产生的一系列以防御为主的生理性或病理性反应，是机体天然免疫的重要组成部分。当机体免疫耐受遭受破坏时，会激活相关免疫细胞，如巨噬细胞，使其释放花生四烯酸﹑细胞因子、前列腺素﹑组胺等炎性介质。其自身的吞噬能力也增强，能够杀灭和消化机体内抗原性异物。炎性介质通过激活细胞内外炎症信号通路，刺激免疫细胞分泌过量的IL-6、TNF-a、TL-13等促炎细胞因子，这使得机体内促炎细胞因子和抑炎细胞因子不平衡，而促炎细胞因子又会促进细胞炎症反应。长时间的炎症反应可能会引发许多疾病，例如癌症、多发性硬化、动脉粥样硬化、关节炎、心脏疾病﹑胰岛素抵抗等。因此，研发同时治疗疼痛与炎症的药物具有十分重要的意义。

茉莉根(Jasminum sambac(L.)Ait.)为木犀科素馨属植物茉莉的干燥根。分布于亚热带和亚温带，我国浙江、广东、四川、福建等南部地区也有栽培。茉莉根传统上用于治疗炎症、疼痛，解热。《本草纲目》记载：根以酒磨一寸服，则昏迷一日乃醒，二寸二日，三寸三日。凡跌损、骨折、脱臼、接骨者用此，则不知痛也。目前茉莉根主要为民间用药，用于跌打损伤、扭筋骨、头顶痛。课题组前期研究发现茉莉根水提取物的镇痛活性强于95％乙醇提取物，通过对水提取物结构与活性的追踪，分离得到一系列素馨萜醇类化合物，醋酸扭体结果显示部分化合物表现出显著的镇痛活性。为了进一步探究茉莉根的镇痛药效物质，新加坡(Geeta,Kumari,et al.Molecular diversity and function of jasmintides fromJasminum sambac.Bmc Plant Biology 2018,18:144.Cystein-Rich peptide familywith unusual disulfide connectivity from Jasminum sambac.Journal of NaturalProducts.2015,78,2791-2799.)的研究者发现茉莉根中有富半胱氨酸的多肽类化合物(2,6-8)，但是其抗炎镇痛方面的活性并未被发现。

本发明首次发现茉莉根中的多肽类化合物具有抗炎镇痛活性，特别是镇痛活性。迄今为止，尚未见茉莉根多肽化合物及药物组合物和抗炎，镇痛和抗炎镇痛研究的有关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗炎镇痛活性的多肽及其制备方法和应用，所述多肽及其在药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗炎症疼痛抗炎方面的应用，该类化合物来源于茉莉根。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面，提供了式1所示的多肽1-8或其药学上可以接受的盐，其中Z为焦谷氨酸，在制备预防、缓解和/或治疗疼痛和炎症中的应用。

所述的炎症包括变质性炎症、渗出性炎症、增生性炎症、特异性炎症以及炎性肠病。

所述的疼痛包括急性疼痛、慢性炎症性疼痛、糖尿病周围神经病变痛、癌症痛、三叉神经痛、疱疹感染后神经痛、创伤后神经痛、化疗诱发的多发性神经病变痛、复杂区域性疼痛综合征、HIV感觉性神经病变疼痛、手术后神经痛、幻肢痛、根性神经病变、放疗后神经丛疾病疼痛、脊髓损伤引起的神经性疼痛。

第二方面：提供了一种药物组合物在制备预防、缓解和/或治疗疼痛产品中的应用，其中，所述的药物组合物包含治疗有效量的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。

所述的产品包括但不限定于药品。

该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。通常本发明药物组合物含有0.1-95重量％的本发明化合物。在单元剂型中本发明化合物一般含量为0.05-100mg，优选的单元剂型含有0.5-10mg。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、静脉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型等。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓释剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明的化合物的用量为0.0001-100mg/kg体重，可一次服用或分多次服用。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。

有益技术效果：

茉莉根在中国南方分布广泛，原料多且来源方便，茉莉根的总多肽具有显著的镇痛活性，本发明的单体多肽系从茉莉根的总多肽中分离得到的，多肽1抗炎镇痛效果等同于总多肽。

附图说明

图1茉莉根总多肽的提取分离流程图

图2多肽1的MALDI-TOF-MS图谱

图3多肽1的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图4多肽2的MALDI-TOF-MS图谱

图5多肽2的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图6多肽3的MALDI-TOF-MS图谱

图7多肽3的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图8多肽4的MALDI-TOF-MS图谱

图9多肽4的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图10多肽5的MALDI-TOF-MS图谱

图11多肽5的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图12多肽6的MALDI-TOF-MS图谱

图13多肽6的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图14多肽7的MALDI-TOF-MS图谱

图15多肽7的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图16多肽8的MALDI-TOF-MS图谱

图17多肽8的DTT，IAA还原烷基化后的MALDI-TOF-MS图谱

图18多肽1的b-和y-离子的碎片

图19多肽2的b-和y-离子的碎片

图20多肽3的b-和y-离子的碎片

图21多肽4的b-和y-离子的碎片

图22多肽5的b-和y-离子的碎片

图23多肽6的b-和y-离子的碎片

图24多肽7的b-和y-离子的碎片

图25多肽8的b-和y-离子的碎片

图26多肽1的HRESIMS谱图

图27多肽2的HRESIMS谱图

图28多肽3的HRESIMS谱图

图29多肽4的HRESIMS谱图

图30多肽5的HRESIMS谱图

图31多肽6的HRESIMS谱图

图32多肽7的HRESIMS谱图

图33多肽1的HPLC液相纯度检测色谱图

图34多肽2的HPLC液相纯度检测色谱图

图35多肽3的HPLC液相纯度检测色谱图

图36多肽4的HPLC液相纯度检测色谱图

图37多肽5的HPLC液相纯度检测色谱图

图38多肽6的HPLC液相纯度检测色谱图

图39多肽7的HPLC液相纯度检测色谱图

图40多肽8的HPLC液相纯度检测色谱图

具体实施方式

术语与简称

LC-MS/MS 液相色谱与串联质谱联用

MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

HPLC 高效液相色谱

HRESI-MS高分辨电喷雾质谱

NOESY二维Overhauser效应(一种测定分子中氢原子空间位置临近关系的二维核磁共振谱)

下面的实施例及药物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

实施例1：茉莉根多肽化合物的分离及结构表征

茉莉根5kg粉碎，用10倍体积溶剂(二氯甲烷:甲醇＝1:1)25℃提取2次，每次连续搅拌过夜。抽滤，上清中加入相同体积的水(二氯甲烷:甲醇:水＝1:1:1)萃取两次，水部位冻干，得到浸膏370g。总浸膏经大孔树脂(D-101)吸附色谱柱，依次用水，30％，60％和95％乙醇洗脱，随之得到E1-E4四个流分。其中E3流分(65g)经中压反相ODS色谱柱，以15mL/min的流速，依次以水，50％，70％和100％甲醇洗脱，分别得到E3-1-E3-4四个流分，其中流分E3-3采用70％甲醇-水等度洗脱7个柱体积，得到E3-3I-E3-3ⅤII 7个流分。流分E3-4采用甲醇等度洗脱7个柱体积，得到E3-4I-E3-4ⅤII7个流分。流分E3-4I和E3-4Ⅱ合并(1.2g)经制备型高效液相色谱(Ultimate XB-C4，10×250mm，5μm；37％乙腈水作为流动相；流速3mL/min)富集化合物粗品1-7。继续经制备型液相色谱(Ultimate XB-C4，10×250mm，5μm；20-60％乙腈水作为流动相梯度洗脱30min；流速3mL/min)得到化合物1(60.0mg)，3(2mg)。经高效液相色谱(Agilent 1200DAD-UV-ELSD)检测器型色谱仪；Ultimate XB-C4，4.6×250mm，5μm；20-70％乙腈水作为流动相梯度洗脱30min；流速(1mL/min)得到化合物2(1mg)，4(1.5mg)，5(1.3mg)，6(1.1mg)，7(0.9mg)，8(0.7mg)。

共得到8个化合物(见表1)，具体实验分离流程如附图1所示。

表1半胱氨酸多肽1-8的结构式及鉴定方法

茉莉根中多肽单体的鉴定：

1.样品前处理

将100μg纯化的多肽置于1.5mL管中，用200μL 8M尿素溶解，加入100mM二硫苏糖醇(DTT)(40μL，溶解在8M尿素中)，37℃孵育3小时；加入50mM碘乙酰胺(IAA)(24μL，溶解在50mM碳酸氢铵溶液中)，然后室温下避光孵育1小时，待脱盐操作；

脱盐：将前述收集的上清液，上样，离心，反复上样10次，之后用0.1％FA的水100μL冲洗柱子8次，最后用75％乙腈-水(含0.1％FA)100μL冲洗4次，将目标肽段冲洗下来，收集到的肽段通过真空冷冻浓缩仪浓缩，干燥的多肽粉末保存在-20℃。

胰酶酶解：在上述多肽粉末中加入100μL 50mM碳酸氢铵(NH₄HCO₃)复溶，加入2μg/4μL(20μg胰酶或糜蛋白酶溶于40μL的buffer溶液中，终浓度为0.5μg/μL)的胰酶，37℃摇床过夜17h，旋干，质谱检测。

2UPLC分析

UPLC条件如下：

仪器：Orbitrap Fusion^TM Lumos^TM Tribrid^TM Mass Spectrometer(ThermoFisher Scientific)联用Ultimate 3000液相系统

色谱柱规格：AcclaimPepMapRSLC70μm×15cm,nanoViperC18,2μm,100A；

流速：0.3mL/min

温度：50℃

紫外检测波长：280nm

进样量：3μL

梯度条件：A液：含有0.1％甲酸(v/v)的水，B液：含有0.1％甲酸(v/v)的乙腈

3质谱分析

质谱条件如下：

质谱参数：使用2.4kV的喷雾电压和320℃的毛细管温度离子化肽段。仪器采用data-dependent模式，自动在MS和MS²扫描之间切换。对于全组学样品,全扫描质谱(m/z350-1500)：分辨率为60000，最大注入时间为50ms，AGC目标值为4×10⁵。MS²高分辨质谱：分辨率为15000，最大注入时间为30ms，排除时间为25s，AGC目标值为5×10⁴，归一化碰撞能量为30％。只选择电荷数2到7的前体进行碎片化。

根据以上分析方法，利用超高效液相、电喷雾、四级杆、飞行时间质谱，对多肽单体进行色谱分析和质谱分析如附图2-17。提取峰的二级质谱图和b-和y-断裂情况如附图18-25所示。

药理实验

实施例1茉莉根中主要多肽(多肽1)镇痛活性评价

小鼠醋酸扭体实验(急性疼痛模型)

实验原理：

将一定容积和浓度的化学刺激物质如醋酸注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积，较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等行为反应，称为扭体反应。该反应多出现在注射后15min内，故可以注射后15min内发生的扭体次数作为疼痛定量指标。

实验材料和方法：

1.小鼠：昆明种小鼠，18-22g，雄性。

2.样品处理：样品临用前用生理盐水配成母液，检测时用培养液稀释成一定浓度后使用。

3.阳性对照药：盐酸哌替啶(Pethidine，Petd)。

4.测试方法：将小鼠随机分组，每组8只。实验组(20mg/kg)；盐酸哌替啶对照组高浓度(5mg/kg)，中浓度(2mg/kg)，低浓度(1mg/kg)；空白对照组(相同体积的生理盐水)，给药方式为腹腔注射，给药体积为0.1mL/10g，给药完成后等待10min。用生理盐水配制0.9％的醋酸溶液，给药量为0.1mL/10g。给药方式腹腔注射，等待5min。记录15min内小鼠扭体次数，按下式计算药物对扭体反应的抑制率，评判药物镇痛效果：

抑制率(％)＝(生理盐水组扭体次数-实验组扭体次数)/生理盐水组扭体次数×100％测试结果：

表2多肽1在20mg/kg剂量的扭体抑制率表

注：^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001.

实验结果显示：在20mg/kg浓度下，多肽1能显著抑制小鼠的醋酸扭体次数，抑制率为95.82％。

实施例2多肽1的镇痛活性量效关系

实验原理：

将一定容积和浓度的化学刺激物质如醋酸注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积，较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等行为反应，称为扭体反应。该反应多出现在注射后15min内，故可以注射后15min内发生的扭体次数作为疼痛定量指标。

实验材料和方法：

1.小鼠：昆明种小鼠，18-22g，雄性。

2.样品处理：样品临用前用生理盐水配成母液，检测时用培养液稀释成一定浓度后使用。

3.阳性对照药：盐酸哌替啶(Pethidine，Petd)。

4.测试方法：将小鼠随机分组，每组8只。实验组高剂量组(20mg/kg)，中剂量组(10mg/kg)，低剂量组(2.5mg/kg)；盐酸哌替啶对照组高浓度(5mg/kg)，中剂量组(10mg/kg)，低浓度(1mg/kg)；空白对照组(相同体积的生理盐水)，给药方式为腹腔注射，给药体积为0.1mL/10g，给药完成后等待10min。用生理盐水配制0.9％的醋酸溶液，给药量为0.1mL/10g.给药方式腹腔注射，等待5min。记录15min内小鼠扭体次数，按下式计算药物对扭体反应的抑制率，评判药物镇痛效果：

抑制率(％)＝(生理盐水组扭体次数-实验组扭体次数)/生理盐水组扭体次数×100％测试结果：

表3多肽1镇痛活性量效关系表

注：^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001.

实验结果显示：根据以上数据计算多肽1的ED₅₀值为3.111mg/kg。

实施例3茉莉根中总多肽组分腹腔注射与灌胃给药方式的镇痛活性评价

实验原理：

将一定容积和浓度的化学刺激物质如醋酸注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积，较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等行为反应，称为扭体反应。该反应多出现在注射后15min内，故可以注射后15min内发生的扭体次数作为疼痛定量指标。

实验材料和方法：

1.小鼠：昆明种小鼠，18-22g，雄性。

2.样品处理：样品临用前用生理盐水配成母液，检测时用培养液稀释成一定浓度后使用。

3.测试方法：将小鼠随机分组，每组8只。腹腔注射给药组(20mg/kg)，中剂量组(10mg/kg)，低剂量组(5mg/kg)灌胃给药高剂量组(200mg/kg)，灌胃给药中剂量组(100mg/kg)，灌胃给药低剂量组(50mg/kg)；空白对照组(相同体积的生理盐水)。腹腔注射实验组给药方式为腹腔注射，给药体积为0.1mL/10g，给药完成后等待10min，用生理盐水配制0.9％的醋酸溶液，给药量为0.1mL/10g，给药方式腹腔注射，等待5min。记录15min内小鼠扭体次数。空白组与灌胃实验组给药方式为灌胃给药，给药体积为0.1mL/10g，给药完成后等待40min，用生理盐水配制0.9％的醋酸溶液，给药量为0.1mL/10g，给药方式腹腔注射，等待5min。记录15min内小鼠扭体次数。给药体积按下式计算药物对扭体反应的抑制率，评判药物镇痛效果：

抑制率(％)＝(生理盐水组扭体次数-实验组扭体次数)/生理盐水组扭体次数×100％测试结果：

表4茉莉根中总多肽腹腔注射与灌胃给药的量效效关系表

注：^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001.

实验结果显示：

在20mg/kg浓度下，给药方式为腹腔注射时，茉莉根总多肽能显著抑制小鼠的醋酸扭体次数，抑制率为97.60％。200mg/kg浓度下，给药方式为灌胃时，茉莉根总多肽抑制小鼠醋酸扭体次数不明显，抑制率在30％以下。

实施例4茉莉根中总多肽热板镇痛活性测试

实验原理：

热板法是一种能确定区分中枢神经末梢神经镇痛机理的方法,用于研究疼痛刺激引起的不适和镇痛药物的作用机制，在热板法镇痛实验中，雌性小鼠因疼痛刺激会产生舔足反应，这种反应可以被药物抑制。通过测量小鼠在热板上舔后组的时间，可以评价药物的镇痛效果。

实验材料和方法：

1.小鼠：昆明种小鼠，18-22g，雌性。

2.样品处理：样品临用前用生理盐水配成母液，检测时用培养液稀释成一定浓度后使用。

3.阳性对照药：盐酸哌替啶。

4.测试方法：将小鼠放入温度已控制好的热板上(55±0.5℃)，立即开始计时，并盖上有机玻璃罩避免小鼠跃出，仔细观察，待小鼠舔后足时马上停止计该时间即为小鼠的痛阈值。凡是在5s内出现舔后足及超过30s不舔后足，或逃避跳跃的小鼠弃之不用。筛选出合格的小鼠，再次测定痛阈值，以两次平均值作为小鼠给药前的正常痛阈值。将小鼠随机分为模型组给0.9％生理盐水(0.1ml/10g)、阳性组(杜冷丁20mg/kg)、实验组给总多肽化合物的生理盐水溶液(20mg/kg)，每组12只。给药方式为腹腔注射。各剂量组小鼠分别在给药后的15、30、60min进行一次痛阈值的测定，并做好记录。设置实验截止时间为60s，若小鼠超过60s仍不舔足，应当立即取出以防止烫伤，且痛阈值按60s计算。按下式计算药物抑制率，评判药物镇痛效果：

痛阈提高率(％)＝(给药后平均热痛阈值-给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈值×100％

测试结果:

表5茉莉根总多肽在20mg/kg痛阈提高率表

注：^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001.

实验结果显示：在20mg/kg浓度下，茉莉根总多肽与空白对照组相比，给药15min后能显著提高小鼠痛阈。

实施例5茉莉根中总多肽对巴豆油致小鼠耳肿胀的影响

实验原理：

用致炎剂引起耳廓皮肤肿胀后，观察并测量给药组与对照组耳廓的重量，比较肿胀率的差异。

实验材料和方法：

1.小鼠：昆明种小鼠，18-22g，雌性。

2.样品处理：样品临用前用生理盐水配成母液，检测时用培养液稀释成一定浓度后使用。

3.阳性对照药：地赛米松

4.测试方法：将小鼠随机分组，每组8只，称重，分别按体重进行腹腔注射。模型组给0.9％生理盐水(0.1ml/10g)，对照组地塞米松(5mg/kg)，实验组给多肽1的生理盐水溶液(20mg/kg)给药后20min，将巴豆油:乙醇:乙醚＝2:20:78配好后取50μL均匀涂抹于每只小鼠右耳的两面。致炎4h后，小鼠脱颈椎处死，分别剪下左右耳片，用打孔器取相同部位打孔，称重，计肿胀度及肿胀抑制率。耳肿胀度＝右耳片质量-左耳片质量

耳肿胀抑制率(％)＝(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100％

表6茉莉根多肽1对巴豆油致小鼠耳肿胀的抑制效果

注：^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001.

实验结果显示：在20mg/kg浓度下，茉莉根多肽1与阳性药地塞米松，对小鼠耳肿胀抑制效果相近。

Claims (8)

1.如下多肽1-8或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗炎症和疼痛疾病药物中的应用，其中Z为焦谷氨酸

2.一种预防和/或治疗炎症和疼痛疾病的药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的权利要求1的任一化合物或其药效学上可接受的盐，以及药效学上可接受的载体，

3.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、溶液剂、气雾剂或喷雾剂。

4.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自缓释制剂、控释制剂、微粒给药系统。

5.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的炎症包括变质性炎症、渗出性炎症、增生性炎症、特异性炎症以及炎性肠病。

6.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述的变质性炎症包括实质器官的感染或中毒；所述的渗出性炎症包括浆液性炎、纤维素性炎、化脓性炎、出血性炎、坏死性炎、卡他性炎；所述的特异性炎症包括结核、梅毒、麻疯、淋巴肉芽肿；所述的炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。

7.根据权利要求1的的应用，其特征在于，所述的药学上可接受的盐，包括药学上可接受的有机盐或无机盐，其中，所述的有机盐包括磺酸盐、羧酸盐、氨基酸盐以及脂肪酸盐，无机盐包括盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐和硝酸盐。

8.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的疼痛包括急性疼痛、炎症性疼痛、糖尿病周围神经病变痛、癌症痛、三叉神经痛、疱疹感染后神经痛、创伤后神经痛、化疗诱发的多发性神经病变痛、复杂区域性疼痛综合征、HIV感觉性神经病变疼痛、手术后神经痛、幻肢痛、根性神经病变疼痛、放疗后神经丛疾病疼痛、脊髓损伤引起的神经性疼痛。