CN120815163B

CN120815163B - 能抑制ccnb2表达的抗肿瘤药物和应用

Info

Publication number: CN120815163B
Application number: CN202511315837.XA
Authority: CN
Inventors: 李国东; 胡发涌; 卢宗鸿; 周颖彬; 姚景波; 夏正霖
Original assignee: Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology
Current assignee: Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology
Priority date: 2025-09-16
Filing date: 2025-09-16
Publication date: 2025-12-12
Anticipated expiration: 2045-09-16
Also published as: CN120815163A

Abstract

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物和应用。本发明提供一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物是指抗乳腺癌；所述抗肿瘤药物是酪蛋白；或者所述抗肿瘤药物是酪蛋白与喜树碱按照1:10~15质量比混合后的组合物；所述酪蛋白是α‑S2酪蛋白。本发明发现酪蛋白能抑制CCNB2表达，并能提高喜树碱的杀死人乳腺癌细胞系的效果。

Description

能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物和应用

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物技术领域，具体涉及一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物和应用。

背景技术

肿瘤微环境是癌症发生和发展的重要组成部分，可以削弱免疫监视并诱导肿瘤耐药。通过增强抗肿瘤免疫反应发挥作用的免疫治疗，是肿瘤治疗研究的重要方向之一。以乳腺癌为例，通过靶向治疗，特别是针对免疫检查点的治疗，是有前景的乳腺癌治疗选择。先前的研究表明，免疫激活可改善人表皮生长因子受体-2阳性和三阴性乳腺癌的预后；使用程序性死亡蛋白-1/程序性死亡配体1拮抗剂的研究初步发现，某些乳腺癌亚型具有固有的免疫原性，使部分患者获得持续的总体缓解。然而，单药治疗的临床疗效有限，仅对少数转移性疾病患者有益。因此，寻找新的、可靠的乳腺癌免疫相关生物标志物以及治疗药物势在必行。

细胞周期蛋白B2是细胞周期蛋白家族的关键成员，在调节细胞周期进展中起重要作用，是细胞周期检查点。细胞周期蛋白家族成员的异常表达常导致肿瘤发生。例如，细胞周期蛋白B1高表达影响前列腺癌的发展并引发肿瘤耐药。同样，细胞周期蛋白E1是卵巢癌治疗的潜在靶点。乳腺癌组织中存在细胞周期蛋白B2高表达，且与不良预后相关。细胞周期蛋白G2先前被证实具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，最近发现其可逆转胶质瘤细胞肿瘤微环境中的免疫抑制，增强PD-1的阻断效果，我们的在先研究结果也显示，在乳腺癌中鉴定出3619个差异表达基因，其中细胞周期蛋白B2是网络中的关键基因，细胞周期蛋白B2高表达与不良预后相关。因此，基于细胞周期蛋白B2研究乳腺癌治疗药物是非常有必要的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物和应用。

本发明的目的是提供一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，所述肿瘤乳腺癌；

所述能抑制CCNB2表达抗肿瘤药物是酪蛋白；

或者所述能抑制CCNB2表达抗肿瘤药物是酪蛋白与喜树碱按照1:10~15质量比混合后的组合物；

所述酪蛋白是α-S2酪蛋白。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，酪蛋白与喜树碱按照的质量比为1:12。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述应用是指所述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物用于制备杀死人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和人乳腺癌细胞系MCF-7的制剂。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述制剂的唯一活性成分为所述抗肿瘤药物。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述制剂还包括药剂学上可接受的辅料。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述辅料包括溶剂、螯合剂和渗透压调节剂中的至少一种。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述酪蛋白对应的溶剂为去离子水。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述酪蛋白对应的渗透压调节剂为氯化钠。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述酪蛋白对应的螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

优选的，上述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，所述喜树碱对应的溶剂为二甲基亚砜。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，抗肿瘤是指抗乳腺癌；所述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物是酪蛋白；或者所述抗肿瘤药物是酪蛋白与喜树碱按照1:10~15质量比混合后的组合物。本发明发现酪蛋白能抑制CCNB2表达，并能提高喜树碱的杀死人乳腺癌细胞系的效果，具有很好的抗乳腺癌作用。

另外，本发明提供的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物选择性杀死人乳腺癌细胞系，而对人正常乳腺细胞几乎无杀伤作用，安全性高。

附图说明

图1为TCGA-BRCA队列数据评估CCNB2的表达水平的结果。

图2为本发明GSE42568数据集评估CCNB2的表达水平的结果。

图3为本发明TCGA-BRCA队列数据中CCNB2表达水平与TIICs相关性的棒棒糖图。

图4为本发明的研究路线。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步说明。

在本发明的描述中，如未特殊说明，所用试剂均为市售，所用方法均为本领域常规技术。

在本发明的描述中，酪蛋白购买自阿拉丁，是α-S2酪蛋白，来源于牛奶，货号rp222691-1g，生物活性≥70%。喜树碱购买自精粹宝生物，CAS号7689-03-4，质量浓度＞98%。

喜树碱的化学结构式如下：

。

本发明的术语简称或中英文对照说明如下：

细胞周期蛋白B1简称CCNB1。

细胞周期蛋白E1简称CCNE1。

细胞周期蛋白B2简称CCNB2。

细胞周期蛋白G2简称CCNG2。

人表皮生长因子受体-2简称HER2。

程序性死亡蛋白-1简称PD-1。

程序性死亡配体1简称PD-L1。

肿瘤浸润免疫细胞简称TIICs。

The Cancer Genome Atlas项目中的针对乳腺癌的队列数据简称TCGA-BRCA队列数据。

GSE42568：Breast Cancer Cell Line Gene Expression Data‌简称GSE42568数据集。

Gene Expression Omnibus，是由美国国立生物技术信息中心创建并维护的公共基因表达数据库，自2000年起收录全球研究机构提交的高通量基因组数据，简称GEO数据库。

Activated CD4 T cell中文名活化的CD4⁺T细胞。

Type 2 T helper cell中文名2型辅助性T细胞

Gamma delta T cell中文名γδT细胞。

Effector memeory CD4 T cell中文名效应记忆CD4⁺T细胞。

Memory B cell中文名记忆B细胞。

Regulatory T cell中文名调节性T细胞。

MDSc中文名髓源性抑制细胞。

Activated CD8 T cell中文名活化的CD8⁺T细胞。

Natural killer T cell中文名自然杀伤T细胞。

Activated dendritic cell中文名活化的树突状细胞。

Immature B cell中文名未成熟B细胞。

Activated B cell中文名活化的B细胞。

T follicular helper cell中文名滤泡辅助性T细胞。

Type 1 T helper cell中文名1型辅助性T细胞。

Monocyte中文名单核细胞。

Effector memeory CD8 T cell中文名效应记忆CD8⁺T细胞。

Macrophage中文名巨噬细胞。

Type 17 T helper cell中文名17型辅助性T细胞。

Immature dendritic cell中文名未成熟树突状细胞。

Central memory CD4 T cell中文名中央记忆CD4⁺T细胞。

Neutrophil中文名中性粒细胞。

CD56dim natural killer cell中文名CD56dim自然杀伤细胞。

CD56bright natural killer cell中文名CD56bright自然杀伤细胞。

Central memory CD8 T cell中文名中央记忆CD8⁺T细胞。

Natural killer cell中文名自然杀伤细胞。

Mast cell中文名肥大细胞。

Eosinophil中文名嗜酸性粒细胞。

Plasmacytoid dendritic cell中文名浆细胞样树突状细胞。

为了充分说明本发明的发明构思，本发明首先引用了我们的在先研究结果，用于证明CCNB2高表达与乳腺癌的不良预后相关，也用于证明CCNB2在治疗乳腺癌中起关键作用。基于在先研究结果，本发明提出调控CCNB2表达的物质，并进行抑制乳腺癌细胞的验证性实验。

机理实验一、CCNB2表达与乳腺癌预后的关联

使用TCGA-BRCA队列数据评估乳腺癌组织中CCNB2的表达水平。从GEO数据库获取GSE42568数据集的基因表达和生存数据，以验证TCGA-BRCA队列数据的结果。结果参见图1和图2，结果显示，乳腺癌组肿瘤组织中CCNB2表达水平与健康组乳腺癌组织中CCNB2表达水平存在显著差异。

机理实验二、CCNB2表达与TIICs的关系

图3是TCGA-BRCA队列数据中CCNB2表达水平与TIICs相关性的棒棒糖图。其中，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，ns表示无显著性差异。结果显示，CCNB2与多种细胞存在相关性关系。另外，在我们之前的研究中，还利用GSE42568数据集绘制了CCNB2表达水平与TIICs相关性的棒棒糖图，结果也显示CCNB2与多种细胞存在相关性关系。由于是在先的研究结果，此处不再赘述。

本发明的研究路线参见图4。本发明提供一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物是指抗乳腺癌；所述抗肿瘤药物是酪蛋白；或者所述抗肿瘤药物是酪蛋白与喜树碱按照1:10~15质量比混合后的组合物。本发明发现酪蛋白能抑制CCNB2表达，并能提高喜树碱的杀死人乳腺癌细胞系的效果。基于此发现，本发明提供了以下的实施例。

实施例1

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白制作的。该能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的制备方法如下：

将酪蛋白与去离子水混合，均质，形成质量浓度为0.3%的酪蛋白液体，注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例2

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:10质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

将酪蛋白与去离子水混合，均质，形成质量浓度为0.3%的酪蛋白液体。

将喜树碱与二甲基亚砜混合，均质，形成质量浓度为0.05%的喜树碱液体。

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:10，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例3

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:11质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:11，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例4

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:12质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:12，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例5

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:13质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:13，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例6

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:14质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:14，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例7

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白与喜树碱按照1:15质量比混合后的组合物。

制备方法如下：

使用时，以酪蛋白与喜树碱的质量计，按照酪蛋白与喜树碱的质量比1:15，取酪蛋白液体以及喜树碱液体，混合均匀后得到能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例8

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白添加辅料后制作的，辅料是渗透压调节剂为氯化钠。

该能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的制备方法如下：

将酪蛋白与去离子水混合，均质，形成质量浓度为0.3%的酪蛋白液体，再加入氯化钠，使酪蛋白液体氯化钠的质量浓度为0.01%。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

实施例9

一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，是酪蛋白添加辅料后制作的，辅料是螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

该能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的制备方法如下：

将酪蛋白与去离子水混合，均质，形成质量浓度为0.3%的酪蛋白液体，再加入乙二胺四乙酸二钠，使酪蛋白液体乙二胺四乙酸二钠的质量浓度为0.01%。注意，如果混合后有沉淀的话，使用前混匀形成悬液。

需要说明的是，上述实施例仅是示例性的给出了酪蛋白液体的浓度，实际应用过程中，以酪蛋白的质量计用药量，去离子水仅作为溶剂使用，在其他的实施例中，酪蛋白液体的质量浓度可以是0.3%~0.5%中的任一数值，更具体的如0.3%、0.4%、0.5%。

需要说明的是，上述实施例仅是示例性的给出了喜树碱液体的浓度，实际应用过程中，以喜树碱的质量计用药量，二甲基亚砜仅作为溶剂使用，在其他的实施例中，喜树碱液体的质量浓度可以是0.05%~0.15%中的任一数值，更具体的如0.05%、0.10%、0.15%。

需要说明的是，上述实施例仅是示例性的给出了酪蛋白液体中氯化钠的浓度，实际应用过程中，酪蛋白液体中氯化钠的质量浓度可以是0.01%~0.05%中的任一数值，更具体的如0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%。

需要说明的是，上述实施例仅是示例性的给出了酪蛋白液体中乙二胺四乙酸二钠的浓度，实际应用过程中，酪蛋白液体中乙二胺四乙酸二钠的质量浓度可以是0.01%~0.1%中的任一数值。更具体的如0.01%、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.1%。

为了证明本发明抗肿瘤药物的效果，进行的抗肿瘤实验如下。

（1）细胞培养：

人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、人乳腺癌细胞系MCF-7和人正常乳腺细胞Hs578Bst，均购自美国典型培养物保藏中心ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯。人乳腺癌细胞系MDA-MB-231接种至添加胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，且DMEM培养基中按照10%的体积比例添加胎牛血清。人乳腺癌细胞系MCF-7接种至含胎牛血清和胰岛素的MEM培养基中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，且MEM培养基中按照体积比10%添加胎牛血清，按照10μg/ml的浓度添加胰岛素。其中，DMEM培养基和MEM培养基均购买自美国犹他州洛根HyClone。

（2）试验药物准备：

喜树碱。

酪蛋白。

各实施例制备的抗肿瘤药物。

（3）药物处理：

于96孔板中接种培养好的细胞，每孔10⁶个，加入50μL的试验药物，然后继续置于37℃、5% CO₂培养箱中48h。台盼蓝拒染法统计活细胞数量，计算不同处理的细胞存活率。

细胞存活率=（处理组活细胞数/对照组活细胞数）×100%。

另外，RT-qPCR定量检测CCNB2的表达，并采用2^-ΔΔCt法确定CCNB2的相对表达量，以GAPDH为内参基因。具体测试方法参照“Lu Z，Wang Z，Li G. High expression of CCNB2is an independent predictive poor prognostic biomarker and correlates withimmune infiltrates in breast carcinoma[J].Heliyon，2024，10(10)：1-19”。

试验药物及相应的实验组名称设计如下：

喜树碱对照组：质量浓度为0.05%的喜树碱液体。

空白对照组：去离子水。

阴性对照组：二甲基亚砜。

实验1组：实施例1制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验2组：实施例2制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验3组：实施例3制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验4组：实施例4制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验5组：实施例5制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验6组：实施例6制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验7组：实施例7制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验8组：实施例8制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

实验9组：实施例9制备的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

每个实验组做3个平行试验，取平均值。

人正常乳腺细胞Hs 578Bst细胞存活率以及CCNB2的相对表达量参见表1。从表1可以看出，喜树碱对照组对于人正常乳腺细胞Hs 578Bst细胞的杀伤率是最高的，而喜树碱与酪蛋白复配的实验组的抗肿瘤药物对人正常乳腺细胞Hs 578Bst细胞几乎无伤，说明酪蛋白可以减轻喜树碱对于人正常乳腺细胞Hs 578Bst细胞的损伤。另外，各组CCNB2的相对表达量差异不显著。

表1 人正常乳腺细胞Hs 578Bst细胞存活率以及CCNB2的相对表达量

人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞存活率以及CCNB2的相对表达量参见表2。表2的结果显示实验2组~实验7组对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤作用显著大于其他组。活性成分仅采用酪蛋白的实验1组、实验8组和实验9组也表现出抑制人乳腺癌细胞系的作用。同时，实验1组~实验9组的CCNB2的相对表达量均较空白对照组显著下降。

表2 人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞存活率以及CCNB2的相对表达量

人乳腺癌细胞系MCF-7细胞存活率以及CCNB2的相对表达量参见表3。表3的结果与表2的结果具有一定的相似性规律。实验2组~实验7组对人乳腺癌细胞系MCF-7的杀伤作用显著大于其他组。活性成分仅采用酪蛋白的实验1组、实验8组和实验9组也表现出抑制人乳腺癌细胞系的作用。同时，实验1组~实验9组的CCNB2的相对表达量均较空白对照组、阴性对照组显著下降。

表3 人乳腺癌细胞系MCF-7细胞存活率以及CCNB2的相对表达量

综合比较表1~表3的结果，可以看出，本发明提供的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物选择性杀死人乳腺癌细胞系，而对人正常乳腺细胞几乎无杀伤作用，安全性高。

需要说明的是，本发明中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了本发明的创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，这些变更和修改均落入本发明的范围。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形在内。

Claims

1.一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，其特征在于，所述肿瘤是指乳腺癌；

所述能抑制CCNB2表达抗肿瘤药物是酪蛋白与喜树碱按照1:10~15质量比混合后的组合物；

所述酪蛋白是α-S2酪蛋白。

2.根据权利要求1所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物，其特征在于，酪蛋白与喜树碱的质量比为1:12。

3.一种能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述应用是指将权利要求1所述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物用于制备杀死人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和人乳腺癌细胞系MCF-7的制剂。

4.根据权利要求3所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述制剂的唯一活性成分为所述能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物。

5.根据权利要求4所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述制剂还包括药剂学上可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述辅料包括溶剂、螯合剂和渗透压调节剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述酪蛋白对应的溶剂为去离子水。

8.根据权利要求6所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述酪蛋白对应的渗透压调节剂为氯化钠。

9.根据权利要求6所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述酪蛋白对应的螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

10.根据权利要求6所述的能抑制CCNB2表达的抗肿瘤药物的应用，其特征在于，所述喜树碱对应的溶剂为二甲基亚砜。