CN120718810A - 一株贝莱斯芽孢杆菌yndh2404及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于微生物和植物病害防治技术领域，公开了一株贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404 （Bacillus velezensis），保藏编号为CCTCC NO：M 20242825；还公开了贝莱斯芽孢杆菌或其发酵液的应用。实验证明：本发明分离鉴定出的贝莱斯芽孢杆菌的菌体及发酵产物对短毛拟漆斑菌引起的咖啡漆斑病或魔芋漆斑病、炭疽病菌引起的咖啡炭疽病、腐皮镰孢菌引起的咖啡茎腐病有显著的抑制作用。采用本发明生防菌制备的菌剂，在使用过程中不会对生态环境造成污染，无公害，可以减少其他化学农药的用量，降低咖啡和魔芋病害的防控成本，为打造咖啡、魔芋“绿色食品牌”提供保障，具有良好的推广价值。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404及其应用

技术领域

本发明属于微生物和植物病害防治技术领域，公开了一株贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404及其应用。

背景技术

贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）是芽孢杆菌属的一个新种，其代谢产物具有广谱抗菌活性，在饲料、植物保护、医学、食品业、林业、污水处理中占有重要地位，其可以抑制包括细菌、真菌、病毒、线虫等的生长，还可增加作物产量，成为近年来的研究热点。研究表明贝莱斯芽孢杆菌对多种植物真菌病害有效并促进植物生长，包括番茄、辣椒、油菜、烟草、花生、葡萄等。现有研究表明贝莱斯芽孢杆菌可抑制辣椒疫病、花生果腐病、叶菜灰霉病和菌核病、红叶芥和昌芥的白粉病、人参立枯病、猝倒病、桃树褐腐病、番茄黄萎病、杨树根腐病、枇杷炭疽病、绿豆叶斑病、咖啡炭疽病菌、咖啡拟茎点霉叶斑病菌、咖啡褐斑病病菌等植物病害。

咖啡（Coffea L.）是重要的热带作物之一，为茜草科咖啡属植物，约有124个种，真正具有商品价值的咖啡只有三个种：小粒种咖啡（Coffea arabica）、中粒种咖啡（C. canephora）和大粒种咖啡（C. liberica）。2024年，全国咖啡种植面积8.13万hm²，总产量15.23万吨，居全球咖啡生产国第13位，咖啡农业总产值60.95亿元；其中云南种植总面积7.95万hm²，占全国的97.79%，居全国第1位，咖啡农业总产值60.10亿元，是云南省热区的支柱产业，主要种植小粒种咖啡。魔芋是天南星科魔芋属，魔芋球茎富含一种高分子多糖——葡甘聚糖，具有减肥、降脂、降糖、降低胰岛素抵抗、增强免疫力等功能，在医药、食品、化妆品等领域具较高的开发利用价值，特别是“低碳、绿色”的理念，使其成为可持续发展的植物资源。云南省德宏州属于南亚热带季风气候，年降雨量充沛，适宜魔芋种植生长，2022年该地区珠芽魔芋种植面积达666.7公顷，是边疆地区乡村振兴的支柱性产业之一。全球气候变化引起的生物和非生物胁迫以及作物品种单一大面积种植，致使作物的抗逆性降低，这些不利的环境因子都加剧了农作物病害的发生流行，叶面真菌病原菌严重影响经济作物的产量和健康。近年来，咖啡病害种类呈现上升的趋势，一些次要病害上升为主要病害，如咖啡漆斑病成为苗圃主要病害。

拟漆斑菌属是Lombard等人于2016年建立的新属，拟漆斑菌属在形态上以分生孢子座周围具有1-3隔的薄壁刚毛与漆斑菌属（Myrothecium）及其它类漆斑菌属（Myrothecium-like）相区别。拟漆斑菌属常引起各种蔬菜、观赏植物和经济作物上的叶斑病、枯萎病、茎溃疡和果实腐烂等。近年来，短毛拟漆斑菌Paramyrothecium breviseta引起的漆斑病在咖啡、魔芋种植区陆续报道。在云南咖啡各个产区苗圃均有发生，发病率高达40%。该病害症状为：发病初期叶片表面出现水渍状斑点，高温高湿时，病斑扩展很快，3-5 d后出现中央灰白色至褐色，边缘暗褐色近圆形病斑，有深浅交替的同心轮纹典型病斑，正面、背面相似，无明显差别，病斑部位下陷、容易破裂，发病叶片病健交界处有明显的黄色晕圈，病斑部位产孢后在轮纹处有附着白色菌丝的小颗粒，为分生孢子座。感病后期病斑蔓延至整个叶片乃至茎干，造成叶片掉落，严重时咖啡整株死亡，该菌不仅能侵染咖啡叶片、嫩茎，还能侵染咖啡鲜果。该病害还可危害魔芋的叶片和叶柄。据统计，2022年4月在瑞丽市珠芽金魔芋大棚幼苗发病率为5-8%，移栽大田之后的发病率为10%。因此，对咖啡、魔芋漆斑病的防治的研究具有重要的经济价值和社会效益。

现有研究中施春兰等研究结果表明贝莱斯芽孢杆菌MC2-1对咖啡炭疽病菌（Xbd1）的抑制率为55.8%，梁艳琼等研究结果表明贝莱斯芽胞杆菌BS2C对咖啡炭疽病菌（CCG3）的抑菌率为65.08%、咖啡褐斑病菌（BEC48）的抑菌率为78.3％、咖啡拟茎点霉叶斑病菌(FS4-1)的抑菌率为55.60％，其对离体叶片的预防效果为“BS2C+CCG3”的病斑抑制率为70.40%，“BS2C+FS4-1”的病斑抑制率为66.86%，“BS2C+BEC48”的病斑抑制率为67.39%，治疗效果为“CCG3+BS2C”的病斑抑制率为55.68%，“FS4-1+BS2C”的病斑抑制率为53.03%，“BEC48+BS2C”的病斑抑制率为56.52%。经检索，有关贝莱斯芽孢杆菌对咖啡漆斑病、魔芋漆斑病的防治未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用。

本发明的技术方案如下：

一株贝莱斯芽胞杆菌YNDH2404（Bacillus velezensis），所述的菌株YNDH2404于2024年12月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20242825。

本发明还保护贝莱斯芽孢杆菌或其发酵液在制备以下任一产品中的应用：

1）抑制短毛拟漆斑菌及其分生孢子萌发；

2）防治短毛拟漆斑菌引起的病害；

3）抑制炭疽病原菌及其分生孢子萌发；

4）防治炭疽病原菌引起的病害；

5）抑制腐皮镰孢菌及其分生孢子萌发；

6）防治腐皮镰孢菌引起的病害。

进一步地，所述的短毛拟漆斑菌引起的病害为咖啡漆斑病或魔芋漆斑病、可可炭疽菌或果生炭疽菌引起的病害为咖啡炭疽病、腐皮镰孢菌引起的病害为咖啡茎腐病。

进一步地，所述的贝莱斯芽孢杆菌发酵液是将保存的贝莱斯芽孢杆菌菌株YNDH2404在固体NA培养基平板上划线培养，置于30℃恒温培养箱活化培养1d后，将活化的生防菌菌饼接种到液体NA培养液中，30℃、180 r/min摇床振荡培养3d，用4层无菌纱布过滤培养液，得到菌株发酵液。

本发明还保护一种生防菌，其活性成分权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404或贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404的发酵液。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

采用本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌YNDH2404能够防治短毛拟漆斑菌引起的各种病害，如咖啡漆斑病、魔芋漆斑病，可以减少对农药的依赖，提高农作物的产量和品质，同时降低对环境的负面影响，在农业和环境领域中具有广泛的应用潜力。实验证明，本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌YNDH2404对咖啡漆斑病、魔芋漆斑病的治疗效果分别达95.12%、82.22%，预防效果分别达到96.96%、87.85%。

附图说明

图1为菌株YNDH2404在NA培养基上培养菌落形态图；

图2为菌株YNDH2404扫描电镜图；

图3为基于16s rRNA基因序列构建的菌株YNDH2404系统发育树；

图4为菌株YNDH2404对咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5的抑制效果比较图，其中图4A为YNDH2404对咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5的抑制效果图，图4B为对照组；

图5为菌株YNDH2404对魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1的抑制效果比较图，其中图5A为YNDH2404对魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1的抑制效果图，图5B为对照组；

图6为菌株YNDH2404对咖啡可可炭疽菌菌株YB-6的抑制效果比较图，其中图6A为YNDH2404对咖啡可可炭疽菌菌株YB-6的抑制效果图，图6B为对照组；

图7为菌株YNDH2404对咖啡果生炭疽菌菌株YD-4的抑制效果比较图，其中图7A为YNDH2404对咖啡果生炭疽菌菌株YD-4的抑制效果图，图7B为对照组；

图8菌株YNDH2404对咖啡腐皮镰孢菌菌株YM-4的抑制效果比较图，其中图8A为YNDH2404对咖啡腐皮镰孢菌菌株YM-4的抑制效果图，图8B为对照组；

图9为菌株YNDH2404对咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5分生孢子萌发（分生孢子NA液体悬浮液、分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、分生孢子纯净水悬浮液0h，3h，6h，12h，24h时）抑制效果比较图；

图10为菌株YNDH2404对魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1分生孢子萌发（分生孢子NA液体悬浮液、分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、分生孢子纯净水悬浮液0h，3h，6h，12h，24h时）抑制效果比较图；

图11为菌株YNDH2404对咖啡可可炭疽菌菌株YB-6分生孢子萌发（分生孢子NA液体悬浮液、分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、分生孢子纯净水悬浮液0h，3h，6h，12h，24h后）抑制效果比较图；

图12为菌株YNDH2404对咖啡果生炭疽菌菌株YD-4分生孢子萌发（分生孢子NA液体悬浮液、分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、分生孢子纯净水悬浮液0h，3h，6h，12h，24h时）抑制效果比较图；

图13为菌株YNDH2404对咖啡腐皮镰孢菌菌株YM-4分生孢子萌发（分生孢子NA液体悬浮液、分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、分生孢子纯净水悬浮液0h，3h，6h，12h，24h时）抑制效果比较图；

图14为菌株YNDH2404对咖啡的盆栽防治效果比较图，其中图14A为接种菌株MB-5结果图，图14B为接种（MB-5+YNDH2404）的结果图，图14C为接种（YNDH2404+MB-5）的结果图，图14D为接种菌株MB-5感染的部分叶片展开图，图14E为接种（MB-5+YNDH2404）的感染叶片展开图，图14F为接种（YNDH2404+MB-5）的感染叶片展开图；

图15为菌株YNDH2404对魔芋的盆栽防治效果比较图，其中图15 A为接种菌株M1对魔芋的结果图，图15B为接种（M1+YNDH2404）结果图，图15C为接种（YNDH2404+M1）的结果图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明，但本发明并不局限于以下技术方案。

咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5、魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1、咖啡可可炭疽菌菌株YB-6、咖啡果生炭疽菌菌株YD-4、咖啡腐皮镰孢菌菌株YM-4保存在云南省德宏热带农业科学研究所，地址：云南省德宏州瑞丽市瑞京路29号，联系电话：15096646750， 联系人：王春梅。

实施例一 菌株的获取与鉴定

1.健康土壤分离候选菌株

（1）菌种的分离纯化

菌株YNDH2404来源于土壤样品，采自云南省德宏热带农业科学研究所橡胶咖啡间作试验基地健康咖啡植株根际土壤。具体采样方法为：采用五点取样法块，用土壤采集器采集0-20cm土壤，每个处理重复3次。收集附着在咖啡根系的土壤，去除杂质（根须、石子等），将采集的土壤样品混匀后用灭菌无菌自封袋密封，置于便携式冰箱中带回实验室，在-20℃保存备用。

菌株的分离：称取10g土壤样品，加入装有90mL无菌水的三角瓶中，30℃摇床振荡混匀，制成土壤悬浮液，采用稀释法，按照10倍梯度依次稀释至稀释倍数10^-7。用移液枪分别从稀释倍数10^-4、 10^-5、10 ^-6、10^-7的土壤悬浮液中吸取100μL，并分别涂布于NA平板上，30℃倒置培养24h。挑取不同形态的单菌落，纯化后，置于50重量％无菌甘油（甘油和NA液体1：1混合）中于-80℃保存备用。

采用上述方法分离获得的菌株YNDH2404，在NA固体培养基上培养，形成圆形乳白色不透明的菌落，中间凸起、边缘波浪状、表面粗糙、干燥，如图1所示菌株YNDH2404的菌落形态。革兰氏染色，菌株YNDH2404为阳性，扫描电子显微镜(蔡司sigma300，德国)下光学显微镜下观察该菌呈杆状，两端钝圆，如图2所示菌株YNDH2404的扫描电镜图。

（2）菌种的鉴定

将菌株YNDH2404接种于NA液体培养液，30℃、180 r/min振荡培养16-20h，取1mL细菌悬浮液12000r/min离心1min，收集菌体，使用细菌基因组DNA提取试剂盒(BioTeke)对菌株YNDH2404的DNA进行提取并进行PCR扩增，PCR扩增产物委托北京擎科生物科技股份有限公司昆明分公司进行一代测序，其DNA序列如SEQ ID NO：1所示。

利用软件ContingExpress处理和拼接基因序列后，在NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）网站上利用Blastn进行序列的同源性比对；使用软件MEGA11.0构建邻接法（Neighbor-Joining，NJ）系统发育树，进行1000次自展（bootstrap）循环抽样检测，确定所分离获得的菌株YNDH2404的分类地位。

结果表明，菌株YNDH2404与菌株Bacillus velezensis的序列相似性为100%。下载相关菌株序列，构建基于16s rRNA基因序列构建的系统发育树(详见图3)，结果显示，该菌株与贝莱斯芽胞杆菌（B. velezensis）亲缘关系最近，聚类在同一支。

根据菌株YNDH2404的培养特征、形态特征以及16S rDNA 序列聚类分析结果，确定该菌株为贝莱斯芽胞杆菌（B.velezensis）。该菌株2024年12月16日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内），保藏编号为CCTCC NO：M 20242825。

实施例二 贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌、炭疽菌、腐皮镰孢菌的抑制作用

1、咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5（P. breviseta）、魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1（P. breviseta）；咖啡炭疽病菌菌株YB-6（Colletotrichum theobromicola）和YD-4（C. fructicola）、咖啡腐皮镰孢菌菌株YM-4（Fusarium solani）的制备：挑取保存有菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4、YM-4的滤纸片于PDA（去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，水1000mL）培养基上，置于25℃培养箱中培养，至菌丝长满培养皿，待用。

2、菌株YNDH2404的制备：将保存的贝莱斯芽孢杆菌（B.velezensis）菌株YNDH2404于NA（牛肉浸膏3g，蛋白胨10g，琼脂15g，氯化钠5g，水1000mL，pH值7.0±0.1）固体培养基上划线培养，置于30℃培养箱中活化培养，菌落长满划线处，待用。

3、采用平板对峙法进行抑菌效果的测定。具体的方法为：用直径为5mm的灭菌打孔器打取PDA平板上培养的菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4、YM-4菌落边缘，将菌饼接种到PDA培养基平板中间，把NA平板上培养的菌株YNDH2404点接接种于距离平板（9cm）边缘距中心2cm处，每皿接种4个点。将接种了菌株YNDH2404的平板放置于培养箱（25℃）中培养7d观察菌株YB-6、YD-4、YM-4菌落形态，14d观察菌株MB-5、M1菌落形态，并用十字交叉法测量菌落直径。对照组为只接种菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4、YM-4菌饼的PDA平板。培养设置5个重复。抑制率的计算公式为：抑制率（%）=（对照病原菌菌落直径-处理病原菌菌落直径）/对照病原菌菌落直径×100%。

实验结果如表1所示：处理组菌株MB-5的菌落直径平均为1.5cm，对照组菌株MB-5的菌落直径平均为7.7cm。经计算，平均抑制率为80.52%；处理组菌株M1的菌落直径平均为1.7cm，对照组菌株M1的菌落直径为平均7.5cm，经计算，平均抑制率为77.33%；处理组菌株YB-6的菌落直径平均为2.3cm，对照组菌株YB-6的菌落直径平均为8.5cm，经计算，平均抑制率为72.94%；处理组菌株YD-4的菌落直径平均为2.3cm，对照组菌株YD-4的菌落直径为8.3cm，经计算，平均抑制率为72.29%；处理组菌株YM-4的菌落直径为3.0cm，对照组菌株YM-4的菌落直径为6.1cm，经计算，平均抑制率为50.82%。从图4-8可以看出，处理组中菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4、YM-4的生长受到明显抑制，其菌落大小显著小于对照组，菌株MB-5、M1产生的分生孢子座显著少于对照组，说明菌株YNDH2404对短毛拟漆斑菌、炭疽菌、腐皮镰孢菌具有较强的抑制效果，对咖啡短毛拟漆斑病和魔芋漆斑病，咖啡可可炭疽病、咖啡果生炭疽病具有较好的防治作用。经比较发现，本发明贝莱斯芽胞杆菌YNDH2404对咖啡炭疽菌YB-6、YD-4的抑制率分别为72.94%、72.53%，抑制率均高于贝莱斯芽孢杆菌MC2-1(55.8%)、BS2C(65.08%)对咖啡炭疽病菌的抑制率。

表1 菌株YNDH2404对咖啡病原菌（MB-5、YB-6、YD-4、YM-4）和魔芋病原菌M1的抑制作用

实施例三 贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌、炭疽菌、腐皮镰孢菌分生孢子萌发的影响

1、生防菌菌液的制备，将实施例二制备的菌株YNDH2404接种到液体NA培养液中，30℃、180 r/min摇床振荡培养3d，用4层无菌纱布过滤培养液，得到菌株发酵液，此时OD₆₀₀的值为13。

2、实验设两组处理，一组对照。处理一为NA（牛肉浸膏3g，蛋白胨10g，琼脂15g，氯化钠5g，水1000 mL，pH值7.0±0.1）液体，处理二为菌株YNDH2404发酵液，对照为灭菌纯净水。将PDA培养基上培养的菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4、YM-4，分别加NA液体、YNDH2404发酵液、灭菌纯净水把分生孢子洗下来，用4层无菌纱布过滤得到病原菌分生孢子NA液体悬浮液、病原菌分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液、病原菌分生孢子纯净水悬浮液，浓度均调节为1×10⁵个/mL。将分生孢子悬浮液滴到疏水玻片上，3、6、12、24h时，查看分生孢子萌发率。每个分生孢子悬浮液做三次生物学重复，三次技术重复。实验结果用SPSS26.0（statisticalProduct and Service Solutions）软件进行统计分析。

实验结果：菌株MB-5、M1、YB-6、YD-4的分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液直至24h时均未萌发；3、6、12、24h时，菌株MB-5的分生孢子纯净水悬浮液萌发率分别为0%、5%、10%、14%，分生孢子NA液体悬浮液萌发率分别为0%、4%、89%、100%；菌株M1的分生孢子纯净水悬浮液萌发率分别为0%、5%、8%、16%，分生孢子NA液体悬浮液萌发率分别为0%、5%、88%、100%，见（表2、图9-10）；菌株YB-6的分生孢子纯净水悬浮液萌发率分别为0%、1%、14%、46%，分生孢子NA液体悬浮液萌发率分别为0%、98%、100%、100%；菌株YD-4的分生孢子纯净水悬浮液萌发率分别为0%、11%、81%、95%，分生孢子NA液体悬浮液萌发率分别为0%、88%、100%、100%，见（表3、图11-12）；菌株YM-4的分生孢子纯净水悬浮液萌发率分别为14%、59%、86%、100%，分生孢子NA液体悬浮液萌发率分别为38%、84%、100%、100%，分生孢子YNDH2404发酵液悬浮液萌发率分别为0%、0%、4%、39%，见（表4、图13）。表明菌株YNDH2404发酵液对短毛拟漆斑菌菌株MB-5、M1，炭疽菌菌株YB-6、YD-4具有较强的抑制作用，对腐皮镰孢菌菌株YM-4具有抑制作用。同时还表明，NA液体促进病原菌的分生孢子萌发。

表2 不同悬浮液体处理对短毛拟漆斑菌菌株MB-5、M1分生孢子萌发的影响

注：表中同列不同小写字母表示差异显著（p<0.05），下同。

发明人还设置YNDH2404的发酵液OD₆₀₀值为9、7.5、4.5，观察YNDH2404发酵液对咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5分生孢子萌发的影响，结果显示均未萌发。

表3 不同悬浮液体处理对炭疽菌菌株YB-6、YD-4分生孢子萌发的影响

表4 不同悬浮液体处理对腐皮镰孢菌菌株YM-4分生孢子萌发的影响

实施例四 贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌引起的咖啡漆斑病、魔芋漆斑病（盆栽）的防治效果

1. 生防菌菌液的制备，同实施例3.1。

2. 咖啡短毛拟漆斑菌菌株MB-5、魔芋短毛拟漆斑菌菌株M1分生孢子悬浮液的制备：将PDA培养基上培养的菌株MB-5、M1，加NA液体把分生孢子洗下来（生防菌液是用NA液体培养的），用4层无菌纱布过滤得到病原菌分生孢子悬浮液，调节浓度为1×10⁶个/mL备用。

3. 咖啡漆斑病、魔芋漆斑病盆栽防效测定方法。实验设3个处理，①菌株MB-5、M1分生孢子悬浮液分别喷雾接种于咖啡、魔芋叶片，作为对照；②咖啡、魔芋叶片分别喷雾接种菌株MB-5、M1分生孢子悬浮液，24 h后喷雾接种生防菌菌株YNDH2404菌液（标记为MB-5+YNDH2404/ M1+YNDH2404）；③生防菌菌株YNDH2404的发酵液喷雾接种咖啡、魔芋叶片，24h后分别喷雾接种菌株MB-5、M1分生孢子悬浮液（标记为YNDH2404+MB-5/ YNDH2404+M1）；（②治疗试验：接菌后处理；③预防试验：接菌前处理）。每一组5株苗（咖啡品种：德热716，苗龄3个月；魔芋品种：珠芽金魔芋，苗龄1月龄，长势基本一致的苗）， 喷雾使叶片正反面覆盖均匀的雾滴即可，每个处理3个重复。 ①②③接种10 d后调查病害情况，咖啡、魔芋漆斑病病情分级标准见表5，按式（1）统计病情指数，按式（2）统计防治效果。

表5 咖啡、魔芋漆斑病病情分级标准

..................式（1）

..............式（2）

实验结果：接种10天后调查病害发病情况，处理①接种菌株MB-5分生孢子悬浮液，咖啡叶片病情指数85.31；接种菌株M1分生孢子悬浮液，魔芋叶片病情指数100；处理②接种（MB-5+YNDH2404），咖啡叶片病情指数4.16，防治效果95.12%；接种（M1+ YNDH2404），魔芋叶片病情指数17.78，防治效果82.22%；处理③接种（YNDH2404+MB-5），咖啡叶片病情指数2.59，预防效果96.96%；接种（YNDH2404+M1），魔芋叶片病情指数12.15，预防效果87.85%。表明贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌引起的咖啡漆斑病、魔芋漆斑病有较好的防治效果。

表6 贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌引起的咖啡、魔芋漆斑病的防治效果

综上所述，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404对短毛拟漆斑菌引起的咖啡漆斑病、魔芋漆斑病均有很好的防治效果。

Claims (5)

1.一株贝莱斯芽胞杆菌YNDH2404（Bacillus velezensis），其特征在于：所述的菌株YNDH2404于2024年12月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20242825。

2.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或其发酵液在制备以下任一产品中的应用：

1）抑制短毛拟漆斑菌及其分生孢子萌发；

2）防治短毛拟漆斑菌引起的病害；

3）抑制炭疽病原菌及其分生孢子萌发；

4）防治炭疽病原菌引起的病害；

5）抑制腐皮镰孢菌及其分生孢子萌发；

6）防治腐皮镰孢菌引起的病害。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的短毛拟漆斑菌引起的病害为咖啡漆斑病或魔芋漆斑病、可可炭疽菌或果生炭疽菌引起的病害为咖啡炭疽病、腐皮镰孢菌引起的病害为咖啡茎腐病。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述的贝莱斯芽孢杆菌发酵液是将保存的贝莱斯芽孢杆菌菌株YNDH2404在固体NA培养基平板上划线培养，置于30℃恒温培养箱活化培养1d后，将活化的生防菌菌饼接种到液体NA培养液中，30℃、180 r/min摇床振荡培养3d，用4层无菌纱布过滤培养液，得到菌株发酵液。

5.一种生防菌，其特征在于：其活性成分权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404或贝莱斯芽孢杆菌YNDH2404的发酵液。