CN120603850A

CN120603850A - 抗cmet抗体及使用方法

Info

Publication number: CN120603850A
Application number: CN202480008442.2A
Authority: CN
Inventors: 李仁柯; 唐晓燕; 钱梦然; 潘洁; 赵昭; 吴溪; 姜明; 李慧; 孙晓娜; 张雁洲; 路蒙蒙; 陈运
Original assignee: Guangzhou Baiji Shenzhou Biopharmaceutical Co ltd
Current assignee: Guangzhou Baiji Shenzhou Biopharmaceutical Co ltd
Priority date: 2023-01-19
Filing date: 2024-01-18
Publication date: 2025-09-05
Also published as: EP4652200A2; WO2024153168A2; TW202430570A; WO2024153168A3; AU2024209475A1; CN121293352A; MX2025008423A; IL322127A; AR131637A1; KR20250135302A; US20250154265A1; CL2025002123A1

Abstract

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段和多特异性抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域；特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域；和特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域；其中该第一表位不同于该第二表位，或其中该第一抗原结合结构域不与该第二抗原结合结构域竞争。本公开还提供了抗体或多特异性抗体用于治疗疾病如癌症的用途。

Description

抗CMET抗体及使用方法

技术领域

本文公开了特异性结合人cMET的抗体，特异性结合人cMET的两个不同表位的多特异性抗体，特异性结合人EGFR和人cMET的多特异性抗体或其抗原结合片段，以及分离的核酸、载体和宿主细胞。最后，本文公开的抗体或其抗原结合片段可用于治疗多种癌症。

背景技术

受体酪氨酸激酶间充质-上皮转化因子(c-MET，又称为cMET或MET，肝细胞生长因子受体，或HGFR)及其配体肝细胞生长因子(HGF)在刺激细胞增殖、存活、侵袭、血管生成的多个细胞过程中发挥关键作用。

cMET由通过二硫键连接的细胞外α亚基和跨膜β亚基组成。细胞外区域由脑信号蛋白(SEMA)结构域、丛蛋白-脑信号蛋白-整合素(PSI)结构域和四个连续的免疫球蛋白-丛蛋白-转录因子(IPT1-4)结构域组成。HGF与cMET的结合诱导cMET的二聚化，使其细胞内激酶结构域(KD)发生自磷酸化¹，这进而为介导下游信号传导通路(例如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-AKT通路)激活的蛋白质创建活性对接位点。

HGF-cMET信号传导失调已在多种实体癌类型中观察到，包括胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、乳腺癌、脑癌等。以HGF非依赖性方式的异常cMET激活可由多种机制诱导，包括cMET过表达、基因组扩增、突变和选择性剪接²。鉴于其在细胞过程、肿瘤发生和癌症进展中的重要作用，c-MET被认为是有前途的癌症治疗靶标。

靶向cMET的小分子和抗体都已开发并在临床试验中进行评估。然而，在大多数试验中，cMET抑制剂并没有取得有希望的结果³。

表皮生长因子受体(EGFR)的激酶结构域中的激活突变发生在相当大比例的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中。^4.5它们的存在与对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性有关。尽管TKI在治疗携带EGFR突变的NSCLC方面具有初步疗效，但大多数患者在初次治疗后约一年内不可避免地会出现获得性耐药性。^6.7

获得性耐药性机制通常分为几类：EGFR突变、基因扩增、MAPK-PI3K突变、癌基因融合、细胞周期基因改变等。EGFR激酶抑制剂的发展克服了新出现的EGFR突变机制。然而，克服治疗耐药性仍然是一个重大挑战，因为大部分耐药性是由非EGFR突变改变引起的。其中，肝细胞生长因子受体(cMET)扩增是导致EGFR TKI治疗后耐药性的主要改变之一。例如，5％-50％的患者对二线奥希替尼治疗产生耐药性，一线治疗为7％-15％。⁸

从机制上讲，EGFR和cMET信号都通过ERK和AKT通路，因此当EGFR被抑制时，cMET信号传导激活补偿了EGFR驱动的信号传导的损失。这使得结合EGFR和cMET靶向的策略对于克服cMET扩增驱动的补偿性耐药性特别有吸引力。该策略已应用于JNJ-61186372(埃万妥单抗(Amivantamab)，或缩写为JNJ-372)，一种EGFR x c-MET双特异性抗体。⁹

鉴于上述原因，靶向EGFR和/或cMET的治疗药物仍存在未满足的医学需求。

发明内容

本公开包含特异性结合人cMET的抗体或其抗体片段，以及特异性结合人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗体片段。此外，本文公开的抗体及其抗体片段可用于与其他模式构建多特异性抗体，例如第二肿瘤相关抗原(TAA)、免疫检查点或免疫刺激物，或构建抗体药物缀合物(ADC)或形成融合蛋白。cMET抗体单独或与其他治疗剂组合可潜在地用于治疗或预防癌症。

本公开包含特异性结合人EGFR和人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗体片段。多特异性抗体或其抗体片段单独或与其他治疗剂组合可潜在地用于治疗或预防癌症。

本公开涵盖以下实施方式。

实施方式1：一种特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:94的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(2)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:8的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(3)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:11的HCDR1，(b)SEQ ID NO:12的HCDR2，(c)SEQ ID NO:13的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(4)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(5)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:16的HCDR1，(b)SEQ ID NO:17的HCDR2，(c)SEQ ID NO:18的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(6)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:21的HCDR1，(b)SEQ ID NO:22的HCDR2，(c)SEQ ID NO:23的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(7)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:26的HCDR1，(b)SEQ ID NO:27的HCDR2，(c)SEQ ID NO:28的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(8)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:31的HCDR1，(b)SEQ ID NO:32的HCDR2，(c)SEQ ID NO:33的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(9)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:36的HCDR1，(b)SEQ ID NO:37的HCDR2，(c)SEQ ID NO:38的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(10)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:41的HCDR1，(b)SEQ ID NO:42的HCDR2，(c)SEQ ID NO:43的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(11)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:46的HCDR1，(b)SEQ ID NO:47的HCDR2，(c)SEQ ID NO:48的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(12)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:51的HCDR1，(b)SEQ ID NO:52的HCDR2，(c)SEQ ID NO:53的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(13)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:61的HCDR1，(b)SEQ ID NO:62的HCDR2，(c)SEQ ID NO:63的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(17)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；或

(18)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3。

实施方式2：如实施方式1所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:72至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:73至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:82至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(7)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(8)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(13)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:144至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；或

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:145至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

实施方式3：如以上实施方式中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:144、SEQID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

实施方式4：如以上实施方式中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:72的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:73的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:82的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(7)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:64的轻链可变区(VL)；

(8)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(13)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。

实施方式5：如以上实施方式中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

实施方式6：一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含

特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域，以及

特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域，

其中该第一表位与该第二表位不同，或其中该第一抗原结合结构域与该第二抗原结合结构域不同，或其中该第一抗原结合结构域不与该第二抗原结合结构域竞争。

实施方式7：如实施方式6所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(4)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:16的HCDR1，(b)SEQ ID NO:17的HCDR2，(c)SEQ ID NO:18的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(5)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:21的HCDR1，(b)SEQ ID NO:22的HCDR2，(c)SEQ ID NO:23的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(6)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:26的HCDR1，(b)SEQ ID NO:27的HCDR2，(c)SEQ ID NO:28的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(7)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:31的HCDR1，(b)SEQ ID NO:32的HCDR2，(c)SEQ ID NO:33的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(8)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:36的HCDR1，(b)SEQ ID NO:37的HCDR2，(c)SEQ ID NO:38的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(9)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:41的HCDR1，(b)SEQ ID NO:42的HCDR2，(c)SEQ ID NO:43的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(10)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:46的HCDR1，(b)SEQ ID NO:47的HCDR2，(c)SEQ ID NO:48的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(11)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:51的HCDR1，(b)SEQ ID NO:52的HCDR2，(c)SEQ ID NO:53的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(13)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；或

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3。

实施方式8：如实施方式6-7中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(7)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(8)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；或

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:144至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

实施方式9：如实施方式8所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域中，SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:144或SEQID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

实施方式10：如实施方式6-9中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:64的轻链可变区(VL)；

(7)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(8)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。

实施方式11：如实施方式6-10中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

(1)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；或

(2)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:61的HCDR1，(b)SEQ ID NO:62的HCDR2，(c)SEQ ID NO:63的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3。

实施方式12：如实施方式6-11中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:82至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；或

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:145至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

实施方式13：如实施方式12所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域中，SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQID NO:59、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

实施方式14：如实施方式6-13中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:82的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。

实施方式15：如实施方式6-14中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；并且

其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3。

实施方式16：如实施方式6-15中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:72的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:73的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76的氨基酸序列，以及SEQ ID NO:64的轻链可变区(VL)；

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(7)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(8)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；并且

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。

实施方式17：如实施方式6-14中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:61的HCDR1，(b)SEQ ID NO:62的HCDR2，(c)SEQ ID NO:63的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3。

实施方式18：如实施方式6-14和17中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。

实施方式19：如实施方式6-18中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

实施方式20：如实施方式6-19中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；以及

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

实施方式21：如实施方式6-20中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体是双特异性抗体或三特异性抗体。

实施方式22：如实施方式6-21中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQID NO:96的第二重链恒定区；或

其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ IDNO:96的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第二重链恒定区。

实施方式23：如实施方式6-22中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含特异性结合人肿瘤相关抗原(TAA)的第三抗原结合结构域。

实施方式24：如实施方式23中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该TAA是EGFR。

实施方式25：如实施方式6-24中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含氨基酸接头，其中该氨基酸接头为SEQ IDNO:97至SEQ ID NO:139的任何序列。

实施方式26：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区。

实施方式27：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含IgG1亚类的重链恒定区和κ类型的轻链恒定区。

实施方式28：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。

实施方式29：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或低岩藻糖基化。

实施方式30：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

实施方式31：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。

实施方式32：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有延长半衰期的IgG1 Fc。

实施方式33：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与细胞毒素缀合。

实施方式34：如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段经由细胞毒素接头与细胞毒素缀合。

实施方式35：一种药物组合物，该药物组合物包含如以上实施方式中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载剂。

实施方式36：一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如实施方式1-34中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，或如实施方式35所述的药物组合物。

实施方式37：如实施方式36所述的方法，其中该癌症携带cMET基因改变和/或癌细胞的生长由cMET信号传导驱动。

实施方式38：如实施方式37所述的方法，其中该cMET信号传导是配体非依赖性的。

实施方式39：如实施方式37所述的方法，其中该cMET信号传导是配体依赖性的。

实施方式40：如实施方式37所述的方法，其中该cMET基因改变是cMET过表达、基因组扩增和/或突变，其导致组成型活性cMET信号传导。

实施方式41：如实施方式36-40中任一项所述的方法，其中该癌症是胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、肾癌、乳腺癌或脑癌。

实施方式42：如实施方式41所述的方法，其中该肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)。

实施方式43：如实施方式42所述的方法，其中该非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。

实施方式44：如实施方式41所述的方法，其中该肝癌是肝细胞癌。

实施方式45：如实施方式41所述的方法，其中该头颈癌是头颈部鳞状细胞癌。

实施方式46：如实施方式36-45中任一项所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段与另一种治疗剂组合施用。

实施方式47：如实施方式46所述的方法，其中该治疗剂为免疫检查点抑制剂。

实施方式48：如实施方式46所述的方法，其中该治疗剂为抗PD-1抗体。

实施方式49：如实施方式48所述的方法，其中该抗PD1抗体是替雷利珠单抗(Tislelizumab)。

实施方式50：一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含

特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域；

特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域；以及

特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域；

其中该第一表位不同于该第二表位，或其中该第一抗原结合结构域不与该第二抗原结合结构域竞争。

实施方式51：如实施方式50所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(12)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(13)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(14)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(15)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；或

(16)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3。

实施方式52：如实施方式50-51中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

实施方式53：如实施方式52所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域中，SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQID NO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

实施方式54：如实施方式50-53中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

实施方式55：如实施方式50-54中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

实施方式56：如实施方式50-55中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

实施方式57：如实施方式56所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域中，SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQID NO:59、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

实施方式58：如实施方式50-57中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

实施方式59：如实施方式24和50-58中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:155的HCDR1，(b)SEQ ID NO:156的HCDR2，(c)SEQ ID NO:157的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:158的LCDR1，(e)SEQ ID NO:159的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:160的LCDR3。

实施方式60：如实施方式24和50-59中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列。

实施方式61：如实施方式24和50-60中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:94的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(16)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

实施方式62：如实施方式24和50-61中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

实施方式63：如实施方式24和50-60中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:61的HCDR1，(b)SEQ ID NO:62的HCDR2，(c)SEQ ID NO:63的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

实施方式64：如实施方式24、50-60和63中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

实施方式65：如实施方式24和50-64中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:155的HCDR1，(b)SEQ ID NO:156的HCDR2，(c)SEQ ID NO:157的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:158的LCDR1，(e)SEQ ID NO:159的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:160的LCDR3。

实施方式66：如实施方式24和50-65中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列。

实施方式67：如实施方式50-66中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

实施方式68：如实施方式24和50-66中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；以及

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

实施方式69：如实施方式24和50-68中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含scFv，该scFv包含具有SEQ IDNO:142的氨基酸的VH和具有SEQ ID NO:143的氨基酸的VL；

任选地，该VH和VL经由第一氨基酸接头结合；

任选地，该第一氨基酸接头是SEQ ID NO:97至SEQ ID NO:139的任何序列；

优选地，该第一氨基酸接头是SEQ ID NO:139。

实施方式70：如实施方式24和50-69中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列的scFv。

实施方式71：如实施方式24和50-70中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体是三特异性抗体。

实施方式72：如实施方式50-71中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区。

实施方式73：如实施方式50-72中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1亚类的重链恒定区和κ类型的轻链恒定区。

实施方式74：如实施方式50-73中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。

实施方式75：如实施方式50-74中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或低岩藻糖基化。

实施方式76：如实施方式50-75中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

实施方式77：如实施方式50-76中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。

实施方式78：如实施方式50-77中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有延长半衰期的IgG1 Fc。

实施方式79：如实施方式50-78中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQID NO:96的第二重链恒定区；或

实施方式80：如实施方式50-79中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含第一轻链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含第二轻链恒定区；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是不同的；或

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的。

实施方式81：如实施方式50-80中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含第二氨基酸接头，其中该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:97至SEQ ID NO:139的任何序列，优选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139。

实施方式82：如实施方式50-81中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

(1)特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VH，以及第二重链恒定区在该第一多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

(2)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH和第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列，或

特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH，以及第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

(3)特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VL和第二轻链恒定区在该第三多肽中沿N末端至C末端的方向排列；以及

(4)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VL和第一轻链恒定区在该第四多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

任选地，该第二重链恒定区为SEQ ID NO:95，并且该第一重链恒定区为SEQ IDNO:96；或该第二重链恒定区为SEQ ID NO:96，并且该第一重链恒定区为SEQ ID NO:95；

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一抗原结合结构域的VL和该第二抗原结合结构域的VL是相同的；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

实施方式83：如实施方式50-82中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

(1)特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH，以及第一重链恒定区在该第一多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

(2)特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VH和第二重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列，或

特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VH，以及第二重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

(3)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VL和第一轻链恒定区在该第三多肽中沿N末端至C末端的方向排列；以及

(4)特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VL和第二轻链恒定区在该第四多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

实施方式84：如实施方式50-83中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

(2)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH和第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

实施方式85：如实施方式50-84中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、和第三多肽，其中

(1)该第一多肽具有SEQ ID NO:153的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:150的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列；

(2)该第一多肽具有SEQ ID NO:146的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列；

(3)该第一多肽具有SEQ ID NO:149的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:150的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:151的氨基酸序列；

(4)该第一多肽具有SEQ ID NO:149的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:150的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:152的氨基酸序列；

(5)该第一多肽具有SEQ ID NO:153的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:154的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列；或

(6)该第一多肽具有SEQ ID NO:146的氨基酸序列，该第二多肽具有SEQ ID NO:150的氨基酸序列，以及该第三多肽具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列。

实施方式86：如实施方式50-85中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含

(1)SEQ ID NO:153的该第一多肽，SEQ ID NO:150的该第二多肽，和SEQ ID NO:148的该第三多肽；

(2)SEQ ID NO:146的该第一多肽，SEQ ID NO:147的该第二多肽，和SEQ ID NO:148的该第三多肽；

(3)SEQ ID NO:149的该第一多肽，SEQ ID NO:150的该第二多肽，和SEQ ID NO:151的该第三多肽；

(4)SEQ ID NO:149的该第一多肽，SEQ ID NO:150的该第二多肽，和SEQ ID NO:152的该第三多肽；

(5)SEQ ID NO:153的该第一多肽，SEQ ID NO:154的该第二多肽，和SEQ ID NO:148的该第三多肽；或

(6)SEQ ID NO:146的该第一多肽，SEQ ID NO:150的该第二多肽，和SEQ ID NO:148的该第三多肽。

实施方式87：一种药物组合物，该药物组合物包含如实施方式50-86中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载剂。

实施方式88：一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如实施方式50-86中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，或如实施方式87所述的药物组合物。

实施方式89：如实施方式88所述的方法，其中该癌症携带cMET基因改变和/或癌细胞的生长由cMET信号传导驱动。

实施方式90：如实施方式89所述的方法，其中该cMET信号传导是配体非依赖性的。

实施方式91：如实施方式89所述的方法，其中该cMET信号传导是配体依赖性的。

实施方式92：如实施方式89所述的方法，其中该cMET基因改变是cMET过表达、基因组扩增和/或突变，其导致组成型活性cMET信号传导。

实施方式93：如实施方式88所述的方法，其中该癌症携带EGFR激活突变和/或癌细胞的生长由EGFR信号传导驱动；任选地，该EGFR激活突变是缺失或点突变。

实施方式94：如实施方式93所述的方法，其中该EGFR信号传导是配体非依赖性的。

实施方式95：如实施方式93所述的方法，其中该EGFR信号传导是配体依赖性的。

实施方式96：如实施方式88-95中任一项所述的方法，其中该癌症是胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、肾癌、乳腺癌或脑癌。

实施方式97：如实施方式96所述的方法，其中该肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)。

实施方式98：如实施方式97所述的方法，其中该非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。

实施方式99：如实施方式96所述的方法，其中该肝癌是肝细胞癌。

实施方式100：如实施方式96所述的方法，其中该头颈癌是头颈部鳞状细胞癌。

实施方式101：如实施方式88-100中任一项所述的方法，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段与另一种治疗剂组合施用。

实施方式102：如实施方式101所述的方法，其中该治疗剂为免疫检查点抑制剂。

实施方式103：如实施方式101所述的方法，其中该治疗剂为抗PD-1抗体。

实施方式104：如实施方式103所述的方法，其中该抗PD1抗体是替雷利珠单抗。

实施方式105：一种分离的核酸，该分离的核酸编码如实施方式1至34和50-86中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段。

实施方式106：一种载体，该载体包含如实施方式105所述的核酸。

实施方式107：一种宿主细胞，该宿主细胞包含如实施方式105所述的核酸或如实施方式106所述的载体。

实施方式108：一种用于产生抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括培养如实施方式107所述的宿主细胞，以及从培养物中回收该抗体、多特异性抗体或抗体片段。

在一些实施方式中，本公开提供了抗人cMET抗体或其抗原结合片段，其对人cMET具有高结合亲和力和/或能够阻断配体依赖性信号传导。

在一些实施方式中，本公开提供了多特异性抗体或其抗原结合片段，其接合人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)，或者其中靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争。这种多特异性抗体或其抗原结合片段具有以下特征中的任一个或多个：

(1)能够阻断配体非依赖性信号传导；

(2)能够抑制癌细胞增殖；以及

(3)能够阻断配体诱导的信号传导。

在一些实施方式中，本公开提供了特异性结合人EGFR和人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗原结合片段或特异性结合人EGFR和人cMET的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争(例如，对人cMET和人EGFR具有高结合亲和力的EGFR x cMET双互补位抗体或其抗原结合片段)。

在一些实施方式中，本公开提供了对癌细胞具有巨大或优越的ADCC活性的EGFR xcMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞和/或cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞。

在一些实施方式中，本公开提供了对癌细胞具有巨大的ADCP活性的EGFR x cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞和/或cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞。

在一些实施方式中，本公开提供了通过下调细胞表面的受体(例如，通过内化)显著阻断EGFR信号传导和/或cMET信号传导的EGFR x cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段。此外，本公开的EGFR x cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段对EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞具有巨大的抗增殖活性，和/或对cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞具有优越的抗增殖活性。

在一些实施方式中，本公开提供了对癌细胞表现出巨大或优越的杀伤作用的EGFRx cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞以及特别是cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞。

在一些实施方式中，本公开提供了在EGFR突变/信号传导驱动的肿瘤中表现出巨大的肿瘤生长抑制作用，和/或在cMET扩增/信号传导驱动的肿瘤中表现出优越的肿瘤生长抑制作用的EGFR x cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方式中，本公开提供了表现出更小毒性和/或更好安全性的EGFR xcMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方式中，本公开提供了特异性结合人EGFR和人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗原结合片段或特异性结合人EGFR和人cMET的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争(例如，具有以下特征中的任一个或多个的EGFR x cMET双互补位抗体或其抗原结合片段)：

(1)对癌细胞具有巨大或优越的ADCC活性，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞和/或cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞；

(2)对癌细胞具有巨大的ADCP活性，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞和/或cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞；

(3)通过下调细胞表面的受体(例如，通过内化)阻断EGFR信号传导和/或cMET信号传导；

(4)对EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞具有巨大的抗增殖活性，和/或对cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞具有优越的抗增殖活性；

(5)对癌细胞具有巨大或优越的杀伤作用，包括EGFR突变/信号传导驱动的癌细胞以及特别是cMET扩增/信号传导驱动的癌细胞；

(6)在EGFR突变/信号传导驱动的肿瘤中具有巨大的肿瘤生长抑制作用，和/或在cMET扩增/信号传导驱动的肿瘤中具有优越的肿瘤生长抑制作用；以及

(7)更小毒性和/或更好安全性。

在一些实施方式中，本公开提供了对EGFR突变/信号传导驱动的肿瘤和cMET扩增/信号传导驱动的肿瘤表现出优异的杀伤作用/肿瘤生长抑制作用的EGFR x cMET双互补位三特异性抗体或其抗原结合片段，从而能够克服cMET扩增驱动的补偿耐药性或EGFR突变驱动的补偿耐药性。

附图说明

图1A-1L显示了代表性单克隆抗cMET抗体的SPR结合动力学曲线。图1A：063Ab10910；图1B：061Ab15310；图1C：063Ab16010；图1D：063Ab02110；图1E：063Ab15210；图1F：062Ab16310；图1G：063Ab05510；图1H：063Ab07710；图1I：063Ab14710；图1J：061Ab05110；图1K：063Ab03210；图1L：063Ab16720。

图2显示了代表性单克隆抗cMET抗体的配体诱导的信号传导阻断活性的比较。

图3显示了代表性单克隆抗cMET抗体的表位鉴定(epitope binning)结果。

图4显示了Hs746T细胞中双特异性抗cMET抗体对配体非依赖性信号传导的抑制作用。

图5显示了双特异性抗cMET抗体对Hs746T细胞的抗增殖活性。

图6显示了H596细胞中双特异性抗cMET抗体的配体诱导的信号传导阻断。

图7.不同的EGFR x cMET x cMET三特异性抗体形式，具有不同的EGFR scFv价和cMET臂方向。

图8.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体在没有血清(图8A)和有血清(图8B)的情况下对H1975细胞以及在没有血清(图8C)和有血清(图8D)的情况下对Hs746T细胞的ADCC活性。

图9.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体在没有血清(图9A)和有血清(图9B)的情况下对H1975细胞以及在没有血清(图9C)和有血清(图9D)的情况下对Hs746T的ADCP活性。

图10.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体对EGFR信号传导依赖性癌细胞系H1975(图10A)和H2073(图10B)以及cMET信号传导依赖性癌细胞系Hs746T(图10C)和EBC-1(图10D)的抗增殖活性。

图11.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体对HEKn细胞的抗增殖活性。

图12.与JNJ-372相比，EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-642在HCC827异种移植模型(EGFR突变驱动的模型)中显示出较低的TGI和CR率。

图13.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-647在HCC827异种移植模型(EGFR突变驱动的模型)中显示出与JNJ-372相当的肿瘤生长抑制作用。

图14.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-642和TE-646在H1975异种移植模型(EGFR突变驱动的模型)中显示出肿瘤生长抑制作用。

图15.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-647在H1975异种移植模型(EGFR突变驱动的模型)中显示出与JNJ-372相当的肿瘤生长抑制作用。

图16.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-647在Hs746T异种移植模型(cMET扩增驱动的模型)中显示出比JNJ-372更好的肿瘤生长抑制作用，且该作用是剂量依赖性的。

图17.EGFR x cMET x cMET抗体TE-647在EBC-1(cMET扩增驱动的模型)异种移植模型中显示出比JNJ-372更好的体内活性，且该作用是剂量依赖性的。

具体实施方式

本公开提供了抗人cMET抗体或其抗原结合片段以及结合人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗原结合片段，或者其中靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争。此外，本公开提供了具有期望的结合亲和力和对配体非依赖性信号传导和/或配体诱导的信号传导具有期望的阻断活性的抗体。抗体可用于与其他模式构建多特异性抗体，例如第二肿瘤相关抗原(TAA)、免疫检查点或免疫刺激物，或构建抗体药物缀合物(ADC)或与其他结构域融合形成融合蛋白。此外，抗体及其构建体可用于降低癌症和相关病症的可能性或治疗癌症和相关病症。

本公开还提供了特异性结合人EGFR和人cMET的两个不同表位(例如，非重叠)的多特异性抗体或其抗体片段或特异性结合人EGFR和人cMET的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争。此外，本公开提供了多特异性抗体或其抗体片段，其具有期望的结合亲和力、期望的ADCC活性、期望的ADCP活性、对EGFR信号传导和cMET信号传导的期望的阻断活性、对EGFR信号传导驱动的癌细胞和cMET信号传导驱动的癌细胞的期望的抗增殖活性和杀伤作用。此外，多特异性抗体及其构建体可用于降低癌症和相关病症的可能性或治疗癌症和相关病症。

I.抗cMET抗体

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段。本公开的抗体或抗原结合片段包括但不限于如下所述产生的抗体或其抗原结合片段。

1.1第一组抗cMET抗体

表1.抗cMET单克隆抗体列表1

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含VH结构域，该VH结构域具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:9、SEQID NO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:144的氨基酸序列(表1)。本公开还提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含具有表1中列出的HCDR中的任一个的氨基酸序列的HCDR。在一方面，本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含具有表1中列出的HCDR中的任一个的氨基酸序列的一个、两个、三个或更多个HCDR。

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VL结构域(表1)。本公开还提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含具有表1中列出的LCDR中的任一个的氨基酸序列的LCDR。在一方面，本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含具有表1中列出的LCDR中的任一个的氨基酸序列的一个、两个、三个或更多个LCDR。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含一个或多个互补决定区(CDR)，这些互补决定区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:84；SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含一个或多个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:84；SEQID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:53，和/或(b)包含一个或多个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区包含选自由SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68组成的组的氨基酸序列。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含三个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区是HCDR1，其包含SEQ ID NO:6、SEQID NO:11、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:36、SEQID NO:41、SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:51的氨基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO:7、SEQID NO:12、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:37、SEQID NO:42、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52的氨基酸序列；以及HCDR3，其包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:84；SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:53的氨基酸序列；和/或(b)包含三个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区是包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的LCDR3。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含三个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区是：包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQID NO:86的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的HCDR3；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HCDR3；或包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HCDR3，和/或(b)包含三个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区是包含SEQID NO:66的氨基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的LCDR2，以及包含SEQID NO:68的氨基酸序列的LCDR3。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(1)来自SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:72所示的重链可变区(VH)的HCDR1(重链互补决定区1)、HCDR2和HCDR3；(2)来自SEQ ID NO:85所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(3)来自SEQID NO:87所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(4)来自SEQ ID NO:89所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(5)来自SEQ ID NO:91所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(6)来自SEQ ID NO:93所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(7)来自SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:73所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(8)来自SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:74所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(9)来自SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:75所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(10)来自SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:76所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(11)来自SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:77所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(12)来自SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:78所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(13)来自SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:79所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(14)来自SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；(15)来自SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或(16)来自SEQ ID NO:144所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和/或(1)来自SEQ ID NO:64所示的轻链可变区(VL)的LCDR1(轻链互补决定区1)、LCDR2和LCDR3。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；或

(6)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3。

(7)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:8的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(8)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:11的HCDR1，(b)SEQ ID NO:12的HCDR2，(c)SEQ ID NO:13的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(9)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:16的HCDR1，(b)SEQ ID NO:17的HCDR2，(c)SEQ ID NO:18的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(10)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:21的HCDR1，(b)SEQ ID NO:22的HCDR2，(c)SEQ ID NO:23的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(11)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:26的HCDR1，(b)SEQ ID NO:27的HCDR2，(c)SEQ ID NO:28的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(12)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:31的HCDR1，(b)SEQ ID NO:32的HCDR2，(c)SEQ ID NO:33的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(13)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:36的HCDR1，(b)SEQ ID NO:37的HCDR2，(c)SEQ ID NO:38的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(14)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:41的HCDR1，(b)SEQ ID NO:42的HCDR2，(c)SEQ ID NO:43的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(15)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:46的HCDR1，(b)SEQ ID NO:47的HCDR2，(c)SEQ ID NO:48的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；或

(16)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:51的HCDR1，(b)SEQ ID NO:52的HCDR2，(c)SEQ ID NO:53的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3，根据Kabat定义。

在一个实施方式中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:144的氨基酸序列；或与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:81或SEQ ID NO:144中任一个至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，和/或(b)轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：

在一个实施方式中，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代(任选地保守氨基酸取代)一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸，同时保留治疗活性/结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。

在一个实施方式中，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:72和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:73和SEQ ID NO:64、SEQID NO:14和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:76和SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:34和SEQID NO:64、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:64、或SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代(任选地保守氨基酸取代)一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸，同时保留治疗活性/结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段，其包含：

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

本公开的其他抗体或其抗原结合片段包括已改变，但在CDR区中与表1中公开的CDR区相比具有至少60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性百分比的氨基酸。在一些方面，其包括氨基酸改变(插入、缺失或取代，任选地保守氨基酸取代)，其中当与表1中描述的序列中描绘的CDR区相比时，在CDR区中改变不超过1、2、3、4或5个氨基酸，同时保持结合特异性和亲和力。

本公开的其他抗体包括可变区(例如，可变区的框架区)中氨基酸或编码氨基酸的核酸已改变的那些；但与表1中所述的可变区序列具有至少60％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性百分比，同时保留结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。在一些方面，其包括氨基酸序列的改变，其中当与表1中所述的序列中描绘的可变区相比时，在可变区(例如，可变区的框架区)中改变不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸，同时保留结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。这些改变可以是插入、缺失或取代，任选地保守氨基酸取代。

在另一个实施方式中，本公开提供以1×10^-6M至1×10^-11M的结合亲和力(K_D)特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，抗cMET抗体或其抗原结合片段以约1×10^-6M、约1×10^-7M、约1×10^-8M、约1×10^-9M、约1×10^-10M或约1×10^-11M的结合亲和力(K_D)结合人cMET。

本公开还提供了编码特异性结合人cMET的抗体的VH或VL的核酸序列。可以优化此类核酸序列以在哺乳动物细胞中表达。

本公开还提供了结合与表1中描述的抗cMET抗体相同的表位的抗体及其抗原结合片段。因此，另外的抗体及其抗原结合片段可以基于它们在结合测定中与表1中描述的抗体交叉竞争(例如，以统计学显著的方式竞争性抑制其结合)的能力来鉴定。测试抗体抑制本公开的抗体及其抗原结合片段结合人cMET的能力证明测试抗体可与该抗体或其抗原结合片段竞争结合人cMET。不受任何一种理论的束缚，这样的抗体可以结合人cMET上的与其竞争的抗体或其抗原结合片段相同或相关(例如，在结构上相似或在空间上邻近)的表位。在某些方面，结合人cMET上的与本公开的抗体或其抗原结合片段相同的表位的抗体是人或人源化单克隆抗体。这种人或人源化单克隆抗体可以如本文所述制备和分离。

在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段为scFv形式，其包含N末端至C末端方向的VH-VL或N末端至C-末端方向的VL-VH。在一些实施方式中，VH和VL经由本文所述的氨基酸接头结合。在一些实施方式中，VH包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:144中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL包含SEQ ID NO:64中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH是表1中描述的VH中的任一个。在一些实施方式中，VL是表1中描述的VL中的任一个。在一些实施方式中，氨基酸接头具有包含SEQ ID NO:97-139中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:97-139的任何序列。

1.2第二组抗cMET抗体

表2.抗cMET单克隆抗体列表2

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含具有SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:145、SEQ IDNO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列(表2)的VH结构域。本公开还提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含具有表2中列出的HCDR中的任一个的氨基酸序列的HCDR。在一方面，本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含具有表2中列出的HCDR中的任一个的氨基酸序列的一个、两个、三个或更多个HCDR。

本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)包含具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VL结构域(表2)。本公开还提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含具有表2中列出的LCDR中的任一个的氨基酸序列的LCDR。在一方面，本公开提供了特异性结合人cMET的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含具有表2中列出的LCDR中的任一个的氨基酸序列的一个、两个、三个或更多个LCDR。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含一个或多个互补决定区(CDR)，这些互补决定区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62；SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含一个或多个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62；SEQ ID NO:63，和/或(b)包含一个或多个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区包含选自由SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:68组成的组的氨基酸序列。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含三个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区是包含SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HCDR1；包含SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HCDR2；以及包含SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HCDR3；和/或(b)包含三个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区是包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的LCDR1；包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的LCDR2；和包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的LCDR3。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含三个互补决定区(HCDR)的重链可变区，这些互补决定区是：包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HCDR3；或包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HCDR2，以及包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HCDR3，和/或(b)包含三个互补决定区(LCDR)的轻链可变区，这些互补决定区是包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的LCDR2，以及包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的LCDR3。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段包含：(1)来自SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:145所示的重链可变区(VH)的HCDR1(重链互补决定区1)、HCDR2和HCDR3；(2)来自SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和/或(1)来自SEQ ID NO:64所示的轻链可变区(VL)的LCDR1(轻链互补决定区1)、LCDR2和LCDR3。

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:61的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:62的HCDR2，(c)SEQ ID NO:63的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；根据Kabat定义。

在一个实施方式中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:83的氨基酸序列；或与SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:59或SEQID NO:83中任一个至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，和/或(b)轻链可变区，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：

在一个实施方式中，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:59、或SEQ ID NO:83、或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代(任选地保守氨基酸取代)一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸，同时保留治疗活性/结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。

在一个实施方式中，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:145和SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:59和SEQ ID NO:64、或SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代(任选地保守氨基酸取代)一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸，同时保留治疗活性/结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段，其包含：

本公开的其他抗体或其抗原结合片段包括已改变，但在CDR区中与表2中公开的CDR区相比具有至少60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性百分比的氨基酸。在一些方面，其包括氨基酸改变(插入、缺失或取代，任选地保守氨基酸取代)，其中当与表2中描述的序列中描绘的CDR区相比时，在CDR区中改变不超过1、2、3、4或5个氨基酸，同时保持结合特异性和亲和力。

本公开的其他抗体包括可变区(例如，可变区的框架区)中氨基酸或编码氨基酸的核酸已改变的那些；但与表2中所述的可变区序列具有至少60％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性百分比，同时保留结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。在一些方面，其包括氨基酸序列的改变，其中当与表2中所述的序列中描绘的可变区相比时，在可变区(例如，可变区的框架区)中改变不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸，同时保留结合特异性/亲和力，任选地CDR的相应序列不改变。这些改变可以是插入、缺失或取代，任选地保守氨基酸取代。

本公开还提供了结合与表2中描述的抗cMET抗体相同的表位的抗体及其抗原结合片段。因此，另外的抗体及其抗原结合片段可以基于它们在结合测定中与表2中描述的抗体交叉竞争(例如，以统计学显著的方式竞争性抑制其结合)的能力来鉴定。测试抗体抑制本公开的抗体及其抗原结合片段结合人cMET的能力证明测试抗体可与该抗体或其抗原结合片段竞争结合人cMET。不受任何一种理论的束缚，这样的抗体可以结合人cMET上的与其竞争的抗体或其抗原结合片段相同或相关(例如，在结构上相似或在空间上邻近)的表位。在某些方面，结合人cMET上的与本公开的抗体或其抗原结合片段相同的表位的抗体是人或人源化单克隆抗体。这种人或人源化单克隆抗体可以如本文所述制备和分离。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段为scFv形式，其包含N末端至C末端方向的VH-VL或N末端至C-末端方向的VL-VH。在一些实施方式中，VH和VL经由本文所述的氨基酸接头结合。在一些实施方式中，VH包含SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:145、SEQID NO:59或SEQ ID NO:83中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL包含SEQ ID NO:64中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，VH是表2中描述的VH中的任一个。在一些实施方式中，VL是表2中描述的VL中的任一个。在一些实施方式中，氨基酸接头具有包含SEQID NO:97-139中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:97-139的任何序列。

II.抗EGFR抗体

本公开提供了特异性结合人EGFR的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段以1×10^-6M至1×10^-10M的结合亲和力(K_D)特异性结合人EGFR。在另一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段以约1×10^-6M、约1×10^-7M、约1×10^-8M、约1×10^-9M或约1×10^-10M的结合亲和力(K_D)结合人EGFR。

在一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:155的HCDR1，(b)SEQ ID NO:156的HCDR2，(c)SEQ ID NO:157的HCDR3；以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含(d)SEQ ID NO:158的LCDR1，(e)SEQ IDNO:159的LCDR2，(f)SEQ ID NO:160的LCDR3，根据Kabat编号。

在另一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含：来自SEQ ID NO:142所示的重链可变区(VH)的HCDR1、HCDR2和HCDR3；以及来自SEQ ID NO:143所示的轻链可变区(VL)的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在另一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段进一步包含CDR中不超过一个、两个、三个、四个或五个氨基酸缺失、插入或取代，优选地氨基酸取代是保守氨基酸取代，同时保持结合特异性和亲和力。

在另一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:142至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:143至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在另一个实施方式中，SEQ ID NO:142或SEQ ID NO:143中已插入、缺失或取代(任选地保守氨基酸取代)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。在另一个实施方式中，这样的变异在可变区的框架区中。在另一个实施方式中，具有这样的变异的抗EGFR抗体或其抗原结合片段保持结合特异性和亲和力。

在另一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:142的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:143的轻链可变区(VL)。

在一个实施方式中，抗EGFR抗体或其抗原结合片段为scFv形式，其包含N末端至C末端方向的VH-VL或N末端至C-末端方向的VL-VH。在一些实施方式中，VH和VL经由本文所述的氨基酸接头结合。在一些实施方式中，VH包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列。在一些实施方式中，VL包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头具有包含SEQID NO:97-139中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:97-139的任何序列。在一个实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:139。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列的scFv。在另一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:161的scFv。

III.多特异性抗体

3.1抗cMET双特异性抗体

本公开提供了特异性结合人cMET的双特异性抗体或抗原结合片段，其包含特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域，以及特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域不同于第二抗原结合结构域。

在一个实施方式中，第一表位不同于第二表位(例如，非重叠)，或第一抗原结合结构域不与第二抗原结合结构域竞争。

在一个方面，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域以及特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域选自第I节中描述的任何抗cMET抗体，并且彼此不同。

在一个方面，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域以及特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域选自第I节中描述的任何抗cMET抗体，并且不相互竞争。

在另一方面，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域可以是选自第1.1节“第一组抗cMET抗体”(包括表1)中描述的那些的任何抗体或抗原结合片段。特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域可以是选自第1.2节“第二组抗cMET抗体”(包括表2)中描述的那些的任何抗体或抗原结合片段。

在一些实施方式中，双特异性抗体包含抗原结合片段，其中该抗原结合片段可以是Fab、F(ab')₂、Fv、单链Fv(scFv)或单结构域抗体。

在一个实施方式中，本公开的双特异性抗体以1×10^-6M至1×10^-10M，或甚至1×10^-11M的结合亲和力(K_D)结合人cMET。在另一个实施方式中，本公开的双特异性抗体以约1×10^-6M、约1×10^-7M、约1×10^-8M、约1×10^-9M、约1×10^-10M或约1×10^-11M的结合亲和力(K_D)结合人cMET。

在一些实施方式中，与仅包含一个特异性结合人cMET的抗原结合结构域的抗体相比，特异性结合人cMET的两个不同表位(例如，非重叠或非竞争)的本公开的双特异性抗体对配体非依赖性信号传导和/或配体诱导的信号传导表现出更好的阻断活性。

在一个实施方式中，本公开提供了双特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含：

(10)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:46的HCDR1，(b)SEQ ID NO:47的HCDR2，(c)SEQ ID NO:48的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；或

(11)重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:51的HCDR1，(b)SEQ ID NO:52的HCDR2，(c)SEQ ID NO:53的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；并且

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(2)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(3)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；

(4)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；或

(5)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQID NO:68的LCDR3；以及

(9)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:80的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

(10)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:81的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；并且

在一个实施方式中，本公开提供了双特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含

重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；并且

在一些实施方式中，在上述双特异性抗体或其抗原结合片段中，可以改变特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域包含：

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域包含

在另一个实施方式中，双特异性抗体进一步包含本文所述的氨基酸接头。在一些实施方式中，氨基酸接头具有包含SEQ ID NO:97-139中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:97-139的任何序列。

3.2抗cMET x抗原多特异性抗体

在一个实施方式中，本文公开的抗cMET抗体(包括第I节“抗cMET抗体”和第3.1节“抗cMET双特异性抗体)可用于与其他模式构建多特异性抗体，例如人类肿瘤相关抗原(TAA)、免疫检查点或免疫刺激物。

在一个实施方式中，本文公开的抗cMET抗体可以掺入抗cMET x TAA多特异性抗体中，其中抗TAA是针对cMET以外的任何人类肿瘤相关抗原(TAA)的抗体或其片段。抗体分子是多特异性抗体分子，例如，其包含至少两个抗原结合结构域，其中至少一个抗原结合结构域序列特异性结合作为第一表位的cMET，第二抗原结合结构域序列特异性结合作为第二表位的TAA。

在另一个实施方式中，两个抗原结合结构域序列特异性结合分别作为第一表位和第二表位的人cMET的两个不同表位(例如，非重叠或非竞争)，并且第三抗原结合结构域序列特异性结合作为第三表位的TAA。在一个实施方式中，多特异性抗体包含第三、第四或第五抗原结合结构域。在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体、三特异性抗体或四特异性抗体。

在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体。如本文所用，双特异性抗体仅特异性结合两种抗原。双特异性抗体包含特异性结合人cMET的第一抗原结合结构域和特异性结合TAA的第二抗原结合结构域。这包括双特异性抗体，其包含特异性结合TAA的第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域以及特异性结合人cMET的第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域。在一些实施方式中，双特异性抗体包含抗原结合片段，其中该抗原结合片段可以是Fab、F(ab')₂、Fv、单链Fv(scFv)或单结构域抗体。

在一个实施方式中，多特异性抗体是三特异性抗体。如本文所用，三特异性抗体特异性结合至少三种抗原或表位。三特异性抗体包含特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域和特异性结合TAA的第三抗原结合结构域。这包括三特异性抗体，其包含特异性结合TAA的第三重链可变结构域和第三轻链可变结构域，特异性结合人cMET的第一表位的第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域，以及特异性结合人cMET的第二表位的第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域。在一些实施方式中，三特异性抗体包含抗原结合片段，其中该抗原结合片段可以是Fab、F(ab')₂、Fv、单链Fv(scFv)或单结构域抗体。

在一个实施方式中，本公开的多特异性抗体以1×10^-6M至1×10^-10M，或甚至1×10^-11M的结合亲和力(K_D)结合人TAA和/或人cMET。在另一个实施方式中，本公开的多特异性抗体以约1×10^-6M、约1×10^-7M、约1×10^-8M、约1×10^-9M、约1×10^-10M或约1×10^-11M的结合亲和力(K_D)结合人TAA和人cMET上的至少一个表位。

先前的实验(Coloma和Morrison Nature Biotech.[自然生物技术]15:159-163(1997)，通过引用整体并入)描述了四价双特异性抗体，其通过在lgG3抗丹磺酰基抗体的C末端(CH3-scFv)之后或铰链(铰链-scFv)之后融合编码单链抗丹磺酰基抗体Fv(scFv)的DNA进行工程化。本公开提供了具有至少两个抗原结合结构域的多价抗体(例如四价抗体)，其可通过编码抗体多肽链的核酸的重组表达容易地产生。本文的多价抗体包含三至八个，但优选三或四个抗原结合结构域，其特异性结合至少两种抗原。

在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体、三特异性抗体或四特异性抗体。在另一个实施方式中，多特异性抗体进一步包含本文所述的氨基酸接头。在一些实施方式中，氨基酸接头具有包含SEQ ID NO:97-139中任一个的氨基酸序列。在一些实施方式中，氨基酸接头是SEQ ID NO:97-139的任何序列。

3.3EGFR x cMET多特异性抗体

在一方面，本公开提供了多特异性抗体或其抗原结合片段，其包含特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域；特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域；和特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域。

在一个实施方式中，第一表位不同于第二表位，或其中第一抗原结合结构域不与第二抗原结合结构域竞争。

在一方面，EGFR x cMET多特异性抗体进一步包含在第3.1节中描述的抗cMET双特异性抗体的顶部的特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域。

在一方面，在第3.2节中描述的抗cMET x抗原多特异性抗体中，另一个抗原(TAA)是人EGFR。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域选自第1.1节中描述的任何抗cMET抗体。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域选自第1.2节中描述的任何抗cMET抗体。

在一个实施方式中，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域选自第II节中描述的任何抗EGFR抗体。

在一个实施方式中，在EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQID NO:6的HCDR1，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:56的HCDR1，(b)SEQ ID NO:57的HCDR2，(c)SEQ ID NO:58的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:68的LCDR3；以及特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域包含：重链可变区，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:155的HCDR1，(b)SEQ ID NO:156的HCDR2，(c)SEQ ID NO:157的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:158的LCDR1，(e)SEQ ID NO:159的LCDR2，和(f)SEQ ID NO:160的LCDR3。

在一个实施方式中，在EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQID NO:64的氨基酸序列；以及特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；以及特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1亚类的重链恒定区和κ类型的轻链恒定区。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或是低岩藻糖基化的。在另一个实施方式中，多特异性抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有延长半衰期的IgG1 Fc。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段采用杵臼(KIH)形成异二聚体。

在一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:96的第二重链恒定区。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:96的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第二重链恒定区。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域和特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域共享共同的轻链。

在一个实施方式中，第一轻链恒定区和第二轻链恒定区是不同的。在另一个实施方式中，第一轻链恒定区和第二轻链恒定区是相同的。

在一个实施方式中，轻链恒定区具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一个实施方式中，轻链恒定区为SEQ ID NO:71。

在一个实施方式中，第一轻链可变区和第二轻链可变区是不同的。在另一个实施方式中，第一轻链可变区和第二轻链可变区是相同的。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含本文的氨基酸接头。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段可以是不同形式，具有不同的EGFR scFv价和cMET臂方向。形式可以是图7中所示的任何形式，由TE-644、TE-645、TE-646、TE-647、TE-648或TE-642表示。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中(1)特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VH，以及第二重链恒定区在该第一多肽中沿N末端至C末端的方向排列；(2)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH和第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；或特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH，以及第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；(3)特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VL和第二轻链恒定区在该第三多肽中沿N末端至C末端的方向排列；以及(4)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VL，第一轻链恒定区在该第四多肽中沿N末端至C末端的方向排列。

在一个实施方式中，EGFR x cMET多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中(1)特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VL，任选地第一氨基酸接头，特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域的VH，任选地第二氨基酸接头，特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VH，以及第二重链恒定区在该第一多肽中沿N末端至C末端的方向排列；(2)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VH和第一重链恒定区在该第二多肽中沿N末端至C末端的方向排列；(3)特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域的VL和第二轻链恒定区在该第三多肽中沿N末端至C末端的方向排列；以及(4)特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域的VL，第一轻链恒定区在该第四多肽中沿N末端至C末端的方向排列。

在一个实施方式中，第二重链恒定区为SEQ ID NO:95，并且第一重链恒定区为SEQID NO:96；或第二重链恒定区为SEQ ID NO:96，并且第一重链恒定区为SEQ ID NO:95。

在一个实施方式中，第一氨基酸接头是SEQ ID NO:139。在另一个实施方式中，第二氨基酸接头是SEQ ID NO:139。

在一个实施方式中，第一抗原结合结构域的VL和第二抗原结合结构域的VL是相同的。

在另一个实施方式中，第一轻链恒定区和第二轻链恒定区是相同的。在另一个实施方式中，第一轻链恒定区和第二轻链恒定区是SEQ ID NO:71。

在一个实施方式中，第三多肽和第四多肽是相同的。

在另一个实施方式中，特异性结合人cMET的第一表位(例如BGA-109)的第一抗原结合结构域和特异性结合人cMET的第二表位(例如BGA-032)的第二抗原结合结构域的位置可以交换。

在一个实施方式中，多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、和第三多肽，其中

在另一个实施方式中，多特异性抗体或其抗原结合片段包含

IV.与细胞毒素缀合的抗人cMET抗体

本文公开的抗人cMET抗体(包括第I节“抗cMET抗体”和第III节“多特异性抗体，例如，第3.1节抗cMET双特异性抗体、第3.2节抗cMET x抗原多特异性抗体或第3.3节EGFR xcMET多特异性抗体)可用于构建抗体药物缀合物(ADC)。在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段与细胞毒素缀合。在另一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段经由细胞毒素接头与细胞毒素缀合。

细胞毒素

细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞生长、活力或繁殖有害的任何试剂，包括但不限于微管蛋白相互作用试剂和DNA损伤试剂。可与本公开的抗体缀合的合适的细胞毒性剂和化疗剂的实例包括，例如，1-(2氯乙基)-1,2-二甲烷磺酰肼、1,8-二羟基-双环[7.3.1]十三碳-4,9-二烯-2,6-二炔-13-酮、1-脱氢睾酮、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、9-氨基喜树碱、放线菌素D、鹅膏蕈碱(amanitins)、氨喋呤、蛇形菌素(anguidine)、蒽环霉素、氨茴霉素(AMC)、奥瑞他汀类(auristatins)、博莱霉素、白消安、丁酸、卡奇霉素类(calicheamicins)(例如卡奇霉素γ1)、喜树碱、洋红霉素、卡莫司汀、西马多丁(cemadotins)、顺铂、秋水仙碱、考布他汀(combretastatins)、环磷酰胺、阿糖胞苷、细胞松弛素B、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素、氮烯咪胺(decarbazine)、二乙酰氧基戊基阿霉素(diacetoxypentyldoxorubicin)、二溴甘露醇、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracin dione)、disorazoles、海兔毒素(dolastatin)(例如海兔毒素10)、阿霉素、倍癌霉素(duocarmycin)、棘霉素、软珊瑚醇(eleutherobins)、依米丁(emetine)、埃博霉素、埃斯培拉霉素(esperamicin)、雌氮芥、溴乙锭(ethidium bromide)、依托泊苷、氟尿嘧啶、格尔德霉素类(geldanamycins)、短杆菌肽D、糖皮质激素类、伊立替康类(irinotecans)、驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂、来普霉素类(leptomycins)、环氧长春碱类(leurosines)、利多卡因、洛莫司汀(CCNU)、美登木素生物碱类(maytansinoids)、氮芥、美法仑、巯基嘌呤(mercatopurines)、甲氨蝶呤类(methopterins)、甲氨蝶呤(methotrexate)、光辉霉素(mithramycin)、丝裂霉素、米托蒽醌、N8-乙酰基亚精胺、鬼臼毒素类、普鲁卡因、普萘洛尔、蝶啶类、嘌呤霉素、吡咯并苯并二氮杂类(PBD)、根霉素类(rhizoxins)、链脲霉素(streptozotocin)、他利霉素(tallysomycins)、紫杉醇、替尼泊苷(tenoposide)、丁卡因、噻替哌苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、托马霉素类(tomaymycins)、拓扑替康类(topotecans)、tubulysin、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和任何前述的衍生物。

细胞毒素接头

用于ADC的细胞毒素接头或接头是将本文所述的抗体或抗原结合蛋白与治疗部分(例如细胞毒性剂)连接(link)、结合(connect)或键合(bond)的任何基团或部分。合适的接头可以在例如，Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins[抗体-药物缀合物和免疫毒素]；Phillips,G.L,编辑；施普林格出版社:纽约,2013；Antibody-Drug Conjugates[抗体-药物缀合物]；Ducry,L,编辑；Humana出版社,2013；Antibody-Drug Conjugates[抗体-药物缀合物]；Wang,J.,Shen,W.-C,和Zaro,J.L,编辑；施普林格国际出版社,2015中找到，各自内容通过引用整体并入文中。

通常，用于本文所述的抗体缀合物的合适结合剂或细胞毒素接头是足够稳定以利用抗体的循环半衰期，同时能够在抗原介导的缀合物内化后释放其有效载荷的那些。接头可以是可切割的或不可切割的。可切割的接头包括内化后通过细胞内代谢切割的接头，例如，通过水解、还原或酶促反应切割。不可切割的接头包括内化后通过抗体的溶酶体降解释放连接的有效载荷的接头。合适的接头包括但不限于酸不稳定接头、水解不稳定接头、酶促可切割接头、还原不稳定接头、自消接头和不可切割的接头。合适的接头还包括但不限于作为或包含肽、葡糖苷酸、琥珀酰亚胺-硫醚、聚乙二醇(PEG)单元、腙、马-己酰基单元、二肽单元、缬氨酸-瓜氨酸单元和对氨基苄基(PAB)单元的那些。

本领域已知的任何细胞毒素接头分子或接头技术都可用于创建或构建本公开的ADC。在某些实施方式中，细胞毒素接头是可切割的接头。根据其他实施方式，接头是不可切割的接头。可用于本公开上下文的示例性接头包括，包含或由以下组成的接头，例如GGFG、MC(6-马来酰亚胺基己酰基)、MP(马来酰亚胺基丙酰基)、val-cit(缬氨酸-瓜氨酸)、val-ala(缬氨酸-丙氨酸)、蛋白酶可切割接头中的二肽位点、ala-phe(丙氨酸-苯丙氨酸)、蛋白酶可切割接头中的二肽位点、PAB(对氨基苄氧羰基)、SPP(N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫代)戊酸酯)、SMCC(N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1羧酸酯)、SIAB(N-琥珀酰亚胺基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯)及其变体和组合。可用于本公开上下文的接头的额外实例提供在，例如，US 7,754,681和Ducry,Bioconjugate Chem.[生物缀合化学],2010,27:5-13，以及其中引用的参考文献中，其内容通过引用整体并入本文。

在某些实施方式中，细胞毒素接头在生理条件下是稳定的。在某些实施方式中，接头是可切割的，例如，能够在酶存在下或在特定pH范围或值下释放至少有效载荷部分。在一些实施方式中，接头包含酶可切割部分。说明性酶可切割部分包括但不限于肽键、酯键、腙和二硫键。在一些实施方式中，接头包含组织蛋白酶可切割接头。

在一些实施方式中，细胞毒素接头包含不可切割部分。

合适的细胞毒素接头还包括，但不限于，与单个结合剂(例如抗体)的两个半胱氨酸残基化学键合的那些。这种接头可以用来模拟抗体的二硫键，这些二硫键因缀合过程而被破坏。

在一些实施方式中，细胞毒素接头包含一个或多个氨基酸。合适的氨基酸包括天然、非天然、标准、非标准、蛋白质、非蛋白质和L-氨基酸或D-氨基酸。在一些实施方式中，细胞毒素接头包含丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物或其组合。在某些实施方式中，氨基酸的一个或多个侧链与侧链基团连接，如下所述。在一些实施方式中，接头包含缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方式中，细胞毒素接头包括赖氨酸、缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方式中，接头包含赖氨酸、缬氨酸和丙氨酸。在一些实施方式中，接头包含缬氨酸和丙氨酸。

V.靶向人cMET的融合蛋白

抗人cMET抗体可用于与其他蛋白质或其他功能结构域融合以形成融合蛋白或嵌合蛋白。

VI.其他修饰

恒定区和Fc区

重链恒定区可以是来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区的野生型序列。轻链恒定区可以是来自κ或λ类型的轻链的野生型序列。在一个实施方式中，重链恒定区是来自IgG1的恒定区的野生型序列。轻链恒定区是来自κ链的轻链的野生型序列。在一个实施方式中，重链恒定区具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列以及轻链恒定区具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一个实施方式中，Fc区可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的野生型Fc区。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含具有降低的效应子功能的IgG1或IgG4的Fc结构域。在另一个实施方式中，重链恒定区包含突变E233P、L234A、L235A、G236del和P329A。

在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含具有延长半衰期的Fc结构域。在另一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含IgG1的Fc结构域，其中引入位于IgG Fc区的CH2的YTE突变(M252Y/S254T/T256E，EU编号，如US 7658921中所述，通过引用整体并入)。

在另一个实施方式中，本公开的抗体具有强大的Fc介导的效应子功能，并且抗体介导针对靶细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

在其他方面，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替代一个或多个氨基酸，使得抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应子配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。此方法描述于例如Winter等人的美国专利号5,624,821和5,648,260中，各自都通过引用整体并入。

在另一方面，可以用一个或多个不同的氨基酸残基替代一个或多个氨基酸残基，使得抗体具有改变的C1q结合和/或降低的或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。此方法描述于例如Idusogie等人的美国专利号6,194,551中，其通过引用整体并入。

另一方面，改变一个或多个氨基酸残基从而改变抗体固定补体的能力。此方法描述于例如Bodmer等人的公开WO 94/29351中。在特定的方面，本公开的抗体或其抗原结合片段的一个或多个氨基酸被IgG1亚类和κ同种型的一个或多个同种异型氨基酸残基替代。同种异型氨基酸残基还包括但不限于IgG1、IgG2和IgG3亚类的重链恒定区以及κ同种型的轻链恒定区，如Jefferis等人,MAbs[单克隆抗体]1:332-338(2009)所述，其通过引用整体并入。

在另一方面，通过修饰一个或多个氨基酸来修饰Fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力。此方法描述于例如Presta的公开WO 00/42072中。此外，已经绘制了在人IgG1上与FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点，并且已经描述了具有改善的结合的变体(参见Shields等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]276:6591-6604,2001)，其通过引用整体并入。

在另一方面，抗体的糖基化被修饰。例如，可以制备无糖基化抗体(即，抗体缺乏或具有降低的糖基化)。例如，可以改变糖基化以增加抗体对抗原的亲和力。这种碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这种无糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。此方法描述于例如Co等人的美国专利号5,714,350和6,350,861中，其通过引用整体并入。

另外地或替代性地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分GlcNac结构的抗体。已经证明此类改变的糖基化模式增加抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可通过例如在具有改变的糖基化途径的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化途径的细胞已经在本领域中描述并且可以用作宿主细胞，在其中表达重组抗体从而产生具有改变的糖基化的抗体。例如，通过引用整体并入的Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破坏的FUT8基因的细胞系，该基因编码岩藻糖基转移酶，使得在这种细胞系中表达的抗体显示出低岩藻糖基化。通过引用整体并入的Presta的公开WO 03/035835描述了变体CHO细胞系Lecl3细胞，其具有降低的将岩藻糖连接至Asn(297)-连接的碳水化合物的能力，也导致在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(也参见Shields等人,(2002)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]277:26733-26740)，通过引用整体并入。通过引用整体并入的Umana等人的WO 99/54342描述了被工程化以表达糖蛋白修饰的糖基转移酶(例如，β(1,4)-N乙酰氨基葡萄糖转移酶III(GnTIII))的细胞系，使得在工程化的细胞系中表达的抗体表现出增加的二等分GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性增加(还参见Umana等人,Nat.Biotech.[自然生物技术]17:176-180,1999，通过引用整体并入)。

Naoko Ohnuki等人的WO 2003085107 A1描述了一种工程化CHO细胞系，其中α1,6-岩藻糖基转移酶的活性降低或消失，从而产生的抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

在另一方面，如果期望ADCC的降低，许多先前的报道显示人抗体亚类IgG4仅具有适度的ADCC并且几乎没有CDC效应子功能(Moore G L等人2010MAbs[单克隆抗体],2:181-189，通过引用整体并入)。然而，发现天然IgG4在应激条件下(如在酸性缓冲液中或在升高的温度下)较不稳定(Angal,S.1993Mol Immunol[分子免疫学],30:105-108；Dall'Acqua,W.等人,1998Biochemistry[生物化学],37:9266-9273；Aalberse等人,2002Immunol[分子免疫学],105:9-19，各自都通过引用整体并入)。降低的ADCC可以通过将抗体可操作地连接至用降低FcγR结合或C1q结合活性的改变的组合工程化的IgG4 Fc，从而降低或消除ADCC和CDC效应子功能来实现。考虑到抗体作为生物药物的物理化学特性，IgG4的较不期望的固有特性之一是其两条重链在溶液中动态分离以形成半抗体，这导致通过称为“Fab臂交换”的过程在体内产生双特异性抗体(Van der Neut Kolfschoten M等人,2007Science[科学],317:1554-157，通过引用整体并入)。228位(EU编号系统)丝氨酸突变为脯氨酸表现出对IgG4重链分离的抑制作用(Angal,S.1993Mol Immunol[分子免疫学],30:105-108；Aalberse等人,2002Immunol[免疫学],105:9-19，各自都通过引用整体并入)。据报道，铰链区和γFc区中的一些氨基酸残基对抗体与Fcγ受体的相互作用具有影响(Chappel S M等人,1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院学报],88:9036-9040；Mukherjee,J.等人,1995FASEB J[美国实验生物学学会联合会杂志],9:115-119；Armour,K.L.等人,1999Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志],29:2613-2624；Clynes,R.A.等人,2000NatureMedicine[自然医学],6:443-446；Arnold J.N.,2007Annu Rev immunol[免疫学年鉴],25:21-50，各自都通过引用整体并入)。此外，在人群中一些罕见的IgG4同种型也可引起不同的物理化学特性(Brusco,A.等人,1998Eur JImmunogenet[欧洲免疫遗传学杂志],25:349-55；Aalberse等人,2002Immunol[分子免疫学],105:9-19，各自都通过引用整体并入)。为了产生具有低ADCC和CDC但具有良好稳定性的多特异性抗体，可以修饰人IgG4的铰链区和Fc区并引入许多改变。这些经修饰的IgG4 Fc分子可在Li等人的美国专利号8,735,553的SEQID NO:83-88中找到，各自都通过引用整体并入。

在另一个实施方式中，本公开的抗体包含具有S228P和/或R409K取代(根据EU编号系统)的人IgG4的Fc结构域。

“杵臼”突变可以掺入Fc：Fc结合界面。在一些实施方式中，杵臼确保了多特异性抗体制造期间两个不同重链正确配对在一起。在一个实施方式中，本文的多特异性抗体的第一重链恒定区或第一Fc包含SEQ ID NO:95，以及本文的多特异性抗体的第二重链恒定区或第二Fc包含SEQ ID NO:96。在另一个实施方式中，本文的多特异性抗体的第一重链恒定区或第一Fc包含SEQ ID NO:96，以及本文的多特异性抗体的第二重链恒定区或第二Fc包含SEQ ID NO:95。

在另一个实施方式中，本文的多特异性抗体的第一重链恒定区或第一Fc包含含有T366W的人IgG1恒定区的变体，以及本文的多特异性抗体的第二重链恒定区或第二Fc包含含有T366S、L368A和Y407V的人IgG1恒定区的变体(EU编号)。

在另一个实施方式中，本文的多特异性抗体的第一重链恒定区或第一Fc包含含有T366S、L368A和Y407V的人IgG1恒定区的变体，以及本文的多特异性抗体的第二重链恒定区或第二Fc包含含有T366W的人IgG1恒定区的变体(EU编号)。

氨基酸接头

还应理解，抗体或蛋白质的多肽链的结构域和/或区可被各种长度的接头区分开。在一些实施方式中，抗原结合结构域通过接头区与彼此CL、CH1、铰链、CH2、CH3或整个Fc区分开。例如，VL1-CL-(接头)VH2-CH1。这样的接头区可以包含随机分类的氨基酸，或一组受限的氨基酸。这样的接头区可以是柔性的或刚性的(参见例如，US2009/0155275，通过引用整体并入)。

已经通过以下方式构建了多特异性抗体：使用或不使用柔性接头基因融合两种单链Fv(scFv)或Fab片段(Mallender等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]1994269:199-206；Mack等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.[美国国家科学院学报]199592:7021-5；Zapata等人.,Protein Eng.[蛋白质工程]1995 8.1057-62)，通过二聚化装置，如亮氨酸拉链(Kostelny等人,J Immunol.[免疫学杂志]1992148:1547-53；de Kruifetal J BiolChem.[生物化学杂志].1996 271:7630-4)和Ig C/CH1结构域(Muller等人,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]422:259-64)；通过双抗体(Holliger等人,(1993)Proc.Nat.Acad.Sci.USA.[美国国家科学院学报]1998 90:6444-8；Zhu等人,Bio/Technology(NY)[生物/技术(纽约)]1996 14:192-6)；Fab-scFv融合(Schoonjans等人,J.Immunol.[免疫学杂志]2000 165:7050-7)；以及微型抗体形式(Pack等人.,Biochemistry[生物化学]1992.31:1579-84；Pack等人,Bio/Technology[生物/技术]199311:1271-7)。本段落中提到的每个参考文献均通过引用整体并入。

本文公开的抗体或蛋白质在其一个或多个抗原结合结构域、CL结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域或Fc区之间包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或更多个氨基酸残基的氨基酸接头区。在一些实施方式中，氨基酸甘氨酸和丝氨酸包含在接头区内。在另一个实施方式中，接头可以是GS(SEQ ID NO:97)、GGS(SEQ ID NO:98)、GSG(SEQ ID NO:99)、SGG(SEQ IDNO:100)、GGG(SEQ ID NO:101)、GGGS(SEQ ID NO:102)、SGGG(SEQ ID NO:103)、GGGGS(SEQID NO:104)、GGGGSGS(SEQ ID NO:105)、GGGGSGS(SEQ ID NO:106)、GGGGSGGS(SEQ ID NO:107)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:108)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:109)、AKTTPKLEEGEFSEAR(SEQ ID NO:110)、AKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:111)、AKTTPKLGG(SEQ ID NO:112)、SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:113)、AKTTPKLEEGEFSEARV(SEQ ID NO:114)、SAKTTP(SEQ ID NO:115)、SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:116)、RADAAP(SEQ ID NO:117)、RADAAPTVS(SEQ ID NO:118)、RADAAAAGGPGS(SEQ ID NO:119)、RADAAAA(G₄S)₄(SEQ ID NO:120)、SAKTTP(SEQ ID NO:121)、SAKTTPKLGG(SEQ ID NO:122)、SAKTTPKLEEGEFSEARV(SEQID NO:123)、ADAAP(SEQ ID NO:124)、ADAAPTVSIFPP(SEQ ID NO:125)、TVAAP(SEQ ID NO:126)、TVAAPSVFIFPP(SEQ ID NO:127)、QPKAAP(SEQ ID NO:128)、QPKAAPSVTLFPP(SEQ IDNO:129)、AKTTPP(SEQ ID NO:130)、AKTTPPSVTPLAP(SEQ ID NO:131)、AKTTAP(SEQ ID NO:132)、AKTTAPSVYPLAP(SEQ ID NO:133)、ASTKGP(SEQ ID NO:134)、ASTKGPSVFPLAP(SEQ IDNO:135)、GENKVEYAPALMALS(SEQ ID NO:136)、GPAKELTPLKEAKVS(SEQ ID NO:137)和GHEAAAVMQVQYPAS(SEQ ID NO:138)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:139)或它们的任何组合(参见WO 2007/024715)。

二聚化特异性氨基酸

在一个实施方式中，多价抗体包含至少一个二聚化特异性氨基酸改变。二聚化特异性氨基酸改变导致“突起到孔中”相互作用，并增加正确多价抗体的组装。二聚化特异性氨基酸可以在CH1结构域或CL结构域或其组合内。用于将CH1结构域与其他CH1结构域(CH1-CH1)和CL结构域与其他CL结构域(CL-CL)配对的二聚化特异性氨基酸至少可以在WO2014082179、WO 2015181805家族和WO 2017059551的公开内容中找到，每个通过引用整体并入。二聚化特异性氨基酸也可以在Fc结构域内。此外，Fc结构域内的二聚化特异性氨基酸也可以与CH1或CL结构域内的二聚化特异性氨基酸组合。在一个实施方式中，本公开提供了包含至少一个二聚化特异性氨基酸对的多特异性抗体。

抗体产生

抗体及其抗原结合片段可通过本领域已知的任何方法产生，包括但不限于抗体四聚体的重组表达、化学合成和酶消化，而全长单克隆抗体可通过例如杂交瘤或重组产生获得。重组表达可以来自本领域已知的任何合适的宿主细胞，例如哺乳动物宿主细胞、细菌宿主细胞、酵母宿主细胞、昆虫宿主细胞等。

本公开还提供编码本文所述的抗体或蛋白质的多核苷酸，例如，编码包含本文所述的互补决定区的重链可变区或轻链可变区的多核苷酸。在一些方面，编码重链可变区的多核苷酸与选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:163或SEQ ID NO:60的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。在一些方面，编码轻链可变区的多核苷酸与选自SEQ ID NO:65的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。

本公开还提供编码本文所述的scFv的多核苷酸。

本公开的多核苷酸可以编码本文所述的多特异性抗体的可变区序列。它们还可以编码多特异性抗体的可变区和恒定区。在另一个实施方式中，本公开的多核苷酸可以编码本文所述的融合蛋白的氨基酸序列。

在一些实施方式中，本文所述的多核苷酸可以被密码子优化以在宿主细胞(例如，真核细胞，更特别地，哺乳动物细胞(例如，CHO细胞))中表达。

在一些实施方式中，本公开提供编码本文的多特异性抗体的多肽(例如，表21和表22中所述的所有多肽)的多核苷酸，例如，本文所述的EGFR x cMET多特异性抗体。

在一个实施方式中，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第一多肽的多核苷酸与具有SEQ ID NO:164的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第二多肽的多核苷酸与具有SEQ ID NO:165的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性，以及编码EGFR x cMET多特异性抗体的第三多肽的多核苷酸与具有SEQ ID NO:166的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。

在一个实施方式中，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第一多肽的多核苷酸与SEQID NO:164的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第二多肽的多核苷酸与SEQ ID NO:165的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性，以及编码EGFR x cMET多特异性抗体的第三多肽的多核苷酸与SEQ ID NO:166的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％核酸序列同一性。

在一个实施方式中，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第一多肽的第一多核苷酸包含具有SEQ ID NO:164的DNA序列，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第二多肽的第二多核苷酸包含具有SEQ ID NO:165的DNA序列，以及编码EGFR x cMET多特异性抗体的第三多肽的第三多核苷酸包含具有SEQ ID NO:166的DNA序列。

在一个实施方式中，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第一多肽的第一多核苷酸包含SEQ ID NO:164的DNA序列，编码EGFR x cMET多特异性抗体的第二多肽的第二多核苷酸包含SEQ ID NO:165的DNA序列，以及编码EGFR x cMET多特异性抗体的第三多肽的第三多核苷酸包含SEQ ID NO:166的DNA序列。

在一个实施方式中，将用于抑制岩藻糖基化的岩藻糖基转移酶抑制剂2F-全乙酰-岩藻糖(西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))添加到生产系统中，用于效应子功能增强。

在一个实施方式中，使用工程化CHO细胞系，其中α1,6-岩藻糖基转移酶的活性降低或消失，从而产生的抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。关于更多细节，参见WO2003085107 A1。

本公开还提供了用于产生本文抗体的表达载体和宿主细胞。表达载体的选择取决于表达载体的预期宿主细胞。通常，表达载体含有可操作地连接至编码抗体链或抗原结合片段的多核苷酸的启动子和其他调节序列(例如，增强子)。在一些方面，除了在诱导条件的控制下，使用诱导型启动子来防止插入序列的表达。诱导型启动子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金属硫蛋白启动子或热激启动子。可以在非诱导条件下、而不在偏向宿主细胞更好耐受其表达产物的编码序列的群体的情况下扩大经转化的生物体的培养。除启动子外，其他调节元件也可以是有效表达抗体或抗原结合片段所需要或期望的。这些元件典型地包括ATG起始密码子和相邻的核糖体结合位点或其他序列。此外，通过包含适合于使用中的细胞系统的增强子，可以提高表达效率(参见，例如，Scharf等人,Results Probl.Cell Differ.[细胞分化中的结果和问题]20:125,1994；以及Bittner等人,Meth.Enzymol.[酶学方法],153:516,1987)，各自通过引用整体并入。例如，SV40增强子或CMV增强子可以用来增加哺乳动物宿主细胞中的表达。

用于携带并表达抗体链的宿主细胞可以是原核或真核的。大肠杆菌是一种可用于克隆和表达本公开多核苷酸的原核宿主。其他适用的微生物宿主包括杆菌，如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，和其他肠杆菌科(enterobacteriaceae)，如沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)和各种假单胞菌属(Pseudomonas)物种。在这些原核宿主中，还可以制备表达载体，其典型地含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如复制起点)。此外，将存在任何数量的多种熟知的启动子，如乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、β-内酰胺酶启动子系统或来自噬菌体λ的启动子系统。启动子典型地任选地用操纵子序列控制表达，并具有核糖体结合位点序列等，用于启动和完成转录和翻译。其他微生物如酵母也可用于表达抗体。也可以使用昆虫细胞与杆状病毒载体的组合。在其他方面，哺乳动物宿主细胞用于表达和产生本公开的抗体。例如，它们可以是表达内源性免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系或携带外源性表达载体的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常死亡或正常或异常永生化动物或人细胞。例如，已经开发了几种能够分泌完整免疫球蛋白的合适宿主细胞系，包括CHO细胞系、各种COS细胞系、HEK 293细胞、骨髓瘤细胞系、转化的B细胞和杂交瘤。使用哺乳动物组织细胞培养物来表达多肽在例如以下中进行了一般性讨论：Winnacker,From Genes to Clones[从基因到克隆],VCH Publishers[VCH出版社],纽约州,纽约市,1987，各自通过引用整体并入。用于哺乳动物宿主细胞的表达载体可以包括表达控制序列，如复制起点、启动子和增强子(参见例如Queen等人,Immunol.Rev.[免疫学综述]89:49-68,1986，通过引用整体并入)和必要的加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。这些表达载体通常含有衍生自哺乳动物基因或哺乳动物病毒的启动子。合适的启动子可以是组成型的、细胞类型特异性的、阶段特异性的、和/或可调控的或可调节的。有用的启动子包括但不限于金属硫蛋白启动子、组成型腺病毒主要晚期启动子、地塞米松诱导型MMTV启动子、SV40启动子、MRP polIII启动子、组成型MPSV启动子、四环素诱导型CMV启动子(如人立即早期CMV启动子)、组成型CMV启动子和本领域已知的启动子-增强子组合。

检测和诊断方法

本公开的抗体或抗原结合片段可用于多种应用，包括但不限于检测cMET/EGFR(即，cMET和/或EGFR)的方法。在一方面，抗体或抗原结合片段可用于检测生物样品中cMET/EGFR的存在。如本文所用的术语“检测”包括定量或定性检测。在某些方面，生物样品包括细胞或组织。在其他方面，这样的组织包括相对于其他组织以更高水平表达cMET/EGFR的正常和/或癌性组织。

在一方面，本公开提供了检测生物样品中cMET的存在的方法。在某些方面，该方法包括在允许抗体与抗原结合的条件下，使生物样品与抗cMET/EGFR抗体接触，并检测抗体与抗原之间是否形成复合物。生物样品可以包括但不限于尿液、组织、痰或血液样品。

还包括诊断与cMET/EGFR表达相关的病症的方法。在某些方面，该方法包括使测试细胞与抗cMET/EGFR抗体接触；通过检测抗cMET/EGFR抗体与cMET多肽/EGFR多肽的结合来测定测试细胞表达的cMET/EGFR的表达水平(定量或定性)；并且将测试细胞的表达水平与对照细胞(例如，与测试细胞相同组织来源的正常细胞或非表达cMET/EGFR的细胞)中的cMET/EGFR表达水平进行比较，其中与对照细胞相比，测试细胞中较高水平的cMET/EGFR表达表明存在与cMET/EGFR表达相关的病症。

治疗方法

在一些实施方式中，本公开的抗体或抗原结合片段可用于多种应用，包括但不限于治疗cMET相关病症或疾病的方法。在一方面，cMET相关病症或疾病是癌症。在一些实施方式中，癌症是cMET阳性的。

本公开的抗体或抗原结合片段可用于多种应用，包括但不限于治疗EGFR/cMET相关病症或疾病的方法。在一方面，EGFR/cMET相关病症或疾病是癌症。在一些实施方式中，癌症是EGFR/cMET阳性的。

在一方面，本公开提供了治疗癌症的方法。在某些方面，该方法包括向有需要的患者施用有效量的抗cMET抗体或抗原结合片段或含cMET抗体的多特异性抗体。在另一方面，本公开提供了用于治疗癌症的抗cMET抗体或抗原结合片段或多特异性抗体或药物组合物。在另一方面，本公开提供了抗cMET抗体或抗原结合片段、多特异性抗体或其抗原结合片段、或药物组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。

在一方面，本公开提供了治疗癌症的方法。在某些方面，该方法包括向有需要的患者施用有效量的本文的多特异性抗体(例如，第3节中描述的多特性抗体)。在另一方面，本公开提供了用于治疗癌症的本文的多特异性抗体或药物组合物。在另一方面，本公开提供了多特异性抗体或其抗原结合片段或药物组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。

在一个实施方式中，癌症携带cMET基因改变，和/或cMET基因改变导致组成型活性cMET信号传导。在一个实施方式中，癌症的生长由cMET信号传导驱动。在一个实施方式中，癌症携带cMET基因改变以及癌症的生长由cMET信号传导驱动。

在一个实施方式中，cMET信号传导是配体依赖性的。在另一个实施方式中，cMET信号传导是配体非依赖性的。

在另一个实施方式中，cMET基因改变包括cMET过表达、基因组扩增、突变和/或选择性剪接，其导致组成型活性cMET信号传导。

在另一个实施方式中，癌症携带EGFR激活突变和/或癌细胞的生长由EGFR信号传导驱动。在另一个实施方式中，EGFR激活突变为缺失或点突变，包括EGFR外显子19缺失(E19del)和/或EGFR L858R/T790M。

在另一个实施方式中，EGFR信号传导是配体非依赖性的。在另一个实施方式中，EGFR信号传导是配体依赖性的。

在另一个实施方式中，本文的EGFR x cMET多特异性抗体诱导EGFR和/或cMET受体的内化，从而减少细胞表面的受体。因此，EGFR x cMET多特异性抗体的治疗不限于特异性EGFR突变或cMET扩增。实施例部分中使用的细胞系仅作为说明的示例，不应限制本文的治疗范围。

癌症可包括但不限于胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、肾癌、乳腺癌或脑癌。

在一个实施方式中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方式中，非小细胞肺癌为鳞状非小细胞肺癌。在另一个实施方式中，肝癌为肝细胞癌。在另一个实施方式中，头颈癌为头颈部鳞状细胞癌。在另一个实施方式中，胃癌是甲胎蛋白阳性(AFP+)胃癌。

本文公开的抗体或抗原结合片段可以通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、肺内和鼻内，并且如果需要用于局部治疗、病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何合适的途径，例如通过注射，如静脉内或皮下注射，这部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑了多种给药方案，包括但不限于单次施用或在不同时间点的多次施用、推注施用、和脉冲输注。

本公开的抗体或抗原结合片段可以以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。关于这点要考虑的因素包括治疗的特定病症、治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病况、病症的起因、药剂的递送位点、施用方法、施用方案、和医疗从业者已知的其他因素。抗体不需要但任选地与目前用于预防或治疗所研究的病症的一种或多种药剂一起配制。此类其他药剂的有效量取决于配制品中存在的抗体的量、病症或治疗的类型、以及上文讨论的其他因素。

为预防或治疗疾病，本公开的抗体或抗原结合片段的合适的剂量将取决于待治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重程度和病程、施用抗体是用于预防还是治疗目的、先前疗法、患者的临床病史和对抗体的应答、以及主治医生的判断。

组合疗法

在一方面，本公开的抗体(包括抗cMET双特异性抗体和EGFR x cMET多特异性抗体)可以与其他治疗剂组合使用。

本公开的抗体可与其他治疗剂(例如其他免疫检查点抗体)组合使用。此类免疫检查点抗体可包括抗PD1抗体。抗PD1抗体可包括但不限于替雷利珠单抗、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)或纳武利尤单抗(Nivolumab)。替雷利珠单抗(表3中的SEQ ID No:140和141)在US 8,735,553中公开。帕博利珠单抗(以前称为MK-3475)公开于US 8,354,509和US8,900,587中，并且是人源化lgG4-K免疫球蛋白，其靶向PD1受体并抑制PD1受体配体PD-L1和PD-L2的结合。纳武利尤单抗(如由百时美施贵宝公司(Bristol-Meyers Squibb)所公开的)是全人lgG4-K单克隆抗体。纳武利尤单抗(克隆5C4)公开于美国专利号US 8,008,449和WO 2006/121168中。

表3.替雷利珠单抗序列

在一个实施方式中，本公开提供了本文抗体和抗PD-1抗体(如上述替雷利珠单抗或其他抗PD-1抗体)的组合在制造用于治疗癌症(如上述癌症)的药物中的用途。在另一个实施方式中，本公开提供了本公开的抗体(包括抗cMET双特异性抗体和EGFR x cMET多特异性抗体)和抗PD-1抗体(如上述替雷利珠单抗或其他抗PD-1抗体)的组合，用于治疗癌症(如上述癌症)。

组合疗法旨在指，并且确实指并包括以下任一种：

-向需要治疗的患者同时施用这种组合疗法，此时将这些组分一起配制成基本上同时向所述患者释放所述组分的单一剂型，

-向需要治疗的患者基本上同时施用这种组合，此时将这些组分彼此分开配制成由所述患者在基本上相同的时间服用的单独剂型，从而所述组分在基本上相同的时间释放给所述患者，

-向需要治疗的患者顺序施用这种组合疗法，此时将这些组分彼此分开配制成由所述患者连续服用的单独剂型，每次施用之间有很长的时间间隔，从而所述组分在基本上不同的时间释放给所述患者；以及

-向需要治疗的患者顺序施用这种组合，此时将这些组分一起配制成以受控方式释放所述组分的单一剂型，从而它们在相同和/或不同时间同时、连续和/或重叠地释放给所述患者，其中每个部分可通过相同或不同途径施用。

药物组合物

还提供了包含本文抗体或多特异性抗体或含有编码本文抗体或抗原结合片段的序列的多核苷酸的组合物，包括药物配制品。在某些实施方式中，组合物包含一种或多种抗体或多特异性抗体或抗原结合片段，或含有编码一种或多种抗体或抗原结合片段的序列的一种或多种多核苷酸。这些组合物还可包含合适的载剂，如本领域熟知的药学上可接受的赋形剂，包括缓冲液。

本文公开的组合物可以是多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如可注射和输注溶液)、分散液或悬浮液、脂质体和栓剂。合适的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。典型的合适组合物是可注射或输注溶液的形式。一种合适的施用方式是肠胃外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一些实施方式中，该抗体通过静脉内输注或注射来施用。在某些实施方式中，该抗体通过肌内或皮下注射来施用。

定义

除非在本文件的其他地方具体定义，否则本文所用的所有其他技术和科学术语具有本领域的普通技术人员通常理解的含义。

如本文所用，包括所附权利要求，除非上下文另外明确说明，否则如“一个”、“一种”和“该”的单数形式包括它们相应的复数指代。

除非上下文另外明确说明，否则术语“或”意指术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。

如本文所用的术语“抗癌剂”是指可用于治疗细胞增殖性病症(如癌症)的任何药剂，包括但不限于细胞毒性剂、化疗剂、放射疗法和放射治疗剂、靶向性抗癌剂、和免疫治疗剂。

术语“人cMET”是指人类中的受体酪氨酸激酶间充质-上皮转化因子。人cMET的氨基酸序列(SEQ ID NO:69)也可在GenBank:AAI30421.1中找到。

术语“人EGFR”是指人类中的表皮生长因子受体。人EGFR的氨基酸序列(SEQ IDNO:167)可在https://www.uniprot.org/uniprotkb/P00533/entry#sequences中找到。

SEQ ID NO:167EGFR氨基酸序列

MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

术语“cMET双互补位抗体或其抗原结合片段”是指在多特异性抗体或其抗原结合片段中，靶向人cMET的其第一抗原结合结构域和靶向人cMET的其第二抗原结合结构域识别人cMET上的非重叠表位，或靶向人cMET的其第一抗原结合结构域不与靶向人cMET的其第二抗原结合结构域竞争。

如本文所用的术语“施用(administration/administering)”和“治疗(treating/treatment)”，当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，意指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与该动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。细胞的处理涵盖试剂与细胞的接触以及试剂与流体的接触，其中流体与细胞接触。术语“施用”和“治疗”也意指体外和离体处理，例如，通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一种细胞对细胞进行处理。本文的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，并且最优选人。在一方面，治疗任何疾病或病症是指改善该疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一方面，“治疗(treat/treating/treatment)”是指缓解或改善至少一个身体参数，包括患者可能无法辨别的那些。在又另一方面，“治疗(treat/treating/treatment)”是指在身体上(例如，可辨别症状的稳定化)、在生理上(例如，身体参数的稳定化)或两者上调节疾病或病症。在又另一方面，“治疗(treat/treating/treatment)”是指预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。

在本公开的上下文中，术语“受试者”是哺乳动物，例如，灵长类动物，优选高等灵长类动物，例如人(例如，患有本文所述的病症或处于患上本文所述的病症的风险中的患者)。

如本文所用的术语“亲和力”是指抗体与抗原之间相互作用的强度。在抗原内，抗体的可变区通过非共价力与抗原在许多位点相互作用。通常，相互作用越多，亲和力越强。

如本文所用的术语“抗体”是指免疫球蛋白家族的多肽，其可以非共价地、可逆地和以特异性方式结合相应的抗原。例如，天然存在的IgG抗体是包含通过二硫键相互结合的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的四聚体。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL或Vκ)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个框架区(FR)构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。

术语“抗体”包括但不限于单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体和抗独特型(抗Id)抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、单结构域抗体、Fab片段、Fab'片段或F(ab')₂片段。抗体可以是任何同种型/类别(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)或亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。此外，抗体包括其衍生剂，例如融合蛋白、多特异性抗体或抗体-药物缀合物(ADC)。此外，抗体包括其衍生剂，通过与另一药剂(如其他药物或抗体)直接或间接连接或与另一药剂形成复合物。

术语“嵌合抗体”是指由来自不同物种的结构域组成的分子，即将来自一种宿主物种(例如小鼠、兔、美洲驼等)的抗体的可变结构域与来自不同物种(例如人)的抗体的恒定结构域融合。

在一些实施方式中，抗cMET抗体包含至少一个抗原结合位点，至少一个可变区。在一些实施方式中，抗cMET抗体包含来自本文所述的cMET抗体的抗原结合片段。在一些实施方式中，抗cMET抗体是分离的或重组的。在一些实施方式中，抗cMET抗体还包括作为第一臂靶向cMET的第一表位和作为第二臂靶向cMET的第二表位的多特异性抗体。在一些实施方式中，抗cMET抗体还包括作为至少一个臂靶向cMET(例如，分别靶向不同表位的两个臂)和作为另一个臂靶向其他抗原的多特异性抗体。

本文中的术语“单克隆抗体”或“mAb”或“Mab”是指基本上同质的抗体的群体，即，除了可能少量存在的可能天然发生的突变外，该群体中包含的抗体分子在氨基酸序列上是相同的。相比之下，常规(多克隆)抗体制剂典型地包括在其可变结构域中具有不同氨基酸序列的多种不同抗体，特别地其互补决定区(CDR)，它们通常对不同的表位具有特异性。修饰语“单克隆”指示获得自基本上均质的抗体群体的抗体的特征并且不应理解为要求通过任何特定方法产生抗体。可以通过本领域技术人员已知的方法获得单克隆抗体(mAb)。参见，例如Kohler等人,Nature[自然]1975 256:495-497；美国专利号4,376,110；Ausubel等人,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY[分子生物学现代方法]1992；Harlow等人,ANTIBODIES:ALABORATORY MANUAL[抗体：实验室手册],Cold spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室]1988；以及Colligan等人,CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY[当代免疫学方案]1993。本文公开的抗体可以是任何免疫球蛋白类别(包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA)，及其任何亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。产生单克隆抗体的杂交瘤可以在体外或在体内培养。高效价的单克隆抗体可以在体内产生中获得，其中将来自单个杂交瘤的细胞腹膜内注射到小鼠中，例如原始引发的Balb/c小鼠，以产生含有高浓度所需抗体的腹水。可以使用本领域技术人员熟知的柱层析方法从这样的腹水，或从培养物上清液中纯化同种型IgM或IgG的单克隆抗体。

通常，基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基末端部分可以定义为主要负责效应子功能的恒定区。典型地，人轻链被分类为κ和λ轻链。此外，人重链典型地分类为α、δ、ε、γ或μ，并且分别将抗体的同种型定义为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包括约10个以上氨基酸的“D”区。

每个轻链/重链(VL/VH)对的可变区形成抗体结合位点。因此，一般而言，完整抗体具有两个结合位点。除了在双功能或双特异性抗体中，两个结合位点通常在一级序列中是相同的。

典型地，重链和轻链的可变结构域包含三个高变区，也称为“互补决定区(CDR)”，其位于相对保守的框架区(FR)之间。CDR通常由框架区对齐，使得能够结合特异性表位。一般而言，从N末端到C末端，轻链和重链可变结构域两者都包含FR-1(或FR1)、CDR-1(或CDR1)、FR-2(FR2)、CDR-2(CDR2)、FR-3(或FR3)、CDR-3(CDR3)和FR-4(或FR4)。CDR和框架区的位置可以使用本领域熟知的多种定义确定，例如Kabat、Chothia、AbM和IMGT(参见，例如Johnson等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究],29:205-206(2001)；Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],196:901-917(1987)；Chothia等人,Nature[自然],342:877-883(1989)；Chothia等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],227:799-817(1992)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],273:927-748(1997))、ImMunoGenTics(IMGT)编号(Lefranc,M.-P.,The Immunologist[免疫学者],7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人,Dev.Comp.Immunol.[发育与比较免疫学],27,55-77(2003)(“IMGT”编号方案))。抗原结合位点的定义还在以下文献中描述：Ruiz等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究],28:219-221(2000)；和Lefranc,M.P.,Nucleic Acids Res.[核酸研究],29:207-209(2001)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],262:732-745(1996)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院学报],86:9268-9272(1989)；Martin等人,Methods Enzymol.[酶学方法],203:121-153(1991)；和Rees等人,在Sternberg M.J.E.(编),Protein Structure Prediction[蛋白质结构预测],Oxford University Press[牛津大学出版社],牛津,141-172(1996)中。例如，根据Kabat，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。根据Chothia，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过结合Kabat和Chothia的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)以及人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。根据IMGT，VH中的CDR氨基酸残基编号为约26-35(HCDR1)、51-57(HCDR2)和93-102(HCDR3)，VL中的CDR氨基酸残基编号为约27-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和89-97(LCDR3)(编号根据Kabat)。根据IMGT，可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定抗体的CDR区。

术语“高变区”是指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区包含来自“CDR”(例如轻链可变结构域中的LCDR1，LCDR2和LCDR3以及重链可变结构域中的HCDR1，HCDR2和HCDR3)的氨基酸残基。参见Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest[免疫学上感兴趣的蛋白质序列],第5版Public Health Service[公共卫生署],National Institutes of Health[国立卫生研究院],贝塞斯达,马里兰州(通过序列定义抗体的CDR区)；还参见Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917(通过结构定义抗体的CDR区)。术语“框架”或“FR”残基意指除了本文定义为CDR残基的高变区残基之外的那些可变结构域残基。

除非另外说明，否则“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留与全长抗体结合的抗原特异性结合的能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，单链Fv(ScFv))；纳米抗体以及从抗体片段形成的多特异性抗体。

如本文所用，抗体“特异性结合”靶蛋白，是指与其他蛋白相比，抗体表现出优先结合靶蛋白，但这种特异性不需要绝对的结合特异性。在描述抗原(例如蛋白质)与抗体或抗原结合抗体片段之间的相互作用的上下文中使用的抗体“特异性结合”或“选择性结合”是指决定抗原在蛋白质和其他生物制剂的异质群体中(例如在生物样品、血液、血清、血浆或组织样品中)的存在的结合反应。因此，在某些指定的免疫测定条件下，抗体或其抗原结合片段与特定抗原特异性结合是背景水平的至少两倍，并且不以显著量与样品中存在的其他抗原特异性结合。在一方面，在指定的免疫测定条件下，抗体或其抗原结合片段与特定抗原的特异性结合是背景结合水平的至少十(10)倍，并且不以显著量与样品中存在的其他抗原特异性结合。

本文所用的“抗原结合结构域”是指抗体上特异性结合抗原的部分。在一些实施方式中，其包含至少六个CDR且与表位(或三个CDR，就单结构域抗体而言)特异性结合。多特异性抗体(例如，双特异性抗体)的“抗原结合片段”包含与第一表位特异性结合的第一抗原结合结构域和与第二表位特异性结合的第二抗原结合结构域。多特异性抗体可以是双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体等，具有针对每个特定表位的抗原结合结构域。多特异性抗体可以是多价抗体(例如，双特异性四价抗体)，其包含多个抗原结合结构域，例如特异性结合第一表位的2、3、4或更多个抗原结合结构域和特异性结合第二表位的2、3、4或更多个抗原结合结构域。

本文中的术语“人抗体”意指仅包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如果在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，人抗体可以包含鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”意指分别仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。

术语“人源化”或“人源化抗体”意指含有来自非人(例如鼠、兔、美洲驼等)抗体以及人抗体的序列的抗体形式。此类抗体含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将包含基本上至少一个、并且典型地两个可变结构域的全部，其高变环的全部或基本上全部对应于非人免疫球蛋白的那些，并且FR的全部或基本上全部是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还将任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白的至少一部分。当有必要区分人源化抗体与亲本啮齿动物抗体时，将前缀“hum”、“hu”、“Hu”或“h”添加到抗体克隆名称中。人源化形式的啮齿动物/骆驼科动物抗体会通常包含亲本啮齿动物抗体的相同CDR序列，但是可包括某些氨基酸取代以增加亲和力，增加人源化抗体的稳定性，除去翻译后修饰或出于其他原因。

术语“相应的人种系序列”是指编码人可变区氨基酸序列或亚序列的核酸序列，与由人种系免疫球蛋白可变区序列编码的所有其他已知可变区氨基酸序列相比，其与参考可变区氨基酸序列或亚序列具有最高确定的氨基酸序列同一性。相应的人种系序列也可以指与所有其他评估的可变区氨基酸序列相比，与参考可变区氨基酸序列或亚序列具有最高氨基酸序列同一性的人可变区氨基酸序列或亚序列。相应的人种系序列可以仅是框架区，仅互补决定区，框架和互补决定区，可变区段(如上定义)，或包含可变区的序列或亚序列的其他组合。可以使用本文所述的方法确定序列同一性，例如使用BLAST、ALIGN或本领域已知的另一种比对算法比对两个序列。相应的人种系核酸或氨基酸序列可以与参考可变区核酸或氨基酸序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自此类人序列，例如人种系序列，或突变形式的人种系序列或含有衍生自人框架序列分析的共有框架序列的抗体，例如Knappik等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]296:57-86,2000中所述。

术语“平衡解离常数(K_D，M)”是指解离速率常数(kd，时间-¹)除以缔合速率常数(ka，时间-¹，M^-l)。平衡解离常数可以使用本领域任何已知的方法测量。本公开的抗体通常将具有小于约10^-7或10^-8M，例如小于约10^-9M或10^-10M，在一些方面，小于约10^-11M、10^-12M或10^-13M的平衡解离常数。

本文中的术语“癌症”或“肿瘤”具有如本领域理解的最广泛的含义，并且是指哺乳动物中典型地以不受调控的细胞生长为特征的生理病况。在本公开的上下文中，癌症不限于某个类型或位置。

在本公开的上下文中，当提及氨基酸序列时，术语“保守取代”意指用新氨基酸取代原始氨基酸，该新氨基酸基本上不改变抗体或片段的化学、物理和/或功能性质，例如其与cMET的结合亲和力。特别地，氨基酸的常见保守取代是本领域熟知的。

如本文所用的术语“杵臼(knob-into-hole)”技术是指氨基酸在体外或体内通过在它们相互作用的界面上将空间突起(杵)引入一个多肽并将穴袋或空腔(臼)引入另一个多肽从而引导将两条多肽配对在一起。例如，杵臼已经被引入了抗体的Fc:Fc结合界面、C_L:C_H界面、或V_H/V_L界面(参见例如US2011/0287009、US 2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431和Zhu等人,1997,Protein Science[蛋白质科学]6:781-788)。在一些实施方式中，杵臼确保了多特异性抗体制造期间两个不同重链正确配对在一起。例如，在其Fc区中具有杵臼氨基酸的多特异性抗体还可包含与每个Fc区连接的单个可变结构域，或者进一步包含与相似或不同轻链可变结构域配对的不同重链可变结构域。杵臼技术还可在VH或VL区中使用，以确保正确配对。

如本文在“杵臼”技术的上下文中所用的术语“杵”是指向多肽在该多肽与另一多肽相互作用的界面处引入突起(杵)的氨基酸改变。在一些实施方式中，另一多肽具有臼突变。

如本文在“杵臼”的上下文中所用的术语“臼”是指向多肽在该多肽与另一多肽相互作用的界面处引入穴袋或空腔(臼)的氨基酸改变。在一些实施方式中，另一多肽具有杵突变。

适用于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法的实例是BLAST算法，其分别描述于Altschul等人,Nuc.Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402,1977；和Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410,1990中。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)公开获得。此算法包括首先通过鉴定查询序列中短字长W鉴定高得分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同字长比对时，其匹配或满足一些正值阈值得分T。T被称为邻域字得分阈值。这些初始邻域字命中作为开始搜索以找到包含它们的较长HSP的值。字命中沿着每个序列在两个方向上延伸，直到累积比对得分可以增加为止。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励得分；始终>0)和N(错配残基的罚分；始终<0)来计算累积得分。对于氨基酸序列，使用得分矩阵来计算累积得分。在以下情况下，将停止字命中在每个方向上的延伸：累积比对得分从其最大实现值下降了数量X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分趋于零或更低；或者到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)默认使用字长(W)11，期望值(E)10，M＝5，N＝-4并比较两条链。对于氨基酸序列，BLAST程序默认使用字长3，期望值(E)10和BLOSUM62得分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院学报]89:10915)比对(B)50，期望值(E)10，M＝5，N＝-4并比较两条链。

BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见例如Karlin和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院学报]90:5873-5787,1993)。BLAST算法提供的一种相似性度量是最小总和概率(P(N))，其提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果测试核酸与参考核酸的比较中最小总和概率小于约0.2，更优选小于约0.01，最优选小于约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。

两个氨基酸序列之间的同一性百分比还可使用以下的算法来确定：E.Meyers和W.Miller,Comput.Appl.Biosci.[生物科学中的计算机应用]4:11-17,(1988)，其已并入ALIGN程序(2.0版本)，使用PAM120权重残基表，空位长度罚分为12，空位罚分为4。此外，可以使用以下确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比：Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:444-453(1970)的算法，其已并入GCG软件包中的GAP程序中，使用BLOSUM62矩阵或PAM250矩阵，空位权重为16、14、12、10、8、6或4，并且长度权重为1、2、3、4、5或6。

术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。该术语涵盖含有已知的核苷酸类似物或经修饰的主链残基或连接的核酸，它们是合成的，天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸相似的结合特性，并且以与参考核苷酸相似的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。

在核酸的上下文中，术语“可操作地连接”是指两个或更多个多核苷酸(例如DNA)区段之间的功能关系。典型地，它是指转录调节序列与转录序列的功能关系。例如，启动子或增强子序列如果在合适的宿主细胞或其他表达系统中刺激或调节编码序列的转录，则可操作地连接至编码序列。通常，可操作地连接至转录序列的启动子转录调节序列与转录序列在物理上邻接，即它们是顺式作用的。然而，一些转录调节序列(如增强子)不需要在物理上邻接或紧邻它们增强其转录的编码序列。

在一些方面，本公开提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与至少一种药学上可接受的赋形剂一起配制的本文所述的抗cMET多特异性抗体。如本文所用，术语“药学上可接受的赋形剂”包括生理学上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。赋形剂可适于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。

如本文所用的术语“治疗有效量”是指当施用于受试者以治疗疾病、或疾病或病症的至少一种临床症状时，足以影响该疾病、病症或症状的治疗的抗体的量。“治疗有效量”可以随抗体，疾病，病症，和/或疾病或病症的症状，疾病、病症、和/或疾病或病症的症状的严重程度，待治疗的受试者的年龄，和/或待治疗的受试者的体重而变化。在任何给定情况下的合适量对于本领域技术人员而言是显而易见的，或者可以通过常规实验确定。在组合疗法的情况下，“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、病症或病况的组合对象的总量。

术语“组合疗法”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗本公开中所述的治疗病况或病症。这种施用涵盖以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂。这种施用也涵盖在多个容器中或在每种活性成分的独立容器(例如，胶囊、粉末和液体)中共同施用。可以将粉末和/或液体在施用之前重构或稀释到所需剂量。此外，这种施用也涵盖在大致相同的时间或在不同的时间以顺序方式使用每种类型的治疗剂。在任何一种情况下，治疗方案将在治疗本文所述的病况或病症方面提供药物组合的有益作用。

如本文所用，短语“与…组合”意指将抗cMET抗体在施用另外的治疗剂的同时、就在该施用前或就在该施用后施用于受试者。在某些实施方式中，将抗cMET抗体作为与另外的治疗剂的共同配制品来施用。

等同物

应理解，虽然已经结合详细描述对本发明进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附的权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。

应理解，可组合本文所述的各种实施方式的一个、一些、任何或全部特征，以形成本公开的另外的实施方式。本公开的这些和其他方面对于本领域的技术人员而言将变得显而易见。

实施例

实施例1.抗cMET抗体的产生

小鼠免疫

为了产生抗cMET抗体，将基因工程小鼠(百奥赛图公司(Biocytogen))通过融合到his标签的人cMET细胞外结构域(SEQ ID NO:69的氨基酸1-932，其是全长人cMET)或与佐剂(用于初次免疫的完全弗氏佐剂(F5881，西格玛公司(Sigma))和用于随后免疫的不完全弗氏佐剂(F5506，西格玛公司))混合的小鼠Fc(内部生成，SEQ ID NO:1和2)免疫。每两周或每三周对动物进行腹膜内和皮下注射。所使用的小鼠包括编码不同的人免疫球蛋白重链和一个共享的人轻链可变区的DNA。

通过ELISA测定针对cMET蛋白的血清滴度，以监测体液免疫反应。向具有足够cMET特异性抗体滴度的动物施用cMET蛋白的最终增强，用于抗体筛选。

表4.抗原序列列表

通过Beacon光流控(Beacon Optofluidic)系统进行的浆细胞筛选

最终增强免疫后3-5天，采集脾脏并捣碎成单细胞悬浮液。根据生产商的说明，用小鼠CD138阳性选择试剂盒(STEMCELL^TM)分离浆细胞。根据生产商的说明，将密度为6.25x10⁶/ml的富集浆细胞导入通道，并注入OptoSelect 14K Chip^TM(贝克莱之光生命科技公司(Berkeley Lights))的NanoPen腔室中。为了筛选人cMET特异性浆细胞，将人cMET蛋白(MET-H82E1，百普赛斯生物科技股份有限公司(Acrobiosystems))缀合珠(520-00053，贝克莱之光生命科技公司)和浓度为5μg/ml的Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG二抗(杰克逊免疫研究公司(Jackson ImmunoResearch))导入通道中。导入后，打开冷冻阀，并将AlexaFluor 488荧光团的FITC通道的暴露时间设置为1000ms。通过设置3分钟的时间段和10个循环的延时成像捕获类似Bloom的阳性信号。完成人cMET特异性浆细胞筛选后，用cyno cMET-ECD-his(内部生成，SEQ ID NO:3)缀合珠筛选食蟹猴cMET特异性浆细胞。使用不相关的His标记的蛋白质缀合珠去除非特异性结合信号的测定作为反筛选进行。将显示人和食蟹猴cMET特异性阳性信号的浆细胞单独输出到装有裂解缓冲液的96孔板中。

实施例2.抗体VH和VL基因克隆、测序和表达

根据生产商的说明，合成第一链cDNA，并使用Opto Plasma B Discovery cDNASynthesis Kit^TM(贝克莱之光生命科技公司)扩增总cDNA。根据生产商的说明，使用OptoPlasma B Discovery Sanger Prep Kit^TM(贝克莱之光生命科技公司)扩增抗体VH和VL基因。将扩增的VH和VL基因分别克隆到含有人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70)和人κ链恒定区(SEQ ID NO:71)基因的哺乳动物表达载体中并测序。代表性抗体的3个HCDR、3个LCDR、VH和VL的氨基酸序列以及VH和VL的DNA序列作为SEQ ID NO:4至68列于表5和表6中。抗体通过Expi293^TM细胞表达，并通过亲和色谱纯化。

表5.抗cMET单克隆抗体列表

表6.抗cMET单克隆抗体序列列表

实施例3.抗cMET抗体结合亲和力和特异性的测定

通过ELISA和FACS测定纯化的抗cMET抗体的结合亲和力和特异性。简言之，将2μg/ml人或食蟹猴单体cMET融合蛋白人cMET-ECD-his或食蟹猴cMET-ECD-his(内部生成，SEQID No:1和3)或人cMET-ECD-mFc形成的人二聚体cMET蛋白(内部生成，SEQ ID NO:2)包被在96孔ELISA板中，并将50μL连续稀释的抗体共孵育30-60分钟，洗涤，并与缀合于HRP的山羊抗人IgG二抗(艾博抗公司(Abcam)，ab98624)一起孵育。孵育和洗涤后，将板用HRP底物显色并测量吸光度。将ELISA结合阳性的候选物连续稀释，并与Hs746T细胞(一种具有推定致癌突变的人胃癌细胞系，进行cMET扩增导致高cMET表达)在4℃下孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤两次后，添加稀释的Alexa Fluor 647山羊抗人IgG二抗，并与Hs746T细胞在黑暗中在4℃下孵育30分钟。用FACS缓冲液洗涤两次后，用FACS缓冲液重悬细胞并使用BectonDickinson LSR Fortessa^TM细胞分析仪读取。通过针对Jurkat细胞(cMET阴性细胞)的FACS结合来评估这些抗体的非特异性结合。使用Dotmatics的GraphPad^TM软件非线性拟合S型剂量反应生成滴定曲线。

如表7和表8所示，所有选定的候选物都以高亲和力特异性结合cMET单体和二聚体蛋白，并且它们都特异性结合表达人cMET的癌细胞结合并交叉结合食蟹猴cMET。

表7.抗cMET抗体对人和食蟹猴cMET蛋白的结合亲和力

表8.抗cMET抗体对Hs746T细胞和Jurkat细胞的结合亲和力

n.d.：未检测到

实施例4.抗cMET抗体的结合动力学

在室温下通过表面等离子体共振(Biacore 8K，通用生命科学公司(GE LifeSciences))测定纯化的抗cMET抗体的结合亲和力和动力学。简言之，将小鼠抗人IgG Fc抗体通过胺偶联固定在活化的CM5生物传感器芯片(目录号BR100530，通用生命科学公司)上。使纯化的单克隆抗体候选流过芯片表面并被抗人IgG抗体捕获。然后将具有his标签的可溶性单体人cMET融合蛋白(内部生成，SEQ ID NO:1)的连续稀释液注射到抗体捕获的表面上，并通过使用一对一Langmuir结合模型(BIA Evaluation Software^TM，通用生命科学公司)分析表面等离子体共振信号的变化以计算缔合速率(k_on)和解离速率(k_off)。将平衡解离常数(K_D)计算为比率k_off/k_on。选定的单克隆抗cMET抗体的结合亲和力和动力学曲线如下表9所示，选定候选的详细结合曲线如图1A-1L所示。

表9.抗cMET抗体对单体cMET蛋白的结合动力学

实施例5.单克隆抗cMET抗体对配体诱导的信号传导的阻断活性

为了评估抗cMET抗体干扰HGF-cMET相互作用并抑制下游信号传导的活性，将抗体处理后T202/Y204处HGF诱导的ERK磷酸化的抑制用作细胞读数。简言之，将H596细胞(从人肺癌分离的上皮样细胞系)接种到一个96孔测定板中，并在37℃，5％ CO2下孵育。24小时后，用不含FBS的培养基使细胞饥饿4小时。然后，将抗cMET抗体的连续稀释液添加到每个孔中并在37℃下孵育1小时。向每个孔中添加100pM人HGF，并在37℃下孵育15分钟。然后，丢弃培养基，将1×裂解缓冲液加入测定板中，并在室温下孵育30分钟。使用ERK磷酸化-T202/Y204试剂盒(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))测量细胞磷-ERK。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC50值。Imax使用以下公式计算：抑制％＝100*[1-(X-MIN)/(MAX-MIN)]。X是给定化合物浓度下的FRET信号。MAX是在H596细胞和100pM hHGF存在下的信号。MIN是在饥饿培养基存在下作为背景信号的信号。单克隆抗cMET抗体的IC50和Imax如表10和图2所示。

表10.单克隆抗cMET抗体对配体诱导的信号传导的阻断活性的比较

实施例6.单克隆抗cMET抗体的激动剂活性

为了评估抗cMET抗体的瞬时激动活性，在抗体处理后测量cMET下游信号传导的激活：ERK磷酸化-T202/Y204的上调。简言之，将H596细胞接种到96孔测定板上，并在37℃，5％CO2下孵育。24小时后，用不含FBS的培养基使细胞饥饿4小时。然后，将50nM抗cMET抗体添加到每个孔中并在37℃下孵育2小时。然后，丢弃培养基，将1×裂解缓冲液加入测定板中，并在室温下孵育30分钟。使用ERK磷酸化-T202/Y204试剂盒(珀金埃尔默公司)测量细胞磷-ERK。通过比较在50nM抗体存在下的p-ERK信号与在媒介物(缓冲液PBS)存在下的信号来确定刺激倍数。单克隆抗cMET抗体的激动剂活性如表11所示。

表11.单克隆抗cMET抗体的激动剂活性

实施例7.抗cMET抗体与不同表位结合

为了评估抗cMET抗体是否彼此竞争，在室温下使用表面等离子体共振(Biacore8K，通用生命科学公司)进行表位鉴定测定。简言之，将人cMET-his(内部生成，SEQ ID NO:1)捕获到抗-his抗体固定的CM5芯片(目录号29234602，通用生命科学公司)的传感器表面。将第一抗体以300nM注射以使抗原结合饱和，随后注射第二抗体。利用Biacore InsightEpitope Binning Extension(表位鉴定扩展)对数据进行分析。代表性单克隆抗体的表位鉴定结果如图3所示。根据图3，抗cMET抗体分为两个非竞争组：(1)063Ab10910、061Ab15310、063Ab16010、063Ab02110、063Ab15210、062Ab16310、063Ab05510、063Ab07710、063Ab14710或061Ab05110；和(2)063Ab03210或063Ab16720。

实施例8.针对cMET不同表位具有2个不同抗原结合结构域的双特异性抗体的构建

为了产生针对cMET的双互补位抗体，我们构建了包含两个不同臂(臂1和臂2)的双特异性抗体，其中臂1和臂2来源于结合单独表位且非竞争性的不同的抗cMET单特异性抗体。

个体抗cMET单特异性抗体来源于本文实施例1至7中描述的候选物。这里描述的所有抗cMET抗体共享共同的轻链(SEQ ID NO:64)。双特异性抗体通过Expi293^TM细胞表达，并通过MabSelect^TMSuRe亲和色谱纯化。表12列出了选定的代表，以说明配对算法和双特异性抗体序列ID。

表12.抗cMET双特异性抗体配对算法和序列ID

实施例9.双特异性抗cMET抗体对配体非依赖性信号传导的抑制

对于具有cMET扩增的癌细胞系，如Hs746T(人胃癌细胞)，cMET信号传导具有组成型活性以支持细胞增殖，而无需配体参与。为了评估抗cMET双特异性抗体抑制配体非依赖性cMET信号传导的活性，在抗cMET双特异性抗体处理后，在Hs746T细胞中测量ERK磷酸化-T202/Y204的抑制。简言之，将细胞Hs746T接种到96孔测定板上，并在37℃，5％ CO2下孵育。24小时后，用10nM抗cMET双特异性抗体处理细胞，并在37℃下孵育18小时。然后，丢弃培养基，将1×裂解缓冲液加入测定板中，并在室温下孵育30分钟。使用ERK磷酸化-T202/Y204试剂盒(珀金埃尔默公司)测量细胞磷-ERK。抑制百分比使用以下公式计算：抑制％＝100*[1-(X-MIN)/(MAX-MIN)]。X是给定化合物浓度下的FRET信号。MAX是仅在Hs746T和PBS存在下的信号。MIN是仅在培养基存在下作为背景信号的信号。如表13所示，所有配对的双特异性抗体在10nM下对配体非依赖性cMET信号传导表现出抑制活性。

表13.双特异性抗cMET抗体对配体非依赖性信号传导的抑制

实施例10.配体非依赖性信号传导的抑制活性和双特异性抗cMET抗体的抗增殖活性

通过实施例9中描述的方法测量抗cMET双特异性抗体的配体非依赖性信号传导抑制活性。简言之，将Hs746T细胞接种到96孔测定板上，并用抗cMET抗体的连续稀释液处理，并在37℃下孵育18小时。然后，使用ERK磷酸化-T202/Y204试剂盒(珀金埃尔默公司)测量细胞磷-ERK。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC50值。如表14和图4所示，以下测试的所有双特异性抗体06BS01-06BS14均表现出有效的配体非依赖性信号传导抑制活性。

表14.双特异性抗cMET抗体对配体非依赖性信号传导的抑制

对cMET信号传导依赖性细胞Hs746T测量抗cMET双特异性抗体的抗增殖活性。Cell-Titer-Glo测定(普洛麦格公司(Promega))作为基于细胞的测定，以评估抗cMET抗体处理后的细胞活力。简言之，将Hs746T细胞接种到96孔测定板上，用抗cMET双特异性抗体的连续稀释液处理细胞，并在37℃，5％ CO₂下孵育6天。抗体处理后，在每个孔中加入50μlCell-Titer-Glo试剂。将混合物在轨道振荡器上混合10分钟以允许细胞裂解。使用PheraStar(BMG Labtech公司)和发光方案测量发光信号。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC50值。如表15和图5所示，以下测试的所有双特异性抗体06BS01-06BS014对Hs746T(其是依赖于组成型激活的cMET信号传导的细胞系)表现出有效的抗增殖活性。

表15.双特异性抗cMET抗体对Hs746T的抗增殖活性

实施例11.双特异性抗cMET抗体对配体诱导的信号传导的阻断活性

为了评估抗cMET双特异性抗体干扰HGF-cMET相互作用并抑制下游信号传导的活性，将抗体处理后HGF诱导的ERK磷酸化-T202/Y204的抑制用作读数。简言之，将H596细胞(从肺癌分离的上皮样细胞系)接种到96孔测定板中，并在37℃，5％ CO₂下孵育。24小时后，用不含FBS的培养基使细胞饥饿4小时。然后，将抗cMET抗体的连续稀释液添加到每个孔中并在37℃下孵育1小时。向每个孔中添加100pM人HGF，并在37℃下孵育15分钟。然后，丢弃培养基，将1×裂解缓冲液加入测定板中，并在室温下孵育30分钟。使用ERK磷酸化-T202/Y204试剂盒(珀金埃尔默公司)测量细胞磷-ERK。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC50值。如表16和图6所示，双特异性抗cMET抗体06BS01、06BS02、06BS03、06BS11、06BS13表现出阻断HGF诱导的cMET信号传导的强活性。

表16.双特异性抗cMET抗体对配体诱导的信号传导的阻断活性

实施例12.抗cMET抗体的翻译后修饰位点的去除

进行点突变以去除cMET抗体的一些潜在翻译后修饰(PTM)位点。

对于cMET抗体063Ab03210、061Ab15310和063Ab10910，将VH的N末端谷氨酰胺(Q)突变为谷氨酸(E)，以避免N末端Q环化引起的异质性，得到cMET抗体063Ab03210-V1(参见SEQ ID NO:82和64)、061Ab15310-V1(SEQ ID NO:73和64)和063Ab10910-V1(参见SEQ IDNo:72和64)。如表17所示，cMET抗体063Ab03210-V1显示出与亲本抗体063Ab03210相似的KD，cMET抗体061Ab15310-V1显示出与亲本抗体061Ab15310相似的KD并且cMET抗体063Ab10910-V1显示出与亲本抗体063Ab10910相似的KD。cMET抗体的工程化VH序列如表18所示。

表17.cMET抗体063Ab03210、061Ab15310、063Ab10910及其变体的SPR结合亲和力。

抗体变体	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(M)
				063Ab03210	2.72E+5	2.01E-2	7.37E-8
063Ab03210-V1	2.69E+5	1.90E-2	7.05E-8
				061Ab15310	9.73E+4	3.81E-3	3.92E-8
061Ab15310-V1	9.98E+4	3.61E-3	3.61E-8
				063Ab10910	1.27E+5	7.14E-4	5.61E-9
063Ab10910-V1	1.26E+5	6.94E-4	5.49E-9

表18.cMET抗体的工程化VH序列

cMET抗体063Ab10910的CDR工程化

对于063Ab10910，HCDR3中NM基序的潜在脱酰胺和氧化位点突变为多种氨基酸残基。表面等离子体共振(Biacore 8K，通用生命科学公司)用于表征PTM位点去除后与cMETECD蛋白(目录号MET-H5227，百普赛斯生物科技股份有限公司(ACRO Biosystems))的相对结合亲和力。表19总结了每个变体的HCDR和VH序列。LCDR和轻链序列(SEQ ID NO:64)保持与亲本抗体相同的共同轻链。如表20所示，变体063Ab10910-P28、063Ab10910-P27、063Ab10910-P37、063Ab10910-P26和063Ab10910-P19显示出与亲本cMET抗体063Ab10910相当的结合亲和力。

表19.063Ab10910及其变体的HCDR和VH序列。

表20.cMET抗体063Ab10910及其变体的SPR结合亲和力。

抗体变体	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(M)
				063Ab10910	7.10E+04	6.07E-04	8.55E-09
063Ab10910-P28	7.00E+04	3.96E-04	5.66E-09
				063Ab10910-P27	7.41E+04	4.96E-04	6.69E-09
063Ab10910-P37	7.05E+04	5.52E-04	7.83E-09
				063Ab10910-P26	6.90E+04	5.48E-04	7.94E-09
063Ab10910-P19	5.14E+04	1.06E-03	2.06E-08

实施例13.抗EGFR x cMET x cMET三特异性抗体的构建

抗EGFR x cMET x cMET三特异性抗体(其中两个cMET臂结合不同的抗cMET表位)用来自抗cMET抗体063Ab10910-P19和063Ab03210-V1的VH和VL序列以及抗EGFR抗体(用于VH的SEQ ID No:142和用于VL的SEQ ID No:143)构建。Fc区采用“杵臼”技术来促进Fc异二聚化以形成由063Ab10910-P19和063Ab03210-V1臂组成的双特异性cMET抗体。将抗EGFR抗体重新格式化为scFv，然后用GS接头序列(GGGGS)₄(SEQ ID NO:139)与双互补位抗cMET抗体的Fc C末端融合。用多个正电荷或负电荷氨基酸进一步工程化两个抗cMET臂(063Ab10910-P19和063Ab03210-V1)的框架，以引入Fc异二聚体和同二聚体之间的pI差异，从而促进在离子交换色谱中纯化靶三特异性分子，得到BGA-109(VH：SEQ ID NO:144)和BGA-032(VH：SEQ ID NO:145)。表21总结了构建的三特异性抗体TE-642的序列。

表21.抗EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-642的构建序列

抗体用内部IgG1/Cκ真核表达载体构建，用ExpiCHO表达系统(赛默飞世尔科技公司(Thermofisher Scientific))产生，其含有30mg/L(0.1mM)岩藻糖基转移酶抑制剂2F-全乙酰-岩藻糖(西格玛奥德里奇公司)来抑制岩藻糖基化以增强效应子功能，并用MabSelectSuRe蛋白A色谱树脂(思拓凡公司(Cytiva))纯化，然后用HP-SP阳离子交换色谱(思拓凡公司)纯化。然后将获得的具有所需纯度的抗体用于进一步表征。

实施例14.多种形式的抗EGFR x cMET x cMET三特异性抗体的构建

除了具有两个融合到Fc C末端的抗EGFR scFv的TE-642外，还构建了具有不同EGFR臂价和EGFR臂方向的多种三特异性抗体形式，以进一步优化这些三特异性的抗体的功能。特别地，将单价或二价EGFR scFv融合到Fc C末端、轻链C末端、轻链N末端和重链N末端。这些不同的价态和方向组合产生了三特异性抗体TE-644、TE-645、TE-646、TE-647和TE-648。这五种抗体以及TE-642的形式如图7所示。这些抗体的序列总结在表22中。

表22.不同形式的抗EGFR x cMET x cMET三特异性抗体的构建序列

这五种抗体用内部IgG1/Cκ真核表达载体构建，用ExpiCHO表达系统(赛默飞世尔科技公司)产生，其含有30mg/L(0.1mM)岩藻糖基转移酶抑制剂2F-全乙酰-岩藻糖(西格玛奥德里奇公司)来抑制岩藻糖基化以增强效应子功能，并用MabSelect SuRe蛋白A色谱树脂(思拓凡公司)纯化，然后用HP-SP阳离子交换色谱(思拓凡公司)纯化。然后将获得的具有所需纯度的抗体用于进一步表征。

实施例15.TE-647与人EGFR和cMET蛋白的结合亲和力

表面等离子体共振(Biacore 8K，通用生命科学公司)用于表征三特异性抗体TE-647以及对照抗体JNJ-372(埃万妥单抗，从https://www.imgt.org/mAb-DB/下载的序列，用“受控Fab-臂交换”程序10内部产生，并用0.1mM岩藻糖基转移酶抑制剂2F-全乙酰-岩藻糖抑制岩藻糖基化以增强效应子功能)和LY3164530(从专利WO 2015100104A1中提取的序列)与人cMET ECD蛋白(目录号10692-H08H，义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological))和人EGFR蛋白(目录号10001-H08H，义翘神州科技股份有限公司)的结合亲和力。简言之，将抗人IgG Fc抗体(目录号29234600，通用生命科学公司)通过胺偶联固定在活化的CM5生物传感器芯片(目录号29149603，通用生命科学公司)上。使三特异性抗体TE-647或对照抗体JNJ-372和LY3164530流过芯片表面并被抗人IgG抗体捕获。然后将人cMET和人EGFR蛋白的连续稀释液注射到抗体捕获的表面上，并通过使用一对一Langmuir结合模型(Biacore^TMInsight评估软件，通用生命科学公司)分析表面等离子共振信号的变化以计算缔合速率(k_a)和解离速率(k_d)。将平衡解离常数(KD)计算为比率k_a/k_d。结合亲和力总结在表23中。

表23.三特异性抗体TE-647和对照抗体对人cMET和人EGFR蛋白的SPR结合亲和力。

测试Ab	测试抗原	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(M)
					TE-647	人cMet	1.67E+05	2.49E-04	1.49E-09
JNJ-372	人cMet	1.85E+05	1.56E-04	8.45E-10
					LY3164530	人cMet	7.84E+04	2.32E-04	2.96E-09
TE-647	人EGFR	1.50E+05	1.06E-03	7.08E-09
					JNJ-372	人EGFR	9.49E+04	8.72E-04	9.19E-09
LY3164530	人EGFR	7.97E+05	8.65E-04	1.09E-09

实施例16.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体的ADCC活性

ADCC是促成构建的三特异性抗体的抗肿瘤活性的机制之一。通过与人原代PBMC共培养，评估针对EGFR信号传导依赖性细胞系H1975(来自非小细胞肺癌的细胞系，其为EGFR信号传导依赖性和配体依赖性)和c-MET信号传导依赖性细胞系Hs746T(人胃癌细胞，其为cMET信号传导依赖性和配体依赖性)的ADCC活性。H1975和Hs746T细胞被工程化以表达纳米荧光素酶，其被捕获在细胞质中并在细胞裂解时被释放。简言之，将人PBMC(1×10⁵)与H1975/Nluc(5×10³/孔)或Hs746T/Nluc(5×10³/孔)在具有连续稀释度(0.0032～50nM)的测试抗体存在下，在96孔V形板中共培养16小时。然后，收集细胞上清液，并通过Nano-Glo荧光素酶测定系统(普洛麦格公司，#N1120)测量荧光素酶信号。在细胞培养基中在全人血清存在或不存在下测量活性。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC₅₀值。如表24和图8所示，TE-644、TE-645、TE-646和TE-647对H1975表现出比JNJ-372更好的ADCC活性(图8A和8B)；以下所有三特异性抗体在有血清或没有血清的情况下对Hs746T显示出比JNJ-372更好的活性(图8C和8D)。

表24.三特异性抗体的ADCC活性

实施例17.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体的ADCP活性

ADCP是另一种Fc介导的功能，有助于构建的三特异性抗体的抗肿瘤活性。通过使用人巨噬细胞测量对H1975和Hs756T的ADCP活性。简言之，人巨噬细胞是从人PBMC衍生和分化的。将人巨噬细胞(1×10⁵/孔)与CFSE预标记的H1975(5×10⁴)或Hs746T(5×10⁴)在抗体(0.0032～50nM)存在下在96孔U形板中共培养2小时，然后进行流式细胞术测量CFSE标记和CD11b阳性巨噬细胞的百分比，这反映了ADCP活性。在细胞培养基中在全人血清存在或不存在下测量活性。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定EC₅₀值。如表25和图9所示，所有三特异性抗体均表现出对肿瘤细胞的ADCP活性。TE-646和TE-647对H1975(图9A和9B)和Hs746T(图9C和9D)表现出与JNJ-372相当的ADCP活性。

表25.三特异性抗体的ADCP活性

实施例18.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体对EGFR或cMET信号传导依赖性癌细胞系的抗增殖活性

从机制上讲，EGFR x cMET x cMET三特异性抗体通过下调细胞表面的这些激酶受体来抑制EGFR或c-MET信号传导，从而抑制c-MET和EGFR信号传导依赖性细胞系的增殖。使用Cell-Titer-Glo测定(普洛麦格公司)来评估这些三特异性抗体对两种类型的细胞系的增殖抑制活性。选择依赖于EGFR信号传导(配体非依赖性)的非小细胞肺癌细胞系：H1975和H2073，以及依赖于c-MET信号传导(配体非依赖性)的细胞系：Hs746t和EBC-1(人鳞状肺癌细胞系)作为评估模型。简言之，将细胞接种到96孔测定板上，用抗体的连续稀释液处理，并在37℃，5％ CO₂下孵育6天。处理后，在每个孔中加入50μl Cell-Titer-Glo试剂。将板在轨道振荡器上振荡10分钟以允许细胞裂解。使用BMG PheraStar和发光方案测量发光信号。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC₅₀值。如表26和图10A-10B所示，与JNJ-372相比，所有三特异性抗体对EGFR信号传导依赖性细胞系(H1975和H2073)表现出相当或更好的抗增殖活性。引人注目的是，如表26和图10C-10D所示，所有三特异性抗体对c-MET信号传导驱动的细胞系(Hs746t和EBC-1)都表现出强大的抗增殖活性，而JNJ-372没有表现出这种活性。

表26.三特异性抗体对EGFR或c-MET信号传导依赖性癌细胞系的抗增殖活性

实施例19.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体对新生儿人表皮角质形成细胞(HEKn)的抗增殖活性

皮肤相关不良事件是由在皮肤细胞，特别是表皮角质形成细胞中命中WT EGFR引起的典型的靶向效应。为了评估EGFR x cMET x cMET三特异性抗体对正常角质形成细胞的皮肤毒性风险，对HEKn细胞进行抗增殖测定。临床批准的药物JNJ-372在患者中没有表现出严重的皮肤相关风险。在I期临床试验中，临床阶段LY3164530导致很大比例的皮肤相关不良事件，包括斑丘疹/痤疮样皮炎(83％，3/4级17％)¹¹。两种抗体均在内部生成，并用作测定中的对照。通过实验，将HEKn细胞接种到96孔测定板上，用抗体的连续稀释液处理，并在37℃，5％ CO₂下孵育6天。处理后，向每个孔中加入50μl Cell-Titer-Glo试剂(普洛麦格公司)。将板在轨道振荡器上振荡10分钟以允许细胞裂解。使用BMG PheraStar和发光方案测量发光信号。通过用GraphPad Prism将剂量-反应数据与四参数逻辑模型拟合来确定IC₅₀值。如表27和图11所示，TE-642、TE-644、TE-647和TE-648对HEKn细胞的抗增殖活性弱于LY3164530。TE-647表现出与JNJ-372相当的效力(IC₅₀)和较低的功效(I_max)，这推断出对正常人角质形成细胞的毒性低于JNJ-372。

表27.三特异性抗体对HEKn的抗增殖活性

实施例20.EGFR x cMET x cMET三特异性抗体TE-642、TE-646和TE-647在体内对人肺肿瘤异种移植物具有活性

在移植HCC827(具有EGFR外显子19缺失(E19del)的肺腺癌细胞系)(图12和图13)和H1975(具有EGFR L858R/T790M，没有进行cMET扩增)(图14和图15)人肺癌细胞的小鼠中评估TE-642、TE-646、TE-647和JNJ-372的体内功效。

雌性BALB/c裸鼠在右胁腹皮下植入5×10⁶个HCC827或H1975细胞(EGFR突变驱动模型，具有EGFR L858R/T790M，没有进行cMET扩增)/200μLPBS和50％ Matrigel。接种后，每周两次使用游标卡尺在两个维度上确定肿瘤体积，并使用如下公式以mm³表示：V＝0.5(a×b²)，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。当肿瘤的平均体积达到约200-250mm³时，将患有HCC827或H1975肿瘤的小鼠随机分为3组，每组6或8只动物，并用媒介物、JNJ-372或三特异性抗体(TE-647、TE-646或TE-642)以10mg/kg每两周一次(BIW)静脉内治疗3周。将部分消退(PR)定义为在三次连续测量中肿瘤体积小于第一天给药测量的起始肿瘤体积的50％，完全消退(CR)定义为在三次连续测量中肿瘤体积小于14mm³。数据表示为平均肿瘤体积±平均值的标准差(SEM)。使用以下公式计算肿瘤生长抑制(TGI)：

经治疗t＝在时间t经治疗的肿瘤体积

经治疗t₀＝在时间0经治疗的肿瘤体积

安慰剂t＝在时间t安慰剂肿瘤体积

安慰剂t₀＝在时间0安慰剂肿瘤体积

在没有进行c-MET扩增的异种移植物(EGFR突变驱动模型，HCC827模型和H1975模型)中，与JNJ-372相比，TE-642在HCC827模型中显示出更低的TGI(81％对113％)和更低的CR率(0对60％)(如图12所示)，在H1975模型中显示出更低的TGI(6％对67％)(如图14所示)。

TE-646在没有进行c-MET扩增的异种移植物(EGFR突变驱动模型，H1975模型)中在抑制肿瘤生长方面与JNJ-372相当，如图14所示。

TE-647在没有进行c-MET扩增的异种移植物(EGFR突变驱动模型)中在肿瘤生长抑制方面与JNJ-372相当，即在HCC827模型(如图13所示)和H1975模型(如图15所示)中。

实施例21.三特异性抗体TE-647在动物模型中抑制人肺和胃肿瘤的肿瘤生长

在移植Hs746T(人胃癌细胞，图16)和EBC-1(人鳞状肺癌细胞，图17)的小鼠中评估TE-647和JNJ-372的体内功效。

雌性BALB/c裸鼠在右胁腹皮下植入5×10⁶个Hs756T或EBC-1(没有EGFR突变的cMET扩增驱动模型)/200μL PBS和50％ Matrigel。接种后，每周两次使用游标卡尺在两个维度上确定肿瘤体积，并使用如下公式以mm³表示：V＝0.5(a×b²)，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。当肿瘤的平均体积达到约200-250mm³时，将患有Hs746T或EBC-1肿瘤的小鼠随机分为7组，每组6只动物，并用媒介物、JNJ-372或TE-647以1、3、10mg/kg BIW静脉内治疗3周。将部分消退(PR)定义为在三次连续测量中肿瘤体积小于第一天给药测量的起始肿瘤体积的50％，完全消退(CR)定义为在三次连续测量中肿瘤体积小于14mm³。数据表示为平均肿瘤体积±平均值的标准差(SEM)。使用以下公式计算肿瘤生长抑制(TGI)：

经治疗t＝在时间t经治疗的肿瘤体积

经治疗t₀＝在时间0经治疗的肿瘤体积

安慰剂t＝在时间t安慰剂肿瘤体积

安慰剂t₀＝在时间0安慰剂肿瘤体积

三特异性抗体TE-647在人胃和肺肿瘤异种移植物(cMET扩增驱动模型)中显示出强大且可再现的抗肿瘤作用。在进行c-MET扩增的异种移植物(Hs746T和EBC-1)中，TE-647显示出比JNJ-372更好的肿瘤生长抑制作用，并且其效果是剂量依赖性的(图16和图17)，表明TE-647在进行c-MET扩增的模型中具有优越的抗肿瘤活性。

实施例22.TE-647的理化性质

疏水性评估

为了使用HIC测定TE-647的疏水性，在分析之前，用流动相A溶液(1.5M硫酸铵，50mM磷酸钠，pH 7.0)稀释50μg样品(1mg/ml)，以达到约1M的最终硫酸铵浓度。使用MABPacHIC-10柱，以0.5mg/min的流速在29min内流动相A和流动相B溶液(50mM磷酸钠，pH 7.0)的线性梯度。在A280吸光度处监测峰值保留时间。结果总结在表28中。TE-647没有显示疏水性风险。

热稳定性评估(Tm和Tagg)

使用与静态光散射偶联的荧光评估热去折叠转变中点Tm(℃)和聚集起始温度(Tagg)。使用(非链贸易有限公司(Unchained labs)，加利福尼亚州普莱森顿(Pleasanton,CA))系统同时测量荧光和静态光散射。在测量过程中，将9μL蛋白质样品(1mg/mL)加载到比色皿中；将样品在20℃下保持120秒，然后以0.3℃/min的速率升温至95℃。在266nm激发后，收集荧光和静态光散射(266nm)。测量后，将数据加载到Unit分析软件中。Tm从荧光得到，Tagg从静态光散射得到。结果总结在表28中。TE-647的Tm和Tagg分别为67.3℃和60.0℃。

自缔合评估

AC-SINS测定通过捕获金胶体表面的mAb来测量蛋白质自相互作用，金胶体在可见光的频率下显示表面共振振荡。当固定化的抗体自相互作用时，胶体聚集，改变振荡频率以吸收更长的波长。将金纳米颗粒与80/20(v/v)捕获抗体/非捕获抗体混合物一起孵育。然后将包覆的金纳米颗粒离心并重悬于PBS中。将样品在缀合缓冲液中稀释至0.05mg/ml，并将45μl每种稀释液加载到384孔板上。然后将5μl先前制备的金纳米颗粒加入包括mAb和缓冲液对照的板的每个孔中。然后用铝盖覆盖板，在室温下孵育2小时，并在3000rpm下快速离心，然后使用板读取器读取450至650nm的每个孔的吸收度光谱。记录并分析每个样品的光谱，与缓冲液和mAb对照相比，最大吸收峰红移，红移及其强度指示测试mAb样品的自相互作用倾向。结果总结在表28中。波长偏移为4.8nm，没有显示自缔合风险。

表28.TE-647的生物物理性质

参考文献

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5.A Prospective,Molecular Epidemiology Study of EGFR Mutations inAsian Patients with Advanced Non–Small-Cell Lung Cancer of AdenocarcinomaHistology(PIONEER).J Thorac Oncol(2014),9:154–162

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11.A phase I study of LY3164530,a bispecific antibody targeting METand EGFR,in patients with advanced or metastatic cancer.Cancer Chemotherapyand Pharmacology(2018)82:407–418。

Claims

1.一种特异性结合人cMET的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:94的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(17)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；或

(18)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3。

2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含与SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含与SEQ ID NO:64至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；

3.如以上权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:85、SEQID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

4.如以上权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：

(1)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQID NO:64的氨基酸序列；

5.如以上权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

6.一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含

特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域，以及

特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域，

7.如权利要求6所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(12)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:84的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(13)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:86的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(14)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:88的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；

(15)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:90的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；或

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3。

8.如权利要求6-7中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

9.如权利要求8所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域中，SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

10.如权利要求6-9中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

11.如权利要求6-10中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

12.如权利要求6-11中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

13.如权利要求12所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域中，SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:59、SEQID NO:83、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

14.如权利要求6-13中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

15.如权利要求6-14中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(16)重链可变区(VH)，该重链可变区包含(a)SEQ ID NO:6的HCDR1(重链互补决定区1)，(b)SEQ ID NO:7的HCDR2，(c)SEQ ID NO:92的HCDR3，以及轻链可变区，该轻链可变区包含：(d)SEQ ID NO:66的LCDR1(轻链互补决定区1)，(e)SEQ ID NO:67的LCDR2，和(f)SEQ IDNO:68的LCDR3；并且

16.如权利要求6-15中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

(11)重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:93的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；或

17.如权利要求6-14中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

18.如权利要求6-14和17中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

19.如权利要求6-18中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

20.如权利要求6-19中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；以及

21.如权利要求6-20中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体是双特异性抗体或三特异性抗体。

22.如权利要求6-21中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:96的第二重链恒定区；或

其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:96的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第二重链恒定区。

23.如权利要求6-22中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含特异性结合人肿瘤相关抗原(TAA)的第三抗原结合结构域。

24.如权利要求23中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该TAA是EGFR。

25.如权利要求6-24中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含氨基酸接头，其中该氨基酸接头是SEQ ID NO:97至SEQ IDNO:139的任何序列。

26.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区。

27.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含IgG1亚类的重链恒定区和κ类型的轻链恒定区。

28.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。

29.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或是低岩藻糖基化的。

30.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

31.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。

32.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有延长半衰期的IgG1 Fc。

33.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与细胞毒素缀合。

34.如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段经由细胞毒素接头与细胞毒素缀合。

35.一种药物组合物，该药物组合物包含如以上权利要求中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载剂。

36.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如权利要求1-34中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段，或如权利要求35所述的药物组合物。

37.如权利要求36所述的方法，其中该癌症携带cMET基因改变和/或癌细胞的生长由cMET信号传导驱动。

38.如权利要求37所述的方法，其中该cMET信号传导是配体非依赖性的。

39.如权利要求37所述的方法，其中该cMET信号传导是配体依赖性的。

40.如权利要求37所述的方法，其中该cMET基因改变是cMET过表达、基因组扩增和/或突变，其导致组成型活性cMET信号传导。

41.如权利要求36-40中任一项所述的方法，其中该癌症是胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、肾癌、乳腺癌或脑癌。

42.如权利要求41所述的方法，其中该肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)。

43.如权利要求42所述的方法，其中该非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。

44.如权利要求41所述的方法，其中该肝癌是肝细胞癌。

45.如权利要求41所述的方法，其中该头颈癌是头颈部鳞状细胞癌。

46.如权利要求36-45中任一项所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段与另一种治疗剂组合施用。

47.如权利要求46所述的方法，其中该治疗剂是免疫检查点抑制剂。

48.如权利要求46所述的方法，其中该治疗剂是抗PD-1抗体。

49.如权利要求48所述的方法，其中该抗PD1抗体是替雷利珠单抗。

50.一种多特异性抗体或其抗原结合片段，其包含

特异性结合人cMET的第一表位的第一抗原结合结构域；

特异性结合人cMET的第二表位的第二抗原结合结构域；以及

特异性结合人EGFR的第三抗原结合结构域；

51.如权利要求50所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

52.如权利要求50-51中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

53.如权利要求52所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域中，SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:73、SEQID NO:14、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:76、SEQID NO:29、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:79、SEQID NO:44、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

54.如权利要求50-53中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

55.如权利要求50-54中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

56.如权利要求50-55中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

57.如权利要求56所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中在特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域中，SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:59、SEQID NO:83、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:64内已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。

58.如权利要求50-57中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

59.如权利要求24和50-58中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

60.如权利要求24和50-59中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

61.如权利要求24和50-60中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

62.如权利要求24和50-61中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

63.如权利要求24和50-60中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

64.如权利要求24、50-60和63中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：

特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含：

65.如权利要求24和50-64中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

66.如权利要求24和50-65中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中

特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:144的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQID NO:64的氨基酸序列；

特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，该重链可变区包含SEQ ID NO:145的氨基酸序列，以及轻链可变区(VL)，该轻链可变区包含SEQID NO:64的氨基酸序列；以及

67.如权利要求50-66中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。

68.如权利要求24和50-66中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域是单克隆抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段；

69.如权利要求24和50-68中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含scFv，该scFv包含具有SEQ ID NO:142的氨基酸的VH和具有SEQ ID NO:143的氨基酸的VL；

任选地，该VH和VL经由第一氨基酸接头结合；

优选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139。

70.如权利要求24和50-69中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人EGFR的该第三抗原结合结构域包含具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列的scFv。

71.如权利要求24和50-70中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体是三特异性抗体。

72.如权利要求50-71中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区。

73.如权利要求50-72中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含IgG1亚类的重链恒定区和κ类型的轻链恒定区。

74.如权利要求50-73中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。

75.如权利要求50-74中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或是低岩藻糖基化的。

76.如权利要求50-75中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是无岩藻糖基化的。

77.如权利要求50-76中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。

78.如权利要求50-77中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有延长半衰期的IgG1Fc。

79.如权利要求50-78中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:95的第一重链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含含有SEQ ID NO:96的第二重链恒定区；或

80.如权利要求50-79中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中特异性结合人cMET的第一表位的该第一抗原结合结构域包含第一轻链恒定区，以及特异性结合人cMET的第二表位的该第二抗原结合结构域包含第二轻链恒定区；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的。

81.如权利要求50-80中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段进一步包含第二氨基酸接头，其中该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:97至SEQ ID NO:139的任何序列，优选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139。

82.如权利要求50-81中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

任选地，该第二重链恒定区为SEQ ID NO:95，并且该第一重链恒定区为SEQ ID NO:96；或该第二重链恒定区为SEQ ID NO:96，并且该第一重链恒定区为SEQ ID NO:95；

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

83.如权利要求50-82中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

84.如权利要求50-83中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、第三多肽和第四多肽，其中

任选地，该第一氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第二氨基酸接头为SEQ ID NO:139；

任选地，该第一轻链恒定区和该第二轻链恒定区是相同的；

任选地，该第三多肽和该第四多肽是相同的。

85.如权利要求50-84中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，该多特异性抗体或其抗原结合片段包含第一多肽、第二多肽、和第三多肽，其中

86.如权利要求50-85中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含

87.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求50-86中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，和药学上可接受的载剂。

88.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如权利要求50-86中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，或如权利要求87所述的药物组合物。

89.如权利要求88所述的方法，其中该癌症携带cMET基因改变和/或癌细胞的生长由cMET信号传导驱动。

90.如权利要求89所述的方法，其中该cMET信号传导是配体非依赖性的。

91.如权利要求89所述的方法，其中该cMET信号传导是配体依赖性的。

92.如权利要求89所述的方法，其中该cMET基因改变是cMET过表达、基因组扩增和/或突变，其导致组成型活性cMET信号传导。

93.如权利要求88所述的方法，其中该癌症携带EGFR激活突变和/或癌细胞的生长由EGFR信号传导驱动；任选地，该EGFR激活突变是缺失或点突变。

94.如权利要求93所述的方法，其中该EGFR信号传导是配体非依赖性的。

95.如权利要求93所述的方法，其中该EGFR信号传导是配体依赖性的。

96.如权利要求88-95中任一项所述的方法，其中该癌症是胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、头颈癌、肾癌、乳腺癌或脑癌。

97.如权利要求96所述的方法，其中该肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)。

98.如权利要求97所述的方法，其中该非小细胞肺癌是鳞状非小细胞肺癌。

99.如权利要求96所述的方法，其中该肝癌是肝细胞癌。

100.如权利要求96所述的方法，其中该头颈癌是头颈部鳞状细胞癌。

101.如权利要求88-100中任一项所述的方法，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段与另一种治疗剂组合施用。

102.如权利要求101所述的方法，其中该治疗剂是免疫检查点抑制剂。

103.如权利要求101所述的方法，其中该治疗剂是抗PD-1抗体。

104.如权利要求103所述的方法，其中该抗PD1抗体是替雷利珠单抗。

105.一种分离的核酸，该分离的核酸编码如权利要求1至34和50-86中任一项所述的抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段。

106.一种载体，该载体包含如权利要求105所述的核酸。

107.一种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求105所述的核酸或如权利要求106所述的载体。

108.一种用于产生抗体、多特异性抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括培养如权利要求107所述的宿主细胞，以及从培养物中回收该抗体、多特异性抗体或抗体片段。