CN120569223A

CN120569223A - 多层囊泡药物制剂

Info

Publication number: CN120569223A
Application number: CN202380064730.5A
Authority: CN
Inventors: 黎世达; 努乔德·艾尔·法耶兹; 罗兰·博特格; 斯瑞莫伊·戈什; 赵博瀚; 李静
Original assignee: Weixin Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Weixin Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2022-07-07
Filing date: 2023-07-07
Publication date: 2025-08-29
Also published as: WO2024010886A2; EP4551194A2; WO2024010886A3; JP2025537677A

Abstract

本发明提供一种多层囊泡活性医药成分(MLV‑API)药物制剂，其包含溶于碱性水溶液的MLV，其中多层囊泡(MLV)包覆活性医药成分(API)，且其中API包含弱碱化合物。MLV‑API的制备无需使用挤出或透析过程，且能够达到90％的高包覆率以及大于15重量％的高药物/脂质比。本发明亦提供一种用于制备MLV‑API药物制剂的方法及试剂盒。

Description

多层囊泡药物制剂

技术领域

本发明是有关制备具有高包覆率的多层囊泡药物制剂的组合物及方法，该多层囊泡药物制剂无需挤出或透析过程即可制备。

背景技术

大多数医药仅以固体剂型(诸如片剂及胶囊)存在，其对儿童而言难以吞咽^1,2。儿科用药需要暂时调配彼等成人剂型。此通常涉及将成人剂型分成较小的剂量，随后将其磨成粉末并与食物或液体(诸如水、牛奶或果汁)混合。不幸的是，此种常见的做法与药物依从性较差有关^3,4。首先，剂量通常不准确，对许多治疗窗较窄的药物而言会造成安全性及功效问题。其次，许多药物具有令人不快的味道，无法通过食物或调味液体来有效掩盖。通常，儿童会吐出药物或拒绝用药，导致治疗失败⁵。

Tang等人⁶首次证实，微脂体小型单层囊泡(small unilamellar vesicle，SUV)为制备对儿童友善药物制剂的有效平台。其等将一种非常苦的药物甲氟喹(Mef)封装在SUV微脂体的水性核心中，将药物分散在溶液形式中以便吞咽，同时防止Mef分子与口腔内的味蕾直接接触，从而完全掩盖味道。在口服摄入后，SUV微脂体能有效地在酸性胃液及含有胆盐的肠液中释放有效负载(payload)，导致与标准悬浮液制剂相比，口服吸收量略有增加。然而，制造SUV微脂体的过程繁琐、耗时、昂贵且规模难以扩大。该方法涉及利用硫酸铵水溶液将胆固醇与磷脂质(DSPC)组成的脂质薄膜水合以制成微脂体多层囊泡(MLV)，随后借由薄膜挤出来减少颗粒尺寸及层状性(lamellarity)，从而产生微脂体SUV。随后，将SUV与10％蔗糖进行透析以形成跨膜梯度。最终，将药物与SUV混合并培养，促使药物主动负载至SUV核心中⁶。薄膜挤出及透析过程对于扩大规模而言特别具有挑战性。此外，长期以来认为，由于脂质双层之间的水性空间有限，因此药物无法主动负载至MLV中。然而，本发明首次成功进行一种具有高包覆率及D/L比的MLV微脂体的主动负载方法。因此，需要一种基于MLV的替代微脂体技术，该技术不需要薄膜挤出及透析，使得可实质上更轻松地进行制备及扩大制造规模。

发明内容

本发明提供一种多层囊泡活性医药成分(MLV-API)药物制剂，其包含溶于碱性水溶液的多层囊泡(MLV)及活性医药成分(API)，其中该API包含弱碱药物；其中该MLV包覆该API；其中该包覆API的MLV的药物/脂质比为约15％至约25重量％之间；且其中该MLV内部的pH低于该MLV外部的碱性水溶液的pH。

本发明亦提供一种制备MLV-API药物制剂的方法，其包含以下步骤：a.借由酸性溶液水合有机组分而形成MLV；d.将碱性水溶液添加至步骤a中形成的MLV中；e.将API溶解于水中以形成API溶液；f.将步骤e的API溶液与步骤d的含有MLV的碱性水溶液混合以产生主动负载溶液，其中在该MLV的内部与外部之间建立pH梯度，以促进该API的主动负载；g.培养步骤f的主动负载溶液，使该API主动负载至该MLV中，其中该API包含弱碱；其中该有机组分包含一或多种能够形成该MLV的脂质；且其中该制备方法不包括使用透析或挤出过程。

本发明亦提供一种MLV-API药物制剂制备试剂盒，其包含API、碱性水溶液及冻干的MLV，其中该API包含呈粉末形式或能够研磨成粉末形式的任何形式的弱碱药物；其中分开储存该三个组分；且其中将该三个组分混合会导致该API主动负载至该MLV中，而无需任何额外成分且无需挤出及透析过程即可形成MLV-API药物制剂。

附图说明

图1说明了氯喹(CQ)在本发明的MLV药物制剂的各种实施例中的包覆率，各自具有不同的药物/脂质比(D/L)。

图2A说明了尼罗蓝(Nile Blue，NB)在本发明的MLV药物制剂的各种实施例中的不同药物/脂质比(D/L)下的包覆率。图2B说明了HCQ在本发明的MLV药物制剂中的不同药物/脂质比(D/L)下的包覆率。

图3说明了本发明的空的MLV及MLV-CQ药物制剂的表征。

图4说明了本发明的MLV-NB及MLV-HCQ药物制剂的表征。

图5A说明了本发明的MLV药物制剂的空的MLV的低温电子显微镜(cryo-TEM)影像，且图5B说明了本发明的MLV药物制剂的MLV-CQ在20重量％的药物/脂质比(D/L)下的cryo-TEM影像。

图6说明了本发明的MLV药物制剂试剂盒的实施例及本发明的制剂调配过程的实施例的示意图。该试剂盒包括一瓶冻干的MLV(A)及一瓶Na₂CO₃水溶液(B)。步骤1：利用预先定量的水将MLV重组；步骤2：使用预定体积的NaCO₃水溶液将pH调整为8-10；步骤3：将片剂/胶囊调配成粉末，添加至MLV中，并充分混合；步骤4：使用前，在室温下将混合物培养1小时。

图7A说明了本发明的冻干的MLV药物制剂在室温下储存至多8周的氯喹(chloroquine，CQ)包覆率。图7B说明了本发明的MLV-CQ药物制剂在4℃下储存至多4周的CQ包覆率。

图8说明了借由使用本发明的MLV药物制剂试剂盒的实施例将一定D/L比范围的羟氯喹(HCQ)成人片剂调配成液体制备物的HCQ在本发明的MLV药物制剂的实施例中的包覆率。

图9说明了本发明的MLV-CQ(20％，w/w)药物制剂的实施例在补充有3mM牛磺胆酸钠的模拟唾液(SS)、模拟胃液(SGF)及模拟肠液(SIF)中的体外药物释放模式(releaseprofile)。

图10说明了向雌性CD-1小鼠口服给予10mg CQ/kg后本发明的MLV-CQ药物制剂的实施例及游离CQ的药物动力学模式(pharmacokinetic profile)。

图11说明了向雌性CD-1小鼠口服给予10mg CQ/kg后本发明的MLV-CQ药物制剂的实施例及CQ溶液的药物动力学参数。

图12说明了使用动态光散射(DLS)对本发明的空的MLV药物制剂进行尺寸及PDI测量。

图13说明了使用动态光散射对本发明的MLV-CQ药物制剂的实施例进行尺寸及PDI测量。

图14说明了使用动态光散射对本发明的MLV-HCQ药物制剂的实施例进行尺寸及PDI测量。

图15说明了使用动态光散射对本发明的MLV-NB药物制剂的实施例进行尺寸及PDI测量。

图16说明了本发明的MLV-可乐定药物制剂在4℃储存期间可乐定的留存率(RR，％)。

图17说明了本发明的MLV-可乐定药物制剂在4℃储存期间可乐定包覆率(EE％)随时间的变化。

具体实施方式

本发明的组合物可包含、组成自或基本上组成自本文所述的本发明基本要素及限制以及本文所述的任何额外或可选的成分、组分或限制。

如本说明书及权利要求范围中所使用的，单数形式“一”、“一个”及“该”包括复数个参考对象，除非上下文中另有明确规定。举例而言，术语“一个”细胞包括复数个细胞，包括其混合物。

量值中的“约”意指基于指示值的平均偏差最大为±20％，较佳为±10％或更佳为±5％。举例而言，约30摩尔％阴离子脂质的量意指相对于总脂质/两亲体摩尔浓度为30摩尔％±6摩尔％，较佳为30摩尔％±3摩尔％或更佳为30摩尔％±1.5摩尔％阴离子脂质。

化合物的“治疗上有效量”包含给予达到预期结果所需的量。所需的确切量因受试者而异，其取决于受试者的物种、年龄、一般状况、疾病严重程度、给予方式、期望结果等。在本发明的某些实施例中，化合物或医药组合物的“治疗上有效量”意指有效缓解受试者或生物样本(例如，细胞)中本文所揭露的任何疾病症状、抑制其进展或使其逆转的量。在某些实施例中，疾病症状缓解约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或约99％。在某些实施例中，疾病进展抑制约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或约99％。在某些实施例中，化合物抑制疾病进展至少约25％、至少约50％、至少约75％或至少约90％。在某些实施例中，疾病被逆转约1％、约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约99％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

“受试者”、“个体”或“患者”在本文中可互换使用，其意指脊椎动物，较佳为哺乳动物，更佳为人类。哺乳类动物包括但不限于鼠科、猿类、人类、农场动物、竞技动物及宠物。

“单层囊泡”为球形囊泡，包括一个脂质双层薄膜，该脂质双层薄膜界定出单一封闭水性隔室(aqueous compartment)。双层薄膜包括两层脂质；内层及外层(小叶(leaflet))。脂质分子外层以其亲水性头部朝向外部水性环境且其疏水性尾部向下指向微脂体内部。脂质内层直接位于外层下方，该脂质的头部面向微脂体的水性内部，且其尾部朝向脂质外层的尾部。

“多层囊泡”包括超过一个脂质双层薄膜，该薄膜界定出超过一个封闭水性隔室。该薄膜呈同心排列，使得不同的薄膜被水性隔室分开，如同洋葱一般。

本发明提供一种多层囊泡活性医药成分(MLV-API)药物制剂，其包含溶于碱性水溶液的多层囊泡(MLV)，其中MLV包覆活性医药成分(API)且其中API包含弱碱化合物。在一实施例中，包覆在MLV内部的API包含氯喹(chloroquine，CQ)、CQ衍生物(例如，羟氯喹(HCQ))、可乐定(clonidine)、可乐定衍生物、伊马替尼(imatinib)、普萘洛尔(propranolol)、毛果芸香碱(pilocarpine)、美洛昔康(meloxicam)、阿立哌唑(aripiprazole)、氯丙嗪(chlorpromazine)、R848、咪喹莫特(imiquimod)、甲氟喹(mefloquine)及伯胺奎(primaquine)或其医药上可接受的盐。在一实施例中，本文揭露的本发明MLV-API制剂的任何实施例皆借由将API主动负载至本发明的MLV中而制备，且无需使用透析及/或挤出过程即可进行。在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂借由将API主动负载至本发明的MLV中而制备，且无需使用透析或挤出即可进行，其中包覆率为至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％，使得小于约10％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％或小于约1％的API存在于MVL外部的碱性水溶液中。在一实施例中，当主动负载溶液内的D/L重量比在约5至约20重量％之间时，本发明的MLV-API药物制剂的包覆率为大于约95％。在一实施例中，当主动负载溶液内的D/L重量比在约15至约20重量％之间时，MLV-CQ的包覆率为大于约95％。在一实施例中，当主动负载溶液的D/L重量比为约5重量％时，MLV-NB的包覆率为大于约95％。在一实施例中，当主动负载溶液的D/L重量比在约5至约15重量％之间时，MLV-HCQ的包覆率为大于约95％。

在一实施例中，本发明的负载API的MLV的药物脂质(D/L)比在5-30重量％之间，诸如约5、约10、约15、约20、约25或约30重量％，包括落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的负载CQ的MLV(MLV-CQ)的药物脂质(D/L)比可在约10至约30重量％之间，诸如约10、约15、约20、约25或约30重量％，包括落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的负载NB的MLV(MLV-NB)的药物脂质(D/L)比可在约10至约30重量％之间，诸如约10、约15、约20、约25或约30重量％，包括落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的负载HCQ的MLV(MLV-HCQ)的药物脂质(D/L)比可在约5至约25重量％之间，诸如约5、约10、约15、约20、约25重量％，包括落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，当在受试者口腔的生理条件下至多30分钟时，本发明的MLV-API药物制剂保留至多约90％至完全留存，诸如约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或完全留存API，如实例4结合图9的说明。在一实施例中，当在受试者口腔的生理条件下至多30分钟时，MLV-CQ药物制剂保留至多约90％至完全留存，诸如至多约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或完全留存API，如实例4结合图9的说明。本发明的MLV的高包覆率及在受试者口腔内的高API留存率共同有效掩盖API令人不快的味道。

在一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者胃部的温度范围中，本发明的负载API的MLV瞬间地或在瞬间爆发而释放的API百分比在约30％至约40％之间，诸如约30％、约32％、约34％、约36％、约38％、约40％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，瞬间爆发在约1至约120秒内，诸如约1秒、约2秒、约5秒、约15秒、约30秒、约45秒、约60秒、约80秒、约100秒、约120秒或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在另一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者胃部温度下约4小时后，从本发明的负载API的MLV释放的API百分比在约40％至约55％之间，诸如约40％、约42％、约44％、约46％、约48％、约50％、约52％、约54％、约56％、约58％、约60％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在又另一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者肠道的温度范围中约1小时后，从本发明的负载API的MLV释放的API百分比在约15％至约30％之间，诸如约15％、约17％、约20％、约22％、约25％、约27％、约30％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。同时，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者肠道温度下约4小时后，从本发明的负载API的MLV释放的API百分比在约15％至约40％之间，诸如约15％、约17％、约20％、约22％、约26％、约28％、约30％、约32％、约34％、约36％、约38％、约40％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者胃部的温度中，本发明的负载CQ的MLV瞬间地或在瞬间爆发而释放的CQ百分比在约30％至约40％之间，诸如约30％、约32％、约34％、约36％、约38％、约40％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，瞬间爆发在约1至约120秒内，诸如约1秒、约2秒、约5秒、约15秒、约30秒、约45秒、约60秒、约80秒、约100秒、约120秒或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在另一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者胃部温度下约4小时后，从本发明的负载CQ的MLV释放的CQ百分比在约40％至约55％之间，诸如约40％、约42％、约44％、约46％、约48％、约50％、约52％、约54％、约56％、约58％、约60％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在又另一实施例中，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者肠道的温度范围中约1小时后，从本发明的负载CQ的MLV释放的CQ百分比在约15％至约30％之间，诸如约15％、约17％、约20％、约22％、约25％、约27％、约30％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。同时，如实例4结合图9的说明，在生理条件及相当于受试者肠道温度下约4小时后，从本发明的负载CQ的MLV释放的CQ百分比在约15％至约40％之间，诸如约15％、约17％、约20％、约22％、约26％、约28％、约30％、约32％、约34％、约36％、约38％、约40％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂包含负载API的MLV，其中直径为约50至约500nm，诸如约50、约100、约200、约300、约400、约500nm或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的MLV-CQ药物制剂包含负载CQ的MLV，其中直径为约200至约300nm，诸如约200、约220、约240、约260、约280、约300nm或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的MLV-NB药物制剂包含负载NB的MLV，其中直径为约150至约250nm，诸如约150、约170、约200、约220、约250或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的MLV-HCQ药物制剂包含负载HCQ的MLV，其中直径为约170至约270nm，诸如约170、约190、约210、约230、约250、约270nm或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在另一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂中的负载API的MLV的多分散性指数(PDI)为约0.3至约0.7，诸如约0.3、约0.35、约0.4、约0.45、约0.5、约0.55、约0.6、约0.65、约0.7或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在另一实施例中，本发明的MLV-CQ药物制剂中的负载CQ的MLV的多分散性指数为约0.3至约0.4，诸如约0.3、约0.32、约0.34、约0.36、约0.38、约0.4或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在另一实施例中，本发明的MLV-NB药物制剂中的负载NB的MLV的多分散性指数为约0.4至约0.6，诸如约0.4、约0.42、约0.45、约0.47、约0.50、约0.52、约0.55、约0.57、约0.60或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在另一实施例中，本发明的MLV-HCQ药物制剂中的负载HCQ的MLV的多分散性指数为约0.4至约0.6，诸如约0.4、约0.42、约0.45、约0.47、约0.50、约0.52、约0.55、约0.57、约0.60或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在另一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂中的负载API的MLV的总电荷为中性或接近中性。在一实施例中，本发明的MLV药物制剂的电动电位为约-15至约15mV，诸如约-15、约-10、约-7.5、约-5、约-2.5、约0、约2.5、约5、约7.5、约10、约-12.5、约15mV或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的MLV-CQ药物制剂中的负载API的MLV在约-5mV下的总电荷为中性或接近中性。在一实施例中，本发明的MLV-NB药物制剂中的负载NB的MLV在约-4mV下的总电荷为中性或接近中性。在一实施例中，本发明的MLV-HCQ药物制剂中的负载HCQ的MLV在约-3mV下的总电荷为中性或接近中性。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂包含MLV内部的pH低于MLV所在的碱性水溶液的pH。在一实施例中，MLV内部的pH为约1.0至约5.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0、约3.2、约3.4、约3.6、约3.8、约4.0、约4.2、约4.4、约4.6、约4.8、约5.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约7.2至约12.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、约11.0、约11.5、约12.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，MLV内部的pH为约1.0至约3.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约8.0至约10.0，诸如约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-CQ药物制剂包含MLV内部的pH低于MLV所在的碱性水溶液的pH。在一实施例中，MLV内部的pH为约1.0至约5.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0、约3.2、约3.4、约3.6、约3.8、约4.0、约4.2、约4.4、约4.6、约4.8、约5.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约7.2至约12.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、约11.0、约11.5、约12.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，MLV-CQ内部的pH为约1.0至约3.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约8.0至约10.0，诸如约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-NB药物制剂包含MLV内部的pH低于MLV所在的碱性水溶液的pH。在一实施例中，MLV内部的pH为约1至5，诸如约1、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0、约3.2、约3.4、约3.6、约3.8、约4.0、约4.2、约4.4、约4.6、约4.8、约5.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约7.2至约12.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、约11.0、约11.5、约12.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，MLV-NB内部的pH为约1.0至约3.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约8.0至约10.0，诸如约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-HCQ药物制剂包含MLV内部的pH低于MLV所在的碱性水溶液的pH。在一实施例中，MLV内部的pH为约1至5，诸如约1、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0、约3.2、约3.4、约3.6、约3.8、约4.0、约4.2、约4.4、约4.6、约4.8、约5.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约7.2至约12.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、约11.0、约11.5、约12.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，MLV-HCQ内部的pH为约1.0至约3.0，诸如约1.0、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，碱性水溶液的pH为约8.0至约10.0，诸如约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂进一步包含冷冻保护剂，其包括蔗糖、右旋糖、葡萄糖、海藻糖、乙二醇、丙二醇、葡聚醣、环糊精、精胺酸、P188、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、山梨醇、白蛋白、甘露醇或其组合。在一实施例中，本发明的MLV药物制剂包含冷冻保护剂，其浓度为约15、20、25、30、35、40、45％或落入此等数值内的任何数字及数字范围。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂可进一步包含二或多种API，其中第一种API被包覆在本发明的MLV内部且第二种化合物位于MLV外部的碱性水溶液中。在一实施例中，第二种化合物所包含的API与第一种API不同，使得本发明的口服药物制剂可提供二或多种药物的组合疗法。在一实施例中，弱碱(诸如伯胺奎、甲氟喹、乙酰胺酚(paracetamol))可被负载于MLV中，而弱酸可保留于外部相中。在另一实施例中，本发明的MLV药物制剂进一步包含第三种化合物，其包括存在于MLV内部或MLV外部碱性水溶液中的佐剂。

本发明亦提供一种MLV-API药物制剂试剂盒，其包含：1.呈粉末形式或能够制成粉末形式的任何形式的API，诸如能够研磨成粉末形式的片剂，2.碱性水溶液，以及3.不包覆任何API的冻干的MLV，其中将三个组分分开保存及储存。在一实施例中，可将冻干的MLV储存在室温下至少4、5、6、7或8周，且当从本发明的试剂盒制成MLV-API药物制剂时，包覆率可达到约90％或更高，如实例2结合图7A的说明。在一实施例中，可借由混合如图6所示的三个组分而无需透析或挤出过程来制备本发明的MLV-API药物制剂。在一实施例中，当将API制成粉末形式时，可借由手动混合如图6所示的三个组分而无需透析或挤出过程来制备本发明的MLV-API药物制剂，其中手动混合包含将所有三个组分混合在单一容器中，并以手轻轻摇晃该容器约1至约10分钟，诸如约1分钟、约2分钟、约5分钟、约7分钟、约10分钟或落入此等数值内的任何时间段及时间范围。在一实施例中，手动混合包含将所有三个组分仅混合在单一容器中而不摇晃该容器。在一实施例中，手动混合包含将所有三个组分混合在单一容器中，并以手剧烈摇晃该容器约1至约10分钟，诸如约1分钟、约2分钟、约5分钟、约7分钟、约10分钟或落入此等数值内的任何时间段及时间范围。在一实施例中，手动混合包含将所有三个组分混合在单一容器中，并以手摇晃该容器直至溶液变得均匀。

在一实施例中，可代替碳酸钠或与其组合使用的碱包括但不限于碳酸钾、碳酸钙、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢镁、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁及氨。在一实施例中，API包含氯喹(CQ)、CQ衍生物(例如，羟氯喹(HCQ))、可乐定、可乐定衍生物、伊马替尼、普萘洛尔、毛果芸香碱、美洛昔康、阿立哌唑、氯丙嗪、R848、咪喹莫特、甲氟喹及伯胺奎或其医药上可接受的盐。

在一实施例中，在约4℃下储存约20至约34天，诸如约20天、约22天、约24天、约26天、约28天、约30天、约32天、约34天或落入此等数值内的任何数字及数字范围之后，使用本发明的试剂盒制备的MLV-API药物制剂的包覆率可维持在>80％。在一实施例中，在约4℃下储存约12至约24天，诸如约12天、约14天、约16天、约18天、约20天、约22天、约24天或落入此等数值内的任何数字及数字范围之后，使用本发明的试剂盒制备的MLV-API药物制剂的包覆率可维持在>94％。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂能够增强所包覆药物的吸收。在一实施例中，本发明的制剂的24小时AUC比游离形式API高出两倍以上，而T_max保持不变，如图10及11所示。在一实施例中，本发明的MLV的C_max比受试者中游离形式药物的药物吸收高出约1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0倍，而T_max保持不变，如图10及11所示。

在一实施例中，本发明的MLV的任何实施例的胆固醇与脂质的摩尔比率可为约1:0.2、1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2、1:2.2或其间的任何比率。在一实施例中，脂质包含DSPC、DOPC、DOPS、DPPS、DSPS、DOPE或其组合。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂的任何实施例无需挤出及/或透析过程即可制成。

在一实施例中，本发明的MLV-API药物制剂的任何实施例可包括但不限于以下组分之一或多者：磷脂质、溶脂质、溶磷脂质、神经脂质、聚乙二醇化脂质、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇(不限于特定的糖)、脂肪酸、固醇、辛酸、癸酸、三酸甘油酯、中链三酸甘油酯(MCT)、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、玉米油、花生油、油酸、Span 80、任何其他食用油、Tween、Gelucire 44/14、Gelucire 50/13、Brij 35、Brij 58、聚氧20单硬脂酸酯、聚氧40单硬脂酸酯、卵磷脂、托可索仑(tocophersolan，TPGS)、拉巴索ALF(labrasol ALF)、乙醇、甘油、PEG 300-4000、PEG 8000、卡必醇P(Transcutol P)、2-吡咯烷酮(Soluphor P)，以本领域技术人员认为可接受的任何比率制备。

本发明进一步包含一种制备本发明的MLV-API药物制剂的方法，其包含以下步骤：

i.制备MLV并建立pH梯度：

a.借由酸性溶液水合有机组分而形成MLV。在一实施例中，酸性溶液可包含柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乙酸、草酸、抗坏血酸、乙酸钠或其组合。在一实施例中，MLV的有机组分包含DSPC、DOPC、DOPS、DPPS、DSPS、DOPE、胆固醇(Chol)、磷脂质、溶脂质、溶磷脂质、神经脂质、聚乙二醇化脂质、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇(不限于特定的糖)或其组合。

d.将步骤i a制得的MLV添加至碱性水溶液中，以形成含有MLV的碱性水溶液，并在MLV内部与碱性水溶液之间建立pH梯度，以促进步骤ii中API的主动负载。在一实施例中，碱性水溶液可包含碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢镁、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氨或其组合。

ii.主动负载API：

a.将粉末形式的API溶解于水中以形成API溶液。在一实施例中，该水包括蒸馏水。在一实施例中，可首先进行将API研磨成粉末形式的步骤。

b.将步骤ii a的API溶液与步骤i中制备的MLV碱性水溶液混合，以形成主动负载溶液。

c.培养步骤ii b中形成的主动负载溶液，以使API主动负载至MLV中。在一实施例中，培养温度的范围可为约15℃至约70℃，诸如约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃或落入此等数值内的任何温度或温度范围，且培养时间的范围可为约5分钟至约2小时，诸如约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟、约90分钟、约100分钟、约110分钟、约120分钟或落入此等数值内的任何时间段或时间范围。在一实施例中，培养温度的范围可为约50℃至约70℃，诸如约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃或落入此等数值内的任何温度或温度范围，且培养时间的范围可为约40分钟至约80分钟，诸如约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟或落入此等数值内的任何时间段或时间范围。

在一实施例中，本发明的制备MLV-API的方法进一步包含步骤i b的将冷冻保护剂添加至含有步骤i a的MLV的溶液中，并将步骤i a中形成的MLV冷冻干燥。在一实施例中，冷冻干燥条件为在约-80℃至约-100℃之间，诸如约-80℃、约-85℃、约-90℃、约-95℃、约-100℃或落入此等数值内的任何温度或温度范围，且在约0.05mBar至约0.2mBar之间过夜，诸如约0.05mBar、约0.1mBar、约0.15mBar、约0.2mBar或落入此等数值内的任何压力及压力范围。在一实施例中，步骤i b的冷冻保护剂包含蔗糖、右旋糖、海藻糖或其组合。在一实施例中，步骤i b的溶液中的冷冻保护剂浓度为约15％至45％，诸如约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45％或落入此等数值内的任何浓度及浓度范围。在一实施例中，本发明的步骤i的制备MLV-API药物制剂的方法进一步包含步骤i c的将步骤i b的冻干的MLV储存在4℃下至多8周，之后进行其余的步骤i d及步骤ii a-c，且在储存后，当进行其余制备步骤时，包覆率仍达到大于约80％、约90％或约95％，且在主动负载溶液中的D/L比在约5％至约20重量％之间，诸如占主动负载溶液的约5％、约10％、约15％、约20％或落入此等数值内的任何百分比或百分比范围。

用于制备本发明的MLV-API药物制剂的方法的任何实施例不包含薄膜挤出步骤及透析步骤。不需要薄膜挤出及透析步骤的微脂体技术实质上在制备及大规模制造时将更加容易且实惠。

在一实施例中，在步骤i的水合步骤中，有机组分在水合前呈薄膜形式。在一实施例中，步骤i中的有机组分包含胆固醇与脂质，其摩尔比率为约1:0.2至约1:2.2，诸如1:0.2、1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2、1:2.2或落入此等数值内的任何数字及数字范围。在一实施例中，本发明的步骤i a的水合步骤包含添加酸性溶液，其pH为约1.0至约5.0，诸如约1、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0、约3.2、约3.4、约3.6、约3.8、约4.0、约4.2、约4.4、约4.6、约4.8、约5.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围，其浓度为约50至约500mM，诸如约50、约100、约150、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550mM或落入此等数值内的任何浓度及浓度范围。在一实施例中，本发明的步骤i d中的MLV制备步骤包含添加碱性溶液，其pH为7.2至约12.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0、约10.5、约11.0、约11.5、约12.0或落入此等数值内的任何pH或pH范围，其浓度为约50至约550mg/mL，诸如约50mg/mL、约100mg/mL、约150mg/mL、约200mg/mL、约250mg/mL、约300mg/mL、约350mg/mL、约400mg/mL、约450mg/mL、约500mg/mL、约550mg/mL或落入此等数值内的任何浓度及浓度范围。在一实施例中，本发明的步骤i a中的水合步骤包含添加酸性溶液，其pH为约1.0至约3.0，诸如约1、约1.2、约1.4、约1.6、约1.8、约2.0、约2.2、约2.4、约2.6、约2.8、约3.0或落入此等数值内的任何数字及数字范围，其浓度为约50至约500mM，诸如约50、约100、约150、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550mM或落入此等数值内的任何浓度及浓度范围。在一实施例中，本发明的步骤i b中的MLV制备步骤包含添加碱性溶液，其pH为7.2至约10.0，诸如约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、约10.0或落入此等数值内的任何pH或pH范围，其浓度为约50至约550mg/mL，诸如约50mg/mL、约100mg/mL、约150mg/mL、约200mg/mL、约250mg/mL、约300mg/mL、约350mg/mL、约400mg/mL、约450mg/mL、约500mg/mL、约550mg/mL或落入此等数值内的任何浓度及浓度范围。

在另一实施例中，借由组合以下替代性组分来制备本发明的MLV-API制剂：辛酸、癸酸、三酸甘油酯、中链三酸甘油酯(MCT)、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、玉米油、花生油、油酸、Span 80、任何其他食用油、Tween、Gelucire 44/14、Gelucire 50/13、Brij 35、Brij 58、聚氧20单硬脂酸酯、聚氧40单硬脂酸酯、卵磷脂、托可索仑(tocophersolan，TPGS)、拉巴索ALF(labrasol ALF)、乙醇、甘油、PEG 300-4000、PEG 8000、卡必醇P(Transcutol P)、2-吡咯烷酮(Soluphor P)或其组合。

在一实施例中，本发明的步骤ii中的主动负载步骤包含API，其中该API包含弱碱药物。在一实施例中，本发明的步骤ii中的主动负载步骤的API包含CQ、CQ衍生物、可乐定、可乐定衍生物、伊马替尼、普萘洛尔、毛果芸香碱、美洛昔康、阿立哌唑、氯丙嗪、R848、咪喹莫特、甲氟喹及伯胺奎或其医药上可接受的盐。

在一实施例中，使用本发明的方法制备的MLV药物制剂的D/L比为至多约5重量％至约30重量％，诸如约5重量％、约10重量％、约15重量％、约20重量％、约25重量％、约30重量％或落入此等数值内的任何重量％或重量％范围。

本发明亦提供一种使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例来治疗疾病的方法。在一实施例中，使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例的治疗方法包含治疗对游离形式的药物的令人不快的味道敏感的受试者。在另一实施例中，使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例的治疗方法包含治疗吞咽困难的受试者。在一实施例中，使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例的治疗方法包含治疗儿童。在一实施例中，使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例所治疗的疾病包含类风湿性关节炎、红斑性狼疮及疟疾。在另一实施例中，使用本发明的MLV药物制剂的任何实施例所治疗的疾病包含高血压、ADHD、药物戒断、更年期潮红、腹泻、痉挛及某些疼痛病况。

以下实例仅用于说明，且未旨在限制本发明的范畴。就本领域技术人员而言，其他通用及特定配置将显而易见。

负载CQ、NB、HCQ的MLV的实例：

材料及方法

材料

1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DSPC)购自Avanti Polar Lipids(Alabaster，AL)。胆固醇、氯喹二磷酸盐(CQ)、羟氯喹硫酸盐(HCQ)、尼罗蓝(NB)、柠檬酸单水合物、碳酸钠(Na₂CO₃)、磷酸、磷酸盐缓冲液(PBS)、浓盐酸及牛磺胆酸钠水合物购自SigmaAldrich(St.Louis，MO)。羟氯喹片剂(200mg/片剂)购自Regency Medical CentrePharmacy(Vancouver，BC，Canada)。所有化学试剂及有机溶剂皆为分析级。

模拟流体

借由1M磷酸滴定10mM PBS(pH 7.4)来模拟唾液(SS，pH 6.5)。模拟胃液(SGF，pH1.2)及模拟肠液(SIF，pH 6.8)两者皆购自RICCA Chemical Company(Arlington，TX)。将牛磺胆酸钠水合物(3mM)添加至模拟肠液中以模拟肠道中的胆盐。

微脂体多层囊泡(MLV)的制备

使用如前述的薄膜水合方法来制备MLV。¹⁴将胆固醇/DSPC(45/55，摩尔比率)混合物以30mg/mL的总脂质浓度溶解于含有氯仿的圆底烧瓶中。使用旋转蒸发来移除氯仿，其中温度为60℃且旋转速度为400rpm，以获得脂质薄膜。将脂质薄膜在高真空下干燥30分钟，以移除氯仿残留物。随后，利用2mL的300mM柠檬酸(pH2)将薄膜水合。MLV悬浮液在40℃下加热并超音波处理30分钟，以获得均匀的乳白色液体制备物。使用Zetasizer NanoZS(MalvernInstruments，Malvern，UK)，借由动态光散射(DLS)来测量MLV的粒径、多分散性指数(PDI)及电动电位。在冷冻干燥方面，将制备在具有30％蔗糖的柠檬酸(pH 2)中的MLV分装成200μL，并使用Triad^TM冷冻干燥系统(LABCONCO，Kansas City，MO)在-90℃及0.12mBar下冷冻干燥过夜。将样本密封并储存在室温下以进行稳定性监控。

药物的主动负载

将约34-40μL的碳酸钠(300mg/mL)添加至200μL的微脂体MLV中，使外部pH提高至8-10。将CQ及HCQ粉末溶解于蒸馏水中，最终浓度为10mg/mL。首先将HCQ片剂(200mg)研磨成细粉，并以10mg/mL溶解于蒸馏水中。以范围5％-30％(w/w)的药物脂质(D/L)比进行药物负载，其是借由将药物溶液与含有pH梯度的MLV混合，接着在室温下培养1小时，并在冰上淬灭2分钟以终止负载过程。借由在Sephadex-G25管柱(GE Healthcare，Milwaukee，WI)上进行尺寸排阻层析法(SEC)来移除未包覆的药物。借由如下述的UPLC来定量分析样本中的药物及脂质浓度。借由以下公式计算药物包覆率(EE)，其中D/L_before及D/L_after分别表示SEC之前及之后的药物/脂质比。

或者，将MLV以10,000g离心10分钟，并借由UPLC来分析含有未包覆药物的上清液。随后，将所得结果与MLV中的总药物浓度进行比较，以获得EE。

低温穿透式电子显微镜(CryoTEM)

将空的及负载CQ的MLV(30mg脂质/mL)以20％ D/L比(w/w)沉积在辉光放电铜栅(glow-discharged copper grid)上，使用FEI Mark IV Vitrobot(FEI，Hillsboro，OR，USA)进行玻璃化，并在UBC高解析度大分子低温电子显微镜设施(Vancouver，BC，Canada)使用配备有Falcon III相机的200kV Glacios显微镜进行成像。

超高效能液相层析法(UPLC)

借由ACQUITY UPLC H级系统(Waters，Milford，MA)¹⁵同时定量药物及脂质的浓度。流动相由溶剂A：含有0.1％三氟乙酸(TFA)的水溶液及溶剂B：含有0.1％TFA的甲醇组成。借由光二极体阵列(PDA)检测器分别在波长为342nm及342nm下进行CQ及HCQ的定量。借由蒸发光散射(ELS)检测器进行DSPC及Chol的定量。借由将曲线下的峰值面积积分并与标准曲线进行比较来测量药物及脂质的浓度。针对血浆CQ定量，使用Waters QDa质谱检测器。在250℃(源温度)下使用锥电压65V来进行离子化，并针对毛细管电压0.5V下获得的单一带电荷分子离子(m/z319.8)，将单一离子辨识(SIR)峰值积分以测定CQ浓度。

储存稳定性研究

将制备在具有30％蔗糖的柠檬酸中的MLV冻干，并在室温下储存。在选定的时间点(1、2、3、4及8周)，利用Milli-Q水将冻干的MLV重组。随后，将碳酸钠添加至MLV中，以产生如上述的跨膜pH梯度，接着以20重量％的D/L负载CQ。使用离心方法来测量药物负载效率。所制备的负载CQ的MLV药物制剂在4℃下以液体形式储存。在不同时间点，使用离心方法来测定CQ包覆率。

体外药物释放

将本发明的MLV-CQ药物制剂(具有20％ D/L(w/w)的负载CQ的MLV)与不同的模拟胃肠液以1:1(v/v)的比率混合，并在37℃下摇晃(150rpm)培养。在选定的时间点，收集200μL的混合物，并借由SEC移除释放的药物。使用UPLC来测量在SEC之前及之后MLV的药物及脂质浓度。借由公式(2)得出药物释放率(％)：

动物

雌性CD1小鼠(18-20g，6-7周大)购自The Jackson Laboratory(Bar Harbor，ME)。所有体内研究皆按照Animal Care Committee of the University of British Columbia(Vancouver，BC，Canada)批准的既定方案(A18-0177)进行。

药物动力学

将本发明的MLV-CQ药物制剂或游离CQ(溶于盐水)以10mg CQ/kg(50mg脂质/kg)经由口服胃管灌食法向小鼠给予。在0.5、1、3、4、6及24小时，经由隐静脉或心脏穿刺采集血液，并快速移至涂覆EDTA的试管中。借由在4℃下以10,000g离心10分钟来分离血浆。将45μL血浆与300μL乙醇混合，涡旋30秒，置于冰上30分钟，并以12,500rpm离心两次，每次5分钟。收集上清液(280μL)、冷冻干燥，并于45μL乙醇中重组。随后，将10μL样本注入UPLC中以测量CQ浓度。分别使用PK solver¹⁶及GraphPad Prisim 8.0版(GraphPad Software，San Diego，CA，USA)分析药物动力学参数及AUC。

统计分析

所有数据皆以平均值±SD表示。利用GraphPad Prism 8.0版进行统计分析。借由非配对t检定进行两个组别之间的比较，并使用单因子变异数分析进行三或多组之间的比较。

实例1.负载药物的MLV的制备

借由将DSPC及胆固醇与300mM柠檬酸(pH 2)水合自发形成MLV微脂体，而无需繁琐的薄膜挤出过程或透析过程。借由将Na₂CO₃水溶液添加至MLV中来产生跨膜pH梯度，使外部pH达到8-10。为了证实此技术是否能够提供CQ的主动及完全负载，将一定D/L范围的梯度MLV与CQ混合，在室温下培养1小时，随后进行EE分析。如图1所示，在D/L为15-20％(w/w)时，测得完全的(>95％)药物包覆率。当D/L增至25％(w/w)时，药物包覆率降至约80％(图1)，表示药物负载达到饱和。长期以来认为，由于脂质双层之间的水性空间有限，因此药物无法主动负载至MLV中。在本发明的制备方法中，发明人揭露了一种经由pH梯度将API主动负载至MLV中的方法。此外，使用简单且可扩展的技术来制备本发明的MLV药物制剂，并针对弱碱药物提供完全的包覆。除了CQ以外，发明人亦成功地以相同的D/L将其他弱碱小分子(诸如HCQ、NB及可乐定)包覆至本发明的MLV中(图2及8)，证实此可作为一种平台技术。

借由DLS来表征空的及负载CQ的MLV，并表现出可比拟的尺寸(约250nm)、PDI(0.3-0.5)及电动电位(±5mV)(图3)。亦表征了MLV-NB及MLV-HCQ的D/L比、尺寸、PDI、包覆率及电动电位(图4)。预期有较高的PDI，是因在制备物中不使用薄膜挤出来控制粒径。此等MLV的相对较小尺寸可能是梯度导入方法所致，该方法可促使脂质重排。借由cryo-TEM影像来进一步确认MLV的多层型态及可变的粒径分布(图5)。不同于先前报导的SUV-Mef结构⁶，在MLV内部未显示电子致密的药物聚集体。

实例2.开发用于简易制备稳定液体药物制剂的用户试剂盒

发明人设想到，此MLV平台可用作弱碱药物的通用味道遮掩制剂。冻干形式的无药MLV将与Na₂CO₃水溶液一起在药房提供，或作为带有完整用药说明的试剂盒提供给照护人员。首先，利用固定量的水将MLV重组，接着添加固定体积的Na₂CO₃水溶液，将外部pH提高至8-10。将固定量的药物粉末(15-20重量％)与MLV混合，随后在使用前于室温下培养约1小时，如图6所示。

为了检查此方法的可行性，发明人将制备在具有30％蔗糖的300mM柠檬酸(pH2)中的MLV冻干成干燥粉末，随后在室温下储存至多8周。在不同时间点，将冻干的MLV重组于MilliQ水中，使用Na₂CO₃水溶液调整pH(8-10)，与20重量％CQ混合，在室温下培养1小时，并使用离心方法测量药物包覆率。如图7A所示，冻干的MLV可在室温下储存至少2个月，并仍能提供>90％的CQ包覆率，其表明冻干的MLV产物在室温下表现出良好的储存稳定性，并可用于借由以下简易过程制备儿童友善的液体制剂。此外，所制备的MLV-CQ在4℃下储存2周后呈现稳定。如图7B所示，在4℃下储存2周后CQ包覆率维持在>94％，但在3周内降至约80％。数据表明，一旦使用此MLV试剂盒制备儿科制剂，则患者可将此制剂储存在4℃下至多2周。

实例3.使用MLV药物制剂试剂盒将羟氯喹片剂调配成液体制剂

接下来，发明人检查了MLV药物制剂试剂盒是否可用于将市售HCQ片剂调配成液体制剂。在加拿大无法购得CQ片剂，因此发明人购买了HCQ片剂作为研究的替代品。当无法从市售购得对儿童友善的剂型时，药剂师及照护人员通常会将成人剂型暂时调配成液体制备物。如前面所述，此种常见的做法常常由于味道掩盖效果不佳而导致药物依从性变差。

将片剂(200mg HCQ/片剂)研磨成细粉，并溶于MilliQ水中，最终浓度为10mg HCQ/mL。制备含有pH梯度的MLV，并将其与HCQ悬浮液以一定范围的D/L比(5-20重量％)混合，接着在室温下培养1小时，随后测量HCQ包覆效率。如图8所示，以D/L为15重量％制备的MLV-HCQ表现出几乎完全的药物包覆率，而当D/L增至20重量％时，效率降至约85％。数据表明，可采用MLV药物制剂试剂盒来支持按照简易过程将成人片剂有效地调配成对儿童友善的液体制剂。

实例4.体外药物释放研究

随后，发明人检查了CQ在口服给予后是否可从本发明的MLV药物制剂释放至胃肠液中，并在补充有3mM牛磺胆酸钠的模拟唾液(SS)、模拟胃液(SGF)及模拟肠液(SIF)中进行药物释放研究，以分别模拟口腔、胃部及肠道状况。将MLV-CQ与各种模拟流体在37℃下培养，同时以150rpm摇晃。借由比较选定时间点的SEC之前及之后的CQ浓度来测量药物释放。如图9所示，当将本发明的MLV-CQ药物制剂与SS一起培养时，在30分钟内没有药物释放，其表明CQ会保留在口腔内的MLV内部。正如发明人先前所确定的，化合物的令人不快的味道取决于游离或释放形式的药物的浓度。因此，数据表明，此种可100％保留CQ的MLV给予系统将完全掩盖苦味。由于制剂通过口腔的转变时间很短，因此发明人仅监控30分钟的药物释放。随后，发明人检查了SGF(pH 1.2)中的药物释放。如图9所示，制剂在与SGF培养后表现出瞬间爆发释放率(约38％)，其中在4小时后的累积CQ释放率为约50％。此爆发释放率可借由SGF中极酸的pH来解释，其中DSPC的磷酸基(pKa约3)会被质子化，导致磷脂质的疏水性与亲水性之间失衡，最终导致脂质双层的不稳定性。⁶最终，在补充有3mM牛磺胆酸钠的SIF中评估CQ释放，胆盐常见于肠道。MLV-CQ在SIF中培养1小时后表现出20％药物释放率，随后在4小时内释放率逐渐增至30％，如图9所示。胆盐可充当破坏微脂体膜以释放出药物的界面活性剂，如先前的证实及描述。⁶数据表明，当口服给予本发明的MLV-CQ药物制剂，MLV可保留CQ，防止其与味蕾接触并掩盖苦味。在进入胃部及肠道后，由于酸性环境及胆盐界面活性剂的存在，CQ可在胃肠道中有效释放。

实例5.药物动力学

进行药物动力学研究，以检查及比较MLV-CQ及CQ水溶液在体内的口服给予。CD-1小鼠利用10mg/kg MLV-CQ(液体)或CQ溶液进行口服给药，并在给予后0.5、1、3、4、6及24小时收集血浆以测量CQ浓度。在口服给予后，无论是MLV-CQ或CQ溶液，血浆中CQ浓度皆逐渐增加，并在3小时达到C_max，随后在24小时完全从血浆中消除。如图10及图11所示，MLV-CQ及CQ溶液的血浆轮廓具有可比较性；然而，与CQ溶液相比，MLV-CQ的C_max及AUC分别高出1.75倍及2倍，其显示MLV可增强药物吸收率。此数据与先前的报导一致，其证实脂质为有效的吸收增强剂。¹⁷

结论

发明人开发了MLV平台技术，用于制造对儿童友善的弱碱药物口服液体制剂。此平台可开发成供药剂师及照护人员使用的试剂盒，以支持将成人固体剂型调配成儿科制剂。此类导致此特殊族群治疗失败的药物依从性问题的解决方案的需求很高。

负载可乐定的MLV的实例：

材料及方法

材料

DSPC(18:0PC)及胆固醇(≥99％)购自Sigma-Aldrich(Oakville，NO，Canada)。可乐定盐酸盐(≥98％)及其他一般实验室化学品皆购自VWR Scientific(Mississauga，NO，Canada)。

水合缓冲溶液

缓冲液A包含0.3M柠檬酸溶液(pH 1.6)。缓冲液B包含0.3M柠檬酸钠缓冲液(pH3.6)。缓冲液C包含0.3M柠檬酸钠缓冲液(pH 5.5)。缓冲液D包含0.3M硫酸铵缓冲液(pH5.0)。

负载可乐定的DSPC/胆固醇多层囊泡的制备及表征

使用薄膜水合方法来制备负载可乐定的DSPC/胆固醇多层囊泡(MLV)。在此，将胆固醇与DSPC之间的摩尔比率(CHOL/DSPC摩尔比率)、水合缓冲液(缓冲液A、B、C及D)及药物脂质重量比(D/L重量比)优化以进行制备。首先，将各种CHOL/DSPC摩尔比率(范围为95/5至45/55)的脂质混合物分别溶解于氯仿中，总脂质浓度范围为10-30mg/mL。接下来，使用旋转蒸发在25-57℃下以400-500rpm旋转移除溶剂。将所得良好成形的脂质薄膜在超声波处理下与等体积的缓冲溶液进行水合，以获得均匀的乳状悬浮液。在主动药物负载方面，最初使用碳酸钠溶液(300mg/mL)将悬浮液调整至pH 8-9。随后，在各个悬浮液中分别添加各种量的可乐定盐酸盐，使得药物脂质重量比维持在1:4至1:10的范围内。随后，将所得混合物在37℃下培养1小时。借由在冰上将混合物淬灭2分钟来终止主动药物负载，最终无需使用挤出或透析过程即可获得MLV。

借由UPLC分析各个MLV样本的包覆率(EE，％)，并使用以下公式(3)计算：

其中M_free意指MLV悬浮液中未包覆药物的量，且M₀为最初添加至悬浮液中的药物量。各个样本以20,000g的速度离心8分钟，并借由UPLC分析含有未包覆药物的上清液。

在长期稳定性研究方面，将新鲜制备的MLV密封并储存在4℃下以便进一步分析。在每个时间间隔内评估总药物量的变化，亦即可乐定的留存率(RR，％)及MLV的包覆率(EE，％)。

使用以下公式(4)计算储存期间可乐定的留存率(RR，％)：

其中M_t意指在各个时间点MLV悬浮液中保留的可乐定的量，且M₀为最初添加至悬浮液中的可乐定的量。首先将MLV的等分试样溶解于甲醇中，随后离心。收集上清液，以检测储存期间MLV中保留的可乐定含量。

使用超高效能液相层析法(UPLC)来分析可乐定含量

使用耦接有光二极体阵列(PDA)检测器(波长208nm)及蒸发光散射检测器(ELSD)的ACQUITY UPLC H级系统(Waters，Milford，MA)来分析各个MLV样本的可乐定浓度。在Waters Acquity BEH-C18管柱(粒径：1.7μm，内径：2.1mm，长度：100mm的管柱)上分离样本，流速为0.5mL/min。流动相由溶剂A(0.1％v/v三氟乙酸水溶液)及溶剂B(0.1％v/v三氟乙酸/乙腈)组成。应用以下梯度：0分钟：A/B(95/5)，3.5分钟：A/B(50/50)，3.8min：A/B(0/100)，4.8min：A/B(0/100)，5.3min：A/B(95/5)，6.5分钟：A/B(95/5)。借由在滞留时间1.6分钟处将PDA峰值进行积分来测定水相中游离可乐定的浓度。借由在滞留时间1.6分钟处将ELSD峰值进行积分来测定溶解于甲醇中的可乐定浓度。使用Empower 3.0软体(Waters)分析数据。

结果

实例6：MLV的制备及表征

主动药物负载为一种将药物包覆于微脂体颗粒核心中的快速有效方法，以避免与外部环境接触。可乐定盐酸盐为一种具有苦味的水溶性药物。有效负载至脂质双层中不仅可掩盖可乐定的令人不快的味道，还可提高其稳定性。在此，采用DSPC/胆固醇MLV来进行可乐定包覆。以下讨论了在MLV制备及储存期间影响药物包覆率(EE)的关键因素，亦即CHOL/DSPC摩尔比率、水合缓冲液(尤其是pH)及药物/脂质重量比。

表1：利用不同CHOL/DSPC摩尔比率及水合缓冲液制备的MLV的包覆率

表1显示了在相同药物脂质重量比(1:10)下制备的MLV的EE。如表1所示，与CHOL/DSPC摩尔比率相比，水合缓冲液及其pH值对药物负载效率的影响较大。较低pH值的水合缓冲液促使更高的EE。举例而言，使用水合缓冲液A(pH 1.6)时，具有不同CHOL/DSPC比的脂质薄膜皆显示出>95％ EE。同时，脂质组合物对主动药物负载显示出更强的包覆效果。当pH增至5.5(缓冲液C)时，具有较高CHOL/DSPC摩尔比率的MLV表现出较高的EE。

表2：利用不同药物/脂质重量比及CHOL/DSPC摩尔比率制备的MLV的包覆率

考量了药物/脂质比对MLV的EE的影响，如表2所示，较低的药物/脂质重量比不仅导致较高的包覆率，还可降低药物投入的成本。值得注意的是，在药物/脂质比为1:10时，EE范围为56-83％，而在药物/脂质比为1:5时，EE似乎更一致，范围为70-80％。然而，在药物/脂质比为1:4时，药物似乎过量，导致EE显著下降。此外，较高的CHOL/DSPC摩尔比率对EE具有正面影响，其中最高的EE出现在2:8DSPC:Chol比率。

表3：培养温度及其他制备参数对主动药物负载的影响

亦分析了主动药物负载期间的其他参数，诸如培养温度、药物/脂质重量比等。如表3所示，较高的培养温度促进主动负载期间的分子运动，从而导致更有效的药物负载。各个样本的EE由于所有制备参数的复杂影响而有所变化。

实例7：MLV的稳定性

借由监控4℃储存期间总药物量及EE的变化来评估MLV的长期储存稳定性。如图16所示，在7周的储存期间，各个样本中的可乐定含量变化不大，其中药物留存率维持在大于80％。然而，各个MLV的EE改变显著。如图17所示，大多数样本在储存期间显示出EE下降的趋势。尤其是在4周后，使用缓冲液A及B制备的样本显示出EE高于95％。然而，使用缓冲液C(pH5.5)制备的MLV首先显示出EE在2周内急剧地降至<60％，随后逐渐回到接近80％。此等结果进一步表明，具有较高pH值的MLV会阻碍主动负载期间的药物包覆。

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Claims

1.一种多层囊泡活性医药成分(MLV-API)药物制剂，其包含溶于碱性水溶液的多层囊泡(MLV)及活性医药成分(API)，

其中该API包含弱碱药物；

其中该MLV负载有该API；且

其中该MLV内部的pH低于该MLV外部的碱性水溶液的pH。

2.如权利要求1的制剂，其中该负载API的MLV的药物/脂质比为至少约15重量％。

3.如权利要求1的制剂，其中该负载API的MLV的包覆率为约80％或更高。

4.如权利要求1的制剂，其中该MLV内部的pH为约1.0至约3.0，且该碱性水溶液的pH为约8.0至约10.0。

5.如权利要求1的制剂，其中该API包含氯喹(chloroquine，CQ)、CQ衍生物、可乐定(clonidine)、可乐定衍生物、伊马替尼(imatinib)、普萘洛尔(propranolol)、毛果芸香碱(pilocarpine)、美洛昔康(meloxicam)、阿立哌唑(aripiprazole)、氯丙嗪(chlorpromazine)、R848、咪喹莫特(imiquimod)、甲氟喹(mefloquine)、伯胺奎(primaquine)或其医药上可接受的盐。

6.如权利要求1的制剂，其中该MLV包含脂质及胆固醇。

7.如权利要求6的制剂，其中该胆固醇与该脂质的摩尔比率为约1:0.2至约1:2.2。

8.如权利要求7的制剂，其中该脂质包含DSPC、DOPC、DOPS、DPPS、DSPS、DOPE、磷脂质(phospholipid)、溶脂质(lysolipid)、溶磷脂质(lysophospholipids)、神经脂质(sphingolipid)、聚乙二醇化脂质(pegylated lipid)、磷脂酰丝胺酸(phosphatidylserine)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)(不限于特定的糖)或其组合。

9.如权利要求1的制剂，其更包含冷冻保护剂。

10.如权利要求9的制剂，其中该冷冻保护剂的浓度为约15％至约45％。

11.如权利要求1的制剂，其更包含存在于该碱性水溶液中但未被包覆在该MLV中的该API以外的一或多种化合物，使得本发明的口服药物制剂可提供二或多种药物的组合疗法。

12.如权利要求11的制剂，其中该一或多种化合物包含佐剂。

13.如权利要求1的制剂，其中该负载API的MLV的直径尺寸为约50至约500nm。

14.如权利要求1的制剂，其中该负载API的MLV的多分散性指数为约0.1至约0.7。

15.如权利要求1的制剂，其中该负载API的MLV的电动电位(zeta电位)为约-15至约15mV。

16.如权利要求1的制剂，其中在约20天后该MLV-API药物制剂的包覆率可维持在≥约80％。

17.如权利要求1的制剂，其中在约12天后该MLV-API药物制剂的包覆率可维持在≥约94％。

18.如权利要求1的制剂，其中当该负载API的MLV在相当于受试者口腔的生理条件下至多30分钟时，该负载API的MLV可在该MLV内部保留至多约95％至约100％的API。

19.如权利要求1的制剂，其中在相当于受试者胃部的生理条件下，包覆在该MLV-API药物制剂的该MLV内部的该API可在少于约120秒内从该MLV释放至多约30％至约40％。

20.如权利要求1的制剂，其中在相当于受试者胃部的生理条件下，包覆在该MLV-API药物制剂的该MLV内部的该API可在4小时内从该MLV释放至多约30％至约55％。

21.如权利要求1的制剂，其中在相当于受试者肠道的生理条件下，包覆在该MLV-API药物制剂的该MLV内部的该API可在4小时内从该MLV释放至多约15％至约40％。

22.如权利要求1的制剂，其中受试者中该负载API的MLV的药物吸收率比受试者中游离形式药物的药物吸收率高出约1.2至约3.0倍。

23.一种制备MLV-API药物制剂的方法，其包含以下步骤

a.借由酸性溶液水合有机组分而形成MLV；

d.将碱性水溶液添加至步骤a中形成的MLV中以制备含有该MLV的碱性水溶液；

e.将API溶解于水中以制备API溶液；

f.将步骤e的API溶液与步骤d的含有MLV的碱性水溶液混合以制备主动负载溶液，其中在该MLV的内部与外部之间建立pH梯度，以促进该API的主动负载；

g.培养步骤f的主动负载溶液，使该API主动负载至该MLV中，以形成负载API的MLV，

其中该API包含弱碱；

其中该有机组分包含一或多种脂质；且

其中该制备方法不使用透析或挤出过程。

24.如权利要求23的方法，其中该负载API的MLV的药物/脂质比为至少约15重量％。

25.如权利要求23的制备方法，其中当步骤f的主动负载溶液内的药物/脂质比为约5至约20重量％时，该包覆率达到90％或更高。

26.如权利要求23的制备方法，其中当步骤f的主动负载溶液内的药物/脂质比为约15至约20重量％且当该API为氯喹(chloroquine，CQ)时，该包覆率达到90％或更高。

27.如权利要求23的制备方法，其中当步骤f的主动负载溶液内的药物/脂质比为约5重量％且当该API为尼罗蓝(Nile Blue，NB)时，该包覆率达到90％或更高。

28.如权利要求23的制备方法，其中当步骤f的主动负载溶液内的药物/脂质比为约5至约15重量％且当该API为羟氯喹(HCQ)时，该包覆率达到90％或更高。

29.如权利要求23的制备方法，其中当步骤f的主动负载溶液内的药物/脂质比为约10至约20重量％且当该API为可乐定盐酸盐时，该包覆率达到90％或更高。

30.如权利要求23的制备方法，其中步骤g的培养温度在约50℃至约70℃之间。

31.如权利要求23的制备方法，其中步骤a的有机组分呈薄膜形式。

32.如权利要求23的方法，其中步骤a的有机组分包含DSPC、DOPC、DOPS、DPPS、DSPS、DOPE、磷脂质、溶脂质、溶磷脂质、神经脂质、聚乙二醇化脂质、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇(不限于特定的糖)、胆固醇或其组合。

33.如权利要求23的制备方法，其中步骤a的有机组分包含摩尔比率为约1:0.2至约1:2.2的胆固醇与脂质。

34.如权利要求23的制备方法，其更包含步骤b的添加冷冻保护剂并冷冻干燥步骤a中形成的MLV。

35.如权利要求34的制备方法，其中该冷冻保护剂选自蔗糖、右旋糖及海藻糖或其组合。

36.如权利要求34的制备方法，其中该冷冻保护剂的浓度为约15％至约45％。

37.如权利要求34的制备方法，其更包含步骤c的在冷冻干燥步骤b之后及进行步骤d、e、f及g之前将该负载API的MLV储存在室温下至多8周，其中当在步骤c之后进行步骤d、e、f及g时，可达到高于90％的包覆率。

38.如权利要求23的制备方法，其中该酸性溶液的pH为约1.0至约3.0。

39.如权利要求23的制备方法，其中该API包含氯喹(chloroquine，CQ)、CQ衍生物、可乐定、可乐定衍生物、伊马替尼、普萘洛尔、毛果芸香碱、美洛昔康、阿立哌唑、氯丙嗪、R848、咪喹莫特、甲氟喹及伯胺奎或其医药上可接受的盐。

40.如权利要求23的制备方法，其中该碱性水溶液包含碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢镁、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氨或其组合。

41.如权利要求23的制备方法，其中该MLV-API药物制剂包含如权利要求1的制剂。

42.一种治疗类风湿性关节炎、红斑性狼疮或疟疾、高血压、ADHD、药物戒断、更年期潮红、腹泻、痉挛及疼痛病况的方法，其包含向受试者口服给予如权利要求1的MLV药物制剂。

43.如权利要求42的方法，其中该受试者为儿童。

44.一种MLV-API药物制剂制备试剂盒，其包含API、碱性水溶液及冻干的MLV，

其中该API包含呈粉末形式或能够研磨成粉末形式的任何形式的弱碱药物；

其中分开储存该三个组分；且

其中将该三个组分混合会导致该API主动负载至该MLV中，而无需任何额外成分且无需挤出及透析过程即可形成MLV-API药物制剂。

45.如权利要求44的试剂盒，其中该MLV-API药物制剂包含如权利要求1的组合物。

46.如权利要求44的试剂盒其中使用如权利要求44的试剂盒制备的MLV-API药物制剂的包覆率在约4℃的储存温度下可维持>80％至多约34天。

47.如权利要求44的试剂盒，其中使用如权利要求44的试剂盒制备的MLV-API药物制剂的包覆率在约4℃的储存温度下可维持>94％至多约24天。

48.如权利要求44的试剂盒，其中使用如权利要求44的试剂盒制备的MLV-API制剂在如权利要求45的试剂盒的冻干的MLV储存在约15℃至约30℃之间的室温及约20％至约80％之间的相对湿度下至少8周之后的包覆率为至少90％。

49.如权利要求48的试剂盒，其中使用如权利要求44的试剂盒制备的MLV-API制剂当储存在4℃下约2周时维持至少90％的包覆率。

50.如权利要求44的试剂盒，其中使用如权利要求44的试剂盒制备的MLV-API制剂的包覆率为约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％。

51.如权利要求44的试剂盒，其中该负载API的MLV的药物/脂质比为至少约15重量％。

52.如权利要求44的试剂盒，其中该API包含氯喹(CQ)、CQ衍生物、可乐定、可乐定衍生物、伊马替尼、普萘洛尔、毛果芸香碱、美洛昔康、阿立哌唑、氯丙嗪、R848、咪喹莫特、甲氟喹及伯胺奎或其医药上可接受的盐。

53.如权利要求44的试剂盒，其中该碱性水溶液包含碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙、碳酸镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢镁、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氨或其组合。

54.如权利要求44的试剂盒，其中该冻干的MLV包含DSPC、DOPC、DOPS、DPPS、DSPS、DOPE、磷脂质、溶脂质、溶磷脂质、神经脂质、聚乙二醇化脂质、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇(不限于特定的糖)、胆固醇或其组合。

55.如权利要求44的组合物，其中该MLV内部的pH为约1.0至约3.0且该碱性水溶液的pH为约8至约10。

56.如权利要求44的试剂盒，其中该胆固醇与DSPC的摩尔比率为约1:0.2至约1:2.2。