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CN120531701A - 一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法 - Google Patents

一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法

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CN120531701A
CN120531701A CN202510594743.4A CN202510594743A CN120531701A CN 120531701 A CN120531701 A CN 120531701A CN 202510594743 A CN202510594743 A CN 202510594743A CN 120531701 A CN120531701 A CN 120531701A
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sericin
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glycyrrhizic acid
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Abstract

本发明属于干眼症治疗领域，涉及一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法。白藜芦醇纳米制剂包括白藜芦醇，以及丝胶蛋白与甘草酸通过互穿作用形成的复合载体，所述复合载体包封所述白藜芦醇。本发明通过采用丝胶蛋白与甘草酸互穿形成的复合载体对白藜芦醇进行包封，有效地解决了传统白藜芦醇在治疗干眼症过程中因生物利用度低而导致的疗效不佳问题。该复合载体能够包封白藜芦醇，形成稳定的纳米丝状结构，该纳米丝状结构具有小于10nm的水动力直径，极大地提升了白藜芦醇的口服生物利用度以及在眼部组织的分布能力，进而显著提升白藜芦醇口服治疗干眼的药效。

Description

一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及干眼症治疗技术领域，具体涉及一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法。
背景技术
近年来，我国干眼症的患病人数持续增加，这种受多重因素影响的眼部疾病主要表现为眼睛干涩、异物感和视觉疲劳，严重时则可能出现眼睛发红、明显不适、肿胀以及灼烧感。若治疗不及时，干眼症甚至会对视力造成损害。炎症在干眼症的发生和发展中扮演着核心角色，既是重要诱因之一，也是常见的临床表现，在治疗过程中有效控制炎症至关重要。目前，环孢素A、他克莫司和糖皮质激素是主要的干眼症治疗药物，但长期使用这些药物可能带来副作用，如耐药性的增强、白内障风险提升以及眼压升高。鉴于此，探索新的治疗策略对于应对干眼症的挑战显得尤为重要。
白藜芦醇(Resveratrol，RES)是一种天然多酚类化合物，广泛存在于葡萄皮、红酒、蓝莓等植物中，以抗氧化、抗炎和神经保护作用著称，在治疗干眼方面展现出潜力。白藜芦醇具有抗炎、抗氧化等作用，有助于全面改善干眼症状，其天然来源还能够降低毒性和副作用的风险。白藜芦醇针对炎症的特异性作用显著，能有效减轻眼部炎症症状，同时具有神经保护作用，能够促进眼部神经修复。总体而言，白藜芦醇在治疗干眼方面具有安全性高、耐受性好等优点。
虽然白藜芦醇在治疗干眼症方面展现出潜力，但其口服后的生物利用度相对较低，进而限制了其治疗效果。具体而言，白藜芦醇的口服生物利用度低于5％，这是由于其在体内经历快速代谢和消除过程所致。这种低生物利用度直接导致眼内浓度不足，从而削弱了其在干眼症治疗中的效果。
因此，需要提供新的技术以提高白藜芦醇的口服生物利用度，进而提升其对干眼症的治疗效果。
发明内容
(一)要解决的技术问题
为了解决现有技术中存在的白藜芦醇治疗干眼症过程中由于生物利用度低导致的干眼症治疗效果不佳的问题，本发明提供一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂及其制备方法。
(二)技术方案
为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
第一方面，本发明提供一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂，包括白藜芦醇，以及丝胶蛋白与甘草酸通过互穿作用形成的复合载体；
所述复合载体包封所述白藜芦醇。
第二方面，本发明还提供一种上述白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合，得到复合载体液；
S2：将白藜芦醇加入复合载体液中，将体系的pH调节至碱性，然后进行超声处理，接着将体系的pH调节至中性，进行离心处理后得到上清液；
S3：对上清液进行干燥处理，得到白藜芦醇纳米制剂。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S1以及步骤S2中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为(4-6):(40-50):(40-50)。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S1中，甘草酸盐为甘草酸二钾、甘草酸二钠、甘草酸钾或者甘草酸钠。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S1中，将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合，然后进行搅拌，搅拌时间为1-2h。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S2中，将白藜芦醇加入复合载体液之后，通过强碱将体系的pH调节至11.8-12.5。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S2中，在冰浴条件下进行超声处理，超声处理的时长为3-5min，离心处理的时间为25-35min。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S2中，通过盐酸将体系的pH调节至中性。
如上所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，优选地，步骤S3中，对上清液进行冷冻干燥处理，冷冻的温度为-40℃到-50℃。
(三)有益效果
本发明通过采用丝胶蛋白与甘草酸互穿形成的复合载体对白藜芦醇进行包封，有效地解决了传统白藜芦醇在治疗干眼症过程中因生物利用度低而导致的疗效不佳问题。该复合载体能够包封白藜芦醇，形成稳定的纳米丝状结构，该纳米丝状结构具有小于10nm的水动力直径，极大地提升了白藜芦醇的口服生物利用度以及在眼部组织的分布能力，进而显著提升白藜芦醇口服治疗干眼的药效。此外，甘草酸还能够联合丝胶蛋白共同提高纳米制剂的口服递送效率及生物相容性。
甘草酸与丝胶蛋白的结合使用能够使丝胶蛋白的等电点消失，有效防止丝胶蛋白在胃部环境中的降解和破裂，确保了白藜芦醇能以更完整、高效的形式被吸收并靶向至眼部组织。因此，本发明提供的白藜芦醇纳米制剂不仅能够克服现有技术中白藜芦醇生物利用度低的问题，还能够显著增强其对干眼症的治疗效果，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为丝胶蛋白、甘草酸二钾、丝胶蛋白-甘草酸复合物、丝胶蛋白包封的白藜芦醇、甘草酸包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的透射电镜图；
图2为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物、白藜芦醇-甘草酸二钾-丝胶蛋白物理混合物以及实施例1制备得到的产物的扫描电镜图；
图3A为甘草酸包封的白藜芦醇、丝胶蛋白包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的包封能力对比图；
图3B为甘草酸包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的稳定性对比图；
图3C为丝胶蛋白、甘草酸二钾、丝胶蛋白-甘草酸复合物、甘草酸包封的白藜芦醇、丝胶蛋白包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的尺寸对比图；
图4A为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物的血液相容性对比图；
图4B为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物本身的颜色对比图；
图4C为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物的血液相容性统计图；
图5为白藜芦醇、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物的口服相容性对比图；
图6为白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的血药浓度检测图；
图7为根据图6得到的药代动力学数据；
图8为白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物在全眼球组织分布的检测图；
图9A为不同组别的小鼠角膜的荧光染色对比图；
图9B为不同组别的小鼠眼球的HE染色对比图；
图9C为图9A的统计图；
图9D为不同组别的小鼠泪液分泌统计对比图；
图9E为图9B中角膜厚度的统计图；
图9F为图9B中角膜上皮细胞厚度的统计图。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合附图以及具体实施方式，对本发明作详细描述。
本发明提供一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂，包括白藜芦醇，以及丝胶蛋白与甘草酸通过互穿作用形成的复合载体，复合载体包封在白藜芦醇的表面。
本发明通过采用丝胶蛋白与甘草酸互穿形成的复合载体对白藜芦醇进行包封，有效地解决了传统白藜芦醇在治疗干眼症过程中因生物利用度低而导致的疗效不佳问题。该复合载体能够包封白藜芦醇，形成稳定的纳米丝状结构，该纳米丝状结构具有小于10nm的水动力直径，极大地提升了白藜芦醇的口服生物利用度以及在眼部组织的分布能力，进而显著提升白藜芦醇口服治疗干眼的药效。此外，甘草酸还能够联合丝胶蛋白共同提高纳米制剂的口服递送效率及生物相容性。
甘草酸与丝胶蛋白的结合使用能够使丝胶蛋白的等电点消失，有效防止丝胶蛋白在胃部环境中的降解和破裂，确保了白藜芦醇能以更完整、高效的形式被吸收并靶向至眼部组织。因此，本发明提供的白藜芦醇纳米制剂不仅能够克服现有技术中白藜芦醇生物利用度低的问题，还能够显著增强其对干眼症的治疗效果，具有良好的应用前景。
本发明还提供一种上述白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合，搅拌后得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇加入复合载体液中，将体系的pH调节至碱性，然后进行超声处理，接着将体系的pH调节至中性，进行离心处理后得到上清液。
S3：对上清液进行干燥处理，得到白藜芦醇纳米制剂。
优选地，在步骤S1以及步骤S2中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为(4-6):(40-50):(40-50)，进一步优选为5:45:45。
优选地，上述步骤S1中，可以将丝胶蛋白溶解在去离子中，在4℃下过夜储存以进一步完成水合，甘草酸盐可以是甘草酸二钾、甘草酸二钠、甘草酸钾或者甘草酸钠，上述甘草酸二钾、甘草酸二钠、甘草酸钾或者甘草酸钠均为甘草酸的盐类，具有较好的溶解度和两亲性。将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合后需要进行搅拌，搅拌时间为1-2h，搅拌速度可以是800-1000r/min。
优选地，步骤S2中，将白藜芦醇加入复合载体液之后，通过强碱/强碱溶液，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液等将体系的pH调节至11.8-12.5，然后在冰浴条件下进行超声处理，且每次超声处理的时长为3-5s，每次超声处理的时长为3-5s，超声处理的总时长为3-5min，接下来通过盐酸将体系的pH调节至7，然后以8000×g的离心力离心处理25-35min，以去除沉淀。离心后得到的上清液即为负载白藜芦醇的丝胶蛋白-甘草酸纳米复合物，接着对上清液进行冷冻干燥处理，冷冻的温度为-40℃到-50℃，得到白藜芦醇纳米制剂。
上述步骤S1中，丝胶蛋白与甘草酸盐通过分子间氢键、疏水相互作用及静电引力形成互穿网络结构。具体地，丝胶蛋白的β-折叠结构域能够与甘草酸盐的三萜皂苷基团产生空间位阻互补，形成动态交联的纳米级网状结构，为后续白藜芦醇的包封提供锚定位点。该结构能够通过范德华力对白藜芦醇的酚羟基进行定向吸附，形成“核-壳”式的纳米组装体。另外，甘草酸盐的羧酸基团与丝胶蛋白的氨基能够产生酸碱中和效应，使丝胶蛋白的等电点消失，能够有效避免被胃蛋白酶的正电结合位点识别。
1-2h的搅拌能够确保分子充分扩散，形成稳定的纳米组装体。
上述步骤S2中，将体系的pH调节至11.8-12.5是本发明的关键制备条件之一，pH调节至11.8-12.5后，碱性环境能够促使丝胶蛋白的α-螺旋展开，暴露疏水核心，增强其与白藜芦醇的π-π堆积作用，该碱性环境下甘草酸盐的羧酸根完全电离，能够增强与白藜芦醇的静电吸引。该碱性环境还能够使白藜芦醇的酚羟基去质子化，进一步增强与丝胶蛋白Tyr残基的π-π堆积。
如果步骤S2中体系的pH小于11.8，则会导致复合载体对白藜芦醇的包封效果显著下降，进而导致产物的生物利用度不足。如果步骤S2中体系的pH大于12.5，则可能导致产物出现黑紫色，白藜芦醇的活性降低，生物相容性下降。
上述步骤S2中，超声处理产生的微射流能够剪切体系中较大的颗粒，使产物的粒径降至<10nm，冰浴条件能够抑制热效应，防止丝胶蛋白变性。超声处理时间也会对产物性能产生显著影响，如果超声处理时间不足3min，则会导致白藜芦醇的包封率过低，包封不完全。如果超声处理时间过长，则有可能导致丝胶蛋白变性，还会导致纳米制剂产生部分破损。
上述步骤S2中，将pH回调至中性能够使丝胶蛋白的氨基质子化，与甘草酸的羧酸根形成强静电交联，锁定纳米结构，并且使白藜芦醇重新质子化，被包裹于疏水核心。另外，将pH回调至中性还能够使甘草酸盐转化为甘草酸。
另外，在本发明的研究过程中，为提升白藜芦醇的生物利用度，首先尝试以甘草酸盐为单一载体，实现甘草酸对白藜芦醇的包封，通过检测发现，甘草酸对白藜芦醇拥有较好的包封率与负载率。然而，单一甘草酸的羧酸根的静电斥力较弱，无法抵抗离子诱导的颗粒聚集，且甘草酸与白藜芦醇的结合依赖动态疏水作用，缺乏刚性网络支撑，导致得到的产物经过40天储存后不够稳定。为了得到同时具有较好的包封率、负载率以及较好的稳定性的产物，本发明进一步增加丝胶蛋白，用于提升稳定性，同时与甘草酸以及白藜芦醇组成复合载体，提升药物在体内的递送效率，并且降低甘草酸引起的副作用。
此外，在单一甘草酸包封体系中，白藜芦醇-甘草酸复合物的平均粒径较大，引入丝胶蛋白后，复合包封产物的水动力直径相比白藜芦醇-甘草酸复合物得到了进一步下降，其形貌从白藜芦醇-甘草酸复合物的类球状转变为均一的纳米丝状结构。
本发明制备得到的负载白藜芦醇的丝胶蛋白-甘草酸纳米丝(R@SD)具有以下优点：
1、具有较高的包封能力、高稳定性以及更小的纳米尺寸。
2、有良好的血液相容性及体内相容性。
3、能够大幅度提升白藜芦醇的血药浓度。
4、白藜芦醇的药代动力学中，相比单一的白藜芦醇，R@SD的药时曲线下面积最高提升6.82倍，最大血药浓度最高提升12.18倍，达峰时间延后。
5、R@SD的全眼球组织的白藜芦醇的分布浓度大幅度提升。
为了进一步明确本发明方案及其技术进步性，以下结合具体实施例和技术效果进行说明。
实施例1
本实施例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：丝胶蛋白(Sericin protein，SER)在蒸馏水中搅拌至完全溶解，在4℃下过夜储存。通过稀释得到浓度为45mg/mL的丝胶蛋白水溶液。将甘草酸二钾(DipotassiumGlycyrrhizinate，DG)加入丝胶蛋白水溶液中，以900转/min的速度搅拌1h，得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇粉末加入复合载体液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至12，然后使用探针超声机冰浴超声处理3min，保持开3s，关3s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理30min，得到上清液。
S3：在-45℃下对上清液进行冷冻干燥，得到白藜芦醇纳米制剂。
本实施例中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为5:45:45。
实施例2
本实施例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：丝胶蛋白在蒸馏水中搅拌至完全溶解，在4℃下过夜储存。通过稀释得到浓度为75mg/mL的丝胶蛋白水溶液。将甘草酸二钠加入丝胶蛋白水溶液中，以800转/min的速度搅拌2h，得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇粉末加入复合载体液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至11.8，然后使用探针超声机冰浴超声处理4min，保持开4s，关4s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理25min，得到上清液。
S3：在-40℃下对上清液进行冷冻干燥，得到白藜芦醇纳米制剂。
本实施例中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为4:40:40。
实施例3
本实施例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：丝胶蛋白在蒸馏水中搅拌至完全溶解，在4℃下过夜储存。通过稀释得到浓度为60mg/mL的丝胶蛋白水溶液。将甘草酸钾加入丝胶蛋白水溶液中，以1000转/min的速度搅拌1.5h，得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇粉末加入复合载体液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至12.5，然后使用探针超声机冰浴超声处理5min，保持开5s，关5s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理35min，得到上清液。
S3：在-50℃下对上清液进行冷冻干燥，得到白藜芦醇纳米制剂。
本实施例中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为6:50:50。
实施例4
本实施例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：丝胶蛋白在蒸馏水中搅拌至完全溶解，在4℃下过夜储存。通过稀释得到浓度为30mg/mL的丝胶蛋白水溶液。将甘草酸钠加入丝胶蛋白水溶液中，以900转/min的速度搅拌1h，得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇粉末加入复合载体液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至12，然后使用探针超声机冰浴超声处理3min，保持开3s，关3s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理30min，得到上清液。
S3：在-45℃下对上清液进行冷冻干燥，得到白藜芦醇纳米制剂。
本实施例中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为5:45:45。
实施例5
本实施例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：丝胶蛋白在蒸馏水中搅拌至完全溶解，在4℃下过夜储存。通过稀释得到浓度为15mg/mL的丝胶蛋白水溶液。将甘草酸钠加入丝胶蛋白水溶液中，以950转/min的速度搅拌1.6h，得到复合载体液。
S2：将白藜芦醇粉末加入复合载体液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至12.1，然后使用探针超声机冰浴超声处理3.5min，保持开4s，关3s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理32min，得到上清液。
S3：在-46℃下对上清液进行冷冻干燥，得到白藜芦醇纳米制剂。
本实施例中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为5:45:45。
对比例1
本对比例提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1：甘草酸二钾在蒸馏水中搅拌至完全溶解，通过稀释得到浓度为45mg/mL的甘草酸二钾水溶液。
S2：将白藜芦醇粉末加入甘草酸二钾水溶液中，通过氢氧化钠将体系的pH调节至12，然后使用探针超声机冰浴超声处理3min，保持开3s，关3s。接下来，添加盐酸将pH调整至7，然后以8000×g的离心力离心处理30min，得到上清液。
S3：在-45℃下对上清液进行冷冻干燥，得到负载白藜芦醇的甘草酸纳米复合物。
本对比例中，白藜芦醇与甘草酸盐的质量比为5:45。
对比例2-3
对比例2-3提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，与实施例1的区别在于，分别通过氢氧化钠将体系的pH调节至11以及13。
对比例4-5
对比例4-5提供一种白藜芦醇纳米制剂的制备方法，与实施例1的区别在于，分别使用探针超声机冰浴超声处理1min以及8min。
图1为丝胶蛋白、甘草酸二钾、丝胶蛋白-甘草酸复合物、丝胶蛋白包封的白藜芦醇、甘草酸包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的透射电镜图，其中，甘草酸包封的白藜芦醇通过对比例1的方式制备得到，丝胶蛋白包封的白藜芦醇的制备方法与对比例1相似，区别在于将甘草酸二钾替换为丝胶蛋白，丝胶蛋白-甘草酸复合物的制备方法与实施例1的区别在于未添加白藜芦醇。
通过图1可知，丝胶蛋白、甘草酸二钾、甘草酸包封的白藜芦醇为球状，丝胶蛋白包封的白藜芦醇的包封效果较差，丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物呈现出纳米丝状并且实施例1制备得到的R@SD中白藜芦醇的纳米球尺寸进一步减小。
图2为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物、白藜芦醇-甘草酸二钾-丝胶蛋白物理混合物以及实施例1制备得到的产物的扫描电镜图。通过图2可知，RES为晶态管状结构，DG为球状结构，SER为片状结构，三种原料的尺寸较大，三种原料物理混合呈现的形貌为三者的叠加，然而，在被SD复合载体包封后，冻干后的R@SD显示出微米尺寸的蚕状结构，相比三种原料，形貌发生了显著变化，尺寸相比原料显著减小。
另外，观察到实施例2-5制备得到的产物的透射电镜图以及扫面电镜图与实施例1制备得到的R@SD的微观形貌基本完全相同。
图3A为甘草酸包封的白藜芦醇、丝胶蛋白包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的包封能力对比图，通过图3A可知，甘草酸以及甘草酸-丝胶蛋白复合载体对白藜芦醇的包封效果较好，丝胶蛋白对白藜芦醇的包封效果较差，几乎没有包封能力。
图3B为甘草酸包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的稳定性对比图，通过图3B可知，甘草酸包封的白藜芦醇的储存稳定性较差，随着储存时间增加，白藜芦醇保留率下降程度显著，R@SD的储存稳定性较好。
图3C为丝胶蛋白、甘草酸二钾、丝胶蛋白-甘草酸复合物、甘草酸包封的白藜芦醇、丝胶蛋白包封的白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的尺寸对比图。
实施例2-5的产物的包封效果、储存稳定性以及尺寸与实施例1基本相同。
图4B为白藜芦醇、甘草酸二钾、丝胶蛋白、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物本身的颜色对比图，且通过生理盐水、Triton、氢氧化钠进行对照，可以看出R@SD本身具有一定颜色。
配置氯化钠溶液、Triton溶液、氢氧化钠溶液、5mg/mL的白藜芦醇溶液、甘草酸二钾溶液、丝胶蛋白溶液、丝胶蛋白-甘草酸复合物溶液以及R@SD溶液，向上述各组溶液中分别加入等量的血红细胞，孵育一段时间后进行离心沉淀处理，如果血红细胞未破损就会直接沉底，如果破损证明药物对血红细胞有破坏性，一般认为溶血百分比(hemolysis)在5％以下时药物的血液相容性较好。
通过图4A以及图4C可知，除了Triton以及氢氧化钠组，各组的血液相容性均较好。另外，经过测试，实施例2-5的R@SD的血液相容性也较好，溶血百分比小于5％。
图5为白藜芦醇、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的产物的口服相容性对比图，其中以PBS缓冲液作为对照，检测白藜芦醇、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及R@SD对肝功能(AST以及ALT)以及肾功能(CREA以及UREA)的影响，可以看出白藜芦醇、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及R@SD对肝功肾功的影响与对照组接近，表明具有良好的口服相容性。同样地，经过检测，实施例2-5的R@SD也具有良好的口服相容性。
图6为白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物的血药浓度检测图，图7为根据图6得到的药代动力学数据。通过图6以及图7可知，相比单一的白藜芦醇，R@SD的药时曲线下面积AUC(0-t)提升了6.82倍，最大血药浓度Cmax提升了12.18倍，达峰时间Tmax延后，说明实施例1的产物R@SD能够大幅度提升RES的血药浓度。另外，经过检测，实施例2-5的R@SD同样能够大幅度提升RES的血药浓度。
图8为白藜芦醇以及实施例1制备得到的产物在全眼球组织分布的检测图，通过图8可知，相比单一的白藜芦醇，R@SD全眼球组织分布的浓度也得到了显著提升。另外，经过检测，实施例2-5的R@SD同样能够提升全眼球组织分布的浓度。
选取6-8周龄、雌性、健康C57BL/6小鼠若干只，剔除角膜荧光素钠染色异常及双眼泪液分泌量差异较大等角膜不正常的小鼠，确保小鼠眼部正常。然后将小鼠随机均分为5组。
第一组小鼠的双眼滴入等体积的PBS，作为正常对照组。将质量浓度为0.1％的苯扎氯铵溶液滴入第二组，第三组，第四组，第五组的小鼠的双眼中，每天1次，连续进行14天，诱导干眼症模型。
干眼症模型建立的同时进行药物治疗。第一组和第二组小鼠口服等体积的PBS缓冲液。第三组，第四组，第五组的小鼠口服等体积等浓度的白藜芦醇、丝胶蛋白-甘草酸复合物以及实施例1制备得到的R@SD。上述各组的给药频率为：每天给药1次，连续给药14天，给药方式采用灌胃，给药剂量按照50mg/kg/只，给药体积为100μL/次/只。
在给药的第14天，使用0.1wt％的荧光素钠溶液对各组小鼠进行染色，将荧光素钠溶液滴入小鼠眼部，使其在小鼠眼表停留10s，接着用生理盐水冲洗掉多余染液，擦干小鼠的眼表，使各组小鼠暴露眼球于钴蓝光的裂隙灯下，调整放大倍数后拍照，记录各组小鼠的角膜上的着色情况，得到图9A。另外，取各组小鼠的眼球，固定包埋后进行HE染色，得到图9B。
采用酚红棉线实验测量给药14天后的各组小鼠的平均泪液分泌量(单位：mm)泪液分泌量(单位：mm)。酚红棉线实验的操作如下：用镊子夹取酚红棉线，将酚红棉线放置在小鼠眼睛的外眦部，60s后取出，记录各组小鼠在不同时间下的酚红棉线湿润长度(mm)，得到图9D。
通过图9A-F可知，在苯扎氯铵诱导的干眼小鼠模型中，R@SD可显著减轻干眼小鼠的眼表损伤，恢复角膜的正常结构以及增加泪液分泌量，其治疗效果明显优于RES。
另外，检测到对比例2制备得到的产物对白藜芦醇的包封效果相比实施例1-5显著下降，而对比例3的产物呈现黑紫色，白藜芦醇的活性以及生物相容性下降。对比例4的包封率过低，白藜芦醇包封不完全，对比例5的纳米制剂产生了破损，但是包封率依然高于对比例4。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (9)

1.一种用于治疗干眼症的白藜芦醇纳米制剂，其特征在于，包括白藜芦醇，以及丝胶蛋白与甘草酸通过互穿作用形成的复合载体；
所述复合载体包封所述白藜芦醇。
2.一种权利要求1所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合，得到复合载体液；
S2：将白藜芦醇加入复合载体液中，将体系的pH调节至碱性，然后进行超声处理，接着将体系的pH调节至中性，进行离心处理后得到上清液；
S3：对上清液进行干燥处理，得到白藜芦醇纳米制剂。
3.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S1以及步骤S2中，白藜芦醇、丝胶蛋白水溶液中的丝胶蛋白以及甘草酸盐的质量比为(4-6):(40-50):(40-50)。
4.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，甘草酸盐为甘草酸二钾、甘草酸二钠、甘草酸钾或者甘草酸钠。
5.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，将丝胶蛋白水溶液与甘草酸盐混合，然后进行搅拌，搅拌时间为1-2h。
6.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，将白藜芦醇加入复合载体液之后，通过强碱将体系的pH调节至11.8-12.5。
7.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，在冰浴条件下进行超声处理，超声处理的时长为3-5min，离心处理的时间为25-35min。
8.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S2中，通过盐酸将体系的pH调节至中性。
9.根据权利要求2所述的白藜芦醇纳米制剂的制备方法，其特征在于，步骤S3中，对上清液进行冷冻干燥处理，冷冻的温度为-40℃到-50℃。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180339051A1 (en) * 2015-09-07 2018-11-29 Medskin Solutions Dr. Suwelack Ag Composition for topical application comprising dimethyl isosorbide, a polyol, and a phenolic or polyphenolic antioxidant
CN109464552A (zh) * 2019-01-04 2019-03-15 河南中医药大学 复方白藜芦醇纳米脂质载体及其制备方法以及应用
US20210046018A1 (en) * 2019-08-16 2021-02-18 Ted's Brain Science, Inc. Resveratrol medication for the treatment of ocular pain and method of use thereof
CN117982718A (zh) * 2024-01-25 2024-05-07 深圳杉海创新技术有限公司 一种丝胶/白藜芦醇修复凝胶及其制备方法与应用
CN119235823A (zh) * 2024-12-06 2025-01-03 江西科技师范大学 抑制骨与软组织感染的纳米粒复合物及其制备方法和应用
CN119235911A (zh) * 2024-09-29 2025-01-03 首都医科大学附属北京同仁医院 一种新型纳米药物Res@LDH及其制备方法和应用
CN119367286A (zh) * 2024-11-08 2025-01-28 北京市眼科研究所 一种干眼症滴眼液

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180339051A1 (en) * 2015-09-07 2018-11-29 Medskin Solutions Dr. Suwelack Ag Composition for topical application comprising dimethyl isosorbide, a polyol, and a phenolic or polyphenolic antioxidant
CN109464552A (zh) * 2019-01-04 2019-03-15 河南中医药大学 复方白藜芦醇纳米脂质载体及其制备方法以及应用
US20210046018A1 (en) * 2019-08-16 2021-02-18 Ted's Brain Science, Inc. Resveratrol medication for the treatment of ocular pain and method of use thereof
CN117982718A (zh) * 2024-01-25 2024-05-07 深圳杉海创新技术有限公司 一种丝胶/白藜芦醇修复凝胶及其制备方法与应用
CN119235911A (zh) * 2024-09-29 2025-01-03 首都医科大学附属北京同仁医院 一种新型纳米药物Res@LDH及其制备方法和应用
CN119367286A (zh) * 2024-11-08 2025-01-28 北京市眼科研究所 一种干眼症滴眼液
CN119235823A (zh) * 2024-12-06 2025-01-03 江西科技师范大学 抑制骨与软组织感染的纳米粒复合物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QINGCHEN CUI ET AL.: "Fabrication of resveratrol-loaded soy protein isolate-glycyrrhizin nanocomplex for improving bioavailability via pH-responsive hydrogel properties", INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES, vol. 28, no. 01, 23 December 2023 (2023-12-23), pages 1 - 15 *
张洪铭等: "丝素蛋白负载白藜芦醇微球的制备及其缓释特性", 蚕业科学, vol. 46, no. 04, 5 January 2021 (2021-01-05), pages 522 - 526 *

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