CN120457128A

CN120457128A - 作为免疫刺激剂以引发先天抗肿瘤免疫的Toll样受体7激动剂

Info

Publication number: CN120457128A
Application number: CN202380090709.2A
Authority: CN
Inventors: M·单; J·瓦基姆; A·古托普洛斯
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2022-11-09
Filing date: 2023-11-08
Publication date: 2025-08-08
Also published as: AU2023376684A1; JP2025538184A; IL320723A; EP4615842A1; KR20250102088A; MX2025005410A; WO2024100093A1; CO2025007474A2; CL2025001375A1

Abstract

本发明涉及可以特异性激活TLR7的化合物。本发明的化合物因其可以刺激先天免疫而可用。本发明的化合物可以用于治疗包括癌症、病毒感染和皮肤病变在内的病况。这些化合物可任选地配制成增强局部施用后的渗透，所述组合物优选引发局部特异性炎症细胞因子反应，同时限制不期望的红斑和其他炎症反应。本发明还涉及包含本发明的化合物和优选地另外的化合物诸如咪喹莫特和/或瑞喹莫德(R848)的药物组合物。本发明还涉及一种包含本发明的化合物的组合物以及用作药物的化合物。本发明的其他方面、实施方案、优势和应用将从本文的进一步描述中变得清晰。

Description

作为免疫刺激剂以引发先天抗肿瘤免疫的Toll样受体7激动剂

技术领域

背景技术

程序性细胞死亡蛋白1，又称PD-1和CD279(分化簇279)，为T细胞和B细胞表面上的一种蛋白质，其具有通过下调免疫系统来调节免疫系统对人体细胞的反应以及通过阻抑T细胞炎症活性来促进自体耐受性的作用。这将预防自身免疫性疾病，但它也可能阻止免疫系统杀伤癌细胞。多年来，人体免疫系统在抗肿瘤领域中的作用一直被低估，直到免疫检查点抑制剂(例如，PD-1/PD-L1的抑制剂)在临床上的成功应用。PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂是一组阻断细胞表面上存在的PD-1和PDL1免疫检查点蛋白的活性的检查点抑制剂药物。

免疫系统具有多种“刹车”机制以负下调T细胞或其他免疫细胞的激活和功能，从而保护宿主自身的健康细胞。PD-1/PD-L1等检查点抑制剂以及CTLA-4拮抗剂可以选择性地释放免疫系统的“刹车”以利用所谓的“适应性免疫”并产生持久的抗肿瘤反应。然而，通常只有一小部分癌症患者在使用检查点抑制剂时临床获益。

人体免疫系统还设计为通过大量具有高选择性免疫功能的细胞类型之间的系统协调来保护身体免受病毒和细菌等外来实体的侵害，即所谓的“先天免疫”。包括吞噬细胞如树突状细胞(DC)、巨噬细胞、γδT细胞和自然杀伤细胞(NK)在内的细胞类型充当抵御外来实体的屏障。其背后的机制是利用病原体的保守分子模式和表达的Fc受体来识别和引发快速免疫反应。由于来自适应性免疫系统的B细胞和T细胞能够发起记忆反应，故通过DC介导的先天和适应性免疫系统之间的通讯可以引发特异性且持久性的免疫反应。

DC负责通过吞噬作用、受体介导的内吞作用和微胞饮作用不断地采样其环境。在模式识别受体(PRR)的帮助下，DC能够识别大量的外来实体。一旦PRR参与，DC就会被激活并成熟成更强的抗原呈递细胞(APC)，并上调CD40和CD86等共刺激分子的细胞表面表达，以实现最佳的T细胞引发和激活。

作为PRR家族的成员，Tool样受体(TLR)是众所周知的。Toll样受体(TLR)目前包含10种具有不同特异性的受体的基因家族，其是细胞病原体模式识别系统的一部分，该系统已进化为防御多种感染(细菌、病毒、真菌)。TLR的激活会导致细胞因子反应，例如释放干扰素以及激活特定的免疫细胞。组织中选定的TLR的功能表达差异很大。部分受体位于细胞表面处，诸如TLR4(受大肠杆菌脂多糖LPS刺激)位于例如上皮细胞上，或TLR3、7、8和9位于特定免疫细胞中的内体膜处。后者都被核酸激活，但识别不同类型的核酸。例如，TLR9被包含CpG子序列的单链DNA激活，TLR7和TLR8被单链RNA激活，而TLR3被双链RNA激活。

TLR还已牵涉在各种自身免疫和炎症性疾病中，最明显的例子是TLR7在系统性红斑狼疮发病机制中所扮演的角色(Barrat和Coffman,Immunol Rev,223:271-283,2008)。另外，TLR8多态性已与类风湿性关节炎相关联(Enevold等人,J Rheumatol,37:905-10,2010)。

每种TLR都有一类特定的分子用于识别微生物的不同表面和细胞内组分，从细菌的膜脂到病毒的单链或双链RNA。细胞内表达的TLR在内体隔室中并包括诸如TLR3、TLR7、TLR8、TLR9和TLR13等TLR。据报道，TLR7和TLR8为二聚体TLR受体，其包含富亮氨酸重复序列(LRR)基序作为胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域，其具有Toll/白细胞介素-1(IL-1)受体(TIR)信号传导结构域。已报道，TLR7在B细胞和浆细胞样树突状细胞(pDC)中表达，而TLR8可在单核细胞和髓样树突状细胞(mDC)中表达。

当TLR7/8与单链RNA(ssRNA)衍生鸟苷等降解产物发生激动剂结合时，二聚化界面会发生重排，包括蛋白质-蛋白质界面和配体介导的界面。TLR7/8胞外结构域中的构象变化导致胞质TIR信号传导结构域的激活构型。随后，存在MyD88依赖性信号，然后是DC中强烈的干扰素反应和促炎细胞因子产生。此外，激活的DC还会上调CD40和CD86等共刺激分子的细胞表面表达。共刺激表达和参与可导致最佳的T细胞引发和激活。

更近来发现，肿瘤相关抗原(TAA)的呈递会影响T细胞的引发和激活，从而产生稳健、长期的抗肿瘤免疫反应。研究显示，当抗原被结合在抗体-抗原复合物(即所谓的“免疫复合物”)中时，APC对抗原的摄取和呈递将更高效。由于激活的DC也会上调主要组织相容性复合物(MHC)的表达，故在与微生物接触期间内化的抗原将被消化，并且其肽会被MHC展示在DC的细胞膜上。激活的T细胞可以识别并杀伤含有MHC结合新抗原的肿瘤细胞。

如上面所提到的，只有一小部分患者从检查点抑制剂体验到临床益处。对于癌症患者而言，其中一个原因在于免疫细胞的存在和频率因肿瘤而异。肿瘤免疫微环境(TIME)中低的T细胞频率被视为“冷”，而高的T细胞频率被视为“热”。临床研究揭示，热肿瘤患者的(治疗)成果比冷肿瘤患者更好，无病生存期更长。

尽管经由TLR7/8通路的激动剂刺激可以激活DC、随后引发并激活T细胞，但合成小分子如咪喹莫特和瑞喹莫德(R848)仅已被批准用作局部治疗剂，例如，咪喹莫特经由瘤内来治疗基底细胞癌，以避免全身炎症。这样的临床治疗在很大程度上限制了对实体肿瘤应用TLR7/8激动剂疗法。

当癌性病变进展时，可能会发生转移，并且除手术外，还可能使用化学疗法、放射疗法和免疫疗法。瑞喹莫德是咪唑并喹啉家族的一员，在结构上与咪喹莫特相关，是一种免疫反应调节剂，可充当Toll样受体7和8的激动剂。然而，它与咪喹莫特明显不同，因为咪喹莫特仅通过toll样受体7(TLR7)传导信号。咪喹莫特已获FDA批准用于治疗多种皮肤疾病。与咪喹莫特相比，瑞喹莫德是更强效的TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和IL-12诱导剂。瑞喹莫德已被证实促进外源性抗原的交叉呈递，从而在动物模型中导致抗原特异性CD8+T-细胞反应的高效诱导。来自动物研究的结果已证实了瑞喹莫德激活树突状细胞的能力，包括诱导免疫细胞的局部激活、刺激促炎细胞因子的产生以及增强通过树突状细胞的抗原呈递从而导致有效细胞反应的激活的能力。在淋巴瘤模型中，瑞喹莫德的全身递送加放射引发持久的抗肿瘤免疫反应(Dovedi SJ 2013,Blood 121(2):251-9.)。瑞喹莫德已在临床试验中用于治疗光化性角化病、皮肤T细胞淋巴瘤和单纯疱疹病毒，具有混合结果。瑞喹莫德的其他现有技术用途包括作为疫苗佐剂施用以治疗各种疾病，包括转移性黑色素瘤，但结果不一致。瑞喹莫德已作为NYES0-1蛋白疫苗的疫苗佐剂用于治疗黑色素瘤(Sabado RL CancerImmunol Res.2015)。

仍然需要此外优选具有特异性并且有效的替代的TLR7激动剂。

发明内容

本发明旨在提供作为有效的TLR7激动剂的化合物以靶向先天免疫。本发明人发现了新型基于咪唑并喹啉的TLR7激动剂，其例如有效于引发针对例如癌症的特异性且持久性免疫反应。

因此，在本发明的第一方面，提供了一种根据式I的化合物，

或其药学上可接受的盐，

其中X为氧原子、C1-C5-烷基(优选CH₂)或NH；

其中R²和R³各自独立地选自氢、C1-C5-烷基、C4-C7-环烷基、C4-C7-杂环烷基、芳基和杂芳基；优选地R²和R³均各自为氢；

并且其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(a)或(b)或(c)下所定义：

(a)L¹为C2-C6烷基；

L²为5-或6-元杂环或OH；L³不存在或选自氢、C1-C2烷基和CH₂C(CH₃)₂；并且

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(b)L¹为C2-C6烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

L³选自6-元杂环、OH、C(O)O、S、SO₂和SO₃H；并且

R¹不存在或为甲基或氢；

(c)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在；

并且其中如果L³不存在，则L²经由共价键与R¹直接结合。

在第一方面的一个优选的实施方案中，R²和R³为氢。

优选地，本发明的化合物中的X为氧原子。

在一个进一步的实施方案中，本发明的化合物具有根据式II的结构：

其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(d)、(e)或(f)下所定义

(d)L¹为C2-C6烷基；

L²为5-或6-元杂环(优选地，三唑或哌嗪)或OH；L³不存在或选自氢、C1-C2烷基和CH₂C(CH₃)₂；并且

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(e)L¹为C2-C3烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

L³选自6-元杂环(优选地哌嗪)、OH、C(O)O、S、SO₂和SO₃H；并且

R¹不存在或为甲基或氢；

(f)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环(优选地哌嗪)或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在。

在本发明的具有式II的化合物的一个优选的实施方案中

L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自NH₂、OH和SCH₃。

在本发明的化合物的一个特别优选的实施方案中，化合物具有选自下面列出的指定为实施例1至实施例27的结构的结构：

一种更优选的本发明化合物涉及这样的化合物，其中

X为NH；

L¹为C2-C6烷基；

L²为5-或6-元杂环；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢；并且

R²和R³各自为氢。

还优选这样的本发明化合物，其中所述化合物

(i)激活TLR7的强度高于激活TLR8的强度；和/或

(ii)诱导IL-6、IL1-b和TNF-α产生；和/或

(iii)诱导外周血单核细胞(PBMC)中CD40和/或CD86的上调。

还优选这样的根据本发明的化合物，其中如果该化合物接触外周血单核细胞(PBMC)，则该化合物诱导TNFα从所述细胞的分泌。

还优选这样的根据本发明的化合物，其中当在实施例6.2.1中描述的测试系统中测试时，所述化合物对TLR7具有小于10μM并优选小于0.01μM的EC50。

本发明的再一个方面涉及一种包含本发明的化合物的药物组合物。

本发明还涉及一种包含本发明的化合物和优选地另外的化合物诸如咪喹莫特和/或瑞喹莫德(R848)的药物组合物。

本发明的再一个方面涉及一种本发明的化合物，其用作药物。

本发明的再一个方面涉及一种本发明的化合物，其用于治疗疾病，其中所述化合物在所述治疗中与另外的化合物咪喹莫特和/或瑞喹莫德(R848)联合使用。

优选的实施方案提供了一种本发明的化合物，其用于治疗选自以下的病况：癌症、病毒感染、非癌性皮肤病变、癌前皮肤病变、癌性皮肤病变、膀胱癌、病毒介导的皮肤病，所述组合物任选地配制成增强局部施用后的渗透，所述组合物优选引发局部特异性炎症细胞因子反应，同时限制不期望的红斑和其他炎症反应。

在本发明的组合物的优选实施方案中，本发明的化合物以0.01％-1％之间的量包含其中。

再一个方面涉及一种本发明的组合物，其用于治疗膀胱癌，其中所述组合物配制成用于囊内施用。

在本发明的组合物的优选实施方案中，本发明还包含下面罗列的组i至xiii中之一的附加组分：

i.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1％wt/vol的油酸(50％)和肉豆蔻酸异丙酯(50％)，或

ii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的肉豆蔻酸异丙酯(50％)和月桂基硫酸钠(50％)，或

iii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的油酸(50％)和月桂基硫酸钠(50％)，或

iv.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的油酸(33％)、肉豆蔻酸异丙酯(33％)和月桂基硫酸钠(33％)，或

v.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2％wt/vol的棕榈酸异丙酯(50％)和油酸钠(50％)，或

vi.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1.0％wt/vol的月桂基硫酸钠(25％)和亚油酸(75％)，或

vii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2.0％wt/vol的棕榈酸(50％)和月桂酸异丙酯(50％)，或

viii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1.5％wt/vol的油酸(50％)和亚油酸(50％)，或

ix.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的亚油酸(25％)、油酸(25％)和亚油酸异丙酯(50％)，或

x.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2.0％wt/vol的油酸钠(33％)、油酸(33％)和棕榈酸甲酯(33％)，或

xi.含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液，或

xii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中的油酸(10％)，或

xiii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中的油酸(2％)和月桂基硫酸钠(5％)。

本发明的再一个方面涉及一种用于治疗癌症的方法，其包括向罹患癌症的受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。

本发明的还再一个方面提供了一种用于治疗皮肤肿瘤病变和病毒诱导的皮肤疾病的方法，其包括局部施用本发明的组合物，所述组合物优选有效于减轻或消除所述病变或疾病，同时限制选自红斑和炎症的不良皮肤反应，所述组合物优选减少肿瘤病变向周围组织中的渗透和向淋巴结的转移。

本发明的还再一个方面涉及一种用于治疗膀胱肿瘤的方法，其包括囊内施用本发明的组合物，所述组合物优选增强本发明的化合物向膀胱上皮的渗透和递送，同时限制刺激，所述组合物优选减少肿瘤向周围肌肉组织中的浸润和向淋巴结的转移。

在本发明的方法的优选实施方案中，所述治疗还包括向所述受试者全身施用至少一种选自抗-PD1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体、抗-CD137抗体、激动剂CD40抗体、CD134(抗-OX40)激动剂和PLX3397的免疫调节剂。

在本发明的方法的优选实施方案中，所述治疗还包括向所述受试者全身施用干扰素γ。

在本发明的方法的优选实施方案中，所述治疗还包括在具有或不具有全身性抗-PD1抗体的情况下施用局部放射。

在本发明的方法的优选实施方案中，所述治疗还包括施用光动力疗法。

在再一个方面，本发明提供了一种激活生物样品中的TLR 7和/或8的方法，其包括使所述生物样品与根据本发明的化合物接触。

在再一个方面，本发明提供了一种本发明的化合物，其用作疫苗佐剂或与抗癌免疫治疗剂(优选伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)或派姆单抗(pembrolizumab))联合用于治疗癌症。

多肽和组合物的其他方面、优势、应用和用途将从本文的进一步公开中变得清晰。本说明书全文引用了若干文献。本文中的任何内容均不应被解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于这样的公开。

附图说明

图1：R848与猴TLR7(PDB 5GMH)之间的分子结合，其中R848的未掩埋氢基团以黑色箭头突出显示。右上：R848的化学结构。

图2：近期报道的TLR7/8激动剂的化学结构。

图3：高效且选择性的TLR7激动剂库。

图4：体外测试TLR7激动剂。通过使用Graph Pad Prism9软件绘制激动剂浓度对cDC群体(图4A)、pDC群体(图4B)和单核细胞(图4C)内CD86染色的中值荧光强度的关系图来为每种激动剂/刺激物生成X-Y散点图。

具体实施方式

皮肤癌通常位于浅表部位。原位黑色素瘤仍局限于表皮，且通常生长缓慢。此类病变可能需要数年时间才能发展为浸润性黑色素瘤。浸润性黑色素瘤通常具有表皮组分，但随着黑色素瘤细胞侵入真皮，其不再局限于表皮。转移性癌症通常位于深处。WO 2017/004421(通过引用并入本文)中示出了数据，其表明，瑞喹莫德在多种体内色素性病变转基因小鼠模型中以及在具有完整免疫系统的同基因黑色素瘤小鼠模型中均奏效。这些数据显示，瑞喹莫德有效于抑制或杀伤痣、非典型表皮内黑色素细胞增生以及黑色素瘤中的黑色素细胞肿瘤细胞。另外，接受瑞喹莫德治疗的小鼠淋巴结中的转移性黑色素瘤也显著减少，这表明瑞喹莫德可以抑制黑色素瘤细胞转移。另外，WO 2017/004421表明，瑞喹莫德与全身性抗-PD1疗法联用在黑色素瘤模型中显著增强了抗-PD1治疗效果。由于瑞喹莫德对肿瘤的作用是通过激活CD8 T细胞和抑制髓源性抑制细胞来介导的，故瑞喹莫德的作用并不局限于黑色素细胞肿瘤。它对治疗其他上皮癌和皮肤T细胞淋巴瘤也有效。

然而，还鉴于癌症和肿瘤的种类繁多，仍然需要更多的化合物来治疗癌症和其他疾病。

图1示出了TLR7与R848等激动剂配体复合的共晶体结构分析(Shimizu等人,CellReports 2018,25,3371)。出乎意料地，本发明人发现了在R848的未掩埋氢基团处的修饰可能性。TLR7的胞外结构域中的激动剂结合位点位于细胞溶酶体中。因此，本发明人发现，任何在低pH值下用可质子化基团进行的修饰都应有潜力延长激动剂配体在溶酶体中的停留时间。本发明人推断，这反过来又会增加此类激动剂配体与TLR7蛋白的结合。

因此，本发明人合成了基于咪唑并喹啉的大量不同的TLR7激动剂。根据下文实施例部分中罗列的进一步实验——其与发明人的论断一致，证实了该组新型激动剂在基于细胞的实验中表现非常好。

出乎意料地，与R484和一些近期报道的TLR7/8激动剂(图2)相比，这些新型TLR7激动剂(图3)不仅在细胞TLR7实验中表现出良好的活性，而且在TLR7与TLR8之间表现出高选择性。更令人惊奇的是，这些新型高选择性TLR7激动剂在细胞单核细胞实验中引发高细胞因子和趋化因子(IL-6、IL1-b和TNF-a)产量并诱导CD40和CD86的强上调(图4)。

因此，本发明在第一方面提供了一种根据式I的化合物，

或其药学上可接受的盐，

其中X为氧原子、C1-C5-烷基(优选CH₂)或NH；

并且其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(a)或(b)或(c)下所定义：

(a)L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(b)L¹为C2-C6烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

L³选自6-元杂环、OH、C(O)O、S、SO₂和SO₃H；并且

R¹不存在或为甲基或氢；

(c)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在；

并且其中如果L³不存在，则L²经由共价键与R¹直接结合。

在某些实施方案中，本发明的化合物刺激免疫反应以治疗癌症。

在更详细地描述本发明的方面和实施方案之前，下文提供了适用于本文整个说明书(包括权利要求书)中公开的发明的某些定义。

定义

除非另有指出或定义，否则所有使用的术语均具有技术人员清楚的其在本领域中的通常含义。例如，参考标准手册，诸如Sambrook等人(Molecular Cloning:A LaboratoryManual(第2版)第1-3卷,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)；F.Ausubel等人(Current protocols in molecular biology,Green Publishing and WileyInterscience,New York,1987)；Lewin(Genes II,John Wiley&Sons,New York,N.Y.,1985)；Old等人(Principles of Gene Manipulation:An Introduction to GeneticEngineering(第2版)University of California Press,Berkeley,CA,1981)；Roitt等人(Immunology(第6版)Mosby/Elsevier,Edinburgh,2001)；Roitt等人(Roitt’s EssentialImmunology(第10版)Blackwell Publishing,UK,2001)；和Janeway等人(Immunobiology(第6版)Garland Science Publishing/Churchill Livingstone,New York,2005)；以及本文引用的一般背景技术。

除非另有说明，否则所有未明确地详细描述的方法、步骤、技术和操作均可按本身已知的方式进行并且已经按本身已知的方式进行，如技术人员将清楚的。

除非另有说明，否则一系列要素前的术语“至少”应理解为指该系列中的每个要素。本领域技术人员应认识或者能够使用不超过常规的实验确定本文描述的发明的具体实施方案的许多等同物。这样的等同物旨在为本发明所涵盖。

本文中无论何处使用的术语“和/或”都包括“和”、“或”以及“由所述术语联系起来的要素的所有或任何其他组合”的含义。

如本文所用，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的20％以内、优选15％以内、更优选10％以内、最优选5％以内。

在整个本说明书及附随的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”及其变型诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应理解为意味着包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤的群组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤的群组。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”替代，或当在本文中使用时，有时也可以用术语“具有”替代。

“激动剂”是指可以与受体(例如，TLR)组合以诱导细胞活性的化合物。激动剂可以是直接与受体结合的配体。或者，激动剂可以间接地与受体组合，例如，通过(a)与另一种直接与受体结合的分子形成复合物，或(b)以其他方式导致另一化合物的改性使得该另一化合物直接与受体结合。激动剂可被称为特定TLR的激动剂(例如，TLR6激动剂)或TLR的特定组合的激动剂(例如，TLR7/8激动剂——TLR7和TLR8两者的激动剂)。“改善”是指特定病况特征性的症状或临床体征的程度、严重性、频率和/或可能性的任何降低。

“细胞介导的免疫活性”是指被认为是细胞介导的免疫反应的一部分的生物活性，诸如例如至少一种TH1细胞因子产量的增加。

“免疫细胞”是指免疫系统的细胞，即直接或间接参与免疫反应的产生或维持的细胞，无论该免疫反应是先天的、获得的、体液性的还是细胞介导的。

“体征”或“临床体征”是指与特定病况相关的能够由患者以外的人发现的客观身体发现。

“症状”是指疾病或患者病况的任何主观迹象。

“治疗”或其变型是指在任何程度上减轻、限制进展、改善或消退与病况相关的症状或体征。

如本文所用，“渗透增强剂”和“渗透增强”分别指增加组织对药物的渗透性的剂和组织对药物的渗透性的增加，即，以增加药物渗透通过组织诸如皮肤或肿瘤的速率和程度。通过使用此类增强剂实现的渗透增强可以例如通过使用扩散池装置或原位测量法测量药物通过动物或人体皮肤或肿瘤组织的扩散速率来观察。Merritt等人,DiffusionApparatus for Skin Penetration,J.of Controlled Release,1(1984)pp.161-162描述了扩散池。

如本文所用，“佐剂性(adjuvancy)”是指影响由免疫系统激活剂引起的非特异性炎症或特异性免疫反应的能力。

如本文所用，对于疗法的术语“抗癌反应”是指癌症对疗法的任何反应，优选是指疗法开始后肿瘤质量和/或体积的变化。过度增殖性病症反应可通过将局部或全身干预后的肿瘤大小与初始大小和尺寸比较来评估，如通过CT、PET、乳房X光检查、超声或触诊所测量。也可通过活检或手术切除后用卡尺测量肿瘤或对肿瘤进行病理检查来评估反应。可以定量方式记录反应，如肿瘤体积变化百分比，也可以定性方式记录反应，如“病理完全缓解”(pCR)、“临床完全缓解”(cCR)、“临床部分缓解”(cPR)、“临床疾病稳定”(cSD)、“临床疾病进展”(cPD)或其他定性标准。过度增殖性病症反应的评估可在疗法开始后早期进行，例如几小时后、几天后、几周后或优选地几个月后。反应评估的典型终点是化疗终止时或手术摘除残留肿瘤细胞和/或肿瘤床时。这通常在治疗开始后三个月。

如本文所用，“减小肿瘤大小”定义为肿瘤大小的减小。这种效果可以通过减少肿瘤中增殖肿瘤细胞的数量(例如，通过减少肿瘤细胞的细胞分裂)和/或通过诱导现有肿瘤细胞的细胞毒性或细胞死亡(凋亡)来实现。因此，肿瘤生长被遏制或阻止。

如本文所用，术语“抑制癌症”或“抑制癌细胞生长”旨在包括抑制不期望或不适当的细胞生长。抑制旨在包括抑制增殖，包括快速增殖。术语“抑制癌细胞生长”也旨在涵盖抑制肿瘤生长，其包括预防受试者体内肿瘤的生长或减少受试者体内原有肿瘤的生长。抑制也可以是抑制肿瘤从一个部位向另一个部位的转移。如果癌症的至少一种症状得到缓解、终止、减缓或预防，则癌症被“抑制”。如本文所用，如果癌症的复发或转移得到减少、减缓、延迟或预防，则癌症也被“抑制”。

“治疗化合物”、“药剂”和“治疗剂”在本文中同义地使用。

如本文所用，“一个/种(a)”、“一个/种(an)”、“该”、“至少一个/种”和“一个/种或多个/种”可互换地使用。因此，例如，包含“一种”免疫反应调节剂(IRM)化合物的药物组合物可以解释为指该药物组合物包含至少一种IRM化合物。

如本文所用，术语“受试者”应指任何动物，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物或任何其他哺乳动物。在一个实施方案中，受试者为灵长类动物。在另一个且最优选的实施方案中，受试者为人。

另外在本文中，以端点记述的数值范围包括包含在该范围内的所有数值(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。本发明的组合物可例如以0.01％-1％(vol/wt％)的量包含本发明的化合物。

如本文所用，术语“协同”是指本文描述的治疗剂的组合，当合在一起时，其比单独的疗法的加和效应更有效。联合疗法(例如，治疗剂联用)的协同效应允许向患有疾病或病症(例如，增殖性病症)的受试者使用较低剂量的一种或多种治疗剂和/或以较低的频率施用一种或多种治疗剂。利用较低剂量的一种或多种治疗剂和/或以较低的频率施用治疗剂的能力将减少与向受试者施用该药剂相关联的毒性，而不会降低疗法在疾病或病症的治疗中的功效。另外，协同效应可以导致药剂在预防、控制或治疗疾病或病症(例如，增殖性病症)中改善的功效。最后，联合疗法的协同效应可避免或减少与单独使用任一治疗剂相关联的不良或不希望有的副作用。

如本文所用，术语“联用”可指使用多于一种治疗剂。术语“联用”的使用并不限制治疗剂被施用于患有疾病或病症(例如，增殖性病症)的受试者的顺序。第一治疗剂(诸如本文描述的化合物)可以在第二治疗剂(诸如抗癌剂)的施用之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、同时或之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)施用于患有疾病或病症(例如，增殖性病症，诸如癌症)的受试者。

免疫反应调节剂(“IRM”)包括具有强效免疫调节活性(包括但不限于抗病毒和抗肿瘤活性)的化合物。某些IRM调节细胞因子的产生和分泌。例如，某些IRM化合物诱导细胞因子诸如例如I型干扰素、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-0、IL-12、MUM和/或MCP-1的产生和分泌。再例如，某些IRM化合物可以抑制某些TH2细胞因子诸如IL-4和IL-5的产生和分泌。

另外，一些IRM化合物据称抑制IL-1和TNF(美国专利号6,518,265)。瑞喹莫德(1-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇)是一种免疫反应调节剂(IRM)，其是通过toll样受体(TLR)7和8刺激细胞而起作用。

如本文所用，当关于本发明的化合物以及关于本文描述的药剂的组合使用时，“有效量”包括但不限于药剂或组合中的每种药剂的对待治疗的疾病或病症(例如癌症)提供统计学显著的预期效果的量。代表性的预期效果在本文中描述。例如，在癌症治疗的上下文中，效果可以是肿瘤生长速率的减慢、肿瘤生长的停止或肿瘤大小、质量、代谢活性或体积的减小(如由标准的衡量标准诸如但不限于实体肿瘤反应评价标准(RECIST)所度量)、相对于单独用组合中单独的药剂或组合的子组合进行治疗而言生存率的统计学显著性提高等等。有效量可能随因素诸如所治疗或抑制的细胞生长的类型、所采用的治疗剂的类型、具体的治疗剂、受试者的(体格)大小或癌细胞生长或肿瘤的严重程度而异。例如，构成组合的每种单独的药剂的选择可影响“有效量”的构成。本领域普通技术人员将能够研究上述因素并确定治疗化合物或治疗化合物/药剂的组合的有效量。

例如，可以使用体外测定来确定治疗剂的“有效量”。普通技术人员会选择供用于上述体外测定中的组合中每种单独的药剂的适当量。可以使用细胞存活分数来确定所选择的量是否是特定治疗剂组合的“有效量”。例如，测定中使用的选定量优选应导致至少50％的细胞、更优选75％、最优选至少95％的细胞的杀伤。在一个优选的实施方案中，治疗剂的有效剂量为亚毒性剂量。如本文所用，术语“亚毒性剂量”是指导致少于约10％的细胞的杀伤的剂量。

施用方案(例如，施用顺序)也会影响有效量的构成。此外，可以每日或依次局部施用若干次分次剂量以及交错剂量，或者剂量可以连续输注。此外，可以根据治疗情况的需要按比例增加或减少给药。

在本文中采用表述“药学上可接受的”来指在合理的医学判断范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、变态反应或其他问题或并发症、与合理的收益/风险比相称的那些本发明治疗化合物或治疗化合物/药剂的组合、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，表述“药学上可接受的载体”意指涉及在将主题化学品从一个器官或身体部分携带或输送到另一个器官或身体部分中的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容而不会对患者造成伤害。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物制剂中采用的其他无毒相容物质。

就本发明的目的而言，化学元素根据元素周期表CAS版、Handbook of Chemistryand Physics第75版进行识别。另外，有机化学的一般原理见述于“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999和"March's AdvancedOrganic Chemistry",第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,John Wiley&Sons,New York:2001中，其整个内容据此通过引用并入。

如本文所用，“烷基”是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基团。烷基基团可以是未被取代的或被不会干扰组合物的指定功能的取代基所取代的，并且可被相同或不同的基团取代一次或两次。取代基可包括例如烷氧基、羟基、巯基、氨基、烷基取代的氨基、硝基、羧基、羰基、羰氧基、氰基、甲基磺酰氨基或卤素。“烷基”的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、3-甲基戊基等。例如，C1-C2烷基包括甲基和乙基基团。如本文所用，“烷基”烃包括一价和二价基团，即包括亚烷基，如果包含该烷基基团的所得结构稳定的话。

如本文所用，术语“环烷基”是指具有三至十四个碳原子和零个杂原子的饱和单环、双环或三环烃环系统。环烷基基团的代表性实例包括但不限于金刚烷基、双环[3.1.1]庚基、环丁基、环己基、环戊基和环丙基。

单独使用或如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共五至十四个环成员的单环和双环环系统，其中所述系统中的至少一个环是芳族的并且其中所述系统中的每个环含有三至七个环成员。术语“芳基”与术语“芳基环”可互换地使用。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环系统。示例性的芳基基团有苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其任选地包含一个或多个取代基。优选地，芳基基团不包含取代基。如在本文使用的术语“芳基”的范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。

单独使用或作为较大部分例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指这样的基团，其具有5至10个环原子、优选地5、6或9个环原子；环状阵列中具有共享的6、10或14个π电子；并且除了碳原子外，还具有一至五个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并包括氮或硫的任何氧化形式，以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基基团包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中连接基或连接点在杂芳族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、邻二氮杂萘基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H–喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、苯并噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基基团任选地是单环或双环的。术语“杂芳基”与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳族”可互换地使用，这些术语中的任何之一包括任选被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基所取代的烷基基团，其中所述烷基和杂芳基部分独立地任选地被取代。

如本文所用，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环环”可互换地使用并且是指稳定的5-至7-元单环或7-10-元双环杂环部分，其是饱和的或部分不饱和的，并且除了碳原子外，还具有一个或多个(优选地一至四个)如上文所定义的杂原子。当结合杂环的环原子使用时，术语“氮”包括被取代的氮。作为实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮为N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。

杂环环可以在任何杂原子或碳原子处连接到其侧基(或多个侧基)，这导致稳定的结构并且任何环原子可以任选被取代(优选非取代环)。这样的饱和或部分不饱和杂环基团的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂基、氧氮杂基、硫氮杂基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团(heterocyclic group)”、“杂环部分”和“杂环基团(heterocyclic radical)”在本文中可互换地使用，并还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，诸如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接基或连接点在杂环基环上。杂环基基团任选地是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基基团，其中所述烷基和杂环基部分独立地任选被取代(但优选是非取代的)。

如本文所述，本发明的某些化合物含有“任选被取代的”部分。通常，术语“被取代的”，无论前面是否有术语“任选”，都指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基所替代。当任何给定结构中多于一个位置被选自指定组的多于一个取代基所取代时，在每个位置处，取代基相同或不同。本发明所设想的取代基的组合优选为导致形成稳定或化学上可行的化合物的那些。如本文所用，术语“稳定的”是指在经受允许其生产、检测的条件及在某些实施方案中就本文公开的一个或多个目的而言经受允许其回收、纯化和使用的条件时基本上不改变的化合物。“稳定的”化合物通常不是自由基。优选地，除了明确指出的那些取代之外，本发明的化合物不被进一步取代。

除非另有说明，否则化合物和本发明的化合物的提及可以包括呈任何药学上可接受的形式或药学上可接受的衍生物的化合物，包括任何异构体(例如，非对映异构体或对映异构体)、盐、酯、酯的盐、溶剂化物、多晶型物等。特别地，如果化合物是光学活性的，则该化合物的提及可以包括该化合物的对映异构体中的每一种以及这些对映异构体的外消旋混合物。另外，除非另有说明，否则本文绘示的结构和化合物还意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，包括用氘或氚替代氢或用富13C-或14C-的碳替代碳，都在本发明的范围内。在一些实施方案中，基团包含一个或多个氘原子。优选地，“药学上可接受的盐、形式或衍生物”包括本发明的化合物的衍生物，其在施用于接受者后能够直接或间接地提供本发明的化合物或其激动剂代谢物或残基。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、变态反应等并与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge等人在J.PharmaceuticalSciences,1977,66,1-19(通过引用并入本文)中详细描述了药学上可接受的盐。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸及碱的那些盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例有氨基基团与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐，或通过使用本领域中使用的其他方法诸如离子交换形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。这些盐可以在治疗剂的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过将呈其游离碱形式的经纯化治疗剂与合适的有机或无机酸单独反应并分离出如此形成的盐来制备。代表性的盐还包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见例如Berge等人(1977)"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66:1-19)。

衍生自适当的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)₄盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。其他药学上可接受的盐包括，在适当时，使用抗衡离子诸如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。

因此，在本发明的第一方面，提供了一种根据式I的化合物，

或其药学上可接受的盐或衍生物，

其中X为氧原子、C1-C5-烷基(优选CH₂)或NH；

并且其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(a)或(b)或(c)下所定义：

(a)L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(b)L¹为C2-C6烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

L³选自6-元杂环、OH、C(O)O、S、SO₂和SO₃H；并且

R¹不存在或为甲基或氢；

(c)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在；

并且其中如果L³不存在，则L²经由共价键与R¹直接结合。

在第一方面的一个优选的实施方案中，R²和R³为氢。

优选地，本发明的化合物中的X为氧原子。

其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(d)、(e)或(f)下所定义

(d)L¹为C2-C6烷基(例如，乙基、丙基、丁基、戊基或己基)；

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(e)L¹为C2-C3烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

R¹不存在或为甲基或氢；

(f)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环(优选地哌嗪)或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在；

在本发明的具有式I或II的化合物的更优选的实施方案中

L¹为C2-C4烷基。

在本发明的具有式II的化合物的一个优选的实施方案中

L¹为C2-C6烷基(优选地C2-C4烷基)；

R¹不存在或选自NH₂、OH和SCH₃；

在本发明的优选实施方案中，本发明的化合物为根据如上文罗列的实施例13或14或者根据如上文罗列的实施例26或27的化合物。

在优选的实施方案中，本发明的化合物为选自如上文罗列的实施例1至6的化合物的化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。在最优选的实施方案中，本发明的化合物为选自如上文罗列的实施例1、3、4和5的化合物或其药学上可接受的盐或衍生物。

一种更优选的本发明化合物涉及这样的化合物，其中

X为NH；

L¹为C2-C6烷基；

L²为5-或6-元杂环；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢；并且

R²和R³各自为氢。

还优选这样的本发明化合物，其中所述化合物

(i)激活TLR7的强度高于激活TLR8的强度；和/或

(ii)诱导IL-6、IL1-b和TNF-α产生；和/或

(iii)诱导外周血单核细胞(PBMC)中CD40和/或CD86的上调。

在上述实施方案中，普通技术人员可以通过进行下文在实施例6.2.1中提供的方法来测试化合物激活TLR7的强度是否高于激活TLR8的强度。

在上述实施方案中，普通技术人员可以通过进行下文在实施例6.2.2中提供的方法来测试化合物是否诱导TNF-α产生。

在上述实施方案中，普通技术人员可以通过进行下文在实施例6.2.3中提供的方法来测试化合物是否诱导CD86的上调。

还优选这样的根据本发明的化合物，其中优选地当在下文实施例6.2.1中描述的测试系统中测试时，所述化合物对TLR7具有小于10μM并优选小于0.01μM的EC50。

在本发明的组合物的优选实施方案中，本发明的化合物以0.01％-1％wt/vol之间的量包含其中。

xi.含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液，或

本发明的还再一个方面涉及一种用于治疗膀胱肿瘤的方法，其包括囊内施用本发明的组合物，所述组合物优选增强瑞喹莫德向膀胱上皮的渗透和递送，同时限制刺激，所述组合物优选减少肿瘤向周围肌肉组织中的浸润和向淋巴结的转移。

在再一个方面，本发明提供了一种本发明的化合物，其用作疫苗佐剂或与抗癌免疫治疗剂(优选伊匹单抗、纳武单抗或派姆单抗)联合用于治疗癌症。

制备

本发明的TLR7激动剂化合物可以按照下文进一步提供的实施例制备。也可以采用合成本发明的化合物的替代方法。

用途、制剂和施用

药学上可接受的组合物

本发明的化合物将用作免疫反应调节剂，并将具有抗病毒和抗肿瘤活性。例如，与toll样受体7(TLR7)激动剂瑞喹莫德类似，预计本发明的化合物将减轻丙型肝炎病毒(HCV)感染，正如瑞喹莫德在临床2期研究中所显示的那样。在过敏性哮喘的鼠科动物模型中，瑞喹莫德(i.n.，20μg/小鼠)经由减少Nrf2信号传导来减轻过敏原诱导的气道反应性和炎症(Int J Biochem Cell Biol.2016Apr；73:53-62.doi:10.1016/j.biocel.2016.02.004.Epub 2016Feb 3)。瑞喹莫德还调节树突状细胞以增强巨细胞病毒-和HIV-1-特异性T细胞反应(J Immunol.2003Oct 15；171(8):4320-8.doi:10.4049/jimmunol.171.8.4320)。瑞喹莫德还诱导髓源性抑制细胞向巨噬细胞和树突状细胞的分化，并可通过减少免疫抑制性MDSC来改善癌症免疫疗法(参见Arch Pharm Res.2014；37(9):1234-40.doi:10.1007/s12272-014-0379-4.Epub 2014Apr19.)。鉴于瑞喹莫德作为TLR7/8激动剂所展现出的这些多种医学益处，预计同样是TLR7/8激动剂的本发明化合物也将享有上述医学用途和益处。

如实施例中所示，本发明的化合物，与瑞喹莫德一样，也是toll样受体7和8的激动剂。因此，在再一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物以及药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。在某些实施方案中，本发明的组合物中本发明的化合物的量使得其有效于可测量地激活生物样品中或患者体内的TLR7/8或其突变体。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制成向需要这样的组合物的患者施用。

如本文所用，术语“患者”或“受试者”意指动物，优选哺乳动物，最优选人。

术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”包括不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒介物。用于本发明的组合物中的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本发明的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式储器施用。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物口服、腹膜内或静脉内施用。本发明的组合物的无菌注射剂型包括水性或油性混悬剂。这些混悬剂根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬剂，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，通常可以采用无菌的非挥发性油作为溶剂或悬浮介质。可以采用的非挥发性油包括合成的单甘油酯或二甘油酯。如药学上可接受的天然油诸如橄榄油或蓖麻油(尤其是其聚氧乙基化形式)一样，脂肪酸诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂。这些油溶液或混悬剂还含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或通常用于药学上可接受的剂型(包括乳剂和混悬剂)的配制中的类似分散剂。其他常用的表面活性剂，诸如Tween、Span和通常用于药学上可接受的固体、液体或其他剂型的制造中的其他乳化剂或生物利用度增强剂，也可用于配制的目的。

在一个实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用。示例性的口服剂型包括胶囊、片剂、水性混悬剂或溶液。在口服使用的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服需要水性混悬剂时，可以将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，还任选地添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。

或者，本发明的药学上可接受的组合物可以以用于直肠施用的栓剂的形式施用。这些栓剂形式可通过将药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体并因此会在直肠中融化而释放药物。这些材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药学上可接受的组合物也可以局部施用，尤其是当治疗的目标包括易于通过局部施用及于的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道疾病。易于制备针对这些区域或器官中每种的合适局部制剂。

对于下肠道的局部应用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠剂制剂实现。也可以使用局部透皮贴剂。

对于局部应用，提供的本发明的药学上可接受的组合物可以被配制于合适的软膏，其含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的本发明的活性化合物。用于局部施用该化合物的示例性载体包括矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，提供的药学上可接受的组合物可以被配制于合适的洗剂或乳膏，其含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性化合物。合适的载体包括但不限于矿物油、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

本发明的药学上可接受的组合物任选地通过鼻气雾剂或吸入施用。这样的组合物可以根据药物配制领域中公知的技术制备并采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他的常规增溶剂或分散剂制备为在盐水中的溶液。如所提及的，本发明的药学上可接受的组合物也可配制用于口服施用。这样的制剂可与或不与食物一起施用。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在其他实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起施用。

任选地与载体物质组合以产生单一剂型的组合物的本发明化合物的量将随所治疗的宿主、特定的施用方式而异。优选地，提供的组合物可以被配制成使得可以向接受这些组合物的患者施用0.01-100mg/kg体重/天的化合物剂量。

还应理解，对于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、联合用药、治疗医师的判断以及所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明的化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。

免疫功能低下患者极易发展严重感染，这常常发展为脓毒症这种危及生命的情况。因此，旨在增强宿主免疫防御的免疫疗法是抵御感染和保护患者的极具吸引力的策略。近来，越来越多的证据表明，激活先天免疫系统可以赋予长期功能性重编程，由此，先天白细胞在二次暴露于病原体后会发起更强劲的反应，从而更高效地清除(病原体)并保护宿主，这被称为训练免疫。Toll样受体(TLR)激动剂是一类已被证明能够通过代谢重编程和表观遗传修饰来触发训练免疫现象的药剂，所述代谢重编程和表观遗传修饰将驱使抗微生物功能的显著增强。免疫调节性TLR激动剂作为疫苗佐剂也高度有益。此外，大多数癌症相关抗原都是自体抗原，并且除了癌症靶向策略外，还需要免疫刺激佐剂。因此，TLR7/8激动剂诸如本发明的化合物也将可用于治疗癌症。

在一个方面，本发明提供了一种治疗罹患TLR7/8相关病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的本发明的化合物，优选式II及相关式的化合物。

本发明的化合物可用作对TLR7激活有响应的癌症的抗癌剂。在某些实施方案中，所述癌症包括但不限于乳癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、中枢和周围神经系统癌、结肠癌、内分泌腺癌、食道癌、子宫内膜癌、生殖细胞癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、喉癌和下咽癌、间皮瘤、肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、小肠癌、软组织癌、睾丸癌、胃癌、皮肤癌、输尿管癌、阴道癌和外阴癌；遗传性癌症、视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤；白血病、淋巴瘤、非霍奇金病、慢性和急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、霍奇金病、多发性骨髓瘤和T-细胞淋巴瘤；骨髓增生异常综合征、浆细胞肿瘤、副肿瘤综合征、原发部位不明癌症以及AIDS相关恶性肿瘤。

在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗皮肤癌或肾癌。某一给定癌症对TLR7激活的敏感性可以通过但不限于以下方式评估：测量原发性或转移性肿瘤负荷的减少(轻微、部分或完全消退)、血象的改变、血液中激素或细胞因子浓度的改变、抑制肿瘤负荷的进一步增加、患者疾病的稳定化、评估与疾病相关的生物标志物或替代标志物、患者总生存期的延长、患者疾病进展时间的延长、患者无进展生存期的延长、患者无病生存期的延长、患者生活质量的改善或者疾病共病(例如但不限于疼痛、恶病质、活动(mobilization)、住院(hopitalization)、血象改变、体重减轻、伤口愈合、发烧)的调节。

根据本发明的化合物还可用作免疫反应调节剂，其可以以多种不同的方式调节免疫反应，使得其可用于治疗多种病症。

本文提供了激活个体免疫反应的方法，其包括使用如本文所述的化合物向个体施用有效量的TLR7的激活剂(例如，TLR7激活剂)。在一些变型中，TLR激活剂激活TLR7依赖性免疫反应。在一些变型中，TLR激活剂激活TLR7和TLR8依赖性免疫反应。除非另有说明，否则术语“TLR激活剂”是指本文公开的本发明化合物中的任一种。在一些优选的实施方案中，所述个体为人患者。

本公开提供了免疫调节方法并包括激活免疫反应的那些，包括但不限于免疫反应。本公开还提供了用于激活TLR7和/或TLR8诱导反应的方法(例如，体外或体内)。在一些变型中，使细胞与有效于从细胞激活有助于免疫反应的反应的量的TLR激活剂接触。

TLR7和/或TLR8的激活可用于治疗和/或预防多种对细胞因子有反应的疾病或病症。

本文提供了激活个体免疫反应的方法，该方法包括以有效于激活个体免疫反应的量向个体施用至少一种如本文所公开的TLR激活剂。

本文还提供了治疗病毒性疾病或病症(例如，HIV感染)的方法，该方法包括以有效于治疗病毒性疾病或病症的量向个体施用至少一种本发明的化合物。

在涉及向受试者施用本发明的化合物的任何方法的一些实施方案中，该化合物优选具有治疗上可接受的安全特性。例如，该化合物/TLR激活剂可具有治疗上可接受的组织学特性，包括对肝脏、肾脏、胰腺或其他器官可接受地低的毒性(如果有的话)。在一些实施方案中，安全特性包括对毒性、组织学特性和/或坏死(例如，肝脏、肾脏和/或心脏)的评价。在一些实施方案中，该TLR激活剂具有治疗上可接受的毒性水平。在一些实施方案中，如与另一种TLR激活剂相比，该TLR激活剂具有降低的毒性水平。在一些实施方案中，如与接受治疗的个体的初始体重相比，该TLR激活剂诱导治疗上可接受的体重减轻。在一些实施方案中，该TLR激活剂诱导总体重少于5％、7.5％、10％、12.5％或15％的减轻。在一些实施方案中，该TLR激活剂具有治疗上可接受的组织学特性。在一些实施方案中，例如，如与参考TLR激活剂相比，该TLR激活剂具有更佳(例如，严重程度评分更低)的组织学特性。在一些实施方案中，例如，在评价肝脏、肾脏和/或心脏时，该TLR激活剂具有更佳(例如，严重程度评分更低)的组织学特性。在一些实施方案中，该TLR激活剂具有治疗上可接受的坏死评分。在一些实施方案中，例如，如与参考TLR激活剂相比，该TLR激活剂具有减少的坏死和/或更佳(例如，更低)的坏死评分。在一些实施方案中，例如，如与参考TLR激活剂相比，该TLR激活剂具有减少的肾和/或肝细胞坏死和/或更佳的肾和/或肝细胞坏死评分。

因此，本发明提供了一种在动物(尤其是哺乳动物，优选人)中激活TLR7的方法，其包括向所述动物施用有效量的本发明的化合物。化合物的有效量将随本领域已知的因素而异，但预期剂量为约0.1至10mg/kg、0.5至10mg/kg、1至10mg/kg、0.1至20mg/kg、0.1至20mg/kg或1至20mg/kg。

本发明还提供了一种在动物中治疗病毒感染的方法，其包括向动物施用有效量的本发明的化合物。有效于治疗或抑制病毒感染的量为与未经治疗的对照动物相比将导致病毒感染的一种或多种表现(诸如病毒性病变、病毒载量、病毒产生率和死亡率)的降低的量。精确的量将随本领域已知的因素而异，但预期将为如上文关于TLR7的激活所指示的剂量，或约100ng/kg至约50mg/kg、优选约10μg/kg至约5mg/kg的剂量。

本发明的方法可以在体外或体内进行。特定细胞对用根据本发明的化合物进行治疗的敏感性可以特别地通过体外测试确定，无论是在研究过程中还是临床应用过程中。通常，将细胞的培养物与根据本发明的化合物以各种浓度组合达足以让活性剂抑制TLR7/8活性的时间段，该时间段通常在约一小时至一周之间。体外治疗可以使用来自活检样品或细胞系的培养细胞进行。

宿主或患者可以属于任何哺乳动物物种，例如灵长类动物物种，特别是人类；啮齿类动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、犬、猫等。动物模型对于实验研究具有重要意义，其为人类疾病的治疗提供模型。

此外，本发明还提供了根据本发明的化合物及其衍生物用于生产用于预防性或治疗性治疗由TLR7/8活性不足引起、介导和/或传播的疾病的药物的用途。在某些实施方案中，本发明提供了根据本发明的化合物或其生理学上可接受的盐或衍生物用于生产用于预防性或治疗性治疗TLR7/8介导的病症的药物的用途。此外，本发明的化合物和/或其生理学上可接受的盐或衍生物可以用作制备其他药物活性成分的中间体。该药物优选以非化学方式制备，例如通过将活性成分与至少一种固体、流体和/或半流体载体或赋形剂组合，并任选地与单一或多种其他活性物质在适当的剂型中相结合。

在一个实施方案中，本发明的化合物可以在疾病发作之前或之后施用一次或若干次作为治疗。这些化合物尤其用于治疗性治疗。治疗相关效果将在一定程度上缓解病症的一种或多种症状，或使与疾病或病理状态相关或导致疾病或病理状态的一个或多个生理或生化参数部分或完全恢复正常。如果化合物以不同的时间间隔施用，例如以增强反应并完全根除疾病的病原体和/或症状，则监测被视为一种治疗。可以应用相同的化合物或不同的化合物。本发明的方法也可以用于降低出现病症的可能性或甚至提前防止与TLR7/8活性不足或降低(与健康受试者相比降低)相关的病症的发生，或用于治疗出现的和持续的症状。

在本发明的含义中，如果受试者具有上述生理或病理状况的任何先决条件诸如家族性易感性、遗传缺陷或先前有过的疾病，则建议进行预防性治疗。

此外，本发明在再一个方面涉及一种药物，其包含至少一种根据本发明的化合物和/或其药学上可用的衍生物、盐、溶剂化物和立体异构体，包括其所有比率的混合物。在某些实施方案中，本发明涉及一种药物，其包含至少一种根据本发明的化合物和/或其生理学上可接受的盐。

在各种实施方案中，活性成分可单独施用或与其他治疗联合施用。通过在药物组合物中使用多于一种化合物，可能实现协同效应，即将本发明的化合物与至少一种作为活性成分的另一药剂联用，所述另一药剂为本发明的另一种化合物或为具有不同结构支架的化合物。活性成分可以同时或依次使用。

文献显示，toll样受体7(TLR7)激动剂R848与放射疗法(RT)联用将导致带有T-和B-细胞淋巴瘤小鼠中肿瘤的长期清除。因此，在再一个方面，本发明提供了一种通过施用本发明的化合物并联合放射疗法治疗受试者来治疗罹患淋巴瘤的受试者的方法。

在再一个方面，本发明提供了一种在需要这样的治疗的患者中治疗癌症的方法，其包括施用治疗有效量的本发明的化合物和施用治疗有效量的至少一种不同的抗肿瘤剂，所述不同的抗肿瘤剂选自：(1)紫杉烷类，(2)铂配位化合物，(3)为抗体的表皮生长因子(EGF)抑制剂，(4)为小分子化合物的EGF抑制剂，(5)为抗体的血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂，(6)为小分子化合物的VEGF激酶抑制剂，(7)雌激素受体拮抗剂或选择性雌激素受体调节剂(SERM)，(8)抗肿瘤核苷衍生物，(9)埃博霉素，(10)拓扑异构酶抑制剂，(11)长春花生物碱，(12)为αVβ3整合素的抑制剂的抗体；(13)抑制αVβ3整合素的小分子化合物；(14)叶酸拮抗剂；(15)核糖核苷酸还原酶抑制剂；(16)蒽环类药物；(17)抗癌生物制剂；(18)沙利度胺(或相关酰亚胺)；以及(19)格列卫(Gleevec)。这些抗肿瘤化合物的实例公开于US20060183765中，该文献通过引用并入本文。

本发明的化合物可以与其他已知的治疗剂(包括抗癌剂)组合施用。如本文所用，术语“抗癌剂”涉及出于治疗癌症的目的向患有癌症的患者施用的任何药剂。

抗癌治疗可作为单一疗法应用，或者除了本文公开的本发明化合物之外还可以涉及常规手术或放射疗法或药物疗法。这样的药物疗法，例如化学疗法或靶向疗法，可包括以下抗肿瘤剂中的一种或多种，但优选一种：

烷化剂：诸如六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、英丙舒凡、对甲苯磺酸、洛莫司汀、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、苏消安、mechloretamine、卡波醌、阿帕齐醌、福莫司汀、葡磷酰胺、帕利伐米、哌泊溴烷、曲磷胺、乌拉莫司汀、TH-302、VAL-083；

铂化合物：诸如卡铂、顺铂、依铂、米铂(miriplatine)水合物、奥沙利铂、洛铂、奈达铂、吡铂、沙铂；洛铂、奈达铂、吡铂、沙铂；

DNA改变剂：诸如氨柔比星、比生群、地西他滨、米托蒽醌、丙卡巴肼、曲贝替定、氯法拉滨；安吖啶、brostallicin、匹杉琼、拉罗莫司汀；

拓扑异构酶抑制剂：诸如依托泊苷、伊立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊苷、拓扑替康；氨萘非特、贝洛替康、依利醋铵、voreloxin；

微管修饰剂：诸如卡巴他赛、多西他赛、艾瑞布林、伊沙匹隆、紫杉醇、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛、长春氟宁；福他布林(fosbretabulin)、替西他赛(tesetaxel)；

抗代谢药：例如天冬酰胺酶、阿扎胞苷、左亚叶酸钙、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、依诺他滨、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲沙、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、卡莫氟；去氧氟尿苷、艾西拉滨、雷替曲塞、沙巴他滨(sapacitabine)、替加氟、三甲曲沙；

抗癌抗生素：诸如博来霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、左旋咪唑、米替福新、丝裂霉素C、罗米地辛、链佐星、戊柔比星、净司他丁、佐柔比星、柔红霉素、普卡霉素；阿柔比星、培洛霉素、吡柔比星；

激素/拮抗剂：诸如阿巴瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡芦睾酮、氯烯雌醚、地加瑞克、地塞米松、雌二醇、氟可龙、氟甲睾酮、氟他胺、氟维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮丙瑞林、甲地孕酮、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肽、泼尼松龙、雷洛昔芬、他莫昔芬、促甲状腺素α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己烯雌酚；阿考比芬、达那唑、地洛瑞林、环硫雄醇、orteronel、恩杂鲁胺；

芳香酶抑制剂：诸如氨鲁米特、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、来曲唑、睾内酯、福美司坦；

小分子激酶抑制剂：诸如克唑替尼、达沙替尼、厄洛替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼、鲁索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、维莫非尼、博舒替尼、吉非替尼、阿昔替尼；阿法替尼、阿利色替、达拉非尼、达克替尼、dinaciclib,多韦替尼、恩扎妥林、尼达尼布、仑伐替尼、利尼伐尼、林西替尼、马赛替尼、米哚妥林、莫特塞尼、来那替尼、奥兰替尼、哌立福新、普纳替尼、雷多替尼(radotinib)、瑞格色替、替吡法尼、替万替尼、替沃扎尼、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼、卡博替尼S-苹果酸盐、伊布替尼、埃克替尼、布帕利西布、西帕替尼、考比替尼、艾代拉里斯、菲卓替尼、XL-647；

光敏剂：诸如甲氧沙林(methoxsalen)；卟吩姆钠、他拉泊芬、替莫泊芬；

抗体：诸如阿仑单抗、贝索单抗、本妥昔单抗、西妥昔单抗、地舒单抗、伊匹单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、帕妥珠单抗；卡妥索单抗、埃罗妥珠单抗、依帕珠单抗、法妥珠单抗、莫格利珠单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗、奥妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥戈伏单抗、雷莫芦单抗、利妥木单抗、司妥昔单抗、托珠单抗、扎鲁木单抗、扎木单抗、马妥珠单抗、达罗托组单抗(dalotuzumab)、奥那妥珠单抗、雷妥莫单抗、他贝芦单抗、阿比妥珠单抗、纳武单抗；

细胞因子：诸如阿地白介素、干扰素α、干扰素α2a、干扰素α2b；西莫白介素、他索纳明(tasonermin)、替西白介素、奥普瑞白介素、重组干扰素β-1a；

药物缀合物：诸如地尼白介素-diftitox、替伊莫单抗、碘苄胍I123、泼尼氮芥、恩美曲妥珠单抗、雌莫司汀、吉妥珠单抗、奥佐米星、阿柏西普；贝辛白介素(cintredekinbesudotox)、依多曲肽(edotreotide)、奥加依妥珠单抗、埃托-那普妥莫单抗、莫妥组单抗(oportuzumab monatox)、锝(99mTc)阿西莫单抗、vintafolide；

疫苗：诸如sipuleucel；vitespe、emepepimut-S、oncoVAX、rindopepimut、troVax、MGN-1601、MGN-1703；和

杂类：阿利维甲酸、贝沙罗汀、硼替佐米、依维莫司、伊班膦酸、咪喹莫特、来那度胺、香菇多糖、甲酪氨酸、米伐木肽、帕米膦酸、培门冬酶、喷司他丁、sipuleucel、西佐喃、他米巴罗汀、替西罗莫司、沙利度胺、维甲酸、维莫德吉、唑来膦酸、伏立诺他；塞来昔布、西仑吉肽、恩替诺特(entinostat)、依他硝唑、ganetespib、伊屈诺昔(idronoxil)、iniparib、ixazomib、氯尼达明、尼莫唑(nimorazole)、帕比司他、peretinoin、plitidepsin、泊马度胺、procodazol、利达福莫司、塔喹莫德(tasquinimod)、telotristat、胸腺法新、替拉扎明、tosedostat、trabedersen、乌苯美司、今又生4(gendicine4)、毕西巴尼4(picibanil4)、reolysin4、盐酸瑞他霉素1、trebananib、virulizin、卡非佐米(carfilzomib)、内皮抑素(endostatin)、immucothel、贝利司他(belinostat)、MGN-1703。

因此，本发明的方面涉及通过以合适的量与上文列出的抗肿瘤剂中的一种或多种一起施用本发明的化合物来治疗受试者以实现所述受试者中癌症疾病的治疗。

在一些实施方案中，如与当TLR激活剂或一种或多种另外的治疗剂被单独施用时所施用的有效量相比，TLR抑制剂与一种或多种另外的治疗剂的组合降低了TLR激活剂和/或另外的治疗剂施用以获得相同的结果的有效量(包括但不限于剂量体积、剂量浓度和/或施用的总药物剂量)。

TLR激活剂也可用作疫苗佐剂以与任何调节体液和/或细胞介导免疫反应的物质结合使用，所述物质诸如例如活病毒、细菌或寄生虫免疫原；灭活病毒、肿瘤来源、原生动物、生物体来源、真菌或细菌免疫原、类毒素、毒素；自体抗原；多糖；蛋白质；糖蛋白；肽；细胞疫苗；DNA疫苗；重组蛋白；糖蛋白；肽；等等。在一些方面，本发明的联合疗法包括但不限于施用本发明的化合物与疫苗的组合。在一些方面，本发明的联合疗法包括但不限于在感染性疾病的治疗中使用本发明的化合物与疫苗的组合。

本发明的再一个方面涉及一种试剂盒，其包含如本文所提供的本发明的化合物以及在激活TLR7-和/或TLR8-依赖性免疫反应的方法中使用的说明书。

该试剂盒可包含一个或多个包含有如本文所述的本发明化合物(或包含所述化合物的制剂)的容器以及一组说明书，说明书通常为书面说明书，但含有关于本发明的化合物或包含所述化合物的制剂用于预期的治疗(例如，激活TLR7和/或TLR8、治疗病毒感染、和/或治疗和/或预防由TLR7和/或TLR8介导的疾病或病症的一种或多种症状)的用途和剂量的说明书的电子存储介质(例如，磁盘或光盘)也是可接受的。试剂盒内包括的说明书通常包括关于预期治疗的剂量、给药时间表和施用途径等信息。TLR激活剂(或包含TLR激活剂的制剂)的容器可以是单位剂量的、散装包装(例如，多剂量包装)的或亚单位剂量的。试剂盒还可包含含有佐剂的容器。

在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其由独立包装组成，独立包装中含有有效量的根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物和立体异构体(包括其所有比率的混合物)，以及任选地有效量的另外的活性成分。试剂盒包含合适的容器，诸如盒、单独的瓶、袋或安瓿。试剂盒可例如包含单独的安瓿，其各自含有呈溶解或冻干形式的有效量的根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物和立体异构体(包括其所有比率的混合物)，以及有效量的另外的活性成分。

本发明的化合物优选配制成剂量单位形式，以便于施用和保持剂量均匀。如本文所用，表达“剂量单位形式”是指适合于待治疗的患者的药剂的物理上离散的单位。然而，应理解，本发明的化合物和组合物的总日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。对任何特定患者或生物体的具体有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和所采用的特定化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物，以及医学领域众所周知的类似因素。

本发明的药学上可接受的组合物可以通过口服、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏或滴剂)、经颊、作为口腔或鼻喷雾剂等施用于人类和其他动物，具体取决于所治疗的感染的严重程度。在某些实施方案中，本发明的化合物以每日约0.01mg/kg至约100mg/kg、优选约1mg/kg至约50mg/kg受试者体重的剂量水平口服或肠胃外施用，每日一次或多次，以获得所需的治疗效果。在某些实施方案中，本发明及相关式的化合物以及其他活性成分的治疗有效量可能取决于许多因素，包括例如动物的年龄和体重、需要治疗的确切疾病状况及其严重程度、制剂的性质和施用方法，并最终由治疗医生或兽医决定。然而，化合物的有效量通常在每日0.1至100mg/kg接受者(哺乳动物)体重的范围内，特别是通常在每日1至10mg/kg体重的范围内。因此，体重70kg的成年哺乳动物的每日实际量通常在70至700mg之间，其中该量可以每日作为单次给药施用，或通常以每日一系列分剂量(例如，两个、三个、四个、五个或六个分剂量)施用，以使总日剂量相同。其盐或溶剂化物或生理功能性衍生物的有效量可以确定为化合物本身的有效量的分数。

在某些实施方案中，药物制剂可以以剂量单位形式施用，每个剂量单位包含预定量的活性成分。这样的单位可以包含例如0.5mg至1g、优选1mg至700mg、特别优选5mg至100mg的根据本发明的化合物，具体取决于所治疗的疾病状况、施用的方法以及患者的年龄、体重和病况，或者，药物制剂可以以剂量单位形式施用，每个剂量单位包含预定量的活性成分。优选的剂量单位制剂为包含如上所述的日剂量或分剂量或活性成分的其相应部分的那些。此外，这种类型的药物制剂可以使用制药领域中公知的方法制备。

用于口服施用本发明的化合物的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物外，液体剂型还任选地含有本领域常用的惰性稀释剂(诸如例如水或其他溶剂)、增溶剂和乳化剂(诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺)、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨醇的脂肪酸酯以及它们的混合物。除了惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和加香剂(perfuming agents)。

注射制剂，例如无菌注射用水性或油性混悬剂，可根据已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制。无菌注射制剂可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液、混悬剂或乳剂，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂有水、林格氏液U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌的非挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可以采用任何温和的非挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，在注射剂的制备中使用脂肪酸诸如油酸。

可例如通过经细菌截留过滤器过滤或通过以无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂来对注射制剂灭菌，所述无菌固体组合物可以在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。

为了延长本发明的化合物的作用，通常理想的是减缓经皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。这可通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体混悬剂来实现。于是化合物的吸收速率就取决于其溶解速率，而溶解速率继而可取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮在油媒介物中来实现肠胃外施用的化合物形式的延迟吸收。可以通过在可生物降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微胶囊基质来制备可注射的储库形式。可以根据化合物与聚合物的比率以及所采用的特定聚合物的性质来控制化合物释放的速率。其他可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备可注射的储库制剂。

用于直肠或阴道施用的组合物优选栓剂，其可通过将本发明的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在体温下为液体，并因此会在直肠或阴道腔中融化而释放活性化合物。

用于口服施用本发明的化合物的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与以下物质混合：至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体，所述赋形剂或载体诸如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增量剂诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘结剂诸如例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c)保湿剂诸如甘油，d)崩解剂诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解阻滞剂诸如石蜡，f)吸收促进剂诸如季铵化合物，g)润湿剂诸如例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂诸如高岭土和膨润土，和i)润滑剂诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，以及它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还任选地包含缓冲剂。

也可采用相似类型的固体组合物作为使用诸如乳糖或奶糖(milk sugar)的赋形剂以及高分子量聚乙二醇等的软或硬填充明胶胶囊中的填充剂。固体剂型片剂、糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可制备为具有包衣和壳，诸如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣。它们任选地含有乳浊剂，并且也可以是仅在或优先在肠道的某个部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。也采用相似类型的固体组合物作为使用诸如乳糖或奶糖的赋形剂以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

本发明的化合物也可与一种或多种如上所述的赋形剂一起配制成微囊化形式。固体剂型片剂、糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可制备为具有包衣和壳，诸如肠溶包衣、释放控制包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣。在此类固体剂型中，本发明的活性化合物可与至少一种惰性稀释剂诸如蔗糖、乳糖或淀粉混合。作为一般做法，除惰性稀释剂外，此类剂型还可包含另外的物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还任选地包含缓冲剂。它们任选地含有乳浊剂，并且也可以是仅在或优先在肠道的某个部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。

用于局部或透皮施用本发明的化合物的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、散剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。根据需要在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载体以及任何所需的防腐剂或缓冲剂混合。眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂也涵盖在本发明的范围内。另外，本发明在优选的实施方案中考虑使用透皮贴剂，其具有向身体提供化合物的受控递送的附加优势。这样的剂型可以通过将化合物溶解或分配在适当的介质中来制备。也可以使用吸收增强剂来增加化合物透过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。

根据一个实施方案，本发明涉及一种激活生物样品中的TLR7/8活性的方法，其包括使所述生物样品与本发明的化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。根据另一个实施方案，本发明涉及一种激活生物样品中的TLR7/8或其突变体活性的方法，其包括使所述生物样品与本发明的化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。

本发明的化合物可在体外用作理解TLR7/8的生物学作用的独特工具，包括评价据信影响TLR7/8的产生和TLR7/8的相互作用以及受TLR7/8的产生和TLR7/8的相互作用影响的诸多因素。本发明的化合物也可用于开发与TLR7/8相互作用的其他化合物，因为本发明的化合物提供重要的构效关系(SAR)信息，该信息有助于此开发。与TLR7/8结合的本发明化合物可优选用作用于检测活细胞、固定细胞、生物体液、组织匀浆、经纯化天然生物材料等中的TLR7/8的试剂。例如，通过可检测地标记本发明的化合物，可以鉴定出表达TLR7/8的细胞。另外，基于其结合TLR7/8的能力，本发明的化合物可用于原位染色、FACS(荧光激活细胞分选)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、ELISA(酶联免疫吸附测定)等、酶纯化，或用于纯化透化细胞内表达TLR7/8的细胞。本发明的化合物还可用作商业研究试剂，用于各种医学研究和诊断用途。此类用途包括但不限于：用作校准标准以在各种功能测定中定量候选TLR7/8激活剂的活性；用作随机化合物筛选(即，寻找新的TLR7/8配体家族)中的激活试剂；用于与TLR7/8共结晶，即本发明的化合物将允许形成与TLR7/8结合的化合物的晶体，使得能够通过x-射线晶体学确定酶/化合物结构；其他研究和诊断应用，其中优选激活TLR7/8或这种激活相对于已知量的TLR7/8激活剂方便地校准等；在测定中用作确定细胞中TLR7/8的表达的探针；以及开发用于检测结合到与TLR7/8结合配体相同位点的化合物的测定法。本发明的化合物可以自身应用和/或与用于诊断治疗有效性的物理测量组合应用。含有所述化合物的药物组合物及所述化合物治疗TLR7/8-介导病况的用途是一种前景广阔的新型广谱疗法，无论在人类还是动物中，其都导致直接且立即的健康状态改善。本发明的口服生物可利用且活性的新型化学实体将提高患者的便利性和医师的依从性。

本发明的化合物、其盐、异构体、互变异构体、对映异构体形式、非对映异构体、外消旋物、衍生物、前药和/或代谢物的特征在于高特异性和稳定性、低制造成本和方便处理。这些特点形成可再现作用(其中包括缺乏交叉反应性)以及与靶结构可靠且安全的相互作用的基础。

如本文所用，术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获得的活检材料或其提取物；和血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其他体液或其提取物。

生物样品中TLR7/8或其突变体活性的调节可用于本领域技术人员已知的多种目的。这样的目的的实例包括但不限于输血、器官移植、生物样本储存和生物测定。

其他用途

在再一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本文描述的本发明化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一个实施方案中，药物组合物还包含治疗有效量的化疗剂。在一个方面，本发明提供了一种在受试者中刺激免疫反应的方法。该方法包括在有效于刺激免疫反应的条件下施用治疗有效量的本文描述的本发明化合物。在一些实施方案中，对患有癌症的受试者进行该方法。在其他实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳癌、子宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、肾癌(kidney cancer)、肺癌、食管癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胆道癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、头/颈癌、甲状腺髓样癌、肾癌(renal cancer)、眼癌、神经母细胞瘤、蕈样肉芽肿、神经胶质瘤、其他脑肿瘤、脊髓肿瘤、肝癌、白血病、淋巴瘤及其任何组合。在某些实施方案中，本发明的化合物可以包含在液体药物组合物中。本发明的液体组合物可以施用至肿瘤中(例如，肿瘤内(IT)施用)以优选地诱导针对肿瘤抗原的先天免疫反应和细胞介导的免疫反应(例如，缩小或稳定肿瘤)。在再一个实施方案中，本发明的化合物与肽缀合。包含肽的缀合物不一定是抗原或免疫原，而是一种减少TLR7和/或TLR8激动剂的溶出的机制，从而创建截留在施用部位(诸如肿瘤内或肿瘤微环境中)的储库。本发明的缀合TLR7和/或TLR8激动剂可刺激免疫抑制细胞并可诱导针对肿瘤中存在的抗原的免疫反应。此外，免疫抑制细胞的动员不仅可以诱导针对施用部位处的肿瘤的免疫反应，而且还可以诱导针对外周、附近和/或远处肿瘤的免疫反应。在一个实施方案中，提供了在受试者中刺激抗肿瘤免疫反应的方法，其中所述方法包括以肿瘤内或肿瘤周围方式向受试者施用本发明的药物组合物的液体形式，其中抗肿瘤免疫反应优选在远离药物组合物的施用部位的部位处有效。在再一个方面，本发明还提供了一种在受试者中诱导抗肿瘤免疫反应的方法。该方法包括在有效于诱导抗肿瘤免疫反应的条件下施用治疗有效量的本文描述的本发明化合物。在一些实施方案中，对患有肿瘤的选定受试者进行该方法。在一些实施方案中，肿瘤选自纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏肿瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、肾母细胞瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤和成视网膜细胞瘤。在再一个方面，本发明提供了一种用于在受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法。该方法包括在有效于治疗肿瘤或异常细胞增殖的条件下施用治疗有效量的本文描述的本发明化合物。在一些实施方案中，肿瘤或异常细胞增殖为癌症。在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、乳癌、子宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、肾癌(kidney cancer)、肺癌、食管癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胆道癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、头颈癌、甲状腺髓样癌、肾癌(renal cancer)、眼癌、神经母细胞瘤、蕈样肉芽肿、神经胶质瘤、其他脑肿瘤、脊髓肿瘤、肝癌、白血病、淋巴瘤及其任何组合。在还另一个方面，本发明还提供了一种用于在受试者中治疗感染性疾病的方法。该方法包括在有效于治疗感染性疾病的条件下施用治疗有效量的本文描述的本发明化合物。在一些实施方案中，感染性疾病为病毒感染、细菌感染、真菌感染或其任何组合。在一些实施方案中，感染性疾病为病毒感染，并且感染性疾病优选选自冠状病毒(包括但不限于严重急性呼吸道综合征(SARS)、SARS-CoV-2(COVID-19)、中东呼吸道综合征(MERS)和普通感冒)、埃博拉、流感、肝炎、Hib病、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头瘤病毒(HPV)、脑膜炎球菌病、肺炎球菌病、麻疹、腮腺炎、诺如病毒、脊髓灰质炎、呼吸道合胞病毒(RSV)、轮状病毒、风疹病毒、带状疱疹、西尼罗河病毒、狂犬病毒、肠道病毒、巨细胞病毒、疱疹病毒、水痘、黄热病、寨卡病毒及其任何组合。在一些实施方案中，感染性疾病为细菌感染，并且感染性疾病优选选自链球菌病、葡萄球菌病、白喉、脑膜炎球菌病、破伤风、百日咳、肺炎球菌病、细菌性食物中毒、性传播感染、肺结核、莱姆病、肉毒中毒或其任何组合。在一些实施方案中，感染性疾病为真菌感染，并且感染性疾病为念珠菌病、组织胞浆菌病、皮肤癣菌病、足癣、曲霉病、隐球菌脑膜炎、球孢子菌病及其任何组合。

用于治疗疾病的包含本发明的化合物的局部、囊内和肿瘤内组合物

本发明的化合物可与其他化合物诸如化学渗透增强剂一起配制。化学渗透增强剂常用于局部和透皮制剂中以增强活性药物成分(药物或药物物质)向皮肤中的吸收、摄取和递送。包含本发明的化合物的此类制剂可用于例如治疗皮肤癌。也可采用合适的制剂来补充组织的局部隔室内的进一步渗透和/或增强递送其的组织中的免疫相关反应。为了增强本发明的化合物向皮肤/肿瘤中的渗透和摄取，制剂可包含但不限于：一种或多种化学增强剂的组合；一种或多种改善药物和化学增强剂进入皮肤/肿瘤中的比例的溶剂或媒介物；以及用于它们作为局部或肿瘤内制剂掺入的胶凝剂或基质。文献中先前已公开了每个类别下的化学品的若干范例。然而，其中采用每种成分使它们与药物的物理化学性质相匹配并改善其皮肤渗透性的具体组合既非无关紧要，也不特别依赖于单独的化学品的具体性质。重要的是应指出，每种成分对皮肤/肿瘤的作用取决于制剂中采用的浓度，并且从单一制剂中它们的组合可以预期存在协同效应。这些效应可以是加和的、正协同的或负协同的。这意味着，从这些制剂递送到皮肤/肿瘤中并穿过皮肤/肿瘤的药物的皮肤/肿瘤渗透动力学和累积效应取决于所采用的具体制剂。因此，由此可知，除了药物性质外，药物的生理学、生物学和治疗终点在很大程度上还取决于制剂。这些终点包括但不限于药代动力学/药效学(PK/PD)、如由曲线下面积(AUC)所确定的累积吸收、生物等效性、治疗指数(TI)，仅举几例。此外，药物的具体制剂不仅影响其效力，而且影响在应用时对皮肤的耐受性/安全性。这可能包括但不限于不良作用诸如刺激、皮肤毒性、红斑等。

除了增强本发明化合物的渗透穿过组织或在局部组织隔室诸如肿瘤内的渗透之外，化学渗透增强剂的有益影响还在于提供炎症效应，这在指导例如肿瘤治疗中的重要免疫反应方面有重要意义。因此，在局部、囊内和/或注射制剂中掺入渗透增强剂可实现朝向肿瘤治疗的治疗终点的加和效应或超过加和效应。

适于施用的剂型包括乳膏剂、软膏剂、溶液剂、凝胶剂、洗剂、糊剂、贴剂、泡沫剂或喷雾剂制剂，其含有如本领域已知合适的载体。用于局部、囊内或肿瘤内施用本发明的化合物和任选地其他药剂的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂和贴剂。可在无菌条件下使活性组分与药学上可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。除了治疗剂外，软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、溶液剂、泡沫剂和凝胶剂还可含有赋形剂诸如动物和植物脂肪、油类、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或它们的混合物。包含本发明的化合物的注射制剂也可通过使用纯化油(大豆油、红花油、三油酸甘油酯和蓖麻油、分馏椰子油、miglyol810、812、Neobee MS、Captex 300)和FDA批准的皮肤填充剂(羟基磷灰石、透明质酸、聚-L-乳酸、胶原蛋白、水凝胶)作为注射制剂的组分来实现。可以设计包含本发明的化合物的局部、囊内和肿瘤内制剂，其通过选择制剂的具体成分(包括增强剂、媒介物和基质)来优化(Karande2004Nature Biotechnology，Karande 2005PNAS，以及这些作品中的和引用这些作品的相关参考文献)。具体的制剂可对药物的效力和目标适应症有深远影响。活性化合物的物理化学性质可从其结构和化学组成得出。可以估计渗透增强剂的化学描述符(descriptor)，这允许平衡其效力和安全性。基于此，可以确定化学渗透增强剂组合，其含有以0-2％wt/vol的总浓度范围、0至100％的重量分数范围的下面列表中的化学品。制剂可以在溶剂中含有2或3种单独的化学品以制备所述制剂。

本发明的化合物可以被组合在包含以下添加剂中的一种或多种的制剂中：辛基硫酸钠、癸基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、十四烷基硫酸钠、十七烷基硫酸钠、二十烷基硫酸钠、月桂醇聚醚硫酸钠、硫酸烟碱、牛磺胆酸硫酸钠、二甲基亚砜、十三烷基磷酸钠、ChemBetaine CAS、ChemBetaine Oleyl、ChemBetaine C、十六烷基二甲基铵丙磺酸盐、癸基二甲基铵丙磺酸盐、十二烷基二甲基铵丙磺酸盐、肉豆蔻基二甲基铵丙磺酸盐、苄基吡啶鎓氯化物、十二烷基吡啶鎓氯化物、十六烷基吡啶鎓氯化物、苄基二甲基十二烷基氯化铵、苄基二甲基肉豆蔻基氯化铵、苄基二甲基硬脂基氯化铵、辛基三甲基溴化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三甲基溴化铵、肉豆蔻基三甲基氯化铵、鲸蜡基三甲基溴化铵、失水山梨醇单月桂酸酯、失水山梨醇单棕榈酸酯、失水山梨醇单硬脂酸酯、失水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、Brij 97、Brij 30、Brij56、Triton X-100、己酸、辛酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、胆酸、己酸甲酯、十一烷酸乙酯、月桂酸甲酯、十三烷酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸棕榈酯、癸二酸二乙酯、丁卡因、单月桂酸甘油酯、单油酸甘油酯、乙基哌嗪羧酸酯、N-月桂基肌氨酸盐、辛酸钠、癸酸钠、棕榈酸钠、油酸钠、辛胺、癸胺、十二烷胺、十四烷胺、油胺、脲、甲基吡咯烷酮、环己基吡咯烷酮、辛基吡咯烷酮、癸基吡咯烷酮、癸基甲基吡咯烷酮、甲基哌嗪、苯基哌嗪、辛酰胺、十六烷酰胺、己内酰胺、香芹醇、氧化蒎烯、柠檬烯、薄荷醇、胡薄荷酮、香芹酚、蒎烯、薄荷酮、松油醇、桉油素、葑酮、三乙酸甘油酯、三甲氧基丙烯甲基苯、芳樟醇、香叶醇和辛基十二烷醇。其他包括亚砜、醇、多元醇、烷烃、脂肪酸、酯、胺和酰胺、萜烯、表面活性剂、环糊精、C2或C3醇和更高级醇、C3或C4二醇或更高级二醇、DMSO、DMF、DMA及相关溶剂、1-正十二烷基-环氮杂环庚-2-酮、N-甲基-吡咯烷酮和N-(2-羟乙基)吡咯烷酮、和更广泛类别的氮酮类以及混合物(二元、三元或更高元)。

本发明的化合物可以与能够改善化合物的输送的化学增强剂一起配制。任选的化学增强剂包括具有极性头部基团的长链烃，诸如表面活性剂、脂肪酸和脂肪酯。

烃链中的(单或双)不饱和性还能有助于皮肤脂质双层的流化和本发明的化合物的渗透。油酸、亚油酸、亚麻酸、棕榈酸、肉豆蔻酸等是脂肪酸的范例。具有小烷基基团诸如甲基、乙基、丙基或丁基的脂肪酸的酯诸如棕榈酸酯、肉豆蔻酸酯、油酸酯、亚油酸酯等是脂肪酯的实例。脂肪酯的盐诸如月桂基硫酸钠、油酸钠等是表面活性剂的实例。短链醇包括乙醇、异丙醇、丁醇、己醇等是溶剂的实例。如果将本发明的化合物配制成局部制剂，则化学品和溶剂的组合可显著增强本发明的化合物跨过皮肤的渗透性。此类范例的组合是可行的制剂，具有不同的效力和安全性，以及API为本发明的化合物的不同的PK/PD特性。

包含了上述化学品及其组合的制剂的实例如下：浓度为0.01、0.02、0.03、0.04至1wt/vol％的本发明化合物，其中该化合物优选与下面i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x、xi、xii或xiii中列出的一种或多种并优选所有组分组合：

i.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1％wt/vol的油酸(50％)和肉豆蔻酸异丙酯(50％)。

ii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的肉豆蔻酸异丙酯(50％)和月桂基硫酸钠(50％)。

iii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的油酸(50％)和月桂基硫酸钠(50％)。

iv.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的油酸(33％)、肉豆蔻酸异丙酯(33％)和月桂基硫酸钠(33％)。

v.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2％wt/vol的棕榈酸异丙酯(50％)和油酸钠(50％)。

vi.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1.0％wt/vol的月桂基硫酸钠(25％)和亚油酸(75％)。

vii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2.0％wt/vol的棕榈酸(50％)和月桂酸异丙酯(50％)。

viii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为1.5％wt/vol的油酸(50％)和亚油酸(50％)。

ix.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为0.5％wt/vol的亚油酸(25％)、油酸(25％)和亚油酸异丙酯(50％)。

x.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中总浓度为2.0％wt/vol的油酸钠(33％)、油酸(33％)和棕榈酸甲酯(33％)。

xi.含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液。

xii.在含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液中的油酸(10％)。

本发明的化合物和组合物的药物及其他用途

本发明的如所述方面包括提供用作药物的根据本发明的组合物。

给药方案将由主治医师和临床因素决定。如在医学领域中众所周知的，任何一位患者的剂量将取决于许多因素，包括患者的体格大小、体重、体表面积、年龄、待施用的具体化合物、所用化合物的活性、施用时间和途径、一般健康状况以及与其他疗法或治疗的组合。蛋白质类药物活性物质可以每剂量1g至100mg/kg体重的量存在；然而，也设想低于或高于此示例性范围的剂量。如果方案为连续输注，则其可在每千克体重每分钟1pg至100mg的范围内。

待施用的具体量或剂量可由临床医生决定，同样基于上述因素。本发明的化合物的有用剂量可通过比较它们的体外活性和在动物模型中的体内活性来确定。将在小鼠和其他动物中的有效剂量外推至人类的方法是本领域已知的；例如，参见US 4,938,949。

通常，根据待治疗的具体疾病、病症或病况、具体的本发明化合物的效力、具体的施用途径以及所用的具体药物制剂或组合物，临床医生将能够确定合适的剂量。

所需的剂量可以方便地以一次剂量或以适当间隔施用的分次剂量提供，例如作为每天两个、三个、四个或更多个分剂量。分剂量本身可以进一步分成例如多个离散的松散间隔的施用。优选地，剂量每周施用一次或甚至更低频率，诸如每两周一次、每三周一次、每月一次或甚至每两个月一次。

施用方案可以包括长期治疗。“长期”是指至少两周，优选数周、数月或数年的持续时间。仅使用本文的教导中给出的常规实验，本领域普通技术人员即可确定该剂量范围的必要调整。参见Remington’sPharmaceutical Sciences(Martin,E.W.,ed.4),MackPublishing Co.,Easton,PA。如果出现任何并发症，个体医生也可调整剂量。

通常，在上述方法中，将使用本发明的化合物。然而，将两种或更多种不同的本发明化合物组合使用或将本发明的化合物与其他药物组合使用也在本发明的范围内。

同样，临床医生将能够基于上述因素及其专业判断来选择此类其他化合物或药物以及合适的联合治疗方案。

当两种或更多种物质或成分待作为联合治疗方案的一部分使用时，它们可以经由相同的施用途径或经由不同的施用途径在基本上相同的时间或在不同的时间(例如，基本上同时地、连续地或根据交替方案)施用。当这些物质或成分待经由相同的施用途径同时施用时，它们可作为不同的药物制剂或组合物施用，或可作为联合药物制剂或组合物的一部分施用，这对于技术人员来说将是清楚的。

另外，当两种或更多种活性物质或成分待作为联合治疗方案的一部分使用时，每种物质或成分可以与当独自使用该化合物或成分时所使用相同的量并且根据与当独自使用该化合物或成分时所使用相同的方案施用，并且这样的联合使用可或可不产生协同效应。然而，当两种或更多种活性物质或成分的联合使用产生协同效应时，也可能可以减少待施用的物质或成分中一种、多种或全部的量，同时仍实现期望的治疗作用。这可例如有用地避免、限制或减少在以其常用量使用一种或多种物质或成分时与它们的使用相关联的任何不希望有的副作用，同时仍获得期望的药效或治疗效果。

根据本公开使用的治疗方案的有效性可以针对所涉及的疾病、病症或病况以任何本身已知的方式确定和/或跟踪，这对于临床医生来说将是清楚的。临床医生还将能够适当并且基于各案基础改变或修改特定的治疗方案，以达到期望的治疗效果，避免、限制或减少不希望有的副作用，和/或在一方面达到期望的治疗效果与另一方面避免、限制或减少不良副作用之间取得适当的平衡。

通常，将遵循治疗方案直至达到期望的治疗效果和/或只要需要维持期望的治疗效果，就将遵循治疗方案。同样，这可以由临床医生决定。

因此，在再一个方面，本发明涉及一种药物组合物，其含有至少一种本发明的化合物和至少一种合适的载体、稀释剂或赋形剂(即，适合于药物用途)以及任选地一种或多种其他活性物质。在一个特别的方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物(优选地至少一种选自权利要求中示出的实施例1至27的化合物，更优选地选自权利要求中示出的列表的实施例1至6的化合物)和至少一种合适的载体、稀释剂或赋形剂(即，适合于药物用途)以及任选地一种或多种其他活性物质。

待治疗的受试者可以是任何温血动物，但特别是哺乳动物，更特别是人类。在兽医学应用中，待治疗的受试者包括任何出于商业目的饲养或作为宠物饲养的动物。如技术人员应清楚的，待治疗的受试者特别是罹患或有风险患上本文提及的疾病、病症和病况的人。因此，在本发明的一个优选实施方案中，包含本发明的化合物的药物组合物供用于医学或诊断学。优选地，所述药物组合物供用于人类医学，但它们也可用于兽医学目的。

同样，在这样的药物组合物中，一种或多种本发明的化合物还可合适地与一种或多种其他活性成分(诸如本文提及的那些)联合使用。

本发明还涉及一种供用于体外(例如，在体外或细胞测定中)或体内(例如，在单细胞或多细胞生物体中，特别是在哺乳动物中，更特别是在人类中，诸如在有风险患上或罹患本发明的疾病、病症或病况的人类中)的药物组合物。

应理解，除非另有明确陈述，否则治疗的提及包括已确诊症状的治疗和预防性治疗。

通常，对于药物用途，可将本发明的化合物配制为药物制剂或组合物，其包含至少一种本发明中使用的化合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，以及任选地一种或多种药学活性多肽和/或化合物。作为非限制性实例，这样的制剂可呈适合于口服施用、肠胃外施用(诸如通过静脉内、肌肉内或皮下注射或者静脉输注)、局部施用(诸如关节内施用)、通过吸入、通过皮肤贴剂、通过植入物、通过栓剂施用等的形式，其中优选关节内施用。此类合适的施用形式-取决于施用的方式，其可为固体、半固体或液体-以及用于其制备中的方法和载体对于技术人员来说将是清楚的，并且本文进行了进一步描述。这样的药物制剂或组合物通常在本文中称为“药物组合物”。

作为示例性的赋形剂，可以提及崩解剂、粘结剂、填充剂和润滑剂。崩解剂的实例包括琼脂、褐藻胶、碳酸钙、纤维素、胶体二氧化硅、树胶、硅酸镁铝、甲基纤维素和淀粉。粘结剂的实例包括微晶纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。填充剂的实例包括碳酸钙、磷酸三钙、三碱式硫酸钙、羧甲基纤维素钙、纤维素、糊精、右旋糖、果糖、乳糖醇、乳糖、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖醇、麦芽糊精、麦芽糖、山梨糖醇、淀粉、蔗糖、糖和木糖醇。润滑剂的实例包括琼脂、油酸乙酯、月桂酸乙酯、丙三醇、棕榈酸硬脂酸甘油酯、氢化植物油、氧化镁、硬脂酸盐、甘露糖醇、泊洛沙姆、二醇类、苯甲酸钠、月桂基硫酸钠、硬脂酰钠、山梨糖醇和滑石粉。常用的稳定剂、防腐剂、润湿和乳化剂、稠度改进剂、风味改进剂、改变渗透压的盐、缓冲物质、增溶剂、稀释剂、润肤剂、着色剂和掩蔽剂以及抗氧化剂均可考虑作为药物佐剂。

合适的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂、水、醇、多元醇、甘油、植物油等。

通常，本发明的化合物可以以任何本身已知的合适方式配制和施用。例如参考上文引用的一般背景技术(特别是参考WO 04/041862、WO 04/041863、WO 04/041865、WO 04/041867和WO 08/020079)以及参考标准手册，诸如Remington’s PharmaceuticalSciences,第18版,Mack Publishing Company,USA(1990),Remington；the Science andPractice of Pharmacy,第21版,Lippincott Williams and Wilkins(2005)；或Handbookof Therapeutic Antibodies(S.Dubel编辑),Wiley,Weinheim,2007(参见例如第252-255页)。

在一个特别的方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物，并且其还包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，并任选地包含一种或多种其他药学活性化合物。

合适的制剂及其制备方法对于技术人员来说将是清楚的，并且例如包括优选适合于肠胃外施用(例如，静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、管腔内、动脉内、鞘内、鼻内或支气管内施用)以及适合于局部(例如，关节内、透皮或皮内)施用的制剂。

用于局部或肠胃外施用的制剂可例如为适合于输注或注射的无菌溶液、混悬剂、分散体或乳剂。用于此类制剂的合适载体或稀释剂例如包括WO 08/020079第143页中提到的那些。通常，将优选水溶液或混悬剂。

在再一个方面，本发明还提供了一种试剂盒，其包含至少一种根据本发明的化合物。设想该试剂盒可以不同的形式提供。

现在将借助以下非限制性的优选方面、实施例和附图进一步描述本发明。

实施例

以下实施例示意了本公开的方法和本发明的产品。

设计、化学制备并生物学评价了一系列新型药用TLR7激动剂，详见下文。出乎意料地，与现有技术化合物诸如R484和一些近期报道的TLR7/8激动剂(参见图2)相比，若干新型TLR7激动剂不仅在细胞TLR7实验中显示出低纳摩尔活性，而且在TLR7与TLR8之间表现出高选择性。更令人惊奇的是，这些新型高选择性TLR7激动剂可在细胞单核细胞实验中引发高细胞因子和趋化因子(IL-6、IL1-b和TNF-a)产量并诱导CD40和CD86的强上调。

TLR7激动剂的化学合成

实施例1的化学合成

步骤1

在氮气氛下向R848(750.00mg；2.36mmol；1.00eq.)在乙腈(15.00ml；20.00V)中的搅拌溶液中加入三乙胺(0.93ml；7.09mmol；3.00eq.)、然后加入氯-(二苯基)甲基]苯(1.33g；4.72mmol；2.00eq.)。将所得悬浮液在微波反应器中于100℃照射1.15小时。通过TLC监测反应，然后真空除去溶剂，得到粗品。通过快速柱色谱法在100-200硅胶中用乙酸乙酯和己烷纯化该粗产物。所需产物在25-30％的乙酸乙酯和己烷中洗脱，并浓缩洗脱液，得到化合物1(1.30g；2.31mmol；97.8％；白色固体；纯化产物)。

产量：1.30g(2.31mmol)，收率％：97.8。

分析数据：

LCMS：柱：Atlantis dC18(50x4.6mm,5μ)，+ve模式；流动相：A：0.1％ HCOOH/H₂OB：ACN；流速：1.5ml/min

RT(min)：2.13；纯度：98.94％；M+H:557.10。

步骤2：

向氢化钠(179.63mg；4.49mmol；2.50eq.)在DMF(10.00ml)中的搅拌溶液中加入化合物1(1.00g；1.80mmol；1.00eq.)溶解在DMF(3mL)中的溶液。将反应混合物在氮气氛下于0℃搅拌30分钟，然后加入1,2,3-噁噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物(441.12mg；1.98mmol；1.10eq.)。将反应混合物在室温下搅拌12小时，并通过LCMS监测反应进程。完成后，用冷水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯(2x 100ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品。通过硅胶柱色谱法纯化该粗品。所需产物在60％的乙酸乙酯/石油醚中洗脱。减压浓缩合并的纯级分，得到化合物2(550.00mg；0.75mmol；41.9％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：550.00mg(0.75mmol)，收率％：41.9。

分析数据：

RT(min)：2.60；纯度：95.70％；M+H:700.00。

步骤3：

在0℃下向化合物2(550.00mg；0.75mmol；1.00eq.)在DCM(10.00ml)中的搅拌溶液中加入TFA(0.08ml；1.03mmol；1.37eq.)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过LCMS监测反应进程。完成后，减压浓缩反应混合物。粗品用乙醚(2x 25ml)洗涤，减压干燥，得到呈三氟乙酸盐的化合物3(360.00mg；0.73mmol；97.4％；浅白色固体；纯化产物)

产量：360.00mg(0.73mmol)，收率％：97.4。

分析数据：

RT(min)：0.94；纯度：95.90％；M+H:358.00。

步骤4：

向化合物3三氟乙酸盐(200.00mg；0.41mmol；1.00eq.)和双(2-氯乙基)(甲基)胺盐酸盐(0.16g；0.81mmol；2.00eq.)在DMF(10.00ml)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(112.45mg；0.81mmol；2.00eq.)。将反应混合物加热至100℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。完成后，将反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。分离的有机层用盐水溶液洗涤，过滤并减压浓缩滤液。粗残余物通过制备型HPLC纯化，使用0.1％NH4OAc/水和乙腈作为洗脱剂。冻干所需级分，得到实施例1(4.50mg；0.01mmol；2.4％；棕色胶质固体；纯化产物)。

产量：4.50mg(0.01mmol)，收率％：2.4。

分析数据：

RT(min)：1.76；纯度：95.81％；M+H:441.30。

HPLC：柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：ACN+0.1％TFA；流速：2ml/min；梯度：0min：5％B，8min：100％B，8.1min：100％B，8.5min：5％ B，10min5％B。

RT(min)：1.72；纯度：96.98％(最大)；纯度：88.09％(220nm)。

1H NMR(400MHz,DMSO-d6):9.12(s,2H),8.55(d,J＝8.00Hz,1H),7.80(d,J＝8.00Hz,1H),7.71(t,J＝8.00Hz,1H),7.54(t,J＝7.20Hz,1H),4.95(s,4H),3.53(m,4H),3.36(m,4H),2.73-3.29(m,4H),2.51(s,3H),1.22(s,6H),1.16(t,J＝6.80Hz,3H)。

实施例2的化学合成

步骤1：

向氢化钠(60％)(158.00mg；3.95mmol；2.59eq.)在DMSO(9.00ml；10.00V)中的处于氮气氛下的0℃搅拌溶液中逐滴加入在DMSO(5ml)中的化合物1(900.00mg；1.53mmol；1.00eq.)并将反应混合物于室温搅拌30分钟。然后在0℃下加入(3-溴丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(0.78ml；4.77mmol；3.12eq.)并让反应混合物在氮气氛下于室温搅拌3小时。通过LCMS监测反应混合物。完成后，在0℃下用冰水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯稀释。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗残余物。所需产物用15％的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到化合物4(215.00mg；0.28mmol；18.4％；胶；纯化产物)。

产量：215.00mg(0.28mmol)，收率％：18.4。

分析数据：

RT(min)：3.59；纯度：95.53％；M+H:729.30。

步骤2：

在氮气氛下于0℃向化合物4(180.00mg；0.24mmol；1.00eq.)在THF(10.00ml；55.56V)中的搅拌溶液中加入TBAF(1.0M,在THF中)(1.00ml；1.00mmol；4.24eq.)。将反应混合物在室温下搅拌3小时并通过TLC确认反应的完成。用水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。收集有机层并真空浓缩，得到化合物5(150.00mg；0.24mmol；100％,胶；纯化产物)

产量：150.00mg(0.24mmol)，收率％：100。

分析数据：

RT(min)：2.22；纯度：99.51％；M+H:615.00。

步骤3：

在0℃下向化合物5(160.00mg；0.26mmol；1.00eq.)在DCM(3.30ml；20.63V)中的搅拌溶液中加入1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并碘氧杂戊环-3-(1H)-酮(0.34g；0.77mmol；3.00eq.)并将反应混合物于室温搅拌30分钟。通过TLC确认反应的完成。用10％的NaHCO₃溶液洗涤该反应混合物。收集有机层并真空浓缩，得到化合物6(170.00mg；0.21mmol；81.8％；无色液体；粗产物)

产量：170.00mg(0.21mmol)，收率％：81.8。

分析数据：

RT(min)：2.36；纯度：75.96％；M+H:613.00。

步骤4：

于室温向化合物6(170.00mg；0.21mmol；1.00eq.)在1,2-二氯乙烷(10.00ml；58.82V)中的搅拌溶液中加入1-甲基哌嗪(0.10ml；0.96mmol；4.55eq.)。将反应混合物于室温搅拌10分钟，并在0℃下向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(300.00mg；1.34mmol；6.38eq.)。将反应混合物于室温搅拌30分钟。通过TLC确认反应的完成。用水淬灭反应混合物并用DCM萃取。收集有机层并真空浓缩，得到化合物7(140.00mg；0.15mmol；71.7％；胶；粗产物)。

产量：140.00mg(0.15mmol)，收率％：71.7。

分析数据：

RT(min)：1.75；纯度：75.26％；M+H:697.00。

步骤5：

在0℃下向化合物7(100.00mg；0.11mmol；1.00eq.)在DCM(5.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.90ml；11.60mmol；9.00V)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应，然后在低于35℃下减压除去溶剂，得到粗品。通过制备型HPLC以HCOOH法纯化该粗品并冻干所需级分，得到呈甲酸盐的实施例2(32.91mg；0.07mmol；60.7％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：32.91mg(0.07mmol)，收率％：60.7。

分析数据：

RT(min)：1.03；M+H:455.20。

RT(min)：9.52；纯度：99.83％(220nm)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):8.36(dd,J＝8.00,Hz,1H),8.15(s,1H),7.62(dd,J＝0.80,8.20Hz,1H),7.45(t,J＝7.20Hz,1H),7.25(t,J＝6.80Hz,1H),6.91(s,2H),4.72(s,4H),3.54-3.53(m,2H),3.24-3.22(m,2H),2.76-2.75(m,2H),2.52-2.50(m,11H),2.10(m,2H),1.42-1.38(m,2H),1.24-1.12(m,9H)。

实施例3的化学合成

步骤1：

在氮气氛下于室温向氢化钠(60％)(0.70g；17.50mmol；2.41eq.)在DMSO(40.00ml；9.76V)中的搅拌溶液中加入在DMSO(7ml)中的化合物1(4.10g；7.26mmol；1.00eq.)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。于室温加入1,4-二溴丁烷(4.83ml；39.46mmol；5.43eq.)并让反应混合物在氮气氛下于室温搅拌3小时。通过LCMS监测反应进程。在0℃下用冰水淬灭反应混合物。用乙酸乙酯稀释反应混合物。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到粗残余物。通过硅胶色谱法纯化该粗残余物。产物用15％的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到化合物8(145.00mg；0.14mmol；2.0％；白色胶；纯化产物)；未反应的起始材料用45％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到化合物1(3.20g；5.12mmol；70.4％；白色固体；纯化产物)。

产量：145mg(0.14mmol)，收率％：2.0。

分析数据：

RT(min)：2.75；纯度：68.10％；M+H:690.90。

步骤2：

在室温下向化合物8(470.00mg；0.67mmol；1.00eq.)和1-甲基哌嗪(0.08ml；0.74mmol；1.10eq.)在乙腈(14.10ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(189.73mg；1.35mmol；2.00eq.)。将悬浮液加热至50℃保持16小时并通过TLC监测反应。完成后，除去溶剂，得到残余物。将该残余物溶解在水中并用DCM(8mL)萃取。用水洗涤有机层。该有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗物质。该物质通过硅胶柱色谱法纯化。所需产物在7％的MeOH/DCM中洗脱，得到化合物9(400.00mg；0.55mmol；82.1％；灰白色粉末；纯化产物)。

产量：400mg(0.55mmol)，收率％：82.1。

分析数据：

LCMS：柱：Atlantis dC18(50x4.6mm)3.5μm；溶剂A：0.1％HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：1.79；纯度：98.20％。

步骤3：

在0℃下向化合物9(95.00mg；0.11mmol；1.00eq.)在DCM(4.75ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.36ml；4.58mmol；40.00eq.)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，在低于35℃下减压除去溶剂，得到粗品。通过制备型HPLC以HCOOH法纯化该粗品并冻干所需级分，得到呈甲酸盐的实施例3(44.00mg；0.08mmol；74.1％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：44.00mg(0.08mmol)，收率％：74.1。

分析数据：

RT(min)：0.99；纯度：99.05％；M+H:469.10。

HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18(150*4.6)mm,3.0μm；溶剂A：水+10mM乙酸铵；溶剂B：乙腈；流速：1.0ml/min。

RT(min)：7.96；纯度：99.22％(最大)；纯度：97.91％(220nm)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):8.33(d,J＝8.40Hz,1H),7.59(d,J＝8.40Hz,1H),7.42(t,J＝Hz,1H),7.22(t,J＝Hz,1H),6.67(s,2H),4.73(s,2H),3.49-3.54(m,6H),3.20(t,J＝9.20Hz,4H),2.078-2.335(m,11H),1.13-1.26(m,14H),(s,H),(s,H),(s,H),(s,H)。

实施例4的化学合成

步骤1：

在氮气氛下于0℃向氢化钠(104.78mg；2.62mmol；3.00eq.)在DMSO(10.00ml；20.00V))中的搅拌溶液中加入化合物1(500.00mg；0.87mmol；1.00eq.)在DMSO(5ml)中的溶液。将反应混合物搅拌30分钟。然后加入1,5-二溴戊烷(614.64mg；2.62mmol；3.00eq.)并将所得溶液在室温下搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，用冷水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯(2x100 ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗品。通过硅胶柱色谱法纯化该粗品。所需产物在16％的乙酸乙酯/石油醚中洗脱。减压浓缩合并的纯级分，得到化合物10(150.00mg；0.21mmol；23.7％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：150.00mg(0.21mmol)，收率％：23.7。

分析数据：

RT(min)：3.32；纯度：97.45％；M+H:705.30。

步骤2：

在室温下向化合物10(150.00mg；0.21mmol；1.00eq.)在乙腈(3.00ml；20.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(87.63mg；0.62mmol；3.00eq.)和1-甲基哌嗪(0.03ml；0.31mmol；1.50eq.)。将悬浮液加热至50℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物，得到粗残余物。将该残余物溶解在DCM(100ml)中并用盐水(2x 50ml)洗涤。减压浓缩有机层，得到粗品。通过硅胶柱色谱法纯化该粗品。所需产物在7％的MeOH/DCM中洗脱。减压浓缩合并的纯级分，得到化合物11(70.00mg；0.09mmol；41.1％；灰白色胶；纯化产物)

产量：70.00mg(0.09mmol)，收率％：41.1。

分析数据：

RT(min)：1.72；纯度：88.13％；M+H:725.20。

步骤3：

在0℃下向化合物11(70.00mg；0.08mmol；1.00eq.)在DCM(3.50ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.26ml；3.32mmol；40.00eq.)。将所得溶液搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，在低于35℃下减压除去溶剂，得到粗物质。该物质通过制备型HPLC以HCOOH法纯化。冻干所需级分，得到呈甲酸盐的实施例4(32.00mg；0.06mmol；72.6％；浅黄色胶；纯化产物)。

产量：32.00mg(0.06mmol)，收率％：72.6。

分析数据：

RT(min)：1.09；纯度：99.24％；M+H:483.10。

HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18(150*4.6)mm,3.0μm；溶剂A：0.1％ TFA/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN；流速：1.0ml/min。

RT(min)：8.82；纯度：99.42％(最大)；纯度：98.26％(220nm)。

1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.57(d,J＝7.60Hz,1H),8.37(s,1H),7.71-7.79(m,1H),7.67-7.71(m,1H),7.52-7.56(m,1H),4.90(s,4H),3.64(s,4H),3.28-3.33(m,8H),2.86(s,3H),2.43-2.47(m,2H),1.21-1.32(m,12H),0.96(d,J＝4.40Hz,2H)。

实施例5的化学合成

步骤1：

向氢化钠(60％)(122.25mg；3.06mmol；2.50eq.)在DMSO(7.00ml；10.00V)中的0℃搅拌溶液中逐滴加入在DMSO(5ml)中的化合物1(700.00mg；1.22mmol；1.00eq.)并将反应混合物于室温搅拌30分钟。然后在0℃下向该反应混合物中加入1,6-二溴己烷(0.58ml；3.67mmol；3.00eq.)并让反应混合物在氮气氛下于室温搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。在0℃下用冰水淬灭反应混合物。用乙酸乙酯稀释反应混合物并分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗残余物。所需产物用15％的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到化合物12(200.00mg；0.21mmol；17.1％；灰白色油；纯化产物)。

产量：200.00mg(0.21mmol)，收率％：17.1。

分析数据：

RT(min)：3.26；纯度：75.40％；M+H:719.00。

步骤2：

在室温下向化合物12(200.00mg；0.21mmol；1.00eq.)和1-甲基哌嗪(0.05ml；0.52mmol；2.50eq.)在乙腈(2.00ml；10.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(88.64mg；0.63mmol；3.00eq.)。将悬浮液加热至50℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，除去溶剂，得到残余物。将该残余物溶解在水中并用DCM(20ml)萃取。用水洗涤有机层。该有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗残余物。通过硅胶色谱法纯化该残余物。所需产物用8％的MeOH/DCM洗脱，得到化合物13(110.00mg；0.14mmol；67.6％；白色固体；纯化产物)。

产量：110.00mg(0.14mmol)，收率％：67.6。

分析数据：

RT(min)：1.79；纯度：95.17％；M+H:739.00。

步骤3：

在0℃下向化合物13(110.00mg；0.14mmol；1.00eq.)在DCM(5.50ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.44ml；5.67mmol；40.00eq.)。将所得溶液搅拌3小时。通过LCMS监测反应进程。完成后，在低于35℃下减压除去溶剂，得到粗品。该粗品通过制备型HPLC以HCOOH法纯化。冻干所需级分，得到呈甲酸盐的实施例5(60.00mg；0.11mmol；77.1％；白色固体；纯化产物)。

产量：60.00mg(0.11mmol)，收率％：77.1。

分析数据：

RT(min)：1.17；纯度：98.84％；M+H:497.10。

RT(min)：5.39；纯度：99.49％(最大)；纯度：99.54％(220nm)。

¹HNMR(400MHz,MeOD):δ8.60(d,J＝8.40Hz,1H),7.80-7.71(m,2H),7.61-7.57(m,1H),4.87-4.84(m,6H),3.67-3.62(m,2H),3.34-3.15(m,10H),2.84-2.79(m,5H),1.53-1.49(m,2H),1.31-1.22(m,11H),1.16-1.09(m,4H)。

实施例6的化学合成

步骤1：

在0℃下向苯甲醇(1.00g；9.20mmol；1.00eq.)在溶解在水(20.00ml；20.00V)中的氢氧化钠10％水溶液(0.92g；23.00mmol；2.50eq.)中的搅拌溶液中加入四丁基铵；硫酸氢盐(64.42mg；0.18mmol；0.02eq.)，然后加入1,4-二溴丁烷(3.99g；18.4mmol；2eq.)。将所得混合物于70℃搅拌4小时并通过TLC监测反应。完成后，用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗物质。通过快速柱色谱法在100-200硅胶中用乙酸乙酯和己烷纯化该物质。所需产物在1-5％的乙酸乙酯和己烷中洗脱，并浓缩洗脱液，得到化合物14(1.00g；4.05mmol；44.0％；无色油；纯化产物)

产量：1g(4.05mmol)，收率％：44。

分析数据：

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.40-7.29(m,5H),4.53(s,2H),3.53(t,J＝-12.40Hz,2H),3.46(t,J＝6.80Hz,2H),2.04-1.79(m,4H)。

步骤2：

在氮气氛下于0℃向氢化钠(60％)(179.63mg；4.49mmol；2.50eq.)在DMSO(20.00ml；20.00V)中的搅拌悬浮液中逐滴加入在DMSO(5mL)中的化合物1并将反应混合物于室温搅拌30分钟。然后在0℃下加入[(4-溴丁氧基)甲基]苯(882.33mg；3.59mmol；2.00eq.)并让反应混合物在氮气氛下于室温搅拌16小时。通过TLC监测反应混合物。完成后，用冰水淬灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗物质。通过快速柱色谱法在100-200硅胶中用乙酸乙酯和己烷纯化该物质。所需产物在10-15％的乙酸乙酯和己烷中洗脱，并浓缩洗脱液，得到化合物15(330.00mg；0.45mmol；24.8％；灰白色胶质；纯化产物)

产量：330mg(0.45mmol)，收率％：24.8。

分析数据：

LCMS：柱：XBridge C8(50x4.6mm)3.5μm；溶剂A：0.1％TFA/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：3.35；纯度：97.21％；M+H:719.3。

步骤3：

在室温下向化合物15(100.00mg；0.14mmol；1.00eq.)在乙醇(5.00ml)和AcOEt(5.00ml)中的搅拌溶液中加入碳载钯(100.00mg；0.09mmol；0.70eq.)。将所得反应混合物在高压釜中在5kg氢气压力下于室温搅拌。完成后，通过硅藻土过滤反应混合物。减压浓缩滤液，得到粗物质。该物质通过制备型HPLC纯化，使用0.1％的HCOOH/水和ACN作为洗脱剂。冻干合并的纯级分，得到呈甲酸盐的实施例6(20.00mg；0.05mmol；37.9％；灰白色固体；纯化产物)。

产量：20mg(0.05mmol)，收率％：37.9。

分析数据：

RT(min)：1.46；纯度：99.69％；M+H:387.1

HPLC：柱：Atlantis dC18(50x4.6mm)3.5μm；溶剂A：0.1％HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：CAN

RT(min)：7.01；纯度(最大)：99.86％；纯度(220nm)：99.32％。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.00(s,1H),7.58-7.60(m,1H),7.39-7.43(m,1H),7.20-7.24(m,1H),4.77(s,5H),3.52(d,J＝7.20Hz,2H),3.35(t,J＝6.00Hz,2H),3.21(s,1H),1.32(q,J＝2.00Hz,4H),1.26(q,J＝10.80Hz,4H),1.14(q,J＝7.20Hz,4H)。

实施例7的化学合成

步骤1：

在氮气氛下于0℃向氢化钠(60％)(0.21g；5.31mmol；2.30eq.)在DMSO(13.00ml；10.00V)中的悬浮液中逐滴加入化合物1(1.30g；2.31mmol；1.00eq.)在DMSO(13.00ml；10.00V)中的溶液。然后将其于室温搅拌30分钟。于0℃加入1,4-二溴丁烷(0.76g；3.46mmol；1.50eq.)并将反应混合物在室温下再搅拌1小时。完成后，用冰水淬灭反应混合物，用乙酸乙酯稀释，分离有机层，经硫酸钠干燥，并减压蒸发溶剂。粗残余物通过快速色谱法(15％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到化合物16(120.00mg；0.17mmol；7.3％；白色固体；纯化产物)。

产量：120.00mg(0.17mmol)，收率％：7.3。

分析数据：

LCMS-柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；流动相：A：0.1％的TFA/H₂O:ACN(95:5)；流动相B：0.1％的TFA/ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：3.28；纯度(最大)：97.18％；M+H:691.20

步骤2：

在室温下向化合物16(3,60.00mg；0.08mmol；1.00eq.)和吗啉(22.26mg；0.25mmol；3.00eq.)在乙腈(1.80ml；30.00V)中的溶液中加入碳酸钾(35.67mg；0.25mmol；3.00eq.)。然后将悬浮液加热至70℃并搅拌20小时，并通过TLC监测反应的进程。完成后，蒸发溶剂并将残余物溶解在水中。然后将其用二氯甲烷萃取。有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥，并然后减压蒸发溶剂。粗品通过快速色谱法(60％的EtOAc/石油醚)纯化，得到化合物17(60.00mg；0.08mmol；97.8％；胶质；纯化产物)。

产量：60.00mg(0.08mmol)，收率％：97.8。

分析数据：

LCMS-柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相A：0.1％的HCOOH/水；B：0.1％的HCOOH/ACN；流速：0.8ml/min。

RT(min)：1.88；纯度(最大)：95.95％；M+H:698.00

步骤3：

在0℃下向化合物17(5,60.00mg；0.08mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(3.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.20ml；2.58mmol；3.33V)。将所得溶液温热至室温并再搅拌3小时。通过TLC监测反应的进程。完成后，减压浓缩反应混合物，粗产物通过快速柱色谱法(10％的甲醇/二氯甲烷)纯化，得到实施例7(34.00mg；0.07mmol；89.5％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：34.00mg(0.07mmol)，收率％：89.5。

分析数据：

RT(min)：1.15；纯度(最大)：98.94％；M+H:456.10。

HPLC-柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5mm；流动相A：0.1％的TFA/MilliQ水；流动相B：乙腈；流速：1.0ml/min。

RT(min)：9.25；纯度(最大)：95.25％；M+H:456.10；纯度(220nm)：96.41％。

实施例8的化学合成

步骤1：

在室温下向化合物16(60.00mg；0.08mmol；1.00eq.)和哌啶(18.54mg；0.21mmol；2.50eq.)在乙腈(1.80ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(30.09mg；0.21mmol；2.50eq.)。将悬浮液加热至70℃并搅拌20小时。通过TLC监测反应的进程。反应完成后，蒸发溶剂并对残余物进行快速色谱法(5％的MeOH/二氯甲烷)，得到化合物18(40.00mg；0.06mmol,66.9％；胶,纯化产物)。

产量：40.00mg(0.06mmol)，收率％：66.9。

分析数据：

LCMS-柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相：A：0.1％的HCOOH/H2O:ACN(95:5)，B：ACN流速：1.5ml/min。

RT(min)：2.01；纯度(最大)：99.36％；M+H:696.1

步骤2：

在0℃下向化合物18(40.00mg；0.06mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(2.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.15ml；1.93mmol；3.75V)。将反应混合物温热至室温并再搅拌3小时。通过TLC监测反应的进程。反应完成后，将其减压浓缩，粗品通过快速柱色谱法(15％的甲醇/二氯甲烷)纯化，得到实施例8(16.00mg；0.03mmol；61.0％；淡棕色胶；纯化产物)。

产量：16.00mg(0.03mmol)，收率％：61.0。

分析数据：

LCMS-柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相：A：0.1％的HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，B：ACN流速：1.5ml/min。

RT(min)：1.24；纯度(最大)：98.78％；M+H:454.10。

实施例9的化学合成

步骤1：

在室温下向化合物16(60.00mg；0.09mmol；1.00eq.)和吡咯烷(19.17mg；0.26mmol；3.00eq.)在乙腈(1.20ml；20.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(35.39mg；0.26mmol；3.00eq.)。将悬浮液加热至70℃并搅拌20小时，并通过TLC监测反应。反应完成后，除去溶剂，并将残余物溶解在水中，然后用DCM萃取。用水洗涤有机层并经硫酸钠干燥。然后减压蒸发溶剂，粗产物通过快速色谱法(60％的EtOAc/石油醚)纯化，得到化合物19(60.00mg；0.09mmol；99.8％；胶；纯化产物)。

产量：60.00mg(0.09mmol)，收率％：99.8。

分析数据：

LCMS-柱：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5mm；流动相：A：0.1％的HCOOH/H2O:ACN(95:5)，B：CAN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：1.99；纯度(最大)：96.78％；M+H:682.00。

步骤2：

在0℃下向化合物19(60.00mg；0.08mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(3.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.15ml；1.93mmol；2.50V)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物，粗产物通过柱色谱法(10％的甲醇/二氯甲烷)纯化，得到实施例9(20.00mg；0.05mmol；54.3％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：20.00mg(0.05mmol)，收率％：54.3。

分析数据：

LCMS-柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5mm；流动相：A：0.1％的HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：1.20；纯度(最大)：99.56％；M+H:440.10。

RT(min)：5.76；纯度(最大)：99.55％；M+H:456.10；纯度(220nm)：99.42％。

实施例10的化学合成

步骤1：

在室温下向化合物16(50.0mg；0.07mmol；1.00eq.)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(34.0mg；0.18mmol；2.50eq.)在乙腈(1.50ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(25.23mg；0.18mmol；2.50eq.)。将悬浮液加热至70℃并搅拌20小时。通过TLC监测反应的进程。反应完成后，除去溶剂，并将残余物重新溶解在水中，然后用二氯甲烷萃取。用水洗涤有机层并然后经无水硫酸钠干燥。减压浓缩溶剂，粗产物通过快速柱色谱法(60％的EtOAc/石油醚)纯化，得到化合物20(45mg；0.06mmol；78.5％；胶；纯化产物)。

产量：45.00mg(0.06mmol)，收率％：78.5。

分析数据：

LCMS-柱：Atlantis dC18(50x4.6mm,5μm),+ve模式；0.1％HCOOH/H₂O，B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：2.07；纯度(最大)：99.44％；M+H:797.00

步骤2：

在0℃下向化合物20(3,45.00mg；0.06mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(2.25ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.15ml；1.93mmol；3.33V)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，在低于35℃下减压除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC纯化。冻干产物级分，得到呈甲酸盐的实施例10(25.00mg；0.05mmol；88.1％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：25.00mg(0.05mmol)，收率％：88.1。

分析数据：

LCMS-柱：Atlantis C18(50x4.6mm,5μm)；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：ACN+0.1％TFA；流速：2ml/min。

RT(min)：9.46；纯度(最大)：98.13％；M+H:455.30。

HPLC-柱：Atlantis dC18(50x4.6mm,5μm),+ve模式；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：ACN+0.1％TFA；流速：2ml/min；梯度：0min：5％B，8min：100％B，8.1min：100％B，8.5min：5％B，10min 5％ B，流速：0.8mL/min。

RT(min)：8.47；纯度(最大)：99.05％；纯度(220nm)：98.46％。

¹H NMR(400MHz,MeOD):8.56(d,J＝8.40Hz,1H),8.44(s,1H),7.78(d,J＝0.52Hz,1H),7.69-7.65(m,1H),7.53-7.49(m,1H),4.91(m,4H),3.67-3.61(m,2H),3.18-3.15(m,4H),2.50(m,4H),2.15-2.06(m,2H),1.32(m,6H),1.28-1.25(m,5H),1.14-1.11(m,2H)。

实施例11的化学合成

步骤1：

在室温下向化合物16(145.00mg；0.14mmol；1.00eq.)和(2-哌嗪-1-基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(136.40mg；0.57mmol；4.00eq.)在乙腈(4.35ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(60.40mg；0.43mmol；3.00eq.)。将悬浮液加热至80℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物，残余物通过快速柱色谱法在甲醇和DCM中纯化。所需产物在4-8％的甲醇和DCM中洗脱。浓缩级分，得到化合物21(105.00mg；0.12mmol；84.4％；灰白色粉末；纯化产物)。

产量：105.00mg(0.12mmol)，收率％：84.4

分析数据：

LCMS：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相：A：0.1％ HCOOH/H₂O B：ACN；流速：1.5ml/min

RT(min)：2.04；纯度：96.44％；M+H:840.10

步骤2：

在0℃下向化合物21(100.00mg；0.11mmol；1.00eq.)在DCM(5.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.36ml；4.59mmol；40.00eq.)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC使用0.1％的HCOOH/H₂O和ACN纯化粗反应混合物。冻干产物级分，得到呈甲酸盐的实施例11(49.00mg；0.09mmol；77.9％；棕色胶；纯化产物)。

产量：49mg(0.09mmol)，收率％：77.9

分析数据：

LCMS：柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；流动相：A：0.1％的TFA/H₂O，B：ACN；

流速：1.5ml/min。

RT(min)：0。1.88；纯度：99.42％；M+H:498.30

HPLC：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：ACN+0.1％TFA；流速：2ml/min；梯度：0min：5％B，8min：100％B，8.1min：100％B，8.5min：5％ B，10min5％B。RT(min)：4.09；纯度(最大)：99.14％；纯度(220nm)：99.53％。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.44(d,J＝8.40Hz,1H),8.16(s,1H),7.51-7.67(m,5H),7.34(t,J＝7.60Hz,1H),4.75(s,4H),3.52(t,J＝6.80Hz,3H),3.38(s,2H),3.21(s,2H),(s,3H),2.66(s,2H),2.51(d,J＝2.00Hz,3H),2.46(d,J＝36.00Hz,3H),1.13-1.20(m,13H),(s,H)。

实施例12的化学合成

步骤1：

在室温下向化合物16(60.00mg；0.08mmol；1.00eq.)和2-(哌嗪-1-基)乙-1-醇(20.30mg；0.15mmol；2.00eq.)在乙腈(1.80ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(32.33mg；0.23mmol；3.00eq.)。将悬浮液加热至80℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，将反应混合物在水与乙酸乙酯之间分配，分离的有机层用盐水溶液洗涤，过滤，并减压浓缩滤液，得到化合物22的粗产物(47.00mg；0.06mmol；80.3％；灰白色粉末；粗产物)。

产量：47mg(0.06mmol)，收率％：80.3

分析数据：

LCMS：柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；流动相：A：0.1％的TFA/H₂O，B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：2.60；纯度：96.73％；M+H:741.30

步骤2：

在0℃下向化合物22(45.00mg；0.06mmol；1.00eq.)在DCM(2.25ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.18ml；2.35mmol；40.00eq.)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物。粗产物通过制备型HPLC使用0.1％的HCOOH/H₂O和ACN纯化。冻干产物级分，得到呈甲酸盐的实施例12(19.00mg；0.03mmol；56.5％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：19mg(0.03mmol)，收率％：56.5

分析数据：

LCMS：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相：A：0.1％HCOOH/H₂O B：ACN；流速：1.5ml/min

RT(min)：0.98；纯度：97.32％；M+H:499.10

HPLC：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；溶剂A：水+0.1％TFA；溶剂B：ACN+0.1％TFA；流速：2ml/min；梯度：0min：5％B，8min：100％B，8.1min：100％B，8.5min：5％ B，10min5％B。RT(min)：9.14；纯度(最大)：95.04％；纯度(220nm)：92.88％。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.54(d,J＝0.80Hz,2H),7.76(d,J＝0.80Hz,1H),7.65-7.74(m,1H),7.45-7.49(m,1H),3.77(t,J＝11.20Hz,2H),3.65(t,J＝14.00Hz,3H),2.81-2.89(m,6H),2.69(s,4H),2.36(s,2H),2.00(s,3H),1.15-1.33(m,14H),(s,H),(s,H),(s,H),

实施例13的化学合成

步骤1：

向化合物16(180.00mg；0.25mmol；1.00eq.)的搅拌溶液中加入在DMF(3.60ml；20.00V)中的叠氮化钠(20.00mg；0.30mmol；1.20eq.)。将悬浮液于室温搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物。将残余物溶解在水中并用DCM(8mL)萃取。用水洗涤有机层。该有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物23的粗产物(150.00mg；0.15mmol；57.7％；灰白色粉末；粗产物)。

产量：150mg(0.15mmol)，收率％：57.7

分析数据：

LCMS：柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；流动相：A：0.1％的TFA/H₂O；B：ACN；

流速：1.5ml/min

RT(min)：3.24；纯度：63.86％；M+H:654.30。

步骤2：

向化合物23(70.00mg；0.07mmol；1.00eq.)和丙-2-炔-1-醇(3.91mg；0.07mmol；1.00eq.)在THF(1.40ml；20.00V)中的溶液中加入碘化铜(I)(7.90mg；0.04mmol；0.60eq.)和乙基-二异丙基-胺(0.01ml；0.07mmol；1.00eq.)。将反应混合物于室温搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用水和盐水溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。该粗产物通过柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM作为洗脱剂，所需产物在8％的甲醇/DCM中洗脱。蒸发所需级分，得到化合物24(40.00mg；0.05mmol；70.6％；白色固体；纯化产物)。

产量：40mg(0.05mmol)，收率％：70.6

分析数据：

LCMS：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5μm；流动相：A：0.1％HCOOH/H₂O B：ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：2.23；纯度：85.71％；M+H:710.00

步骤3：

在0℃下向化合物24(40.00mg；0.05mmol；1.00eq.)在DCM(2.00ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.30ml；3.87mmol；7.50V)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物。残余物通过柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM作为洗脱剂，所需产物在15％的甲醇/DCM中洗脱。蒸发所需级分，得到实施例13(18.00mg；0.04mmol；76.5％；淡棕色胶；纯化产物)

产量：18mg(0.04mmol)，收率％：76.5。

分析数据：

流速：1.5ml/min

RT(min)：2.10；纯度：97.88％；M+H:468.20

HPLC：柱：Phenomenex Gemini C18(150*4.6)mm,3.0μm；流动相A：10mM的乙酸铵/milli-q水；流动相B：乙腈；流速：1.0ml\min。

RT(min)：8.10；纯度(最大)：95.26％；纯度(220nm)：90.72％

实施例14的化学合成

步骤1：

向化合物23(90.00mg；0.13mmol；1.00eq.)和N-(丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(20.99mg；0.13mmol；1.00eq.)在THF(1.80ml；20.00V)中的溶液中加入碘化铜(I)(15.30mg；0.08mmol；0.60eq.)和乙基二异丙基胺(0.05ml；0.27mmol；2.00eq.)。将反应混合物于室温搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用水和盐水溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗化合物。该粗产物通过柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM作为洗脱剂，所需产物在8％的甲醇/DCM中洗脱。蒸发所需级分，得到化合物25(50.00mg；0.06mmol；45.2％；白色固体；纯化产物)。

产量：50mg(0.06mmol)，收率％：45.2。

分析数据：

LCMS：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5mm；流动相A：0.1％的HCOOH/水；B：0.1％的HCOOH/ACN；流速：0.8ml/min。

RT(min)：2.51；纯度：96.95％；M+H:809.00

步骤2：

在0℃下向化合物25(50.00mg；0.07mmol；1.00eq.)在DCM(3.00ml；60.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.30ml；3.87mmol；6.00V)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过TLC监测反应。完成后，减压浓缩反应混合物，得到粗产物。该粗产物通过柱色谱法纯化，使用甲醇/DCM作为洗脱剂，所需产物在15％的甲醇/DCM中洗脱。蒸发所需级分，得到实施例14(15.00mg；0.03mmol；46.2％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：15mg(0.03mmol)，收率％：46.2

分析数据：

LCMS：柱：XBridge C8,3.5μm,4.6x 50mm；流动相：A：0.1％的TFA/H₂O:ACN(95:5)；流动相B：0.1％的TFA/ACN；流速：1.5ml/min。

RT(min)：1.98；纯度：99.94％；M+H:467.20

HPLC：柱：ATLANTIS dC18(50x4.6mm)5mm；流动相A：0.1％的TFA/MilliQ水；流动相B：乙腈；流速：1.0ml/min。

RT(min)：5.42；纯度(最大)：99.86％；纯度(220nm)：99.30％。

实施例15的化学合成

步骤1：

在0℃下向实施例6(5,50.00mg；0.13mmol；1.00eq.)在丙酮(2.00ml；40.00V)中的搅拌溶液中加入硫酸和三氧化铬(0.10ml)。将所得反应混合物于室温搅拌1小时。反应完成后，过滤反应混合物并减压浓缩滤液。所得粗品用乙醚(10mL)洗涤，得到化合物26(45.00mg；0.10mmol；81.1％；蓝色胶；粗产物)。该粗品直接用于下一步。

产量：45.00mg(0.10mmol)，收率％：81.1。

分析数据：

LCMS-柱：Atlantis dC18(50x4.6mm)3.5m；溶剂A：0.1％的HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN；流速：1.5mL/min。

RT(min)：1.47；纯度(最大)：92.18％；M+H:401.10。

步骤2：

向化合物26(40.00mg；0.09mmol；1.00eq.)在DMF(0.40ml；10.00V)中的搅拌溶液中加入[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基铵；六氟磷酸盐(67.06mg；0.17mmol；2.00eq.)。然后在氮气氛下于0℃向其中加入乙基-二异丙基-胺(0.05ml；0.26mmol；3.00eq.)和1-甲基哌嗪(0.02ml；0.17mmol；2.00eq.)。然后将反应混合物于室温再搅拌2小时。通过LCMS监测反应的进程。完成后，冻干反应混合物，粗产物通过制备型HPLC纯化。冻干产物级分，得到呈甲酸盐的实施例15(13.00mg；0.02mmol；26.6％；棕色胶；纯化产物)。

产量：13.00mg(0.02mmol)，收率％：26.6。

分析数据：

LCMS-柱：Atlantis dC18(50x4.6mm)3.5μm；溶剂A：0.1％的HCOOH/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN；流速：0.8mL/min。

RT(min)：8.48；纯度(最大)：94.47％；M+H:483.20。

HPLC-柱：Atlantis dC18(50x4.6mm)3.5μm；溶剂A：0.1％的TFA/H₂O:ACN(95:5)，溶剂B：ACN，流速：0.8mL/min。

RT(min)：5.21；纯度(最大)：94.95％；纯度(220nm)：92.87％。

¹H-NMR(400MHz,CD3OD-d6):δ8.83(d,J＝8.00Hz,1H),7.72(d,J＝8.40Hz,1H),7.58(t,J＝7.60Hz,1H),7.41(t,J＝7.20Hz,1H),4.88(s,4H),3.65(t,J＝6.80Hz,2H),3.61(s,2H),3.50(d,J＝3.20Hz,2H),3.15(d,J＝4.00Hz,2H),2.34(s,6H),1.91(t,J＝6.80Hz,2H),1.58(q,J＝6.00Hz,2H),1.27(q,J＝7.20Hz,11H)。

实施例16的化学合成

步骤1：

将(4-甲基-哌嗪-1-基)乙酸(10,000mg；1,00eq.)溶解在DMF(1,000ml)中并冷却至0℃。然后加入4-甲基吗啉(17,374μl；2,50eq.)、[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基铵；六氟磷酸盐(26,439mg；1,10eq.)，并最后加入化合物3(23,222mg；1,00eq.)。让反应混合物温热至室温并搅拌1小时。减压浓缩反应溶液，残余物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。合并含有产物的级分并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例16(31,00mg；0,050mmol；79％)，为透明固体。

分析数据：

RT(min)：0.98；纯度(最大)：98.3％；M+H:498.6。

实施例17的化学合成

步骤1：

将R848(20,00mg；0,062mmol；1,0eq.)、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酸(29,588mg；0,187mmol；3,0eq.)和4-(吡咯烷-1-基)吡啶(13,860mg；0,094mmol；1,5eq.)与二氯甲烷(2,000ml)合并，得到白色悬浮液。加入N,N'-二异丙基碳二亚胺(0,029ml；0,187mmol；3,0eq.)。将反应混合物于50℃加热过夜。完成后，将溶液直接注入到制备型HPLC上，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。将含有产物的级分合并在一起并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例17(8,5mg；22,5％,透明油,纯化产物)

分析数据：

RT(min)：0.97；纯度(最大)：94.0％；M+H＝455

实施例18的化学合成

步骤1：

在室温下向4-氯-3-硝基喹啉(4.50g；21.14mmol；1.00eq.)溶解在DCM(45.00ml；10.00V)中的溶液中加入三乙胺(9.00ml；63.42mmol；3.00eq.)，随后加入1-氨基-2-甲基丙-2-醇(3.81g；42.28mmol；2.00eq.)。将反应混合物回流3小时。通过TLC监测反应。完成后，真空浓缩反应混合物，加入水，形成固体，并真空过滤，得到化合物27(5.30g；19.93mmol；94.3％；黄色固体；纯化产物)。

产量：5.30g(19.93mmol)，收率％：94.3。

分析数据：

RT(min)：0.436；纯度(最大)：98.27％；M+H:260.20。

步骤2：

在0℃下向化合物27(5.30g；20.28mmol；1.00eq.)在溶剂水(4.58ml；0.86V)和甲醇(50.00ml；9.43V)中的溶液中加入六水合氯化镍(II)(0.19g；0.80mmol；0.04eq.)，然后加入硼氢化钠(1.57g；40.67mmol；2.00eq.)。将反应混合物于室温搅拌2小时。通过TLC监测反应。完成后，将黑色溶液通过硅藻土过滤并浓缩滤液，得到粗产物。然后将该粗产物通过快速柱色谱法(3％的MeOH/DCM)纯化，得到化合物28(4.20g；16.55mmol；81.6％；橙色粉末；纯化产物)。

产量：4.20g(16.55mmol)，收率％：81.6。

分析数据：

RT(min)：0.37；纯度(最大)：91.11％；M+H:232.20。

步骤3：

向化合物28(4.20g；18.16mmol；1.00eq.)在DMF(42.00ml；10.00V)中的搅拌溶液中加入2-{[(叔-丁氧基)羰基](乙基)氨基}乙酸(5.59g；27.24mmol；1.50eq.)、[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(20.92g；54.48mmol；3.00eq.)、三乙胺(7.14ml；54.48mmol；3.00eq.)和4-二甲基氨基吡啶(0.22g；1.82mmol；0.10eq.)。将反应混合物于室温搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，真空浓缩反应混合物，得到残余物。该残余物用DCM稀释并用水洗涤，收集有机层并真空浓缩，得到中间体，将其溶解在乙醇(84.00ml；20.00V)中并于室温加入在水(2.10ml；0.50V)中的氢氧化钠(1.02g；2.54mmol；0.14eq.)。将环化反应回流6小时，并通过LCMS监测反应。完成后，真空浓缩反应混合物，得到粗产物。该粗产物通过硅胶色谱法使用7％的MeOH/DCM纯化，得到化合物29(4.90g；9.27mmol；51.0％；淡棕色固体；纯化产物)。

产量：4.90g(9.27mmol)，收率％：51.0。

分析数据：

RT(min)：0.67；纯度(最大)：82.73％；M+H:399.20。

步骤4：

在氮气氛下向化合物29(0.80g；1.92mmol；1.00eq.)在乙腈(24.00ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入三乙胺(1.36ml；9.58mmol；5.00eq.)、然后加入[氯(二苯基)甲基]苯(1.08g；3.83mmol；2.00eq.)。将所得悬浮液加热至100℃并搅拌16小时。通过TLC监测反应。完成后，除去溶剂，得到粗产物。通过快速柱色谱法在60-120硅胶中用乙酸乙酯和石油醚纯化该粗产物。产物在40-100％的乙酸乙酯和石油醚中洗脱，并浓缩洗脱液，得到化合物30(800.00mg；1.22mmol；63.6％；白色固体；纯化产物)。

产量：800.00mg(1.22mmol)，收率％：63.6。

分析数据：

RT(min)：1.14；纯度(最大)：93.25％；M+H:656.20。

步骤5：

向氢化钠(60％)(0.05g；1.19mmol；1.50eq.)在DMSO(5.60ml；10.00V)中的处于氮气氛下的0℃搅拌溶液中逐滴加入在DMSO(5.60ml；10.00V)中的化合物30(0.56g；0.80mmol；1.00eq.)并将反应混合物于室温搅拌30分钟。然后在0℃下加入1,4-二溴丁烷(0.53g；2.39mmol；3.00eq.)并让反应混合物在氮气氛下于室温搅拌1小时。通过TLC监测反应。完成后，在0℃下用冰水淬灭反应混合物。用乙酸乙酯稀释反应混合物并分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化并且产物用15％的乙酸乙酯/己烷洗脱。蒸发所需级分，得到化合物31(23.00mg；0.03mmol；3.6％；白色胶；纯化产物)。

产量：23.00mg(0.03mmol)，收率％：3.6。

分析数据：

RT(min)：3.09；纯度(最大)：96.95％；M+H:790.30。

步骤6：

在室温下向化合物31(80.00mg；0.08mmol；1.00eq.)和1-甲基哌嗪(0.01ml；0.09mmol；1.10eq.)在乙腈(2.40ml；30.00V)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(23.91mg；0.17mmol；2.00eq.)。将悬浮液加热至50℃并搅拌16小时。通过LCMS监测反应。完成后，除去溶剂，得到粗产物。将该粗产物溶解在水中并用DCM(8mL)萃取。用水洗涤有机层。该有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物32(55.00mg；0.06mmol；67.4％；灰白色胶；纯化产物)。

产量：55.00mg(0.06mmol)，收率％：67.4。

分析数据：

RT(min)：1.70；纯度(最大)：84.18％；M+H:810.40。

步骤7：

在0℃下向化合物32(55.00mg；0.04mmol；1.00eq.)在DCM(2.75ml；50.00V)中的搅拌溶液中加入TFA(0.13ml；1.70mmol；40.00eq.)。将所得溶液温热至室温并搅拌3小时。通过LCMS监测反应。完成后，在低于35℃下减压除去溶剂，得到粗产物。该粗产物通过制备型HPLC以TFA法纯化并冻干产物级分，得到呈三氟乙酸盐的实施例18(13.10mg；0.02mmol；51.6％；白色胶；纯化产物)。

产量：13.10mg(0.02mmol)，收率％：51.6。

分析数据：

RT(min)：8.32；纯度(最大)：97.35％；M+H:468.30。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.23(s,br,2H),8.99(s,br,2H),8.61(d,J＝8.00Hz,1H),7.83(d,J＝8.00Hz,1H),7.75(t,J＝15.20Hz,1H),7.55(t,J＝15.20Hz,1H),4.68(s,br,6H),3.19-2.22(m,15H),1.20-1.31(m,13H)。

实施例19的化学合成

步骤1：

将R848(18.00mg；0.057mmol；1.0eq.)加到甲苯(2.00ml)中，得到白色悬浮液。加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(0.017ml；0.170mmol；3.0eq.)和邻苯二甲酰氯(0.010ml；0.068mmol；1.2eq.)。将反应混合物于110℃搅拌2小时并通过LCMS监测。完成后，冷却混合物，然后用乙酸乙酯稀释并用1N HCl洗涤。分离有机相并用乙酸乙酯萃取水层。合并有机层，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物33的粗产物(25.20mg,0.070mmol,白色胶；粗产物)，其不经进一步纯化即用于下一反应中。

分析数据：

RT(min)：1.50；纯度(最大)：30.81％；M+H＝445

步骤2：

将从步骤1获得的化合物33(作为粗物质；18.00mg；0.040mmol；1.0eq.)、(1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-乙酸(24.93mg；0.121mmol；3.0eq.)和4-(吡咯烷-1-基)吡啶(9.00mg；0.061mmol；1.5eq.)与DCM(2,00ml)合并，得到白色悬浮液。加入N,N'-二异丙基碳二亚胺(0.019ml；0.121mmol；3.0eq.)和分子筛。将反应混合物加热至50℃过夜并通过LCMS监测。完成后，反应混合物通过制备型RP-HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％ TFA)洗脱。将含有产物的级分合并在一起并冻干过夜，得到化合物34(16.70mg,0.02mmol,61.0％,白色粉末,纯化产物)。

产量：16.70mg(0.02mmol)，收率％：61.0。

分析数据：

RT(min)：1.725；纯度(最大)：93.5％；M+H＝631.7。

步骤3：

将化合物34(16.700mg；0.026mmol；1.0eq.)与THF(2,00ml)合并，得到白色悬浮液。向该悬浮液中加入在水中的肼溶液(35％)(0.057ml；0.624mmol；23.6eq.)，将溶液于室温搅拌4小时并通过LCMS监测。完成后，将反应混合物直接注入到制备型HPLC上，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。将含有产物的级分合并在一起并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例19(3.70mg；0.01mmol；29.0％；白色粉末；纯化产物)。

产量：3.70mg(0.01mmol)，收率％：29.0。

分析数据：

RT(min)：0.902；纯度(最大)：100％；M+H＝371.9。

实施例20的化学合成

将乙醇酸(6.482mg；1.00eq.)溶解在DMF(2.00ml)中，然后加入4-甲基吗啉(0.023ml；2.50eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(35.294mg；1.10eq.)并搅拌10分钟。最后加入化合物3(31.00mg；1.00eq.)，将混合物于室温搅拌过夜并通过LCMS监测。反应过夜后，起始材料未完全转化成产物，因此向混合物中加入乙醇酸(6.482mg；1.00eq.)、[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(35,294mg；1,10eq.)和4-甲基吗啉(0.023ml；2.50eq.)在DMF(0.500ml)中的溶液，将其再次搅拌过夜并通过LCMS监测。完成后，减压浓缩反应溶液，残余物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。合并含有产物的级分并冻干过夜，得到实施例20(17.10mg；0.041mmol；48.8％；灰白色固体；纯化固体)。

产量：17.10mg(0.041mmol)，收率％：48.8。

分析数据：

RT(min)：1.10；纯度(最大)：99.9％；M+H＝416.1。

实施例21的化学合成

将2-羟基异丁酸(8.675mg；1.00eq.)溶解在DMF(2.000ml)中，然后加入4-甲基吗啉(0.018ml；2.00eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(31.050mg；1.00eq.)并搅拌10分钟。最后加入化合物3(30.000mg；1.00eq.)，将混合物于室温搅拌过夜并通过LCMS监测。减压浓缩反应溶液，残余物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。合并含有产物的级分并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例21(29.000mg；0.052mmol；63.7％；白色固体；纯化产物)。

产量：29.000mg(0.052mmol)，收率％：63.7。

分析数据：

RT(min)：1.103；纯度(最大)：100％；M+H＝444.0。

实施例22的化学合成

将丙二酸单甲酯(14.248μl；1.00eq.)溶解在DMF(2,000ml)中，然后加入4-甲基吗啉(0.030ml；2.00eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(51.750mg；1.00eq.)并搅拌10分钟。最后加入化合物3(50.000mg；1.00eq.)，将混合物于室温搅拌过夜并通过LCMS监测。减压浓缩反应溶液，残余物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。合并含有产物的级分并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例22(52.300mg；0.084mmol；61.9％；透明玻璃固体；纯化产物)。

产量：52.300mg(0.084mmol)，收率％：61.9。

分析数据：

RT(min)：1.11；纯度(最大)：92.0％；M+H＝458.0。

实施例23的化学合成

将甲硫基乙酸(8.203μl；1.00eq.)溶解在DMF(2.000ml)中。加入N-乙基二异丙基胺(79.306μl；5.00eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并-[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(70.927mg；2.00eq.)并搅拌20分钟，然后加入化合物3(33.339mg；1.00eq.)，将反应混合物于室温搅拌2小时并通过LCMS监测。完成后，反应混合物通过制备型HPLC经Sunfire柱纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。合并含有产物的级分，浓缩并冻干，得到呈三氟乙酸盐的实施例23(16.500mg；0.028mmol；30.3％；米色固体；纯化产物)。

产量：16.500mg(0.028mmol)，收率％：30.3。

分析数据：

RT(min)：1.177；纯度(最大)：95.9％；M+H＝446.2。

实施例24的化学合成

将甲磺酰乙酸(12.058mg；0.087mmol；1.2eq.)溶解在DMF(2.000ml)中。加入4-甲基吗啉(15.994μl；0.145mmol；2.0eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(33.188mg；0.087mmol；1.2eq.)并搅拌10分钟，然后加入化合物3(26.000mg；0.073mmol；1.0eq.)。将反应混合物搅拌过夜并通过LCMS监测。完成后，反应混合物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。收集含有产物的级分并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例24(9.10mg；0.01mmol；20.5％；淡米色固体；纯化产物)。

产量：9.10mg(0.01mmol)，收率％：20.5。

分析数据：

RT(min)：1.14；纯度(最大)：97.0％；M+H＝478.1。

实施例25的化学合成

将2-磺基乙酸(12.740mg；0.087mmol；1.2eq.)溶解在DMF(2,000ml)中。加入4-甲基吗啉(15.994μl；0.145mmol；2.0eq.)和[二甲基氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵；六氟磷酸盐(33.188mg；0.087mmol；1.2eq.)并搅拌10分钟，然后加入化合物3(26.000mg；0.073mmol；1.0eq.)。将反应混合物于室温搅拌过夜并通过LCMS监测。完成后，反应混合物通过制备型HPLC纯化，用水/乙腈(0.1％TFA)洗脱。收集含有产物的级分并冻干过夜，得到呈三氟乙酸盐的实施例25(26.3mg；0.04mmol；60.3％；白色粉末；纯化产物)。

产量：26.3mg(0.04mmol)，收率％：60.3。

分析数据：

RT(min)：1.108；纯度(最大)：99％；M+H＝480.1。

实施例26的化学合成

步骤1：

向化合物16(200.00mg；0.29mmol；1.00eq.)和1-[2-(甲基硫烷基)乙基]哌嗪(69.52mg；0.43mmol；1.50eq.)在乙腈(4.000ml)中的溶液中加入碳酸钾(122.33mg；0.87mmol；3.00eq.)并于60℃搅拌过夜。通过TLC监测反应。反应完成后，浓缩反应混合物，粗残余物通过硅胶色谱法使用10％的甲醇:DCM纯化，得到化合物35(152.73mg；0.19mmol；67.3％；纯化产物)。

产量：152.73mg(0.19mmol)，收率％：67.3。

分析数据：

RT(min)：2.59；纯度(最大)：98.2％；M+H＝771.40。

步骤2：

向化合物35(175.00mg；0.23mmol；1.00eq.)在DCM(1.75ml)中的溶液中逐滴加入三氟乙酸(0.18ml；2.27mmol；10.00eq.)并于室温搅拌过夜。通过TLC监测反应。反应完成后，减压浓缩反应混合物，得到粗残余物，将其通过硅胶色谱法使用10％的甲醇和DCM纯化，得到实施例26(21.4mg；0.04mmol；17.5％；纯化产物)

产量：21.4mg(0.04mmol)，收率％：17.5。

分析数据：

RT(min)：1.96；纯度(最大)：97.4％；M+H＝529.20。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.58(d,J＝8.00Hz,1H),7.81(d,J＝7.60Hz,1H),7.71(t,J＝15.60Hz,1H),7.54(t,J＝15.60Hz,1H),5.03(s,br,3H),4.70(s,br,3H),3.55-3.57(m,15H),3.20(s,br,4H),2.51-2.52(m,3H),2.11(s,3H),1.14-1.22(m,9H)。

实施例27的化学合成

向实施例10(100.00mg；0.22mmol；1.00eq.)溶解在乙腈(2.00ml)中的溶液中加入1-氯-2-甲基-2-(甲基硫烷基)丙烷(91.50mg；0.66mmol；3.00eq.)和碳酸钾(46.53mg；0.33mmol；1.50eq.)并于50℃搅拌过夜。通过TLC监测反应。反应完成后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用水洗涤，用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩，得到粗残余物。该粗残余物通过制备型HPLC使用0.1％的TFA/水和ACN纯化，得到实施例27(5.80mg；0.01mmol；4.7％；纯化产物)。

产量：5.80mg(0.01mmol)，收率％：4.7。

分析数据：

RT(min)：2.00；纯度(最大)：99.48％；M+H:557.40。

TLR7激动剂的生物学评价

TLR7/8报告基因测定

材料和通用程序

HEK-Blue^TM TLR7和TLR8细胞系得自InvivoGen(美国加利福尼亚州圣地亚哥)。将HEK-Blue细胞培养在高葡萄糖DMEM培养基(Gibco-10569010)中，该培养基根据制造商的建议补充有10％的HI-FBS(源自澳洲)(Gibco-10100-147)和1％的青霉素/链霉素(Gibco-15140-122-100ml)。另外，还向该培养基中添加了特定的抗生素混合物。对于HEK-Blue^TMhTLR7细胞，添加100μg/ml Zeocin(11006-33-0)、10μg/ml Blasticidin(ant-bl-05)、50μg/ml Normocin(ANT-NR-1-500MG)，对于HEK-Blue^TM hTLR8细胞，添加100μg/ml Zeocin、30μg/ml Blasticidin、50μg/ml Normocin(均来自InvivoGen)。

体外筛选激动剂的通用程序

所有化合物均在100％ DMSO(Sigma-D2650)中制备。将化合物在100％ DMSO中连续稀释(3倍)，从30μM开始，直至10点剂量反应曲线；孔板中DMSO的最终浓度为0.3％。使用瑞喹莫德和TL8-506(InvivoGen-tlrl-tl8506)作为对照。分别使用0.3％ DMSO和10μM瑞喹莫德作为最小值和最大值，激活％使用以下公式计算：

激活％：{100-(最大吸光度-吸光度)/(最大吸光度-最小吸光度)}x100。

对于用TLR7/8激动剂进行的刺激，将细胞重悬于完全培养基中，并在第1天将40μl细胞悬液(10,000个细胞/孔)接种于384孔测定板(Thermo Scientific^TM Nunc–164688)中，该测定板已用Echo液体处理仪(Echo Liquid Handler)预先分配了化合物。将板在100g下旋转1分钟以使细胞沉降，并在37℃、5％ CO₂的条件下温育24小时。为了测量温育24小时后SEAP的产生，避光向测定板中加入根据制造商的说明制备的10μl Quanti-Blue^TM溶液(InvivoGen rep-qbs2)并在37℃、5％CO₂的条件下温育30分钟。温育后，在Tecan spark(Spark control Magellan)中于620nm处测量吸光度。

使用Graph Pad Prism统计软件(版本7.05)确定EC₅₀，单独的数据点代表平行样的吸光度值。表1描述了本公开的化合物，其中EC₅₀值小于0.01μM的为“A”活性，介于0.01μM至0.1μM之间的为“B”活性，介于0.1μM至1μM之间的为“C”活性，介于1μM至10μM之间的为“D”活性，大于10μM的为“E”活性。

表1：TLR7/8激动剂在HEKBlue细胞中的体外筛选

总体上，我们的实施例中的大多数对TLR7的效力远高于基准。此外，我们的实验

从PBMC的TNFα分泌

材料和通用程序

从健康人志愿者分离出外周血单核细胞(PBMC)并储存在液氮中。将冷冻PBMC的小瓶在37℃水浴中解冻不超过2分钟。将管的内容物无菌转移到经预热的完全培养基中，该培养基含有RPMI基础培养基(Gibco-21875034)并补充有10％的HI-FBS(源自澳洲)(Gibco-10100-147)和1％的青霉素/链霉素(Gibco-15140-122-100ml)，然后离心。将细胞重悬于完全培养基(3ml)中并使用血球计数器计数。

体外筛选激动剂的通用程序

所有选定的化合物(五种基准分子和15种实施例分子)均在100％DMSO(Sigma-D2650)中制备(10mM储备液)。在U-底96孔板(Cellstar-650180)中将化合物在100％ DMSO中连续稀释(4倍)直至8点DRC。将3μl的该连续稀释DRC与97μl的完全培养基(1:33.33)混合作为(300μM)3％ DMSO的中间稀释液。将11μl来自中间稀释液的化合物加到PBMC板(1:10)使得培养板中DMSO的最终浓度为0.3％并且化合物的起始浓度为30μM。分别使用瑞喹莫德(30μM)和DMSO(0.3％)作为阳性对照和阴性对照。

将板在37℃、5％ CO₂的条件下温育18小时。温育后，将板在2000rpm下旋转5分钟，轻轻吸去上清液并收集在蛋白低结合V-底96孔板(Thermo Fisher-249944)中。密封上清液板，贴上适当的标签并储存在-80℃下直至进行细胞因子分析(<1个月)。

使用MILLIPLEX MAP人细胞因子/趋化因子磁珠检测试剂盒(HCYTOMAG-60K)根据试剂盒的建议来测量TNF-α。

使用Graph Pad Prism统计软件(版本7.05)确定EC₅₀，单独的数据点代表平行样的吸光度值。表2描述了本公开的化合物，其中EC₅₀值小于0.1μM的为“A”活性，介于0.1μM至1μM之间的为“B”活性，介于1μM至10μM之间的为“C”活性，大于10μM的为“D”活性。

表2：PBMC中选定TLR7/8激动剂的体外筛选

PBMC中激活标志物CD86的表达

材料和通用程序

PBMC商业采购自HemaCare Corporation并在含有10％ HI-FBS的RPMI(Gibco-11875093)中培养。为了进行刺激，将含有2X10^5个细胞的50μl细胞悬液接种在96孔平底白盖测定板(Greiner Bio one–655180)中。使用新鲜培养的PBMC筛选激动剂。使用FITC抗人CD14(Bioscience,11-0149-42)、PE抗人CD123(Biolegend,396704)、BV421抗人CD11c(Biolegend 301628)和APC抗人CD86(Biolegend,374208)抗体进行流式细胞术染色。

体外测试激动剂的通用程序

所有化合物均在高2倍的浓度下制备以使用培养基产生中间储备液(2μM)。将化合物在培养基中使用10倍稀释进行连续稀释，总共4点DRC(2-0.002μM)。将中间储备液(50μl)和连续稀释的储备液加到测定板中以达到1-0.001μM的最终浓度。使用未经刺激或经用0.02％ DMSO刺激的细胞作为对照。将板在37℃、5％ CO₂的条件下温育21小时。

第二天，使用冰冷的FACS缓冲液(无阳离子并含有2％ HI-FBS的DPBS)采收细胞并转移至单独的96孔V-底板(Greiner,650201)。使用FACS缓冲液通过在4℃下以1400rpm旋转2分钟来洗涤细胞一次。随后在PBS中进行洗涤，然后使用在PBS中稀释的僵尸黄染色剂(Biolegend,423103；1:100)根据制造商的操作规程对细胞进行活-死染色。将细胞在FACS缓冲液中洗涤两次并使用抗-CD14 FITC、抗-CD11c BV421、抗-CD123 PE和抗-CD86 APC抗体(每种抗体2μl/测试)在FACS缓冲液中于4℃在避光条件下染色1小时。染色后，在4℃下使用FACS缓冲液在1400rpm下洗涤细胞两次2分钟。使用ACEA NovoCyte流式细胞仪在用补偿珠设置补偿矩阵后分析悬浮在FACS缓冲液(100μl/孔)中的细胞，活-死染色除外，对于活-死染色，使用经用僵尸黄染料染色的PBMC。

使用FSC-H和SSC-H门控PBMC，然后使用FSC-H和FSC-A进一步门控单个细胞。使用太平洋橙通道中捕获的活-死染色门控单细胞(singlet)以检测活力。对能存活的单细胞进行CD14+(单核细胞)群体、CD14-CD11c+(cDC群体)和CD14-CD11c-CD123+(pDC)群体的门控。进一步评估每个群体在相应通道中的CD86+表达。使用NovoExpress软件用相应的FMO对照来指定阴性门和阳性门。通过使用Graph Pad Prism9软件绘制浓度对cDC群体(图4A)、pDC群体(图4B)和单核细胞(图4C)内CD86染色的中值荧光强度的关系图来为每种刺激物生成X-Y散点图。

Claims

1.一种根据式I的化合物

或其药学上可接受的盐，

其中X为氧原子、C1-C5-烷基(优选CH₂)或NH；

并且其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(a)或(b)或(c)下所定义：

(a)L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(b)L¹为C2-C6烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

L³选自6-元杂环、OH、C(O)O、S、SO₂和SO₃H；并且

R¹不存在或为甲基或氢；

(c)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在；

并且其中如果L³不存在，则L²经由共价键与R¹直接结合。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R²和R³为氢。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中X为氧原子。

4.根据权利要求3所述的化合物，其中所述化合物具有根据式II的结构

其中L¹、L²、L³和R¹为如下文在(d)、(e)或(f)下所定义

(d)L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自氢、NH₂、OH和SCH₃；

(e)L¹为C2-C3烷基；

L²选自C(O)、NHC(O)CH₂和NHC(O)C(CH₃)₂；

R¹不存在或为甲基或氢；

(f)L¹为C(O)CH₂；

L²为6-元杂环(优选地哌嗪)或NH₂；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢或不存在。

5.根据权利要求4所述的化合物，其中

L¹为C2-C6烷基；

R¹不存在或选自NH₂、OH和SCH₃。

6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有选自下面列出的指定为实施例1至实施例27的结构的结构：

7.根据权利要求1所述的化合物，其中

X为NH；

L¹为C2-C6烷基；

L²为5-或6-元杂环；

L³不存在；并且

R¹为甲基或氢；并且

R²和R³各自为氢。

8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物

(i)激活TLR7的强度高于激活TLR8的强度；和/或

(ii)诱导IL-6、IL1-b和TNF-α产生；和/或

(iii)诱导外周血单核细胞(PBMC)中CD40和/或CD86的上调。

9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中如果该化合物接触外周血单核细胞(PBMC)，则该化合物诱导TNFα从所述细胞的分泌。

10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中当在实施例6.2.1中描述的测试系统中测试时，所述化合物对TLR7具有小于10μM并优选小于0.01μM的EC50。

11.药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物。

12.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其用作药物。

13.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其用于治疗疾病，其中所述化合物在所述治疗中与另外的化合物咪喹莫特和/或瑞喹莫德(R848)联合使用。

14.一种包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物的组合物，其用于治疗选自以下的病况：癌症、病毒感染、非癌性皮肤病变、癌前皮肤病变、癌性皮肤病变、膀胱癌、病毒介导的皮肤病，所述组合物任选地配制成增强局部施用后的渗透，所述组合物优选引发局部特异性炎症细胞因子反应，同时限制不期望的红斑和其他炎症反应。

15.根据权利要求11或14所述的组合物，其包含0.01％-1％(wt/vol)的根据权利要求1-10中任一项所述的化合物。

16.根据权利要求14或15所述的组合物，其用于治疗膀胱癌，其中所述组合物配制成用于囊内施用。

17.根据权利要求11、14、15或16中任一项所述的组合物，其还包含下面罗列的组i至xiii中之一的附加组分：

xi.含有50ml磷酸盐缓冲盐水和50ml乙醇的溶液，或

18.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括向罹患癌症的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或根据权利要求11和14-17中任一项所述的组合物。

19.一种用于治疗皮肤肿瘤病变和病毒诱导的皮肤疾病的方法，所述方法包括局部施用根据权利要求11和14-17中任一项所述的组合物，所述组合物优选有效于减轻或消除所述病变或疾病，同时限制选自红斑和炎症的不良皮肤反应，所述组合物优选减少肿瘤病变向周围组织中的渗透和向淋巴结的转移。

20.一种用于治疗膀胱肿瘤的方法，所述方法包括囊内施用根据权利要求11和14-17中任一项所述的组合物，所述组合物优选增强所述组合物向膀胱上皮的渗透和递送，同时限制刺激，所述组合物优选减少肿瘤向周围肌肉组织中的浸润和向淋巴结的转移。

21.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，所述治疗还包括全身施用至少一种选自抗-PD1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体、抗-CD137抗体、激动剂CD40抗体、CD134(抗-OX40)激动剂和PLX3397的免疫调节剂。

22.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其还包括全身施用干扰素γ。

23.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其还包括在具有或不具有全身性抗-PD1抗体的情况下施用局部放射。

24.根据权利要求18-20中任一项所述的方法，其还包括施用光动力疗法。

25.一种激活生物样品中的TLR 7和/或8的方法，所述方法包括使所述生物样品与根据权利要求1-10中任一项所述的化合物接触。

26.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其用作疫苗佐剂或与抗癌免疫治疗剂(优选伊匹单抗、纳武单抗或派姆单抗)联合用于治疗癌症。