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CN120457127A - 用于调节egfr和pi3k的化合物 - Google Patents

用于调节egfr和pi3k的化合物

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CN120457127A
CN120457127A CN202380084851.6A CN202380084851A CN120457127A CN 120457127 A CN120457127 A CN 120457127A CN 202380084851 A CN202380084851 A CN 202380084851A CN 120457127 A CN120457127 A CN 120457127A
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CN
China
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alkyl
ring
salt
heteroaryl
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Application number
CN202380084851.6A
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C·E·怀特黑德
J·S·利奥波德
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Mcnisdick Treatment Ltd
Original Assignee
Mcnisdick Treatment Ltd
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Abstract

本公开涉及药物化学领域。具体地，本公开涉及一类具有根据式I的喹唑啉结构或喹啉结构的新型小分子，其中环A、环B和B'、Y、X1、R1和n在本文中描述，

Description

用于调节EGFR和PI3K的化合物
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2022年10月20日提交的美国临时申请USSN 63/417,869的优先权，该美国临时申请全文以引用方式并入本文。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明是在美国国立卫生研究院授予的授权号R44CA213715的政府支持下完成的。政府享有本发明的某些权利。
技术领域
本公开涉及药物化学领域。具体地，本公开涉及一类具有喹唑啉结构或喹啉结构的新型小分子，这些小分子充当EGFR蛋白和PI3K蛋白的双重抑制剂。本公开还涉及它们作为用于治疗EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况的治疗剂的用途。本公开还涉及它们作为用于治疗EGFR和/或PI3K介导的中枢神经系统疾病或病况的治疗剂的用途，这些疾病或病况需要可以穿透血脑屏障的治疗剂。
背景技术
胶质母细胞瘤(GBM)是成人中最常见的恶性原发性脑肿瘤，经常表现出异常的EGFR和PI3K通路信号传导。根据癌症基因组图谱(TCGA)，高达90％的GBM在受体酪氨酸激酶(RTK)或PI3K途径信号传导方面发生改变。大约66％的GBM在这两类信号传导缺陷中都存在改变。EGFR的畸变是RTK中最普遍的，发生在超过一半的GBM中。EGFR的改变包括扩增、过表达和EGFRvIII突变。超过60％的GBM显示PI3K途径信号传导发生改变，表现为PTEN的缺失或突变(41％)或PI3K的突变(25％)。因此，人们付出了相当大的努力来开发独立靶向EGFR或PI3K信号传导的治疗GBM的药剂。
虽然GBM表现出EGFR和PI3K途径畸变的高发生率，但在临床环境中单独使用任一途径的靶向抑制剂导致令人失望的反应率和对无进展生存和长期生存的最小影响。大量因素导致临床前疗效未能转化为临床益处，包括补偿信号传导和/或缺乏脑穿透。虽然EGFR是GBM中最过表达的RTK，但其他RTK可以补偿受损的EGFR信号传导。替代性地，PTEN或PI3K突变可以导致独立于EGFR受体的EGFR途径激活。Mellinghoff等人的研究表明，EGFR靶向药剂厄洛替尼和吉非替尼仅在EGFR和野生型PTEN表达高的情况下才表现出益处。Haas-Kogan等人还证明，GBM对厄洛替尼的反应依赖于EGFR的高表达和活化AKT的低表达。PI3K途径抑制剂的使用也没有对GBM产生显著的临床活性，从而需要组合PI3K途径抑制剂与其他靶向药剂。具体地，直接靶向EGFR和PI3K途径已在临床前表现出显著的前景。遗憾的是，评估EGFR和PI3K途径方法的组合在GBM中的疗效的试验数量有限。西罗莫司和EGFR抑制剂(吉非替尼或厄洛替尼)的组合最初显示出疗效的暗示，如19％的客观反应率和大约一半的患者表现出稳定的疾病所证明的。然而，雷帕霉素类似物组合EGFR抑制剂的后续II期试验未能显示出有意义的临床活性。Buck等人报道，mTOR抑制剂雷帕霉素与EGFR抑制剂厄洛替尼在对单独厄洛替尼治疗表现出抗性的几种细胞系中协同作用。由于雷帕霉素诱导AKT磷酸化，导致途径重新激活，因此这种协同组合的全部潜力永远无法实现。传统观点认为，与mTOR/EGFR抑制剂组合相比，泛PI3K抑制剂与EGFR抑制剂组合将具有更优异的疗效。遗憾的是，这种策略尚未在临床上广泛应用于GBM患者，部分原因是组合药物双方都需要具备必要的脑穿透特性。
脑肿瘤会损害BBB的完整性，从而使液体和血浆蛋白的积聚增加。随之而来的“渗漏”增加提供了将药物分子分配到肿瘤中导致治疗活性的机会。由于GBM的播散性质，肿瘤消退对总生存几乎没有影响。厄洛替尼和吉非替尼等药物不能穿透大脑中具有功能性BBB的部分，因为它们被耐药转运蛋白诸如p-糖蛋白(Pgp)和乳腺癌耐药蛋白(BRCP)主动流出大脑。
综上所述，有证据支持用可以穿透BBB的小分子双重靶向EGFR和PI3K途径具有重大的医疗需求。
发明内容
本公开确定了能够双重靶向EGFR和PI3K途径的新型小分子化合物。
在一些方面，本公开的化合物是EGFR和PI3K分子的有效抑制剂，并且可用于治疗脑癌，因为所公开的化合物可以穿透人和其他哺乳动物的血脑屏障(BBB)。
本公开满足了对用于治疗与异常EGFR和PI3K途径信号传导相关的癌症的改进方法的需求。实际上，在开发本公开的实施方案的过程中进行的实验设计了一类能够双重靶向EGFR和PI3K途径的可以穿透血脑屏障的新型强效小分子。
因此，本公开提供了一类能够双重靶向EGFR和PI3K途径的可以穿透血脑屏障的新型小分子，以及它们作为用于治疗癌症和其他疾病的治疗剂的用途。
因此，本公开考虑了将患有癌症(例如，与异常EGFR和PI3K途径信号传导相关的癌症)(例如，和/或癌症相关病症)的动物(例如，人)暴露于能够抑制EGFR和PI3K两者的活性的治疗有效量的药物。
在一些相关实施方案中，可治疗的癌症是可用本公开的化合物治疗的脑癌，这些化合物能够穿过BBB，从而直接抑制此类癌细胞或支持细胞的生长和/或使此类细胞作为群体更容易受到癌症治疗药物或放射疗法的细胞死亡诱导活性的影响。
此外，本公开考虑了通过与放射疗法或替莫唑胺的组合治疗(例如，同时、非同时)来增强(例如，协同)这种治疗效果。实际上，本公开考虑了EGFR和PI3K活性的双重抑制剂满足治疗多种癌症类型的未满足的需求，无论是当作为单一疗法施用以诱导癌细胞中的细胞生长抑制、细胞凋亡和/或细胞周期停滞时，还是当与另外的药剂(诸如其他诱导细胞死亡或破坏细胞周期的癌症治疗药物(例如，MAPK途径抑制剂))或放射疗法(组合疗法)按时间关系施用时，以便与仅单独用癌症治疗药物或放射疗法治疗的动物中的相应比例的细胞相比，使更大比例的癌细胞或支持细胞易于执行细胞凋亡程序。
在本公开的某些实施方案中，与单独用化合物或抗癌药物/放射治疗的动物相比，用治疗有效量的本公开化合物和一个疗程的抗癌剂对动物的组合治疗在此类动物中产生更大的肿瘤反应和临床益处。由于所有批准的抗癌药物和放射治疗的剂量都是已知的，因此本公开考虑了它们与本发明化合物的各种组合。
申请人已经发现某些小分子能够双重靶向EGFR和PI3K，并可以穿透血脑屏障，并用作用于治疗癌症和其他疾病的治疗剂。因此，本公开涉及此类小分子，并增加细胞对细胞凋亡和/或细胞周期停滞的诱导剂的敏感性。本公开的某些化合物可以作为包括光学异构体的立体异构体存在。本公开包括所有立体异构体，作为纯的单个立体异构体制备物和各自的富集制备物。此类立体异构体的外消旋混合物以及可以根据已知方法分离的单个非对映异构体和对映异构体都是本领域技术人员熟知的。
具体实施方式
定义
出于本公开的目的，化学元素是根据元素周期表,CAS版本,Ha ndbook ofChemistry and Physics,第75版来鉴定的。另外，有机化学的一般原理在“OrganicChemistry”,Thomas Sorrell,University Sc ience Books,Sausalito:1999以及“March's Advanced Organic Chemi stry”,第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,John Wiley&Sons,New York:2001中进行了描述，这些文献的全部内容以引用方式并入本文。
如本文所用，“烷基”是指含有1-12(例如，1-8、1-6或1-4)个碳原子的饱和脂族烃基。烷基可以是直链或支链的。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正庚基或2-乙基己基。烷基可以被一个或多个取代基取代(即，任选地被取代)，该一个或多个取代基诸如卤代、磷、环脂族[例如，环烷基或环烯基]、杂环脂族[例如，杂环烷基或杂环烯基]、芳基、杂芳基、烷氧基、芳酰基、杂芳酰基、酰基[例如，(脂族)羰基、(环脂族)羰基或(杂环脂族)羰基]、硝基、氰基、酰氨基[例如，(环烷基烷基)羰基氨基、芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基、(杂环烷基)羰基氨基、(杂环烷基烷基)羰基氨基、杂芳基羰基氨基、杂芳烷基羰基氨基、烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环烷基氨基羰基、芳基氨基羰基或杂芳基氨基羰基]、氨基[例如，脂族氨基、环脂族氨基或杂环脂族氨基]、磺酰基[例如，脂族-SO2-]、亚磺酰基、硫烷基、磺氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、氧代、羧基、氨基甲酰基、环脂族氧基、杂环脂族氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基、杂芳基烷氧基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基或羟基。取代烷基的一些实例包括(但不限于)羧基烷基(诸如HOOC-烷基、烷氧基羰基烷基和烷基羰基氧基烷基)、氰基烷基、羟烷基、烷氧基烷基、酰基烷基、芳烷基、(烷氧基芳基)烷基、(磺酰基氨基)烷基(诸如(烷基-SO2-氨基)烷基)、氨基烷基、酰氨基烷基、(环脂族)烷基或卤代烷基。
如本文所用，单独使用或作为较大部分的一部分使用的“芳基”，如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中，是指单环(例如，苯基)；双环(例如，茚基、萘基、四氢萘基、四氢茚基)；和三环(例如，芴基、四氢芴基或四氢蒽基、蒽基)环系统，其中单环系统是芳族的或者双环或三环系统中的至少一个环是芳族的。双环和三环基团包括苯并稠合的2-3元碳环。例如，苯并稠合基团包括与两个或更多个C4-8碳环部分稠合的苯基。芳基任选地被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基包括脂族[例如，烷基、烯基或炔基]；环脂族；(环脂族)脂族；杂环脂族；(杂环脂族)脂族；芳基；杂芳基；烷氧基；(环脂族)氧基；(杂环脂族)氧基；芳氧基；杂芳氧基；(芳脂族)氧基；(杂芳脂族)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代(在苯并稠合的双环或三环芳基的非芳族碳环上)；硝基；羧基；酰氨基；酰基[例如，(脂族)羰基；(环脂族)羰基；((环脂族)脂族)羰基；(芳脂族)羰基；(杂环脂族)羰基；((杂环脂族)脂族)羰基；或(杂芳脂族)羰基]；磺酰基[例如，脂族-SO2-或氨基-SO2-]；亚磺酰基[例如，脂族-S(O)-或环脂族-S(O)-]；硫烷基[例如，脂族-S-]；氰基；卤代；羟基；巯基；磺氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；磺酰胺；或氨基甲酰基。替代性地，芳基可以是未取代的。
取代芳基的非限制性实例包括卤代芳基[例如，单、二(诸如对,间-二卤代芳基)和(三卤代)芳基]；(羧基)芳基[例如，(烷氧基羰基)芳基、((芳烷基)羰基氧基)芳基和(烷氧基羰基)芳基]；(酰氨基)芳基[例如，(氨基羰基)芳基、(((烷基氨基)烷基)氨基羰基)芳基、(烷基羰基)氨基芳基、(芳基氨基羰基)芳基和(((杂芳基)氨基)羰基)芳基]；氨基芳基[例如，((烷基磺酰基)氨基)芳基或((二烷基)氨基)芳基]；(氰基烷基)芳基；(烷氧基)芳基；(氨磺酰基)芳基[例如，(氨基磺酰基)芳基]；(烷基磺酰基)芳基；(氰基)芳基；(羟烷基)芳基；((烷氧基)烷基)芳基；(羟基)芳基、((羧基)烷基)芳基；(((二烷基)氨基)烷基)芳基；(硝基烷基)芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)芳基；((杂环脂族)羰基)芳基；((烷基磺酰基)烷基)芳基；(氰基烷基)芳基；(羟烷基)芳基；(烷基羰基)芳基；烷基芳基；(三卤代烷基)芳基；对-氨基-间-烷氧基羰基芳基；对-氨基-间-氰基芳基；对-卤代-间-氨基芳基；或(间-(杂环脂族)-邻-(烷基))芳基。
如本文所用，“环烷基”是指3-10(例如，5-10)个碳原子的饱和碳环单环或双环(稠合或桥接联)环。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、降冰片基、立方基、八氢茚基、十氢萘基、双环[3.2.1]辛基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.3.1]壬基、双环[3.3.2.]癸基、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基或((氨基羰基)环烷基)环烷基。
环烷基可以任选地被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基诸如磷、脂族[例如，烷基、烯基或炔基]、环脂族、(环脂族)脂族、杂环脂族、(杂环脂族)脂族、芳基、杂芳基、烷氧基、(环脂族)氧基、(杂环脂族)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳脂族)氧基、(杂芳脂族)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰氨基[例如，(脂族)羰基氨基、(环脂族)羰基氨基、((环脂族)脂族)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族)羰基氨基、(杂环脂族)羰基氨基、((杂环脂族)脂族)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族)羰基氨基]、硝基、羧基[例如，HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[例如，(环脂族)羰基、((环脂族)脂族)羰基、(芳脂族)羰基、(杂环脂族)羰基、((杂环脂族)脂族)羰基或(杂芳脂族)羰基]、氰基、卤代、羟基、巯基、磺酰基[例如，烷基-SO2-和芳基-SO2-]、亚磺酰基[例如，烷基-S(O)-]、硫烷基[例如，烷基-S-]、磺氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。
如本文所用，“环基”与“环烷基”相同，不同之处在于环基可以是部分不饱和的，但不是芳族的。
如本文所用，“杂环烷基”是指3-10元单环或双环(稠合或桥接)(例如，5至10元单环或双环)饱和环结构，其中一个或多个环原子是杂原子(例如，N、O、S或它们的组合)。杂环烷基的实例包括哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、1,4-二氧戊环基、1,4-二噻烷基、1,3-二氧戊环基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、八氢苯并呋喃基、八氢色烯基、八氢硫代色烯基、八氢吲哚基、八氢吡啶基、十氢喹啉基、八氢苯并[b]噻吩基、2-氧杂-双环[2.2.2]辛基、1-氮杂-双环[2.2.2]辛基、3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和2,6-二氧杂-三环[3.3.1.03,7]壬基。单环杂环烷基可以与苯基部分稠合形成将被归类为杂芳基的结构，诸如四氢异喹啉。
杂环烷基可以任选地被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基诸如磷、脂族[例如，烷基、烯基或炔基]、环脂族、(环脂族)脂族、杂环脂族、(杂环脂族)脂族、芳基、杂芳基、烷氧基、(环脂族)氧基、(杂环脂族)氧基、芳氧基、杂芳氧基、(芳脂族)氧基、(杂芳脂族)氧基、芳酰基、杂芳酰基、氨基、酰氨基[例如，(脂族)羰基氨基、(环脂族)羰基氨基、((环脂族)脂族)羰基氨基、(芳基)羰基氨基、(芳脂族)羰基氨基、(杂环脂族)羰基氨基、((杂环脂族)脂族)羰基氨基、(杂芳基)羰基氨基或(杂芳脂族)羰基氨基]、硝基、羧基[例如，HOOC-、烷氧基羰基或烷基羰基氧基]、酰基[例如，(环脂族)羰基、((环脂族)脂族)羰基、(芳脂族)羰基、(杂环脂族)羰基、((杂环脂族)脂族)羰基或(杂芳脂族)羰基]、硝基、氰基、卤代、羟基、巯基、磺酰基[例如，烷基磺酰基或芳基磺酰基]、亚磺酰基[例如，烷基亚磺酰基]、硫烷基[例如，烷基硫烷基]、磺氧基、脲、硫脲、氨磺酰基、磺酰胺、氧代或氨基甲酰基。
如本文所用，“杂环基”与“杂环烷基”相同，不同之处在于杂环基可以是部分不饱和的，但不是芳族的。
如本文所用的“杂芳基”是指具有4至15个环原子的单环、双环或三环环系统，其中一个或多个环原子是杂原子(例如，N、O、S或它们的组合)，并且其中单环环系统为芳香族，或者双环或三环环系统中的至少一个环为芳香族。杂芳基包括具有2至3个环的苯并稠合环系统。例如，苯并稠合基团包括与一个或两个4至8元杂环脂族部分稠合的苯并(例如，吲哚嗪基(indolizyl)、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚啉基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基或异喹啉基)。杂芳基的一些实例是氮杂环丁烷基、吡啶基、1H-吲唑基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、异喹啉基、苯并噻唑基、呫吨、噻吨、吩噻嗪、二氢吲哚、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、噌啉基、喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基(phthalazyl)、喹唑基、喹喔啉基、异喹啉基、4H-喹啉嗪基(quinolizyl)、苯并-1,2,5-噻二唑基或1,8-萘啶基。
单环杂芳基包括但不限于呋喃基、噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、1,3,4-噻二唑基、2H-吡喃基、4-H-吡喃基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡唑基、吡嗪基或1,3,5-三嗪基(triazyl)。单环杂芳基根据标准化学命名法进行编号。
双环杂芳基包括但不限于吲哚嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚啉基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、喹啉基、异喹啉基、吲哚嗪基、异吲哚基、吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹啉嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑基、喹喔啉基、1,8-萘啶基或蝶啶基。双环杂芳基根据标准化学命名法进行编号。
杂芳基任选地被一个或多个取代基取代，该一个或多个取代基诸如脂族[例如，烷基、烯基或炔基]；环脂族；(环脂族)脂族；杂环脂族；(杂环脂族)脂族；芳基；杂芳基；烷氧基；(环脂族)氧基；(杂环脂族)氧基；芳氧基；杂芳氧基；(芳脂族)氧基；(杂芳脂族)氧基；芳酰基；杂芳酰基；氨基；氧代(在双环或三环杂芳基的非芳族碳环或杂环上)；羧基；酰氨基；酰基[例如，脂族羰基；(环脂族)羰基；((环脂族)脂族)羰基；(芳脂族)羰基；(杂环脂族)羰基；((杂环脂族)脂族)羰基；或(杂芳脂族)羰基]；磺酰基[例如，脂族磺酰基或氨基磺酰基]；亚磺酰基[例如，脂族亚磺酰基]；硫烷基[例如，脂族硫烷基]；硝基；氰基；卤代；羟基；巯基；磺氧基；脲；硫脲；氨磺酰基；磺酰胺；或氨基甲酰基。替代性地，杂芳基可以是未取代的。
取代的杂芳基的非限制性实例包括(卤代)杂芳基[例如，单和二(卤代)杂芳基]；(羧基)杂芳基[例如，(烷氧基羰基)杂芳基]；氰基杂芳基；氨基杂芳基[例如，((烷基磺酰基)氨基)杂芳基和((二烷基)氨基)杂芳基]；(酰氨基)杂芳基[例如，氨基羰基杂芳基、((烷基羰基)氨基)杂芳基、((((烷基)氨基)烷基)氨基羰基)杂芳基、(((杂芳基)氨基)羰基)杂芳基、((杂环脂族)羰基)杂芳基和((烷基羰基)氨基)杂芳基]；(氰基烷基)杂芳基；(烷氧基)杂芳基；(氨磺酰基)杂芳基[例如，(氨基磺酰基)杂芳基]；(磺酰基)杂芳基[例如，(烷基磺酰基)杂芳基]；(羟烷基)杂芳基；(烷氧基烷基)杂芳基；(羟基)杂芳基；((羧基)烷基)杂芳基；(((二烷基)氨基)烷基]杂芳基；(杂环脂族)杂芳基；(环脂族)杂芳基；(硝基烷基)杂芳基；(((烷基磺酰基)氨基)烷基)杂芳基；((烷基磺酰基)烷基)杂芳基；(氰基烷基)杂芳基；(酰基)杂芳基[例如，(烷基羰基)杂芳基]；(烷基)杂芳基；或(卤代烷基)杂芳基[例如，三卤代烷基杂芳基]。
如本文所用，“环状部分”和“环状基团”是指单环、双环和三环系统，包括环脂族、杂环脂族、芳基或杂芳基，它们中的每一个已在前面定义。
如本文所用，“烷氧基”是指烷基-O-基团，其中“烷基”先前已定义。
如本文所用，“卤代烷基”是指被1-3个卤素取代的烷基。例如，术语卤代烷基包括基团-CF3。
如本文所用，“羰基”是指-C(O)-。
如本文所用，“氧代”是指＝O。
短语“任选取代的”在本文中可与短语“取代的或未取代的”互换使用。如本文所述，本公开的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代，诸如上文一般说明的，或如本公开的特定类别、亚类和种类所示例的。如本文所述，变量R1、X、L、X1、X2、X3、X4、X5、X6以及本文所述的式(I)、(II)和(II-A)中包含的其他变量涵盖特定基团，诸如烷基和芳基。除非另有说明，否则其中包含的变量R1、X、L、X1、X2、X3、X4、X5、X6和其他变量的每个特定基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。特定基团的每个取代基还任选地被卤代、氰基、氧代、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、环脂族、杂环脂族、杂芳基、卤代烷基和烷基中的一至三个取代。例如，烷基可以被烷基硫烷基取代，并且烷基硫烷基可以任选地被卤代、氰基、氧代、烷氧基、羟基、氨基、硝基、芳基、卤代烷基和烷基中的一至三个取代。作为另外的实例，(环烷基)羰基氨基的环烷基部分可以任选地被卤代、氰基、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基和烷基中的一至三个取代。当两个烷氧基与同一原子或相邻原子键合时，两个烷氧基可以与它们所键合的原子一起形成环。
如本文所用，术语“取代的”，无论其前面是否有术语“任选地”，通常是指给定结构中的氢原子被特定取代基的基团取代。特定取代基在上文的定义中以及下文的化合物及其实施例的描述中进行了描述。除非另有说明，否则任选取代的基团可以在基团的每个可取代位置具有取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被多于一个选自特定基团的取代基取代时，取代基在每个位置可以相同或不同。环取代基(诸如杂环烷基)可以与另一个环(诸如环烷基)键合形成螺双环系统，例如，两个环共享一个共同原子。如本领域普通技术人员将认识到的，本公开所设想的取代基的组合是导致形成稳定或化学上可行的化合物的那些组合。
如本文所用，短语“稳定的或化学上可行的”是指化合物在受到允许其产生、检测以及优选地其回收、纯化和用于本文所公开的一个或多个目的的条件时基本上不会改变。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是当在40℃或更低的温度下、在不存在水分或其他化学反应条件下保持至少一周时基本上不会改变的化合物。
除非另有说明，否则本文描述的结构还意指包括结构的所有异构(例如，对映异构、非对映异构和几何(或构象))形式；例如，每个不对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象)混合物均在本公开的范围内。除非另有说明，否则本公开的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范围内。另外，除非另有说明，否则本文所描绘的结构还意指包括仅在存在一个或多个同位素富集原子方面有所不同的化合物。例如，具有本发明结构但氢被氘或氚取代或碳被富含13C或14C的碳取代的化合物在本发明的范围内。此类化合物可用作例如生物测定中的分析工具或探针，或用作治疗剂。
值得注意的是，叙述语“第一”、“第二”、“第三”等的使用用于区分单独的要素(例如，溶剂、反应步骤、过程、试剂等)，并且可以指或可以不指所描述的要素的相对顺序或相对年表。
如本文所用，术语“抗癌剂”是指用于治疗过度增殖性疾病诸如癌症(例如，在哺乳动物中，例如，在人中)的任何治疗剂(例如，化学治疗化合物和/或分子治疗化合物)、反义疗法、放射疗法或外科手术干预。
如本文所用，术语“前药”是指母体“药物”分子的药理学无活性衍生物，其需要在靶生理系统内进行生物转化(例如，自发转化或酶促转化)以释放或将前药转化(例如，酶促转化、生理转化、机械转化、电磁转化)为活性药物。设计前药以克服与稳定性、水溶性、毒性、缺乏特异性或生物利用度有限相关的问题。示例性前药包含活性药物分子本身和化学掩蔽基团(例如，可逆地抑制药物活性的基团)。一些前药是具有在代谢条件下可裂解的基团的化合物的变体或衍生物。前药可以使用本领域已知的方法容易地由母体化合物制备，诸如在以下文献中描述的方法：ATextbook of Drug Design and Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard(编辑),Gordon&Breach,1991,特别是第5章:“Design andApplications of Prodrugs”；Design of Prodru gs,H.Bundgaard(编辑),Elsevier,1985；Prodrugs:Topical and Oc ular Drug Delivery,K.B.Sloan(编辑),MarcelDekker,1998；Met hods in Enzymology,K.Widder等人(编辑),第42卷,Academic Pres s,1985,特别是第309-396页；Burger's Medicinal Chemistry and Dru g Discovery,第5版,M.Wolff(编辑),John Wiley&Sons,1995,特别是第1卷以及第172-178页和第949-982页；Pro-Drugs as Novel Delivery Systems,T.Higuchi和V.Stella(编辑),Am.Chem.Soc.,1975；以及Bioreversible Carriers in Drug Design,E.B.Roche(编辑),Elsevier,1987。
当示例性前药在生理条件下经历溶剂分解或经历酶促降解或其他生化转化(例如，磷酸化、氢化、脱氢、糖基化)时，它们在体内或体外变得具有药物活性。前药通常具有水溶性、组织相容性或在哺乳动物生物体内延迟释放的优势。(参见例如Bundgard,Design ofProdrugs,第7-9、21-24页,Elsevier,Amsterdam(1985)；以及Silverman,The OrganicChemistry of Drug Design and Drug Action,第352-401页,Academic Press,SanDiego,CA(1992))。常见的前药包括酸衍生物，诸如通过母体酸与合适的醇(例如，低级烷醇)反应制备的酯或通过母体醇与合适的羧酸(例如，氨基酸)反应制备的酯、通过母体酸化合物与胺反应制备的酰胺、反应形成酰化碱衍生物(例如，低级烷基酰胺)的碱性基团或含磷衍生物，例如，磷酸酯、膦酸酯和氨基磷酸酯，包括环状磷酸酯、膦酸酯和氨基磷酸酯(参见例如美国专利申请公开号US 2007/0249564A1；其以引用方式全文并入本文)。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在目标患者(例如，哺乳动物)中生理耐受的本公开化合物的任何盐(例如，通过与酸或碱反应获得)。本发明化合物的盐可以衍生自无机或有机酸和碱。酸的实例包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等。其他酸，诸如草酸，虽然其本身不是药学上可接受的，但可用于制备盐，这些盐可用作获得本公开化合物及其药学上可接受的酸加成盐的中间体。
碱的实例包括但不限于碱金属(例如，钠)氢氧化物、碱土金属(例如，镁)氢氧化物、氨和式NW4 +的化合物，其中W是C1-4烷基等。
盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、氟庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐(mesylate)、甲磺酸盐(methanesulfonate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其他实例包括与合适的阳离子诸如Na+、NH4 +和NW4 +(其中W是C1-4烷基)等复合的本公开化合物的阴离子。对于治疗用途，本公开的化合物的盐被认为是药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可用于例如制备或纯化药学上可接受的化合物。
如本文所用，术语“溶剂化物”是指本公开的化合物与一种或多种溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。这种物理缔合通常包括氢键。在某些情况下，溶剂化物能够分离，例如，当一种或多种溶剂化物分子被掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离溶剂化物两者。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇化物和甲醇化物。
如本文所用的短语“稳定的或化学上可行的”是指化合物在受到允许其产生、检测以及优选地其回收、纯化和用于本文所公开的一个或多个目的的条件时基本上不会改变。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学上可行的化合物是当在40℃或更低的温度下、在不存在水分或其他化学反应条件下保持至少一周时基本上不会改变的化合物。
本公开的治疗方法包括向有需要的患者施用安全有效量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“受试者”旨在包括人和非人动物。优选的受试者包括需要增强可有益于患者治疗和/或预防癌症和/或癌症转移的免疫反应的人类患者。这些方法特别适合于治疗患有可通过增强T细胞介导的免疫反应来治疗的病症的人类患者。在一个具体实施方案中，这些方法特别适合于体内治疗癌细胞。
“诸如”具有与“诸如但不限于”相同的含义。类似地，“包括(include)”具有与“包括(include)但不限于”相同的含义，而“包括(including)”具有与“包括(including)但不限于”相同的含义。
术语“肿瘤”、“癌症”和“瘤形成”可互换使用，并且是指生长、增殖或存活大于正常对应细胞的生长、增殖或存活的细胞或细胞群，例如细胞增殖性或分化性病症。通常，生长是不受控制的。术语“恶性肿瘤”是指对附近组织的侵袭。术语“转移”是指肿瘤、癌症或瘤形成扩散或播散到受试者体内的其他部位、位置或区域，其中这些部位、位置或区域不同于原发性肿瘤或癌症。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指足以导致病症的一种或多种症状的改善、或防止病症的进展、或引起病症的消退的治疗剂的量。例如，关于癌症的治疗，在一个实施方案中，治疗有效量是指降低肿瘤生长速率、减少肿瘤质量、减少转移数量、增加肿瘤进展时间或增加存活时间至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的治疗剂的量。
如本文所用，关于病况的“治疗”意指：(1)改善病况或病况的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)生物级联中导致或造成病况的一个或多个点或(b)病况的一种或多种生物学表现，(3)减轻与病况相关的一种或多种症状或影响，或(4)减缓病况或病况的一种或多种生物学表现的进展。
如本文所用，术语“增加敏感性”、“致敏(sensitize)”和“致敏(sensitizing)”是指通过施用第一药剂(例如，本公开的喹唑啉化合物)使动物或动物体内的细胞对第二药剂的生物学效应(例如，促进或延迟细胞功能的某一方面，包括但不限于细胞分裂、细胞生长、增殖、侵袭、血管生成、坏死或细胞凋亡)更敏感或更有反应。第一药剂对靶细胞的敏化作用可以通过在施用和不施用第一药剂的情况下施用第二药剂时观察到的预期生物学效应(例如，促进或延迟细胞功能的某一方面，包括但不限于细胞生长、增殖、侵袭、血管生成或细胞凋亡)的差异来测量。与不存在第一药剂时的反应相比，致敏细胞的反应可以增加至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约100％、至少约150％、至少约200％、至少约250％、至少约300％、至少约350％、至少约400％、至少约450％或至少约500％。
如本文所用，术语“细胞凋亡失调”是指细胞通过细胞凋亡经历细胞死亡的能力的任何畸变(例如，倾向)。细胞凋亡失调与多种病况相关或由多种病况诱导，该多种病况的非限制性实例包括自身免疫性病症(例如，系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或干燥综合征)、慢性炎性病况(例如，银屑病、哮喘或克罗恩氏病)、过度增殖性病症(例如，肿瘤、B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤)、病毒感染(例如，疱疹、乳头状瘤或HIV)和其他病况，诸如骨关节炎和动脉粥样硬化。
如本文所用，术语“过度增殖性疾病”是指患者体内局部增殖细胞群不受正常生长的通常限制控制的任何病况。过度增殖性病症的实例包括肿瘤、赘生物、淋巴瘤等。如果赘生物没有发生侵袭或转移，则称其为良性，如果发生这两种情况中的任一种，则称其为恶性。“转移性”细胞意味着该细胞可以侵入并破坏邻近的身体结构。增生是细胞增殖的一种形式，涉及组织或器官中细胞数量的增加，而结构或功能没有显著改变。化生是受控细胞生长的一种形式，其中一种类型的完全分化的细胞取代另一种类型的分化的细胞。
活化的淋巴细胞的病理性生长通常导致自身免疫性病症或慢性炎性病况。如本文所用，术语“自身免疫性病症”是指生物体产生识别生物体自身分子、细胞或组织的抗体或免疫细胞的任何病况。自身免疫性病症的非限制性实例包括自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、伯格氏病或IgA肾病、乳糜泻、慢性疲劳综合征、克罗恩氏病、皮肌炎、纤维肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、扁平苔藓、多发性硬化、重症肌无力、银屑病、风湿热、风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、1型糖尿病、溃疡性结肠炎、白癜风等。
如本文所用，术语“肿瘤疾病”是指良性(非癌性)或恶性(癌性)细胞的任何异常生长。
如本文所用，术语“正常细胞”是指未经历异常生长或分裂的细胞。正常细胞是非癌性的，并且不是任何过度增殖性疾病或病症的一部分。
如本文所用，术语“抗肿瘤剂”是指延缓靶向(例如，恶性)赘生物的增殖、生长或扩散的任何化合物。
如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”是指减少患者体内病理细胞(例如，过度增殖或肿瘤细胞)的发生。预防可以是完全的，例如，受试者体内完全不存在病理细胞。预防也可以是部分的，使得受试者体内病理细胞的出现率低于在没有本公开的情况下的出现率。本领域技术人员应当理解，“预防”不是绝对术语。在医学中，“预防”应理解为是指预防性施用药物以显著降低病况或其生物学表现的可能性或严重程度，或延迟这种病况或其生物学表现的发作。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的媒介物”涵盖任何标准药物载体、溶剂、表面活性剂或媒介物。合适的药学上可接受的媒介物包括水性媒介物和非水性媒介物。标准药物载体及其制剂在Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCo.,Easton,PA,第19版1995中进行了描述。
除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语的含义是所公开主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施方案
在一个方面，本公开包括式I的化合物
或其药学上可接受的盐，其中
X1选自N或C-R2；
Y选自N或CH；
R1选自C1-6烷基、卤代、CN、OR'和NR'2，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
R2选自氢、卤代、CN、C1-6烷基、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其中每个C1-6烷基、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
环A是任选地被一个或多个R3取代基取代的苯基、6元杂环基或6元杂芳基，或者环A是选自式W1-W4的双环部分：
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代；
每个X是CH、C-R3或N；
每个X'是N或O；
环E是苯基、六元杂芳基、或5或6元环基或杂环基；
每个R3是R'或选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、N(S(O2)R')2、C(O)H、C(O)OH、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2和S(O2)R'的取代基，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代；或者
单个碳原子上的两个R3取代基能够组合形成3-6元螺环环烷基或杂环烷基；
环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂环基或稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是苯基、6元杂环基或6元杂芳基；
每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'和C(O)N(R')2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代；
每个R'独立地选自R”、OH、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基，它们中的每一个任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
每个R”独立地选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OC1-6烷基、NH2、NHC1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NH2、C(O)NHC1-6烷基和C(O)N(C1-6烷基)2，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个选自卤代、氧代、烷氧基、CN、NH2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基和C(O)NHC1-6烷基的取代基取代；并且
n是选自0、1、2、3或4的整数。
在该方面的一个实施方案中，X1是N。
在另一个实施方案中，X1是C-R2。
在一个实施方案中，R2选自氢、卤代、CN和C1-6烷基，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代。
在进一步的实施方案中，R2是CN。
在一个实施方案中，R1选自C1-6烷基、卤代、CN、OR'和NR'2，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代。
在进一步的实施方案中，R1选自甲基、CN或卤代。
在一个实施方案中，n是0或1。
在进一步的实施方案中，n是0。
在一个实施方案中，每个R3是R'或选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、N(S(O2)R')2、C(O)H、C(O)OH、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2和S(O2)R'的取代基，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
在另一个实施方案中，每个R3选自氧代、OH、卤代、CN、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、C(O)OH、C(O)H、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2、S(O2)R'、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基和5-6元杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
在另一个实施方案中，每个R3选自卤代、氧代、氨基、OH、CN、C1-6烷基、C(O)H、OC1-6烷基、烷氧羰基、C1-6卤代烷基、羧基、C1-6卤代烷氧基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、羟烷基、羟烷基羰基、烷基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、环烷基羰基、氰基氨基羰基、羟基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环羰基、氰基氨基羰基、羟基氨基羰基、烷基杂环基、杂环基、烷基杂环基羰基、氨基氮杂环丁烷基、氨基氧杂环丁烷基、羟基环丙基、羟基杂环基、氨基杂环基、氨基杂环基羰基、吡咯烷基、环丙基氨基、N-甲基三唑基、咪唑基、吡唑基、氨基烷氧基和三唑基。
在进一步的实施方案中，每个R3选自卤代、氧代、NH2、CF3、CH3、OCH3、O(CH2)3N(CH3)2、OCF3、OCHF2、OH、CN、NHS(O)2CH3、S(O)2CH3、C(O)H、C(O)OH、C(CH3)2OH、C(O)CH3、C(O)CF3、C(O)CH2CH3、CH(OH)CH2CH3、CH2OH、C(O)NH2、C(O)NH(CH3)、C(O)OH、C(O)NH(CH2CH3)、C(O)NH(CH(CH3)2)、C(O)NH(C(CH3)3)、C(O)N(CH3)2、C(O)NH(CN)、C(O)NOH(CH3)、C(O)OCH3、C(O)NHCN、C(O)N(CH3)OH、4-甲基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基-羰基、3-二甲基氨基-氮杂环丁烷-1-基、3-二甲基氨基-氮杂环丁烷-1-基-羰基、3-氨基氧杂环丁烷-3-基、3-羟基氧杂环丁烷-3-基、1-羟基环丙基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-羰基、环丙基氨基、环丙基氨基羰基、4-甲基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-1-基、咪唑-1-基、1-甲基-1,2,3-三唑-4-基和1,2,4-三唑-3-基。
在一个实施方案中，环A是任选地被一个或多个R3取代基取代的苯基、6元杂环基或6元杂芳基。
在另一个实施方案中，环A是选自式W1、W2、W3和W4的双环部分：
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代；
在进一步的实施方案中，环A选自
在一个实施方案中，每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OC1-6烷基、NH2、NHC1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NH2、C(O)NHC1-6烷基和C(O)N(C1-6烷基)2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
在一个实施方案中，每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OC1-6烷基和NH2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
在进一步的实施方案中，每个R4独立地选自卤代和C1-6烷基。
在一个实施方案中，环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是稠合苯环或稠合吡啶环。
在一个实施方案中，环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是稠合苯环。
在另一个实施方案中，环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基，并且环B'是稠合苯环。
在进一步的实施方案中，环B和环B'一起形成选自
的双环部分。
在另一个实施方案中，X1选自N或C-R2，其中R2选自卤代、CN或C1-6烷基。
在进一步的实施方案中，X1选自N或C-CN。
在另一个实施方案中，Y是CH。
在一个实施方案中，化合物是式Ia的化合物：
其中，
每个X3独立地是N或CH，其中CH能够独立地被R3取代；并且
m和p各自独立地是0、1、2或3。
在一个实施方案中，至少两个X3取代基是CH。
在另一个实施方案中，至少一个X3取代基是N。
在一个实施方案中，X1是N。
在一个实施方案中，化合物是式Ib的化合物：
其中，
每个X3独立地是N或CH，其中CH能够独立地被R3取代；并且
m和p各自独立地是0、1、2或3。
在一个实施方案中，至少一个X3取代基是N。
在另一个实施方案中，两个X3取代基均为N。
在一个实施方案中，每个R3独立地选自卤代、氧代、NH2、CF3、CH3、OCH3、OH、CN和CH2OH。
在一个实施方案中，m为0或1。
在另一个实施方案中，每个R4独立地选自卤代和C1-6烷基。
在一个实施方案中，m是0、1或2。
在另一个实施方案中，环A选自
在另一个方面，本发明包括式I的化合物，其是式Ic的化合物：
其中，
X1是N或C-CN；
R4'选自氢或卤素；
R4”是卤素；
R5选自氢、NH2、卤代、C1-4烷基和C1-4烷氧基；并且
X3是N或CR6，其中R6选自羟基、C(O)OR'、C(O)N(R')2、(C1-6烷基)SO2和(C1-6烷基)SO2N(R')。
在该方面的一个实施方案中，R4'选自氢或氟。
在另一个实施方案中，R4”是氯。
在另一个实施方案中，R5选自氢、NH2、氯和甲氧基。
在另一个实施方案中，R6选自羟基、C(O)N(CH3)2和CH3SO2N(R')。
在一个实施方案中，化合物是式IIa的化合物：
其中，
环A是选自式W1、W2、W3和W4的双环部分；
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代；
在一个实施方案中，环A选自、
在一些实施方案中，化合物选自：
在一个方面，本公开包括选自以下的化合物：
在另一个方面，本公开包括药物组合物，该药物组合物包含本文所述的化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂。
在另一个方面，本公开包括一种治疗、改善或预防患者的EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况的方法，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的化合物或其盐或药物组合物。
在一个实施方案中，EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况是过度增殖性疾病或病况。
在进一步的实施方案中，所述疾病或病况是癌症。
在另一个实施方案中，所述癌症是胶质母细胞瘤或多形性胶质母细胞瘤。
在一个实施方案中，所述患者是人类患者。
在另一个实施方案中，所述化合物在体内穿过血脑屏障(BBB)。
在一个实施方案中，该方法还包括向所述患者施用一种或多种抗癌剂。
在进一步的实施方案中，所述抗癌剂是化疗剂。
在另一个进一步的实施方案中，所述抗癌剂是放射疗法。
在另一个方面，本公开包括试剂盒，该试剂盒包含本文所述的化合物或其盐或药物组合物，以及用于向患有EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况的患者施用所述化合物的说明书。
在进一步的实施方案中，所述病况是癌症。
在又一个进一步的实施方案中，所述癌症是胶质母细胞瘤或多形性胶质母细胞瘤。
在一个实施方案中，试剂盒还包含一种或多种抗癌剂。
在另一个实施方案中，所述化合物、其盐或组合物与一种或多种抗癌剂一起施用。
在一个实施方案中，本发明的化合物在体内代谢相对稳定。在一个实施方案中，本发明的化合物具有长的体内半衰期。在另一个实施方案中，化合物具有至少约5分钟的体内半衰期。在另一个实施方案中，化合物具有至少约10分钟的体内半衰期。在另一个实施方案中，化合物具有至少约15分钟的体内半衰期。在另一个实施方案中，化合物具有至少约25分钟的体内半衰期。在另一个实施方案中，化合物具有至少约30分钟的体内半衰期。
在一个实施方案中，本发明的化合物在小鼠肝微粒体(MLM)存在下相对稳定。在一个实施方案中，本发明的化合物在MLM存在下具有长的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在MLM存在下具有至少约5分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在MLM存在下具有至少约10分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在MLM存在下具有至少约15分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在MLM存在下具有至少约25分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在MLM存在下具有至少约30分钟的半衰期。
在一个实施方案中，本发明的化合物在人肝微粒体(HLM)存在下相对稳定。在一个实施方案中，本发明的化合物在HLM存在下具有长的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在HLM存在下具有至少约5分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在HLM存在下具有至少约10分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在HLM存在下具有至少约15分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在HLM存在下具有至少约25分钟的半衰期。在另一个实施方案中，化合物在HLM存在下具有至少约30分钟的半衰期。
药物组合物
本文所述的化合物可以配制成还包含药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的药物组合物。在一个实施方案中，本公开提供了一种包含上述本公开的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的药物组合物。在一个实施方案中，本公开是一种包含有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物的药物组合物。药学上可接受的载体包括例如根据预期施用形式适当选择并符合常规药学实践的药物稀释剂、赋形剂或载体。
根据另一个实施方案，本公开提供了一种包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的组合物。本公开的药物组合物包含治疗有效量的式I的化合物，其中“治疗有效量”是(a)有效可测量地调节生物样品或患者中的EGFR和/或PI3K，或(b)有效治疗和/或改善由EGFR和/或PI3K介导的疾病或病症的量。
如本文所用，术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，并且最优选人。
还应当理解，本公开的某些化合物可以以游离形式存在以用于治疗，或者在适当时，以其药学上可接受的衍生物(例如，盐)形式存在。根据本公开，药学上可接受的衍生物包括但不限于药学上可接受的前药、盐、酯、此类酯的盐或任何其他加合物或衍生物，其在施用于有需要的患者后能够直接或间接地提供如本文另外描述的化合物或其代谢物或残余物。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等的那些盐。
药学上可接受的盐在本领域是众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1-19中详细描述了药学上可接受的盐，所述文献以引用的方式并入本文。本公开的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例包括与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或通过使用本领域中使用的其他方法诸如离子交换形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐。本公开还设想了对本文公开的化合物的任何碱性含氮基团进行季铵化。水溶性或油溶性或分散性产物可以通过这种季铵化获得。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。适当时，其他药学上可接受的盐包括使用抗衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
药学上可接受的载体可以含有不会过度抑制化合物的生物活性的惰性成分。药学上可接受的载体应当是生物相容的，例如无毒的、无炎性的、非免疫原性的或在施用于受试者时没有其他不期望的反应或副作用。可以采用标准药物制剂技术。
如本文所用，药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括任何和所有溶剂、稀释剂或其他液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，如适合于所需的特定剂型。Remington's Pharmaceutical Sciences,第十六版,E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除非任何常规载体介质与本文所述的化合物不相容，诸如通过产生任何不期望的生物学效应或以有害方式与药学上可接受的组合物的任何其他组分相互作用，否则这种常规载体介质的使用被认为在本发明的范围内。如本文所用，短语“副作用”涵盖疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不需要的和不利的作用。副作用总是不需要的，但不需要的作用不一定是不利的。来自疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不良反应可能是有害的、不舒服的或有风险的。副作用包括但不限于发烧、发冷、嗜睡、胃肠毒性(包括胃和肠溃疡和糜烂)、恶心、呕吐、神经毒性、肾毒性(nephrotoxicities)、肾毒性(renal toxicities)(包括乳头坏死和慢性间质性肾炎等病况)、肝毒性(包括血清肝酶水平升高)、骨髓毒性(包括白细胞减少、骨髓抑制、血小板减少和贫血)、口干、金属味、妊娠延长、虚弱、嗜睡、疼痛(包括肌肉疼痛、骨痛和头痛)、脱发、乏力、头晕、锥体外系症状、静坐不能、心血管紊乱和性功能障碍。
可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(诸如人血清白蛋白)、缓冲物质(诸如twin 80、磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羊毛脂、糖诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡；油类诸如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和大豆油；二醇类；诸如丙二醇或聚乙二醇；酯类诸如油酸乙酯、月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂诸如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，以及其他无毒的相容润滑剂诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。根据配方师的判断，防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
本公开的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、颊部、阴道或经由植入式储库施用。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、眼内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物通过口服、腹膜内或静脉内施用。本公开的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制备物也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常作为溶剂或悬浮介质使用。
为达成此目的，任何温和的不挥发性油均可被使用，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，天然药学上可接受的油(诸如橄榄油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙基化形式)也是如此。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳剂和悬浮液)的类似分散剂。其他常用的表面活性剂(诸如吐温、司盘)和通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他乳化剂或生物利用度增强剂也可用于配制目的。
本公开的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，这些口服可接受的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还会添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服使用水性混悬剂时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
替代性地，本公开的药学上可接受的组合物可以以栓剂的形式施用，用于直肠或阴道施用。这些可以通过将药剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，该无刺激性赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠或阴道腔中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡，它们在环境温度下为固体但在体温下为液体，因此会在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。
本公开的药学上可接受的组合物也可以局部施用，特别是当治疗的靶标包括通过局部应用容易到达的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。对于这些区域或器官的每一者而言，容易制备合适的局部制剂。
低位肠道的局部应用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠制剂实现。也可以使用局部透皮贴剂。
对于局部应用，可以将药学上可接受的组合物配制成含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分的合适的软膏。用于局部施用本公开的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。替代性地，可以将药学上可接受的组合物配制成含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗剂或乳膏。合适的载体包括但不限于矿物油、单硬脂酸脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物配制成例如在等渗、pH调节的无菌盐水或其他水溶液中的微粉化悬浮液，或优选地，配制成在等渗、pH调节的无菌盐水或其他水溶液中的溶液，其具有或不具有防腐剂，诸如苯扎氯铵。替代性地，对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物配制成软膏，诸如凡士林。本公开的药学上可接受的组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入施用。此类组合物根据药物制剂领域熟知的技术制备，并且可以使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂制备为盐水溶液。
用于经口施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆以及酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯以及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包含佐剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可注射制备物，例如无菌可注射水性或油性悬浮液，可以根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制备物也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受媒介物和溶剂之中有水、林格氏溶液、U.S.P.以及等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常作为溶剂或悬浮介质使用。为了这个目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸可用于制备注射剂。
可注射制剂可以例如通过细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，这些无菌固体组合物可以在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。
为了延长本公开的化合物的作用，通常需要减缓化合物从皮下或肌内注射的吸收。这可通过使用水溶性不良的结晶或非晶物质的液体混悬液来达成。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，而溶解速率又可取决于晶体大小和晶体形式。替代性地，通过将化合物溶解或悬浮在油性媒介物中来实现肠胃外施用的化合物形式的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微胶囊基质来制备可注射储库形式。根据化合物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物释放的速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库可注射制剂。
口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)湿润剂，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，诸如石蜡；f)吸收加速剂，诸如季铵化合物；g)润湿剂，诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；以及i)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠以及它们的混合物。对于胶囊、片剂和丸剂，剂型还可以包含缓冲剂。
类似类型的固体组合物也可以用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用赋形剂诸如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇等。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳诸如肠溶包衣和药物配制领域熟知的其他包衣来制备。固体剂型可任选地含有遮光剂。这些固体剂型也可以是这样的组合物，使得它们仅或优选地在肠道的某一部分中释放活性成分，任选地以延迟的方式释放。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物也可以用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用赋形剂诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等。
活性化合物也可以呈与一种或多种如上所述的赋形剂一起的微囊化形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可制备成具有包衣和壳，诸如肠溶衣、控释包衣和药物制剂领域中熟知的其他包衣。在此类固体剂型中，活性化合物可以混合有至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉。按照常规做法，此类剂型还可以包含除惰性稀释剂之外的其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。对于胶囊、片剂和丸剂，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以任选地含有遮光剂，并且也可以是这样的组合物，使得它们仅或优选地在肠道的某一部分中释放活性成分，任选地以延迟的方式释放。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或透皮施用本公开的化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何所需的防腐剂或缓冲剂混合。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也被考虑在本公开的范围内。另外，本公开考虑了透皮贴剂的使用，其具有提供化合物向身体的受控递送的额外优点。此类剂型可以通过将化合物溶解或分配在适当的介质中来制备。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
为了易于施用和剂量均匀，本公开的化合物优选配制成剂量单位形式。如本文所用，短语“剂量单位形式”是指适合于待治疗患者的物理上离散的药剂单位。然而，应当理解，本公开的化合物和组合物的每日总用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。对于任何特定患者或生物体的特定有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；所采用的特定化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物，以及医学领域熟知的类似因素。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本公开化合物的量将根据所治疗的宿主、特定的施用模式和其他因素而变化。优选地，组合物应被配制为使得可以向接受这些组合物的患者施用0.01-100mg/kg体重/天的剂量的抑制剂。
根据待治疗或预防的特定病况或疾病，本公开的组合物中也可以存在通常施用以治疗或预防该病况的另外的治疗剂。如本文所用，通常施用以治疗或预防特定疾病或病况的另外的治疗剂被称为“适合于所治疗的疾病或病况”。
本公开的一些实施方案提供了用于施用有效量的本公开的化合物和至少一种另外的治疗剂(包括但不限于化疗抗肿瘤剂、细胞凋亡调节剂、抗微生物剂、抗病毒剂、抗真菌剂和抗炎剂)和/或治疗技术(例如，手术干预和/或放射疗法)的方法。在一个具体实施方案中，另外的治疗剂是抗癌剂。
多种合适的抗癌剂被考虑用于本公开的方法。实际上，本公开考虑但不限于施用多种抗癌剂，诸如：诱导细胞凋亡的药剂；多核苷酸(例如，反义、核酶、siRNA)；多肽(例如，酶和抗体)；生物模拟物；生物碱；烷基化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢药；激素；铂化合物；单克隆或多克隆抗体(例如，与抗癌药物、毒素、防御素缀合的抗体)、毒素；放射性核素；生物反应调节剂(例如，干扰素(例如，IFN-α)和白介素(例如，IL-2))；过继免疫治疗剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的药剂(例如，全反式视黄酸)；基因治疗试剂(例如，反义治疗试剂和核苷酸)；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂；蛋白体抑制剂：NF-КB调节剂；抗CDK化合物；HDAC抑制剂；等等。适合与所公开的化合物共同施用的化疗化合物和抗癌疗法的许多其他实例是本领域技术人员已知的。
在某些实施方案中，抗癌剂包括诱导或刺激细胞凋亡的药剂。诱导细胞凋亡的药剂包括但不限于放射线(例如，X射线、γ射线、UV)；肿瘤坏死因子(TNF)相关因子(例如，TNF家族受体蛋白、TNF家族配体、TRAIL、针对TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗体)；激酶抑制剂(例如，表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂、血管生长因子受体(VGFR)激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂、血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)激酶抑制剂和Bcr-Abl激酶抑制剂(诸如GLEEVEC))；反义分子；抗体(例如，HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素(例如，雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素(例如，氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质类固醇)；环氧合酶2(COX-2)抑制剂(例如，塞来昔布、美洛昔康、NS-398和非甾体抗炎药(NSAID))；抗炎药(例如，保泰松、DECADRON、DELTASONE、地塞米松、地塞米松浓缩剂(dexamethasone intensol)、DEXONE、HEXADROL、羟氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羟基保泰松、PEDIAPRED、苯基丁氮酮、PLAQUENIL、泼尼松龙、泼尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌症化疗药物(例如，伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟达拉滨(FLUDARA)、达卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、顺铂、卡铂、奥沙利铂、5-FU、多柔比星、吉西他滨、硼替佐米、吉非替尼、贝伐珠单抗、TAXOTERE或TAXOL)；细胞信号分子；神经酰胺和细胞因子；星形孢菌素等。
在其他实施方案中，本公开的组合物和方法提供了本公开的化合物和至少一种选自烷化剂、抗代谢物和天然产物(例如，草药和其他植物和/或动物衍生的化合物)的抗过度增殖剂或抗肿瘤剂。
适用于本发明组合物和方法的烷化剂包括但不限于：1)氮芥(例如，二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑(L-肌溶素)和苯丁酸氮芥)；2)乙烯亚胺和甲基三聚氰胺(例如，六甲基三聚氰胺和噻替派)；3)烷基磺酸盐(例如，白消安)；4)亚硝基脲(例如，卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(甲基-CCNU)和链脲佐菌素(链脲佐菌素))；和5)三氮烯(例如，达卡巴嗪(DTIC；二甲基三氮烯咪唑甲酰胺)。
在一些实施方案中，适用于本发明组合物和方法的抗代谢物包括但不限于：1)叶酸类似物(例如，甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶类似物(例如，氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脱氧尿苷；FudR)和阿糖胞苷(胞嘧啶阿糖胞苷))；和3)嘌呤类似物(例如，巯基嘌呤(6-巯基嘌呤；6-MP)、硫鸟嘌呤(6-硫鸟嘌呤；TG)和喷司他丁(2'-脱氧助间型霉素))。
在更进一步的实施方案中，适用于本公开的组合物和方法的化疗剂包括但不限于：1)长春花生物碱(例如，长春花碱(VLB)、长春新碱)；2)表鬼臼毒素(例如，依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如，更生霉素(放线菌素D)、柔红霉素(正定霉素；红比霉素)、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素(丝裂霉素C))；4)酶(例如，L-天冬酰胺酶)；5)生物反应调节剂(例如，干扰素-α)；6)铂配位复合物(例如，顺铂(顺式DDP)和卡铂)；7)蒽二酮类(例如，米托蒽醌)；8)取代脲类(例如，羟基脲)；9)甲基肼衍生物(例如，丙卡巴肼(N-甲基肼；MIH))；10)肾上腺皮质抑制剂(例如，米托坦(o,p'-DDD)和氨鲁米特)；11)肾上腺皮质类固醇(例如，泼尼松)；12)孕激素(例如，己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如，己烯雌酚和炔雌醇)；14)抗雌激素(例如，他莫昔芬)；15)雄激素(例如，丙酸睾酮和氟甲睾酮)；16)抗雄激素(例如，氟他胺)：和17)促性腺激素释放激素类似物(例如，亮丙瑞林)。
在癌症治疗环境中常规使用的任何溶瘤剂均可用于本公开的组合物和方法中。例如，美国食品和药物管理局保存着一份获准在美国使用的溶瘤剂的处方集。美国食品和药物管理局的国际对应机构也保存着类似的处方集。本领域技术人员将理解，所有美国批准的化疗药物所需的“产品标签”描述了示例性药剂的批准适应症、剂量信息、毒性数据等。
例如，可以将化疗剂或其他抗增殖剂与本公开的化合物组合以治疗增殖性疾病和癌症。已知化疗剂的实例包括但不限于PI3K抑制剂(例如，艾代拉里斯和可泮利塞(copanlisib))、BCL-2抑制剂(例如，维奈托克)、BTK抑制剂(例如，依鲁替尼和阿卡鲁替尼)、依托泊苷、CD20抗体(例如，利妥昔单抗、奥瑞利珠单抗、奥妥珠单抗、奥法妥木单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗和乌妥昔单抗)、阿仑单抗、苯达莫司汀、克拉屈滨、多柔比星、苯丁酸氮芥、泼尼松、米多斯替尼、来那度胺、泊马度胺、检查点抑制剂(例如，伊匹单抗、纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、阿替利珠单抗、阿维单抗、德瓦鲁单抗)、工程化细胞疗法(例如，CAR-T疗法-)、GleevecTM、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓扑替康、紫杉醇、干扰素和铂衍生物。
并且，在一些情况下，在治疗过程期间施用放射疗法，其中向有需要的患者施用本公开的化合物(或其药学上可接受的盐)。
抗癌剂还包括已被鉴定为具有抗癌活性的化合物。实例包括但不限于3-AP、12-O-十四烷酰基佛波醇-13-乙酸酯、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、ADI-PEG 20、AE-941、AG-013736、AGRO100、阿拉诺辛、AMG 706、抗体G250、抗肿瘤酮、AP23573、阿帕齐醌、APC8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦、阿扎胞苷、BB-10901、BCX-1777、贝伐单抗、BG00001、比卡鲁胺、BMS247550、硼替佐米、苔藓抑素-1、布舍瑞林、骨化三醇、CCI-779、CDB-2914、头孢克肟、西妥昔单抗、CG0070、西仑吉肽、氯法拉滨、考布他汀A4磷酸盐、CP-675,206、CP-724,714、CpG 7909、姜黄素、地西他滨、DENSPM、多塞尔钙化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙丙昔罗、依氟鸟氨酸、EKB-569、恩扎妥林、厄洛替尼、依昔舒林、芬维A胺、夫拉平度、氟达拉滨、氟他胺、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔单抗、吉非替尼、染料木黄酮、葡磷酰胺、GTI-2040、组氨瑞林、HKI-272、高三尖杉酯碱、HSPPC-96、hu14.18-白细胞介素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫特、英夫利昔单抗、白细胞介素-12、IPI-504、伊洛福芬、伊沙匹隆、拉帕替尼、来那度胺、来他替尼、亮丙瑞林、LMB-9免疫毒素、洛那法尼、鲁尼利昔单抗、马磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、单克隆抗体3F8、单克隆抗体J591、莫沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼鲁米特、硝基喜树碱、诺拉曲塞二盐酸盐、他莫昔芬、NS-9、O6-苄基鸟嘌呤、奥立默森钠、ONYX-015、奥戈伏单抗、OSI-774、帕尼单抗、卡铂、PD-0325901、培美曲塞、PHY906、吡格列酮、吡非尼酮、匹克生琼、PS-341、PSC 833、PXD101、吡唑并吖啶、R115777、RAD001、抗肿瘤核糖核酸酶、瑞贝卡霉素类似物、rhuAngiostatin蛋白、rhuMab2C4、罗格列酮、鲁比替康、S-1、S-8184、沙铂、SB-、15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR31747A、ST1571、SU011248、辛二酰苯胺异羟肟酸、苏拉明、他拉博司他、他仑帕奈、塔立奇达、替西罗莫司、TGFa-PE38免疫毒素、沙利度胺、胸腺法新、替匹法尼、替拉扎明、TLK286、曲贝替丁、葡糖醛酸三甲曲沙酯、TroVax、UCN-1、丙戊酸、长春氟宁、VNP40101M、伏洛昔单抗、伏立诺他、VX-680、ZD1839、ZD6474、齐留通和唑喹达三盐酸盐。
对于抗癌剂和其他治疗剂的更详细描述，本领域技术人员可以参考许多指导手册，包括但不限于Physician's Desk Reference和Good man和Gilman的“PharmaceuticalBasis of Therapeutics”第十版,编辑Hardman等人,2002。
存在于本公开的组合物中的另外的治疗剂的量将不超过包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中通常施用的量。优选地，本发明公开的组合物中另外的治疗剂的量将在包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的量的约50％至100％的范围内。
治疗方法
本公开的化合物是磷酸肌醇3'OH激酶家族(PIK3)(例如，PIK3Cα、PIK3δ、PIK3β、PIK3Cγ、PI3Kα)的蛋白质的活性或功能的调节剂(例如，抑制剂)和表皮生长因子EGFR家族(例如，ERBB受体酪氨酸激酶家族(例如，ERBB1、ERBB2、ERBB4、ERBB1))的蛋白质的活性或功能的调节剂(例如，抑制剂)。
PI3K受到磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)的负向调控(参见例如Hamada K等人,2005Genes Dev 19(17):2054–65)。大量研究表明，PIK3CA突变/PTEN缺失和EGFR靶向抗性之间存在联系，从而导致总生存不佳(参见例如Atreya CE,Sangale Z,Xu N等人CancerMed.2013；2:496-506；Sawai H等人,BMC Gastroenterol.2008；8:56；Bethune G等人,JThorac Dis.2010；2:48-51；Spano JP等人,Ann Oncol.2005；16:189-194；Heimberger AB等人,J Transl Med.2005；3:38)。在开发本公开的实施方案的过程中合成的喹唑啉化合物和喹啉化合物是基于一个中心假设而设计的，即EGFR和PIK3CA的双重靶向对患有EGFR阳性且PIK3CA突变或PTEN表达无效的结肠直肠癌患者有效(参见例如Psyrri A等人,Am SocClin Oncol Educ Book.2013:246-255；Lui VW等人,Cancer Discov.2013；3:761-769；JinG等人,Lung Cancer.2010；69:279-283；Buck E等人,Mol Cancer Ther.2006；5:2676-2684；Fan QW等人,Cancer Res.2007；67:7960-7965；Gadgeel SM等人,Clin LungCancer.2013；14:322-332)。
因此，本公开涉及一类具有喹唑啉结构或喹啉结构的新型小分子，其充当EGFR蛋白和PI3K蛋白的双重抑制剂，以及它们作为用于治疗以异常EGFR和PI3K表达为特征的病况(例如，癌症和其他疾病(例如，自身免疫病症、炎症性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺炎、多器官衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、精子能动性、移植排斥、移植物排斥、肺损伤等))的治疗剂的用途。实际上，通过靶向EGFR和PI3K两者，本公开的化合物可用于治疗患有EGFR阳性结肠直肠癌的受试者，这些受试者携带PI3Kα激活突变或PTEN无效。
因此，本公开考虑了将患有以异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)为特征的病况(例如，癌症(例如，和/或癌症相关病症))的患者(例如，人)暴露于治疗有效量的抑制EGFR和PI3K两者的活性的具有喹唑啉结构(例如，具有喹唑啉结构的小分子)或喹啉结构(例如，具有喹啉结构的小分子)的药物将抑制以异常EGFR和PI3K蛋白表达为特征的细胞(例如，具有异常EGFR和PI3K蛋白表达的结肠直肠癌细胞)的生长和/或使此类细胞作为群体对另外治疗药物(例如，癌症治疗药物或放射疗法)的细胞死亡诱导活性更敏感。本公开考虑了EGFR和PI3K两者的抑制剂满足治疗以异常EGFR和PI3K活性为特征的多种病况(例如，癌症)的未满足的需求，无论是当作为单一疗法施用以诱导此类细胞(例如，癌细胞)中的细胞生长抑制、细胞凋亡和/或细胞周期停滞时，还是当与另外的药剂(诸如诱导其他细胞死亡或破坏细胞周期的治疗药物(例如，癌症治疗药物或放射疗法))(组合疗法)按时间关系施用时，以便与仅单独用治疗药物或放射疗法治疗的患者中的相应比例的细胞相比，使更大比例的细胞(例如，癌细胞)或支持细胞易于执行细胞凋亡程序。
在本公开的某些实施方案中，其中所治疗的病况是以异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)为特征的癌症(例如，结肠直肠癌)，与单独用化合物或抗癌药物/放射治疗的患者相比，用治疗有效量的本公开的化合物和一个疗程的抗癌剂对患者进行组合治疗在此类患者中产生了更大的肿瘤反应和临床益处。由于所有批准的抗癌药物和放射治疗的剂量都是已知的，因此本公开考虑了它们与本发明化合物的各种组合。
如上所述，申请人已经发现某些喹唑啉化合物和喹啉化合物充当EGFR和PI3K的抑制剂，并且用作用于治疗癌症和其他疾病的治疗剂。因此，本公开涉及用于抑制EGFR和PI3K活性(例如，从而促进细胞凋亡)并增加细胞对细胞凋亡和/或细胞周期停滞的诱导剂的敏感性的喹唑啉化合物和喹啉化合物。本公开的某些喹唑啉化合物和喹啉化合物可以作为立体异构体(包括光学异构体)存在。本公开包括所有立体异构体，作为纯的单个立体异构体制备物和每种立体异构体的富集制备物，以及此类立体异构体的外消旋混合物以及可以根据本领域技术人员熟知的方法分离的单个非对映异构体和对映异构体。
本公开还提供了化合物在以异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)为特征的细胞中诱导细胞周期停滞和/或细胞凋亡的用途。本公开还涉及化合物用于使细胞对另外的药剂(诸如细胞凋亡和/或细胞周期停滞的诱导剂)敏感，以及通过在用化疗剂治疗之前诱导细胞周期停滞来对正常细胞进行化学保护的用途。
本公开的化合物可用于治疗、改善或预防病症，诸如对诱导凋亡细胞死亡有反应的那些病症，例如以细胞凋亡失调为特征的病症，包括过度增殖性疾病，诸如以细胞异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)为特征的癌症(例如，结肠直肠癌)。在某些实施方案中，化合物可用于治疗、改善或预防以对癌症疗法的抗性为特征的此类癌症(例如，结肠直肠癌)(例如，化学抗性、放射抗性、激素抗性等的那些癌细胞)。在某些实施方案中，癌症是结肠直肠癌、头颈癌、多形性胶质母细胞瘤和/或非小细胞肺癌(NSCLC)。在其他实施方案中，化合物可用于治疗以EGFR和PI3K蛋白的异常表达为特征的其他疾病(例如，自身免疫病症、炎性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺炎、多器官衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、精子能动性、移植排斥、移植物排斥、肺损伤等)。
本发明还提供了包含本公开的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本公开还提供了包含本公开的化合物和用于向患者施用该化合物的说明书的试剂盒。试剂盒可任选地含有其他治疗剂，例如抗癌剂或细胞凋亡调节剂。
此外，本公开提供了通过将细胞暴露于本公开的喹唑啉或喹啉化合物中的一种或多种来同时在细胞中抑制EGFR蛋白活性和PI3K蛋白活性的方法。
尽管有令人信服的证据表明PI3K/AKT途径激活会导致对EGFR靶向剂的抗性，但直到最近研究人员才寻求在临床前和临床上将EGFR靶向剂与PI3K/AKT/MTOR途径抑制剂组合。例如，Buck等人证明mTOR抑制剂雷帕霉素与EGFR抑制剂厄洛替尼在对单独厄洛替尼治疗有抗性的几种细胞系中协同作用(例如，Ratushny V等人,Cell Signal.2009；21:1255-1268)。然而，由于雷帕霉素诱导AKT的磷酸化导致途径重新激活，因此没有实现这种协同组合的全部潜力(例如，Ratushny V等人,Cell Signal.2009；21:1255-1268)。其他人已经探索了几种细胞系和癌症组织型中EGFR和PI3K/AKT途径的双重抑制，为这种组合治疗策略提供了进一步的支持(参见例如Eichhorn PJ等人,Cancer Res.2008；68:9221-9230)。本公开的化合物克服了此类限制并代表EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的双重效力抑制剂。具体地，利用从已知的PI3K和EGFR抑制剂收集的x射线晶体结构和结构-活性关系，此类实验分别导致鉴定出促进对PI3K的高抑制活性的PI3K抑制剂的“活性核心”和促进对EGFR的高抑制活性的EGFR抑制剂的“活性核心”(参见实施例I)。因此，本公开的喹唑啉和喹啉化合物被合成以靶向PI3K的“活性核心”和EGFR的“活性核心”，从而使此类化合物具有针对EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的“双重效力”。
因此，本公开涉及充当EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的抑制剂的化合物。通过抑制EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)，这些化合物使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期停滞的诱导剂敏感，并且在一些情况下，它们本身诱导细胞凋亡和/或细胞周期停滞。因此，本公开涉及使细胞对细胞凋亡和/或细胞周期阻滞的诱导剂敏感的方法以及在细胞中诱导细胞凋亡和/或细胞周期阻滞的方法，这些方法包括使细胞与单独的本公开化合物或与本公开化合物与另外的药剂(例如，细胞凋亡诱导剂或细胞周期破坏剂)的组合接触。
本公开还涉及治疗、改善或预防患者的以具有异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的细胞为特征的病况(诸如对诱导细胞凋亡有反应的那些病况)的方法，这些方法包括向患者施用本公开的化合物和另外的药剂(例如，细胞凋亡诱导剂)。此类病症包括以细胞凋亡失调为特征的病症和以具有异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的细胞增殖为特征的病症(例如，结肠直肠癌)。实际上，通过靶向EGFR和PI3K两者，本公开的化合物可用于治疗患有EGFR阳性结肠直肠癌的受试者，这些受试者携带PI3Kα激活突变或PTEN无效。
本公开的一个重要方面是本公开的化合物单独或响应于另外的细胞凋亡诱导信号而诱导细胞周期停滞和/或细胞凋亡并且还增强细胞周期停滞和/或细胞凋亡的诱导。因此，预期这些化合物使细胞对细胞周期停滞和/或细胞凋亡的诱导敏感，包括对这种诱导刺激有抗性的细胞。本公开的EGFR和PI3K抑制剂(例如，喹唑啉化合物)(例如，喹啉化合物)可用于在可通过诱导细胞凋亡来治疗、改善或预防的任何病症中诱导细胞凋亡。
在一些实施方案中，本公开的组合物和方法用于治疗患者(例如，哺乳动物患者，包括但不限于人和兽医动物)的患病细胞、组织、器官或病理状况和/或疾病状态。在这方面，各种疾病和病理能够使用本发明的方法和组合物来治疗或预防。这些疾病和病况的非限制性示例性列表包括但不限于结肠直肠癌、非小细胞肺癌、头颈癌、多形性胶质母细胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮肤癌、结肠癌、黑色素瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌、脑癌、原发性脑癌、头颈癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小细胞肺癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、泌尿生殖系统癌、甲状腺癌、食道癌、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、肾上腺癌、肾细胞癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、恶性胰腺胰岛素瘤、恶性类癌、绒毛膜癌、蕈样肉芽肿、恶性高钙血症、宫颈增生、白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、毛细胞白血病、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、原发性巨球蛋白血症和视网膜母细胞瘤等、T细胞和B细胞介导的自身免疫疾病；炎性疾病；感染；过度增殖性疾病；艾滋病；退行性病况、血管疾病等。在一些实施方案中，被治疗的癌细胞是转移性的。在其他实施方案中，被治疗的癌细胞对抗癌剂具有抗性。
在其他实施方案中，病症是含有具有异常EGFR蛋白活性(例如，ERBB1)和PI3K蛋白活性(例如，PI3Kα)的细胞的任何病症(例如，自身免疫病症、炎性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病、过敏、哮喘、胰腺炎、多器官衰竭、肾脏疾病、血小板聚集、精子能动性、移植排斥、移植物排斥、肺损伤等)。
本公开提供了将本公开的化合物与放射疗法一起施用的方法。本公开不受用于向患者递送治疗剂量的放射的类型、量或递送和施用系统的限制。例如，患者可以接受光子放射疗法、粒子束放射疗法、其他类型的放射疗法以及它们的组合。在一些实施方案中，使用线性加速器将放射递送至患者。在其他实施方案中，使用γ刀递送放射。
放射源可以在患者的外部或内部。外部放射疗法最为常见，并且涉及使用例如线性加速器将高能放射束通过皮肤引导到肿瘤部位。当放射束定位于肿瘤部位时，几乎不可能避免正常健康组织的暴露。然而，患者通常能够很好地耐受外部放射。内部放射疗法涉及在体内肿瘤部位处或附近植入放射发射源，诸如珠、线、丸粒、胶囊、颗粒等，包括使用特异性靶向癌细胞的递送系统(例如，使用附着于癌细胞结合配体的颗粒)。此类植入物可以在治疗后取出，或者留在体内不活动。内部放射疗法的类型包括但不限于近距离放射疗法、间质放射疗法、腔内放射疗法、放射免疫疗法等。
患者可以任选地接受放射增敏剂(例如，甲硝唑、米索硝唑、动脉内Budr、静脉内碘脱氧尿苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代-4-硝基咪唑、2H-异吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-亲和缺氧选择性细胞毒素、卤化DNA配体、1,2,4-苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝唑衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶-嵌入剂、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1,2,4-三唑、4,5-二硝基咪唑衍生物、羟基化泰克萨菲林、顺铂、丝裂霉素、替利扎明、亚硝基脲、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(高温)等)、放射保护剂(例如，半胱胺、氨基烷基二氢硫代磷酸酯、氨磷汀(WR 2721)、IL-1、IL-6等)。放射增敏剂增强肿瘤细胞的杀伤。放射保护剂保护健康组织免受放射的有害影响。
可以向患者施用任何类型的放射，只要患者能够耐受放射剂量而没有不可接受的负面副作用。合适的放射疗法类型包括例如电离(电磁)放射疗法(例如，X射线或γ射线)或粒子束放射疗法(例如，高线性能量放射)。电离放射被定义为包含具有足够能量以产生电离(即，电子的获得或损失)的粒子或光子的放射(如例如U.S.5,770,581中所述，其全部内容以引用方式并入本文)。放射的影响可以由临床医生至少部分地控制。在一个实施方案中，为了最大的靶细胞暴露和降低的毒性，对放射剂量进行分次。
在一个实施方案中，向患者施用的放射的总剂量为约.01格雷(Gy)至约100Gy。在另一个实施方案中，在治疗过程中施用约10Gy至约65Gy(例如，约15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy)。虽然在一些实施方案中，可以在一天的过程中施用完整剂量的放射，但理想地将总剂量分次并在几天内施用。理想地，放射疗法在至少约3天，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约1-8周)的过程中施用。因此，放射的日剂量将包括约1-5Gy(例如，约1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)或1-2Gy(例如，1.5-2Gy)。放射的日剂量应足以诱导靶细胞的破坏。如果延长一段时间，在一个实施方案中，放射不是每天施用，从而允许患者休息并实现治疗的效果。例如，对于每个治疗周，放射需要在连续5天施用，而不是在2天施用，从而允许每周休息2天。然而，根据患者的反应性和任何潜在的副作用，放射可以1天/周、2天/周、3天/周、4天/周、5天/周、6天/周或全7天/周施用。放射疗法可以在治疗期间的任何时间开始。在一个实施方案中，放射在第1周或第2周开始，并且在治疗期的剩余持续时间内施用。例如，放射在包括6周的治疗期的第1-6周或第2-6周施用以治疗例如实体瘤。替代性地，放射在包括5周的治疗期的第1-5周或第2-5周施用。然而，这些示例性放射疗法施用计划并不旨在限制本公开。
抗微生物治疗剂也可用作本公开中的治疗剂。可以使用可杀死、抑制或以其他方式减弱微生物有机体功能的任何药剂，以及预期具有此类活性的任何药剂。抗微生物剂包括但不限于单独或组合使用的天然和合成抗生素、抗体、抑制蛋白(例如，防御素)、反义核酸、膜破坏剂等。实际上，可以使用任何类型的抗生素，包括但不限于抗菌剂、抗病毒剂、抗真菌剂等。
在本公开的一些实施方案中，本公开的化合物和一种或多种治疗剂或抗癌剂在以下一种或多种条件下施用于患者：以不同的周期、以不同的持续时间、以不同的浓度、通过不同的施用途径等。在一些实施方案中，化合物在治疗剂或抗癌剂之前施用，例如在施用治疗剂或抗癌剂之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时、1、2、3、4、5或6天、或1、2、3或4周。在一些实施方案中，化合物在治疗剂或抗癌剂之后施用，例如在施用抗癌剂之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小时、1、2、3、4、5或6天、或1、2、3或4周。在一些实施方案中，化合物和治疗剂或抗癌剂同时施用，但按照不同的时间表施用，例如，化合物每天施用，而治疗剂或抗癌剂每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。在其他实施方案中，化合物每周施用一次，而治疗剂或抗癌剂每天、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用。
本公开范围内的组合物包括其中所含本公开化合物的量能够有效实现其预期目的的所有组合物。虽然个体需求不同，但确定每种组分的有效量的最佳范围在本领域的技术范围内。通常，这些化合物可以根据正在治疗的哺乳动物(例如人)的体重以每天0.0025至50mg/kg或等效量的其药学上可接受的盐的剂量口服施用于哺乳动物，以治疗对诱导细胞凋亡有反应的病症。在一个实施方案中，口服施用约0.01至约25mg/kg以治疗、改善或预防此类病症。对于肌肉注射，剂量通常为约口服剂量的一半。例如，合适的肌内剂量为约0.0025至约25mg/kg，或约0.01至约5mg/kg。
单位口服剂量可包含约0.01至约1000mg，例如约0.1至约100mg的化合物。单位剂量可以按照一种或多种片剂或胶囊每天施用一次或多次，每种片剂或胶囊含有约0.1至约10mg，方便地约0.25至50mg的化合物或其溶剂化物。
在局部制剂中，化合物可以以每克载体约0.01至100mg的浓度存在。在一个实施方案中，化合物以约0.07-1.0mg/mL，例如约0.1-0.5mg/mL，并且在一个实施方案中约0.4mg/mL的浓度存在。
除了将化合物作为原料化学品施用之外，本公开的化合物还可以作为药物制备物的一部分施用，该药物制备物含有合适的药学上可接受的载体，这些药学上可接受的载体包括有助于将化合物加工成可药用的制备物的赋形剂和助剂。制备物，特别是那些可以口服或局部施用并且可以用于一种类型的施用的制备物，诸如片剂、糖衣丸、缓释锭剂和胶囊、漱口水和漱口液、凝胶、液体悬浮液、护发素、发胶、洗发剂以及可以直肠施用的制备物，诸如栓剂，以及通过静脉内输注、注射、局部或口服施用的合适溶液，含有约0.01％-99％，在一个实施方案中约0.25％-75％的活性化合物和赋形剂。
本公开的药物组合物可以施用于可经历本公开的化合物的有益作用的任何患者。此类患者中最重要的是哺乳动物，例如人，尽管本公开不旨在如此限制。其他患者包括兽医患者(牛、羊、猪、马、狗、猫等)。
化合物及其药物组合物可以通过实现其预期目的的任何方式施用。例如，施用可以通过肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、透皮、颊、鞘内、颅内、鼻内或局部途径进行。替代性地或同时地，施用可以通过口服途径进行。施用的剂量将取决于接受者的年龄、健康状况和体重、同时治疗的种类(如果有的话)、治疗频率以及所需效果的性质。
一般合成程序
以下一般合成程序和具体合成实施例中进一步详细公开了另外的实施方案，其不以任何方式旨在限制权利要求的范围。
实施例
式I的化合物可以使用方案1中提供的一般方法合成。根据方案1，式G1的溴化物或碘化物化合物可以通过与试剂诸如4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷等反应转化为式G2的硼烷化合物。然后可以将式G2的化合物偶联到式G5的化合物，其中XA是适于偶联到式G2的化合物的官能团，得到式I的化合物。偶联可以使用本领域技术人员已知的化学方法来完成，诸如钯催化偶联条件。式G5的化合物可以通过将式G3的化合物与式G4的化合物在亲核芳族取代条件下反应来合成，其中X1如本文所定义并且G6和G7可以如本文所述被取代。还应当理解，如方案1中规定的反应顺序也可以颠倒，使得式G2的化合物与式G3的化合物反应形成中间产物，然后将该中间产物与式G4的化合物反应得到式I的化合物。
方案1：式I的化合物的合成
式I的化合物也可以根据方案2合成。按照该方案，式G6的化合物首先用式G7的胺进行亲核取代，其中X1如本文所定义并且G6和G7可以如本文所述被取代。所得的式G8的化合物，其中Xa是适于与式G9的四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷化合物进行官能团相互转化的基团。在偶联条件下，例如钯催化偶联条件下，将式G9的化合物与式G10的化合物接触，得到式I的化合物。
方案2：式I的化合物的替代路径
具体实施例
提供以下实施例是为了可以更充分地理解本发明，并且不旨在以任何方式限制本发明。
实施例1：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(比较化合物1)的合 成
步骤1：6-氯吲哚啉(1b)
在室温下，在N2气氛下，向1a(5.00g，33.1mmol)在AcOH(93.0mL)中的搅拌溶液中，在5分钟内分批添加NaCNBH3(6.24g，99.3mmol)，并将反应混合物搅拌4小时。将反应混合物用冰水淬灭，并通过缓慢添加固体NaOH碱化至pH＝14(注意：观察到放热反应)。将水性混合物用MTBE(2×200mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用EtOAc-己烷(20-30％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-氯吲哚啉(1b)(3.40g，68％产率)，为棕色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.97(d,J＝7.6Hz,1H),6.63(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),6.57(d,J＝2.0Hz,1H),3.57(t,J＝8.4Hz,2H),2.97(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):154.0[M+H]+。
步骤2：6-溴-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(1c)的合成
向6-溴-4-氯喹唑啉(1.0g，4.10mmol)在异丙醇(50mL)中的溶液中添加6-氯吲哚啉(1b)(0.63g，4.10mmol)。将反应混合物加热回流(85℃)六小时。反应通过TLC完成，并且反应混合物中形成橙色沉淀。将反应混合物趁热通过中型烧结漏斗过滤。将过滤的固体用过量异丙醇(50mL)冲洗，然后干燥过夜，得到0.629g。静置过夜后，从滤液中分离出第二种固体。将该固体干燥，得到第二批6-溴-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(1c)(0.531g)(总产率1.16g，78％)。Rf＝0.43(1:1乙酸乙酯:庚烷)，LC/MS(ESI+m/z 361,363)。
步骤3：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(比较化合物1)的合成
向由1c(0.205g，0.568mmol)在乙醇(4.5mL)中组成的溶液中添加2-氨基嘧啶-5-硼酸(1d)(0.083g，0.597mmol)。接着添加Silia CatDpp-Pd(0.220g，0.25mmol/g，0.06mmol)，然后添加碳酸钾(2.0M水溶液，0.57mL，1.13mmol)。将搅拌棒添加到5mL微波小瓶中，并在N2气氛下将小瓶盖上盖。将反应混合物在Biotage Emer ys Optimizer微波炉中在125℃下加热30分钟。将粗反应混合物经中等烧结漏斗过滤并用过量乙醇冲洗。向粗滤液中添加二氧化硅G60(25g)并减压浓缩，得到干燥的负载到二氧化硅上的材料。将干燥的负载柱置于预平衡的Silicycle 25g柱的顶部。将粗物质在Biotage Is olera柱上纯化，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(比较化合物1)(40mg，18.8％产率，95％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(br s,1H),8.66(br s,2H),8.23(br s,1H),8.17(br d,J＝7.32Hz,1H),7.91(br d,J＝8.33Hz,1H),7.60(br s,1H),7.32(br d,J＝6.68Hz,1H),7.02(br d,J＝7.23Hz,1H),6.88(br s,2H),4.60(br s,2H)3.28-3.10(m,2H)；MS:(ESI+m/z 375.1,ESI–m/z373.05)；TLC:(90:10:0.5,DCM:MeOH:NH4OH)Rf＝0.63。
实施例2：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)喹唑啉(比较 化合物2)
向由1c(0.205g，0.568mmol)在乙醇(4.5mL)中组成的溶液中添加吡咯并[2,3-b]吡啶-5-硼酸频哪醇酯(1e)(0.145g，0.596mmol)。接着添加SiliaCatDpp-Pd(0.220g，0.25mmol/g，0.06mmol)，然后添加碳酸钾(2.0M水溶液，0.57mL，1.13mmol)。将搅拌棒添加到5mL微波小瓶中，并在N2气氛下将小瓶盖上盖。将反应混合物在Biotage EmerysOptimizer微波炉中在125℃下加热30分钟。将粗反应混合物经中等烧结漏斗过滤并用过量乙醇冲洗。向粗滤液中添加二氧化硅G60(25g)并减压浓缩，得到干燥的负载到二氧化硅上的材料。将干燥的负载柱置于预平衡的Silicycle 25g柱的顶部。将粗物质在BiotageIsolera柱上纯化，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。该柱提供混合级分，将其在乙醇溶液中在40℃下研磨过夜。将该溶液经烧结漏斗过滤，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)喹唑啉(比较化合物2)(25mg，11％产率，95％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(br s,1H),8.77(s,1H),8.62(s,1H),8.39-8.19(m,4H),7.99(br d,J＝8.51Hz,1H),7.63(s,1H),7.55(br s,1H),7.35(br d,J＝8.05Hz,1H),7.06(br d,J＝8.23Hz,1H),6.53(br s,1H),4.64(br t,J＝7.87Hz,2H)3.30-3.10(m,2H)；MS:(ESI+m/z 398.1,ESI–m/z396.1)；TLC:(90:10:0.5,DCM:MeOH:NH4OH)Rf＝0.65。
实施例3：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合 物3)的制备
向1c在1,4-二噁烷(4.50mL)中的搅拌溶液中添加1g(0.184g，0.75mmol)、K2CO3(0.14g，1.04mmol)的水(0.9mL)溶液，脱气10分钟，向其中添加Pd(dppf)Cl2 DCM复合物(23.0mg，0.029mmol)，并在加热至110℃的密封管中脱气10分钟，持续24小时。将反应物冷却至室温，添加(0.9mL)乙酸，然后减压浓缩，得到粗品，将其用于柱色谱(12.0g)二氧化硅，使用5％至6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，合并柱级分并减压浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物3)(100mg，59％)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.95(d,J＝2Hz,1H),8.78(s,1H),8.63(d,J＝1.6Hz,1H),8.44(d,J＝1.6Hz,1H),8.32(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.23(d,J＝1.2Hz,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.68(t,J＝8Hz,2H),3.21(t,J＝8.4Hz,2H)。
实施例4：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(化合 物4)的合成
向1c(0.16g，0.44mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1h(0.230g，0.80mmol)、K2CO3(0.15g，1.11mmol)的水(1.0mL)溶液，脱气10分钟，向其中添加Pd(dppf)Cl2 DCM复合物(25.0mg，0.031mmol)，并在加热至110℃的密封管中脱气10分钟，持续24小时。将反应物冷却至室温，添加(0.9mL)乙酸，然后减压浓缩，得到粗品，将其用于柱色谱(12.0g)二氧化硅，使用5％至6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，合并柱级分并减压浓缩，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(化合物4)(130mg，66％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.76(s,1H),8.63(s,1H),8.26(s,1H),8.24-8.22(m,1H),8.07(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.35(d,J＝8Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(brs,2H),4.60(t,J＝8Hz,2H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H)。
实施例5：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化 合物5)的合成
步骤1：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉(1m)的合成
在室温下，向置于可重新密封的试管中的1c(2.00g，5.57mmol)在1,4-二噁烷(40.0mL)中的搅拌溶液中添加双频哪醇二硼烷(1.69g，6.68mmol)和KOAc(1.64g，16.7mmol)。将反应混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(227mg，0.2mmol)，密封试管，并将混合物在120℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物与MTBE(50mL)一起研磨，真空过滤，用MTBE(30mL)洗涤并真空干燥，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉(1m)(1.50g，66％产率)，为棕色固体。MS(ESI+APCI；多模式)：408.1[M+H]-。
步骤2：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物5)的合成
向6-溴-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶(26.01mg，122.64μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1m(50mg，122.64μmol，1当量)、K3PO4(78.10mg，367.92μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(8.97mg，12.26μmol，0.1当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：10％-40％，8min)。得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物5)(29.9mg，55.43μmol，45.20％产率，97.68％纯度，TFA)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.96-9.01(m,2H),8.67(s,1H),8.59(s,1H),8.51(dd,J＝8.69,1.44Hz,1H),8.35(s,1H),8.05(d,J＝8.50Hz,2H),7.45(d,J＝8.13Hz,1H),7.23(dd,J＝7.94,1.69Hz,1H),4.87(br t,J＝7.75Hz,2H),4.17(s,3H),3.26(br t,J＝7.75Hz,2H)。MS(M+H)+＝413.0
实施例6：4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉 (化合物6)的合成
步骤1：6-氯-5-氟-吲哚啉(1j)的合成
向6-氯-5-氟-1H-吲哚(4g，23.59mmol，1当量)在AcOH(40mL)中的溶液中添加NaCNBH3(4.45g，70.76mmol，3当量)。将混合物在20℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。TLC(PE:EtOAc＝3:1，Rf＝0.38)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。冷却至25℃，向混合物中添加H2O(30mL)，通过缓慢添加饱和NaHCO3水溶液将混合物调节至pH＝9，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。将合并的有机物用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速柱(ISCO 40g二氧化硅，15％-30％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。得到6-氯-5-氟-吲哚啉(1j)(2.1g，12.24mmol，51.88％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.06(d,J＝9.17Hz,1H),6.52(d,J＝6.23Hz,1H),5.60(br s,1H),3.43(t,J＝8.44Hz,2H),2.90(t,J＝8.56Hz,2H)。MS(M+H)+＝172.2
步骤2：6-溴-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉(1k)的合成
向1j(260mg，1.52mmol，1当量)在i-PrOH(8mL)中的溶液中添加6-溴-4-氯喹唑啉(368.92mg，1.52mmol，1当量)，将混合物在80℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物真空浓缩。得到6-溴-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉(1k)(500mg，1.32mmol，87.16％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝380.1
步骤3：4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物6)的合成
向1k(0.16g，0.42mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1g(0.186g，0.75mmol)、K2CO3(0.14g，1.05mmol)的水(1.0mL)溶液，脱气10分钟，向其中添加Pd(dppf)Cl2 DCM复合物(24.0mg，0.029mmol)，并在加热至110℃的密封管中脱气10分钟，持续24小时。将反应物冷却至室温，添加(1.0mL)乙酸，然后减压浓缩，得到粗品，将其用于柱色谱(12.0g)二氧化硅，使用5％至6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，合并柱级分并减压浓缩，得到4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物6)(80mg，48％，)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.80(brs,1H),8.96(d,J＝2.0Hz,1H),8.75(s,1H),8.64(d,J＝2Hz,1H),8.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.31(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),8.24(d,J＝1.2Hz,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.95(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H)4.74(t,J＝8.0Hz,2H),3.23(t,J＝8.0Hz,2H)。
实施例7：5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(化合物7)的合 成
向1k(0.16g，0.42mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1d(0.16g，0.73mmol)、K2CO3(0.14g，1.05mmol)的水(1.0mL)溶液，脱气10分钟，向其中添加Pd(dppf)Cl2 DCM复合物(24.0mg，0.029mmol)，并在加热至110℃的密封管中脱气10分钟，持续24小时。将反应物冷却至室温，添加(0.9mL)乙酸，然后添加水(2.0mL)，减压浓缩，得到粗品，将其用于柱色谱(12.0g)二氧化硅，使用5％至6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，合并柱级分并减压浓缩，得到5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(化合物7)(130mg，78％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.71(s,1H),8.70(s,2H),8.28(d,J＝1.6Hz,1H),8.19(dd,J＝8.8,2Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝6.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),6.91(brs,2H),4.68(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H)。
实施例8：5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺 (化合物8)的合成
向1k(0.16g，0.44mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1h(0.20g，0.75mmol)、K2CO3(0.14g，1.05mmol)的水(1.0mL)溶液，脱气10分钟，向其中添加Pd(dppf)Cl2 DCM复合物(24.0mg，0.029mmol)，并在加热至110℃的密封管中脱气10分钟，持续24小时。将反应物冷却至室温，添加(0.9mL)乙酸，然后减压浓缩，得到粗品，将其用于柱色谱(12.0g)二氧化硅，使用5％至6％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，合并柱级分并减压浓缩，得到5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(化合物8)(100mg，52％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.72(s,1H),8.65(brs,1H),8.29(brs,1H),8.22(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),8.09(d,J＝2.0Hz,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.81(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),6.72(brs,2H),4.65(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H)。
实施例9：(4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉-3-甲 腈)(化合物9)的合成
步骤1：6-溴-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(2c)的合成
在室温下在N2气氛下，向1b(143mg，0.94mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-4-氯喹啉-3-甲腈(250mg，0.94mmol)，并将反应混合物在90℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，此时产物沉淀。通过真空过滤收集沉淀的产物，用MTBE:己烷(5:1，20.0mL)洗涤并真空干燥，得到6-溴-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(2c)(200mg，55％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.08(s,1H),8.19(s,1H),8.07(s,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(s,1H),4.40–4.29(m,2H),3.38–3.21(m,2H),MS(ESI+APCI；多模式):386.0[(M+2)+H]+。
步骤2：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉-3-甲腈(化合物9)的合成
在室温下，向置于圆底烧瓶中的2c(200mg，0.52mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1g(320.0mg，1.30mmol)、Cs2CO3(509mg，1.56mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将反应混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(29.8mg，0.02mmol)，并将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉-3-甲腈(化合物9)(65mg，30％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.5(br s,1H),9.02(s,1H),8.77(d,J＝2.0Hz,1H),8.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.30(dd,J＝8.4Hz,J＝1.6Hz,1H),8.25–8.21(m,2H),8.15(br s,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),6.88(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),6.50(s,1H),4.40(t,J＝8.8Hz,2H),3.33(t,J＝10.4Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):423.2[M+H]+。HPLC:99.3(％AUC)。
实施例10：6-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物10)的合成
在室温下，向置于RB烧瓶中的2c(200mg，0.52mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加2b(139mg，0.62mmol)、Cs2CO3(339mg，1.04mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将反应混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(21.3mg，0.02mmol)，并将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(3-5％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物10)(72mg，34％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.97(s,1H),8.52(s,2H),8.17(d,J＝1.6Hz,2H),8.03(t,J＝0.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(dd,J＝7.6Hz,J＝2.0Hz,1H),6.56(br s,2H),6.44(s,1H),4.38(t,J＝8.0Hz,2H),3.36–3.29(m,2H),MS(ESI+APCI；多模式):399.1[M+H]+。HPLC:97.8(％AUC)。
实施例11：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-咪唑并[1,5-a]嘧啶-3-基-喹唑啉(化合物 11)的合成
向3-溴咪唑并[1,5-a]嘧啶(29.14mg，147.17μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加1m(60mg，147.17μmol，1当量)、K3PO4(93.72mg，441.50μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.77mg，14.72μmol，0.1当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：10％-25％，8分钟)。得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-咪唑并[1,5-a]嘧啶-3-基-喹唑啉(化合物11)(7.96mg，17.38μmol，11.81％产率，95.03％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.46(br s,1H),9.07(s,1H),8.89-9.01(m,2H),8.74(s,1H),8.50(dd,J＝8.82,1.31Hz,1H),8.30(s,1H),8.21(d,J＝8.63Hz,1H),7.98(br s,1H),7.50(d,J＝8.13Hz,1H),7.33(dd,J＝8.00,1.88Hz,1H),5.00(br t,J＝7.63Hz,2H),3.29(br t,J＝7.57Hz,2H)。MS(M+H)+＝399.0
实施例12：N-[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲 磺酰胺(化合物12)的合成
步骤1：2-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-胺(4b)的合成
向5-溴-2-氯-吡啶-3-胺(4a)(20g，96.41mmol，1当量)在二噁烷(250mL)中的搅拌溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(29.38g，115.69mmol，1.2当量)、KOAc(23.65g，241.01mmol，2.5当量)和Pd(dppf)Cl2(3.53g，4.82mmol，0.05当量)。将混合物用N2吹扫3次，然后在100℃下搅拌16小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5:1，Rf＝0.25)显示有少量起始材料残留，并有新的斑点形成。将反应混合物倒入水(150mL)中。将水相用乙酸乙酯(300mL*3)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速柱(ISCO 120g二氧化硅，10％-15％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度15分钟)纯化。得到2-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-胺(4b)(6.75g，26.52mmol，30％产率)，为黄色固体。
步骤2：N-[2-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]-N-甲基磺酰基-甲磺酰胺(4c)的合成
在0℃下向4b(27g，106.08mmol，1当量)在DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加TEA(42.94g，424.33mmol，59.06mL，4当量)、MsCl(31.170g，272.11mmol，21.06mL，2.57当量)。将混合物在0℃下搅拌1小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，Rf＝0.84)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。将反应混合物真空浓缩。将残余物倒入MeOH(10mL)中。将混合物在20℃下搅拌1小时，过滤，并将滤饼真空浓缩，得到粗产物。得到N-[2-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]-N-甲基磺酰基-甲磺酰胺(4c)(20g，48.70mmol，46％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.77(d,J＝1.8Hz,1H),8.04(d,J＝1.6Hz,1H),3.53(s,6H),1.45-1.32(m,12H)。
步骤3：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-碘-喹唑啉(3a)的合成
向1j(2g，11.66mmol，1当量)在i-PrOH(30mL)中的搅拌溶液中添加4-氯-6-碘喹唑啉(3.39g，11.66mmol，1当量)，将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-碘-喹唑啉(3a)(4.8g，11.28mmol，96.76％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝426.0。
步骤4：N-[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物12)的合成
向3a(100mg，234.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加4c(96.49mg，234.95μmol，1当量)、Cs2CO3(229.65mg，704.85μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.50μmol，0.1当量)。将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：20％-45％，8分钟)。得到N-[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物12)(12.44mg，23.58μmol，10.04％产率，95.60％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.95(br s,1H),8.95(s,1H),8.75(d,J＝2.25Hz,1H),8.58(s,1H),8.38(dd,J＝8.82,1.44Hz,1H),8.28(br d,J＝6.75Hz,1H),8.23(d,J＝2.25Hz,1H),8.05(d,J＝8.63Hz,1H),7.53(d,J＝8.76Hz,1H),4.87(br t,J＝7.63Hz,2H),3.24-3.27(m,2H),3.19(s,3H)。MS(M+H)+＝504.1
实施例13：6-(6-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物 13)的合成
在室温下，将5-溴-2-氯-3-甲氧基吡啶(200mg，0.90mmol)和Cs2CO3(882mg，2.71mmol)在H2O(4.00mL)中的溶液添加到1m(552mg，1.35mmol)在1,4-二噁烷(20.0mL)中的搅拌溶液中。将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(51.7mg，0.06mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-(6-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物13)(180mg，47％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.78(s,1H),8.46(d,J＝1.6Hz,1H),8.40(d,J＝2.0Hz,1H),8.32(dd,J＝8.8Hz,J＝2.0Hz,1H),8.00(d,J＝8.8Hz,1H),7.89(d,J＝2.0Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),4.66(t,J＝8.0Hz,2H),4.02(s,3H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):423.1[M+H]+。HPLC:96.8(％AUC)。
实施例14：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹唑 啉(化合物14)的合成
步骤2：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物14)的合成：
将6-溴-2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(100mg，0.47mmol)和Cs2CO3(459mg，1.41mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液添加到1m(288mg，0.70mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中。将混合物置于可重复密封的试管中并用Ar(g)脱气10分钟。然后一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(24.1mg，0.03mmol)并密封试管。将反应混合物在120℃下搅拌12小时。然后将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物14)(80mg，41％产率)，为浅棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6-Vt(90℃)):8.78(s,1H),8.59(s,1H),8.33(d,J＝1.6Hz,1H),8.26–8.23(m,1H),8.14(s,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.54(J＝1.6Hz,1H),7.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.01(d,J＝2.0Hz,1H),4.59(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(t,J＝7.6Hz,2H),2.54(s,3H),MS(ESI+APCI；多模式):413.2.[M+H]+。HPLC:95.9(％AUC)。
实施例15：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-甲氧基吡啶-3-基)喹唑啉(化合物15)的 合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1c(200mg，0.55mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(155mg，0.66mmol)和Cs2CO3(543mg，1.67mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(31.8mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热1.5小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-甲氧基吡啶-3-基)喹唑啉(化合物15)(84mg，37％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.78(s,1H),8.60(s,1H),8.59(s,1H),8.42(s,1H),8.35–8.28(m,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.73–7.69(m,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.65(t,J＝8.0Hz,2H),3.92(s,3H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):389.1[M+H]+。HPLC:99.8(％AUC)。
实施例16：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5,6-二甲氧基吡啶-3-基)喹唑啉(化合物 16)的合成
在室温下，向1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-2,3-二甲氧基吡啶(107mg，0.49mmol)、Cs2CO3(479mg，1.47mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.0mg，0.03mmol)，并将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5,6-二甲氧基吡啶-3-基)喹唑啉(化合物16)(60mg，28％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.77(s,1H),8.33(s,1H),8.27(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(d,J＝1.2Hz,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J＝5.2Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),4.63(t,J＝8.4Hz,2H),3.92(s,3H),3.89(s,3H),3.19(t,J＝7.6Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):419.1[M+H]+。HPLC:98.0(％AUC)。
实施例17：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(6-甲氧基吡嗪-2-基)喹唑啉(化合物17)的 合成
在室温下，向1m(300mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(20.0mL)中的搅拌溶液中添加2-溴-6-甲氧基吡嗪(107mg，0.73mmol)、Cs2CO3(718mg，2.21mmol)在H2O(4.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(42.1mg，0.05mmol)，并将混合物在120℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(6-甲氧基吡嗪-2-基)喹唑啉(化合物17)(110mg，39％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.95(t,J＝6.8Hz,2H),8.78(s,1H),8.63(dd,J＝8.8Hz,J＝1.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.71(d,J＝2.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),4.66(t,J＝8.0Hz,2H),3.99(s,3H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):390.1[M+H]+。HPLC:99.7(％AUC)。
实施例18：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑 啉(化合物18)的合成
在室温下，向1m(288mg，0.73mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(100mg，0.47mmol)、Cs2CO3(460mg，1.41mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2(24.1mg，0.03mmol)，密封试管，并将混合物在120℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物18)(30mg，16％，AMRI批号IN-ASR-K-90-3，ALB-215209)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.34(s,1H),8.90(d J＝2.0Hz,1H),8.79(s,1H),8.57(s,1H),8.41(s,1H),8.34(d,J＝8.8Hz,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.65(t,J＝8.4Hz,2H),3.20(t,J＝8.0Hz,2H),2.56(s,3H),MS(ESI+APCI；多模式):413.2[M+H]+。HPLC:95.2(％AUC)。
实施例19：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹 唑啉(化合物19)的合成
在室温下，向置于可重新密封的试管中的1m(270mg，0.66mol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-3-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(100mg，0.44mmol)、Cs2CO3(430mg，1.32mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2(22.5mg，0.03mmol)，密封试管，并将反应混合物在120℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(3-甲氧基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物19)(72.2mg，39％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.71(s,1H),8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.76(s,1H),8.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.40(d,J＝1.6Hz,1H),8.31(dd,J＝8.8Hz,J＝1.6Hz,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(d,J＝1.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.6Hz,1H),7.05(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),4.64(t,J＝8.0Hz,2H),4.04(s,3H),3.20(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):429.1[M+H]+。HPLC:98.7(％AUC)。
实施例20：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-甲氧基吡嗪-2-基)喹唑啉(化合物20)的 合成
在室温下，向1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加2-溴-5-甲氧基吡嗪(71.0mg，0.49mmol)、Cs2CO3(479mg，1.47mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.0mg，0.03mmol)，并将反应混合物在120℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-甲氧基吡嗪-2-基)喹唑啉(化合物20)(66mg，34％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.95(s,1H),8.76(d,J＝4.0Hz,2H),8.54(d,J＝8.0Hz,1H),8.43(s,1H),7.97(d,J＝8.4Hz,1H),7.72(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(dd,J＝8.0Hz,J＝1.2Hz,1H),4.64(t,J＝8.0Hz,2H),3.98(s,3H),3.20(t,J＝7.6Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):390.1[M+H]+。HPLC:97.6(％AUC)。
实施例21：6-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑 啉(化合物21)的合成
在室温下，向置于密封试管中的1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶(97.0mg，0.49mmol)、Cs2CO3(479mg，1.47mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2(25.1mg，0.03mmol)，密封试管，并将混合物在110℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物21)(100mg，51％产率)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.14(d,J＝1.6Hz,1H),8.78(s,2H),8.53(s,1H),8.38(dd,J＝8.8Hz,J＝1.6Hz,1H),8.02(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(J＝1.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.71(t,J＝8.0Hz,2H),3.20(t,J＝7.6Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):400.1[M+H]+。HPLC:97.2(％AUC)。
实施例22：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-2-醇(化合物22)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(233mg，0.57mmol)在1,4-二噁烷(5.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴吡啶-2-醇(99.5mg，0.57mmol)、Cs2CO3(558.0mg，1.71mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(32.7mg，0.04mmol)，并密封小瓶。将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-2-醇(化合物22)(27mg，13％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.94(s,1H),8.72(s,1H),8.20(s,1H),8.14(d,J＝8.8Hz,1H),7.95–7.88(m,3H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.05(d,J＝6.4Hz,1H),6.47(d,J＝9.2Hz,1H),4.62(t,J＝8.0Hz,2H),3.20(t,J＝7.6Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):375.1[M+H]+。HPLC:96.0(％AUC)。
实施例23：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-醇(化合物23)的合成
在室温下，向1m(230mg，0.56mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴吡啶-3-醇(97.6mg，0.56mmol)、Cs2CO3(550mg，1.69mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(32.2mg，0.03mmol)，并将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-醇(化合物23)(70mg，33％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.14(s,1H),8.77(s,1H),8.45(s,1H),8.35(s,2H),8.20(d,J＝8.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(s,1H),7.49(s,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),4.64(t,J＝8.0Hz,2H),3.20(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):375.1[M+H]+。HPLC:96.3(％AUC)。
实施例24：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)喹唑啉(化合物 24)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加3-溴-5-(甲基磺酰基)吡啶(116mg，0.49mmol)、Cs2CO3(479mg，1.47mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.0mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％ EtO Ac作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)喹唑啉(化合物24)(60mg，18％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.34(d,J＝2.0Hz,1H),9.10(d,J＝2.0Hz,1H),8.78(s,1H),8.67(s,1H),8.55(s,1H),8.37(d,J＝8.8Hz,1H),8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝1.2Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.69(t,J＝8.0Hz,2H),3.43(s,3H),3.20(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):437.1[M+H]+。HPLC:96.1(％AUC)。
实施例25：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)烟碱醛(化合物25)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加5-溴烟碱醛(91.3mg，0.49mmol)、Cs2CO3(478.9mg，1.47mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.0mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)烟碱醛(化合物25)(70mg，37％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.21(s,1H),9.28(d,J＝2.0Hz,1H),9.10(d,J＝1.2Hz,1H),8.78(s,2H),8.62(s,1H),8.50(d,J＝1.2Hz,1H),8.34(t,J＝1.6Hz,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝1.6Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.67(t,J＝8.0Hz,2H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H),(ESI+APCI；多模式):387.1[M+H]+。HPLC-97.4(％AUC)。
实施例26：5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-醇(化合物26)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(230mg，0.56mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加5-溴嘧啶-2-醇(98.9mg，0.56mmol)、Cs2CO3(551mg，1.69mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(32.2mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法使用CH3OH-CH2Cl2(5-10％)纯化，将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到5-(4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)嘧啶-2-醇(化合物26)(39mg，18％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.35(br s,1H),8.73(s,2H),8.31(s,2H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),4.65(t,J＝8.0Hz,2H),3.19(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):376.1(M+H)+,HPLC:98.9(％AUC)。
实施例27：6-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉 (化合物27)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(206mg，0.50mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加7-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶(99.6mg，0.56mmol)、Cs2CO3(493.3mg，1.51mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.9mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将反应混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH 3OH-CH2Cl2(5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-7-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物27)(120mg，60％产率)，为黄绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.28(s,1H),8.78(s,1H),8.69(d,J＝7.2Hz,1H),8.55(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,1H),8.25(s,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(s,1H),7.48(d,J＝6.8Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0Hz,J＝1.6Hz,1H),4.71(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):399.1[M+H]+。HPLC:96.9(％AUC)。
实施例28：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合 物28)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(206mg，0.50mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(99.6mg，0.56mmol)、Cs2CO3(493mg，1.51mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.9mg，0.03mmol)，密封小瓶，并将混合物在微波反应器中在120℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(梯度5-10％)作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物28)(60mg，29％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.52(s,1H),8.93(d,J＝2.0Hz,1H),8.79(s,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.37–8.33(m,3H),8.02(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),4.70(t,J＝8.0Hz,2H),3.20(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):399.2[M+H]+。HPLC:98.5(％AUC)。
实施例29：6-([1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-6-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉 (化合物29)的合成
在室温下，向置于微波小瓶中的1m(200mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶(98.0mg，0.56mmol)、Cs2CO3(479mg，1.47mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(28.0mg，0.03mmol)，并封闭小瓶。将反应混合物在120℃下用微波辐射1h。将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用100％EtOAc作为洗脱剂。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到6-([1,2,4]三唑并[4,3-a]嘧啶-6-基)-4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物29)(125mg，43％产率)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.93(s,1H),9.38(d,J＝2.4Hz,1H),8.77(d,J＝3.6Hz,1H),8.60(d,J＝1.6Hz,1H),8.80(dd,J＝8.8Hz,J＝2.0Hz,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.87(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.08(dd,J＝8.0Hz,J＝2.0Hz,1H),4.74(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(t,J＝8.0Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):400.2[M+H]+。HPLC:97.0(％AUC)。
实施例30：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基-吡啶-3- 甲酰胺(化合物30)的合成
步骤1：4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉(1n)的合成：
在室温下在N2气氛下，向置于3颈圆底烧瓶中的1k(1.35g，3.57mmol)在甲苯(50.0mL)中的搅拌溶液中添加双频哪醇酯乙硼烷(2.71g，4.64mmol)、KOAc(2.24g，10.7mmol)，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.43g，0.35mmol)，密封小瓶，并将混合物在100℃下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用40％ EtOAc的己烷溶液。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹唑啉(1n)(800mg，52％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.76(s,1H),8.47(s,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.75(d,J＝6.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),4.55(t,J＝8.0Hz,2H),3.25(t,J＝8.0Hz,2H),1.32(s,12H)；MS(ESI+APCI；多模式):425.0[(M+H]+。
步骤2：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物30)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-N,N-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(32.29mg，140.95μmol，1当量)、Cs2CO3(137.77mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物30)(8.4mg，16.82u mol，11.94％产率，97％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.20-9.26(m,1H),9.03-9.10(m,1H),8.77-8.83(m,1H),8.70-8.76(m,1H),8.53-8.59(m,1H),8.38-8.52(m,2H),8.23(d,J＝8.68Hz,1H),7.60(d,J＝8.56Hz,1H),5.02(s,2H),3.30(br t,J＝7.40Hz,2H),2.95-3.06(m,6H).MS(M+H)+＝448.0。
实施例31：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-醇(化合物31) 的合成
向3a(100mg，234.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(229.65mg，704.84μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-醇(51.94mg，234.95μmol，1当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexLuna80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：5％-30％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-醇(化合物31)(52.13mg，121.44μmol，51.69％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.38(br s,1H),9.03(s,1H),8.75(d,J＝1.63Hz,1H),8.66(s,1H),8.29-8.58(m,3H),7.98-8.27(m,2H),7.58(d,J＝8.76Hz,1H),4.97(br t,J＝7.57Hz,2H),3.30(br t,J＝7.50Hz,2H)。MS(M+H)+＝393.0
实施例32：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5-甲基磺酰基-3-吡啶基)喹唑啉(化 合物32)的合成
向3a(100mg，234.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(229.65mg，704.84μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)和3-甲基磺酰基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(66.53mg，234.95μmol，1当量)，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexLuna80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-30％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5-甲基磺酰基-3-吡啶基)喹唑啉(化合物32)(5.9mg，12.52μmol，5.33％产率，96.54％纯度)，为棕色胶状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.40(br s,1H),8.97-9.21(m,2H),8.67-8.84(m,2H),8.41-8.65(m,2H)m,8.08(br d,J＝8.00Hz,1H),7.59(br d,J＝7.75Hz,1H),5.01(br s,2H),3.38-3.40(m,3H),3.33 -3.35(m,2H)。MS(M+H)+＝455.0
实施例33：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲醛(化合物 33)的合成
向3a(100mg，234.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(229.65mg，704.84μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-甲醛(54.76mg，234.95μmol，1当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：NP-1；流动相：[庚烷-EtOH]；B％：5％-95％，16分钟)，得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲醛(化合物33)(28.54mg，70.50μmol，30.01％产率，100％纯度)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.27-10.16(m,1H),9.36-9.26(m,1H),9.16-9.04(m,1H),8.80-8.72(m,1H),8.68-8.59(m,1H),8.56-8.46(m,1H),8.40-8.26(m,1H),8.04-7.93(m,2H),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),4.73(br t,J＝8.0Hz,2H),3.26-3.19(m,2H)。MS(M+H)+＝405.1
实施例34：5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,3-二氢-2H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-2-酮(化合物34)的合成
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1n(0.15g，0.35mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(0.11g，0.52mmol)、Cs2CO3(0.34g，1.05mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.019g，0.024mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续4小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(化合物34)(45.0mg，17％产率)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.16(s,1H),8.73(s,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.32(d,J＝1.6Hz,1H),8.23-8.15(m,1H),8.02(s,1H),7.96-7.90(m,2H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.70(t,J＝8.0Hz,2H),3.64(s,2H),3.23(t,J＝8.0Hz,2H)；MS(ESI+APCI；多模式):432.0[M+H]+；HPLC:95.3(％AUC)。
实施例35：6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2 (3H)-酮(化合物35)的合成
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1n(0.10g，0.23mmol)在1,4-二噁烷(5.0mL)中的搅拌溶液中添加6-溴噁唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(0.074g，0.34mmol)、Cs2CO3(0.22g，0.69mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2(0.013g，0.016mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续4小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)噁唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(化合物35)(25.0mg)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.5(s,1H),8.73(s,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),8.38(s,1H),8.24(d,J＝8.8Hz,1H),8.14(d,J＝1.6Hz,1H),7.97-7.94(m,2H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.71(t,J＝8.0Hz,2H),3.22(t,J＝8.0Hz,2H)；MS(ESI+APCI；多模式):434[M+H]+。HPLC:98.1(％AUC)。
实施例36：6-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-基)-4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑 啉(化合物36)的合成
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1n(0.20g，0.47mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1H-苯并[d][1,2,3]三唑(0.14g，0.70mmol)、Cs2CO3(0.45g，1.41mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2(0.022g，0.03mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到6-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-基)-4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物36)(35.0mg，19％产率)，为浅棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ15.87(s,1H),8.75(s,1H),8.46(s,1H),8.33(dd,J＝8.8Hz,J＝8.8Hz,1H),8.00-7.94(m,4H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.71(t,J＝8.0Hz,2H),3.22(t,J＝8.0Hz,2H)；MS(ESI+APCI；多模式):417[M+H]+；HPLC:95.4(％AUC)。
实施例37：2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)烟碱醛(化合物 37)的合成
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1n(0.20g，0.47mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加2-氨基-5-溴烟碱醛(0.14g，0.70mmol)、Cs2CO3(0.45g，1.41mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.026g，0.03mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)烟碱醛(化合物37)(96.0mg，48％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.99(s,1H),8.73(t,J＝7.6Hz,2H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.25-8.23(m,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.88(d,J＝6.8Hz,1H),7.74(s,2H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(t,J＝8.0Hz,2H),3.22(t,J＝8.0Hz,2H)；MS(ESI+APCI；多模式):420[M+H]+；HPLC:98.7(％AUC)。
实施例38：6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-2-酮(化合物38)的合成
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1n(0.20g，0.47mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(0.15g，0.70mmol)、Cs2CO3(0.45g，1.41mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.024g，0.03mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(方法：使用WATERS MASS BASED AUTOPURIFICATION HPLC系统进行，二元溶剂系统A和B，使用梯度洗脱：HPLC方法：GEMINI C18@10μm(30×150mm，10μ)；流动相，A＝0.05％TFA的H2O溶液，并且B＝ACN；流速：30mL/min，进样体积：300μL，运行时间：15分钟，梯度：90％-55％A，10％-45％ B(0.0-10分钟)；(在220nm处UV检测)。将仅含有纯产物的级分合并浓缩，得到6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(化合物38)(18.0mg，9％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6 VT(90℃)NMR):δ11.1(brs,1H),10.6(brs,1H),8.73(s,1H),8.28(d,J＝2.0Hz,1H),8.23(d,J＝2.0Hz,1H),8.15(dd,J＝8.8Hz,J＝8.4Hz,1H),7.96-7.91(m,1H),7.76(d,J＝6.8Hz,1H),7.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.35-7.32(m,1H),4.62(t,J＝8.0Hz,2H),3.23(t,J＝8.4Hz,2H),MS(ESI+APCI；多模式):433[M+H]+。HPLC:96.7％(％AUC)。
实施例39：(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4-甲基哌 嗪-1-基)甲酮(化合物39)的合成
步骤1：(5-溴吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(1q)的制备
在室温下，向1o(0.50g，2.47mmol)在CH2Cl2(20.0mL)中的搅拌溶液中添加1p(0.3mL，2.97mmol)、HOBt(0.50g，3.70mmol)、EDC·HCl(0.70g，3.70mmol)，然后添加Et3N(0.98mL，7.41mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)稀释并用CH2Cl2(2×20mL)萃取，用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用10％甲醇的CH2Cl2溶液。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到(5-溴吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(1q)(0.25g，35％产率)，为浅黄色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.58(d,J＝1.6Hz,1H),8.12(t,J＝4.0Hz,1H),3.61(brs,2H),3.31(brs,2H),2.36(brs,2H),2.27(brs,2H),2.19(s,3H)；MS(ESI+APCI；多模式):285[M+H]+。
步骤2：(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(化合物39)的合成：
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1q(0.25g，0.88mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加1n(0.25g，0.58mmol)、Cs2CO3(0.56g，1.74mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.033g，0.04mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(化合物39)(165mg，55％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.10(s,1H),8.76(s,1H),8.63(s,1H),8.48(s,1H),8.31(d,J＝8.8Hz,1H),8.22(s,1H),8.00–7.95(m,2H),7.45(d,J＝8.8Hz,1H),4.72(t,J＝15.6Hz,2H),3.67(s,2H),3.38(s,2H),3.22(t,J＝8.0Hz,2H),2.40(s,2H),2.31(d,J＝14.4Hz,2H),2.20(s,3H)；MS(ESI+APCI；多模式):503[M+H]+；HPLC:>99(％AUC)。
实施例40：(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4- 甲基哌嗪-1-基)甲酮(化合物40)的合成
步骤1：(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(1s)的制备：
在室温下，向1r(0.50g，2.31mmol)在DMF(10.0mL)中的搅拌溶液中添加1p(0.25mL，2.54mmol)、HOBt(0.46g，3.46mmol)、EDC·HCl(0.66g，3.46mmol)，然后添加i-Pr2EtN(0.98mL，7.41mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(2×20mL)萃取，用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用10％甲醇的DCM溶液。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(1s)(0.24g，34％产率)，为浅黄色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.06(s,1H),7.52(s,1H),6.17(s,2H),3.41(brs,4H),2.30(s,4H),2.18(s,3H)；MS(ESI+APCI；多模式):299[M+H]+。
(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(化合物40)的合成：
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的3(0.23g，0.77mmol)在1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌溶液中添加4(0.22g，0.51mmol)、Cs2CO3(0.49g，1.53mmol)在H2O(2.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.029g，0.03mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(化合物40)(105mg，37％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.72(s,1H),8.47(d,J＝2.4Hz,1H),8.23-8.17(m,2H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.76(t,J＝6.8Hz,2H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),6.23(s,2H),4.63(t,J＝8.0Hz,2H),3.48(brs,4H),3.26-3.19(m,2H),2.32(d,J＝1.6Hz,4H),2.19(s,3H)；MS(ESI+APCI；多模式):518[M+H]+；HPLC:98.8％(％AUC)。
实施例41：(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3-(二甲基 氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物41)的合成
步骤1：3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1u)的合成：
在室温下，向1t(5.00g，29.2mmol)在甲醇(200.0mL)中的搅拌溶液中添加二甲胺(40mL)、乙酸(3.00mL)，然后添加10％ Pd/C(3.00g)。将反应混合物在氢气气氛下在室温下搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将所得滤液真空浓缩，得到粗化合物。将粗化合物用6.0N NaOH碱化至pH-10，然后将反应混合物用EtOAc(2×200mL)和盐水(200mL)萃取。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到纯产物3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1u)(3.20g，55％产率)，为棕色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ3.80(brs,2H),3.60(brs,2H),2.96-2.91(m,1H),2.03(s,6H),1.37(s,9H)；MS(ESI+APCI；多模式):201.0[M+H]+。
步骤2：N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺(1v)的合成：
在室温下，向1u(0.38g，1.90mmol)在CH2Cl2(15.0mL)中的搅拌溶液中添加4.0M二噁烷在HCl(4.0mL)中的溶液，并将反应混合物搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。将粗产物与MTBE(15mL)一起研磨，真空过滤，得到N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺(1v)(380mg，粗产物)，为浅黄色固体。粗化合物直接用于下一步骤。MS(ESI+APCI；多模式):101[M+H]+。
步骤3：(5-溴吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(1w)的制备：
在室温下，向1o(0.20g，0.99mmol)在CH2Cl2(10.0mL)中的搅拌溶液中添加1v(0.20mg，1.48mmol)、HOBt(0.20g，1.48mmol)、EDC·HCl(0.28g，1.48mmol)，然后添加Et3N(0.65mL，4.95mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(50.0mL)稀释并用CH2Cl2(2×20.0mL)萃取，用饱和NaHCO3(50.0mL)和盐水(50.0mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用10％甲醇的CH2Cl2溶液。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到(5-溴吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(1w)(0.07g，25％产率)，为浅黄色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.84(d,J＝2.4Hz,1H),8.78(d,J＝1.6Hz,1H),8.23(t,J＝4.0Hz,1H),4.32-4.30(m,1H),4.19-4.15(m,1H),4.09-4.05(m,1H),3.86-3.82(m,1H),3.10-3.06(m,1H),2.08(s,6H)；MS(ESI+APCI；多模式):284[M+H]+。
步骤4：(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物41)的合成：
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1w(0.07g，0.24mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1n(0.07g，0.16mmol)、Cs2CO3(0.15g，0.48mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.009g，0.011mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到(5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物41)(50.0mg，60％产率)，为浅绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.13(d,J＝2.4Hz,1H),8.84(d,J＝2.0Hz,1H),8.75(s,1H),8.49(d,J＝1.6Hz,1H),8.35-8.29(m,2H),8.02-7.96(m,2H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),4.72(t,J＝8.0Hz,2H),4.39(t,J＝8.0Hz,2H),4.21-4.18(m,1H),4.13-4.11(m,1H),3.90-3.86(m,1H),3.22(t,J＝8.0Hz,2H),3.12-3.07(m,1H),2.09(s,6H)；MS(ESI+APCI；多模式):503[M+H]+；HPLC:97.9(％AUC)。
实施例42：(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3- (二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物42)的合成
步骤1：(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(1x)的制备：
在室温下，向1r(0.20g，0.92mmol)在DMF(10.0mL)中的搅拌溶液中添加1v(0.18g，1.38mmol)、HOBt(0.18g，1.38mmol)、EDC·HCl(0.26g，1.38mmol)，然后添加i-Pr2EtN(0.80mL，4.60mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(2×50mL)萃取，用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用10％甲醇的CH2Cl2溶液。将含有产物的级分合并并真空浓缩，得到(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(1x)(0.09g，32％产率)，为浅黄色液体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.12(d,J＝2.4Hz,1H),7.72(d,J＝2.4Hz,1H),6.84(s,2H),4.25(brs,1H),4.10-4.02(m,2H),3.81(brs,1H),3.06-3.02(m,1H),2.07(s,6H)；MS(ESI+APCI；多模式):299[M+H]+。
步骤2：(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物42)的合成：
在室温下在N2气氛下，向置于密封管中的1x(0.085g，0.28mmol)在1,4-二噁烷(5.00mL)中的搅拌溶液中添加1n(0.08g，0.18mmol)、Cs2CO3(0.17g，0.54mmol)在H2O(1.00mL)中的溶液，并将混合物用Ar(g)脱气10分钟。一次性添加Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(0.01g，0.012mmol)，并将反应混合物加热至120℃持续16小时。将反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用CH3OH-CH2Cl2(1-10％)作为洗脱剂，得到产物，将其与甲醇一起研磨，真空过滤并干燥，得到(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮(化合物42)(75.0mg，72％产率)，为浅绿色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.72(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.26(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(dd,J＝10.4Hz,J＝7.2Hz,1H),7.96-7.91(m,2H),7.83(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),6.93(s,2H),4.69-4.66(m,2H),4.31-4.21(m,1H),4.14-4.04(m,2H),3.98-3.84(m,1H),3.25-3.19(m,2H),3.17-3.03(m,1H),2.07(s,6H)；MS(ESI+APCI；多模式):518[M+H]+；HPLC:98.3(％AUC)。
实施例43：5-(4-吲哚啉-1-基喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(化合物43)的合成
步骤1：6-溴-4-吲哚啉-1-基-喹唑啉(1y)的合成
向6-溴-4-氯喹唑啉(200mg，821.40μmol，1当量)在i-PrOH(2mL)中的溶液中添加吲哚啉(97.88mg，821.40μmol，92.34μL，1当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。得到6-溴-4-吲哚啉-1-基-喹唑啉(1y)(300mg，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝328.0。
步骤2：5-(4-吲哚啉-1-基喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(化合物43)的合成
向6-溴-4-吲哚啉-1-基-喹唑啉(140.88mg，431.90μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加(2-氨基嘧啶-5-基)硼酸(60mg，431.90μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(31.60mg，43.19μmol，0.1当量)和Cs2CO3(422.17mg，1.30mmol，3当量)。将混合物用N2吹扫1分钟，然后将混合物在N2气氛下在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤得到滤液，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：3％-30％，8分钟)。得到5-(4-吲哚啉-1-基喹唑啉-6-基)嘧啶-2-胺(化合物43)(17.34mg，46.01μmol，10.65％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.96(s,1H),8.89(s,2H),8.57(d,J＝1.4Hz,1H),8.42(dd,J＝1.7,8.8Hz,1H),8.24(br d,J＝7.4Hz,1H),8.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.4Hz,1H),7.40-7.35(m,1H),7.31-7.25(m,1H),4.93(br t,J＝7.4Hz,2H),3.29(br t,J＝7.3Hz,2H)。MS(M+H)+＝341.1。
实施例44：5-[4-(6-甲基吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物44)的合 成
步骤1：6-溴-4-(6-甲基吲哚啉-1-基)喹唑啉(1z)的合成
向6-溴-4-吲哚啉-1-基-喹唑啉(200mg，821.40μmol，1当量)在i-PrOH(2mL)中的溶液中添加6-甲基吲哚啉(109.40mg，821.40μmol，1当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。得到6-溴-4-(6-甲基吲哚啉-1-基)喹唑啉(1z)(350mg，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝340.2。
步骤2：5-[4-(6-甲基吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物44)的合成
向1z(146.94mg，431.90μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的溶液中添加(2-氨基嘧啶-5-基)硼酸(60mg，431.90μmol，1当量)、Cs2CO3(422.17mg，1.30mmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(31.60mg，43.19μmol，0.1当量)。将混合物用N2吹扫1分钟，并在N2气氛下在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，得到滤液。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：20％-50％，10分钟)。得到5-[4-(6-甲基吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物44)(1.69mg，4.56μmol，1.06％产率，95.62％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.71(s,1H),8.63(s,2H),8.22(d,J＝1.8Hz,1H),8.17(dd,J＝1.9,8.7Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.31(s,1H),7.22(d,J＝7.5Hz,1H),6.90(s,2H),6.85-6.81(m,1H),4.52(t,J＝7.9Hz,2H),3.14(br t,J＝7.8Hz,2H),2.25(s,3H)。MS(M+H)+＝355.1。
实施例45：5-[4-(6-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物45)的合成
步骤1：6-溴-4-(6-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(1aa)的合成
向6-溴-4-吲哚啉-1-基-喹唑啉(200mg，821.40μmol，1当量)在i-PrOH(2mL)中的溶液中添加6-氟吲哚啉(112.66mg，821.40μmol，1当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。得到6-溴-4-(6-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(化合物1aa)(345mg，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝344.2。
步骤2：5-[4-(6-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物45)的合成
向1aa(200mg，581.09μmol，1当量)在DMF(3mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加(2-氨基嘧啶-5-基)硼酸(80.73mg，581.09μmol，1当量)、Cs2CO3(567.99mg，1.74mmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(42.52mg，58.11μmol，0.1当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液直接纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 100*40mm*5μm；流动相：[水(0.1％ TFA)-ACN]；B％：5％-35％，8分钟)。得到5-[4-(6-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物45)(5.86mg，12.40μmol，2.13％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.89(s,1H),8.75(s,2H),8.46-8.40(m,1H),8.32(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.85-7.75(m,1H),7.42(dd,J＝6.0,8.0Hz,1H),7.13-6.89(m,3H),4.84(br t,J＝7.8Hz,2H),3.22(br t,J＝7.6Hz,2H)。MS(M+H)+＝359.1。
实施例46：5-[4-(5,6-二氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物46)的 合成
步骤1：6-溴-4-(5,6-二氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(1ab)的合成
向6-溴-4-氯-喹唑啉(200mg，821.40μmol，1当量)在i-PrOH(2mL)中的溶液中添加5,6-二氟吲哚啉(127.44mg，821.40μmol，1当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。得到6-溴-4-(5,6-二氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(1ab)(368mg，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝362.2。
步骤2：5-[4-(5,6-二氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物46)的合成
向1ab(200mg，552.23μmol，1当量)在DMF(3mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加(2-氨基嘧啶-5-基)硼酸(76.72mg，552.23μmol，1当量)、Cs2CO3(539.78mg，1.66mmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(40.41mg，55.22μmol，0.1当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入H2O+MEOH(1:1，30mL)中，在20℃下搅拌3小时。过滤，并将滤饼真空浓缩。得到5-[4-(5,6-二氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物46)(162.60mg，426.11μmol，77.16％产率，98.63％纯度)，为灰色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.71(br s,3H),8.30(br s,1H),8.21-8.14(m,1H),7.97-7.88(m,1H),7.84-7.72(m,1H),7.50-7.36(m,1H),6.90(br s,2H),4.69(br s,2H),3.19(br s,2H)。MS(M+H)+＝377.1。
实施例47：5-[4-(7-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物47)的合成
步骤1：6-溴-4-(7-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(1ac)的合成
向6-溴-4-氯-喹唑啉(200mg，821.40μmol，1当量)在i-PrOH(2mL)中的溶液中添加7-氟吲哚啉(112.66mg，821.40μmol，1当量)。将混合物在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物。得到6-溴-4-(7-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉(1ac)(353mg，粗品)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝344.2。
步骤2：5-[4-(7-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物47)的合成
向1ac(200mg，581.09μmol，1当量)在DMF(3mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加(2-氨基嘧啶-5-基)硼酸(80.73mg，581.09μmol，1当量)、Cs2CO3(567.99mg，1.74mmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(42.52mg，58.11μmol，0.1当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：15％-45％，7分钟)。得到5-[4-(7-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-2-胺(化合物47)(5.81mg，14.72μmol，2.53％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.99(s,1H),8.88(s,2H),8.47(d,J＝1.5Hz,1H),8.43(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),8.08(d,J＝8.8Hz,1H),7.35-7.28(m,2H),7.21(s,1H),4.85(br t,J＝7.3Hz,2H),3.29(br t,J＝7.4Hz,2H)。MS(M+H)+＝359.1。
实施例48：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉- 3-甲腈(化合物48)的合成
步骤1：6-溴-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(2d)的合成
将1j(380mg，2.21mmol，1当量)和6-溴-4-氯喹-3-甲腈(592.39mg，2.21mmol，1当量)在i-PrOH(5mL)中的溶液在80℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。得到化合物6-溴-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(800mg，1.99mmol，89.72％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝404.1。
步骤2：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉-3-甲腈(化合物48)的合成
向1g(182.61mg，745.07μmol，1当量)在DMF(5mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加6-2d(300mg，745.07μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(54.52mg，74.51μmol，0.1当量)和Cs2CO3(728.27mg，2.24mmol，3当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液直接纯化。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：30％-60％，10分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹啉-3-甲腈(化合物48)(21.29mg，43.72μmol，5.87％产率，98.03％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.07(s,1H),8.85(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(d,J＝2.0Hz,1H),8.37(br d,J＝8.8Hz,1H),8.34(s,1H),8.25(d,J＝8.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),6.90(d,J＝6.1Hz,1H),4.63-4.56(m,1H),4.34(br d,J＝8.4Hz,1H),3.43-3.22(m,2H)。MS(M+H)+＝441.1。
实施例49：6-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化 合物49)的合成
向1d(103.51mg，745.07μmol，1当量)在DMF(5mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加2d(300mg，745.07μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(54.52mg，74.51μmol，0.1当量)和Cs2CO3(728.28mg，2.24mmol，3当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：30％-60％，10分钟)。得到6-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物49)(31.24mg，65.95μmol，8.85％产率，95.69％纯度，HCl)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.11(s,1H),8.92(s,2H),8.38-8.29(m,2H),8.28-8.22(m,1H),7.45(br d,J＝8.9Hz,1H),6.98(br d,J＝5.8Hz,1H),4.69(br d,J＝6.6Hz,1H),4.30(br d,J＝8.4Hz,1H),3.32(br t,J＝8.0Hz,2H)。MS(M+H)+＝417.1。
实施例50：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5,6-二甲氧基-3-吡啶基)喹啉-3-甲 腈(化合物50)的合成
步骤1：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹啉-3-甲腈(2e)的合成
向2d(3.5g，8.69mmol，1当量)在二噁烷(1mL)中的溶液中添加AcOK(2.56g，26.08mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(709.86mg，869.25μmol，0.1当量)和1l(2.65g，10.43mmol，1.2当量)，将混合物用Ar吹扫，将反应在115℃下搅拌4小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。TLC(PE:EtOAc＝3:1，Rf＝0.35)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。将反应混合物冷却至室温并用水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。将合并的有机物用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速柱纯化(ISCO 80g二氧化硅，40％-60％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度30分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)喹啉-3-甲腈(2e)(2.2g，4.89mmol，56.28％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝450.2
步骤2：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5,6-二甲氧基-3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化合物50)的合成
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和5-溴-2,3-二甲氧基-吡啶(72.73mg，333.55μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：55％-77％，7分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5,6-二甲氧基-3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化合物50)(54.69mg，105.22μmol，31.55％产率，95.69％纯度，HCl)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.04(s,1H),8.31(br d,J＝8.92Hz,1H),8.20(d,J＝8.68Hz,1H),8.14(s,1H),8.04(d,J＝1.71Hz,1H),7.36-7.50(m,2H),6.85(d,J＝6.11Hz,1H),4.31-4.59(m,2H),3.90(s,3H),3.83(s,3H),3.18-3.47(m,2H)。MS(M+H)+＝461.0
实施例51：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-3-吡啶 基]喹啉-3-甲腈(化合物51)的合成
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇(72.07mg，333.55μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：32％-50％，7分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-3-吡啶基]喹啉-3-甲腈(化合物51)(70mg，131.49μmol，39.42％产率，93.05％纯度，HCl)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.26(s,1H),9.13(s,1H),8.92(s,1H),8.76(s,1H),8.53(d,J＝1.34Hz,1H),8.46(dd,J＝8.80,1.59Hz,1H),8.32(d,J＝8.80Hz,1H),7.48-7.78(m,1H),7.44(d,J＝8.80Hz,1H),7.02(d,J＝6.11Hz,1H),4.62-4.72(m,1H),4.26-4.35(m,1H),3.32(br t,J＝7.95Hz,2H),1.56(s,6H)MS(M+H)+＝459.1。
实施例52：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6- 基)喹啉-3-甲腈(化合物52)的合成
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(2.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和6-溴-2-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶(70.73mg，333.55μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)和通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150*30mm*5um；流动相：[水(0.1％ TFA)-ACN]；B％：25％-65％，8分钟)纯化两次。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(2-甲基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹啉-3-甲腈(化合物52)(3.95mg，8.68μmol，2.60％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 9.05(s,1H),8.73(s,1H),8.34-8.40(m,2H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝8.66Hz,1H),7.42(d,J＝8.91Hz,1H),6.84(d,J＝6.15Hz,1H),4.47-4.58(m,1H),4.31-4.41(m,1H),3.30-3.38(m,2H),2.68(s,3H)。MS(M+H)+＝459.1
实施例53：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3H-三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹啉- 3-甲腈(化合物53)的合成
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(2.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和6-溴-3H-三唑并[4,5-b]吡啶(66.38mg，333.55μmol，1当量)，将混合物在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：15％-45％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3H-三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹啉-3-甲腈(化合物53)(16.56mg，37.39μmol，11.21％产率，99.76％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.98-9.09(m,2H),8.78(br s,1H),8.36-8.47(m,2H),8.27(d,J＝9.26Hz,1H),7.42(d,J＝8.88Hz,1H),6.88(d,J＝6.25Hz,1H),4.59(td,J＝9.22,6.82Hz,1H),4.31(d,J＝8.00Hz,1H),2.54(s,2H)。MS(M+H)+＝442.1
实施例54：6-(2-氨基-1,3-苯并噁唑-5-基)-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉- 3-甲腈(化合物54)
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和5-溴-1,3-苯并噁唑-2-胺(71.06mg，333.55μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，将液体真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：35％-55％，7分钟)。得到6-(2-氨基-1,3-苯并噁唑-5-基)-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物54)(20.05mg，39.56μmol，11.86％产率，97.15％纯度，HCl)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(s,1H),8.62(br s,1H),8.27-8.32(m,1H),8.21-8.26(m,1H),8.18-8.21(m,1H),7.51-7.59(m,2H),7.43(dd,J＝16.81,8.50Hz,2H),6.94(d,J＝6.11Hz,1H),4.51-4.57(m,1H),4.41-4.49(m,1H),3.18-3.43(m,2H)。MS(M+H)+＝456.0
实施例55：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹 啉-3-甲腈(化合物55)的合成
向2e(150mg，333.55μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(326.03mg，1.00mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.41mg，33.35μmol，0.1当量)和6-溴-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶(70.73mg，333.55μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，将液体真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：20％-50％，8分钟)，得到粗产物(30mg)，将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：35％-65％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹啉-3-甲腈(化合物55)(14.95mg，29.99μmol，8.99％产率，98.55％纯度，HCl)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.16(s,1H),8.91(d,J＝1.83Hz,1H),8.56(s,1H),8.44-8.51(m,2H),8.29-8.37(m,2H),7.47(d,J＝8.92Hz,1H)7.07(d,J＝6.11Hz,1H)4.68(br d,J＝7.95Hz,1H)4.33-4.50(m,1H)4.16(s,3H)3.33(br d,J＝3.67Hz,2H)。MS(M+H)+＝455.0
实施例56：6-[6-(3-氨基氧杂环丁烷-3-基)-3-吡啶基]-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉- 1-基)喹啉-3-甲腈(化合物56)的合成
步骤1：2-甲基-N-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙烷-2-亚磺酰胺(1ad)的合成
向氧杂环丁烷-3-酮(2g，27.75mmol，1当量)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.36g，27.75mmol，1当量)在EtOH(30mL)中的溶液中添加四乙氧基钛(6.33g，27.75mmol，5.76mL，1当量)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。减压浓缩反应混合物，得到残余物。将残余物通过快速柱(ISCO 40g二氧化硅，10％-60％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1/1，Rf＝0.70)。得到2-甲基-N-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙烷-2-亚磺酰胺(1ad)(1.4g，7.99mmol，28.78％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm 5.54-5.67(m,2H),5.44-5.53(m,2H),1.18-1.20(m,9H)。MS(M+H)+＝176.1
步骤2：N-[3-(5-溴-2-吡啶基)氧杂环丁烷-3-基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(1ae)的合成
将2,5-二溴吡啶(830.02mg，3.50mmol，1当量)溶于甲苯(5mL)中，将反应混合物冷却至-60℃，然后滴加正丁基锂(2.5M，2.05mL，1.46当量)并将混合物搅拌10分钟。添加1ad(700mg，3.99mmol，1.14当量)的0.5mL甲苯(3mL)溶液，并将反应混合物在-60℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物用MeOH(水溶液，5mL)淬灭，然后将反应混合物减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(12g Sepa 二氧化硅快速柱，洗脱剂为0-100％乙酸乙酯/石油醚梯度@50mL/min)。基于TLC(PE:EA＝1:1，Rf＝0.20)。得到N-[3-(5-溴-2-吡啶基)氧杂环丁烷-3-基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(1ae)(1g，3.00mmol，85.64％产率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.75(d,J＝2.32Hz,1H),8.12(dd,J＝8.44,2.45Hz,1H),7.55(d,J＝8.44Hz,1H),5.08(d,J＝6.11Hz,1H),4.86-4.94(m,2H),4.82(d,J＝6.23Hz,1H),4.44-4.51(m,1H),1.15(s,9H)。(M+H)+＝333.1
步骤3：3-(5-溴-2-吡啶基)氧杂环丁烷-3-胺(1af)的合成
在0℃下向1ae(330mg，990.27μmol，1当量)在MeOH(3mL)中的溶液中滴加HCl/EtOAc(4M，505.04μL，2.04当量)，将混合物在0℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物在EtOAc(50mL)溶剂和水(50mL)之间分配。得到3-(5-溴-2-吡啶基)氧杂环丁烷-3-胺(1af)(100mg，436.54μmol，44.08％产率)，为黄色油状物。(M+H)+＝228.1
步骤4：6-[6-(3-氨基氧杂环丁烷-3-基)-3-吡啶基]-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物56)的合成
向2e(78.53mg，174.62μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(170.68mg，523.86μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(12.78mg，17.46μmol，0.1当量)和1af(40mg，174.62μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相：[水(0.04％NH4HCO3)-ACN]；B％：30％-55％，10分钟)，得到6-[6-(3-氨基氧杂环丁烷-3-基)-3-吡啶基]-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹啉-3-甲腈(化合物56)(8.87mg，18.80μmol，10.76％产率，100％纯度)，为棕色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.03-9.06(m,1H),8.93(d,J＝1.88Hz,1H),8.28-8.37(m,2H),8.24(d,J＝8.63Hz,1H),8.17(dd,J＝8.32,2.44Hz,1H),7.78(d,J＝8.38Hz,1H),7.42(br d,J＝8.76Hz,1H),6.81-6.89(m,1H),4.87-4.97(m,2H),4.59(d,J＝5.50Hz,2H),4.52(br d,J＝6.63Hz,1H),4.30-4.39(m,1H),3.27-3.29(m,2H),2.76(br s,2H)
1H NMR(400MHz,DMSO+D2O-d6)δppm 8.98-9.03(m,1H),8.89(d,J＝1.88Hz,1H),8.28-8.33(m,1H),8.26(s,1H),8.20-8.25(m,1H),8.14(dd,J＝8.32,2.31Hz,1H),7.75(d,J＝8.25Hz,1H),7.40(br d,J＝8.88Hz,1H),6.75-6.82(m,1H),4.89(d,J＝5.63Hz,2H),4.59(d,J＝5.63Hz,2H),4.44-4.54(m,1H),4.29-4.39(m,1H),3.17-3.42(m,2H)
(M+H)+＝472.2
实施例57：3-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]氧杂环 丁烷-3-胺(化合物57)的合成
向1af(13.34mg，58.22μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(56.90mg，174.66μmol，3当量)、1n(24.78mg，58.22μmol，1当量)和Pd(dppf)Cl2(4.26mg，5.82μmol，0.1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％NH4HCO3)-ACN]；B％：25％-55％，8分钟)，得到3-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]氧杂环丁烷-3-胺(化合物57)(1.85mg，4.13μmol，7.09％产率，100％纯度)，为棕色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(d,J＝2.25Hz,1H),8.82(s,1H),8.53(s,1H),8.26-8.40(m,2H),7.99-8.10(m,2H),7.87(d,J＝8.13Hz,1H),7.51(d,J＝9.13Hz,1H),5.00(d,J＝5.63Hz,2H),4.79(br t,J＝8.13Hz,2H),4.67(d,J＝5.75Hz,2H),3.30(br t,J＝7.94Hz,2H),2.82(br s,2H)
1H NMR(400MHz,DMSO+D2O-d6)δppm 8.89-8.93(m,1H),8.63(s,1H),8.33(d,J＝1.75Hz,1H),8.16-8.21(m,1H),8.14(dd,J＝8.32,2.44Hz,1H),7.90(d,J＝8.75Hz,1H),7.81(d,J＝6.75Hz,1H),7.69(d,J＝8.38Hz,1H),7.32(d,J＝8.76Hz,1H),4.82(d,J＝5.88Hz,2H),4.57-4.62(m,2H),4.52(d,J＝5.88Hz,2H),3.12(br t,J＝7.94Hz,2H)。
实施例58：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(2-甲氧基嘧啶-5-基)喹唑啉(化合物 58)的合成
向5-溴-2-甲氧基-嘧啶(99.90mg，528.55μmol，1.5当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加1n(150mg，352.37μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um柱；45％-65％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(2-甲氧基嘧啶-5-基)喹唑啉(化合物58)(13.90mg，33.40μmol，9.48％产率，98.01％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,T＝273+80K)δ＝9.04(s,2H),8.76(s,1H),8.43(s,1H),8.25(d,J＝8.2Hz,1H),7.99(d,J＝9.5Hz,1H),7.92(d,J＝6.8Hz,1H),7.39(d,J＝9.0Hz,1H),4.70(t,J＝8.3Hz,2H),4.02(s,3H),3.29-3.21(m,2H)。MS(M+H)+＝408.0。
实施例59：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-1,8-萘啶-4-酮(化 合物59)的合成
向6-溴-1H-1,8-萘啶-4-酮(48.11mg，213.77μmol，1.3当量)在二噁烷(3mL)、H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1n(70mg，164.44μmol，1当量)、Cs2CO3(160.73mg，493.32μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(12.03mg，16.44μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌4小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 100*40mm*5μm柱；10％-40％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，8分钟梯度)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-1,8-萘啶-4-酮(化合物59)(17.90mg，31.65μmol，19.25％产率，98.65％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.42(br s,1H),9.24(d,J＝2.5Hz,1H),9.01(s,1H),8.80(d,J＝2.6Hz,1H),8.71-8.65(m,1H),8.52(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),8.35(d,J＝6.8Hz,1H),8.01(dd,J＝5.2,8.1Hz,2H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),6.22-6.15(m,1H),4.96(br t,J＝7.6Hz,2H),3.29(br t,J＝7.5Hz,2H)。MS(M+H)+＝444.0。
实施例60：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-甲基磺酰基-吡啶- 2-胺(化合物60)的合成
步骤1：3-甲基磺酰基吡啶-2-胺(1ag)的合成
将3-溴吡啶-2-胺(2g，11.56mmol，1当量)、甲亚磺酸钠(1.53g，15.03mmol，1.3当量)、CuI(220.16mg，1.16mmol，0.1当量)、NaOH(92.47mg，2.31mmol，0.2当量)和L-脯氨酸(266.18mg，2.31mmol，0.2当量)放入微波管中的DMSO(15mL)中。将密封管用N2鼓泡1分钟，并在微波下在160℃下加热1小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.39)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(200mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速柱(ISCO20g二氧化硅，50％-70％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度15分钟)纯化。得到3-甲基磺酰基吡啶-2-胺(1ag)(500mg，2.90mmol，25.12％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.26(dd,J＝1.9,4.8Hz,1H),7.89(dd,J＝1.8,7.8Hz,1H),6.76(dd,J＝4.8,7.9Hz,1H),6.74-6.67(m,2H),3.17(s,3H)。
步骤2：5-溴-3-甲基磺酰基-吡啶-2-胺(1ah)的合成
将1ag(200mg，1.16mmol，1当量)、NBS(227.38mg，1.28mmol，1.1当量)在ACN(2mL)中的溶液在20℃下搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。得到5-溴-3-甲基磺酰基-吡啶-2-胺(1ah)(200mg，796.49μmol，68.58％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝253.0
步骤3：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-甲基磺酰基-吡啶-2-胺(化合物60)的合成
向1ah(44.24mg，176.18μmol，1.5当量)在H2O(0.4mL)、DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加1n(50mg，117.46μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75μmol，0.1当量)、Cs2CO3(114.81mg，352.37μmol，3当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液直接纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10uM柱；30％-55％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)，得到20mg粗产物。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um柱；15％-45％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，9分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-甲基磺酰基-吡啶-2-胺(化合物60)(13.10mg，22.43μmol，19.10％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.92(s,1H),8.77(d,J＝2.5Hz,1H),8.46(s,1H),8.33(d,J＝8.7Hz,1H),8.24(d,J＝2.5Hz,1H),8.19(br d,J＝6.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),7.05(br s,2H),4.85(br t,J＝7.7Hz,2H),3.28(s,3H),3.27-3.23(m,2H)。MS(M+H)+＝470.0。
实施例61：1-(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基) 乙-1-酮(化合物61)的合成
步骤1：1-(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)乙酮(1ai)的合成
向1-(2-氨基-3-吡啶基)乙酮(100mg，734.48μmol，1当量)在ACN(1.5mL)中的搅拌溶液中添加NBS(137.26mg，771.20μmol，1.05当量)，将混合物在20℃下搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将残余物通过快速柱(ISCO 10g二氧化硅，50％-60％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度15分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1/1，Rf＝0.33)。得到1-(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)乙酮(1ai)(110mg，511.52μmol，69.64％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.26(d,J＝2.3Hz,1H),8.08(d,J＝2.3Hz,1H),2.57(s,3H)。MS(M+H)+＝217.0。
步骤2：1-(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(化合物61)的合成
向1ai(60mg，279.01μmol，1.3当量)在二噁烷(3mL)、H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1n(91.36mg，214.62μmol，1当量)、Cs2CO3(209.78mg，643.87μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(15.70mg，21.46μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Synergi C18 150*25*10um柱；15％-35％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，8分钟梯度)。得到1-(2-氨基-5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(化合物61)(35.70mg，63.67μmol，29.66％产率，97.71％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.96(s,1H),8.73(d,J＝2.3Hz,1H),8.57(d,J＝2.4Hz,1H),8.54-8.51(m,1H),8.45(br d,J＝8.8Hz,1H),8.30-8.23(m,1H),7.98(br d,J＝8.8Hz,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,1H),4.91(br t,J＝7.6Hz,2H),3.28(br t,J＝7.5Hz,2H),2.68(s,3H)。MS(M+H)+＝434.0。
实施例62：2-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-2-醇 (化合物62)的合成
向1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(4mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇(76.14mg，352.37μmol，1.5当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge Prep OBD C18150*40mm*10um柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到2-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-2-醇(化合物62)(64.90mg，143.86μmol，61.24％产率，96.40％纯度)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.85(br s,1H),8.75(br s,2H),8.41(br s,1H),8.26(br d,J＝8.3Hz,1H),8.17(br s,1H),8.00(brd,J＝8.1Hz,1H),7.90(br d,J＝5.4Hz,1H),7.43(br d,J＝8.1Hz,1H),5.30(br s,1H),4.69(br s,2H),3.23(br d,J＝7.3Hz,2H),1.53(br s,6H)。MS(M+H)+＝435.1。
实施例63：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-苯并噁唑-2-胺 (化合物63)的合成
向1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(4mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1,3-苯并噁唑-2-胺(75.07mg，352.37μmol，1.5当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm柱；20％-50％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，10分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-苯并噁唑-2-胺(化合物63)(62.00mg，109.85μmol，46.76％产率，96.72％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.97(s,1H),8.49(s,1H),8.38(br d,J＝8.6Hz,1H),8.27(br d,J＝6.6Hz,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,1H),7.68-7.64(m,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,1H),7.52-7.46(m,1H),7.46-7.39(m,1H),4.91(br t,J＝7.5Hz,2H),3.29(br t,J＝7.6Hz,2H)。MS(M+H)+＝432.0。
实施例64：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-苯并咪唑-2-胺(化 合物64)的合成
向1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(4mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-1H-苯并咪唑-2-胺(64.76mg，305.39μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并将反应混合物在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um柱；10％-40％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，9分钟梯度)，得到20mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 100*40mm*5μm柱；10％-43％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，8分钟梯度)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-苯并咪唑-2-胺(化合物64)(10.40mg，19.09μmol，8.12％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.73(br s,2H),8.85(d,J＝2.7Hz,1H),8.57(br d,J＝7.6Hz,2H),8.40(br s,1H),8.27(br d,J＝8.4Hz,1H),8.05(br s,1H),7.99(d,J＝8.7Hz,1H),7.72(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),4.77(br t,J＝6.7Hz,2H),3.28-3.23(m,2H)。MS(M+H)+＝431.0。
实施例65：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-5,6-二氢环戊并[c]吡 啶-7-酮(化合物65)的合成
步骤1：3-(3,5-二溴-4-吡啶基)丙酸乙酯(1aj)的合成
在-60℃下向3,5-二溴-4-甲基-吡啶(2g，7.97mmol，1当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中添加LDA(2M，4.38mL，1.1当量)，并将混合物在-60℃下搅拌0.5小时。添加2-溴乙酸乙酯(3.33g，19.92mmol，2.21mL，2.5当量)，将混合物在-60℃下搅拌3小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝10:1，Rf＝0.44)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。在-60℃下将反应混合物缓慢添加到饱和NH4Cl(10mL)中。将水相用乙酸乙酯(10mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速柱(ISCO 40g二氧化硅，8％-10％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度15分钟)纯化。得到3-(3,5-二溴-4-吡啶基)丙酸乙酯(1aj)(1.5g，4.45mmol，55.85％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.59(s,2H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),3.33-3.25(m,2H),2.61-2.54(m,2H),1.29(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤2：4-溴-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-酮(1ak)的合成
在-60℃下向1aj(1.4g，4.15mmol，1当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中缓慢添加n-BuLi(2.5M，3.32mL，2当量)。将混合物在-60℃下搅拌4小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，Rf＝0.31)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。在-60℃下向混合物中添加水(10mL)。将水相用乙酸乙酯(30mL*3)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速柱纯化(ISCO 40g二氧化硅，15％-20％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度15分钟)，得到4-溴-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-酮(1ak)(150mg，707.40μmol，17.03％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝8.91(s,1H),8.82(s,1H),3.17-3.09(m,2H),2.81-2.73(m,2H)。
步骤3：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-酮(化合物65)的合成
向1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(4mL)和H2O(0.8mL)中的搅拌溶液中添加4-溴-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-酮(64.76mg，305.39μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX150*30mm*5um柱；20％-50％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，9分钟梯度)。得到4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-酮(化合物65)(49.20mg，86.85μmol，36.97％产率，96.19％纯度，TFA)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.02-8.97(m,1H),8.95(s,2H),8.54-8.49(m,1H),8.37-8.28(m,2H),8.10-8.02(m,1H),7.58-7.49(m,1H),4.91-4.81(m,2H),3.34-3.21(m,4H),2.77-2.70(m,2H)。MS(M+H)+＝431.0
实施例66：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-6,7-二氢-5H-环戊并 [c]吡啶-7-醇(化合物66)的合成
步骤1：4-溴-6,7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-7-醇(1al)的合成
在0℃下向1ak(400mg，1.89mmol，1当量)在EtOH(5mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(107.05mg，2.83mmol，1.5当量)。将混合物在20℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um柱；1％-30％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，9分钟梯度)。得到4-溴-6,7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-7-醇(1al)(200mg，609.60μmol，32.32％产率，TFA)，为白色固体。
步骤2：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-6,7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-7-醇(化合物66)的合成
添加1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(4mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液，然后添加1al(92.48mg，281.89μmol，1.2当量，TFA)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2吹扫1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，12分钟梯度)。得到4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-6,7-二氢-5H-环戊并[c]吡啶-7-醇(化合物66)(22.10mg，49.89μmol，21.24％产率，97.72％纯度)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.76(s,1H),8.57(d,J＝8.5Hz,2H),8.22(s,1H),8.08(dd,J＝1.7,8.7Hz,1H),7.97(d,J＝8.6Hz,1H),7.90(d,J＝6.7Hz,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),5.53(d,J＝5.7Hz,1H),5.25(q,J＝6.2Hz,1H),4.64(br t,J＝8.0Hz,2H),3.20(br t,J＝7.9Hz,2H),3.08-2.90(m,2H),2.41-2.31(m,1H),1.89-1.77(m,1H)。MS(M+H)+＝433.0
实施例67：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-7-甲基-5,6-二氢环戊 并[c]吡啶-7-醇(化合物67)的合成
步骤1：4-溴-7-甲基-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-醇(1am)的合成
在-60℃下向1ak(500mg，2.36mmol，1当量)在THF(5mL)中的搅拌溶液中添加MeMgBr(3M，1.18mL，1.5当量)，并将混合物在20℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料剩余，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(10mL)中。将水相用二氯甲烷(20mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速柱(ISCO 10g二氧化硅，60％-70％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝0/1，Rf＝0.40)。得到4-溴-7-甲基-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-醇(1am)(300mg，1.32mmol，55.78％产率)，为绿色油状物。
步骤2：4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-7-甲基-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-醇(化合物67)的合成
向1n(100mg，234.91μmol，1当量)在二噁烷(5mL)和H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加1am(64.30mg，281.89μmol，1.2当量)、Pd(dppf)Cl2(17.19mg，23.49μmol，0.1当量)、Cs2CO3(229.62mg，704.74μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，12分钟梯度)。得到4-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-7-甲基-5,6-二氢环戊并[c]吡啶-7-醇(化合物67)(28.60mg，62.96μmol，26.80％产率，98.38％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.76(s,1H),8.58(s,1H),8.54(s,1H),8.23(s,1H),8.08(br d,J＝1.1Hz,1H),7.99(s,1H),7.90(d,J＝7.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),5.30(s,1H),4.64(br t,J＝8.2Hz,2H),3.25-3.17(m,2H),3.08-2.90(m,2H),2.08(t,J＝6.8Hz,2H),1.54(s,3H)。MS(M+H)+＝447.0
实施例68：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-1-酮 (化合物68)的合成
步骤1：5-溴-N-甲氧基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1an)的合成
将5-溴吡啶-3-甲酸(5g，24.75mmol，1当量)、N-甲氧基甲胺的溶液盐酸盐(2.66g，27.23mmol，1.1当量)、EDCI(5.22g，27.23mmol，1.1当量)、TEA(2.76g，27.23mmol，3.79mL，1.1当量)、HOBt(1.00g，7.43mmol，0.3当量)在DMF(50mL)中的溶液在25℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速柱(ISCO 40g二氧化硅，0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2/1，Rf＝0.45)。得到5-溴-N-甲氧基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1an)(3.1g，12.65mmol，51.10％产率)，为无色油状物。MS(M+H)+＝245.0。
步骤2：1-(5-溴-3-吡啶基)乙酮(1ao)的合成
在-78℃下向1an(3.1g，12.65mmol，1当量)在THF(30mL)中的搅拌溶液中添加MeMgBr(3M，6.32mL，1.5当量)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到1-(5-溴-3-吡啶基)乙烯酮(1ao)(2.5g，12.50mmol，98.80％产率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝200.0。
步骤3：3-溴-5-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烯基)吡啶(1ap)的合成
在0℃下向1ao(1g，5.00mmol，1当量)、DIEA(969.16mg，7.50mmol，1.31mL，1.5当量)在CH2Cl2(15mL)中的搅拌溶液中添加[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]三氟甲磺酸酯(2.64g，10.00mmol，2.30mL，2当量)。将混合物在0℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(20mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到3-溴-5-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烯基)吡啶(1ap)(2.4g，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝316.1。
步骤4：[1-(5-溴-3-吡啶基)环丙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷(1aq)的合成
在0℃下向1ap(0.5g，1.59mmol，1当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加ZnEt2(1M，7.95mL，5当量)、CH2I2(2.13g，7.95mmol，641.70μL，5当量)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(200mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到[1-(5-溴-3-吡啶基)环丙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷(1aq)(300mg，913.74μmol，57.44％产率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝328.1
步骤5：1-(5-溴-3-吡啶基)丙-1-酮(1ar)的合成
将1aq(250mg，761.45μmol，1当量)在HCl/MeOH(4M，5.00mL，26.27当量)中的溶液在25℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Welch Xtimate C18 100*25mm*3μm；1％-20％乙腈的0.05％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到1-(5-溴-3-吡啶基)丙-1-酮(1ar)(200mg，粗品)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝216.0
步骤6：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-1-酮(化合物68)的合成
向1n(117.64mg，276.35μmol，1当量)在H2O(0.2mL)和DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加1ar(76.90mg，359.25μmol，1.3当量，HCl)、Cs2CO3(270.12mg，829.04μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(20.22mg，27.63μmol，0.1当量)，并将混合物用N2吹扫1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，12分钟梯度)，得到20mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(DaicelChiralPak IG(250*30mm,10um)；28％-58％乙腈的0.04％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-1-酮(化合物68)(5.7mg，12.14μmol，4.39％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.30(d,J＝2.1Hz,1H),9.21(d,J＝1.9Hz,1H),9.07(s,1H),8.74(d,J＝1.4Hz,1H),8.69(t,J＝2.0Hz,1H),8.57(dd,J＝1.6,8.7Hz,1H),8.45(d,J＝6.6Hz,1H),8.17(d,J＝8.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),5.01(br t,J＝7.6Hz,2H),3.30(br t,J＝7.4Hz,2H),3.23(q,J＝7.1Hz,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)。MS(M+H)+＝433.0
实施例69：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基] 环丙醇(化合物69)的合成
步骤1：5-溴-N-甲氧基-N,2-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(1as)的合成
将5-溴-2-甲基-吡啶-3-甲酸(1g，4.63mmol，1当量)、N-甲氧基甲胺盐酸盐(903.05mg，9.26mmol，2当量)、HATU(2.11g，5.55mmol，1.2当量)、DIEA(2.39g，18.52mmol，3.23mL，4当量)在DMF(20mL)中的溶液在25℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速柱(ISCO 40g二氧化硅，0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2/1，Rf＝0.45)。得到5-溴-N-甲氧基-N,2-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(1as)(1.1g，4.25mmol，91.72％产率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝259.0
步骤2：1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙酮(1at)的合成
在-78℃下向1as(1.1g，4.25mmol，1当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中添加MeMgBr(3M，2.12mL，1.5当量)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。在0℃下将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙烯酮(1at)(0.8g，3.74mmol，88.03％产率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝215.9
步骤3：1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙烯基氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(1au)的合成
在0℃下向1at(300mg，1.40mmol，1当量)、DIEA(271.69mg，2.10mmol，366.16μL，1.5当量)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中添加[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]三氟甲磺酸酯(740.93mg，2.80mmol，644.29μL，2当量)。将混合物在0℃下搅拌2小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3:1，Rf＝0.76)显示起始材料被完全消耗，并有新的斑点形成。将反应混合物倒入水(20mL)中。将水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)乙烯基氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(1au)(0.48g，粗品)，为黄色油状物。
步骤4：[1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)环丙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷(5)的合成
在0℃下向ZnEt2(1M，6.09mL，5当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加TFA(694.59mg，6.09mmol，451.03μL，5当量)、CH2I2(1.63g，6.09mmol，491.42μL，5当量)、1au(400mg，1.22mmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(100mL)中。将水相用乙酸乙酯(200mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到[1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)环丙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷(1av)(500mg，粗品)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝344.1
步骤5：1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)环丙醇(1aw)的合成
将1av(400mg，1.17mmol，1当量)在HCl/MeOH(4M，3.84mL，13.13当量)中的溶液在25℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Welch Xtimate C18 100*25mm*3μm；1％-20％乙腈的0.05％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)环丙醇(1aw)(60mg，226.80μmol，19.41％产率，HCl)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.79(d,J＝2.3Hz,1H),8.27(d,J＝2.1Hz,1H),2.76(s,3H),1.06-1.00(m,2H),1.00-0.94(m,2H)。MS(M+H)+＝228.0
步骤6：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基]环丙醇(化合物69)的合成
向1aw(60mg，226.80μmol，1当量，HCl)在DMF(1mL)和H2O(0.2mL)中的搅拌溶液中添加1n(96.55mg，226.80μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2(16.60mg，22.68μmol，0.1当量)、Cs2CO3(221.69mg，680.41μmol，3当量)，将混合物用N2吹扫1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相：[水(10Mm NH4HCO3)-ACN]；B％：28％-48％，10分钟)。得到1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基]环丙醇(化合物69)(10.3mg，22.30μmol，9.83％产率，96.75％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.74-8.79(m,2H),8.36(s,1H),8.25(br d,J＝8.63Hz,1H),7.98(d,J＝8.63Hz,1H),7.93(d,J＝2.00Hz,1H),7.84(d,J＝6.63Hz,1H),7.45(d,J＝8.88Hz,1H),5.82(s,1H),4.66(br t,J＝8.07Hz,2H),3.22(brt,J＝7.94Hz,2H),2.71(s,3H),0.99-1.06(m,2H),0.89-0.98(m,2H)。MS(M+H)+＝447.0
实施例70：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基] 丙-1-醇(化合物70)的合成
步骤1：1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)丙-1-醇(1ax)的合成
然后在0℃下向5-溴-2-甲基-吡啶-3-甲酸乙酯(1g，4.10mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加EtMgBr(3M，4.10mL，3当量)、Ti(OEt)4(1.40g，6.15mmol，1.27mL，1.5当量)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入饱和NH4Cl(10mL)中。将水相用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速柱(ISCO 20g二氧化硅，20-24％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5/1，Rf＝0.48)。得到1-(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)丙-1-醇(1ax)(300mg，1.30mmol，31.82％产率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝230.0。
步骤2：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基]丙-1-醇(化合物70)的合成
向1ax(50mg，217.30μmol，1.2当量)在二噁烷(3mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1n(77.08mg，181.08μmol，1当量)、Cs2CO3(177.00mg，543.24μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(13.25mg，18.11μmol，0.1当量)。将混合物用N2吹扫1分钟，并将混合物在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 100*40mm*5μm柱；5％-30％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，8分钟梯度)。得到1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基]丙-1-醇(化合物70)(70.50mg，124.48μmol，68.75％产率，99.40％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.08-8.88(m,2H),8.65-8.45(m,2H),8.40(br d,J＝8.5Hz,1H),8.25-8.14(m,1H),8.09-8.00(m,1H),7.52(br d,J＝8.8Hz,1H),4.84(br d,J＝6.8Hz,3H),3.27(br t,J＝7.5Hz,2H),2.73-2.63(m,3H),1.80-1.62(m,2H),0.94(br t,J＝7.3Hz,3H)。MS(M+H)+＝449.1。
实施例71：7-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-1H-吡咯并[3, 4-c]吡啶-3-酮(化合物71)的合成
步骤1：5-溴-4-(溴甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(1ay)的合成
将5-溴-4-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(250mg，1.09mmol，1当量)、NBS(212.75mg，1.20mmol，1.1当量)、AIBN(53.53mg，326.00μmol，0.3当量)在CCl4(5mL)中的溶液在90℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(10mL)中。将水相用二氯甲烷(10mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到5-溴-4-(溴甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(1ay)(250mg，粗品)，为黄色固体。MS(M+H)+＝309.9。
步骤2：7-溴-2-甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮(1az)的合成
将甲基1ay(240mg，776.81μmol，1当量)、甲胺盐酸盐(150mg，2.22mmol，2.86当量)、TEA(314.42mg，3.11mmol，432.49μL，4当量)在DMF(3mL)中的溶液在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物倒入水(10mL)中。将水相用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。将合并的有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到7-溴-2-甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮(1az)(150mg，660.63μmol，85.04％产率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝229.0。
步骤3：7-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮(化合物71)的合成
向1n(216.32mg，508.17μmol，1当量)在H2O(0.5mL)和DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加1az(150mg，660.63μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2(37.18mg，50.82μmol，0.1当量)、Cs2CO3(496.72mg，1.52mmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(Phenome nex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；20％-50％乙腈的10mM碳酸氢铵溶液和0.05％铵水溶液，8分钟梯度)，得到30mg粗产物。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um柱；25％-55％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到7-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3-酮(化合物71)(6.7mg，15.03μmol，2.96％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.96(s,1H),8.94-8.90(m,1H),8.78(s,1H),8.36(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.95(d,J＝6.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),4.75(s,2H),4.67(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(br t,J＝7.9Hz,2H),3.09(s,3H)。MS(M+H)+＝446.0
实施例72：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)喹唑 啉(化合物72)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(1mL)和H2O(0.2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(137.77mg，422.84μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)和5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(27.77mg，140.95μmol，1当量)，将反应物在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：10％-30％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物72)(1.81mg，4.00μmol，2.84％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.91(br s,1H),9.05(s,1H),8.70(d,J＝2.25Hz,1H)8.63(d,J＝1.50Hz,1H),8.52(dd,J＝8.75,1.63Hz,1H),8.41-8.47(m,2H)8.06(d,J＝8.75Hz,1H),7.53-7.64(m,2H)6.58(dd,J＝3.31,1.81Hz,1H)5.02(br t,J＝7.50Hz,2H)3.33-3.34(m,2H)。MS(M+H)+＝416.0
实施例73：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲腈 (化合物73)的合成
向1n(150mg，352.37μmol，1当量)在二噁烷(5mL)、H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加2-氨基-5-溴-吡啶-3-甲腈(76.75mg，387.61μmol，1.1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，将滤液通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；15％-50％乙腈的0.04％盐酸水溶液，7分钟梯度)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲腈(化合物73)(15.50mg，31.47μmol，8.93％产率，92.02％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.03(s,1H),8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.57-8.50(m,1H),8.50-8.38(m,3H),8.05(d,J＝8.8Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),7.32(br s,1H),4.99(brt,J＝7.5Hz,2H),3.30(br t,J＝7.4Hz,2H)。MS(M+H)+＝417.1。
实施例74：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-2-胺(化合物74) 的合成
向5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(72.66mg，330.14μmol，1当量)在二噁烷(3mL)、H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加1k(150mg，396.17μmol，1.2当量)、Cs2CO3(322.70mg，990.42μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(24.16mg，33.01μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在120℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 100*40mm*3μm；1％-25％乙腈的0.04％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-2-胺(化合物74)(82.20mg，191.47μmol，58.00％产率，99.76％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.02(s,1H),8.63-8.52(m,2H),8.49-8.36(m,4H),8.14(d,J＝8.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),7.20(d,J＝9.3Hz,1H),4.98(br t,J＝7.5Hz,2H),3.30(br t,J＝7.4Hz,2H)。MS(M+H)+＝392.1。
实施例75：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2- d]嘧啶(化合物75)的合成
步骤1：4,6-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶(4a)的合成
将6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(200mg，1.10mmol，1当量)在POCl3(2mL)中的溶液在90℃下搅拌12小时。LCMS显示反应物被完全消耗，并且检测到具有所需化合物的一个主峰。减压浓缩反应混合物，得到残余物。将粗残余物倒入乙酸乙酯(10mL)中，并将混合物添加到冰水(10mL)中，将混合物在0℃下通过饱和碳酸氢钠碱化至pH＝8～9，然后将混合物用乙酸乙酯(15mL*4)萃取，将有机物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱(ISCO10g二氧化硅，0-20％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度10分钟)纯化。得到4,6-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶(4a)(130mg，粗品)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝9.14(s,1H),8.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H)。
步骤2：6-氯-4-(6-氯吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4b)的合成
向4a(125mg，624.92μmol，1当量)在i-PrOH(3mL)中的溶液中添加1b(95.99mg，624.92μmol，1当量)，将混合物在90℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需ms的一个主峰。将反应混合物过滤，并将滤饼用i-PrOH(1mL*3)洗涤并减压干燥，得到粗产物。得到6-氯-4-(6-氯吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4b)(130mg，409.87μmol，65.59％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.81(s,2H),8.74(s,1H),7.81(br d,J＝8.4Hz,1H),7.34-7.29(m,1H),7.27-7.23(m,1H),5.15(br t,J＝7.7Hz,2H),3.37(br t,J＝7.5Hz,2H)。MS(M+H)+＝317.0。
步骤3：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物75)的合成
向密封管中添加：4b(130mg，409.87μmol，1当量)、1g(130.59mg，532.83μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(33.47mg，40.99μmol，0.1当量)、K3PO4(3M，409.87μL，3.0当量)和DMF(0.4mL)。然后将密封管用氮气鼓泡30秒并加热至100℃。然后将密封管在100℃下搅拌20小时。LCMS显示起始材料剩余，并且形成所需产物。将混合物倒入水(10mL)中，过滤。将滤饼与MeOH(10mL)一起在25℃下研磨15分钟，将滤饼溶解在DMSO(10mL)中。将溶液通过制备型HPLC纯化：柱：Waters Xbridge BEH C18 100*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-60％，8分钟。得到4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物75)(13mg，32.18μmol，7.85％产率，98.96％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.89(s,1H),9.38(s,1H),9.02(s,1H),8.78(s,1H),8.62-8.57(m,1H),8.55(s,1H),8.33-8.29(m,2H),7.38-7.36(m,1H),7.14-7.10(m,1H),5.15(t,J＝8Hz,2H),3.28(s,2H)。MS(M+H)+＝400.0
实施例76：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶 并[3,2-d]嘧啶(化合物76)的合成
步骤1：6-氯-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4c)的合成
向4,6-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶(140mg，699.91μmol，1当量)在i-PrOH(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1j(120.10mg，699.91μmol，1当量)。然后将混合物在80℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且形成所需产物。将混合物过滤，得到滤饼。得到6-氯-4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4c)(200mg，596.72μmol，85.26％产率)，为黄色固体。
步骤2：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物76)的合成
向密封管中添加：4c(200mg，596.72μmol，1当量)、1g(146.25mg，596.72μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(48.73mg，59.67μmol，0.1当量)、K3PO4(2M，895.09μL，3.0当量)和DMF(4mL)。然后将密封管用氮气鼓泡30秒并加热至100℃。然后将混合物在100℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且形成所需产物。将混合物倒入水(10mL)中，过滤。将滤饼与乙酸乙酯(10mL)一起在25℃下研磨15分钟，将滤饼溶解在DMSO(10mL)中。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：20％-60％，10分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物76)(75.11mg，158.72μmol，26.60％产率，96.0％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,T＝273+80K)δ＝9.36-9.35(m,1H),9.01-9.00(m,1H),8.98(s,1H),8.81(d,J＝6.8Hz,1H),8.71(d,J＝8.8Hz,1H),8.50(d,J＝4.8Hz,1H),8.29(s,1H),7.55-7.47(m,1H),5.30(t,J＝8Hz,2H),3.41(br t,J＝8Hz,2H)。MS(M+H)+＝418.1。
实施例77：4-(6-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2- d]嘧啶(化合物77)的合成
步骤1：6-氯-4-(6-氟吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4d)的合成
向4a(200mg，999.88μmol，1当量)在i-PrOH(3mL)中的溶液中添加6-氟吲哚啉(137.14mg，999.88μmol，1当量)，将混合物在90℃下搅拌2小时。LC-MS显示反应物1被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤。将滤饼用i-PrOH(1mL*3)洗涤，然后减压干燥，得到粗产物。得到6-氯-4-(6-氟吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4d)(278mg，924.46μmol，92.46％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝9.02(d,J＝8.8Hz,1H),8.80(s,1H),8.52(d,J＝10.8Hz,1H),7.85(d,J＝8.8Hz,1H),7.38–7.34(m,1H),7.08-7.00(m,1H),5.21(t,J＝8Hz,2H),3.39(t,J＝7.6Hz,2H)。MS(M+H)+＝301.1。
步骤2：4-(6-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物77)的合成
向密封管中添加：4c(200mg，665.08μmol，1当量)、1g(211.90mg，864.60μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(54.31mg，66.51μmol，0.1当量)、K3PO4(3M，665.08μL，3当量)和DMF(5mL)。然后将密封管用氮气鼓泡30秒并加热至100℃。然后将密封管在100℃下搅拌10小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且形成所需产物。将反应混合物倒入水(10mL)中，过滤，将滤饼用水(1mL*3)洗涤，得到粗产物。将粗产物倒入乙酸乙酯(5mL)中并在25℃下搅拌20分钟。然后将混合物过滤，将滤饼用乙酸乙酯(1mL*3)洗涤，得到粗产物。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge Prep OBD C18150*40mm*10um柱；25％-70％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到4-(6-氟吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物77)(95.63mg，236.99μmol，35.63％产率，95.01％纯度)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d,T＝273+80K)δ＝13.67s(s,1H),9.38(s,1H),8.99(s,1H),8.78(s,1H),8.58-8.55(m,1H),8.36-8.28(m,3H),7.38-7.34(m,1H),6.90-68.85(m,1H),5.20(t,J＝8Hz,2H),3.32(t,J＝7.6Hz,2H)。MS(M+H)+＝384.2。
实施例78：4-(6-溴吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2- d]嘧啶(化合物78)的合成
步骤1：6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇的合成
将3-氨基-6-氯-吡啶-2-甲酰胺(12g，69.94mmol，1当量)在原甲酸三乙酯(106.92g，721.46mmol，120.00mL，10.32当量)中的溶液在150℃下搅拌20小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.02并且二氯甲烷:甲醇＝10:1，Rf＝0.52)表明反应物1被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将反应混合物过滤，并将滤饼用甲基叔丁基醚(5mL*3)洗涤，将滤饼减压干燥，得到粗产物(13g)。将粗产物倒入乙酸乙酯(50mL)中并在20℃下搅拌30分钟，过滤并将滤饼用乙酸乙酯(5mL*3)洗涤并真空干燥，得到粗产物(12g)。然后将粗产物添加到甲醇(30mL)中，将混合物加热至80℃并在80℃下搅拌30分钟。然后将混合物在80℃下过滤，将滤饼用甲醇(5mL*3)洗涤并真空干燥，得到粗产物。得到6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(10g，55.07mmol，78.75％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.76(s,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H)。
步骤2：6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(4d)的合成
向6-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(1.5g，8.26mmol，1当量)在DMF(21mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(674.61mg，826.09μmol，0.1当量)、K3PO4(4M，6.20mL，3当量)、1g(3.04g，12.39mmol，1.5当量)。然后将混合物在100℃下搅拌10小时。LC-MS显示反应物1被完全消耗，并且检测到所需的MS。将搅拌的反应混合物倒入水(50mL)中，过滤。将滤饼倒入MeOH(20mL)中，将混合物在20℃下搅拌20分钟，过滤并将滤饼减压干燥，得到粗产物。得到6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(4d)(1.5g，5.68mmol，68.72％产率)，为紫色固体。MS(M+H)+＝265.2。
步骤3：4-氯-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4e)的合成
向6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-醇(100mg，378.44μmol，1当量)在POCl3(2mL)中的搅拌悬浮液中添加TEA(153.18mg，1.51mmol，210.70μL，4.0当量)。然后将混合物在100℃下搅拌1.5小时。通过LCMS监测混合物。在QC下，所需产物容易地变为R1。真空除去POCl3。得到4-氯-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4e)(100mg，粗品)，为棕色胶状物。
步骤4：4-(6-溴吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物78)的合成
向4e(100mg，353.75μmol，1当量)在i-PrOH(3mL)中的搅拌溶液中添加6-溴吲哚啉(70.06mg，353.75μmol，1.0当量)。然后将混合物在80℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且形成所需产物。将混合物浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：30％-55％，10分钟)。得到4-(6-溴吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物78)(7.97mg，15.26μmol，4.31％产率，99.03％纯度，HCl)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.39(s,1H),9.06(s,1H),9.01(s,1H),8.79(s,1H),8.74(d,J＝8.8Hz,1H),8.42(d,J＝9.2Hz,1H),8.33(s,1H),7.41(s,2H),5.25(t,J＝8Hz,2H),3.34(t,J＝8Hz,2H)。MS(M+H)+＝443.9,446.0。
实施例79：4-(6-甲基吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3, 2-d]嘧啶(化合物79)的合成
步骤1：6-氯-4-(6-甲基吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4f)的合成
向4a(200mg，999.88μmol，1当量)在i-PrOH(3mL)中的溶液中添加6-甲基吲哚啉(133.17mg，999.88μmol，1当量)，将混合物在90℃下搅拌2小时。LC-MS显示约2％的反应物1剩余，并且检测到58％的所需化合物。将反应混合物过滤。将滤饼用异丙醇(1mL*3)洗涤并减压干燥，得到粗产物。6-氯-4-(6-甲基吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(4f)(230mg，775.05μmol，77.52％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝9.01(d,J＝8.8Hz,1H),8.76(s,1H),8.52(s,1H),7.81(d,J＝8.8Hz,1H),7.32-7.29(m,1H),7.17(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(t,J＝7.6Hz,2H),3.37(t,J＝7.6Hz,2H),2.49(s,3H)。MS(M+H)+＝297.1。
步骤2：4-(6-甲基吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物79)的合成
向密封管中添加：4f(200mg，673.96μmol，1当量)、1g(214.73mg，876.15μmol，1.3当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(55.04mg，67.40μmol，0.1当量)、K3PO4(3M，673.96μL，3当量)和DMF(5mL)。然后将密封管用氮气鼓泡30秒并加热至100℃。然后将密封管在100℃下搅拌10小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且形成所需产物。将反应混合物倒入水(10mL)中并过滤。将滤饼用水(1mL*3)洗涤，得到粗产物。将粗产物倒入乙酸乙酯(5mL)中并在25℃下搅拌20分钟。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18250*50mm*10μm柱；15％-55％乙腈的0.04％盐酸水溶液，10分钟梯度)。得到4-(6-甲基吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶(化合物79)(111.12mg，236.89μmol，35.15％产率，96.43％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝9.40(s,1H),9.07(s,1H),9.01(s,1H),8.77(d,J＝8.8Hz,1H),8.48(s,1H),8.43(d,J＝8.8Hz,1H),8.34(s,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.12(d,J＝7.6Hz,1H),5.26(t,J＝7.6Hz,2H),3.35(t,J＝7.6Hz,2H),2.40(s,3H)。MS(M+H)+＝380.0。
实施例80：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5- 基)喹唑啉(化合物80)的合成
向1n(65mg，152.69μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的溶液中添加K3PO4(97.23mg，458.08μmol，3当量)、Pd(PPh3)4(17.64mg，15.27μmol，0.1当量)和5-溴-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(48.57mg，229.04μmol，1.5当量)，将反应在100℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(10mmol NH4HCO3)-ACN]；B％：25％-55％，8分钟)，得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)喹唑啉(化合物80)(3.57mg，8.29μmol 5.43％产率，100％纯度)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.57-12.91(m,1H),8.93(d,J＝2.1Hz,1H),8.76(s,1H),8.60(d,J＝2.1Hz,1H),8.44(d,J＝1.6Hz,1H),8.33(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),8.00(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(d,J＝6.6Hz,1H),7.45(d,J＝8.9Hz,1H),4.71(t,J＝8.1Hz,2H),3.23(br t,J＝7.9Hz,2H),2.57(s,3H)。MS(M+H)+＝431.1
实施例81：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3H-三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹唑 啉(化合物81)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(0.5mL)和H2O(0.1mL)中的溶液中添加Cs2CO3(137.77mg，422.84μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)和6-溴-3H-三唑并[4,5-b]吡啶(42.07mg，211.42μmol，1.5当量)，将反应物在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(10mmol NH4HCO3)-ACN]；B％：30％-60％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3H-三唑并[4,5-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物81)(3.84mg，9.19μmol，6.52％产率，100％纯度)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.11(d,J＝1.9Hz,1H),8.80-8.71(m,2H),8.51(s,1H),8.35(dd,J＝1.6,8.6Hz,1H),8.04-7.92(m,2H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),4.74(br t,J＝8.0Hz,2H),3.22(br t,J＝7.9Hz,2H)。MS(M+H)+＝418.1
实施例82：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-甲基-嘧啶-2-胺(化 合物82)的合成
向1n(150mg，352.37μmol，1当量)在二噁烷(4mL)、H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-4-甲基-嘧啶-2-胺(72.88mg，387.61μmol，1.1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 250*50mm*10μm；10％-40％乙腈的0.04％盐酸水溶液，10分钟梯度)，得到80mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-甲基-嘧啶-2-胺(化合物82)(54.70mg，134.45μmol，38.16％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.74(s,1H),8.16(s,1H),8.04(s,1H),7.92(s,2H),7.83(d,J＝6.6Hz,1H),7.42(d,J＝8.9Hz,1H),6.73(s,2H),4.60(br t,J＝8.0Hz,2H),3.19(br t,J＝7.9Hz,2H),2.31(s,3H)。MS(M+H)+＝407.1。
实施例83：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-(三氟甲基)嘧啶-2- 胺(化合物83)的合成
向5-溴-4-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(102.33mg，422.84μmol，1.2当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加1n(150mg，352.37μmol，1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液直接纯化。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(WelchXtimate C18150*25mm*5um；25％-45％乙腈的0.04％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(化合物83)(38.30mg，77.02μmol，21.86％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ＝9.01(s,1H),8.50(s,1H),8.43-8.31(m,2H),8.06(br d,J＝8.9Hz,1H),8.01-7.96(m,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,1H),4.81(br t,J＝7.4Hz,2H),3.26(br t,J＝7.3Hz,2H)。MS(M+H)+＝461.1。
实施例84：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-甲氧基-嘧啶-2-胺 (化合物84)的合成
向5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-胺(79.08mg，387.61μmol，1.1当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加1n(150mg，352.37μmol，1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在120℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Luna C18 100*30mm*5um；1％-30％乙腈的0.04％盐酸水溶液，8分钟梯度)，得到50mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um柱；40％-75％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-4-甲氧基-嘧啶-2-胺(化合物84)(26.20mg，61.86μmol，17.55％产率，99.83％纯度)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.71(s,1H),8.24(s,2H),8.04(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.82(d,J＝6.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),6.85(s,2H),4.60(br t,J＝7.9Hz,2H),3.88(s,3H),3.21(br t,J＝7.8Hz,2H)。MS(M+H)+＝423.1。
实施例85：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-4-醇(化 合物85)的合成
向化合物84(30mg，70.95μmol，1当量)在AcOH(3mL)中的搅拌溶液中添加HBr(775.75mg，3.55mmol，520.64μL，37％纯度，50当量)，将混合物在65℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。通过添加饱和NaOH将残余物调节至pH～9。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；5％-45％乙腈的0.04％盐酸水溶液，7分钟梯度)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]嘧啶-4-醇(化合物85)(19.19mg，41.63μmol，58.68％产率，96.60％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.01(s,1H),8.75(s,1H),8.44-8.37(m,1H),8.35-8.27(m,2H),8.22(s,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),4.87(br t,J＝7.6Hz,2H),3.30(br t,J＝7.4Hz,2H)。MS(M+H)+＝409.0。
实施例86：6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,2,4-三嗪-3-胺(化合 物86)的合成
向1n(150mg，352.37μmol，1当量)在二噁烷(5mL)、H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-1,2,4-三嗪-3-胺(92.49mg，528.55μmol，1.5当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；30％-50％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到6-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基)-1,2,4-三嗪-3-胺(化合物86)(12.3mg，31.23μmol，8.86％产率，99.27％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.97(s,1H),8.73(d,J＝7.8Hz,2H),8.54(brd,J＝8.8Hz,1H),8.01-7.92(m,2H),7.51-7.40(m,3H),4.70(br t,J＝7.9Hz,2H),3.24(brt,J＝7.9Hz,2H)。MS(M+H)+＝394.1。
实施例87：[2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲 醇(化合物87)的合成
向(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)甲醇(85.85mg，422.84μmol，1.2当量)在二噁烷(5mL)、H2O(1mL)中的搅拌溶液中添加1n(150mg，352.37μmol，1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物真空浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Kromasil C18(250*50mm*10μm)柱；25％-55％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，10分钟梯度)。得到[2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲醇(化合物87)(29.10mg，68.27μmol，19.37％产率，98.97％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.71(s,1H),8.31(d,J＝2.3Hz,1H),8.23-8.19(m,1H),8.18-8.12(m,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.84-7.79(m,1H),7.76(d,J＝6.6Hz,1H),7.43(d,J＝8.8Hz,1H),5.98(s,2H),5.24(t,J＝5.4Hz,1H),4.63(br t,J＝8.0Hz,2H),4.44(d,J＝5.4Hz,2H),3.22(br t,J＝8.0Hz,2H)。MS(M+H)+＝422.1。
实施例88：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲酰胺 (化合物88)的合成
向2-氨基-5-溴-吡啶-3-甲酰胺(91.35mg，422.84μmol，1.2当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加1n(150mg，352.37μmol，1当量)、Cs2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，将滤液通过制备型HPLC纯化(Kromasil C18(250*50mm*10μm)柱；25％-55％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，10分钟梯度)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物88)(33.80mg，74.80μmol，21.23％产率，96.23％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.71(s,1H),8.57(d,J＝2.0Hz,1H),8.39-8.31(m,2H),8.31-8.22(m,1H),8.22-8.06(m,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.91-7.83(m,1H),7.43(br d,J＝8.9Hz,4H),4.68(br t,J＝8.1Hz,2H),3.22(br t,J＝7.8Hz,2H)。MS(M+H)+＝435.1。
实施例89：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基- 吡啶-3-甲酰胺(化合物89)的合成
向1k(150mg，396.17μmol，1.1当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加2-氨基-N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-甲酰胺(104.86mg，360.15μmol，1当量)、Cs2CO3(352.04mg，1.08mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(26.35mg，36.02μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm柱；10％-40％乙腈的0.04％盐酸水溶液，7分钟梯度)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物89)(13.90mg，26.00μmol，7.22％产率，93.42％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.98(s,1H),8.63(d,J＝2.1Hz,1H),8.52(s,1H),8.44-8.36(m,1H),8.36-8.23(m,2H),8.06(d,J＝8.9Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),4.92(br t,J＝7.6Hz,2H),3.29(br t,J＝7.6Hz,2H),2.99(br d,J＝16.5Hz,6H)。MS(M+H)+＝463.1。
实施例90：3-氨基-6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-吡嗪-2-酮 (化合物90)的合成
向1n(150mg，352.37μmol，1当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加3-氨基-6-溴-1H-吡嗪-2-酮(80.34mg，422.84μmol，1.2当量)、CS2CO3(344.43mg，1.06mmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(25.78mg，35.24μmol，0.1当量)。将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在100℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，将滤液通过制备型HPLC纯化(Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；10％-30％乙腈的0.04％盐酸水溶液，8分钟梯度)。得到3-氨基-6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1H-吡嗪-2-酮(化合物90)(14.10mg，31.46μmol，8.93％产率，99.36％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,T＝273+80K)δ＝8.90(s,1H),8.47(s,1H),8.29-8.22(m,2H),8.05(d,J＝8.8Hz,1H),7.49(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(s,1H),4.87(t,J＝7.8Hz,2H),3.32(t,J＝7.8Hz,2H)。MS(M+H)+＝409.0。
实施例91：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物 91)的合成
向3a(100mg，234.95μmol，1当量)在二噁烷(0.5mL)、H2O(0.1mL)中的搅拌溶液中添加5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(58.29mg，234.95μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(19.19mg，23.49μmol，0.1当量)、K3PO4(149.61mg，704.84μmol，3当量)，将混合物用N2鼓泡1分钟，并将混合物在90℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应物过滤，将滤液通过制备型HPLC纯化(Phenomene x Gemini-NX 150*30mm*5um柱；25％-55％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-2-甲酰胺(化合物91)(13.39mg，31.89μmol，13.57％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.06(s,1H),8.77(s,1H),8.53(s,1H),8.41(d,J＝8.4Hz,1H),8.33(d,J＝8.3Hz,1H),8.19-8.12(m,2H),8.03-7.98(m,2H),7.71(br s,1H),7.45(d,J＝9.2Hz,1H),4.75(s,2H),3.27-3.20(m,2H)。MS(M+H)+＝420.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.19(s,1H),8.78(s,1H),8.70(dd,J＝1.4,4.8Hz,1H),8.48(s,1H),8.24(d,J＝8.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.04(d,J＝8.3Hz,2H),7.97(d,J＝4.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(t,J＝8.0Hz,2H),3.21(br t,J＝7.9Hz,2H)。MS(M+H)+＝417.1。
实施例92：4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6- 基)喹唑啉(化合物92)的合成
将1n(200mg，469.82μmol，1当量)、6-溴-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶(99.62mg，469.82μmol，1当量)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(57.55mg，70.47μmol，0.15当量)和Na2CO3(2M，704.74μL，3当量)溶于微波管中的H2O(0.5mL)、ACN(5mL)中。将混合物用N2鼓泡1分钟。并在微波下将密封管在100℃下加热30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤饼直接纯化。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(PhenomenexGemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；30％-60％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，8分钟梯度)。得到4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)-6-(1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物92)(36.80mg，82.19μmol，17.49％产率，96.23％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,T＝273+80K)δ＝8.95(s,1H),8.79(s,1H),8.53(s,1H),8.47(s,1H),8.37(d,J＝8.8Hz,1H),8.28(s,1H),8.04(d,J＝8.8Hz,1H),7.89(d,J＝6.6Hz,1H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),4.71(t,J＝8.2Hz,2H),4.16(s,3H),3.26(t,J＝8.0Hz,2H)。MS(M+H)+＝431.1。
实施例93：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-咪唑并[1,5-a]嘧啶-3-基-喹唑啉(化合物93)的合成
向3-溴咪唑并[1,5-a]嘧啶(93.03mg，469.82μmol，1当量)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加1n(200mg，469.82μmol，1当量)、K3PO4(199.46mg，939.65μmol，2当量)、二叔丁基(环戊基)膦二氯钯铁(30.62mg，46.98μmol，0.1当量)，将混合物用Ar鼓泡，并将混合物在80℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需的MS。将反应混合物过滤，并将滤液直接纯化。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm柱；33％-53％乙腈的10mM碳酸氢铵水溶液，6分钟梯度)，得到80mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(Phenomenex Luna C18200*40mm*10um柱；22％-52％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液，10分钟梯度)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-咪唑并[1,5-a]嘧啶-3-基-喹唑啉(化合物93)(38.50mg，92.36μmol，19.66％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.33-9.23(m,1H),8.96(s,1H),8.79(d,J＝2.1Hz,1H),8.68-8.58(m,2H),8.40(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),8.31(br d,J＝6.6Hz,1H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(br s,1H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),4.92(br t,J＝7.8Hz,2H),3.29(br t,J＝7.7Hz,2H))。MS(M+H)+＝417.1。
实施例94：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-吡咯烷- 1-基-甲酮(化合物94)的合成
步骤1：(5-溴-3-吡啶基)-吡咯烷-1-基-甲酮(1ba)的合成
向5-溴吡啶-3-羰基氯(200mg，907.23μmol，1当量)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加吡咯烷(64.52mg，907.23μmol，75.73μL，1当量)、TEA(275.41mg，2.72mmol，378.82μL，3当量)，将反应在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。不纯化，用于下一步骤。得到(5-溴-3-吡啶基)-吡咯烷-1-基-甲酮(1ba)(90mg，352.79μmol，38.89％产率)，为黄色固体。
步骤2：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物94)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(3mL)和H2O(0.6mL)中的搅拌溶液中添加1ba(43.15mg，169.14μmol，1.2当量)、Cs2CO3(137.77mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在N2下在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：30％-50％，7分钟)。得到[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物94)(96.114％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.19(d,J＝1.50Hz,1H),9.04-9.10(m,1H),8.83(s,1H),8.71(s,1H),8.51-8.58(m,1H),8.46(br d,J＝1.63Hz,2H),8.17(d,J＝8.75Hz,1H),7.59(d,J＝8.63Hz,1H),5.01(br t,J＝7.44Hz,2H),3.48-3.53(m,4H),3.30(br t,J＝7.32Hz,2H),1.82-1.95(m,4H)。MS(M+H)+＝474.0
实施例95：[2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]- 吡咯烷-1-基-甲酮(化合物95)的合成
步骤1：(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)-吡咯烷-1-基-甲酮(1bb)的合成
向1r(200mg，921.57μmol，1当量)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加吡咯烷(78.65mg，1.11mmol，92.31μL，1.2当量)、HATU(525.62mg，1.38mmol，1.5当量)和DIEA(357.31mg，2.76mmol，481.55μL，3当量)，将反应在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到(2-氨基-5-溴-3-吡啶基)-吡咯烷-1-基-甲酮(1bb)(210mg，777.42μmol，84.36％产率)，为黄色固体。
步骤2：[2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物95)的合成
向1n(70mg，164.44μmol，1当量)在DMF(1mL)和H2O(0.2mL)中的搅拌溶液中添加1bb(44.42mg，164.44μmol，1当量)、Cs2CO3(160.73mg，493.32μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(12.03mg，16.44μmol，0.1当量)，将反应在N2下在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-30％，8分钟。得到[2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物95)(10.14mg，19.30μmol，11.74％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δppm 8.82(s,1H),8.42(br d,J＝5.75Hz,2H),8.21-8.35(m,2H),8.19(s,1H),7.92(d,J＝8.92Hz,1H),7.43-7.51(m,1H),4.76-4.89(m,2H),3.44-3.56(m,2H),3.31-3.42(m,2H),3.20-3.30(m,2H),1.78-1.89(m,4H)。MS(M+H)+＝489.0
实施例96：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡啶-3-甲酰 胺(化合物96)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(1mL)和H2O(0.2mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(30.31mg，140.95μmol，1当量)、Cs2CO3(137.77mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物96)(9.05mg，19.24μmol，13.65％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.25(d,J＝2.00Hz,1H),9.11-9.17(m,1H),9.09(d,J＝1.75Hz,1H),9.06(s,1H),8.84(s,1H),8.78(d,J＝1.25Hz,1H),8.59(dd,J＝8.69,1.44Hz,1H),8.45(d,J＝6.75Hz,1H),8.18(d,J＝8.75Hz,1H),7.59(d,J＝8.75Hz,1H),5.07(br t,J＝7.57Hz,2H),3.30(br t,J＝7.38Hz,2H),2.84(d,J＝4.38Hz,3H)。MS(M+H)+＝434.0。
实施例97：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡啶- 3-甲酰胺(化合物97)的合成
步骤1：2-氨基-5-溴-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(2)的合成
向1r(200mg，921.57μmol，1当量)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加甲胺盐酸盐(74.67mg，1.11mmol，1.2当量)、HATU(525.62mg，1.38mmol，1.5当量)和DIEA(357.32mg，2.76mmol，481.56μL，3当量)，将反应在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到2-氨基-5-溴-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1bc)(100mg，434.67μmol，47.17％产率)，为黄色固体。
步骤2：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物97)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(3mL)和H2O(0.6mL)中的搅拌溶液中添加1bc(38.91mg，169.14μmol，1.2当量)、K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)和Pd(PPh3)4(16.29mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在N2下在100℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：30％-55％，8分钟)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物97)(4.98mg，10.13μmol，7.19％产率，98.747％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δppm 8.94(s,1H),8.51-8.64(m,3H),8.41(d,J＝9.13Hz,1H),8.35(d,J＝6.75Hz,1H),7.93-8.03(m,1H),7.54(d,J＝8.76Hz,1H),4.86-4.97(m,2H),3.22-3.35(m,2H),2.80(s,3H)。MS(M+H)+＝449.0
实施例98：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N,N-二甲基- 吡啶-3-甲酰胺(化合物98)的合成
向1n(55mg，129.20μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(31.15mg，129.20μmol，1当量)、Cs2CO3(126.29mg，387.61μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(9.45mg，12.92μmol，0.1当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相[柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-65％，10分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(化合物98)(5.06mg，11.00μmol，8.52％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.09-9.18(m,1H),8.95-9.00(m,1H),8.69-8.79(m,2H),8.46-8.53(m,2H),8.29-8.35(m,1H),7.98-8.06(m,1H),7.90-7.97(m,1H),7.39-7.48(m,1H),4.72(t,J＝8.19Hz,2H),3.23(br t,J＝8.00Hz,2H),2.83-2.94(m,1H),0.71-0.78(m,2H),0.58-0.64(m,2H)。MS(M+H)+＝460.2。
实施例99：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡 啶-3-甲酰胺(化合物99)的合成
步骤1：2-氨基-5-溴-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(1bd)的合成
向1r(200mg，921.57μmol，1当量)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加环丙胺(63.14mg，1.11mmol，76.63μL，1.2当量)、HATU(525.62mg，1.38mmol，1.5当量)和DIEA(357.32mg，2.76mmol，481.56μL，3当量)，将反应在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应冷却至环境温度，用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。基于TLC(PE:EtOAc＝2:1，Rf＝0.40)，将残余物通过快速柱纯化(ISCO 20g二氧化硅，30％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)。得到2-氨基-5-溴-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(1bd)(200mg，780.95μmol，84.74％产率)，为白色固体。
步骤2：2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(化合物99)的合成
向1bd(43.32mg，169.14μmol，1.2当量)在DMF(1mL)和H2O(0.2mL)中的搅拌溶液中添加1n(60mg，140.95μmol，1当量)、Pd(PPh3)4(16.29mg，14.09μmol，0.1当量)和K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)，将反应在N2下在100℃下搅拌4小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-65％，10分钟)。得到2-氨基-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡啶-3-甲酰胺(化合物99)(6.24mg，13.14μmol，9.32％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.68-8.75(m,1H),8.50-8.61(m,2H),8.29-8.35(m,1H),8.19-8.27(m,2H),7.95(d,J＝8.76Hz,1H),7.80(d,J＝6.63Hz,1H),7.44(d,J＝8.88Hz,1H),7.21-7.34(m,2H),4.65(t,J＝7.94Hz,2H),3.15-3.26(m,2H),2.76-2.89(m,1H),0.69-0.75(m,2H),0.45-0.62(m,2H)。MS(M+H)+＝475.1
实施例100：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5-羟基-3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化 合物100)的合成
向2e(80mg，177.89μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(173.88mg，533.68μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(13.02mg，17.79μmol，0.1当量)和5-溴吡啶-3-醇(30.95mg，177.89μmol，1当量)。将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：20％-42％，7分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(5-羟基-3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化合物100)(10.95mg，22.29μmol，12.53％产率，92.28％纯度，HCl)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.75(br s,1H)9.09(s,1H)8.76(s,1H)8.46(s,1H)8.42(s,1H)8.33-8.36(m,1H)8.26-8.29(m,1H)8.19(br s,1H)7.43(d,J＝8.92Hz,1H)6.95(d,J＝6.11Hz,1H)4.65(br d,J＝8.44Hz,1H)4.23-4.29(m,1H)3.31(brs,2H).MS(M+H)+＝417.0
实施例101：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-喹啉基)喹啉-3-甲腈(化合物 101)的合成
向2e(80mg，177.89μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加Cs2CO3(173.88mg，533.68μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(13.02mg，17.79μmol，0.1当量)和3-溴喹啉(37.01mg，177.89μmol，23.88μL，1当量)。将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 100*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ TFA)-ACN]；B％：30％-60％，8分钟)，得到粗产物(15mg)。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomene x luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：52％-82％，7分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-喹啉基)喹啉-3-甲腈(化合物101)(9.72mg，19.50μmol，10.96％产率，97.78％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.36(d,J＝2.08Hz,1H),9.08(s,1H),8.92(s,1H),8.45-8.55(m,2H),8.30(d,J＝9.17Hz,1H),8.07-8.19(m,2H),7.90(t,J＝7.34Hz,1H),7.70-7.80(m,1H),7.45(d,J＝8.92Hz,1H),6.96(d,J＝6.23Hz,1H),4.63(q,J＝8.56Hz,1H),4.34(q,J＝8.84Hz,1H),3.29-3.41(m,2H).MS(M+H)+＝451.1。
实施例102：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化合物 102)的合成
向2e(80mg，177.89μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(173.88mg，533.68μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(13.02mg，17.79μmol，0.1当量)和3-溴吡啶(28.11mg，177.89μmol，17.14μL，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：28％-52％，7分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(3-吡啶基)喹啉-3-甲腈(化合物102)(18.8mg，39.78μmol，22.36％产率，92.53％纯度，HCl)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.29(d,J＝1.5Hz,1H),9.11(s,1H),8.88(d,J＝4.5Hz,1H),8.79(br d,J＝8.1Hz,1H),8.54(d,J＝1.8Hz,1H),8.42(dd,J＝2.0,8.7Hz,1H),8.30(d,J＝8.8Hz,1H),8.03(dd,J＝5.5,7.9Hz,1H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),6.97(d,J＝6.1Hz,1H),4.69(br d,J＝8.7Hz,1H),4.26(q,J＝8.4Hz,1H),3.32(br t,J＝8.3Hz,2H)。MS(M+H)+＝401.0
实施例103：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)喹 啉-3-甲腈(化合物103)的合成
向2e(80mg，177.89μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(173.88mg，533.68μmol，3当量)、Pd(dppf)Cl2(13.02mg，17.79μmol，0.1当量)和4-溴-2H-吡唑并[3,4-c]吡啶(35.23mg，177.89μmol，1当量)，将混合物用N2鼓泡，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4-基)喹啉-3-甲腈(化合物103)(2.52mg，5.05μmol，2.84％产率，95.60％纯度，HCl)，为橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.51(br s,1H),9.14(s,1H),8.59(s,1H),8.47-8.39(m,3H),8.37-8.31(m,1H),7.42(d,J＝8.9Hz,1H),6.93(d,J＝6.2Hz,1H),4.52-4.40(m,2H),3.30(br t,J＝8.1Hz,2H)。MS(M+H)+＝441.0
实施例104：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(化 合物104)的合成
向1n(50mg，117.46μmol，1当量)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加6-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(20.27mg，117.46μmol，1当量)、K3PO4(74.80mg，352.37μmol，3当量)和Pd(PPh3)4(13.57mg，11.75μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：15％-50％，8分钟)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(化合物104)(3.28mg，5.88μmol，5.01％产率，98.58％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.69(s,1H),9.24(s,1H),9.04(s,1H),8.89(s,1H),8.70-8.78(m,1H),8.16(br d,J＝6.38Hz,1H),8.07(d,J＝8.76Hz,1H),7.52(d,J＝8.88Hz,1H),4.84(br t,J＝8.00Hz,2H),3.99(s,3H),3.27-3.31(m,2H)。MS(M+H)+＝436.1
实施例105：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酸(化合物 105)的合成
向1n(50mg，117.46μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加6-氯吡嗪-2-甲酸(18.62mg，117.46μmo l，1当量)、K3PO4(74.80mg，352.37μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-AC N]；B％：10％-45％，8分钟)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酸(化合物105)(18.39mg，34.32μmol，29.22％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.65(s,1H),9.20(s,1H),9.03(d,J＝1.38Hz,1H),8.88(s,1H),8.75(dd,J＝8.88,1.50Hz,1H),8.18(d,J＝6.75Hz,1H),8.04(d,J＝8.76Hz,1H),7.50(d,J＝8.75Hz,1H),4.79-4.90(m,2H),3.27(br t,J＝7.69Hz,2H)。MS(M+H)+＝422.0
实施例106：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡嗪-2-甲酰 胺(化合物106)的合成
向化合物104(60mg，137.67μmol，1当量)在THF(2mL)中的搅拌溶液中添加甲胺盐酸盐(13.94mg，206.50μmol，1.5当量)、K2CO3(38.05mg，275.33μmol，2当量)，将反应在20℃下搅拌12小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：20％-50％，8分钟)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-甲基-吡嗪-2-甲酰胺(化合物106)(10.84mg，19.23μmol，13.97％产率，97.35％纯度，TFA)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.65(s,1H),9.17(s,1H),9.12(s,1H),9.03-9.09(m,1H),9.00(dd,J＝8.88,1.38Hz,1H),8.89(s,1H),8.22(d,J＝6.63Hz,1H),8.02(d,J＝8.76Hz,1H),7.51(d,J＝8.88Hz,1H),4.90(br t,J＝7.75Hz,2H),3.27(br t,J＝7.69Hz,2H),2.91(d,J＝4.88Hz,3H)。MS(M+H)+＝435.0
实施例107：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-乙基-吡嗪-2-甲酰 胺(化合物107)的合成
步骤1：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酰氯(1be)的合成
向化合物105(60mg，142.24μmol，1当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加SOCl2(25.38mg，213.37μmol，15.48μL，1.5当量)，将反应在25℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物真空浓缩，得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-羰基氯(1be)(60mg，136.28μmol，95.81％产率)，为黑色油状物。
步骤2：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-乙基-吡嗪-2-甲酰胺(化合物107)的合成
向1be(60mg，136.28μmol，1当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加乙胺(18.43mg，408.85μmol，26.75μL，3当量)和TEA(68.95mg，681.42μmol，94.85μL，5当量)，将反应在25℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-70％，8分钟)，得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-乙基-吡嗪-2-甲酰胺(化合物107)(2.54mg，5.41μmol，3.97％产率，95.65％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.64(s,1H),9.12-9.19(m,2H),8.76-8.83(m,2H),8.18(s,1H),8.10(d,J＝6.88Hz,1H),8.03(d,J＝8.76Hz,1H),7.47(d,J＝8.76Hz,1H),4.85(t,J＝8.13Hz,2H),3.24(br t,J＝7.94Hz,2H),1.47(s,9H)。MS(M+H)+＝477.1
实施例108：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-异丙基-吡嗪-2-甲 酰胺(化合物108)的合成
向甲基化合物104(60mg，137.67μmol，1当量)在THF(2mL)中的搅拌溶液中添加丙-2-胺(12.21mg，206.50μmol，17.74μL，1.5当量)、Al(CH3)3(2M，275.33μL，4当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物用MeOH(2mL)淬灭并过滤，浓缩。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：30％-60％，8分钟)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-异丙基-吡嗪-2-甲酰胺(化合物108)(8.95mg，14.96μmol，10.87％产率，96.43％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.65(s,1H),9.20(s,1H),9.17(s,1H),8.99(br d,J＝8.75Hz,1H),8.91(br s,1H),8.71(br d,J＝8.25Hz,1H),8.22-8.30(m,1H),8.04(d,J＝8.76Hz,1H),7.53(d,J＝8.76Hz,1H),4.86-5.06(m,2H),4.21(br dd,J＝14.57,6.94Hz,1H),3.27(br t,J＝7.63Hz,2H),1.26(d,J＝6.63Hz,6H)。MS(M+H)+＝463.0
实施例109：N-叔丁基-6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲 酰胺(化合物109)的合成
向1be(60mg，136.28μmol，1当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加2-甲基丙-2-胺(29.90mg，408.85μmol，42.96μL，3当量)和TEA(41.37mg，408.85μmol，56.91μL，3当量)，将反应在25℃下搅拌1小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge BEHC18 100*30mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，8分钟)。得到N-叔丁基-6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酰胺(化合物109)(5.72mg，11.86μmol，8.70％产率，98.90％纯度)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.64(s,1H),9.12-9.19(m,2H),8.76-8.83(m,2H),8.18(s,1H),8.10(d,J＝6.88Hz,1H),8.03(d,J＝8.76Hz,1H),7.47(d,J＝8.76Hz,1H),4.85(t,J＝8.13Hz,2H),3.24(br t,J＝7.94Hz,2H),1.47(s,9H)。MS(M+H)+＝477.1
实施例110：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡嗪-2-甲 酰胺(化合物110)的合成
向6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡嗪-2-甲酸甲酯(60mg，137.67μmol，1当量)在THF(2mL)中的搅拌溶液中添加环丙胺(11.79mg，206.50μmol，14.31μL，1.5当量)、Al(CH3)3(2M，275.33μL，4当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌2小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应混合物用MeOH(2mL)淬灭并过滤，浓缩。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-65％，8分钟)。得到6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-环丙基-吡嗪-2-甲酰胺(化合物110)(4.33mg，9.39μmol，6.82％产率，100％纯度)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.62(s,1H),9.14(s,1H)9.10(s,1H),8.86-9.04(m,2H),8.77(s,1H),7.93-8.12(m,2H),7.47(d,J＝8.76Hz,1H),4.80(br t,J＝8.00Hz,2H),3.21-3.27(m,2H),2.89-2.98(m,1H),0.65-0.81(m,4H)。MS(M+H)+＝461.1
实施例111：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲酸甲酯(化 合物111)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在H2O(0.3mL)和DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加5-溴吡啶-3-甲酸甲酯(33.49mg，155.04μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：10％-45％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-甲酸甲酯(化合物111)(4.78mg，8.62μmol，6.11％产率，98.959％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.29(d,J＝2.20Hz,1H),9.15(d,J＝1.71Hz,1H),8.91(s,1H),8.54-8.71(m,2H),8.42(d,J＝8.68Hz,1H),8.15(br d,J＝6.60Hz,1H),8.01(d,J＝8.68Hz,1H),7.52(d,J＝8.92Hz,1H),4.75-4.91(m,2H),3.94(s,3H),3.26(br t,J＝7.95Hz,2H)。MS(M+H)+＝435.0
实施例112：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-氰基-吡啶-3-甲酰 胺(化合物112)
向1n(50mg，117.46μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.6mL)中的溶液中添加5-溴-N-氰基-吡啶-3-甲酰胺(26.55mg，117.46μmol，1当量)、K3PO4(74.80mg，352.37μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75μmol，0.1当量)。将反应混合物在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：20％-50％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-氰基-吡啶-3-甲酰胺(化合物112)(12.65mg，28.44μmol，24.21％产率，100％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δppm 9.04(d,J＝1.60Hz,1H),8.99(d,J＝2.40Hz,1H),8.73(s,1H),8.53(s,1H),8.42(s,1H),8.28–8.25(m,1H),7.99(d,J＝8.80Hz,1H),7.92(d,J＝8.75Hz,1H),7.40(d,J＝8.80Hz,1H),4.70(br t,J＝8.0Hz,2H,)3.32(br t,J＝8.0Hz,2H)。MS(M+H)+＝445.1。
实施例113：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-羟基-N-甲基-吡 啶-3-甲酰胺(化合物113)
步骤1：5-溴-N-羟基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1bf)的合成
向5-溴吡啶-3-甲酸(500mg，2.48mmol，1当量)在DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加N-甲基羟胺(206.72mg，2.48mmol，1当量，HCl)、HATU(1.41g，3.71mmol，1.5当量)和DIEA(959.70mg，7.43mmol，1.29mL，3当量)，将反应在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速柱(ISCO12g二氧化硅，40％-60％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。基于TLC(PE:EtOAc＝1:1，Rf＝0.30)。得到5-溴-N-羟基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(1bf)(200mg，865.63μmol，34.97％产率)，为黄色固体。
步骤2：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-羟基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物113)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在H2O(0.3mL)和DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-N-羟基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(39.08mg，169.14μmol，1.2当量)、Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)和K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)，将反应在100℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：5％-40％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-羟基-N-甲基-吡啶-3-甲酰胺(化合物113)(31.67mg，69.82μmol，49.54％产率，99.176％纯度)，为黄色胶状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.12(br s,1H),8.98(s,1H),8.85(s,1H),8.62(d,J＝1.13Hz,1H),8.39-8.47(m,2H),8.32(d,J＝6.75Hz,1H),8.02(d,J＝8.76Hz,1H),7.54(d,J＝8.76Hz,1H),4.92(br t,J＝7.69Hz,2H),3.33(s,3H),3.24-3.30(m,2H)。MS(M+H)+＝450.0
实施例114：6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3H-异苯并呋喃-1-酮 (化合物114)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在H2O(0.3mL)和DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-3H-异苯并呋喃-1-酮(33.03mg，155.04μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：15％-50％，8分钟)。得到化合物6-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3H-异苯并呋喃-1-酮(化合物114)(11.2mg，24.82μmol，17.61％产率，95.714％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.91(s,1H),8.56(s,1H),8.41(dd,J＝8.62,1.53Hz,1H),8.21-8.29(m,2H),8.19(br d,J＝6.60Hz,1H),7.99(d,J＝8.80Hz,1H),7.85(d,J＝8.07Hz,1H),7.52(d,J＝8.68Hz,1H),5.50(s,2H),4.86(br t,J＝7.64Hz,2H),3.25-3.29(m,2H)。MS(M+H)+＝432.0
实施例115：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[3-(4H-1,2,4-三唑-3-基)苯基]喹唑啉(化合物115)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加3-(3-溴苯基)-4H-1,2,4-三唑(34.74mg，155.05μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.85μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.10μmol，0.1当量)，然后将混合物用N2鼓泡1分钟，并在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：15％-45％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[3-(4H-1,2,4-三唑-3-基)苯基]喹唑啉(化合物115)(20.52mg，42.81μmol，30.37％产率，100％纯度，HC l)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.04(s,1H),8.63(d,J＝1.4Hz,1H),8.48(dd,J＝1.6,8.8Hz,2H),8.43(s,1H),8.39(br d,J＝6.8Hz,1H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),8.07(d,J＝8.6Hz,1H),7.92(br d,J＝8.0Hz,1H),7.69(t,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),4.97(br t,J＝7.6Hz,2H),3.30-3.28(m,2H)。MS(M+H)+＝443.0
实施例116：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹唑啉(化合物116)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在H2O(0.3mL)和DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加3-溴-5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶(31.72mg，140.95μmol，1当量)、K3PO4(89.76mg，422.84μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：10％-45％，8分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹唑啉(化合物116)(9.05mg，15.93μmol，11.30％产率，98.21％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(d,J＝1.75Hz,1H),9.11(d,J＝2.13Hz,1H),8.99(s,1H),8.70(t,J＝2.06Hz,1H),8.66(br d,J＝1.50Hz,2H),8.48(dd,J＝8.76,1.63Hz,1H),8.31(d,J＝6.75Hz,1H),8.03(d,J＝8.76Hz,1H),7.54(d,J＝8.75Hz,1H),4.93(br t,J＝7.75Hz,2H),3.28(br t,J＝7.57Hz,2H)。MS(M+H)+＝444.0
实施例117：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]甲醇(化 合物117)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加(5-溴-2-吡啶基)甲醇(29.15mg，155.05μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.85μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.10μmol，0.1当量)，然后将混合物用N2鼓泡1分钟，并在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：5％-35％，8分钟)。得到[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]甲醇(化合物117)(6.7mg，15.11μmol，10.72％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.08(d,J＝2.0Hz,1H),9.04(s,1H),8.68(d,J＝1.6Hz,1H),8.55(dd,J＝1.9,8.3Hz,1H),8.50(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),8.42(d,J＝6.6Hz,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.83(d,J＝8.1Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),4.98(br t,J＝7.7Hz,2H),4.77(s,2H),3.30(br s,2H)。MS(M+H)+＝407.0
实施例118：2-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]丙-2- 醇(化合物118)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加2-(5-溴-2-吡啶基)丙-2-醇(33.50mg，155.05μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.85μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.10μmol，0.1当量)，然后将混合物用N2鼓泡1分钟，并在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)。得到2-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-吡啶基]丙-2-醇(化合物118)(24.69mg，52.38μmol，37.16％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.00-8.94(m,2H),8.59(s,1H),8.41(dd,J＝1.6,8.7Hz,1H),8.30(br d,J＝7.5Hz,2H),8.00(d,J＝8.8Hz,1H),7.86(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,1H),4.91(br t,J＝7.8Hz,2H),3.27(br t,J＝7.6Hz,2H),1.50(s,6H)。MS(M+H)+＝435.0
实施例119：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲醇(化 合物119)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加(5-溴-3-吡啶基)甲醇(29.15mg，155.05μmol，1.1当量)、K3PO4(89.76mg，422.85μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.10μmol，0.1当量)，然后将混合物用N2鼓泡1分钟，并在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：5％-40％，7分钟)。得到[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲醇(化合物119)(23.24mg，52.42μmol，37.19％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.15(d,J＝1.8Hz,1H),9.03(s,1H),8.75(s,1H),8.71(d,J＝1.3Hz,1H),8.56(br s,1H),8.50(dd,J＝1.5,8.8Hz,1H),8.41(d,J＝6.8Hz,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),4.98(br t,J＝7.6Hz,2H),4.74(s,2H),3.30(br s,2H)。MS(M+H)+＝407.0
实施例120：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-甲 腈(化合物120)的合成
向1n(60mg，140.95μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(10.31mg，14.09μmol，0.1当量)、K3PO4(2M，211.42μL，3当量)和5-溴-2-甲氧基-吡啶-3-甲腈(33.03mg，155.04μmol，1.1当量)，将混合物用N2吹扫3次，并在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：10％-50％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-甲腈(化合物120)(89.694％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.96(d,J＝2.40Hz,1H),8.76-8.87(m,2H),8.46-8.54(m,1H),8.33(br d,J＝8.58Hz,1H),8.09-8.20(m,1H),7.94-8.01(m,1H),7.49(br d,J＝9.49Hz,1H),4.75-4.86(m,2H),4.08(s,3H),3.27(br d,J＝7.79Hz,2H)。MS(M+H)+＝432.0
实施例121：2-[5-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-2-醇(化合 物121)的合成
向1m(60mg，147.17μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇(31.80mg，147.17μmol，1当量)、K3PO4(93.72mg，441.50μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.77mg，14.72μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna80*30mm*3μm；流动相：[水(0.04％ HCl)-ACN]；B％：1％-30％，8分钟)。得到2-[5-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]丙-2-醇(化合物121)(36.76mg，79.49μmol，54.02％产率，98.041％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.19(d,J＝1.22Hz,1H),9.05(s,1H),8.89(d,J＝1.71Hz,1H),8.68-8.77(m,2H),8.53(dd,J＝8.74,1.41Hz,1H),8.24(s,1H),8.15(d,J＝8.68Hz,1H),7.48(d,J＝8.07Hz,1H),7.31(dd,J＝8.07,1.83Hz,1H),4.90-5.01(m,2H),3.26(br t,J＝7.40Hz,2H),1.58(s,6H)。MS(M+H)+＝417.0
实施例122：6-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-二氢咪唑并[4,5-b]吡 啶-2-酮(化合物122)的合成
向1m(60mg，147.17μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-1,3-二氢咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(31.50mg，147.17μmol，1当量)、K3PO4(93.72mg，441.51μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.77mg，14.72μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，滤液直接用于纯化。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相：[水(0.04％HCl)-ACN]；B％：5％-45％，7分钟)。得到6-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-二氢咪唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(化合物121)(19.95mg，44.20μmol，30.04％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.52-11.60(m,1H),11.14(s,1H),9.04(s,1H),8.52-8.58(m,1H),8.42(d,J＝8.92Hz,1H),8.34(d,J＝1.71Hz,1H),8.22(br s,1H),8.03(d,J＝8.68Hz,1H),7.64(s,1H),7.48(d,J＝8.07Hz,1H),7.28-7.34(m,1H),4.95(br t,J＝7.70Hz,2H),3.26(br t,J＝7.46Hz,2H)。MS(M+H)+＝415.0
实施例123：6-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3H-噁唑并[4,5-b]吡啶-2- 酮(化合物123)的合成
向1m(60mg，147.17μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加6-溴-3H-噁唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(31.64mg，147.17μmol，1当量)、K3PO4(93.72mg，441.51μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.77mg，14.72μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：C18-1 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：5％-50％，8min)。得到6-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3H-噁唑并[4,5-b]吡啶-2-酮(化合物123)(22.18mg，41.86μmol，28.44％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.92(s,1H),8.53(d,J＝1.83Hz,1H),8.49(d,J＝1.34Hz,1H),8.36(dd,J＝8.74,1.53Hz,1H),8.18(d,J＝1.83Hz,1H),7.94-8.04(m,2H),7.43(d,J＝7.95Hz,1H),7.21(dd,J＝8.01,1.90Hz,1H),4.83(br t,J＝7.76Hz,2H),3.24(br t,J＝7.70Hz,2H)。MS(M+H)+＝416.0
实施例124：5-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-二氢吡咯并[2,3-b]吡 啶-2-酮(化合物124)的合成
向1m(60mg，147.17μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-1,3-二氢吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(31.35mg，147.17μmol，1当量)、K3PO4(93.72mg，441.51μmol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(10.77mg，14.72μmol，0.1当量)，将反应在80℃下在N2下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：C18-1 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：5％-50％，8min)。得到5-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-1,3-二氢吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(化合物124)(1.2mg，2.27μmol，1.54％产率，100％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.18(s,1H),8.88(s,1H),8.51(d,J＝2.13Hz,1H),8.41(s,1H),8.29(dd,J＝8.76,1.63Hz,1H),8.03(s,1H),7.96(d,J＝8.76Hz,1H),7.92(br s,1H),7.41(d,J＝8.00Hz,1H),7.17(dd,J＝7.82,1.69Hz,1H),4.77(br t,J＝7.75Hz,2H),3.65(s,2H),3.23(br s,2H)。MS(M+H)+＝414.0
实施例125：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑 啉(化合物125)的合成
向1n(65mg，152.6μmol，1当量)在DMF(1.5mL)和H2O(0.3mL)中的溶液中添加K3PO4(97.23mg，458.08μmol，3当量)、Pd(PPh3)4(17.64mg，15.27μmol，0.1当量)和6-溴-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(45.35mg，229.04μmol，1.5当量)，将反应在100℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，然后将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：25％-55％，8分钟)，得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)喹唑啉(化合物125)(4.02mg，9.64μmol，6.32％产率，100％纯度)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.51(br s,1H),8.95(d,J＝1.9Hz,1H),8.77(s,1H),8.51(d,J＝1.8Hz,1H),8.40-8.30(m,3H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),7.96(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),4.75(t,J＝8.1Hz,2H),3.24(br t,J＝7.9Hz,2H)。MS(M+H)+＝417.1
实施例126：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基]嘧啶-2- 胺(化合物126)的合成
向4c(30mg，89.51μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加1d(12.43mg，89.51μmol，1当量)、K3PO4(57.00mg，268.53μmol，3当量)和Pd(PPh3)4(10.34mg，8.95μmol，0.1当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexLuna C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：15％-50％，8分钟)。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基]嘧啶-2-胺(化合物126)(1.13mg，2.14μmol，2.39％产率，96.25％纯度，TFA)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.07(s,2H),8.79(s,1H),8.68(d,J＝7.00Hz,1H),8.44(d,J＝8.88Hz,1H),8.23(d,J＝8.88Hz,1H),7.48(d,J＝8.88Hz,1H),7.15-7.27(m,2H),5.12(t,J＝8.19Hz,2H),3.32(br s,2H)。MS(M+H)+＝394.0
实施例127：5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基)吡啶-2-胺 (化合物127)的合成
向4c(30mg，89.51μmol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.5mL)中的搅拌溶液中添加(6-氨基吡啶-3-基)硼酸(12.43mg，89.51μmol，1当量)、K3PO4(57.00mg，268.53μmol，3当量)和Pd(PPh3)4(10.34mg，8.95μmol，0.1当量)，将反应在N2下在80℃下搅拌3小时。LCMS显示起始材料被完全消耗，并且检测到所需产物的MS。将反应物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：15％-50％，8分钟)。得到5-(4-(6-氯-5-氟吲哚啉-1-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-基)吡啶-2-胺(化合物127)(8.08mg，12.14μmol，10.39％产率，96.14％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.93(s,1H),8.85(d,J＝1.13Hz,1H),8.75(d,J＝7.00Hz,1H),8.70(br d,J＝9.38Hz,1H),8.55(d,J＝9.00Hz,1H),8.39(d,J＝8.88Hz,1H),7.54(d,J＝8.75Hz,1H),7.21(d,J＝9.38Hz,1H),5.15(br t,J＝8.00Hz,2H),3.35(br t,J＝7.94Hz,2H)。MS(M+H)+＝393.0
实施例128：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3,3-二羟基-1H-吡咯 并[2,3-b]吡啶-2-酮(化合物155)的合成
向1n(49.88mg，117.18umol，1当量)和5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2,3-二酮(26.60mg，117.18umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.57mg，11.72umol，0.1当量)和K3PO4(74.62mg，351.54umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。将反应混合物过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：10％-50％，8分钟)。得到化合物155，5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3,3-二羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(3.2mg，6.72umol，5.73％产率，97.36％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝464.1.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.00(s,1H),8.85(d,J＝2.4Hz,1H),8.52(s,1H),8.39-8.30(m,2H),8.28(d,J＝2.4Hz,1H),8.07(br d,J＝8.8Hz,2H),7.57(d,J＝8.8Hz,1H),4.93(br t,J＝7.4Hz,2H),3.29(br t,J＝7.4Hz,2H)。
实施例129：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]螺[1H-吡咯并[2,3-b] 吡啶-3,1'-环丙烷]-2-酮(化合物156)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和5-溴螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,1'-环丙烷]-2-酮(28.08mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-65％，8分钟)。得到化合物156，5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,1'-环丙烷]-2-酮(5.63mg，11.86umol，10.10％产率，96.48％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝458.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.32(br s,1H),8.73(s,1H),8.49(d,J＝2.4Hz,1H),8.33(d,J＝1.8Hz,1H),8.22(dd,J＝1.8,8.8Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝6.8Hz,1H),7.81(d,J＝2.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.67(t,J＝8.2Hz,2H),3.22(br t,J＝8.0Hz,2H),1.78(t,J＝3.8Hz,2H),1.59(t,J＝3.8Hz,2H)。
实施例130：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-醇 (化合物157)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和5-溴-2-甲氧基-吡啶-3-醇(23.96mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：20％-60％，8分钟)，得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-醇(化合物157)(15.85mg，37.48umol，31.91％产率，100％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝423.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.73(s,1H),8.73(s,1H),8.28(s,1H),8.15(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝6.6Hz,1H),7.48-7.37(m,2H),4.67(t,J＝8.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.22(br t,J＝8.0Hz,2H)。
实施例131：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-吡啶-3-醇 (化合物158)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和5-溴-2-甲基-吡啶-3-醇(22.09mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲(树脂)以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：10％-40％，8分钟)，得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-吡啶-3-醇(化合物158)(12.03mg，27.14umol，23.10％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝407.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.79(br s,1H),8.98(s,1H),8.69(d,J＝1.2Hz,1H),8.61(d,J＝1.2Hz,1H),8.39(dd,J＝1.4,8.8Hz,1H),8.33(d,J＝6.6Hz,1H),8.22(br s,1H),8.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,1H),4.92(br t,J＝7.6Hz,2H),3.29(br t,J＝7.6Hz,2H),2.60(s,3H)。
实施例132：2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-醇(化合 物159)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和5-溴-2-氯-吡啶-3-醇(24.48mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲(树脂)以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：15％-55％，8分钟)。得到2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]吡啶-3-醇(化合物159)(13.03mg，30.50umol，25.96％产率，100％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝427.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.75(s,1H),8.37(d,J＝1.2Hz,2H),8.17(dd,J＝1.4,8.6Hz,1H),8.03-7.90(m,2H),7.65(d,J＝1.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.70(br t,J＝8.0Hz,2H),3.23(br t,J＝7.8Hz,2H)。
实施例133：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基] 甲醇(化合物163)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和(5-溴-2-甲基-3-吡啶基)甲醇(23.73mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲(树脂)以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBDC18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：20％-60％，8分钟)。得到[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲基-3-吡啶基]甲醇(化合物163)(10.41mg，24.73umol，21.06％产率，100％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝421.2.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.79-8.71(m,2H),8.37(d,J＝1.4Hz,1H),8.23(dd,J＝1.6,8.7Hz,1H),8.07(d,J＝1.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.6Hz,1H),7.87(d,J＝6.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),5.34(t,J＝5.4Hz,1H),4.67(br t,J＝8.0Hz,2H),4.61(d,J＝5.2Hz,2H),3.22(br t,J＝8.0Hz,2H),2.49(br s,3H)。
实施例134：[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲 醇(化合物164)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和(5-溴-2-氯-3-吡啶基)甲醇(26.13mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲(树脂)以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：15％-45％，8分钟)。得到[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]甲醇(化合物164)(7.24mg，15.15umol，12.90％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝441.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.00(s,1H),8.79(d,J＝2.4Hz,1H),8.61(d,J＝1.4Hz,1H),8.41(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),8.37-8.29(m,2H),8.08(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),4.92(br t,J＝7.6Hz,2H),4.64(s,2H),3.28(br t,J＝7.6Hz,2H)。
实施例135：[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-3-吡啶 基]甲醇(化合物165)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和(5-溴-2-甲氧基-3-吡啶基)甲醇(25.61mg，117.46umol，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.38umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，向反应混合物中添加硫脲(树脂)以除去过量的Pd(dppf)Cl2，然后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBDC18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，8分钟)。得到[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-3-吡啶基]甲醇(化合物165)(5.41mg，12.19umol，10.38％产率，98.42％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝437.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.74(s,1H),8.49(d,J＝2.4Hz,1H),8.33(d,J＝1.4Hz,1H),8.19(dd,J＝1.6,8.6Hz,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.6Hz,1H),7.87(d,J＝6.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),5.28(t,J＝5.6Hz,1H),4.68(br t,J＝8.0Hz,2H),4.54(d,J＝5.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.23(br t,J＝7.8Hz,2H)。
实施例137：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹唑 啉(化合物171)的合成
步骤1：(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺的合成
将化合物91(30mg，71.46μmol，1当量)和DMF-DMA(12.77mg，107.18μmol，14.24μL，1.5当量)在甲苯(2mL)中的溶液用N2脱气三次，每次1分钟，然后在120℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到一个新的峰。冷却至15℃后，将反应混合物减压浓缩，得到残余物。得到(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺(30mg，63.17μmol，88.40％产率)，为黑色固体，其直接用于下一步骤。
步骤2：4-(6-氯吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹唑啉(化合物171)的合成
向(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺(30mg，63.17μmol，1当量)在AcOH(1mL)中的溶液中逐滴添加肼水合物(8mg，159.81μmol，2.53当量)。将所得混合物在15℃下搅拌12小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。将反应混合物过滤，然后减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 100*30mm*3um；流动相：[H2O(0.04％HCl)-ACN]；梯度：15％-45％ B，8.0分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹唑啉(化合物171)(3mg，5.90μmol，9.34％产率，94.45％纯度，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝444.0.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.18(br s,1H),9.07(s,1H),8.74(s,1H),8.57(br d,J＝8.4Hz,1H),8.52-8.38(m,3H),8.26(br d,J＝8.0Hz,1H),8.17(br d,J＝8.6Hz,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),5.03(br t,J＝7.4Hz,2H),3.31(brt,J＝7.4Hz,2H)。
实施例138：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶 基]喹啉-3-甲腈(化合物172)
步骤1：5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]吡啶-2-甲酰胺的合成：向5-溴吡啶-2-甲酰胺(134.10mg，667.09μmol，1.5当量)和2e(200mg，444.73μmol，1当量)在H2O(0.2mL)和DMF(1mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(32.54mg，44.47μmol，0.1当量)和K3PO4(283.21mg，1.33mmol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌12小时。LC-MS显示反应物2被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至15℃后，将反应混合物用水(3mL)稀释，然后过滤，将滤饼用MeOH(3*3mL)洗涤，然后减压浓缩，得到残余物。得到5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(110mg，202.67μmol，45.57％产率，81.78％纯度)，为棕色固体，其直接用于下一步骤。
步骤2：(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺的合成
将5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(60mg，135.18μmol，1当量)和DMF-DMA(24.16mg，202.77μmol，26.94μL，1.5当量)在甲苯(2mL)中的溶液用N2脱气三次，每次1分钟，然后在120℃下搅拌12小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到一个新的峰。冷却至15℃后，将反应混合物减压浓缩，得到残余物。无需进一步纯化并直接用于下一步骤。得到(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺(60mg，粗品)，为黑色固体。
步骤3：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹啉-3-甲腈(化合物172)的合成
向(NE)-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-N-(二甲基氨基亚甲基)吡啶-2-甲酰胺(60mg，120.26μmol，1当量)在AcOH(1mL)中的溶液中逐滴添加肼水合物(20mg，399.52μmol，3.32当量)。将所得混合物在15℃下搅拌12小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。在0℃下在冰浴下向反应混合物中添加饱和NaHCO3水溶液(2ml)以调节pH(7-8)，然后用乙酸乙酯(3*2mL)萃取。将有机层用盐水(2mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，然后过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna C18 100*30mm*3um；流动相：[H2O(0.04％HCl)-ACN]；梯度：25％-50％ B，8.0分钟)。得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[6-(4H-1,2,4-三唑-3-基)-3-吡啶基]喹啉-3-甲腈(化合物172)(2.9mg，5.46μmol，4.54％产率，94.87％纯度，HCl)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝468.0.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.10(s,1H),9.00(s,1H),8.58-8.36(m,4H),8.32-8.26(m,1H),8.23(br d,J＝8.4Hz,1H),7.45(br d,J＝8.8Hz,1H),6.94(d,J＝6.4Hz,1H),4.61(br d,J＝7.6Hz,1H),4.38(br d,J＝8.4Hz,1H),3.41-3.25(m,2H)。
实施例139：1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(化合物179)的合成
步骤1：1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙醇的合成
在0℃下在冰浴下向5-溴吡啶-3-甲醛(500mg，2.69mmol，1当量)和TMSCF3(420.45mg，2.96mmol，1.1当量)在THF(7mL)中的溶液中添加TBAF(1M，2.69mL，1当量)。然后将反应混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(10mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3*6mL)萃取。将有机层用盐水(6mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，然后过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速柱(ISCO 12g二氧化硅，5％-20％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。得到1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙醇(600mg，2.34mmol，87.18％产率，100％纯度)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.68(s,1H),8.13(s,1H),7.22(d,J＝6.0Hz,1H),5.45-5.29(m,1H)。
步骤2：1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇的合成
向1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙醇(500mg，1.95mmol，1当量)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加2-碘氧基苯甲酸(1.09g，3.91mmol，2当量)。将反应混合物在78℃下搅拌4小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.6)显示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将反应混合物冷却至25℃后过滤反应物，然后用EtOAc(3mL*3)洗涤。将混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(2*10mL)萃取。将有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，然后过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速柱(ISCO 12g二氧化硅，10％-30％乙酸乙酯的石油醚溶液，梯度20分钟)纯化。得到1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(300mg，1.10mmol，56.47％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.79(d,J＝2.0Hz,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.08(t,J＝2.0Hz,1H),8.05(s,2H)。
步骤3：1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(化合物179)的合成
向1m(30mg，73.58umol，1当量)和1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(20.02mg，73.58umol，1当量)在H2O(0.2mL)和二噁烷(1mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(5.38mg，7.36umol，0.1当量)和K3PO4(46.86mg，220.75umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。将反应混合物冷却至25℃后过滤。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：20％-50％，8分钟)，得到1-[5-[4-(6-氯吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(化合物179)(12.56mg，24.66umol，33.51％产率，100％纯度，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝473.1.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.15(d,J＝1.6Hz,1H),9.07(s,1H),8.86(s,1H),8.69(s,1H),8.45(d,J＝8.6Hz,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.15(d,J＝8.8Hz,1H),8.12-7.89(m,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),4.97(br t,J＝7.4Hz,2H),3.27(br t,J＝7.4Hz,2H)。
实施例140：1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-2,2, 2-三氟-乙烷-1,1-二醇(化合物180)的合成
向1n(50mg，117.46umol，1当量)和1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(31.95mg，117.46umol，1当量)在H2O(0.2mL)和二噁烷(1mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.59mg，11.75umol，0.1当量)和K3PO4(74.80mg，352.37umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-75％，8分钟)，得到1-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-3-吡啶基]-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(化合物180)(7.75mg，15.79μmol，13.44％产率，100％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝491.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.07(d,J＝2.2Hz,1H),8.84-8.72(m,2H),8.44(d,J＝1.4Hz,1H),8.28-8.18(m,2H),8.02(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(s,2H),7.93(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝9.2Hz,1H),4.70(t,J＝8.0Hz,2H),3.23(br t,J＝7.8Hz,2H)。
实施例141：4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(2,2,2-三氟-1,1-二羟基-乙 基)-3-吡啶基]喹啉-3-甲腈(化合物181)的合成
向2e(50mg，111.18umol，1当量)和1-(5-溴-3-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(30.24mg，111.18umol，1当量)在H2O(0.2mL)和二噁烷(1mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(8.14mg，11.12umol，0.1当量)和K3PO4(70.80mg，333.55umol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在80℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至25℃后，过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Luna 80*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：25％-55％，8分钟)，得到4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-6-[5-(2,2,2-三氟-1,1-二羟基-乙基)-3-吡啶基]喹啉-3-甲腈(化合物181)(12.03mg，21.00umol，18.88％产率，96.22％纯度，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝515.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.09(s,1H),8.99(d,J＝2.0Hz,1H),8.82(d,J＝1.4Hz,1H),8.32-8.24(m,3H),8.21(s,1H),8.07-7.90(m,1H),7.42(d,J＝8.8Hz,1H),6.89(d,J＝6.0Hz,1H),4.56-4.47(m,1H),4.40(q,J＝8.8Hz,1H),3.37-3.25(m,2H)。
实施例142：N-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-2-甲氧基- 3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物188)
向N-[2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]-N-甲基磺酰基-甲磺酰胺(57.30mg，141.05μmol，1当量)和1k(80mg，141.05μmol，1当量)在H2O(0.2mL)和DMF(1mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(10.32mg，14.10μmol，0.1当量)和K3PO4(89.82mg，423.14μmol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至15℃后，过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Waters Xbridge Prep OBDC18 150*40mm*10um；流动相：[H2O(10mM NH4HCO3)-ACN]；梯度：45％-75％ B，8.0分钟)。得到N-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-2-甲氧基-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物188)(17.50mg，33.24μmol，23.57％产率，99.52％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝524.0.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.38(br s,1H),9.03(s,1H),8.31(d,J＝2.0Hz,1H),8.27-8.19(m,2H),8.17(s,1H),7.91(d,J＝2.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),6.80(d,J＝6.4Hz,1H),4.53-4.42(m,1H),4.41-4.30(m,1H),3.97(s,3H),3.33(br s,2H),3.05(s,3H)。
实施例143：N-[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-3-吡 啶基]甲磺酰胺(化合物189)的合成
向4c(57.94mg，141.07μmol，1当量)和2d(80mg，141.07μmol，1当量)在H2O(0.2mL)和DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加Pd(dppf)Cl2(10.32mg，14.11μmol，0.1当量)和K3PO4(89.83mg，423.20μmol，3当量)。然后将反应混合物用N2脱气三次，每次1分钟。将所得混合物在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至15℃后，过滤反应混合物。将滤液通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex lunaC18 100*40mm*5um；流动相：[H2O(0.04％ HCl)-ACN]；梯度：30％-60％B，8.0分钟)。得到N-[2-氯-5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)-3-氰基-6-喹啉基]-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物189)(33.53mg，58.58μmol，41.53％产率，98.69％纯度，HCl)，为橙色固体。MS(M+H)+＝528.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.89(s,1H),9.07(s,1H),8.60(d,J＝2.0Hz,1H),8.39-8.20(m,3H),8.13(d,J＝2.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),6.88(d,J＝6.0Hz,1H),4.53(br d,J＝7.6Hz,1H),4.34(br d,J＝8.4Hz,1H),3.39-3.25(m,2H),3.15(s,3H)。
实施例144：N-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-3-吡啶 基]甲磺酰胺(MTX-229F)的合成：
步骤1：N-甲基磺酰基-N-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]甲磺酰胺(4e)的合成
向2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-胺(4d)(300mg，1.20mmol，1当量)在DCM(8mL)中的溶液中添加TEA(364.14mg，3.60mmol，500.88uL，3当量)。然后在用N2脱气三次(每次1分钟)后，在0℃下将溶于DCM(2mL)中的MsCl(412.22mg，3.60mmol，278.53uL，3当量)滴加到混合物中。将所得混合物在0℃下搅拌2h。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的一个主峰。将反应混合物用水(5ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(3*5mL)萃取。将有机层用盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，然后过滤并减压浓缩，得到残余物。无需纯化并直接用于下一步骤。得到N-[2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-吡啶基]-N-甲基磺酰基-甲磺酰胺(4e)(0.5g，730.18umol，60.87％产率，59.332％纯度)，为黄色固体。
步骤2：N-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物131)的合成
向1k(0.05g，132.06umol，1当量)和4e(90.43mg，132.06umol，59.332％纯度，1当量)在DMF(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加K3PO4(84.09mg，396.17umol，3当量)和Pd(dppf)Cl2(9.66mg，13.21umol，0.1当量)。将所得混合物用N2脱气三次，每次1分钟，然后在100℃下搅拌3小时。LC-MS显示起始材料被完全消耗，并且检测到具有所需质量的主峰。冷却至15℃后，将反应混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(WatersXbridge Prep OBD C18 150*40mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，8分钟)。在制备型HPLC纯化后，将洗脱液浓缩以除去有机溶剂。将残余水溶液冻干，得到残余物。得到N-[5-[4-(6-氯-5-氟-吲哚啉-1-基)喹唑啉-6-基]-2-甲氧基-3-吡啶基]甲磺酰胺(化合物131)(8.66mg，17.32umol，13.12％产率，100％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝500.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.19(s,1H),8.74(s,1H),8.40(d,J＝2.4Hz,1H),8.34(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(dd,J＝1.8,1.6Hz,1H),8.00-7.95(m,2H),7.91(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(t,J＝8.0Hz,2H),3.98(s,3H),3.22(br t,J＝8.0Hz,2H),3.07(s,3H)。
在以下实施例中，本发明化合物的生物活性有时在本文中与比较化合物1和比较化合物2进行比较，比较化合物1和比较化合物2被鉴定为：
实施例145：本公开的所选化合物对人PI3Ka、EGFR和DNA-PK酶的亲和力。
酶材料描述
EGFR(ErbB1)：重组人蛋白，催化结构域(氨基酸668-1210)，GST标记，在昆虫细胞中表达。通过自身磷酸化体外激活。
DNA-PK：天然人，从MOLT4细胞纯化。
PIK3CA/PIK3R1：重组人全长蛋白，组氨酸标记，在昆虫细胞中表达。与PIK3R1、磷酸肌醇-3-激酶、调节亚基1(p85α)共表达，未标记。
方案
生化测定采用基于荧光的偶联酶形式，基于磷酸化和非磷酸化肽对蛋白水解裂解的不同敏感性。肽底物用两个荧光团(构成FRET对)标记(每端一个)。在初级反应中，激酶将ATP的γ-磷酸转移到合成FRET肽中的单个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基上。在第二反应中，位点特异性蛋白酶识别并裂解非磷酸化的FRET肽。FRET肽的磷酸化抑制显影试剂的裂解。裂解破坏FRET肽上供体(即香豆素)与受体(即荧光素)荧光团之间的FRET，而未裂解的磷酸化FRET肽维持FRET。使用比率法(其计算在400nm处激发供体荧光团后供体发射与受体发射的比率(发射率))来定量反应进程。
用于定量反应进程的这种比率法的显著优点是消除了FRET肽浓度和信号强度的孔与孔之间的差异。因此，该测定在低百分比磷酸化下产生非常高的Z′因子值(>0.7)。
裂解的和未裂解的FRET肽都有助于荧光信号并因此有助于发射率。FRET肽的磷酸化程度可以根据发射率计算。如果FRET肽被磷酸化(即，没有激酶抑制)，则发射率将保持较低，而如果FRET肽未被磷酸化(即，激酶抑制)，则发射率将保持较高。
酶：ADAPTA通用激酶测定是一种用于检测ADP的均质荧光免疫测定法。与ATP耗竭测定法相反，ADAPTA测定法对ADP形成极其敏感，使得大部分信号变化发生在ATP转化为ADP的前10％-20％中。这使得ADAPTA通用激酶测定法非常适合用于低活性激酶。
ADAPTA通用激酶测定法的原理概述如下。该测定本身可分为两个阶段：激酶反应阶段和ADP检测阶段。在激酶反应阶段，将激酶反应所需的所有组分添加到孔中，并使反应温育60分钟。反应后，将由铕标记的抗ADP抗体、Alexa647标记的ADP示踪剂和EDTA(以终止激酶反应)组成的检测溶液添加到测定孔中。激酶反应形成的ADP(在没有抑制剂的情况下)将取代抗体中的Alexa647标记的ADP示踪剂，导致TR-FRET信号减弱。在存在抑制剂的情况下，由激酶反应形成的ADP的量减少，而由此产生的完整抗体-示踪剂相互作用导致TR-FRET信号增强。
测定条件：
测试化合物：在孔中的1％ DMSO(最终)中筛选测试化合物。对于10点滴定，从客户选择的起始浓度开始进行3倍系列稀释。
肽/激酶混合物：将所有肽/激酶混合物在适当的激酶缓冲液中稀释至2倍工作浓度。
ATP溶液：将所有ATP溶液在激酶缓冲液(50mM HEPES pH 7.5、0.01％ BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA)中稀释至4倍工作浓度。先前使用测定法测定ATP Km表观值。
显影试剂溶液：显影试剂在显影缓冲液中稀释。
10X新型PKC脂质混合物：2mg/mL磷脂酰丝氨酸、0.2mg/mL DAG的20mM HEPES溶液(pH 7.4)、0.3％ CHAPS。对于5mL 10X新型PKC脂质混合物：1.向玻璃管中添加10mg磷脂酰丝氨酸(Avanti Polar Lipids部件号8400032C或840039C)和1mg DAG(Avanti PolarLipids部件号800811C)。2.通过在氮气流下蒸发成透明薄膜，从脂质混合物中除去氯仿。以一定角度连续旋转试管以确保脂质溶液的最大表面积，将促进形成最薄的膜。3.向干燥的脂质混合物中添加5mL重悬缓冲液、20mM HEPES、0.3％ CHAPS、pH 7.4。4.温和加热至50-60℃，持续1-2分钟，并短时间涡旋，直到脂质溶解为澄清或略微混浊的溶液。脂质通常在2-3次加热/涡旋循环后处于溶液中。5.冷却至室温，等分至单次使用体积，并在-20℃下储存。
测定方案：带条形码的Corning，低体积NBS，黑色384孔板(Corning目录号4514)1.2.5μL-4X测试化合物或100nL 100X加2.4μL激酶缓冲液。2.5μL-2X肽/激酶混合物。3.2.5μL-4X ATP溶液。4.摇板30秒。5.在室温下温育60分钟激酶反应。6.5μL-显影试剂溶液。7.摇板30秒。8.在室温下温育60分钟显影反应。9.在荧光酶标仪上读取并分析数据。
通过计算来自测定孔的发射率来确定ADP的形成。发射率通过将示踪剂(受体)发射的强度除以615nm处的Eu(供体)发射的强度来计算，如下式所示。
由于ADAPTA技术测量ADP形成(即ATP转化为ADP)，因此它可用于测量任何类型的ATP水解，包括激酶的固有ATPase活性。在这种情况下，底物是水，而不是脂质或肽。服务以这种方式筛选CHUK，因此底物不包含在激酶反应中。下面提供了使用固有ATPase活性筛选激酶抑制剂的参考。
测定条件
测试化合物：在孔中的1％ DMSO(最终)中筛选测试化合物。对于10点滴定，从客户选择的起始浓度开始进行3倍系列稀释。
底物/激酶混合物：将所有底物/激酶混合物在适当的激酶缓冲液中稀释至2倍工作浓度(完整描述参见激酶特异性测定条件部分)。
ATP溶液：将所有ATP溶液在水中稀释至4倍工作浓度。ATP Km表观值先前使用放射测定法测定，除非当没有底物可用时，在这种情况下进行测定。
检测混合物：在TR-FRET稀释缓冲液中制备检测混合物。检测混合物由EDTA(30mM)、Eu-抗ADP抗体(6nM)和ADP示踪剂组成。检测混合物含有EC60浓度为5-150μM ATP的示踪剂。
测定方案：带条形码的Corning，低体积，白色384孔板(Corning目录号4512)。1.2.5μL-4X测试化合物的30mM HEPES溶液或100nL100X的100％ DMSO加2.4μL 30mM HEPES溶液。2.2.5μL-4X ATP溶液。3.5μL-2X底物/激酶混合物。4.摇板30秒。5.以1000×g离心1分钟。6.在室温下温育60分钟激酶反应。7.5μL检测混合物。8.摇板30秒。9.以1000×g离心1分钟。10.在室温下60分钟检测混合物平衡。11.在荧光酶标仪上读取并分析数据。
在下表2中，本公开的所选化合物与比较化合物1和比较化合物2对PI3Ka、EGFR和DNA-PK酶的亲和力表示为在100nM下的抑制百分比。表2中的在100nM下的抑制％数据表示为“*”(值为10％或更小)、“**”(值大于10％且小于或等于80％)、“***”(值大于80％且小于或等于90％)和“****”(值大于90％)。在下表3中，本公开的所选化合物与比较化合物1和比较化合物2对PI3Ka、EGFR和DNA-PK酶的亲和力表示为50％抑制浓度(IC50)。表3中的IC50数据表示为“++++”(值为20nM或更小)、“+++”(值大于20nM且小于或等于200nM)、“++”(值大于200nM且小于或等于2000nM)和“+”(值大于2000nM)。NT为“未测试”。
表2：本公开的所选化合物与与比较化合物1和比较化合物2对PI3Ka、EGFR和DNA-PK酶的亲和力表示为在100nM下的抑制百分比。
表3：本公开的所选化合物与比较化合物1和比较化合物2对PI3Ka、EGFR和DNA-PK酶的亲和力表示为50％抑制浓度(IC50)(以nM为单位)。
实施例146：肝微粒体中代谢稳定性的评估。
工作溶液：将5μL化合物和对照储备液(10mM的二甲基亚砜(DMSO)溶液)用495μL乙腈(ACN)(中间溶液浓度：100μm，99％ ACN)稀释
NADPH辅因子制备：NADPH粉末：β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸还原形式，四钠盐；NADPH·4Na。称取适量的NADPH粉末并稀释到10mM MgCl2溶液中(工作溶液浓度：10单位/mL；反应体系中的最终浓度：1单位/mL)
肝微粒体制备：在100mM磷酸钾缓冲液中制备适当浓度的微粒体工作溶液。使用含有200ng/mL甲苯磺丁脲和200ng/mL拉贝洛尔作为内标(IS)的冷(4℃)乙腈(ACN)作为终止溶液
测定程序：将空的“温育”板T60和NCF60预热10分钟。将肝微粒体在100mM磷酸盐缓冲液中稀释至0.56mg/mL。将445μL微粒体工作溶液(0.56mg/mL)转移到预热的“温育”板T60和NCF60中，然后在37℃下持续振荡预温育“温育”板T60和NCF60 10分钟。将54μL肝微粒体转移至空白板中，然后向空白板中添加6μL NAPDH辅因子，然后向空白板中添加180μL淬灭溶液。将5μL化合物工作溶液(100μm)添加到含有微粒体的“温育”板(T60和NCF60)中，并充分混合3次。
对于NCF60板，添加50μL缓冲液并充分混合3次。开始计时；将板在37℃下振荡温育60分钟。在“淬灭”板T0中，添加180μL淬灭溶液和6μL NAPDH辅因子。确保板冷却以防止蒸发。对于T60板，充分混合3次，并在0分钟时间点立即取出54μL混合物到“淬灭”板。然后向温育板(T60)中添加44μL NAPDH辅因子。开始计时；将板在37℃下振荡温育60分钟。在5、10、20、30和60分钟时，向“淬灭”板中添加180μL淬灭溶液，混合一次，并在每个时间点从T60板中连续转移60μL样品到“淬灭”板中。对于NCF60：混合一次，并在60分钟时间点将60μL样品从NCF60温育转移到含有淬灭溶液的“淬灭”板中。将所有取样板振荡10分钟，然后在4℃下以4000rpm离心20分钟。将80μL上清液转移至240μL HPLC水中，并通过板振荡器混合10分钟。在LC-MS/MS分析之前，将每个生物分析板密封并振荡10分钟。
使用一级动力学方程计算T1/2和CLint(微粒体)(μL/min/mg)。一级动力学方程：
当时，
本公开的化合物的生物稳定性可以通过测定其在微粒体存在下的1/2寿命来测量。表4中显示了如上所述的在人肝微粒体(HLM)或小鼠肝微粒体(MLM)存在下的本公开的所选化合物的1/2寿命。在表4中，1/2寿命表示为“++++”(值大于或等于30分钟)、“+++”(值大于或等于15分钟且小于30分钟)、“++”(值大于或等于10分钟且小于15分钟)和“+”(值等于或小于10分钟)。
表4：在人肝微粒体(HLM)或小鼠肝微粒体(MLM)存在下本公开的所选化合物的1/2寿命。
表4中的结果表明，本公开的化合物将在体内具有强大的生物稳定性，因为大多数测试化合物在人肝微粒体和小鼠肝微粒体两者存在下具有大于30分钟的半衰期。
实施例147：溶解度评估
储备溶液的制备：在DMSO中制备浓度为10mM的测试化合物和对照化合物双氯芬酸的储备溶液。
模拟胃液(SGF)：包括盐酸、氯化钠和胃蛋白酶的水性混合物(pH＝1.2)。
模拟肠液(SIF)：通过将6.8g KH2PO4溶于约500mL超纯水中并用0.1M NaOH将溶液调节至pH 6.8来制备。然后将10g胰蛋白酶溶于超纯水中。将两种溶液充分混合并用超纯水稀释至最终体积为1000mL。
溶解度测定程序：将每个样品的15μL储备溶液(10mM)按顺序放入其适当的96孔架中。向无盖溶解度样品板的每个小瓶中添加485μL(SIF、SGF、PBS 7.4、FESSIF或FESSGF)。测定一式两份进行。向每个小瓶中添加一根搅拌棒，并使用模制PTFE/硅胶塞密封。然后将溶解度样品板转移至Eppendorf Thermomixer Comfort板振荡器，并在25℃下以1100rpm振荡2小时。在完成2小时后，移除塞子并使用大磁铁移除搅拌棒，将来自溶解度样品板的样品转移到过滤板中。使用真空歧管过滤所有样品。从滤液中取出5μL和5μL DMSO的等分试样，然后添加490μL含有内标(1:1)的H2O和乙腈混合物。使用一定比例的超纯水根据峰形对稀释剂进行稀释。根据溶解度值和LC-MS信号响应改变稀释因子。
300μM标准品(STD)的制备：将6μL从10mM DMSO STD板转移到剩余的空板中，然后向该板中添加194μL DMSO，使STD浓度为300μM。从300μM DMSO STD板中，将5μL DMSO STD和5μL SIF转移到剩余的空板中，然后向该板中添加490μL含有内标(1:1)的H2O和乙腈混合物，使最终STD浓度为3μM。使用一定比例的超纯水根据峰形对稀释剂进行稀释。根据LC-MS信号响应改变标准样品的浓度。
样品分析程序：将板放入孔板自动进样器中。通过LC-MS/MS分析评估样品。
数据分析：所有计算均使用Microsoft Excel进行。使用LC结合质谱峰识别和定量，分析滤液并对已知浓度的标准品进行定量。测试化合物和对照化合物的溶解度值计算如下：
任何不在规定限度内的化合物值都将被拒绝，并重复实验。
表5中提供了本公开的所选化合物的溶解度数据。表5中的溶解度数据表示为“****”(值大于或等于200μm)、“***”(值大于或等于50μm且小于200μm)、“**”(值大于或等于10μm且小于50μm)和“*”(值小于10μm)。空白单元格为“未测试”。
表5：本公开的所选化合物的溶解度数据。
实施例148：P-gp或BCRP底物的评估。
使用表达人P-gp或人BCRP的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞来确定示例分子是否是这些转运蛋白的底物。从荷兰癌症研究所(阿姆斯特丹)获得MDCKII-BCRP和MDCK-MDR1细胞。
MDCK-MDR1或MDCKII-BCRP细胞的制备
将50μL和25mL细胞培养基分别添加到Transwell插入件和储库的每个孔中。然后在细胞接种之前，将HTS transwell板在37℃、5％CO2下温育1小时。用培养基将MDCK-MDR1细胞稀释至1.56×106个细胞/mL，并将50μL细胞悬浮液分配到96孔HTS Transwell板的过滤孔中。最终细胞浓度为5.45×105个细胞/cm2。将细胞在37℃、5％CO2、95％相对湿度的细胞培养箱中培养4-8天。每隔一天更换一次细胞培养基，最迟在初始接种后24小时开始。
溶液的制备
为制备HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)，准确称取2.38g HEPES和0.35g碳酸氢钠，添加到900mL纯水中，然后超声溶解内容物。将100mL 10×HBSS转移至溶液中，并将溶液置于搅拌器上，用氢氧化钠缓慢调节pH至7.4，然后过滤。
地高辛用作Pgp(MDR1)的参比底物。匹伐他汀用作BCRP的参比底物。美托洛尔用作阴性对照底物。将测试化合物和对照化合物的储备溶液在DMSO中稀释以得到400μm溶液，然后用HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)稀释以得到1μm工作溶液。为了测定在Pgp抑制剂存在下的药物转运速率，将已知的Pgp抑制剂PSC833以10μm的最终浓度添加到顶端和基底外侧隔室中。为了测定在BCRP抑制剂存在下的药物转运速率，将已知的BCRP抑制剂Ko 143以30μm的最终浓度添加到顶端和基底外侧隔室中。温育系统中DMSO的最终浓度为0.5％。
执行药物转运测定
从培养箱中取出MDCK-MDR1或MDCKII-BCRP细胞板。用预热的HBSS(10mM HEPES，pH7.4)洗涤单层两次。然后将板在37℃下温育30分钟。
确定从顶端到基底外侧方向的药物转运速率。将125μL工作溶液添加到Transwell插入件(顶端隔室)中，并立即将50μL样品从顶端隔室转移到新的96孔板中的含有IS(100nM阿普唑仑、200nM咖啡因和100nM甲苯磺丁脲)的200μL乙腈中作为初始供体样品(A-B)。以1000rpm涡旋10分钟。用235μL转运缓冲液填充接收板(基底外侧隔室)中的孔。
确定从基底外侧到顶端方向的药物转运速率。将285μL工作溶液添加到接收板孔(基底外侧隔室)中，并立即将50μL样品从基底外侧隔室转移到新的96孔板中的含有IS(100nM阿普唑仑、200nM咖啡因、100nM甲苯磺丁脲和200nM拉贝洛尔)的200μL乙腈中作为初始供体样品(B-A)。以1000rpm涡旋10分钟。用75μL转运缓冲液填充Transwell插入件(顶端隔室)。顶端到基底外侧方向和基底外侧到顶端方向需要同时进行。将Transwell板在37℃、5％ CO2下在旋转振荡器上以150rpm振荡温育2小时。
在温育结束时，将来自供体侧(Ap→Bl通量的顶端隔室和Bl→Ap的基底外侧隔室)和受体侧(Ap→Bl通量的基底外侧隔室和Bl→Ap的顶端隔室)的50μL样品转移到新的96孔板的孔中，然后添加4体积的含有IS(100nM阿普唑仑、200nM咖啡因、100nM甲苯磺丁脲和200nM拉贝洛尔)的乙腈。将样品涡旋10分钟，然后以3,220g离心40分钟。在LC-MS/MS分析之前，将100μL上清液等分试样与适当体积的超纯水混合。
数据分析
所有计算均使用Microsoft Excel进行。从提取的离子色谱图测定峰面积。
可以使用以下等式计算药物转运测定的表观穿透性(Papp)：
其中，
“Papp”是表观穿透性(cm/s×10-6)；
“dQ/dt”是药物转运速率(pmol/秒)；
“A”是膜的表面积(cm2)；并且
“D0”是初始供体浓度(nM；pmol/cm3)。
可以使用以下等式确定流出比：
其中，
“Papp(B-A)”表示基底外侧到顶端方向的表观穿透性系数；并且
“Papp(A-B)”表示顶端到基底外侧方向的表观穿透性系数。
流出比大于二表明P-gp或BCRP流出转运蛋白的潜在底物。表6中提供了本公开的所选化合物的流出比数据。流出比在2和3之间是弱底物。流出比大于3是PGP或BCRP或两者的强底物。表6中的流出比数据表示为“非底物”(如果值小于或等于2)、“弱底物”(如果值大于2但小于3)和“强底物”(如果值大于或等于3)。空白单元格为“未测试”。
表6：本公开的所选化合物的流出比
实施例149：通过本发明所选化合物评估血脑屏障穿透。
药代动力学样品
使用多达三种施用途径(IV、IP和PO)进行药代动力学研究，以评估化合物的血浆和脑浓度。在8个时间点0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24h采集脑和血浆样品。在每个时间点和每条途径总共使用3只动物，以产生总共多达72只动物用于研究。
血液样品处理和储存：在每个时间点通过心脏穿刺在CD1小鼠中收集血浆样品。收集0.3ml体积并转移到含有抗凝剂K2-EDTA的塑料微型离心管中。将装有血液样品和抗凝剂的收集管倒置几次以适当混合管内容物，然后置于湿冰上。然后将样品在4℃下以4000g离心5分钟以获得血浆。在分析之前，将样品储存在-75±15℃的冰箱中。
脑样品处理和储存：在收集组织之前将小鼠完全放血。程序：打开胸腔，切开心室，并进行温和的iv盐水冲洗(盐水冲洗体积～10ml)，动物头部朝下以45度角放置，以便排出血液。在采用时间点收集脑组织样品，速冻于冰盒中并保持在-75±15℃。在分析之前，将所有组织样品称重并用水按组织重量(g)与水体积(mL)以1:3的比例匀浆。实际浓度为检测值乘以稀释因子4。通过用50％乙腈水溶液稀释分析物储备溶液，获得所需的工作溶液系列浓度。向10μL空白CD1小鼠血浆中添加5μL工作溶液(1、2、4、20、100、200、1000、2000、4000ng/mL)，以获得0.5～2000ng/mL(0.5、1、2、10、50、100、500、1000、2000ng/mL)的校准标准品，总体积为15μL。独立于用于校准曲线的样品制备了四种浓度为1ng/mL、2ng/mL、50ng/mL和1600ng/mL的血浆质量控制样品。这些QC样品在分析当天以与校准标准品相同的方式制备。
生物分析脑样品：将所有脑样品按脑重量(g)与水体积(mL)1:3的比例添加到水中进行匀浆。实际浓度(ng/g)为检测值(ng/mL)乘以4。通过用50％乙腈水溶液稀释分析物储备溶液，获得所需的工作溶液系列浓度。向30μL空白CD1小鼠脑匀浆中添加15μL工作溶液(1、2、4、20、100、200、1000、2000、4000ng/mL)，以获得0.5～2000ng/mL(0.5、1、2、10、50、100、500、1000、2000ng/mL)的校准标准品，总体积为45μL。独立于用于校准曲线的样品制备了四种浓度为1ng/mL、2ng/mL、50ng/mL和1600ng/mL的脑匀浆质量控制样品。这些QC样品在分析当天以与校准标准品相同的方式制备。
PK样品分析：使用LC-MS/MS方法分析血浆和组织样品中化合物的浓度。使用WinNonlin(PhoenixTM，版本6.1)进行药代动力学计算。尽可能根据血浆和脑浓度与时间的关系数据计算以下药代动力学参数：
C0、Cmax、Tmax、T1/2、AUCinf、AUClast、脑与血浆比。
药代动力学数据使用描述性统计数据诸如平均值、标准差来描述。
表7a：化合物7的PK参数：
表7b：比较化合物XX的PK参数：
比较化合物XX
血脑屏障由防止旁细胞转运的非常紧密的连接组成。为了在大脑中实现显著的药物暴露，药物必须穿过分隔血液和大脑的细胞膜。药剂必须通过被动扩散或主动转运来穿过。大多数药物分子通过被动扩散穿透屏障。大脑与血液之间的屏障配备了多药耐药转运蛋白(PGP和BCRP)，它们主动地将分子从大脑流回血液中。通过确保候选药物不是外排蛋白诸如P-gp或BCRP的底物，可以提高脑穿透的可能性。
脑血浆比(Kp)是药理学和药物开发中使用的药代动力学参数，用于测量药物在大脑与血浆(血液的液体部分)之间的分布。它是药物穿透血脑屏障能力的重要指标。Kp可以通过药代动力学参数计算，诸如根据血浆和脑浓度计算出的Cmax、AUClast值。Kp值大于1表示药物在大脑中的浓度高于在血浆中的浓度，这表明血脑屏障的穿透性良好。Kp值远小于1表示脑穿透较差。对于脑癌，希望Kp值大于或等于1。
比较化合物XX被评估为P-gp外排蛋白的“弱底物”和BCRP外排蛋白的“非底物”。因此，表8a提供了比较化合物XX的体内脑与血浆比，如通过上述方案测定的。即使比较化合物XX仅是P-gp的弱底物，该化合物的脑与血浆比对于Cmax和AUClast小于1。
表8a：比较化合物XX的脑与血浆比
本发明的化合物7被评估为P-gp外排蛋白的“非底物”和BCRP外排蛋白的“非底物”。因此，表8b提供了化合物7的体内脑与血浆比，如通过上述方案测定的。化合物7不是P-gp或BCRP的底物，并且取决于施用途径，化合物的脑与血浆比对于Cmax在3-4之间并且对于AUClast在3-9之间。
表8：化合物7的脑与血浆比
对于脑癌，期望的是通过实验证明穿过血脑屏障的化合物具有大于或等于1的Kp值。本公开提供了治疗有效的化合物，这些化合物在穿过血脑屏障方面是有效的，并且已经使用本文实施例中提供的方法和测定法在实验上证明具有大于或等于1的Kp值。
其他实施方案
应当理解，虽然已经结合其详细描述描述了本公开，但是前面的描述旨在说明而不是限制由所附权利要求的范围限定的本发明的范围。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。

Claims (62)

1.一种式I的化合物
或其药学上可接受的盐，其中
X1选自N或C-R2；
Y选自N或CH；
R1选自C1-6烷基、卤代、CN、OR'和NR'2，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
R2选自氢、卤代、CN、C1-6烷基、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其中每个C1-6烷基、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
环A是任选地被一个或多个R3取代基取代的苯基、6元杂环基或6元杂芳基，或者环A是选自式W1-W4的双环部分：
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代；
每个X是CH、C-R3或N；
每个X'是N或O；
环E是苯基、六元杂芳基、或5或6元环基或杂环基；
每个R3是R'或选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、N(S(O2)R')2、C(O)H、C(O)OH、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2和S(O2)R'的取代基，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代；或者
单个碳原子上的两个R3取代基能够组合形成3-6元螺环环烷基或杂环烷基；
环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂环基或稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是苯基、6元杂环基或6元杂芳基；
每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'和C(O)N(R')2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代；
每个R'独立地选自R”、OH、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代；
每个R”独立地选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OC1-6烷基、NH2、NHC1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NH2、C(O)NHC1-6烷基和C(O)N(C1-6烷基)2，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个选自卤代、氧代、烷氧基、CN、NH2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基和C(O)NHC1-6烷基的取代基取代；并且
n是选自0、1、2、3或4的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中X1是N。
3.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中X1是C-R2。
4.根据权利要求3所述的化合物或盐，其中R2选自氢、卤代、CN和C1-6烷基，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代。
5.根据权利要求4所述的化合物或盐，其中R2是CN。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或盐，其中R1选自C1-6烷基、卤代、CN、OR'和NR'2，其中每个C1-6烷基任选且独立地被一个或多个R”取代基取代。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物或盐，其中R1选自甲基、CN或卤代。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物或盐，其中n是0或1。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或盐，其中n是0。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或盐，其中每个R3是R'或选自氧代、OH、卤代、CN、C1-6烷基、环基、杂环基、芳基、杂芳基、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、N(S(O2)R')2、C(O)H、C(O)OH、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2和S(O2)R'的取代基，其中每个烷基、环基、杂环基、芳基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或盐，其中每个R3选自氧代、OH、卤代、CN、OR'、NH2、NHR'、N(R')2、NHS(O2)R'、C(O)H、C(O)OH、C(O)R'、C(O)OR'、C(O)NH2、C(O)NHR'、C(O)NR'2、S(O2)R'、C1-6烷基、C3-6环烷基、3-6元杂环基和5-6元杂芳基，其中每个烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物或盐，其中每个R3选自卤代、氧代、氨基、OH、CN、C1-6烷基、C(O)H、OC1-6烷基、烷氧羰基、C1-6卤代烷基、羧基、C1-6卤代烷氧基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、羟烷基、羟烷基羰基、烷基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、环烷基羰基、氰基氨基羰基、羟基氨基羰基、环烷基氨基羰基、杂环羰基、氰基氨基羰基、羟基氨基羰基、烷基杂环基、杂环基、烷基杂环基羰基、氨基氮杂环丁烷基、氨基氧杂环丁烷基、羟基环丙基、羟基杂环基、氨基杂环基、氨基杂环基羰基、吡咯烷基、环丙基氨基、N-甲基三唑基、咪唑基、吡唑基、氨基烷氧基和三唑基。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物或盐，其中每个R3选自卤代、氧代、NH2、CF3、CH3、OCH3、O(CH2)3N(CH3)2、OCF3、OCHF2、OH、CN、NHS(O)2CH3、S(O)2CH3、C(O)H、C(O)OH、C(CH3)2OH、C(O)CH3、C(O)CF3、C(O)CH2CH3、CH(OH)CH2CH3、CH2OH、C(O)NH2、C(O)NH(CH3)、C(O)OH、C(O)NH(CH2CH3)、C(O)NH(CH(CH3)2)、C(O)NH(C(CH3)3)、C(O)N(CH3)2、C(O)NH(CN)、C(O)NOH(CH3)、C(O)OCH3、C(O)NHCN、C(O)N(CH3)OH、4-甲基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基-羰基、3-二甲基氨基-氮杂环丁烷-1-基、3-二甲基氨基-氮杂环丁烷-1-基-羰基、3-氨基氧杂环丁烷-3-基、3-羟基氧杂环丁烷-3-基、1-羟基环丙基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-1-基-羰基、环丙基氨基、环丙基氨基羰基、4-甲基-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-三唑-1-基、咪唑-1-基、1-甲基-1,2,3-三唑-4-基和1,2,4-三唑-3-基。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物或盐，其中环A是任选地被一个或多个R3取代基取代的苯基、6元杂环基或6元杂芳基。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物或盐，其中环A是选自式W1、W2、W3和W4的双环部分：
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的化合物或盐，其中环A选自
17.根据权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OC1-6烷基、NH2、NHC1-6烷基、N(C1-6烷基)2、C(O)C1-6烷基、C(O)OC1-6烷基、C(O)NH2、C(O)NHC1-6烷基和C(O)N(C1-6烷基)2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中每个R4独立地选自卤代、OH、CN、氧代、C1-6烷基、OC1-6烷基和NH2，其中每个烷基任选且独立地被一个或多个R'取代基取代。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中每个R4独立地选自卤代和C1-6烷基。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是稠合苯环或稠合吡啶环。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物，其中环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基或5元杂芳基，并且环B'是稠合苯环。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的化合物，其中环B和环B'一起形成任选地被一个或多个R4的实例取代的稠合双环杂芳基环系统，其中环B是5元杂环基，并且环B'是稠合苯环。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的化合物，其中环B和环B'一起形成选自 的双环部分。
24.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中X1选自N或C-R2，其中R2选自卤代、CN或C1-6烷基。
25.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中X1选自N或C-CN。
26.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中Y是CH。
27.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物是式Ia的化合物：
其中，
每个X3独立地是N或CH，其中所述CH能够独立地被R3取代；并且
m和p各自独立地是0、1、2或3。
28.根据权利要求27所述的化合物或盐，其中至少两个X3取代基是CH。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的化合物或盐，其中至少一个X3取代基是N。
30.根据权利要求27-29中任一项所述的化合物或盐，其中X1是N。
31.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物是式Ib的化合物：
其中，
每个X3独立地是N或CH，其中所述CH能够独立地被R3取代；并且
m和p各自独立地是0、1、2或3。
32.根据权利要求31所述的化合物或盐，其中至少一个X3取代基是N。
33.根据权利要求32所述的化合物或盐，其中两个X3取代基均是N。
34.根据权利要求32-33中任一项所述的化合物或盐，其中每个R3独立地选自卤代、氧代、NH2、CF3、CH3、OCH3、OH、CN和CH2OH。
35.根据权利要求32-34中任一项所述的化合物或盐，其中m是0或1。
36.根据权利要求32-35中任一项所述的化合物或盐，其中每个R4独立地选自卤代和C1-6烷基。
37.根据权利要求32-36中任一项所述的化合物或盐，其中m是0、1或2。
38.根据权利要求32-37中任一项所述的化合物或盐，其中环A选自
39.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物是式Ic的化合物：
其中，
X1是N或C-CN；
R4'选自氢或卤素；
R4”是卤素；
R5选自氢、NH2、卤代、C1-4烷基和C1-4烷氧基；并且
X3是N或CR6，其中R6选自羟基、C(O)OR'、C(O)N(R')2、(C1-6烷基)SO2和(C1-6烷基)SO2N(R')。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中R4'选自氢或氟。
41.根据权利要求39或权利要求40所述的化合物，其中R4”是氯。
42.根据权利要求39-41中任一项所述的化合物，其中R5选自氢、NH2、氯和甲氧基。
43.根据权利要求39-41中任一项所述的化合物，其中R6选自羟基、C(O)N(CH3)2和CH3SO2N(R')。
44.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物是式IIa的化合物：
其中，
环A是选自式W1、W2、W3和W4的双环部分；
其中式W1-W4中的每一个各自任选且独立地被一个或多个R3取代基取代。
45.根据权利要求44所述的化合物或盐，其中环A选自、
46.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物选自：
47.一种化合物，所述化合物选自：
48.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-47中任一项所述的化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂。
49.一种治疗、改善或预防患者的EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1-47中任一项所述的化合物或其盐，或根据权利要求48所述的药物组合物。
50.根据权利要求49所述的方法，其中EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况是过度增殖性疾病或病况。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述疾病或病况是癌症。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述癌症是胶质母细胞瘤或多形性胶质母细胞瘤。
53.根据权利要求49-52中任一项所述的方法，其中所述患者是人类患者。
54.根据权利要求49-53中任一项所述的方法，其中所述化合物在体内穿过血脑屏障(BBB)。
55.根据权利要求49-54中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述患者施用一种或多种抗癌剂。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述抗癌剂是化疗剂。
57.根据权利要求55所述的方法，其中所述抗癌剂是放射疗法。
58.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1-47中任一项所述的化合物或其盐，或根据权利要求48所述的组合物，以及用于向患有EGFR和/或PI3K介导的疾病或病况的患者施用所述化合物的说明书。
59.根据权利要求58所述的试剂盒，其中所述病况是癌症。
60.根据权利要求59所述的试剂盒，其中所述癌症是胶质母细胞瘤或多形性胶质母细胞瘤。
61.根据权利要求60所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含一种或多种抗癌剂。
62.根据权利要求61所述的试剂盒，其中所述化合物、其盐或组合物与一种或多种抗癌剂一起施用。
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