CN120303300A

CN120303300A - 治疗表达dll3的癌症的方法

Info

Publication number: CN120303300A
Application number: CN202380083220.2A
Authority: CN
Inventors: N·哈希米萨拉威; M·米诺卡; A·戈德里克; X·陈; M·基斯特勒; C-H·如; A·埃里森; A·帕蒂; B·塞布尔
Original assignee: Amgen Inc
Current assignee: Amgen Inc
Priority date: 2022-12-08
Filing date: 2023-12-07
Publication date: 2025-07-11
Also published as: AU2023390130A1; CL2025001677A1; MX2025006653A; KR20250116698A; WO2024123965A2; WO2024123965A3; JP2025541137A; EP4630458A2; TW202436335A; IL320471A

Abstract

本披露提供了在表达人δ样配体3(DLL3)蛋白的受试者中治疗小细胞肺癌(SCLC)的方法。这些方法包括向受试者施用抗原结合分子，该抗原结合分子至少包含结合人DLL3的第一结合结构域，其中至少25％的SCLC细胞表达DLL3，或其中至少25％的SCLC细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

Description

治疗表达DLL3的癌症的方法

技术领域

本披露涉及治疗表达DLL3的癌症(例如小细胞肺癌(SCLC))的方法。

背景技术

小细胞肺癌(SCLC)是一种侵袭性肺癌，预后不良且治疗选择有限，占所有新诊断肺癌的约13％，2021年美国有超过235,000名成年人被诊断为SCLC。数十年来，存活率仍然很低，只有7％的SCLC患者存活五年，这在很大程度上是由于缺乏新的疗法来对抗这种形式的肺癌。大多数患者表现为广泛期疾病，而约三分之一的患者表现为局限期疾病，定义为肿瘤只存在于胸部的一侧，并且其适合单个辐射场(radiation field)。具有淋巴瘤样特征的弥散性、转移性肿瘤是SCLC的标志。第一个已知的SCLC患者诊断将SCLC描述为淋巴系统疾病，直到1926年它才被确认为是肺癌，这突出了SCLC肿瘤与其他实体瘤相比的独特性质。

患者通常对目前的护理标准(包括化学疗法与胸部放射疗法(TRT)的组合)反应良好，但化学抗性疾病总是很快复发，对此目前没有可用的治疗选择。最近，将抗PD-L1抗体阿特珠单抗添加到卡铂和依托泊苷化学疗法中证明了一线环境中的总生存期(OS)有所改善，使得该方案被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于广泛期SCLC的一线治疗。尽管取得了这些治疗进展，但复发性难治性(RR)情况的预后非常差，具有快速的疾病进展和少于六个月的短期中位生存期。此外，SCLC患者有高的并发症率，包括高血压、心脏病、糖尿病和肿瘤伴随综合征。这些，再加上典型的高龄SCLC患者，影响了患者忍受严酷化学疗法方案的能力，进一步限制了治疗选择。

δ样配体3(DLL3)是一种抑制性Notch配体，在SCLC和其他神经内分泌肿瘤中高表达，但在正常组织中表达极低。在一项研究中，所分析的大约86％的SCLC肿瘤通过RNA测序(RNA-seq)显示出DLL3表达的证据(Giffin等人,Clin.Cancer Res.[临床癌症研究],27(5):1526-1537(2021).doi:10.1158/1078-0432.CCR-20-2845)。相反，只有少数正常细胞类型显示出表达DLL3(例如神经元、胰岛细胞和垂体细胞)，并且这样的表达主要是细胞质的。最近的研究报道，DLL3也在神经内分泌来源的其他肿瘤类型(包括黑色素瘤、多形性胶质母细胞瘤、神经内分泌前列腺癌(NEPC)和大细胞神经内分泌肺肿瘤)中表达。

正在研究将靶向DLL3的疗法用于治疗表达DLL3的癌症。例如，特司林-洛伐妥珠单抗(rovalpituzumab tesirine(Rova-T))是一种抗体-药物缀合物(ADC)，其含有靶向DLL3的抗体，该抗体通过蛋白酶可切割接头拴系到细胞毒性剂吡咯并苯并二氮杂卓。尽管在早期临床试验中取得了有希望的结果，但在3期试验中表现出有限的功效和某些毒性的较高发生率后，Rova-T的开发被停止(Blackhall等人,J.Thoracic Oncology[胸部肿瘤学杂志],16(9):1547-1558(2021)；以及Upetry等人,J.Thoracic Oncology[胸部肿瘤学杂志],16(9):1429-1433(2021))。ADC的治疗效果由抗体缀合的细胞毒性/细胞抑制剂介导，ADC通常不参与、募集和/或激活免疫系统的细胞。因此，DLL3仍然是例如参与和激活细胞毒性T细胞的免疫治疗剂的有希望的靶标。

仍然需要用于识别和治疗将从靶向DLL3的免疫治疗剂中受益的患者群体的方法。

发明内容

本披露提供了一种治疗受试者中小细胞肺癌(SCLC)的方法，该方法包括向受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人δ样配体3(DLL3)的第一结合结构域，其中至少25％的SCLC细胞表达DLL3。

在该方法的一些方面，至少50％或至少75％的SCLC细胞表达DLL3。

在该方法的一些方面，使用免疫组织化学(IHC)测定法来测定DLL3表达。

在该方法的一些方面，使用来自受试者的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本来测定DLL3表达。

在该方法的一些方面，在基于铂的治疗后，SCLC在受试者中进展或复发。

在该方法的一些方面，在与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗后，SCLC在受试者中进展或复发。

在该方法的一些方面，受试者(i)已经完成最多两个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，或(ii)已经完成四至六个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，并且没有经历疾病进展。

在一些方面，该方法进一步包括向受试者施用PD-L1抑制剂和可选地化学治疗剂。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子包含结合人CD3的第二结合结构域。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是蛋白质。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子包含抗体、单链可变片段(scFv)、串联单链可变片段(scFv)2、双特异性T细胞接合物分子或异多聚体。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子包含SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗(tarlatamab)。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子包含结合人DLL3的第一异二聚体和结合人CD3的第二异二聚体，其中(a)该第一异二聚体包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链(HC)和含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链(LC)；以及(b)该第二异二聚体包含含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链。

在一些方面，与包含少于50％的SCLC细胞表达DLL3并用相同抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者相比，该方法增加了受试者的无进展生存期(PFS)。

在一些方面，与第二受试者相比，该方法增加总生存期(OS)、客观缓解率(ORR)和/或疾病控制率(DCR)和缓解持续时间(DOR)中的一个或多个。

在一些方面，该方法使得受试者的客观缓解率(ORR)大于约35％。

本披露还提供了一种治疗受试者中SCLC的方法，该方法包括向受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人DLL3的第一结合结构域，其中该SCLC具有DLL3表达水平，其中至少25％的SCLC细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

在该方法的一些方面，SCLC具有DLL3表达水平，其中至少50％或至少75％的SCLC细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

在该方法的一些方面，至少25％的SCLC细胞以2+或3+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是蛋白质。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子包含SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗。

在一些方面，与具有较低DLL3表达水平并用相同抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者相比，该方法增加了受试者的无进展生存期(PFS)。

在一些方面，与第二受试者相比，该方法增加OS、ORR和/或DCR和DOR中的一个或多个。

在该方法的一些方面，癌细胞是活的癌细胞。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且塔拉妥单抗以10mg至100mg的剂量每两周一次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以10mg的剂量每两周一次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以100mg的剂量每两周一次施用。

在一些方面，该方法包括在第1、2和3周以10mg至100mg的剂量每周一次施用塔拉妥单抗，然后每两周一次施用塔拉妥单抗。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且塔拉妥单抗以10mg至100mg的剂量每三周两次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以10mg、30mg或100mg的剂量每三周两次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗在21天周期的第1天和第8天施用。

在该方法的一些方面，双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且塔拉妥单抗以20mg至200mg的剂量每三周一次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以20mg至100mg的剂量每三周一次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以100mg至200mg的剂量每三周一次施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗以20mg、60mg、100mg或200mg的剂量施用。

在该方法的一些方面，塔拉妥单抗在21天周期的第一天施用。

在一些方面，该方法包括在第1和2周以10mg至100mg的剂量每周一次施用塔拉妥单抗，然后每三周一次施用塔拉妥单抗。

在该方法的一些方面，FFPE组织标本是从粗针穿刺活检组织样品制备的。

在该方法的一些方面，受试者是人。在一些实施例中，该人接受过至少一种针对该癌症的先前治疗并且复发。在一些实施例中，至少一种先前治疗是基于铂的化学疗法和依托泊苷，以及可选地抗PD-L1抗体。在一些实施例中，该人未接受过针对该癌症的先前全身性治疗。

附图说明

图1A为显示94例数据截止日期为首次给药日期后至少9周并且可获得其基线后肿瘤数据的患者的肿瘤负荷(由所有靶病灶的最长直径之和(SLD)定义)相对于基线的最佳百分比变化的图。CR表示完全缓解，PR表示部分缓解，SD表示稳定疾病，并且NE表示不可评估。SD^指示患者具有初始缓解，但在后续扫描中没有确认缓解，并且PR**指示患者具有初始PR并且仍有可能进行将来的确认性扫描。队列30中的一例经确认的受试者缺少病灶测量的直径之和，因此未包括在该图中。在这些队列中使用阶梯给药(即，1mg导入剂量)。图1B为显示根据所有具有确认应答的患者(N＝25)的塔拉妥单抗剂量产生应答的时间、治疗持续时间和截至数据截止日期的患者状态的图。

图2A显示了数据截止日期为首次给药日期后至少9周的患者(N＝107)的无进展生存率的Kaplan-Meier曲线。图2B显示了数据截止日期为首次给药日期后至少9周的患者(N＝107)的总生存率的Kaplan-Meier曲线。

图3是ROC曲线，反映了当使用Ventana SP347测定评估的DLL3表达对FIH受试者(1-100mg队列)进行回顾性检查以进行选择时，客观缓解强化的真阳性率(TPR)和假阳性率(FPR)。ROC分析包括入组1-100mg队列的77名受试者，可获得这些受试者的治疗前DLL3表达读数。

图4是显示客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)与表达DLL3的肿瘤细胞百分比的图。

图5A是显示实例1所述的以1步到目标剂量给药塔拉妥单抗单一疗法的FIH队列中总DLL3表达与肿瘤减少之间的关系的图。图5B是显示具有3+DLL3表达强度的肿瘤与肿瘤减少之间的关系的图。BOR表示最佳总体缓解，CR表示完全缓解，PR表示部分缓解，PD表示进展性疾病，SD表示稳定疾病，NE表示不可评估，NA表示“不可用”。

图6A-6D为显示峰值细胞因子水平(6A：IL-6；6B：IL-8；6C：IL-10；6D：TNF-α)在患有CRS的患者内相比于未患有CRS的患者趋向于更高的图。生物标志物可评估患者(N＝86)；在第1周期中患有任何分级CRS的患者(n＝45)；未患有CRS的患者(n＝40)。C1，第1周期；CRS，细胞因子释放综合征；G，分级。

图7为显示来自实例1中所述的I期研究的患者中IL-10表达的纵向分析的图。IL-10表现出显著高于参考正常范围的升高，并且在患有CRS的患者中更高。JT趋势检验调整后的P值＝0.049(在95％置信度下显著)；KW关联检验调整后的P值＝0.096(在90％置信度下显著；在95％置信度下不显著)。黄色虚线指示参考正常范围。

图8A和图8B为显示来自实例1中所述的I期研究的患者中IFN-γ表达的分析的图。IFN-γ诱导高于生理范围；在患有和不患有第1周期CRS的患者之间的诱导相似。JT趋势检验调整后的P值＝0.234(在95％置信度下不显著)；KW关联检验调整后的P值＝0.317(在90％或95％置信度下不显著)。黄色虚线指示参考正常范围。

图9为实例2中所述的临床研究的示意图。

图10是显示实例4中所述的塔拉妥单抗在DLL3+NEPC肿瘤中的功效的瀑布-泳道图。

具体实施方式

本披露至少部分基于如下发现：DLL3由某些类型的癌症表达。通过分析DLL3在小细胞肺癌(SCLC)肿瘤和一大批正常组织中的差异表达，它被鉴定为肿瘤相关抗原以及基于T细胞的疗法的靶标(Giffin等人,J Thorac Oncol.[胸部肿瘤学杂志],13(10):S971(2018))。在SCLC和大细胞神经内分泌癌(LCNEC)的表面观察到DLL3过表达(Rudin等人,Lancet Oncol.[柳叶刀肿瘤学]2017；18:42-51；以及Saunders等人,SciTranslMed.[科学转化医学],2015；7:302ra136)。在其他癌症(包括胰腺癌、胃肠道神经内分泌癌、小细胞膀胱癌、神经内分泌前列腺癌、异柠檬酸脱氢酶突变型神经胶质瘤、妇科癌症和默克尔细胞癌)的细胞中也观察到DLL3表达(Matsuo等人,Cancer Science[癌症科学],112:2984-2992(2021))。因此，DLL3是多种癌症的可能治疗靶标。

本披露提供了治疗受试者(例如，人受试者)中表达DLL3的癌症(例如，小细胞肺癌(SCLC))的方法，该方法包括向受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人DLL3的第一结合结构域。与用相同的双特异性抗原结合分子治疗的DLL3表达较低或无DLL3表达的SCLC癌细胞相比，将本文所述的双特异性抗原结合分子施用给表达一定水平的DLL3的SCLC癌细胞有利地与改善的治疗结局(例如，增加的无进展生存期(PFS)和客观缓解率(ORR))有关。

定义

为了有助于理解本技术，下面定义了几个术语和短语。另外的定义在整个具体实施方式中陈述。

如本文所用，术语“生物标志物(biomarker)”、“标志物(marker)”或“生物标志物(biological marker)”是指可以作为生物过程或条件的指示物进行客观测量和评估的分析物(例如，核酸、DNA、RNA、肽、蛋白质或代谢物)。在一些方面，如果与对照(例如，健康受试者或患有不表达DLL3的SCLC的受试者)相比，可以在肿瘤细胞中对分析物进行定量或定性区分，则分析物是可差异检测的。

如本文所用，术语“抗原结合分子”是指特异性结合抗原的分子或化合物。在一些实施例中，抗原结合分子是蛋白质。如本文所用，术语“抗原结合蛋白”是指与抗原特异性结合的蛋白质分子。例如，抗原结合蛋白可包含抗体或其抗原结合片段。抗原结合蛋白典型地包含抗体的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，或包含由其衍生的结构域。在一些实施例中，抗原结合蛋白包含允许免疫特异性靶结合的抗体的最低结构要求。这种最低要求可以通过例如至少三个轻链互补决定区(CDR)(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)、以及理想地全部六个CDR的存在来定义。这些CDR在抗原结合蛋白中的位置(和顺序)在技术人员的知识范围内。

在某些方面，本披露的抗原结合蛋白是“双特异性的”，意思是抗原结合蛋白能够与两种不同的抗原特异性结合。在另一方面，本披露的抗原结合蛋白可以是“三特异性的”，意思是抗原结合蛋白能够与三种不同的抗原特异性结合。在另一方面，本披露的抗原结合蛋白可以是“四特异性的”，意思是抗原结合蛋白能够与四种不同的抗原特异性结合。

如本文所用，术语“抗体”是指全抗体分子或其片段(例如，片段如scFv、Fab、Fab’和F(ab’)₂)，除非另有说明；抗体可以是多克隆或单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体等。在天然全抗体中，重链包含可变区VH和三个恒定区CH1、CH2和CH3。VH结构域位于重链的氨基末端，CH3结构域位于羧基末端。在天然全抗体中，轻链包含可变区VL和恒定区CL。轻链的可变区位于该轻链的氨基末端。在天然全抗体中，各轻链/重链对的可变区典型地形成抗原结合位点。恒定区典型地负责效应子功能。

在人抗体中，CH1意指在EU索引或EU编号系统的位置118至215处具有氨基酸序列的区域，该EU索引或EU编号系统基于测序的第一个人IgG1(即“EU抗体”)的序列编号(Edelman等人,Proc NatlAcad Sci USA[美国国家科学院院刊],63(1):78-85(1969))。称为“铰链区”的高度柔性氨基酸区在CH1与CH2之间存在。CH2表示在EU索引的位置231至340处具有氨基酸序列的区域，并且CH3表示在EU索引的位置341至446处具有氨基酸序列的区域。

“CL”表示轻链的恒定区。在人抗体的κ链的情况下，CL表示在EU索引的位置108至214处具有氨基酸序列的区域。在λ链中，CL表示在位置108至215处具有氨基酸序列的区域。

在天然抗体中，可变区典型地表现出相同的一般结构，其中相对保守的框架区(FR)由三个高变区(也称为互补决定区(CDR))连接。来自每对的两条链的CDR典型地通过框架区比对，这可以使得能够结合特定表位。从N末端到C末端，轻链可变区和重链可变区典型地均包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链上的CDR称为H1、H2和H3，而轻链上的CDR称为L1、L2和L3。典型地，CDR3是抗原结合位点内分子多样性的最大来源。每个结构域的氨基酸的分配典型地根据如下的定义：Kabat等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest[具有免疫学意义的蛋白质序列](National Institutes ofHealth[美国国立卫生研究院],公开号91-3242,第1-3卷,贝塞斯达,马里兰州)；Chothia,C.,和Lesk,A.M.(1987)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],196:901-917；或Chothia C.等人,Nature[自然],342:878-883(1989)。在一些实施例中，根据Kabat或Chothia的定义来定义抗原结合蛋白的CDR。在本申请中，除非另有说明，否则术语“CDR”是指来自轻链或重链的CDR。

抗体可以包含本领域已知的任何恒定区。人轻链分类为κ轻链和λ轻链。重链分类为μ、δ、γ、α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有若干个亚类，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包括但不限于IgM1和IgM2。本披露的实施例包括所有这种抗体类别或同种型。轻链恒定区可为例如κ型或λ型轻链恒定区，例如人κ型或λ型轻链恒定区。重链恒定区可为例如α型、δ型、ε型、γ型或μ型重链恒定区，例如人α型、δ型、ε型、γ型或μ型重链恒定区。因此，在示例性实施例中，抗体是同种型IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的抗体，包括IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的任一种。在某些实施例中，抗体是同种型IgG(例如，IgG1)。

抗体可以是单克隆抗体。如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由针对抗原上的单个表位的B淋巴细胞的单个克隆产生的抗体。单克隆抗体典型地使用杂交瘤技术产生，如在Kohler and Milstein,Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志],5:511-519(1976)中首次描述。单克隆抗体也可使用重组DNA方法产生(参见例如，美国专利4,816,567)，从噬菌体展示抗体文库中分离(参见例如，Clackson等人Nature[自然],352:624-628(1991)；和Marks等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],222:581-597(1991))，或由携带完全人免疫球蛋白系统的转基因小鼠产生(参见例如，XENOMOUSE^TM小鼠、Green等人(1994)Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21、US2003-0070185、WO 96/34096和WO 96/33735)。相反，“多克隆”抗体是由动物体内不同B细胞谱系分泌的抗体。多克隆抗体是识别同一抗原上多个表位的免疫球蛋白分子的集合。

如本文所用，术语“嵌合抗体”是指含有来自两种或更多种不同抗体的结构域的抗体。嵌合抗体可以例如含有来自一个物种的恒定结构域，和来自第二物种的可变结构域，或更通常地，可以含有来自至少两个物种的氨基酸序列的区段。嵌合抗体还可以含有同一物种内的两种或更多种不同抗体的结构域。术语“人源化”在关于抗体使用时是指至少具有来自经工程化以具有比原始来源抗体更类似于真实人抗体的结构和免疫学功能的非人来源CDR区的抗体。例如，人源化可涉及将来自非人抗体(例如小鼠抗体)的CDR接枝到人抗体中。人源化还可以涉及所选择的氨基酸取代以使非人序列更类似于人序列。

抗体可以通过酶(例如木瓜蛋白酶和胃蛋白酶)切割成片段。木瓜蛋白酶切割抗体以产生两个Fab片段和单个Fc片段。胃蛋白酶切割抗体以产生F(ab’)2片段和pFc’片段。在示例性方面，本披露的双特异性抗原结合蛋白包含抗原结合抗体片段。如本文所用，术语“抗原结合抗体片段”是指抗体分子中能够与抗体的抗原结合的部分，也称为“抗原结合片段”或“抗原结合部分”。在一些实施例中，抗原结合抗体片段是Fab片段或F(ab')2片段。

抗体架构已经被用于建造越来越多的替代形式，其跨越至少约12-150kDa的分子量范围和具有从单体(n＝1)、二聚体(n＝2)和三聚体(n＝3)到四聚体(n＝4)并且可能更高的化合价(n)范围；这样的替代形式在本文中称为“抗体蛋白产物”。抗体蛋白产物包括基于完整抗体结构的那些和模拟保留完整抗原结合能力的抗体片段的那些，例如单链可变片段(scFv)、Fab和VHH/VH(以下所讨论的)。保留其完全抗原结合位点的最小抗原结合抗体片段为Fv片段，其完全由可变(V)区组成。使用可溶的柔性氨基酸肽接头将V区连接至scFv(单链可变片段)片段以稳定分子，或者将恒定(C)结构域添加到V区以产生Fab片段。scFv和Fab片段均可以容易地在宿主细胞、例如原核宿主细胞中产生。其他抗体蛋白产物包括串联单链可变片段(scFv)₂、经二硫键稳定的scFv(ds-scFv)、单链Fab(scFab)以及二聚体及多聚体抗体形式，如双功能抗体、三功能抗体和四功能抗体，或包含由与寡聚结构域连接的scFv组成的不同形式的迷你抗体(miniAb)。肽体(peptibody)或肽-Fc融合物是另一种抗体蛋白产物。肽体的结构由接枝到Fc结构域上的生物活性肽组成。本领域充分描述了肽体(参见例如，Shimamoto等人,mAbs[单克隆抗体]4(5):586-591(2012))。

本披露的双特异性抗原结合分子可包含上述抗体蛋白产物中的任一种。在示例性方面，本披露的双特异性抗原结合蛋白包含scFv、(scFv)₂、Fab、VHH/VH、Fv片段、ds-scFv、scFab、二聚体抗体、多聚体抗体(例如双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体)、迷你抗体、骆驼科重链抗体的肽体VHH/VH、scFv-单结构域mAb、多聚体蛋白、sdAb、双功能抗体；三功能抗体；四功能抗体；双特异性或三特异性抗体、BsIgG、附加IgG、BsAb片段或双特异性融合蛋白中的任一种。在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白包含(scFv)₂、scFab、scFv-单结构域mAb或多聚体蛋白。在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白包含(scFv)₂或多聚体蛋白。

如本文所用，当抗原结合蛋白在类似结合测定条件下对靶抗原的结合亲和力明显高于其对其他不相关蛋白质的亲和力且因此能够相区分时，该抗原结合蛋白“特异性结合至”该抗原。特异性结合抗原的抗原结合蛋白可能具有≤1x 10^-6M的平衡解离常数(K_D)。在示例性方面，本文提供的双特异性抗原结合蛋白的K_D为微摩尔、纳摩尔、皮摩尔或飞摩尔。当K_D≤3x 10^-8M时，抗原结合蛋白以“高亲和力”特异性结合抗原。在一些实施例中，本披露的双特异性抗原结合蛋白以K_D≤100nM(例如，90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM或由前述值中的任两个定义的范围)与一种或多种靶抗原结合。在其他实施例中，本披露的双特异性抗原结合蛋白以约10nM-30nM(例如，约15nM、20nM或25nM)的K_D与一种或多种靶抗原结合。

可使用多种技术确定亲和力，这些技术的一个实例是酶联免疫吸附测定(ELISA)。在各种实施例中，通过表面等离激元共振测定(例如基于的测定)确定亲和力。使用此方法，可以测量缔合速率常数(k_a，以M^-1s^-1表示)和解离速率常数(k_d，以s^-1表示)。然后可以由动力学速率常数的比率(k_d/k_a)计算平衡解离常数(K_D，以M表示)。在一些实施例中，可以通过动力学方法、例如动力学排除测定(KinExA)(如Rathanaswami等人,AnalyticalBiochemistry[分析生物化学],373:52-60(2008)中所描述)确定亲和力。使用KinExA测定，可以测量平衡解离常数(K_D，以M表示)和缔合速率常数(ka，以M^-1s^-1表示)。解离速率常数(以s^-1表示的k_d)可以由这些值计算(K_D x k_a)。在其他实施例中，通过平衡/溶液方法确定亲和力。在某些实施例中，通过细胞上结合测定使用流式细胞术确定亲和力。在本披露的某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白以20nM(2.0x 10^-8M)或更低的K_D、10nM(1.0x 10^-8M)或更低的K_D、1nM(1.0x 10^-9M)或更低的K_D、500pM(5.0x 10^-10M)或更低的K_D、200pM(2.0x 10^-10M)或更低的K_D、150pM(1.50x 10^-10M)或更低的K_D、125pM(1.25x 10^-10M)或更低的K_D、105pM(1.05x10^-10M)或更低的K_D、50pM(5.0x10^-11M)或更低的K_D、20pM(2.0x 10^-11M)或更低的K_D与由哺乳动物细胞(例如，CHO、HEK 293、Jurkat)表达的一种或多种靶抗原特异性结合，如通过动力学排除测定确定的(Rathanaswami等人，同上)。在一些实施例中，本文所述的双特异性抗原结合蛋白表现出所需特征，例如，如通过k_d测量的约10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9、10^-10s^-1或更低的对一种或多种靶抗原的结合亲合性(更低的值表示更高的结合亲合性)、和/或如通过K_D测量的约10^-9、10^-10、10^-11、10^-12、10^-13、10^-14、10^-15、10^-16M或更低的对一种或多种靶抗原的结合亲和力(更低的值表示更高的结合亲和力)。

在本披露的某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白可以是多价的。结合蛋白的化合价表示该结合蛋白内单独的抗原结合结构域的数量。在一些实施例中，双特异性抗原结合蛋白可以是多价的。例如，在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白可以是四价的，其包含四个抗原结合结构域：与第一靶抗原结合的两个抗原结合结构域和与第二靶抗原结合的两个抗原结合结构域。四特异性抗原结合蛋白是四价的，并且包含四个抗原结合结构域：一个与第一靶抗原结合的抗原结合结构域、一个与第二靶抗原结合的抗原结合结构域、一个与第三靶抗原结合的抗原结合结构域和一个与第四靶抗原结合的抗原结合结构域。

如本文所用，术语“抗原结合结构域”可与“结合结构域”互换使用，是指抗原结合蛋白的区域，所述区域含有与抗原相互作用并赋予抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基。在一些实施例中，结合结构域可衍生自一种或多种靶抗原的天然配体。如本文所用，术语“一种或多种靶抗原”是指双特异性抗原结合分子的第一靶抗原和/或第二靶抗原，并且还指四特异性分子的第一靶抗原、第二靶抗原、第三靶抗原和/或第四靶抗原。

如本文所用，术语“免疫球蛋白结构域”是指包含与免疫球蛋白的氨基酸序列相似的氨基酸序列并包含大约100个氨基酸残基(包括至少两个半胱氨酸残基)的肽。免疫球蛋白结构域的实例包括免疫球蛋白重链的VH、CH1、CH2和CH3，以及免疫球蛋白轻链的VL和CL。另外，免疫球蛋白结构域发现于免疫球蛋白以外的蛋白质中。免疫球蛋白以外的蛋白质中的免疫球蛋白结构域的实例包括属于免疫球蛋白超家族的蛋白质(如主要组织相容性复合体(MHC)、CD1、B7、T细胞受体(TCR)等)中包含的免疫球蛋白结构域。任一免疫球蛋白结构域都可用作本文所述的双特异性抗原结合蛋白的免疫球蛋白结构域。

与一种或多种靶抗原特异性结合的结合结构域可以衍生自a)这些抗原的已知抗体，或者b)通过使用抗原蛋白或其片段的从头(de novo)免疫方法、通过噬菌体展示或其他常规方法获得的新抗体或抗体片段。衍生出双特异性抗原结合蛋白的结合结构域的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体或人源化抗体。在某些实施例中，衍生出结合结构域的抗体是单克隆抗体。在这些和其他实施例中，抗体是人抗体或人源化抗体，并且可以是IgG1型、IgG2型、IgG3型或IgG4型。例如，结合结构域可以从或基于IgG1单克隆抗体获得。

如本文所用，“多聚体蛋白”是指含有多于一条单独的多肽链或蛋白质链的蛋白质，这些单独的多肽链或蛋白质链彼此缔合以在体外或体内形成单个蛋白质。多聚体蛋白可包含多于一种的同类型多肽以形成“同多聚体”。替代性地，多聚体蛋白也可由多于一种的具有不同序列的多肽构成，以形成“异多聚体”。因此，“异多聚体”是包含至少第一多肽和第二多肽的分子，其中该第二多肽在氨基酸序列上与该第一多肽相差至少一个氨基酸残基。异多聚体可包含由第一和第二多肽形成的“异二聚体”或可形成存在多于两种多肽的更高级的三级结构。

如本文所用，术语“稳定性”和“稳定”定义为在一段时间内维持双特异性抗原结合多肽或蛋白质的化学或物理完整性和/或生物活性。稳定抗原结合多肽或蛋白质包括防止或延迟抗原结合多肽或蛋白质从其生物和/或治疗活性形式降解或退化为非活性形式。不稳定性可能起因于如聚集、变性、片段化或化学修饰(如氧化、交联、脱酰胺)以及与包含抗原结合多肽或蛋白质的组合物所特有的其他组分反应等事件。

抗原结合蛋白或多肽的稳定性可使用本领域已知的方法来表征，包括但不限于用免疫测定技术(如ELISA)测量生物活性(如抗原结合活性)，或确定抗原结合蛋白或多肽的纯度或物理/化学变化的其他技术，如尺寸排阻色谱法、毛细管凝胶电泳、圆二色性或质谱法。稳定性是通过对在初始时间点(如在配制或制备组合物时(即，视情况而定，悬浮液或分散体))经由这些类型的表征方法获得的测量值与在稍后时间点(即在给定环境或条件下储存后)获得的测量值进行比较来确定的。

如本文所用，术语“CD3受体复合物”是指由四条链构成的蛋白质复合物。在哺乳动物中，复合物含有CD3γ(gamma)链、CD3δ(delta)链和两条CD3ε(epsilon)链。这些链与T细胞受体(TCR)和所谓的ζ(zeta)链缔合以形成T细胞受体CD3复合物并在T淋巴细胞中生成激活信号。CD3γ(gamma)、CD3δ(delta)和CD3ε(epsilon)链是含有单一细胞外免疫球蛋白结构域的免疫球蛋白超家族的高度相关的细胞表面蛋白。CD3分子的细胞内尾含有对于TCR的信号传导能力所必需的单一保守基序，称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或简称ITAM。CD3ε分子是多肽，该多肽在人中由位于染色体11上的CD3E基因编码。CD3ε的最优选的表位包括在人CD3ε细胞外结构域的氨基酸残基1-27内。

术语“治疗”包括，例如，改善或降低疾病的严重程度，或缩短疾病的持续时间。此外，术语“治疗”以及与之相关的词语不一定隐含100％或完全治疗。更确切些，存在本领域中普通技术人员认为具有潜在益处或治疗作用的不同程度的治疗。在此方面，本披露内容的癌症治疗方法可提供任何量或任何水平的治疗。此外，由本披露内容的方法提供的治疗可包括治疗所治疗癌症的一种或多种病状或症状或体征。

可以通过定期评估接受治疗的患者来监测治疗功效。对于几天或更长时间的重复施用，取决于病症，可以重复进行治疗直至出现所希望的疾病症状的遏制。然而，其他剂量方案可能是有用的并且在本披露的范围内。

“约”或“大约”与可测量的数值变量结合使用时，指变量的指示值和变量的所有值，这些值在指示值的实验误差范围内(例如，在平均值的95％置信区间内)或指示值的±10％，以较大者为准。数字范围包括定义该范围的数字。

本披露不限于本文所述的特定氨基酸序列。在一些实施例中，本披露提供了与本文鉴定的任一氨基酸序列至少约90％相同(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同)的氨基酸序列。氨基酸或核酸序列“同一性”可通过将目的核酸或氨基酸序列与参考核酸或氨基酸序列进行比较来确定。同一性百分比是目的序列和参考序列之间相同(即，具有同一性)的核苷酸或氨基酸残基数除以最长序列的长度(即，目的序列或参考序列的长度，以较长者为准)。用于获得两个或更多个序列之间的最佳比对并计算其同一性的多个数学算法是已知的，并且将这些数学算法并入多个可用的软件程序中。这样的程序的实例包括CLUSTAL Omega、T-Coffee和ALIGN(用于核酸和氨基酸序列的比对)、BLAST程序(例如，BLAST 2.13、BL2SEQ及其后续版本)以及FASTA程序(例如，FASTA3x、FASTM和S SEARCH)(用于序列比对和序列相似性搜索)。序列比对算法也披露于例如，Altschul等人,J.Molecular Biol[分子生物学杂志],275(3):403-410(1990)；Beigert等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],106(10):3770-3775(2009)；Durbin等人,编辑,Biological Sequence Analysis:Probabilistic Models of Proteins and Nucleic Acids[生物序列分析：蛋白质和核酸的概率模型],Cambridge University Press[剑桥大学出版社],英国剑桥(2009)；Soding,Bioinformatics[生物信息学],27(7):951-960(2005)；Altschul等人,Nucleic AcidsRes.[核酸研究],25(17):3389-3402(1997)；和Gusfield,Algorithms on Strings,Treesand Sequences[字符串、树和序列的算法],Cambridge University Press[剑桥大学出版社],英国剑桥(1997)中。

双特异性抗原结合分子

如上所讨论，本文提供的抗原结合分子是“双特异性”的，因为它们结合两种不同的抗原或表位。在一些实施例中，双特异性抗原结合分子是至少包含结合人DLL3的第一结合结构域的抗原结合蛋白。在优选实施例中，双特异性抗原结合分子是抗原结合蛋白，其至少包含结合人DLL3的第一结合结构域和结合人CD3(如上所述的T细胞上的T细胞受体复合物的亚基)的第二结合结构域。

δ样配体3(DLL3)是一种非典型Notch配体，主要在胚胎发育过程中(在体节发生过程中起作用)表达。DLL3在正常组织的高尔基体中累积(Geffers等人,J Cell Biol.[细胞生物学杂志],178:465-476(2007))。人DLL3蛋白包含几个细胞外结构域：信号肽、N-末端、DSL、EGF1、EGF2、EGF3、EGF4、EGF5、EGF6和膜近端结构域。人DLL3的示例性氨基酸序列包括例如，UniProt Q9NYJ7和NCBI参考序列：NP_058637.1。

第一结合结构域可以结合人DLL3的任何合适区域或表位。在一些实施例中，第一结合结构域结合包含在EGF3和EGF4结构域内的人DLL3的表位，例如SEQ ID NO:1的氨基酸序列内的表位。例如，第一结合结构域可以结合EGF3结构域内的人DLL3的表位，其包含在SEQ ID NO:2的氨基酸序列内。在其他实施例中，双特异性抗原结合分子的第一结合结构域结合包含在EGF5结构域(SEQ ID NO:3)和/或EGF6结构域(SEQ ID NO:4)内的人DLL3的表位。靶向DLL3的药剂的一个实例是结合DLL3和CD3的双特异性T细胞接合抗原结合多肽，如分子。分子是由两个柔性连接的结合结构域组成的重组蛋白，每个结构域都衍生自抗体。分子的一个结合结构域对肿瘤相关表面抗原(如DLL3)具有特异性；第二结合结构域对CD3具有特异性。通过其特定设计，抗体构建体独特地适合于将T细胞与靶细胞瞬时连接，并且同时强有力地激活T细胞对靶细胞的固有细胞溶解潜力。参见例如，WO 99/54440、WO 2005/040220、和WO 2008/119567。

在一些实施例中，双特异性抗原结合蛋白可包含两个串联scFv氨基酸序列(scFv)₂：一个结合人DLL3，另一个结合人CD3。在这方面，例如，第一scFv的氨基酸序列包含与人DLL3结合的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，而第二scFv的氨基酸序列包含与人CD3结合的VH和VL。在一些实施例中，VH和VL通过接头连接以形成单链Fv(scFv)。在一些实施例中，接头是包含选自SEQ ID NO:5-13中任一个的序列的肽接头。在一些实施例中，接头是GS接头，例如Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(G4S，SEQ ID NO:6)或其聚合物，即(Gly4Ser)x，其中x是1或更大的整数(例如，2或3)(例如，SEQ ID NO:12或13)。

在某些实施例中，本文所述的抗DLL3抗原结合蛋白包含结合DLL3(优选人DLL3)并包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的第一结合结构域，以及结合CD3(优选人CD3)并包含SEQID NO:15的氨基酸的第二结合结构域。在某些实施例中，本文所述的抗DLL3抗原结合蛋白包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。

在各种实施例中，双特异性抗原结合蛋白为塔拉妥单抗(国际药物非专利药名(INN)：建议INN：列表123，WHO药物信息34(2):395-397(2020))，也称为AMG 757，其是为治疗SCLC而开发的半衰期延长的分子。塔拉妥单抗的活性需要同时结合靶细胞(DLL3+细胞)和T细胞两者。塔拉妥单抗的药理作用是通过特异性重定向先前引发的细胞毒性CD8+或CD4+T淋巴细胞以杀伤DLL3+细胞来介导的。塔拉妥单抗在1期研究中显示出对SCLC患者的抗肿瘤活性，并且临床评估正在进行中(参见例如，ClinicalTrials.gov标识符：NCT03319940以及Owonikoko等人,Journal of Clinical Oncology[临床肿瘤学杂志]39:15_suppl,8510-8510(2021))。例如，WO 2017/021349和WO 2021/092134详细描述了塔拉妥单抗。

在一些实施例中，双特异性抗原结合蛋白可以是异多聚体。示例性异多聚体包括但不限于异二聚体抗体(在本文中可与“异免疫球蛋白”或“异Ig”互换使用)，它们是包含两条不同轻链和两条不同重链的抗体。在一些实施例中，本披露涵盖的异多聚体包含与人DLL3结合的第一异二聚体和与人CD3结合的第二异二聚体。

在一些实施例中，第一异二聚体包含含有SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链(HC)，和含有SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链(LC)；并且第二异二聚体包含含有SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链，和含有SEQ IDNO:20的氨基酸序列的轻链。例如，第一异二聚体可包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链。替代性地，第一异二聚体可包含含有SEQID NO:21的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，例如，第二异二聚体可包含含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链。在其他实施例中，例如，第二异二聚体可包含含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链。在一些实施例中，第一异二聚体可包含含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链。在另外的实施例中，第二异二聚体可包含含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链。

因此，本文提供的示例性异多聚体可包含含有SEQ ID NO:17的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:18的轻链氨基酸序列的第一异二聚体；和含有SEQ ID NO:19的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:20的轻链氨基酸序列的第二异二聚体。在其他实施例中，本文提供的示例性异多聚体可包含含有SEQ ID NO:17的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:18的轻链氨基酸序列的第一异二聚体；和含有SEQ ID NO:24的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:20的轻链氨基酸序列的第二异二聚体。在一些实施例中，本文提供的示例性异多聚体包含含有SEQ ID NO:21的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:22的轻链氨基酸序列的第一异二聚体；和含有SEQ ID NO:19的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:20的轻链氨基酸序列的第二异二聚体。在其他实施例中，本文提供的示例性异多聚体包含含有SEQ ID NO:21的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:22的轻链氨基酸序列的第一异二聚体；和含有SEQ ID NO:24的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:20的轻链氨基酸序列的第二异二聚体。

本披露所包含的结合DLL3和CD3的其他示例性抗原结合蛋白包括多特异性结合蛋白，例如，Hipp等人,Clin Cancer Res[临床癌症研究]2020；26:5258–68；WO2019/234220；和WO 2020/069028中所述。在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白是包含以下的蛋白质：(a)第一结构域，该第一结构域为与人CD3特异性结合的单链可变片段(scFv)；(b)第二结构域，其为与人血清白蛋白特异性结合的单结构域抗体；以及(c)第三结构域，其为与DLL3蛋白特异性结合的单结构域抗体。在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白包含SEQ ID NO:26或27的氨基酸序列或由其组成。在某些实施例中，双特异性抗原结合蛋白是包含以下的蛋白质：(a)与人DLL3特异性结合的第一抗原结合结构域；(b)与人CD3特异性结合的第二抗原结合结构域，和(c)第一和第二Fc结构域，其中该第一Fc结构域共价连接至第一抗原结合结构域，并且该第二Fc结构域共价连接至第二抗原结合结构域。在某些实施例中，第一结合结构域与人DLL3的膜近端区域(例如，SEQ ID NO:28)特异性结合。在某些实施例中，第一结合结构域从其N末端到C末端包含第一轻链可变结构域、第一轻链恒定结构域、第一肽接头、第一重链可变结构域和第一重链恒定CH1结构域；并且第二结合结构域从其N端到C端包含第二轻链可变结构域、第二轻链恒定结构域、第二肽接头、第二重链可变结构域和第二重链恒定CH1结构域。

在一些实施例中，该抗原结合分子包含免疫球蛋白恒定区。如本文所用，术语“恒定区”是指抗体中除可变区外的所有结构域。恒定区不直接参与抗原的结合，但展现各种效应子功能。如以上所述，抗体取决于其重链恒定区的氨基酸序列而分为特定同种型(IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和亚型(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2)。轻链恒定区可以为例如见于全部五个抗体同种型中的κ型或λ型轻链恒定区，例如人κ型或λ型轻链恒定区。在一些实施例中，本披露所包含的抗原结合蛋白是IgG1或IgG4同种型。

DLL3表达

本披露提供了治疗受试者中表达DLL3的癌症(例如，小细胞肺癌(SCLC))的方法。对于本文所述的治疗SCLC的任一方法，SCLC癌细胞理想地在细胞表面表达DLL3。在其他实施例中，SCLC癌细胞在细胞表面和细胞质中表达DLL3。在一些方面，DLL3蛋白的细胞表面表达和细胞间表达可以通过免疫组织化学(IHC)或正电子发射断层扫描(PET)来确定。用于确定DLL3蛋白表达的任何合适的IHC测定法可以结合本披露使用。理想地，IHC测定法由管理机构(如美国食品和药物管理局(FDA)或具有CE-IVD注册权限的机构)批准。DLL3特异性IHC测定法及其组分是本领域已知的，并且可从多种来源商购获得。例如，可以使用DLL3(SP347)测定(罗氏诊断有限公司(Roche Diagnostics,GmbH)，德国曼海姆)检测癌细胞或肿瘤细胞中的DLL3表达。可用于在IHC测定法中检测DLL3表达的其他抗DLL3抗体包括但不限于，NBP2-24669(罗福斯生物制剂公司(Novus Biological)，科罗拉多州立托顿市(Littleton，CO))；PA5-26336(赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific)，马萨诸塞州沃尔瑟姆市)；和ab229902(艾博抗公司(Abcam)，马萨诸塞州剑桥)。

在其他实施例中，可以测定SCLC中的DLL3基因表达。用于检测和定量基因表达(例如，mRNA水平)的方法在本领域是已知的，并且可用于本披露的上下文。这些方法包括，例如，基于流式细胞术的方法、聚合酶链式反应(PCR)分析、测序分析(例如RNA测序)、电泳分析、限制性片段长度多态性(RFLP)分析、RNA印迹分析、定量PCR、逆转录酶-PCR分析(RT-PCR)等。

在一些实施例中，癌细胞的至少5％(例如，5％、10％或20％)可对DLL3呈阳性，如通过IHC所确定的。从受试者获得的样品中DLL3阳性SCLC细胞的量可以用肿瘤比例得分(TPS)表示。“肿瘤比例得分”是显示DLL3的部分或完全膜和细胞质染色的活的癌细胞或肿瘤细胞的百分比。在一些实施例中，受试者中或从受试者获得的SCLC样品中至少25％(例如，30％、35％、40％或45％)的SCLC细胞表达DLL3(25％ TPS)。在某些实施例中，受试者中或从受试者获得的SCLC样品中至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、80％、90％、99％或100％)的SCLC细胞表达DLL3(50％ TPS)。例如，受试者中或从受试者获得的SCLC样品中至少75％(例如，85％、95％或100％)的SCLC细胞表达DLL3(75％ TPS)。活的癌细胞或肿瘤细胞是指具有正常形态和完整细胞核(例如，没有细胞核起泡(nuclear blebbing))的癌细胞或肿瘤细胞，并且是由本领域普通技术人员(例如病理学家)常规进行的定性评估。在某些实施例中，活的癌细胞或肿瘤细胞由病理学家确定。

例如，在使用DLL3(SP347)测定(Roche Diagnostics,GmbH,德国曼海姆)的实施例中，可以采用以下DLL3评分算法：

25％截止时的阳性状态DLL3(SP347)：≥25％的活肿瘤细胞使用任何物镜均表现出中度至强的膜和/或细胞质染色。

75％截止时的阳性状态DLL3(SP347)：≥75％的活肿瘤细胞使用任何物镜均表现出中度至强的膜和/或细胞质染色。

上述评分算法的某些考虑因素包括，例如，(i)对使用的放大倍率没有限制；(ii)需要至少100个具有良好保存形态的活的肿瘤细胞；和(iii)考虑部分/不完全细胞(细胞或膜)染色，并在评估中考虑最高强度。

通过IHC的DLL3表达水平也可以通过给予肿瘤样品基于DLL3阳性信号强度的IHC得分来确定。在一些实施例中，肿瘤评分基于Huang等人,Arch Pathol Lab Med[病理学与检验医学档案],143(11):1373-137(2019)中描述的方法。例如，为了评估DLL3染色，可以在任何放大倍率下收集膜和细胞质的组合H得分。H得分可使用以下公式计算：1x(以1+强度染色的细胞的百分比)+2x(以2+强度染色的细胞的百分比)+3x(以3+强度染色的细胞的百分比)，并且通常在0-300的范围内。令人惊讶的是，将细胞质DLL3染色与膜DLL3染色相结合并不会降低DLL3表达对治疗结局的预测/相关价值，事实上会产生更有效的分析。阴性或弱染色可在至少20倍放大倍率下确认。DLL3阳性可定义为≥1％染色肿瘤细胞。苏木精和曙红(H&E)染色可使用常规方法进行，H&E染色载玻片可用于评估肿瘤含量和组织质量评估。在一些实施例中，至少100个活的肿瘤细胞(例如，120、130、140、150、200、300、400、500个或更多个活的肿瘤细胞)用于DLL3评估。如上所讨论，可以对肿瘤组织进行特定百分比的肿瘤细胞染色评分。也可以对肿瘤组织进行肿瘤细胞DLL3染色总强度评分，范围为0到3，增量为1。例如，肿瘤细胞的强细胞质和/或膜DLL3染色可评分为“3”或“3+”，中度染色可评分为“2”或“2+”，弱染色可评分为“1”或“1+”。没有任何DLL3阳性染色可被给予“0”的得分。在一些实施例中，2、2+、3或3+(例如，2+、3+或2+和3+)的IHC强度得分指示高水平的DLL3表达或DLL3过表达。在其他实施例中，通过IHC的肿瘤细胞的3+染色指示高水平的DLL3表达或DLL3过表达。在一些实施例中，IHC强度得分(例如，1+、2+或3+)由病理学家确定。

因此，本披露还提供一种治疗受试者中SCLC的方法，该方法包括向受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人DLL3的第一结合结构域，其中至少25％(例如，30％、35％、40％、45％)的SCLC细胞表达DLL3，例如，通过IHC测定法所测定的。在某些实施例中，至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、80％、90％、99％或100％)的SCLC细胞表达DLL3。例如，至少75％(例如，85％、95％或100％)的SCLC细胞表达DLL3。在某些实施例中，本披露提供了一种治疗受试者中SCLC的方法，该方法包括向受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人DLL3的第一结合结构域，其中该SCLC具有DLL3表达水平，其中至少25％(例如，30％、40％、50％、60％、70％或更多)的SCLC细胞以等于或大于2+(例如，2+、3+或2+和3+)的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。例如，在一些实施例中，该SCLC具有DLL3表达水平，其中至少75％(例如，80％、85％、90％、95％、99％或100％)的SCLC细胞以等于或大于2+(例如，2+、3+或2+和3+)的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

根据本发明的方法，可以将样品中检测到的一个或多个IHC信号的强度与预定参考值进行比较，例如预定的阈值。术语“预定参考值”是指用于评估测定结果的测定值或定义的分析物量。例如，预定参考值可以是与已知量的DLL3蛋白相对应的DLL3阳性信号。术语“预定阈值”和“预定截止值”在本文中可互换使用，指的是测定值或定义的分析物量，用于通过将测定结果与预定阈值或截止值进行比较来评估受试者肿瘤样品中的DLL3表达。虽然本披露可以提供示例性预定阈值水平，但众所周知，截止值可以根据测定的性质(例如，所使用的抗体等)而变化。此外，将本文的披露内容适用于其他样品以获得基于本披露的此类测定的测定特异性参考或截止值完全在本领域的普通技术人员的范围内。不受理论限制，使用成对的嵌套截止值(例如25％ TPS或75％ TPS)来鉴定表达DLL3的癌症确保了包括中等和高表达的肿瘤细胞，同时也允许分析强DLL3表达。

受试者和样品

在披露的方法的各种情况下，受试者是人受试者。在示例性实例中，人受试者患有小细胞肺癌(SCLC)，可选地，组织学或细胞学确认的SCLC。在各个方面，人是患有SCLC的男性或女性和/或大于或等于18岁。在示例性方面，人受试者已经用基于铂的化学疗法进行治疗。在示例性方面，人受试者患有复发性难治性(RR)SCLC，其可选地在有或无PD-L1抑制剂的至少一种基于铂的化学疗法之后发生进展或复发。在示例性方面，人受试者患有广泛期小细胞肺癌(ES-SCLC)，可选地患有组织学或细胞学确认的ES-SCLC。在示例性方面，人受试者患有可选地在至少一种基于铂的化学疗法后进展或复发的局限性SCLC。在示例性方面，人受试者患有ES-SCLC并且还未接受过针对ES-SCLC的先前全身性治疗。在示例性实例中，人受试者具有0-1的美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG))体能状态(Oken等人,Am J Clin Oncol[美国临床肿瘤学杂志]5:649-655(1982)。在各个方面，人受试者具有一种或多种已被治疗的脑转移瘤。在各个方面，基于铂的化学疗法包括卡铂或顺铂或铂-伊立替康。

本文所述的DLL3表达分析理想地对从被诊断患有癌症的受试者获得的肿瘤或癌细胞样品进行。如本文所用，术语“样品”或“生物样品”是指从受试者获得的处于健康和/或病理状态的生物流体、组织或细胞的样品。多种细胞类型、组织或体液可用作样品。这些细胞类型、组织和体液可以包括组织切片，例如活检和尸检样品、用于组织学目的的冷冻切片、血液(如全血)、血浆、血清、红细胞、血小板、支气管灌洗液、间质液、脑脊髓液等。组织或细胞样品可以通过从人体中取出细胞来提供，但也可以通过使用先前分离的细胞(例如，由另一人在另一时间和/或出于其他目的分离)来完成。也可以使用存档组织，例如有治疗史或结局史的那些。在一些方面，样品包括来自受试者的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)细胞学或组织标本。示例性细胞学或组织标本包括粗针穿刺活检(CNB)、细针穿刺(FNA)、支气管内超声扫描和活检(EBUS)。细胞学或组织标本只要固定在福尔马林中并制备成FFPE(例如，新鲜粗针穿刺活检的FFPE)标本，就有资格进行测试。

在示例性方面，癌症是组织学或细胞学确认的SCLC。可选地，SCLC可通过修改的实体瘤缓解标准(RECIST)1.1测量，其中可测量的病灶包括(a)具有清晰边界的非结节病灶，其可以在轴向平面的一个维度中准确且连续地测量(最长直径≥10mm，通过磁共振成像/计算机断层扫描(MRI/CT)测量，扫描切片厚度≤5mm)和/或(b)根据MRI/CT垂直于长轴(短轴)的最长直径≥15mm的结节病灶，和/或排除单纯性囊肿、胸膜/心包积液和腹水。

癌症可能是SCLC以外的神经内分泌癌。神经内分泌癌或赘瘤(NEC或NEN)是相对罕见且异质性的肿瘤类型，占所有恶性肿瘤的约2％，在美国的患病率<200,000(Oronsky等人,Neoplasia[瘤形成],19(12):991-1002(2017))。术语“神经内分泌”适用于广泛分布的细胞，这些广泛分布的细胞具有与神经细胞相似的特性(如存在致密核心颗粒(DCGs4)，这些致密核心颗粒与存在于五羟色胺能神经元(其储存单胺)中的DCG相似)和“内分泌”特性(如这些单胺的合成和分泌)。神经内分泌(NE)系统包括内分泌腺，如垂体、甲状旁腺和NE肾上腺，以及嵌入腺体组织(甲状腺或胰腺)内的内分泌胰岛组织和外分泌实质中的分散细胞，如消化道和呼吸道的内分泌细胞，它们属于所谓的弥漫性内分泌系统。大多数神经内分泌肿瘤发生在肺、阑尾、小肠、直肠和胰腺。神经内分泌癌包括但不限于小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌前列腺癌(NEPC)和神经母细胞瘤。在一些实施例中，肿瘤或癌症是肺癌诸如小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC)、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌诸如神经内分泌前列腺癌、神经内分泌胰腺癌、肝母细胞瘤、大细胞肺神经内分泌癌、胰腺神经内分泌癌、膀胱神经内分泌癌、胃神经内分泌癌、肾上腺外分泌肿瘤、默克尔细胞癌、成神经细胞瘤、头颈部类癌或神经内分泌癌、头颈部副神经节瘤或子宫颈小细胞神经内分泌癌。在一些实施例中，肿瘤或癌症是前列腺癌(例如，神经内分泌前列腺癌)或肺癌(例如，小细胞肺癌)。

给药方案

本文披露了治疗癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，包括向有需要的受试者施用双特异性抗原结合分子，例如本文所述的抗DLL3抗原结合分子。在一些方面，抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg、约30mg至约100mg、约10mg或约100mg的剂量每两周一次施用给受试者。在其他实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg、约30mg至约100mg、约10mg或约100mg的剂量每三周两次施用给受试者。在其他实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约200mg、约30mg至约100mg、约20mg、约60mg或约200mg的剂量每三周一次施用给受试者。如上所讨论，在某些实施例中，DLL3阳性癌症是小细胞肺癌(SCLC)。在某些实施例中，SCLC是局限性SCLC、复发性/难治性SCLC(RR SCLC)或广泛性疾病SCLC(ED SCLC)。在某些实施例中，受试者是患有SCLC(例如，RR SCLC或ED SCLC)的人。

示例性给药方案包括每周一次向受试者施用抗DLL3抗原结合分子，持续三周(即，第1、2和3周)，然后每两周一次向受试者施用抗DLL3抗原结合分子。另一个示例性给药方案包括每周一次向受试者施用抗DLL3抗原结合分子，持续两周(即，第1和2周)，然后每三周一次向受试者施用抗DLL3抗原结合分子。抗DLL3抗原结合分子可以以约10mg至约100mg、约30mg至约100mg、约10mg或约100mg的剂量施用给受试者。

在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在28天周期的第1天和第15天施用。在其他实施例中，抗DLL3抗原结合分子在21天周期的第1天，或在21天周期的第1天和第8天施用。

抗DLL3抗原结合分子可由任何合适的方式施用，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和/或病灶内施用。肠胃外施用包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施例中，抗DLL3抗原结合分子通过静脉内(IV)输注(例如短静脉内输注(约60分钟))每两周一次、每三周一次、或每三周两次施用。

由于双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子，例如本文所述的那些)的作用机制，在开始用其治疗期间，受试者可能具有增加的细胞因子释放综合征(CRS)风险，并且可以实施阶梯给药方法。因此，在某些实施例中，双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子)在药剂治疗开始期间(例如，治疗的第一周期)使用阶梯给药方法施用，之后该抗DLL3抗原结合分子根据上述每两周一次、每三周两次或每三周一次的方案施用。例如，抗DLL3抗原结合分子可以在治疗开始(第1周期)期间根据以下一步给药方案以21天或28天周期施用，例如上述那些：在第1天的第一阶梯剂量或导入剂量，在第8天的等于目标剂量的阶梯剂量，以及在第15天的目标剂量。抗DLL3抗原结合分子的示例性导入剂量包括1mg。抗DLL3抗原结合分子的示例性目标剂量包括10mg至100mg范围内的剂量(例如，10mg或100mg)或20mg至200mg范围内的剂量(例如，20mg、60mg或200mg)。

组合疗法

在本文披露的方法的一些实施例中，上述双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合蛋白)可以单独施用(即，作为“单一疗法”)来治疗癌症(例如，SCLC)，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，或与至少一种另外的治疗剂组合施用以在受试者中达到所需的生物效应(即，作为“组合疗法”的一部分)。在本文披露的各种实施例中，“组合疗法”或“与……组合”是指向患有表达DLL3的癌症的受试者(例如，人)施用一种治疗方式(例如，抗DLL3抗原结合蛋白)以外施用另一种治疗方式(例如，抗PD-L1抗体和可选地一种或多种化学治疗剂)。在其中涉及抗DLL3抗原结合蛋白和抗PD-L1抗体的组合疗法中(如下所述)，一种治疗方式可在向受试者施用另一种治疗方式之前、期间或之后施用。但是，此类组合疗法不包括其中在一种治疗方式的施用结束和另一种治疗方式开始施用之间已经过去28天或更长时间的情况。

在一些实施例中，抗DLL3抗原结合分子与一种或多种化学治疗剂组合施用。“化学治疗剂”也称为抗肿瘤剂，包括可用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂可根据其作用机制进行分类，并且在每个类别内可进一步划分成亚组。化学治疗剂的示例性类别包括烷化剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂和蛋白激酶抑制剂。烷化剂包括亚组，例如氧杂氮杂磷杂苯(oxazaphosphorine)、氮芥、咪唑并四嗪、亚硝基脲、烷基磺酸酯、肼和基于铂的药剂。基于铂的药剂包括顺铂、卡铂和奥沙利铂。拓扑异构酶抑制剂包括拓扑异构酶I抑制剂和拓扑异构酶II抑制剂。有丝分裂抑制剂包括长春花生物碱、紫杉烷和非紫杉烷微管抑制剂。抗肿瘤抗生素包括博来霉素、放线菌素D(更生霉素)和丝裂霉素。

在某些实施例中，可用于本文所披露的方法中的化学治疗剂是烷化剂。在示例性实施例中，烷化剂可以是基于铂的药剂，如顺铂、卡铂或奥沙利铂。在某些实施例中，烷化剂是芦比替定(ZEPZELCA^TM)。在其他实施例中，化学治疗剂可以是拓扑异构酶抑制剂，如拓扑异构酶II抑制剂(例如，依托泊苷)。在某些实施例中，可用于本文所披露的方法中的化学治疗剂包括基于铂的药剂(顺铂、卡铂或奥沙利铂)、拓扑异构酶II抑制剂(依托泊苷)或基于铂的药剂与拓扑异构酶II抑制剂的组合。

在所披露的方法的一些方面，抗DLL3抗原结合分子与PD-1/PD-L1信号传导通路的拮抗剂组合施用。程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，也称为CD279、SLEB2和hSLE1，是跨膜蛋白，表达于活化的T细胞、自然杀伤细胞(NK)和B淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞(DC)和单核细胞上。值得注意的是，PD-1在肿瘤特异性T细胞上高度表达(Han等人,Am J Cancer Res[美国癌症研究杂志]10(3):727-742(2020))。PD-1与B7蛋白家族成员、PD-1配体1(PD-L1；也称为CD279和B7-H1)和PD-1配体2(也称为PD-L2、CD273和B7-DC)结合。PD-L1在T细胞和B细胞、巨噬细胞和树突状细胞上组成型表达，而PD-L2表达通常仅限于活化的DC和巨噬细胞(Xing等人,Oncoimmunology[肿瘤免疫学]7(3):e1356144(2017)(doi:10.1080/2162402X.2017.1356144))。PD-1抑制适应性和先天性免疫应答。PD-1/PD-L1轴与癌症中T细胞免疫应答的抑制有关。已在临床上在许多实体瘤适应症中证实此路径的拮抗剂。PD-1抑制剂(例如，纳武单抗、派姆单抗和西米普利单抗[cemiplimab])以及PD-L1抑制剂(例如，阿特珠单抗、阿维单抗和德瓦鲁单抗)靶向PD-1/PD-L1通路，并且每一种都已获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗各种癌症。在各种实施例中，靶向PD-L1的药剂(例如，PD-L1阻断剂)可用于本文所披露的方法中以治疗表达DLL3的癌症。靶向PD-L1的示例性药剂包括抗PD-L1抗体，例如阿特珠单抗、阿维单抗和德瓦鲁单抗。

在某些实施例中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗(国际非专利药名(INN),WHO DrugInformation[WHO药物信息],第29卷,第3期,2015年,推荐INN：清单74)。阿特珠单抗是人源化PD-L1阻断抗体。它是免疫球蛋白G1-κ，抗[智人CD274(程序性死亡配体1，PDL1，PD-L1，B7同源物1，B7H1)]，人源化单克隆抗体；γ1重链(1-448)[人源化VH(智人IGHV3-23*04(86.70％)-(IGHD)-IGHJ4*01)[8.8.11](1-118)-智人IGHG1*03(CH1 R120>K(215)(119-216),铰链(217-231),CH2 N84.4>A(298)(232-341),CH3(342-446),CHS(447-448))(119-448)],(221-214')-二硫化物与κ轻链(1'-214')[人源化V-κ(智人IGKV1-5*01(87.90％)-IGKJ1*01)[6.3.9](1'-107')-智人IGKC*01(108'-214')]；二聚体(227-227”:230-230”)-双二硫化物。阿特珠单抗可商购获得，例如，其以上市。

在某些实施例中，抗PD-L1抗体是阿维鲁单抗(国际非专利药名(INN),WHO DrugInformation[WHO药物信息],第30卷,第1期,2016年,推荐INN：清单75)。阿维鲁单抗是在CHO细胞中产生的PD-L1阻断单克隆抗体。它是免疫球蛋白G1-λ1，抗[智人CD274(程序性死亡配体1，PDL1，PD-L1，B7同源物1，B7H1)]，智人单克隆抗体；γ1重链(1-450)[智人VH(IGHV3-23*01(90.80％)-(IGHD)-IGHJ4*01)[8.8.13](1-120)-IGHG1*01,Gm17,1(CH1(121-218),铰链(219-233),CH2(234-343),CH3(344-448),CHS(449-450)(121-450)],(223-215')-二硫化物与λ1轻链(1'-216')[智人V-λ(IGLV2-14*01(99.00％)-IGLJ1*01)[9.3.10](1'-110')-IGLC1*02(111'-216')]；二聚体(229-229”:232-232”)-双二硫化物。阿维鲁单抗可商购获得，例如，其以上市。

在某些实施例中，抗PD-L1抗体是德瓦鲁单抗(国际非专利药名(INN),WHO DrugInformation[WHO药物信息],第29卷,第3期,2015年,推荐INN：清单74)。德瓦鲁单抗是在CHO细胞中产生的PD-L1阻断单克隆抗体。它是免疫球蛋白G1-κ，抗[智人CD274(程序性死亡配体1，PDL1，PD-L1，B7同源物1，B7H1)]，智人单克隆抗体；γ1重链(1-451)[智人VH(IGHV3-7*01(99.00％)-(IGHD)-IGHJ4*01)[8.8.14](1-121) - IGHG1*03 (CH1 (122-219), 铰链(220-234), CH2 (235-344) L1.3>F (238),L1.2>E(239),P116>S(335),CH3(345-449),CHS(450-451))(122-451)],(224-215’)-二硫化物与κ轻链(1’-215’)[智人V-κ(IGKV3-20*01(96.90％)-IGKJ1*01)[7.3.9](1’-108’)-IGKC*01(109’-215’)]；二聚体(230-230”:233-233”)-双二硫化物。德瓦鲁单抗可商购获得，例如，其以上市。

在一方面，本文披露了一种治疗表达DLL3的癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子，抗PD-L1抗体，以及可选地一种或多种化学治疗剂，其中该抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量每两周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约10mg、约30mg、约50mg或约100mg的剂量每两周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在28天周期的第1天和第15天施用。

在一方面，本文披露了一种治疗表达DLL3的癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子，抗PD-L1抗体，以及可选地一种或多种化学治疗剂，其中该抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量每三周两次，或以约20mg至约200mg的剂量每三周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约10mg、约30mg、约50mg或约100mg的剂量每三周两次施用，例如，在21天周期的第1天和第8天。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约100mg(例如，约20mg、约60mg或约100mg)的剂量每三周一次施用，例如，在21天周期的第1天。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约100mg至约200mg(例如，约120mg或约200mg)的剂量每三周一次施用，例如，在21天周期的第1天。

在其中抗DLL3抗原结合分子与抗PD-L1抗体和可选地一种或多种化学治疗剂一起施用的各种实施例中，抗DLL3抗原结合分子可以在治疗开始期间(例如，第1周期)根据一步给药方案施用，以使与抗DLL3抗原结合分子相关的潜在副作用(例如，CRS)最小化，如本文所述。因此，在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在治疗的第1周期中根据以下方案以21天周期施用：在第1天的约0mg或约1mg的第一剂量，在第8天的从约1mg至约100mg的第二剂量，以及在第15天的从约10mg至约200mg的第三剂量。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在第1周期中根据以下方案施用：在第1天的约1mg的第一剂量，在第8天的从约10mg至约100mg的第二剂量，以及在第15天的从约10mg至约100mg的第三剂量。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在第1周期中根据以下方案施用：在第1天的约1mg的第一剂量，在第8天的从约10mg至约100mg的第二剂量，以及在第15天的从约20mg至约200mg的第三剂量。每个第1周期方案均可在上述抗DLL3抗原结合分子的每两周一次、每三周两次或每三周一次的方案之前使用。

在某些实施例中，本文披露了一种治疗表达DLL3的癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子，抗PD-L1抗体，以及可选地一种或多种化学治疗剂，其中该抗DLL3抗原结合分子根据以下方案施用：a)第1周期(21天)：在第一天的约1mg的第一剂量，在第8天的第二剂量，在第15天的第三剂量，b)第2周期和第3周期(每个周期21天)：在每个周期的第1天的第四剂量和第8天的第五剂量，以及c)在第4周期开始以及此后以28天周期每两周一次的一个或多个后续剂量，其中第二剂量、第三剂量、第四剂量、第五剂量以及一个或多个后续剂量相同并且各自为从约10mg至约100mg(例如，约10mg、约30mg或约100mg)。

在某些实施例中，本文披露了一种治疗表达DLL3的癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子，抗PD-L1抗体，以及可选地一种或多种化学治疗剂，其中该抗DLL3抗原结合分子根据以下方案以21天周期施用：a)第1周期：在第一天的约1mg的第一剂量，在第8天的第二剂量，在第15天的第三剂量，b)第2周期和第3周期：在每个周期的第1天的第四剂量和第8天的第五剂量，以及c)在第4周期开始以及此后每三周一次的一个或多个后续剂量，其中第二剂量、第三剂量、第四剂量以及第五剂量相同并且各自为从约10mg至约100mg(例如，约10mg、约30mg或约100mg)，并且其中一个或多个后续剂量相同并且各自为从约20mg至约200mg(例如，约20mg、约60mg或约200mg)。

在某些实施例中，本文披露了一种治疗DLL3阳性癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子，抗PD-L1抗体，以及可选地一种或多种化学治疗剂，其中该抗DLL3抗原结合分子根据以下方案以21天周期施用：a)第1周期：在第一天的约1mg的第一剂量，在第8天的从约10mg至约100mg的第二剂量，在第15天的第三剂量，b)第2周期和第3周期：在每个周期的第1天的第四剂量，以及c)在第4周期开始以及此后每三周一次的一个或多个后续剂量，其中第三剂量、第四剂量以及一个或多个后续剂量相同并且各自为从约20mg至约200mg(例如，约20mg、约60mg或约200mg)。

在其中抗DLL3抗原结合分子与抗PD-L1抗体和可选地一种或多种化学治疗剂一起施用的各种实施例中，抗PD-L1抗体是PD-L1阻断抗体。此类抗PD-L1抗体的实例包括阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和阿维单抗。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是阿特珠单抗或德瓦鲁单抗。在某些实施例中，抗PD-L1抗体是德瓦鲁单抗。当用于本文披露的方法中时，抗PD-L1抗体的剂量和方案与监管机构(例如，FDA)批准的相同。例如，阿特珠单抗可以每2周约840mg、或每3周约1200mg、或每4周约1680mg的剂量施用。例如，德瓦鲁单抗可以每2周约10mg/kg、或每3周约1500mg、或每4周约1500mg的剂量施用。

在其中抗DLL3抗原结合分子与抗PD-L1抗体和可选地一种或多种化学治疗剂一起施用的各种实施例中，一种或多种化学治疗剂包括烷化剂、拓扑异构酶抑制剂或它们的组合。在某些实施例中，一种或多种化学治疗剂包括基于铂的药剂(例如，顺铂、卡铂或奥沙利铂)、拓扑异构酶II抑制剂(例如，依托泊苷)或它们的组合。在某些实施例中，一种或多种化学治疗剂包含顺铂或卡铂和依托泊苷。在某些实施例中，一种或多种化学治疗剂是依托泊苷。在各种实施例中，一种或多种化学治疗剂根据监管机构(例如，FDA)批准的剂量和/或方案施用。例如，在各种实施例中，卡铂以足以实现AUC＝5mg/ml/min的剂量施用，并且依托泊苷以100mg/m²的剂量施用。

在各种实施例中，抗DLL3抗原结合分子、抗PD-L1抗体和可选的一种或多种化学治疗剂各自通过静脉内(IV)输注来施用。在某些实施例中，当在同一天给予时，抗DLL3抗原结合分子在施用抗DP-L1抗体和一种或多种化学治疗剂之后施用。

在某些实施例中，本文披露了一种治疗表达DLL3的癌症(例如SCLC)的方法，其中至少25％的癌细胞表达DLL3或其中至少25％的癌细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子和烷化剂，其中该抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约200mg的剂量每三周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量(例如，10mg、20mg、60mg或100mg)每三周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约200mg的剂量(例如，20mg、60mg、100mg或200mg)每三周一次施用。在某些实施例中，抗DLL3抗原结合分子在21天周期的第1天施用。在各种实施例中，烷化剂是芦比替定。

在某些实施例中，该方法包括向有需要的受试者施用抗DLL3抗原结合分子和烷化剂，其中该抗DLL3抗原结合分子根据以下以21天周期向受试者施用：在第1天的0mg或约1mg的第一剂量，在第8天的从约10mg至约100mg的第二剂量，在第15天的从约10mg至约200mg的第三剂量，以及在第22天开始并且此后每三周一次的从约10mg至约200mg的一个或多个后续剂量。在某些实施例中，第一剂量为1mg，第二剂量为从10mg至100mg(例如，10mg、20mg、60mg或100mg)，第三剂量为从10mg至200mg(例如，10mg、20mg、60mg、100mg或200mg)，并且一个或多个后续剂量相同并且与第三剂量(例如，10mg、20mg、60mg、100mg或200mg)相同。在某些实施例中，该方法包括在第1周期和第2周期中仅施用烷化剂，并且在第3周期以及此后施用烷化剂和抗DLL3抗原结合分子。在各种实施例中，烷化剂是芦比替定。在各种实施例中，芦比替定可根据监管机构(例如，FDA)批准的剂量和/或方案施用，例如，以约3.2mg/m²、2.6mg/m²或2mg/m²的剂量每三周一次施用。

在各种实施例中，抗DLL3抗原结合分子和烷化剂(例如，芦比替定)各自通过静脉内(IV)输注来施用。在某些实施例中，当在同一天给予时，抗DLL3抗原结合分子在施用烷化剂之后施用。

可与本文所述的抗原结合分子组合施用(可选地与一种或多种化学治疗剂和/或抗PD-L1抗体组合)的其他癌症治疗包括但不限于手术、放射疗法、靶向疗法、免疫疗法、激素疗法和干细胞移植。示例性靶向癌症疗法包括但不限于蛋白激酶抑制剂(例如，BCR-ABL和c-KIT酪氨酸激酶抑制剂、EGFR酪氨酸激酶抑制剂、ALK酪氨酸激酶抑制剂、V600E突变-BRAF致癌基因抑制剂、MEK抑制剂、布鲁顿(Bruton)激酶抑制剂、Janus激酶抑制剂和CDK抑制剂)。

另外的治疗剂

在一些实施例中，本文披露的方法进一步包括使用一种或多种另外的治疗剂来预防、降低或减轻与单独或与抗PD-L1抗体和/或化学治疗剂组合施用双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合蛋白)相关联的任何副作用的风险。可能与使用抗DLL3抗原结合蛋白相关的主要副作用是细胞因子释放综合征(CRS)。可用于预防、降低或减轻CRS风险的另外的治疗剂包括但不限于皮质类固醇(例如，地塞米松)、液体(例如，盐水)和抗IL6抗体(例如，托珠单抗或司妥昔单抗(siltuximab))。可以在抗DLL3抗原结合蛋白(例如，AMG 757)的所有第1周期剂量(包括所有阶梯剂量)之前通过静脉内(IV)施用地塞米松，可以在第1周期中的所有抗DLL3抗原结合蛋白(例如，AMG 757)剂量之后静脉内(IV)施用盐水(例如，1升)，并且可以根据需要(例如，受试者对静脉内(IV)流体无应答性)施用抗IL6抗体(例如，托珠单抗或司妥昔单抗)。可以根据需要用口服地塞米松实现另外的皮质类固醇预防性。地塞米松的示例性剂量包括8mg/施用(最大24mg/天)。托珠单抗的示例性剂量包括8mg/kg(不超过800mg)。CRS的症状包括发烧、恶心、疲劳、头痛、肌痛和乏力，并且也可以使用可用于治疗这些症状的治疗剂(例如，用于治疗发烧的对乙酰氨基酚/醋氨酚)。在某些实施例中，也可用于减少或减轻与抗DLL3抗原结合蛋白治疗相关的副作用的另外的治疗剂包括粒细胞集落刺激因子(例如，非格司亭或培非格司亭)。

因此，在某些实施例中，本文披露的方法进一步包括施用一种或多种选自皮质类固醇(例如，泼尼松、氢化可的松和地塞米松)、液体(盐水)和抗IL6抗体(例如，托珠单抗或司妥昔单抗)的另外的治疗剂。在某些实施例中，这些方法进一步包括施用一种或多种选自皮质类固醇(例如地塞米松)、液体(盐水)和托珠单抗或司妥昔单抗的另外的治疗剂。在某些实施例中，皮质类固醇、液体和托珠单抗中的一种或多种在其中施用抗DLL3抗原结合蛋白(例如，AMG 757)的第1周期中施用。

治疗性应答

可通过多种临床结局、终点和/或量度来评估所披露的用于治疗癌症(例如SCLC)的方法的功效。在一些实施例中，可以将根据所披露的方法治疗的受试者的结局与具有较低DLL3表达水平并用相同的双特异性抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者进行比较。在这方面，可评估的临床结局包括但不限于无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、客观缓解(ORR)、疾病控制率(DCR)、缓解持续时间(DOR)。如本文所用，术语“无进展生存期(PFS)”是指从随机化直到疾病进展的第一个证据或死亡的时间。如本文所用，术语“总生存期(OS)”是指从随机到死亡的时间。如本文所用，术语“客观缓解率(ORR)”是衡量特定治疗如何影响有实体瘤病史的患者中的肿瘤负荷的量度，并且是指对疗法产生部分或完全缓解的患者比例。如本文所用，术语“缓解持续时间(DoR)”是指实现完全或部分缓解的患者中从随机到疾病进展或死亡的时间。如本文所用，术语“疾病控制率(DCR)”描述其治疗性干预导致完全缓解、部分缓解或稳定疾病的晚期癌症患者的百分比。在一些方面，与具有较低DLL3表达水平并用相同的抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者相比，所披露的方法预期增加无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、客观缓解率(ORR)和/或疾病控制率(DCR)和缓解持续时间(DOR)中的一项或多项。关于癌症疗法的临床终点进一步描述于例如Delgado A.和Guddati,A.K.等人,Am J Cancer Res[美国癌症研究杂志]2021；11(4):1121-1131中。

如上所讨论，将本文所述的抗原结合分子施用给表达DLL3的癌症(例如，SCLC)(其中癌细胞表达特定水平的DLL3)有利地与改善的治疗结局相关，特别是与标准护理(SOC)相比。应当理解，接受SOC二线治疗的SCLC患者的总缓解率(ORR)和中位无进展生存期(PFS)分别为约51％和4.6个月。(Simos等人,Clin Lung Cancer[临床肺癌],15:110-118(2014))。对于接受SOC三线化学疗法的复发性SCLC患者，ORR为约18％，中位PFS为约2.0个月(Gong,J.和R.Salgia,J.Oncol.Practice[肿瘤学实践杂志],14(6):359-366(2018))。因此，在一些实施例中，与标准护理相比，本文所述的方法预期增加ORR、PFS和/或OS。例如，当抗DLL3抗原结合剂作为针对SCLC的一线治疗时，所披露的方法预期产生至少约65％(例如，约65％至约70％)的ORR、大于约5个月(例如，7个月或更多)的中位PFS以及至少约13个月(例如约13至15个月或约16至18个月)的中位OS。当抗DLL3抗原结合剂作为针对SCLC的二线治疗时，所披露的方法预期产生至少约35％的ORR、大于约7个月(例如，8个月或更多)的中位PFS以及至少约11个月(例如，11.5个月或更多)的中位OS。当抗DLL3抗原结合剂作为针对SCLC的三线治疗施用时，该方法预期产生至少约20％(例如，约24％或更多)的ORR、大于约6个月的中位PFS以及至少约7.5个月(例如，8个月或更多)的中位OS。

理想地，由本披露的方法提供的治疗减缓癌症的进展。例如，这些方法可通过增强T细胞活性或针对癌症的免疫应答，减少肿瘤或癌症生长，减少肿瘤细胞转移，增加肿瘤或癌细胞的细胞死亡等而治疗癌症。在示例性方面，这些方法可使癌症复发延迟至少约30天、两个月、4个月、6个月、1年、2年、4年或更长时间。在示例性方面，治疗可涵盖增加受试者的生存期。在各个方面，由本披露的方法提供的治疗包括根据实体瘤疗效评价标准(RECIST)或其他类似标准的治疗性应答。RECIST是由美国国家癌症研究所(National CancerInstitute of the United States)、加拿大国家癌症研究所临床试验组(NationalCancerInstitute of Canada Clinical Trials Group)和欧洲癌症研究和治疗组织(European Organisation for Research and Treatment of Cancer)共同建立的一组评估肿瘤和/或癌细胞的进展、稳定化或应答性的标准。RECIST将肿瘤大小定义为靶病灶的最长直径(SLD)之和，并将患者分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定疾病(SD)和进展性疾病(PD)。CR和PR表示没有新的肿瘤病灶，分别为100％收缩率和大于30％收缩率；PD表示肿瘤大小从观察到的最小大小增加20％直到该点，或出现新的病灶。

制品

本文披露了包含如下的制品：(a)包含双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子如AMG 757)的容器；和(b)带有通过施用抗DLL3抗原结合分子(例如AMG 757)来治疗受试者中表达DLL3的癌症(或治疗SCLC)的说明书的包装插页，其中说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量通过静脉内(IV)输注每2周一次施用。在一些实施例中，说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量(例如，10mg、30mg或100mg)每三周两次施用给受试者，例如在21天周期的第1天和第8天。在某些实施例中，说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约200mg的剂量(例如，20mg、60mg、100mg、160mg或200mg)每三周一次施用给受试者，例如在21天周期的第1天。在某些实施例中，说明书进一步指定在向受试者施用抗DLL3抗原结合分子的第一周期中，该抗DLL3抗原结合分子通过历时2天至7天(例如，历时3天)的延长静脉内输注来施用。在某些实施例中，说明书进一步指定抗DLL3抗原结合分子在第1周期(21天周期)中根据一步给药方案施用：在第1天的1mg，在第8天的第二剂量，以及在第15天的第三剂量，其中第二剂量和第三剂量相同并且各自为从约10mg至约100mg。

在某些实施例中，制品包含：(a)包含双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子如AMG 757)的容器；和(b)带有通过施用抗DLL3抗原结合分子(例如AMG 757)与抗PD-L1抗体(例如，阿特珠单抗或德瓦鲁单抗)组合来治疗受试者中表达DLL3的癌症(或治疗SCLC)的说明书的包装插页，其中说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约200mg的剂量(例如，20mg、60mg、100mg、160mg或200mg)每三周一次施用给受试者，例如在21天周期的第1天。在某些实施例中，说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量每三周两次施用给受试者，例如在21天周期的第1天和第8天。在某些实施例中，说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约10mg至约100mg的剂量每两周一次施用给受试者，例如在28天周期的第1天和第15天。在某些实施例中，说明书进一步指定将一种或多种化学治疗剂(例如，卡铂或顺铂和/或依托泊苷)与抗DLL3和抗PD-L1药剂组合向受试者施用。

在某些实施例中，制品包含：(a)包含双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子如AMG 757)的容器；和(b)带有通过施用抗DLL3抗原结合分子(例如AMG 757)与烷化剂(例如，芦比替定)组合来治疗受试者中表达DLL3的癌症(或治疗SCLC)的说明书的包装插页，其中说明书指定至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞表达DLL3或至少25％(例如，30％、50％、60％、70％或75％)的癌细胞以至少2+的强度表达DLL3，并且抗DLL3抗原结合分子以约20mg至约200mg的剂量(例如，20mg、60mg、100mg、160mg或200mg)每三周一次施用给受试者，例如在21天周期的第1天。

在一些实施例中，包装插页进一步包括用于检测和测量来自受试者的肿瘤细胞中人DLL3蛋白表达的说明书。例如，包装插页理想地包括用于通过免疫组织化学(IHC)测定法测量DLL3表达的说明书，例如本文所述的那些。在某些实施例中，IHC测定法由管理机构(如美国食品和药物管理局(FDA)或具有CE-IVD注册权限的机构)批准。此外，包装插页可以包括用于对通过IHC测量的DLL3表达强度进行评分的说明书，以选择适合治疗的受试者以及适当剂量的抗DLL3抗原结合分子以施用给选定的受试者。在各种实施例中，包装插页可进一步指示在第1周期和/或第2周期中施用抗DLL3抗原结合分子(例如，AMG 757)后让受试者住院并且监测长达约48小时(例如，约24小时、12小时、8小时、7小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时)。在各种实施例中，包装插页可进一步指示在第1周期中施用抗DLL3抗原结合分子(例如，AMG 757)后测量或测试受试者的一种或多种细胞因子，例如IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和IFN-γ(例如，受试者血液或血清中一种或多种细胞因子的水平)，并且在任何细胞因子的任何水平高于正常参考水平时让受试者住院并且监测长达约48小时(例如，约24小时、12小时、8小时、7小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时)。例如，包装插页可指示在第1周期中施用抗DLL3抗原结合分子(例如，AMG 757)后测量或测试受试者的IL-10，并且在IL-10的水平高于正常参考水平时让受试者住院并且监测长达约48小时(例如，约24小时、12小时、8小时、7小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时)。细胞因子可使用本领域已知的方法来测量或检测。

在各种实施例中，容器包含以约1mg、5mg、10mg或25mg的量的双特异性抗原结合分子(例如，抗DLL3抗原结合分子(例如，AMG 757))，例如，抗DLL3抗原结合分子(例如，AMG757)作为无菌、一次性使用的不含防腐剂的冻干药品提供，每个容器(例如，小瓶)含有1mg、5mg、10mg或25mg抗DLL3抗原结合分子。在各种实施例中，说明书指定将冻干药品用水复溶用于输注。在各种实施例中，说明书指定受试者是人(例如，患有SCLC的人)。

以下实例进一步说明了本发明，但当然不应被解释为以任何方式限制其范围。

实例1

本实例描述了评估塔拉妥单抗在复发性/难治性小细胞肺癌患者中的1期临床研究。

小细胞肺癌(SCLC)是一种侵袭性肺癌亚型，每年在全世界超过150,000人中诊断出神经内分泌分化。从2001-2016年，美国SCLC患者的2年生存率为11％-17％。在铂和依托泊苷化学疗法中加入免疫检查点抑制剂阿特珠单抗或德瓦鲁单抗，然后单独使用检查点抑制剂进行维持治疗作为SCLC的一线治疗，使一部分广泛期SCLC(ES-SCLC)患者的死亡风险降低约30％，并获得了持久但适度的生存增加。对于大多数复发的SCLC患者，可用的治疗是有限的。拓扑替康是全球最广泛使用的二线药剂，疗效有限且安全性不佳。2020年，芦比替定成为20多年来首个获FDA批准用于二线治疗的药物，并基于35％的客观缓解率(ORR)获得有条件批准；然而，一项随机研究未能证明OS益处。尚无药剂被专门批准用于复发性SCLC的三线治疗。

Notch信号传导通路是SCLC中神经内分泌分化的调节因子。如本文所讨论，抑制性Notch配体δ样配体3(DLL3)在高达85％的SCLC细胞表面异常表达，在正常组织中表达最少，使其成为一个引人注目的治疗靶标。体外SCLC模型表明DLL3在促进肿瘤生长、迁移和侵袭中的作用。靶向DLL3的抗体-药物缀合物(ADC)特司林-洛伐妥珠单抗在SCLC患者中显示出临床抗肿瘤活性。

如本文所讨论，塔拉妥单抗是一种半衰期延长的双特异性T细胞接合物(HLE)分子，结合癌细胞上的DLL3和T细胞上的CD3，导致T细胞介导的肿瘤溶解。塔拉妥单抗在SCLC的临床前模型中促进肿瘤消退。塔拉妥单抗是首个在SCLC中进行临床评估的靶向DLL3的免疫疗法。

1期试验评估了塔拉妥单抗在SCLC患者中的安全性、药代动力学和初步功效。

患者和方法

研究设计和参与者

DeLLphi-300是一项1期、多国、开放标签、剂量递增的研究，评估塔拉妥单抗单一疗法。本文报告的结果涉及单一疗法方案，并包括剂量递增和扩展队列。符合条件的患者年龄为18岁或以上，患有组织学或细胞学确认的SCLC，其在至少1种在先基于铂的方案后进展或复发，并且如果是标准护理，除化学疗法外还使用PD-L1抑制剂。纳入的患者需要具有2个或更低的美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态，并且根据修改后的实体瘤疗效评价标准(RECIST)1.1版定义至少2个可测量的病灶。关键的排除标准是未经治疗的活动性脑转移和先前免疫治疗期间严重或复发的免疫介导的不良事件或输注相关反应。

方案和修正案由每个参与机构的机构审查委员会或伦理委员会批准。试验根据国际协调理事会良好临床实践(International Council for Harmonisation GoodClinical Practice)指南和赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)的原则进行。所有患者均提供了书面知情同意书。

程序

计划的塔拉妥单抗剂量水平为0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30和100mg，每2周(Q2W)通过静脉内(IV)输注施用。由于不良事件(AE)预计较低，前4个剂量水平计划为单患者队列。塔拉妥单抗施用持续到发生疾病进展、出现不可接受的副作用或撤回知情同意。

结局

主要终点是安全性，包括剂量限制性毒性(DLT；定义为首次给药后28天内并符合方案标准的塔拉妥单抗相关毒性)、治疗期间的AE(治疗中出现的AE[TEAE])、以及根据研究者审查可能与塔拉妥单抗相关的TEAE(治疗相关的不良事件[TRAE])。次要终点包括药代动力学、通过研究者评估根据修改后的RECIST 1.1(其应用免疫相关缓解标准的多个方面，包括确认疾病进展至RECIST 1.1)的客观缓解的抗肿瘤活性、缓解持续时间(DOR)、应答时间(TTR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。

统计分析

分析包括入组递增和扩展队列的患者。数据截止日期为2022年7月19日。双参数贝叶斯逻辑回归模型(BLRM)模型指导剂量探索。持续审查安全性数据。在剂量水平审查会议(DLRM)中，申办方与现场研究者协商，在做出剂量递增决定之前按队列审查BLRM推荐的剂量水平和所有可用的累积数据。持续评估在所有受试者中观察到的AE和DLT，并且将其完全纳入所有DLRM中。基于100mg的总体获益-风险特征，决定将其作为扩展剂量进一步评估。为选定的人口统计学、安全性、药代动力学(PK)、药效学和生物标志物数据提供描述性统计。进行了探索性分析以评估DLL3基线表达与临床获益之间的关系，并在下文中进一步详细说明。使用Kaplan-Meier估计达到事件终点的时间的中位和百分位数，其中使用Brookmeyer和Crowley方法计算置信区间(CI)。

终点的其他说明

最大耐受剂量(MTD)是研究者和研究团队在考虑到贝叶斯逻辑回归模型(BLRM)的情况下共同确定的认为安全的最高剂量。

使用不良事件通用术语标准(CTCAE)4.0版对不良事件进行分级。使用Lee标准对CRS事件进行分级。

此外，将细胞因子释放综合征(CRS)、中性粒细胞减少症和神经系统事件作为本研究中关注的事件，使用Amgen MedDRA查询缩小范围(AMQN)搜索方法进行监测。所有事件均使用MedDRA24.1版进行编码。AMQN搜索的细胞因子释放综合征包括细胞因子异常、细胞因子释放综合征、细胞因子风暴和细胞因子检测。使用CRS Lee等人(2014)的标准对CRS事件进行分级。中性粒细胞减少症基于AMQN搜索并且使用CTCAE 4.0版进行分级。神经系统事件基于“直接神经毒性引起的中枢神经精神事件”AMQN搜索并且使用CTCAE 4.0版进行分级。

本文披露的功效数据基于当地研究者评估。如果数据截止日期为首次给药日期后至少9周以便有时间进行评估，则将患者定义为功效可评估。

对连续采集的血液样品进行T细胞和外周细胞因子的探索性分析。

对于免疫原性评估，在研究第1天(给药前)和研究期间的多个时间点采集来自接受塔拉妥单抗的患者的血液样品，以使用经验证的电化学发光桥接免疫测定法检测抗塔拉妥单抗结合抗体。

DLL3表达的评估

入组研究的受试者提供新鲜活检或存档福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)组织活检，用于通过免疫组织化学进行回顾性DLL3分析。在安全性/疗效群体的107名受试者中，90名(84％)可评估肿瘤DLL3表达。通过使用抗DLL3抗体(克隆SP347Ventana，亚利桑那州图森市(Tucson，AZ))检测肿瘤细胞中的DLL3表达。简言之，在带电载玻片上以4μm或5μm厚度对FFPE SCLC组织块进行切片，并使用UOptiView DAB IHC检测试剂盒(Ventana)在BenchMarkULTRA上染色以进行可视化。兔单克隆抗体作为阴性标志物对照。评估每个标本的阴性标志物对照的可接受的背景和信号/噪声染色。为了评估DLL3染色，在任何放大倍率下收集膜/细胞质的组合H得分。在至少20倍放大倍率下确认阴性或弱染色。DLL3表达的解释由合格的病理学家进行。DLL3阳性定义为≥1％染色肿瘤细胞。苏木精和曙红(H&E)染色在SakuraTissueTek Prisma仪器上进行。H&E染色载玻片用于评估肿瘤含量和组织质量评估。生物标志物评估需要至少100个活的肿瘤细胞。

对肿瘤组织进行特定百分比肿瘤细胞染色评分。还在DLL3(SP347)染色的载玻片上评估了肿瘤细胞染色的总强度，范围为0到3，增量为1，如Huang等人,Arch PatholLabMed[病理学与实验医学档案],143(11):1373-137(2019)所述。肿瘤细胞的强细胞质和/或膜染色评分为“3”或“3+”，中度染色评分为“2”或“2+”，弱染色评分为“1”或“1+”。没有染色被给予“0”的得分。

ROC分析

接收者操作特征(ROC)分析包括入组1-100mg剂量队列的77名受试者，这些受试者可获得治疗前DLL3表达读数。使用上述SP347测定法在10倍放大倍率下的总DLL3表达(DLL3的肿瘤细胞阳性率为0％-100％)以及探索性得分回顾性地用于检查患者选择对临床获益(确认的OR)强化的影响。在DLL3表达的整个范围内计算真阳性率(TPR，y轴)和假阳性率(FPR，x轴)。对于所考虑的每个阈值，真阳性被定义为高DLL3应答者，假阳性被定义为高DLL3非应答者，真阴性被定义为低DLL3非应答者，假阴性被定义为低DLL3应答者。

免疫细胞和细胞因子分析

根据研究方案中指定的评估计划采集抽取到EDTA管中的全血样品。利用经流式细胞术验证的组合，使用带荧光标记的抗体CD4 BV510(克隆SK3，BD Biosciences)、CD8BV605(克隆SK1，BD Biosciences)、CD3 Alexa Fluor 700(克隆SK7，BioLegend)和CD279(PD-1)BB515(克隆EH12.1，BD Biosciences)对全血样品进行染色。由Q2 SolutionsLaboratories Europe在BD FACSCanto流式细胞仪上集中采集数据。为评估细胞因子产生，采集血清样品并且使用Meso Scale Discovery(MSD)V-plex促炎性组合1评估IFNγ水平。根据制造商的说明书执行测定。简而言之，将样品用稀释剂2(MSD)按1:2的比例稀释。将稀释的样品和标准品一式两份加入96孔板中，该板具有独立地预包被在10个确定的点上的捕获抗体，并且在环境温度孵育2小时。将板用洗涤缓冲液洗涤三次，并且将检测抗体混合物加入每个孔并且将板在环境温度孵育2小时。将板用洗涤缓冲液洗涤三次，并且将2x读取缓冲液T(MSD)加入每个孔，并且在MSD酶标仪上读数。从标准曲线推测出浓度在2.61-542,720pg/mL的既定范围内。

细胞因子释放综合征(CRS)的表征

执行分析以便探索在初始剂量的塔拉妥单抗之后24小时内的细胞因子水平与在第1周期中发生CRS之间的相关性。在该分析中包括在第1周期中接受1mg作为初始剂量的塔拉妥单抗以及接受1mg至100mg的后续剂量的队列。

在长达24小时的时间点抽取血清以用于细胞因子分析。评估CRS的发生率、发作时间、严重程度、管理和复发。在第1周期中，针对患有CRS的患者与未患有CRS的患者的一组可溶性因子，评估了在塔拉妥单抗的初始剂量之后24小时内的血清峰值水平和升高速度。包括来自1mg初始给药队列的患者。

使用具有错误发现率校正的基于KruskalWallis(KW)秩检验来鉴别来自CRS和无CRS类别的分析物值是否源自不同的分布。利用Jonckheere-Terpstra(JT)趋势检验以及错误发现率校正来确定从无CRS到CRS组的分析物值的增加趋势。利用单变量逻辑回归来确定每种分析物的增长率和峰值能否预测给药后第1周期中CRS的发生。

结果

患者

截至2022年7月19日，在剂量递增(0.003mg至100mg；n＝73)和扩展(100mg；n＝34)队列中107例患者接受了塔拉妥单抗(图1)。由于在之前的队列中观察到细胞因子释放综合征(CRS)，因此从3mg队列开始使用阶梯给药(使用1mg作为导入剂量，之后在第8天、第15天以及此后Q2W使用目标剂量)。细胞因子释放综合征(CRS)是塔拉妥单抗根据其作用机制(MOA)的预期风险。

基线特征汇总于表1中。中位年龄为63岁(范围为32至80岁)。99％的患者中ECOG体能状态为0至1。多于70％的患者接受过≥2线先前疗法，25％的患者为铂难治性，并且50％的患者接受过先前PD-1/PD-L1抑制剂。

中位随访期为8.7个月(范围为0.2至31.8个月)。92例患者(86％)停止治疗，最常见的原因是疾病进展(n＝77[72％])。在数据截止时，47例患者(43.9％)因死亡而结束研究。开始的治疗周期中位数为3(四分位距[IQR]：1，8)，并且接受的塔拉妥单抗剂量中位数为6(IQR：3，16)。

表1.患者人口统计和基线特征

*1例患者在基线时的疾病期未知。

ECOG，美国东部肿瘤协作组；IQR，四分位距；PD-1，程序性细胞死亡蛋白1；PD-L1，程序性死亡配体1。

如上所述，对新鲜或存档的活检样品进行回顾性DLL3免疫组织化学分析。DLL3在90例(94％)可评估患者中的85例(≥1％)中得到表达；中位H评分为186(范围为0至300)，并且中位肿瘤细胞阳性率为95％(范围为0至100％)。

安全性和耐受性

DLT发生在6例患者中，包括肺部炎症(n＝1[最后先前剂量，0.3mg])、丙氨酸氨基转移酶升高(n＝1[1mg]、CRS(n＝1[1mg])、脑病(n＝1[10mg])、寒战、发热和中性粒细胞减少症(n＝1各自[100mg])。未达到最大耐受剂量(MTD)；在扩展队列中评估了最高剂量(100mg)。4例患者(3.7％)因脑病(n＝1)、免疫效应细胞相关神经毒性(ICANS)(n＝1)和肺部炎症(n＝2)等AE而停用塔拉妥单抗，所有这些AE均与治疗有关。在一例70岁老年男性中记录到单起G5肺部炎症事件，该男性具有先前卡铂/依托泊苷化学疗法、慢性阻塞性肺疾病以及肺结节和胸膜结节放疗史。事件发作在第1周期第18天、第二次塔拉妥单抗治疗后3天(两者剂量均为0.3mg)，并且在肺部炎症需要对肺部以及胸椎中导致脊髓压迫的软组织肿块进行紧急姑息性放疗时，与临床上显著的疾病进展混淆。研究者将死亡原因归于疾病进展和肺部炎症。观察到一起另外的G3和三起另外的G2肺部炎症TEAE(肺部炎症的总体发生率为5/107[4.7％])。在患有G2肺部炎症的患者中，1例患者因神经毒性(非肺部炎症)而结束治疗，1例患者在因PD停药前肺部炎症消退，并且1例患者在未改变剂量的情况下恢复治疗。

107例患者(100％)发生了任何原因/分级的TEAE。最常见的是CRS(56例患者[52.3％])、发热(43例[40.2％])、便秘(33例[30.8％])和疲乏(32例[29.9％])。61例患者(57.0％)发生了≥3级AE，最常见的是中性粒细胞减少症(8.4％)、淋巴细胞计数减少(6.5％)和高血压(5.6％)。55例患者(51.4％)发生了严重不良事件(SAE)。TEAE导致9例患者(8.4％)的剂量减少，其中4例(3.7％)发生CRS相关的减少。20例患者(18.7％)发生剂量中断，最常见的原因是中性粒细胞减少症和中性粒细胞计数减少。97例(90.7％)和33例(30.8％)患者分别发生了任何分级和≥3级的TRAE。

基于使用塔拉妥单抗、其他BiTE^TM分子和其他T细胞相关疗法的临床前、临床和机制数据，将CRS、中性粒细胞减少症和神经系统事件作为受关注的事件进行监测。执行AmgenMedDRA查询缩小范围(AMQN)搜索以补充标准系统器官类别单一首选术语安全性报告(如上所定义并且汇总于表2中)。减轻CRS的可能性的措施包括预防性皮质类固醇(仅第1周期)以及在一些患者中的静脉(IV)补液。15例患者(14.0％)报告了≥2级治疗中出现的CRS，并且1例患者(0.9％)报告了3级CRS；无4级或5级CRS报告。对于任何分级的CRS(n＝56)，基于记录的日期，首次发作的中位时间为首次给药后2天(范围为1天至30天)；实施更精确的基于时间的报告以更好地表征CRS，其中在具有可用的每小时数据的患者子集中(n＝47)，中位发作时间为17.5小时。CRS是短暂的(中位持续时间为3天[IQR：2天至4天])，并且在所有病例中均消退。8例患者(7.5％)接受托珠单抗治疗CRS。CRS主要局限于第1周期。共有5例患者(4.7％)在第2周期发生CRS；其中4例患者在第1周期中也发生CRS，而1例患者在第2周期中或更晚时间首次经历CRS。75例患者(70.1％)发生了任何分级的治疗中出现的神经系统AE，并且大多数神经系统AE为1级；最常见的是味觉障碍(29.0％)、头痛(19.6％)和头晕(10.3％)。12例患者(11.2％)发生了≥3级治疗中出现的神经系统事件，包括意识模糊状态(4.7％)、谵妄(1.9％)和脑病(1.9％)。1例受试者发生了4级神经系统事件(意识模糊)，无患者发生5级神经系统事件。所有≥3级神经系统AE均消退，其中1例受试者因G3脑病而停用塔拉妥单抗，并且其他2例受试者继续以减少的剂量进行治疗。G2 ICANS是导致1例受试者停药的另一个神经系统原因。任何分级的神经系统事件的首次发作大多数在治疗的前30天内(中位数为9天[IQR，2天至29天]，其中中位持续时间为5天(IQR，2天至15天)。11例患者(10.3％)发生了≥3级中性粒细胞减少症。任何分级的中性粒细胞减少症首次发作发生在首次塔拉妥单抗施用后的中位时间30天(IQR，21天至31天)，并且中位持续时间为7天(IQR，4至13)；总体而言，10例患者(9.3％)接受了G-CSF。1例患者中发生发热性中性粒细胞减少症，但其被认为与治疗无关。

表2.治疗中出现的不良事件(首选术语和选定术语的AMQ)

*基于单个首选术语的发生率。使用MedDRA版本编码：25.0。使用CTCAE 4.0版进行不良事件分级，并且使用Lee等人(2014)的标准进行CRS事件分级。

基于AMQ缩小范围搜索，包括细胞因子异常、细胞因子释放综合征、细胞因子风暴、细胞因子检测。中性粒细胞减少症基于AMQ缩小范围搜索。神经系统事件基于“直接神经毒性引起的中枢神经精神事件”AMQ缩小范围搜索。使用MedDRA版本编码：25.0。使用CRSLee等人(2014)的标准进行CRS事件分级。使用CTCAE 4.0版进行中性粒细胞减少症和神经系统事件分级。

AMQ，Amgen MedDRA查询。

功效

确认的ORR为23.4％(95％置信区间[CI]：15.7，32.5)，包括2例完全缓解和23例部分缓解(表3)。

表3.根据研究者评估，塔拉妥单抗引起的肿瘤缓解

*中期功效分析集是安全性分析集的子集。中期功效分析集包括数据截止日期为首次给药日期后至少9周的患者。

这包括32例在基线后扫描中发生PD但未经进一步确认扫描的患者(根据修订版RECIST 1.1为未确认的PD)。

未进行影像学评估的原因包括撤回知情同意(n＝5)、死亡(n＝2)、临床PD(n＝1)和开始新的抗癌疗法(n＝1)。

图1A图示了具有可评估的基线后评估结果的患者(n＝94)的直径之和相对于基线的最佳百分比变化。疾病控制率为51.4％(95％ CI：41.5，61.2)。从0.3mg剂量开始可见缓解，并且在3mg及更高剂量时通常观察到更高的缓解率。在39例患者(36.4％)中观察到基线后评估时靶病灶中肿瘤缩小至少30％。在确认的缓解者中，中位TTR为1.8个月(范围为1.2至7.4)，并且中位DOR为12.3个月(95％ CI：6.6，14.9)(图1B)。最长缓解持续时间为14.9个月，并且11例患者(44％的缓解者)在数据截止时具有持续进行的缓解。分别地，中位PFS为3.7个月(95％ CI：2.1，5.4)，并且中位OS为13.2个月(95％ CI：10.5，NE)(图2)。共有28例患者(26.2％)在塔拉妥单抗之后继续接受后续抗癌疗法。

进行分析以研究DLL3表达与塔拉妥单抗的临床获益之间的关系。图3表明当回顾性地考虑针对患者选择的总DLL3表达时，针对应答者(使用确认的OR)而强化的敏感性和特异性。图4表明DLL3表达水平与改善的ORR和DCR相关。图5A和5B表明DLL3表达与肿瘤减少之间的相关性。在阈值范围内观察到临床获益。

临床药代动力学

截至2022年4月15日，从剂量递增和扩展队列中获得了101例患者的初步药代动力学数据。简而言之，塔拉妥单抗在血清暴露量方面表现出近似按剂量成比例增加。在每隔一周的目标方案开始后4周内，血清塔拉妥单抗暴露量达到近似稳定状态，累积极少。在评估的目标剂量范围内，在稳定状态下估计的平均(±SD)终末消除半衰期为大约5.7(±2.2)天，其与HLE平台相对于非HLE BiTE^TM分子的预期延长的半衰期一致。

免疫原性

在具有可用样品的患者中，97例患者中的10例(10.3％)在塔拉妥单抗施用后产生了抗塔拉妥单抗抗体。99例患者中的两例(2.0％)在基线时有预先存在的抗体。在这些患者中，抗药抗体(ADA)对塔拉妥单抗暴露量或对安全性特征无明显影响。

药效学

首个剂量的塔拉妥单抗输注后的药效学应答以初始T细胞重新分布、T细胞活化和瞬时IFN-γ升高为特征。对于阶梯剂量队列，药效学应答在初始施用1mg阶梯剂量后最大，并且以目标剂量施用时未超过该结果。

临床CRS总结

CRS大多数为1级(39％)，发生在第1周期，并且在所有患者中均可逆(见表4)。CRS是临床上可管理的。

表4

为减轻CRS的风险，在第1周期期间能够使用≥1项以下预防性措施：用

口服地塞米松进行另外的皮质类固醇预防、施用托珠单抗、依那西普或对

乙酰氨基酚。

*CRS包括细胞因子异常、细胞因子释放综合征、细胞因子风暴、细胞因

子检测。

百分比基于患有任何分级CRS的患者总数。

具有发作日期和时间两者数据的患者(n＝47)的发作时间。

数据截止：2022年6月15日。

CRS，细胞因子释放综合征。

细胞因子和CRS分析

在生物标志物可评估的患者中，与未患有CRS的患者相比，在第1周期中患有CRS的患者中IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的24小时内峰值水平与基线水平的比率趋于更高(图6A至图6D)。IL-10表现出显著高于参考正常范围的升高，并且在患有CRS的患者中更高(图7)。由于效应细胞因子IFN-γ在临床前试验中具有强诱导作用，因此对其进行了研究(参见例如，Giffin MJ等人Clin Cancer Res.[临床癌症研究]2021；27:1526-1537)。正如从塔拉妥单抗的作用机制所预期的那样，IFN-γ诱导高于生理范围；患有第1周期CRS的患者与未患有第1周期CRS的患者之间，诱导相似(图8A和图8B)。

讨论

通过100mg的扩展剂量，塔拉妥单抗在广泛的剂量范围内表现出可管理的安全性特征，并且与经过大量预治疗的SCLC患者群体中令人鼓舞的缓解率相关联。确认的缓解是持久的，并且看起来有望实现OS。在所有剂量(N＝107)中，仅4例患者(3.7％)停用塔拉妥单抗，并且9例患者因AE而减少剂量。未达到MTD；在剂量扩展队列中进一步评估了最高剂量(100mg)。

基于塔拉妥单抗的MOA，预期会发生CRS。虽然CRS是本研究中观察到的最常见的TEAE(56％的患者)，但其通常是低分级、短暂的，并且通常发生在第一周期中。CRS通常是可逆的，并且通过类固醇、静脉内(IV)输液和解热药进行管理，其中在接受塔拉妥单抗的107例患者中，有8例患者(7.5％)使用托珠单抗治疗CRS。中性粒细胞减少症是本研究中观察到的与塔拉妥单抗相关联的风险，并且基于临床前数据是出人意料的；机制不明。因此，针对具体监测和管理更新了研究方案。对中性粒细胞减少症的进一步评估将与组合使用塔拉妥单抗与其他骨髓抑制疗法的试验相关。由于已知与免疫效应细胞疗法相关，因此将神经系统评估作为频繁的临床评估的一部分进行，以评估研究患者的CRS和/或神经系统AE。尽管有12例患者(11.2％)发生≥3级神经系统AE，大多数神经系统AE为轻度和自限性的，无需停止治疗或减少剂量。有2例患者因神经系统AE(脑病，ICANS)而停用塔拉妥单抗。正在对神经系统AE进行仔细评估，以更好地表征这些事件并且确定可以特异性改善管理的风险因素或干预措施。

很少有获批的一线后的SCLC疗法。对二线SCLC中的芦比替定的2期研究发现ORR为35％，并且中位DOR为5.3个月。在对复发性SCLC中的拓扑替康与组合化学疗法的随机研究中，拓扑替康的ORR为24％，中位DOR为3.3个月。美国FDA对纳武单抗和派姆单抗用于三线或更晚SCLC的先前条件性批准是基于分别为12％和19％的缓解率，其中在>60％的缓解患者中观察到≥12个月的持久缓解。由于未证明生存获益，这些批准随后被撤回。塔拉妥单抗的ORR为23％，中位DOR为12.3个月，与其他疗法相比良好，尤其是考虑到超过70％的患者接受过至少2次线先前疗法线。本研究中的一半患者(50％)接受过先前PD-1/PD-L1疗法，这代表了一线SCLC的当前实践。尽管用塔拉妥单抗观察到中位PFS(3.7个月)，但中位OS(13.2个月)相对较高并且优于之前报告的用芦比替定得到的中位OS(9.3个月)或用拓扑替康得到的OS(约6个月)，但比较的价值受到研究设计和患者群体差异的限制。有前景的OS获益可能反映了迄今为止在那些对塔拉妥单抗有应答的患者中观察到的缓解的长期持久性，但需要在更大规模的随机研究中进一步跟进。相对较长的OS与较短的PFS的替代解释可能是OS获益源自塔拉妥单抗后治疗，但这不太可能是主要因素，因为在该经过大量预治疗的队列中仅26.2％的患者接受了此类治疗。正在努力确定可预测应答和/或毒性的临床、人口统计和生物学因素(例如，先前疗法、DLL3表达)。增加的DLL3表达似乎趋向于具有更高程度的临床获益。

本实例的结果证明了塔拉妥单抗在具有高度未满足的医疗需求的患者中有前景的活性，并且引起对塔拉妥单抗作为SCLC和其他神经内分泌癌的单一疗法的若干正在进行的研究。

实例2

本实例描述了一项2期研究，其评估了在两种或多种先前疗法线后AMG 757/塔拉妥单抗在复发性/难治性小细胞肺癌受试者中的疗效、安全性、耐受性和药代动力学。

研究设计

DeLLphi-301研究(20200491)是AMG 757/塔拉妥单抗在复发性SCLC受试者中的2期、开放标签、全球研究，这些受试者在1种基于铂的方案(使用或不使用检查点抑制剂)和至少1种其他治疗线(使用基于铂的方案再次治疗被视为二线治疗)后进展或复发。

本研究分3个部分进行。第1部分是剂量比较，以1:1比率将约180名患者随机分组，以接受10mg或100mg塔拉妥单抗(作为60分钟静脉内输注)。使用预先指定的中期分析来选择第2部分和第3部分的剂量。第2部分是剂量扩展，以选定的剂量总共招募约100名患者(第1部分和第2部分合并)。第3部分是在第2部分入组完成后进行的一项子研究，用以在第1周期期间减少住院监测(从48小时减少到24小时)的情况下评估塔拉妥单抗的安全性。

主要疗效终点为根据RECIST 1.1通过盲法独立中心评审(BICR)确认的客观缓解(完全缓解或部分缓解)。次要终点包括DoR、疾病控制率、疾病控制持续时间、无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)、治疗中出现的不良事件(TEAE)的发生率、塔拉妥单抗血清浓度和抗塔拉妥单抗抗体形成的发生率。探索性终点包括细胞因子水平、肿瘤组织中的靶标表达、免疫相关的生物标志物以及与健康相关的生活质量相对于基线的变化。使用SP347抗体在Roche Tissue Diagnostics(美国图森市(Tucson，USA))对福尔马林固定石蜡包埋的组织回顾性进行DLL3免疫组织化学。研究的目标和终点如表5所示。研究方案如图9所示。

表5

治疗

对于所有3个部分，塔拉妥单抗在第1周期第1天(C1D1)以1mg的阶梯剂量开始，然后在C1D8、C1D15以10mg或100mg开始，此后每2周一次(28天周期)。患者接受治疗，直到疾病进展。成像评估计划在第一年每6周进行一次，之后每12周进行一次。如果满足方案规定的标准，研究者可自行决定允许对具有持续临床增益的患者进行放射学疾病进展以外的治疗。安全性随访发生在最后一剂塔拉妥单抗后6周，长期随访每3个月一次，在最后一剂塔拉妥单抗后进行1年，或在第一名患者入组后进行5年，以先发生者为准。

统计考虑事项

根据已发表的文献，在方案中预先指定15％客观缓解率(ORR)作为历史对照基准(Ready等人,J Thorac Oncol[胸部肿瘤学杂志],14:237-44(2019)；和Chung等人,JThorac Oncol[胸部肿瘤学杂志],15:618-27(2020))。假设ORR为30％，选择来自第1部分和第2部分的目标剂量下的100名患者的样品量，以提供约92％概率，即ORR的97.5％置信区间(CI)下限将超过15％。在预先指定的中期分析中选择97.5％ CI作为主要终点，以调整剂量选择的多样性。安全性分析集由接受至少一剂塔拉妥单抗的所有患者(第1-3部分)组成。疗效分析集包括第1部分和第2部分的所有患者，他们接受了至少一剂塔拉妥单抗并且根据BICR在基线时至少有一个可测量的病灶。第3部分的患者未纳入疗效分析集，因为这些数据尚不成熟。

比例的置信区间使用Clopper-Pearson方法计算。事件终点时间使用Kaplan-Meier方法估计。

受试者资格标准的总结

患有组织学或细胞学确认的复发性/难治性SCLC的男性和女性受试者(≥18岁[或国内法定成年年龄])，他们在1种基于铂的方案和至少1种其他先前治疗线后进展或复发(注：[1]使用基于铂的方案再次治疗被视为二线治疗；[2]基于铂的方案后使用检查点抑制剂/抗程序性死亡配体1[PD-L1]作为维持治疗被视为1线治疗；[3]在护理标准一线全身治疗包括含铂化学疗法与PD-L1抑制剂的组合的国家，要求受试者未能通过作为其一线全身治疗一部分的PD-L1抑制剂或没有资格接受PD-L1抑制剂治疗)。

一旦同意研究，受试者提供病史并进行筛查安全性测试以确认满足研究的所有资格要求。受试者必须在第一剂塔拉妥单抗前21天内具有根据RECIST 1.1定义的可测量病灶，并且必须具有足够的器官功能。

研究产品

塔拉妥单抗的给药和施用总结如表6所示。

表6

用药前

地塞米松8mg IV(或等效剂量的其他皮质类固醇)仅在第1周期第1天和第8天输注塔拉妥单抗前1小时内施用。

在第1周期中的所有塔拉妥单抗剂量后立即施用静脉(IV)补液(1L生理盐水)进行预防。

研究期间的生物标志物评估

血液样品：收集外周血、血清和血浆样品，用于评估探索性生物标志物，其可包括但不限于细胞因子、DNA、RNA分析和循环肿瘤细胞计数。这些样品可用于帮助进一步了解受试者的疾病及其对治疗的反应。

流式细胞术全血样品：收集全血样品进行免疫表型流式细胞术，以鉴定外周血细胞亚群和活化状态的变化。

存档和/或新鲜给药前肿瘤组织：通过IHC评估新鲜给药前肿瘤组织或存档肿瘤组织的基线DLL3表达和其他可能预测应答的探索性生物标志物。

受试者必须提供最后一次癌症治疗后采集的存档肿瘤组织样品(2年内收集的福尔马林固定的、石蜡包埋的[FFPE]样品)或愿意接受治疗前肿瘤活检。经研究者和医学监查员同意，在最后一次癌症治疗后没有存档肿瘤组织可用或由于情有可原的情况(例如，无法安全进行或研究者确定无法进行)而无法进行治疗前肿瘤活检的受试者可以在没有肿瘤活检的情况下入组。

为研究提供的任何活检提交相应的病理报告。在首次放射学评估时和在治疗结束后进行肿瘤活检是可选的。

结果

患者

在2021年12月至2023年5月期间，共有222名患者入组17个国家的56个地点。在第1部分中，176名患者被随机分配接受10mg(n＝88)或100mg(n＝88)的塔拉妥单抗。根据预先指定的中期分析结果，第2部分(剂量扩展；n＝12)和第3部分(缩短住院监测期；n＝34)选择10mg剂量。在数据截止(2023年6月27日)时，10mg组的中位治疗持续时间为5.1个月(范围0.0-15.2)，100mg组为3.7个月(范围0.0-15.2)。两个剂量组的基线人口统计学和临床特征相当，尽管100mg组基线时脑转移患者的比例更高。

功效

第1部分和第2部分中共185名患者接受了塔拉妥单抗，在基线时至少有1处可测量的病灶，并被纳入功效分析；中位随访时间为10.6个月(95％ CI，9.7-11.3)。通过BICR的ORR在10mg组中为40.4％(97.5％ CI，29.4-52.2)，在100mg组中为31.4％(97.5％ CI，20.6，43.8)。ORR在预定义的亚组中是一致的，包括存在脑转移或肝转移、一线治疗中对基于铂的化学疗法的敏感性、以及先前PD-(L)1抑制剂治疗。疾病控制率在10mg组中为70.7％(95％ CI，60.7，79.4)，在100mg组中为62.8％(95％ CI，51.7，73.0)。大多数缓解(61/67，91.0％)在塔拉妥单抗开始后6±1周的首次计划评估中出现。两组均未达到中位DoR(10mg：95％ CI，5.9个月-不可评估；100mg：95％ CI，6.6个月-不可评估)。在10mg和100mg组的所有67名应答者中，39人(58.2％)的应答持续时间为至少6个月，37人(55.2％)在数据截止时仍有持续应答。研究者的应答与中心评审一致。

中位PFS(mPFS)在10mg组中为4.9个月(95％ CI，3.0-6.7)，在100mg组中为3.9个月(95％ CI，2.6-4.4)。在6个月和9个月时，10mg组的PFS的Kaplan-Meier估计值分别为40.8％(95％ CI，30.6-50.7)和28.5％(95％ CI，19.2-38.6)，100mg组分别为33.2％(95％CI，23.0-43.8)和25.5％(95％ CI，16.1-35.9)。中位总生存期(mOS)在10mg组中为14.3个月(95％ CI，10.8-不可估计)，在100mg组中未达到(95％ CI，12.4-不可估计)。在6个月和9个月时，10mg组的总生存期的Kaplan-Meier估计值分别为73.4％(95％ CI，63.2-81.2)和68.0％(57.1-76.6)，100mg组分别为71.4％(95％ CI，60.1-80.0)和65.5％(95％ CI，53.8-75.0)。在最后一次随访中，10mg组中57.6％(57/99)以及100mg组中51.7％(45/87)仍然存活，OS数据尚未成熟。

免疫组织化学分析表明，在96.2％(150/156)的患者样品中检测到DLL3表达。根据BICR评估的DLL3表达水平对ORR和DoR的分析如表7所示。

表7.

安全性

最常见的治疗中出现的不良事件(TEAE)是细胞因子释放综合征(CRS)(55.0％)、食欲下降(34.5％)、发热(34.1％)、便秘(26.4％)和贫血(25.9％)。10mg组中59.4％患者和100mg组中64.4％患者出现3级或更高分级的TEAE。10mg组中25.6％患者和100mg组中33.3％患者出现3级或更高分级的治疗相关不良事件(TRAE)。TRAE导致12.8％(10mg)和28.7％(100mg)患者的剂量中断和/或减少，3.0％(10mg)和3.4％(100mg)患者停药。10mg组中有一例(0.8％)因呼吸衰竭而出现5级TRAE。

10mg组中51.1％(68/133)患者和100mg组中60.9％(53/87)患者报道CRS，主要为1级(10mg：40/133[30.1％]，100mg：28/87[32.2％])或2级(10mg：27/133[20.3％]，100mg：20/87[23.0％])，并且主要局限于前两个剂量(第1周期第1天[C1D1]和第1周期第8天[C1D8])。10mg组中0.8％(1/133)患者和100mg组中5.7％(5/87)患者发生3级CRS。在经历CRS的患者中，最常见的症状是发烧(96.7％)、低血压(19.8％)和缺氧(17.4％)。最后一次塔拉妥单抗给药后CRS的中位发作时间为13.1小时(Q1，Q3：7.8，27.4)。CRS的中位持续时间为4天(Q1，Q3：2，6)，通过包括对乙酰氨基酚、静脉(IV)补液和/或皮质类固醇使用的支持性护理通常是可控制的。在少数情况下，另外的干预措施包括托珠单抗(10mg：7/133[5.3％]；100mg：9/87[10.3％])、补充氧气(10mg：11/133[8.3％]；100mg：8/87[9.2％])和/或血管加压药支持(10mg：1/133[0.8％]；100mg：1/87[1.1％])。与10mg组相比，CRS导致100mg组中剂量中断和/或剂量减少的频率更高(8/87[9.2％]与4/133[3.0％])。几乎所有CRS病例(98.4％)均消退。

免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)根据美国移植和细胞治疗学会(American Society for Transplantation and Cellular Therapy(ASTCT))2019共识进行分级(Lee等人,Journal of the American Society for Blood and MarrowTransplantation[美国血液和骨髓移植学会杂志],25:625-38(2019))。对这些事件的分析包括ICANS术语以及可能的相关神经不良事件。10mg组中11名患者(8.3％)和100mg组中24名患者(27.6％)发生包括相关神经系统事件的ICANS。≥3级事件在10mg组中未发现(0％；0/133)，在100mg组中4名患者(4.6％)观察到。包括相关神经系统事件的ICANS主要发生在第1周期，中位发病时间为5天。最常见的表现是免疫效应细胞相关毒性综合征(10mg：6/11患者，100mg：9/24患者)、肌无力(10mg：4/11患者、100mg：6/24患者)、失语症(10mg：1/11患者、100mg：2/24患者)和认知障碍(100mg：3/24患者)。包括相关神经系统事件的ICANS导致10mg组中1名(0.8％)患者和100mg组中5名(5.7％)患者剂量中断和/或剂量减少，两组各1名患者治疗中断。中位消退时间为6.5天(95％ CI：4.0，17.0)。

10mg组中17.3％患者和100mg组中16.1％患者观察到中性粒细胞减少症。每个剂量组均有1名患者观察到3级发热性中性粒细胞减少症。中性粒细胞减少症或发热性中性粒细胞减少症未导致任何患者的治疗中断。

在第1周期输注塔拉妥单抗后接受24小时或48小时住院监测的患者中观察到类似的安全性。

药代动力学

在评估的剂量范围内，塔拉妥单抗表现出血清暴露的近似剂量比例增加。在第2周期第15天达到稳态血清塔拉妥单抗暴露。在10mg和100mg Q2W方案后，稳态下(第2周期第15天给药前)塔拉妥单抗平均(SD)C_谷值分别为0.51(0.22)μg/mL和6.8(3.4)μg/mL。结果与实例1和Paz-Ares等人,J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志],41(16):2893-2903(2023)中描述的1期研究中观察到的一致，并支持Q2W给药间隔。

免疫原性

在199名至少有一项可报告的基线后免疫原性评估的患者中，10mg组中4名患者(4/119；3.4％)和100mg组中3名患者(3/80；3.8％)产生了治疗中出现的抗塔拉妥单抗结合抗体。这些患者均未产生抗塔拉妥单抗中和抗体。抗塔拉妥单抗抗体的存在似乎不会影响药物暴露、功效或安全性。

实例3

本实例描述了塔拉妥单抗与标准护理(SOC)化学疗法在复发性小细胞肺癌(SCLC)中的比较的3期研究。

下面描述了一项开放标签、随机、多中心、3期研究，该研究将评估与SOC疗法相比，塔拉妥单抗用于治疗先前1线含铂疗法后进展的小细胞肺癌(SCLC)受试者的功效和安全性。

研究设计

该研究包括预筛查期、21天筛查期、治疗期、安全性随访(SFU)访视和长期随访(LTFU)期。

入组时需要提供可评估的存档组织样品(5年内收集的福尔马林固定石蜡包埋[FFPE]块或签署相关知情同意书前30天内切片的切片)，或用于中心评估的新粗针穿刺活检，并且受试者必须同意肿瘤组织收集和测试。肿瘤材料收集可以在初步诊断后的任何时候进行，包括在21天筛查窗口之前，前提是完成预筛查知情同意书。为了使受试者有资格参与研究，必须在随机分组之前确认肿瘤组织可评估性。

将受试者以1:1分配比率随机接受塔拉妥单抗或批准的SOC治疗(美国(US)、加拿大、澳大利亚、新加坡、韩国为芦比替定或拓扑替康；日本为氨柔比星；除日本以外的所有国家为拓扑替康)。

随机分组将按以下方式分层：

·先前抗PD-(L)1暴露(是与否)

·无化学疗法间隔(≥180天；<180至≥90天；<90天)

·存在脑转移(是与否)

每组约350名受试者，入组总共约700名受试者。主要疗效终点包括OS，次要疗效终点包括PFS。

研究群体

纳入标准

只有以下所有标准都适用，受试者才有资格纳入研究：在任何研究特定的活动/程序开始之前，受试者已提供知情同意书；签署知情同意书时年龄≥18岁(或国家法定成年年龄，以较大者为准)；组织学或细胞学确认的复发性/难治性SCLC；受试者在1种基于铂的方案后进展或复发(记录的首次疾病进展必须在ES或LS疾病的一线基于铂的全身化学疗法期间或之后；接受LS疾病治疗并复发的患者符合条件；在SCLC切除后接受辅助铂-依托泊苷且复发的患者符合条件；在ES疾病的SOC一线全身治疗包括含铂化学疗法与PD-L1抑制剂的组合的国家，要求患者未能通过作为其一线全身治疗一部分的PD-(L)1抑制剂或没有资格接受PD-(L)1抑制剂治疗)；提供可评估的肿瘤样品用于中心检测(肿瘤样品必须是存档的(5年内收集的FFPE块或签署相关知情同意书前30天内切片的切片)，或新鲜的粗针穿刺活检)；在21天筛查期内根据RECIST 1.1定义的可测量疾病(如果在21天筛查期内完成，作为护理标准并在知情同意书之前进行的筛查扫描可用于确认受试者资格，前提是在任何数据传输之前获得使用这些扫描的知情同意书)；美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态为0或1；最低预期寿命为12周。

受试者必须具有足够的器官功能，定义如下：血液功能(中性粒细胞绝对计数≥1.5×10⁹/L；血小板计数≥100×10⁹/L；血红蛋白>9g/dL(90g/L))；凝血功能(凝血酶原时间(PT)/国际标准化比率(INR)和部分凝血活酶时间(PTT)或活化部分凝血活酶时间(APTT)≤1.5×机构正常上限(ULN)。不符合上述标准的接受慢性抗凝治疗的受试者有资格入组。)；肾功能(基于肾病饮食调整(MDRD)计算，估计的肾小球滤过率(eGFR)>30mL/min/1.73m²)；肝功能(天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)<3×ULN(或对于肝脏受累受试者，<5×ULN)；总胆红素<1.5×ULN(或对于肝脏受累受试者，<2×ULN)；对于有可能接受芦比替定作为SOC的受试者，总胆红素<1.5×ULN和任何AST)；肺功能(无临床意义的胸腔积液。允许使用留置胸膜导管(例如PleurX)处理胸腔积液；基线氧饱和度>室内空气90％)；和心脏功能(心脏射血分数≥50％，通过超声心动图(ECHO)或多门控采集(MUGA)扫描确定无临床意义的心包积液，且无临床意义的心电图(ECG)发现)。

排除标准

如果以下任何标准适用，则将受试者从研究中排除。

相关的疾病：未经治疗或有症状的中枢神经系统(CNS)转移或软脑膜疾病(无症状CNS转移的受试者如果临床稳定至少4周且不需要干预(包括使用皮质类固醇)，则有资格；脑转移经过治疗的受试者在满足以下标准的条件下有资格：确定性治疗在第一剂研究治疗前至少2周完成(立体定向放射外科手术在第一剂研究治疗前至少7天完成)，任何CNS疾病临床稳定，受试者因CNS疾病停用类固醇(除非类固醇因与CNS疾病无关的原因而指定)，并且受试者在第一剂研究治疗前至少7天停用或服用稳定剂量的抗癫痫药物)；先前免疫检查点抑制剂史，导致：任何严重或危及生命的免疫介导的不良事件，免疫介导的脑炎或其他免疫介导的CNS事件(任何分级)史，≥2级免疫介导的复发性肺炎，导致永久停用免疫治疗药剂的输注相关反应(例外：有免疫检查点抑制剂诱导的内分泌病史且在替代治疗中临床稳定的受试者)。

其他医学病症：过去2年内需要全身性治疗(替代疗法除外)的活动性自身免疫性疾病或在研究进行时需要免疫抑制疗法的任何其他疾病；需要全身治疗的活动性感染或任何不受控制的感染。如果对积极治疗有反应，则允许单纯性尿路感染(UTI)和无并发症的细菌性咽炎。需要口服抗生素且无发热>24小时，无白细胞增多，无任何临床感染体征的受试者符合条件；有实体器官移植史；过去2年内其他恶性肿瘤的病史(例外：以治愈目的治疗的并且在入组前≥1年没有已知的活动性疾病存在的低风险恶性肿瘤，并且根据研究者的判断认为复发风险低；没有疾病证据、充分治疗的非黑色素瘤皮肤癌或恶性小痣性痣；没有疾病证据、充分治疗的宫颈原位癌；没有疾病证据、充分治疗的乳腺导管原位癌；没有前列腺癌证据的前列腺上皮内瘤；充分治疗的尿路上皮乳头状非浸润性癌或原位癌)；在第一剂研究治疗前12个月内有心肌梗死和/或症状性充血性心脏衰竭(美国纽约心脏协会(New YorkHeart Association)>II级)；在第一剂研究治疗前12个月内有动脉血栓形成病史(例如，卒中或短暂性脑缺血发作)；垂体炎或垂体功能障碍病史(任何分级)；已知的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染、丙型肝炎感染(允许在抗病毒治疗后达到持续病毒学应答的丙型肝炎受试者)或乙型肝炎感染(允许通过抗病毒治疗获得持续病毒学应答的具有乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或核心抗体的受试者，但要求在研究治疗期间定期监测再激活)；在第一剂研究治疗前7天内接受全身性皮质类固醇治疗或任何其他形式的免疫抑制治疗(允许方案要求的预防性地塞米松和任何止吐疗法，低剂量皮质类固醇(试验期间允许泼尼松≤10mg/天或等效量))；严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)感染的证据(如果受试者在第一剂研究治疗前14天内没有2019冠状病毒病(COVID 19)的急性症状(从无症状受试者检测呈阳性的那天算起)，则受试者符合条件)；有间质性肺病或活动性非感染性肺炎的证据。

先前/伴随疗法：使用塔拉妥单抗的先前疗法或作为本试验一部分的任何SOC化学疗法；使用DLL3通路的任何选择性抑制剂的先前疗法；受试者之前接受过一种以上的SCLC全身治疗方案(铂/依托泊苷/抗PD-(L)1治疗后进行抗PD-(L)1维持治疗被视为一种方案)；在第一剂研究治疗前21天内有先前抗癌治疗(例外：如果在第一剂研究治疗前已经过去至少14天并且如果所有治疗相关毒性已经消退到分级≤1，或资格标准中规定的水平，则接受常规化学疗法的受试者符合条件，除了脱发或认为不可逆的毒性(定义为存在且稳定>30天)，这些在排除标准中未另行描述；先前姑息性放疗必须在第一剂研究治疗前至少7天完成)；接受抗癌治疗，如化学疗法、免疫治疗或靶向治疗(可考虑接受切除乳腺癌辅助激素治疗的患者(也指与其他恶性肿瘤病史相关的排除))；在第一剂研究治疗前7天内已知抑制膜转运蛋白P-gp和/或乳腺癌耐药性蛋白(BCRP)的任何草药或处方药/非处方药(包括但不限于环孢菌素、克拉霉素、伊曲康唑或酮康唑)；在第一剂研究治疗前7天内已知是细胞色素P450 3A(CYP3A)酶的中度或强抑制剂的任何草药或处方药/非处方药(包括但不限于克拉霉素、伊曲康唑、酮康唑)；在第一剂研究治疗前28天内已知是CYP3A酶的中度或强诱导剂的任何草药或处方药/非处方药(包括但不限于依非韦伦、苯巴比妥、苯妥英钠、利福平、圣约翰草)；已达到先前心脏毒性药物(例如其他蒽环类药物)治疗的极限剂量的受试者(盐酸柔红霉素总剂量为25mg/kg体重，盐酸多柔比星总剂量为500mg/m²体表面积，盐酸表柔比星总剂量为900mg/m²体表面积，盐酸吡柔比星总剂量为950mg/m²体表面积等)；在第一剂研究治疗前28天内进行过重大外科手术；在第一剂研究治疗前4周内进行活病毒治疗，包括减毒活疫苗接种(不允许在第一剂塔拉妥单抗后3天内进行非活性疫苗接种(例如，非活或非复制药剂)，包括COVID-19疫苗接种(注：SOC治疗的疫苗接种预防措施基于区域处方信息))。

先前/现行临床研究经验：目前正在另一个研究设备或药物研究中接受治疗，或者在另一个研究设备或一个或多个药物研究结束治疗后不到30天。排除参与此研究的同时的其他研究程序。

其他排除：在治疗期间以及在最后一剂塔拉妥单抗后的另外72天内不愿使用方案规定的避孕方法的具有生育潜力的女性受试者(注：SOC疗法的避孕要求基于区域处方信息)；正在母乳喂养或计划在研究期间至最后一剂塔拉妥单抗后72天进行母乳喂养的女性受试者(注：SOC疗法的母乳喂养限制基于区域处方信息)；计划在研究期间至最后一剂塔拉妥单抗后72天怀孕或捐卵的女性受试者(注：SOC疗法的避孕要求基于区域处方信息)；具有生育能力的女性受试者在筛查时通过血清妊娠试验评估为妊娠测试阳性；在治疗期间以及最后一剂塔拉妥单抗后的另外132天内，不愿意实行性禁欲(避免异性性交)或使用避孕的有具有生育潜力女性伴侣的男性受试者；在治疗期间以及最后一剂塔拉妥单抗后的另外132天内，不愿意实行禁欲或使用避孕套的有妊娠伴侣的男性受试者；在治疗期间以及最后一剂塔拉妥单抗后的另外132天内，不愿意放弃捐献精子的男性受试者；受试者对在给药期间要施用或可能施用的任何产品或组分具有已知敏感性；据受试者和研究者所知，受试者可能无法完成所有方案要求的研究访问或程序和/或遵守所有要求的研究程序(例如，临床结局评估)；在研究者或医学监查员(如果被咨询的话)看来会对受试者安全性构成风险或干扰研究评价、程序或完成的任何其他临床上显著的障碍、病症或疾病(上面概述的那些除外)的病史或证据。

护理标准治疗方案

芦比替定将在每个21天周期的第1天以3.2mg/m²的批准方案给药。芦比替定将以静脉内(IV)输注施用60分钟。芦比替定作为无菌、无防腐剂、白色至灰白色冻干粉提供，单剂量透明玻璃小瓶中含有4mg。芦比替定旨在用无菌注射用水USP进行重构。冻干制剂含有蔗糖、乳酸和氢氧化钠。

拓扑替康将在每个21天周期的第1至5天以1.5mg/m² IV或2.3mg/m²/天口服的批准方案给药。拓扑替康注射液将在30分钟内以静脉内(IV)输注施用。拓扑替康胶囊应整粒吞服。拓扑替康注射液作为无菌、无热原、透明、浅黄色至绿色溶液提供，装在含有4mg/4mL(1mg/mL)的游离碱浓度的一次性小瓶中。每mL含有拓扑替康盐酸盐(相当于1mg拓扑替康游离碱)、甘露醇、USP和酒石酸、NF。还可能含有盐酸和氢氧化钠来调节pH。拓扑替康胶囊以0.25mg不透明白色至黄白色并印有HYCAMTIN和0.25mg或1mg不透明粉红色并印有HYCAMTIN和1mg形式提供。胶囊含有盐酸拓扑替康(其含量以拓扑替康游离碱表示)，赋形剂为明胶、单硬脂酸甘油酯、氢化植物油和二氧化钛。印记是用可食用的黑色墨水制作的。1mg胶囊还含有红色氧化铁。

氨柔比星将以40mg/m²的批准方案给药，并将在每个21天周期的第1至3天作为静脉内(IV)输注施用。氨柔比星以黄红色粉末或团块形式提供，装在含有20mg或50mg盐酸安柔比星的小瓶中。赋形剂包括乳糖水合物、L-半胱氨酸盐酸盐、一水合物、盐酸和氢氧化钠。

塔拉妥单抗输注前和输注后药物

地塞米松8mg IV(或等效剂量的其他皮质类固醇)将仅在第1周期第1天和第8天输注塔拉妥单抗前1小时内施用。

仅在第1周期的所有塔拉妥单抗剂量后立即施用静脉(IV)补液(1L生理盐水，2至4小时)进行预防。

实例4

本实例描述了一项1b期临床研究，以评估塔拉妥单抗在新发或治疗中出现的神经内分泌前列腺癌(NEPC)受试者中的安全性、耐受性、药代动力学和疗效。

前列腺癌是男性最常诊断的非皮肤癌，2020年美国(US)估计新增191,930例，死亡33,330例(美国癌症协会(American Cancer Society)，2020)。在欧盟，2015年估计新增365,000例前列腺癌，2012年和2015年估计分别有72,000例和77,000例死亡(占癌症死亡总数的10％)(Crocetti E.,Epidemiology of prostate cancer in Europe[欧洲前列腺癌流行病学]；publications.jrc.ec.europa.eu/repository/handle/JRC101382(2015))。NEPC代表前列腺癌的侵袭性变体。虽然新发病例似乎很少见，在初期诊断时不到2％的患者(Parimi等人,Am J Clin Exp Urol.[美国临床与实验泌尿外科杂志],2:273-285(2014))，但治疗中出现的NEPC，其特征是从腺癌向高分级神经内分泌肿瘤的组织学转变，正越来越被认可，并可能在15％至20％接受前列腺腺癌标准疗法(包括新型激素疗法)治疗的患者中发展(Aggarwal等人,J Clin Oncol.[临床肿瘤学杂志],36:2492-2503(2018))。这种组织学转变的确切机制尚不清楚，然而，雄激素信号传导依赖性的丧失和替代谱系程序的获得与NEPC的发展有关。总体而言，NEPC的预后较差(Wang等人,J Clin Oncol.[临床肿瘤学杂志],32:3383-3390(2014))，并且通常使用基于铂的化学疗法方案治疗(Aparicio等人,Clin Cancer Res.[临床癌症研究],19:3621-3630(2013))。目前没有针对NEPC的标准治疗方法。

研究设计

进行一项开放标签1b期研究，来评估针对NEPC的塔拉妥单抗单一疗法。塔拉妥单抗在新发或治疗中出现的NEPC受试者中作为短期静脉内(IV)输注每2周(Q2W)在28天周期以阶梯给药来施用。

由于其已知作用机制，初始输注塔拉妥单抗后，受试者第一剂量效应(如细胞因子释放综合征(CRS))的风险增加。为了降低这些风险，实施了阶梯给药方法。该研究包括单步剂量探索，包括第1天1mg塔拉妥单抗的导入剂量，随后第15天单步至100mg塔拉妥单抗的目标剂量，然后Q2W。在塔拉妥单抗在SCLC受试者中进行的1期试验中，100mg剂量的塔拉妥单抗被认为安全和可耐受的最高剂量。约40名受试者入组该研究。

受试者资格标准的总结

患有定义为以下一项或多项的转移性新发或治疗中出现的NEPC的成年受试者(≥18岁)有资格入组：小细胞NEPC的组织学诊断，具有神经内分泌分化的前列腺癌，如通过以下定义：大多数肿瘤样品中嗜铬粒蛋白和/或突触素的阳性免疫组织化学染色或Tp53、RB1和PTEN中的≥2个改变(通过免疫组织化学(IHC)，或对基线肿瘤组织或循环肿瘤DNA(ctDNA)的基因组分析)。要求受试者在至少1线先前治疗中进展，包括用于新发NEPC(如果在诊断为NEPC时，他们先前没有诊断或治疗过前列腺癌)的含铂方案或如果治疗中出现(在诊断为NEPC之前曾诊断出前列腺癌)，则包括雄激素信号传导抑制剂(例如阿比特龙、恩杂鲁胺和/或阿帕他胺)。根据实体瘤疗效评价标准(RECIST)1.1标准和前列腺癌工作组3(PCWG3)指南，受试者必须具有可测量的疾病，美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤2和足够的器官功能。

治疗和程序

在28天周期(第2周期及以后)的第1天和第15天，塔拉妥单抗作为短期静脉内输注施用(约60分钟，然后冲洗)。为了降低细胞因子释放综合征(CRS)的风险，在所有第1周期剂量前1小时内静脉施用地塞米松8mg IV(或等效剂量的其他皮质类固醇)进行术前用药。需要在第1周期中所有剂量后立即用1L生理盐水在4至5小时内静脉(IV)补液进行预防。

要求机构现场有托珠单抗或司妥昔单抗(如果托珠单抗不可用)用于潜在治疗CRS。给药塔拉妥单抗直到疾病进展(根据PCWG3指南，允许超出疾病进展的治疗)。

每个受试者遵循相同的治疗方案和程序要求。在获得书面知情同意书后，除非另有说明，否则所有筛查测试和程序均在塔拉妥单抗施用(第1天)后28天内进行。进行一系列临床安全性和研究评估，包括体检、生命体征、临床实验室测试、放射学评估、肿瘤活检、药代动力学(PK)和生物标志物样品收集。

在所有第1周期剂量期间，所有受试者在塔拉妥单抗输注后住院强化监测48小时。第2周期不需要住院治疗，除非受试者在第1周期经历2级或更高分级CRS或神经系统事件(如果第1周期发现2级或更高分级CRS或神经系统事件，则在第2周期第1天输注塔拉妥单抗后至少需要住院24小时)。如果没有CRS或其他急性毒性的体征和症状，受试者可以在这段时间后出院。如果受试者在第2周期没有住院，则在输注塔拉妥单抗后观察受试者8小时。

进行常规放射学成像(计算机断层扫描[CT]/磁共振成像[MRI])和肿瘤负荷评估。根据PCWG3指南，基于RECIST 1.1确定疾病缓解评估。为了进一步评估延迟不良事件的风险，受试者在最后一剂塔拉妥单抗后约42(±5)天返回进行安全性随访(SFU)访视。

对于所有未通过门诊就诊、电话或图表审查撤回同意的受试者，从第一剂塔拉妥单抗开始，每3个月进行长达3年的长期随访，以评估生存期和/或随后癌症治疗的开始。

统计考虑事项

除非另有说明，否则所有入组并接受至少1剂塔拉妥单抗的受试者均纳入分析。

当目标入组完成并且每个受试者完成至少6个月的研究或退出研究时，进行主要分析。在最后一名受试者有机会完成相应的治疗结束访视/程序后进行最终分析。

提供了按剂量、给药方案和时间(视情况而定)划分的选定人口统计学、安全性、药代动力学、疗效数据的描述性统计数据。关于连续数据的描述性统计包括平均值、中位数、标准偏差和范围，而分类数据使用频率计数和百分比进行总结。将报告任何治疗中出现的不良事件的受试者的数量和百分比制成表格。列出了临床实验室测试、体检结果和生命体征数据。提供了实验室、检查和生命体征数据随时间和/或相对于基线随时间的变化的总结。

比例的置信区间(CI)使用Clopper-Pearson提出的精确方法进行估计(Clopper和Pearson,Biometricka[生物测量学],26:404-413(1934))。Kaplan-Meier方法用于估计事件终点时间的中位数和百分位数，CI使用Brookmeyer和Crowley(Brookmeyer和Crowley,Biometrics[生物计量学],38:29-41(1982))方法计算。Kaplan-Meier方法用于估计事件终点时间的里程碑，Greenwood公式(Kalbfleisch和Prentice,The Statistical Analysisof Failure Time Data[失效时间数据的统计分析],约翰威立国际出版公司(John Wiley&Sons,Inc.),纽约,xi+321pp(1980))用于估计CI计算中使用的标准误差。

研究期间的生物标志物评估

收集血液样品用于评估循环标志物，包括但不限于PSA和细胞因子。还收集血液样品用于循环肿瘤细胞(CTC)的计数和表型分析。这些样品用于帮助进一步了解受试者的疾病及其对治疗的反应。

收集全血样品进行免疫表型流式细胞术，以鉴定特定时间点T细胞亚群和活化状态的变化。血浆和/或血清或组织也可用于DNA、RNA和蛋白质表达分析，包括体细胞突变，以便将表达水平与应答相关联。

通过IHC评估福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)存档肿瘤组织的基线DLL3表达和其他可能预测应答的探索性生物标志物。

为了满足资格要求，受试者必须提供新鲜肿瘤组织用于生物标志物发现和未来研究，除非存档组织是在最后一次癌症治疗后采集的。对于入组后第一周内的存档肿瘤样品，评估研究前收集的存档FFPE肿瘤组织。

收集肿瘤活检并分析药效学(PD)变化，以确定研究产品对肿瘤中一种或多种靶标的影响，以及潜在地分析与获得性耐药性相关的分子机制。

结果

共40名患者接受塔拉妥单抗，38名患者根据RECIST 1.1标准纳入疗效分析。塔拉妥单抗在不良事件特征与SCLC受试者的AE特征相似的NEPC受试者中是安全且可耐受的。完全缓解率(CR)为0/38(0％)，确认部分缓解率(PR)为4/38(10.5％)，疾病控制率(DCR)为12/38(31.6％)。

36个患者样品可用于DLL3表达分析。免疫组织化学分析显示，在56％(18/32-4个样品不可评估)的治疗患者样品中检测到DLL3表达。在DLL3+患者样品中，总缓解率(ORR)为22.2％(4/18)，DCR为55.6％(10/18)。

本文所引用的所有参考文献(包括出版物、专利申请、和专利)均通过引用特此并入，引用的程度如同每个参考文献被个别地并且明确地指示通过引用并入并且以其全文在本文阐述。

除非本文另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是在所附权利要求的上下文中)，术语“一个/种(a和an)”和“该”及“至少一个”以及类似指称对象的使用应解释为涵盖单数和复数两者。使用术语“至少一个”后跟一个或多个项的列表(例如，“A和B中的至少一个”)应被解释为表示从所列项(A或B)中选择的一个项或两个或更多个所列项(A和B)的任何组合，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。除非另作描述，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”将视为开放性术语(还即意指“包括(但不限于)”)。除非本文另外指示，否则本文有关值的范围的陈述仅意欲用作个别地提及在该范围内的每一独立值的简写方法，且每一独立值是并入说明书中，就如同在本文个别地陈述该值一般。除非本文另外指示或上下文另外明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以按任何合适的顺序进行。关于本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地描述本发明，而非对本发明范围施加限制，除非另外要求。本说明书中的语言均不应解释为指示任何非要求的要素为实践本发明必不可少的。

本文描述了本发明的优选实施例，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳模式。在阅读以上描述后，那些优选实施例的变化对于本领域普通技术人员可能变得显而易见。发明人期望熟练的技术人员适当地采用这样的变化，并且发明人打算以不同于本文具体描述的方式来实践本发明。因此，本发明包括如适用法律允许的所附权利要求中陈述的主题的所有修改和等同物。此外，除非本文另外指示或与上下文另外明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素在其所有可能变化中的任何组合。

序列

Claims

1.一种治疗受试者中小细胞肺癌(SCLC)的方法，该方法包括向该受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人δ样配体3(DLL3)的第一结合结构域，其中至少25％的SCLC细胞表达DLL3。

2.如权利要求1所述的方法，其中至少50％的SCLC细胞表达DLL3。

3.如权利要求1所述的方法，其中至少75％的SCLC细胞表达DLL3。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中使用免疫组织化学(IHC)测定法来测定DLL3表达。

5.如权利要求4所述的方法，其中使用来自该受试者的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本来测定DLL3表达。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在基于铂的治疗后，该SCLC在该受试者中进展或复发。

7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗后，该SCLC在该受试者中进展或复发。

8.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该受试者(i)已经完成最多两个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，或(ii)已经完成四至六个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，并且没有经历疾病进展。

9.如权利要求1-5中任一项所述的方法，该方法进一步包括向该受试者施用PD-L1抑制剂和可选地化学治疗剂。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含结合人CD3的第二结合结构域。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是蛋白质。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含抗体、单链可变片段(scFv)、串联单链可变片段(scFv)₂、双特异性T细胞接合物分子或异多聚体。

13.如权利要求12所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含SEQ ID NO:14和SEQID NO:15的氨基酸序列。

14.如权利要求13所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗。

15.如权利要求12所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含结合人DLL3的第一异二聚体和结合人CD3的第二异二聚体，其中

(a)该第一异二聚体包含含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链(HC)和含有SEQ IDNO:18的氨基酸序列的轻链(LC)；以及

(b)该第二异二聚体包含含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，与包含少于50％的SCLC细胞表达DLL3并用相同抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者相比，该方法增加了该受试者的无进展生存期(PFS)。

17.如权利要求16所述的方法，与该第二受试者相比，该方法增加总生存期(OS)、客观缓解率(ORR)和/或疾病控制率(DCR)和缓解持续时间(DOR)中的一个或多个。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，该方法使得该受试者的客观缓解率(ORR)大于约35％。

19.一种治疗受试者中SCLC的方法，该方法包括向该受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子至少包含结合人δ样配体3(DLL3)的第一结合结构域，其中该SCLC具有DLL3表达水平，其中至少25％的SCLC细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

20.如权利要求19所述的方法，其中该SCLC具有DLL3表达水平，其中至少50％或至少75％的SCLC细胞以等于或大于2+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

21.如权利要求19或权利要求20所述的方法，其中至少25％的SCLC细胞以2+或3+的强度表达DLL3，如通过IHC测定法所测定的。

22.如权利要求19-21中任一项所述的方法，其中使用来自该受试者的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本来测定DLL3表达。

23.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中在基于铂的治疗后，该SCLC在该受试者中进展或复发。

24.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中在与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗后，该SCLC在该受试者中进展或复发。

25.如权利要求19-22中任一项所述的方法，其中该受试者(i)已经完成最多两个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，或(ii)已经完成四至六个周期的与依托泊苷和可选地PD-L1抑制剂组合的基于铂的治疗，并且没有经历疾病进展。

26.如权利要求19-22中任一项所述的方法，该方法进一步包括向该受试者施用PD-L1抑制剂和可选地化学治疗剂。

27.如权利要求19-26中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含结合人CD3的第二结合结构域。

28.如权利要求19-27中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是蛋白质。

29.如权利要求19-28中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含抗体、单链可变片段(scFv)、串联单链可变片段(scFv)₂、双特异性T细胞接合物分子或异多聚体。

30.如权利要求29所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含SEQ ID NO:14和SEQID NO:15。

31.如权利要求30所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗。

32.如权利要求29所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子包含结合人DLL3的第一异二聚体和结合人CD3的第二异二聚体，其中

33.如权利要求19-32中任一项所述的方法，与具有较低DLL3表达水平并用相同抗原结合分子治疗的第二SCLC受试者相比，该方法增加了该受试者的无进展生存期(PFS)。

34.如权利要求33所述的方法，与该第二受试者相比，该方法增加OS、ORR和/或DCR和DOR中的一个或多个。

35.如权利要求19-34中任一项所述的方法，该方法使得该受试者的客观缓解率(ORR)大于约35％。

36.如权利要求19-35中任一项所述的方法，其中这些癌细胞是活的癌细胞。

37.如权利要求1-14、16-31或33-36中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且其中塔拉妥单抗以10mg至100mg的剂量每两周一次施用。

38.如权利要求37所述的方法，其中塔拉妥单抗以10mg的剂量每两周一次施用。

39.如权利要求37所述的方法，其中塔拉妥单抗以100mg的剂量每两周一次施用。

40.如权利要求37-39中任一项所述的方法，该方法包括在第1、2和3周以10mg至100mg的剂量每周一次施用塔拉妥单抗，然后每两周一次施用塔拉妥单抗。

41.如权利要求1-14、16-31或33-36中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且其中塔拉妥单抗以10mg至100mg的剂量每三周两次施用。

42.如权利要求41所述的方法，其中塔拉妥单抗以10mg、30mg或100mg的剂量每三周两次施用。

43.如权利要求41或42所述的方法，其中塔拉妥单抗在21天周期的第1天和第8天施用。

44.如权利要求1-14、16-31或33-36中任一项所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是塔拉妥单抗，并且其中塔拉妥单抗以20mg至200mg的剂量每三周一次施用。

45.如权利要求44所述的方法，其中塔拉妥单抗以20mg至100mg的剂量每三周一次施用。

46.如权利要求44所述的方法，其中塔拉妥单抗以100mg至200mg的剂量每三周一次施用。

47.如权利要求44-46中任一项所述的方法，其中塔拉妥单抗以20mg、60mg、100mg或200mg的剂量施用。

48.如权利要求44-47中任一项所述的方法，其中塔拉妥单抗在21天周期的第一天施用。

49.如权利要求44-47中任一项所述的方法，该方法包括在第1和2周以10mg至100mg的剂量每周一次施用塔拉妥单抗，然后每三周一次施用塔拉妥单抗。

50.如权利要求5或权利要求22所述的方法，其中这些FFPE组织标本是从粗针穿刺活检组织样品制备的。

51.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中该受试者是人。

52.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中该受试者接受过至少一种针对该癌症的先前治疗并且复发。

53.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中该受试者未接受过针对该癌症的先前全身性治疗。

54.一种治疗受试者中神经内分泌前列腺癌(NEPC)的方法，该方法包括向该受试者施用双特异性抗原结合分子，该双特异性抗原结合分子包含结合人δ样配体3(DLL3)的第一结合结构域和结合人CD3的第二结合结构域，其中这些NEPC细胞表达DLL3，如通过免疫组织化学(IHC)测定法所测定的。

55.如权利要求54所述的方法，其中该IHC测定法是Ventana SP347 IHC测定法。

56.如权利要求54或权利要求55所述的方法，其中该双特异性抗原结合分子是包含SEQID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列的蛋白质。