CN1202830C - 穿山龙及其薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的新用途 - Google Patents
穿山龙及其薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的新用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及中药穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷治疗慢性肾小球肾炎中的新用途，中药穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷具有减轻尿蛋白排泄、降低高血压、减轻肾小球病理损害，从而达到治疗慢性肾炎，改善肾功能的作用。
Description
发明领域
本发明是关于中药穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的新用途，属于中药领域。
背景技术
薯蓣总皂苷为中药穿山龙的有效部位。化学成分含薯蓣皂苷(dioscin)、延属皂苷(trillin)等多种甾体皂苷。薯蓣皂苷含量为1.5～2.6％，尚含有少量25-异-螺甾-3，5-二烯(25-D-spirosta-3，5-diene)中药穿山龙为薯蓣科植物穿山龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)的干燥根茎，主产于东北、华北，四川、陕西、甘肃等地区也有分布。具有活血舒筋、消食利水、祛痰截疟之功效。临床报道穿龙薯蓣总皂苷对治疗冠心病、抗动脉粥样硬化、降血脂、平喘抗炎和抗肿瘤有一定疗效。
发明内容
本发明的目的在于公开中药单味穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的新用途。
中药穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的作用，是通过以下的药效实验、临床实验得到证实的。
中药穿山龙与其提取物薯蓣总皂苷具有减轻尿蛋白排泄、降低高血压、减轻肾小球病理变，从而达到治疗慢性肾炎，改善肾功能的作用。
实验例1中药穿山龙及其提取物薯蓣总皂苷在治疗慢性肾小球肾炎中的药效
实验
一、材料与方法：
(1)、动物模型的制备
雄性Wistar大鼠，切除左肾24小时后，尾静脉注射500μg单克隆抗体1-22-3，造成慢性系膜增生性肾小球肾炎，造模后共观察6周。
(2)、实验用药的制备：按常规取实验室制备薯蓣总皂苷。
(3)、实验设计
28只雄性Wistar大鼠7周龄，随机分四组，每组7只。第1组：给生理盐水(PBS)作对照；第2组，给穿山龙生药煎剂3g/公斤·体重/日。第3组，给薯蓣总皂苷50mg/公斤·体重/日。第4组，给洛丁新2mg/公斤·体重/日。抗体注射同时灌胃给药，共观察42天。第42天处死全部大鼠，心脏取血，摘取右肾称重后，取肾组织做免疫荧光和光镜检查。
(4)、尿蛋白检查
取单克隆抗体1-22-3注射后第1、7、14、21、28、35、42天24小时尿，利用Bradford方法，检查尿液中24小时蛋白的含量。
(5)、大鼠血压测定
于取尿前检查大鼠的血压，方法是将大鼠固定在检测装置(SoftronECGprocessor，Tokyo，Japan)中，加温至30℃，测尾部血管的收缩压和舒张压，共重复三次，取平均值。我们测量了大鼠造模后第1、7、21、31和41天血压的变化。
(6)、光学显微镜检查
部分肾组织被置于10％福尔马林液中固定，石蜡包埋，将组织切割为4μm厚的薄片，进行PAM和PAS染色。每张组织切片我们观察了100个肾小球，对肾小球内系膜基质增生进行了半定量分析。并计算了100个肾小球中新月体的个数。
(7)、免疫荧光分析法
部分肾组织迅速被冷冻在N-乙烷液体中，置-70℃保存。冷冻组织被切割为3-4μm薄片，利用间接免疫荧光方法染色。所使用的一次抗体有：抗转化生长因子β(TGF-β)抗体，抗I型胶原抗体，和抗大鼠平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)抗体等。FITC标记的猪抗兔免疫球蛋白Igs，作为TGF-β和I型胶原的二次抗体；FITC标记的羊抗小鼠IgG2a作为α-SM-actin的二次抗体。我们检查了每张组织切片中20个肾小球，根据Floege等人(Kidney Int.1992)的方法，进行了半定量分析。即根据肾小球荧光范围和强度，可分为阴性和阳性。阴性我们定为“0”。阳性中，荧光范围小于25％，为“1+”；25％～50％为“2+”；50～75％为“3+”；大于75％为“4+”。然后算出每张切片中，一个肾小球的均值。将所有组织切片，按组分类，进行统计学处理。
(8)、血生化检查
我们检查了各组大鼠血浆总蛋白、白蛋白、总胆固醇、血肌酐和尿素氮的含量。
(9)、统计学处理
组间比较采用秩和检验和非配对t检验方法。
二.实验结果
(1)尿蛋白结果：
中药穿山龙与穿龙薯蓣总皂苷在造模后第1、7、14、21、28、35和42天明显地抑制了尿蛋白的排泄。与生理盐水对照组相比统计学处理有显著性差异(见表1)。
表1.24小时尿蛋白结果(
x+s)
1天 7天 14天 21天 28天 35天 42天
组别 n mg/d mg/d mg/d mg/d mg/d mg/d mg/d
PBS 7 15.04±2.94 76.84±25.43 83.97±24.53 70.50±13.95 54.69±15.34 45.27±7.85 35.47±6.51
穿山龙3g 7 9.93±1.96**ΔΔΔ 46.66±9.77** 45.96±12.92*** 34.63±4.18*** 30.29±5.42***Δ 24.63±4.43*** 22.67±6.51**
薯蓣皂苷50mg 7 13.96±1.94 50.30±5.36* 42.41±3.19*** 37.84±3.27*** 34.27±4.33** 33.03±4.27**ΔΔ 32.44±4.90
洛丁新4mg 7 15.79±2.28 54.67±5.61** 49.56±3.51** 43.56±5.39*** 34.27±4.33** 37.59±8.11 35.30±5.34
注：与PBS组比较*P＜0.05，**p＜0.001；与洛丁新组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01ΔΔΔ，＜p＜0.001
(2)光镜与免疫荧光结果：
中药穿山龙与穿龙薯蓣总皂苷均可减轻肾小球的病理损害。减少系膜基质的扩张和新月体的形成(见图1、图2、图3)。我们半定量分析了穿山龙与穿龙薯蓣总皂苷对转化生长因子β_(TGF-β)，I型胶原(CollI)和大鼠平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)等的影响，我们发现药物治疗后明显地抑制了TGF-β、CollI和α-SM-actin等在肾小球内的表达，统计学处理有显著性的差异(见表2)。
表2免疫荧光半定量分析结果(
x±s)
n TCF-β CollI α-SMA
PBS 7 1.06±0.30 1.05±0.34 1.13±0.26
穿山龙3g 7 0.21±0.13*** 0.18±0.099***Δ 0.40±0.12***
薯蓣皂苷50mg 7 0.32±0.057*** 0.31±0.073*** 0.46±0.20***
洛丁新4mg 7 0.37±0.076*** 0.4±0.082*** 0.53±0.13***
注：与PBS组比较***p＜0.001；与洛丁新组比较ΔP＜0.05
(3)对大鼠血压的影响：
如表3、4所示，造模后大鼠的血压逐渐增高，在第21天、31天和41天均表现出高血压，而中药穿山龙与穿龙薯蓣总皂苷均可使血压降低，与已公认的降压药洛丁新有同样的效果(见表2、3)，经统计学处理有显著性的差异。
表3收缩压的变化情况(
x±s)
1天 7天 21天 31天 41天
组别 n (mmHg) (mmHg) (mmHg) (mmHg) (mmHg)
PBS 7 114.09±7.31 114.46±9.55 137.34±11.72 143.33±15.26 139.13±14.75
穿山龙3g 7 113.33±6.24* 109.3±3.07 126.57±4.56**122.2±3.77*** 123.36±3.51**
薯蓣皂苷50mg 7 112.53±6.88 116.07±9.88 127.67±4.18* 124.01±4.02*** 123.64±3.09**
洛丁新4mg 7 114.79±4.76 115.01±4.47 129.43±3.29* 129.34±2.71** 130.63±5.33
注：与PBS组比较*P＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
表4舒张压的变化情况(
x±s)
1天 7天 21天 31天 41天
组别 n (mmHg) (mmHg) (mmHg) (mmHg) (mmHg)
PBS 7 82.77±6.74 81.39±8.66 94.50±7.30 101.00±11.94 99.39±14.24
穿山龙3g 7 78.61±4.45 77.76±3.8 84.01±3.32** 85.24±4.83*** 83.27±2.94***
薯蓣皂苷50mg 7 86.84±4.01 86.49±4.4 87.46±4.49* 86.06±2.97** 85.31±2.52**
洛丁新4mg 7 84.8±3.18 87±5.79 89.04±3.70 90.51±4.38* 89.07±2.42*
注：与PBS组比较*P＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
(4)对血生化指标的影响：
如表5所示，穿山龙与穿龙薯蓣总皂苷可提高血浆总蛋白，改善肾功能。
表5血生化指标(
x±s)
n T-protein T-cholest BUN Creatinine
(G/dl) (Mg/dl) (Mg/dl) (Mg/dl)
PBS 7 5.64±0.18 91.86±24.09 34.54±9.93 0.36±0.079
穿山龙3g 7 5.61±0.11 73.71±9.07* 27.36±4.09* 0.31±0.069
薯蓣皂苷50mg 7 6.04±0.15***ΔΔΔ 83.14±7.34 26.24±6.26* 0.29±0.069
洛丁新4mg 7 5.66±0.19 81.43±12.20 31.93±3.26 0.34±0.053
注：与PBS组比较*p＜0.05，***p＜0.001；与洛丁新组比较ΔΔΔ＜P＜0.001
实验例2中药穿山龙在治疗慢性肾小球肾炎中的临床实验
1临床资料
1.1病例选择 凡临床表现符合慢性肾炎诊断标准，排除了急性感染后肾小球肾炎、过敏性紫癜、狼疮性肾炎等继发性肾小球疾病的可能性。
1.2一般资料临床观察20例，均为中日友好医院1999-2001年住院或门诊患者。其中男21例，女9例；年龄16-62岁，平均37.53岁；病程2-10年。临床表现为单纯蛋白尿7例，蛋白尿兼血尿7例，肾病综合征6例。10例具有病理诊断结果，其中IgA肾病2例，非IgA系膜增生性肾炎5例，微小病变3例。
2治疗方法
患者没有使用任何西药，单纯口服穿山龙为主的中药煎剂，每天2次，每次约100ml。或患者单纯使用西药疗效不明显，尿蛋白持续不消。西药减量的同时，配合服用穿山龙为主的中药煎剂。
3疗效标准与治疗结果
3.1疗效标准参照第二次全国肾病专题学术讨论会通过的疗效评定标准。完全缓解：尿蛋白持续阴性，高倍镜下尿红细胞消失。基本缓解：尿蛋白持续减少≥50％，高倍镜下尿红细胞不超过4个。好转：尿蛋白持续减少≥25％，高倍镜下尿红细胞不超过4个。无效：尿蛋白或尿红细胞无显著变化。
3.2治疗结果
20例中，完全缓解3例(15％)，基本缓解6例(30％)，好转9例(45％)，无效2例(10％)，总有效率为90％。疗效明显优于单纯西药治疗。
附图说明：
图1为生理盐水对照组；
图2为薯蓣总皂苷治疗组；
图3为穿山龙治疗组成。
具体实施方式
实施例1
精密称取穿山龙粗粉1000g，饮片打碎，过20目筛，加6倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液和上述水溶液，滤过，滤液浓缩至适量，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装即得颗粒剂。口服，一次0.25g，一日两次。
实施例2
薯蓣总皂苷原料1000g，药用淀粉1000g，混合均匀，装入0#胶囊，得胶囊剂。每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日两次。
实施例3
薯蓣总皂苷原料1000g，药用淀粉500g，混合均匀，用适量乙醇制粒，经整粒机整粒，压片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日两次。
Claims (4)
1、单味穿山龙在制备治疗慢性肾小球肾炎药物中的应用。
2、如权利要求1所述的应用，其中所述治疗慢性肾小球肾炎是指减轻尿蛋白排泄、降低高血压、减轻肾小球病理损害。
3、薯蓣总皂苷在制备治疗慢性肾小球肾炎药物中的应用。
4、如权利要求3中所述的应用，其中所述治疗慢性肾小球肾炎是指减轻尿蛋白排泄、降低高血压、减轻肾小球病理损害。
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