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CN120098128A - Cd137激动剂抗体及其用途 - Google Patents

Cd137激动剂抗体及其用途 Download PDF

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CN120098128A
CN120098128A CN202510235235.7A CN202510235235A CN120098128A CN 120098128 A CN120098128 A CN 120098128A CN 202510235235 A CN202510235235 A CN 202510235235A CN 120098128 A CN120098128 A CN 120098128A
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CN
China
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antibody
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chain variable
antigen
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A·库兹曼
H·特兰
陈士浩
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QLSF Biotherapeutics Inc
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Abstract

本公开提供与CD137结合并使其活化的分离的结合分子、包含编码结合分子的氨基酸序列的核酸分子的载体、含有载体的宿主细胞、制备结合分子的方法、含有结合分子的药物组合物以及使用此类抗体、抗体片段和衍生物以及多肽的方法，包括治疗需要刺激免疫应答的疾病(包括癌症)的方法。

Description

CD137激动剂抗体及其用途
本申请是申请日为2020年1月2日、申请号为202080012041.6、名称为“CD137激动剂抗体及其用途”的专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请主张在2019年1月2日提交的美国临时专利申请号62/787,509的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。
序列表的并入本申请包括创建于2020年1月2日并通过EFS-Web以ASCII格式提交的名称为“QLSF001PCT_ST25.txt”、大小为73.8KB的序列表。序列表的全部内容通过引用并入本文。
发明背景
CD137是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员。其别名为肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、4-1BB和淋巴细胞活化诱导(ILA)的受体。CD137可由活化的T细胞表达，但在CD8 T细胞上的表达量比在CD4 T细胞上的表达量更高。此外，CD137可在树突细胞、滤泡树突细胞、自然杀伤细胞、粒细胞和发炎部位的血管壁细胞上表达。CD137的一项典型活性是其对活化的T细胞的共刺激活性。CD137的交联能增强T细胞增殖、IL-2分泌、存活和细胞溶解活性。此外，它还可增强免疫活性以消除小鼠中的肿瘤。
CD137在TCR活化时可被诱导为T细胞共刺激受体(Nam等人，Current Cancer DrugTargets，5：357-363(2005)；Watts等人，Annual Review of Immunology，23：23-68(2005))。除了在活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞上表达外，CD137也在CD4+CD25+调节性T细胞上表达。其天然配体CD137L表达于抗原呈递细胞，包括B细胞、单核细胞/巨噬细胞和树突细胞(Watts等人，Annu.Rev.Immunol.,23:23-68(2005))。
CD137L或CD137激动性单克隆抗体(mAb)通过CD137信号传送提升TCR诱导的T细胞增殖、细胞因子生成和功能成熟，并延长CD8+T细胞存活。这些效应源于：(1)NF-KB、c-JunNH2-末端激酶/应激活化蛋白激酶(JNK/SAPK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的活化，以及(2)抗凋亡和细胞周期相关基因表达的调控。在缺乏CD137和CD137L的小鼠上进行的实验还表明了CD137共刺激在产生完全感受态的T细胞应答中的重要性。IL-2和IL-15活化的NK细胞表达CD137，激动性mAb连接CD137会刺激NK细胞增殖和IFN-γ分泌，但不会刺激其细胞溶解活性。此外，CD137刺激的NK细胞在体外促进活化的T细胞的扩增。根据其共刺激功能，已表明针对CD137的激动性mAb可促进心脏同种异体移植物和皮肤同种异体移植物的排斥反应，根除肿瘤，扩大原发性抗病毒CD8+T细胞应答，并增强T细胞的细胞溶解潜力。这些研究支持CD137信号传导提升T细胞功能的观点，所述T细胞功能可增强对肿瘤和感染的免疫力。
抗CD137抗体已在美国2005/0095244中公开，美国专利号为7,288,638(例如20H4.9-IgG4[10C7或BMS-663513]或20H4.9-IgG1[BMS-663031])；美国专利号6,887,673[cxE9或BMS-554271]；美国专利号7,214,493；美国专利号6,303,121；美国专利号6,569,997；美国专利号6,905,685；美国专利号6,355,476；美国专利号6,362,325[IDS或BMS-469492；3H3或BMS-469497；或3El]；美国专利号6,974,863(例如53A2)；或美国专利号6,210,669(例如IDS、3B8或3E1)、或美国专利号8,337,850。另外的CD137激动性抗体在美国2016/0244528、美国专利号5,928,893；美国专利号6,303,121；美国专利号6,569,997和美国专利号8,137,667中有所描述；
发明概述
本公开提供了分离的抗CD137单克隆激动剂抗体及其特异性结合人类CD137的抗原结合部分。
在本发明的一方面，一种分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分包含重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，所述抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分进一步包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:6，以及重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:7。在优选实施方案中，所述抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分进一步包含：(a)包含SEQID NO:3的轻链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:4的轻链可变区CDR2；以及(c)包含SEQ IDNO:5的轻链可变区CDR3。在一个实施方案中，所述抗体或部分包含与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列.在另一个实施方案中，所述抗体或部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与如SEQ ID NO:2所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一方面，一种分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分包含重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:31。在一些实施方案中，所述抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分进一步包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29，以及重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:30。在优选实施方案中，所述抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分进一步包含：(a)包含SEQ ID NO:26的轻链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:27的轻链可变区CDR2；以及(c)包含SEQ ID NO:28的轻链可变区CDR3。在一个实施方案中，所述抗体或部分包含与SEQ ID NO:35具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:36具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列.在另一个实施方案中，所述抗体或部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与如SEQ ID NO:36所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
在本发明的另一方面，一种分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:25的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在本发明的另一方面，一种分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分包含：重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
通过使免疫原性最小化的修饰，本公开发明的所述抗体可进一步工程化为适合于人类治疗的形式。合适的抗体包括但不限于嵌合抗体和人源化抗体。所述公开的抗体的亲和力、稳定性和特异性也可通过本领域技术人员已知的技术进一步优化。其他形式可涉及所述公开的抗体与其他功能蛋白寡聚、药物缀合和融合。
本公开发明的所述抗体可以是，例如全长抗体，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。可选地，所述公开的抗体可以是抗体片段，例如Fab片段、Fab'片段和F(ab')2片段、双体、三体、四体、单链可变区片段(scFv)、二硫键稳定性可变区片段(dsFv)和半抗体。可选地，所述公开的抗体可以是双特异性抗体。
在本发明的另一方面，一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37至SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40至SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
在本发明的另一方面，一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:43至SEQ ID NO:46的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:47至SEQ ID NO:50的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分与人类CD137结合并使其活化。因此，所述抗体或抗原结合部分可刺激抗肿瘤免疫应答。在一些实施方案中，所述抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分与非人灵长类CD137结合并使其活化。在一些实施方案中，所述抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分与哺乳动物CD137结合并使其活化。
在本发明的另一方面，还提供了一种包含所述分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分的组合物。
在本发明的另一方面，还提供了一种包含所述分离的抗CD137单克隆激动剂抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的转运体的药物组合物。还提供了包含本发明的免疫偶联物和药学上可接受的转运体的组合物。
在本发明的另一方面，还提供了一种包含分离核酸分子的载体，所述分离核酸分子编码所述抗体或其抗原结合部分，以及一种包含表达载体的宿主细胞，所述表达载体包含所述核酸分子。
本发明进一步提供了一种使用本公开发明的抗CD137激动剂抗体来刺激免疫应答的方法。例如，在一个实施方案中，本公开发明提供了一种治疗有需要的受试者的方法，包括向受试者施用有效量的本公开发明的抗体或抗原结合部分的步骤。
在另一方面，本公开发明提供了一种治疗人类癌症的方法，包括向人类施用有效治疗所述癌症的量的本公开发明的抗CD137激动剂抗体或抗原结合部分的步骤。
在另一方面，本公开发明提供了一种治疗人类传染病的方法，包括向人类施用有效治疗所述传染病的量的本公开发明的抗CD137激动剂抗体或抗原结合部分的步骤。
通过以下不应被解释为限制的说明书和各示例，本公开的其他特征和优点将显而易见。本申请中引用的所有参考文献、GenBank条目、专利和已发布专利申请的内容通过引用明确并入本文。
本申请还包括以下实施方式。
1、一种分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，包含重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:8。
2、一种分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，包含重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:31。
3、根据实施方式1所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其进一步分别包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO：6，以及重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:7。
4、根据实施方式2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其进一步分别包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29，以及重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:30。
5、根据实施方式3所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含
(a)包含SEQ ID NO:3的轻链可变区CDR1；
(b)包含SEQ ID NO:4的轻链可变区CDR2；以及
(c)包含SEQ ID NO:5的轻链可变区CDR3；
其中，所述抗体或部分与人类CD137特异性结合。
6、根据实施方式4所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含
(a)包含SEQ ID NO:26的轻链可变区CDR1；
(b)包含SEQ ID NO:27的轻链可变区CDR2；以及
(c)包含SEQ ID NO:28的轻链可变区CDR3；
其中，所述抗体或部分与人类CD137特异性结合。
7、根据实施方式1所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列。
8、根据实施方式1所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与如SEQ ID NO:2所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
9、根据实施方式2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含与SEQ ID NO:35具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:36具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列。
10、根据实施方式2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与如SEQ ID NO:36所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
11、根据实施方式1-10中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其为Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、单链抗体或双特异性抗体。
12、根据实施方式1-10中任一项所述的分离的抗体，所述分离的抗体为嵌合抗体或人源化抗体。
13、根据实施方式1-10中任一项所述的分离的抗体，所述分离的抗体为免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子。
14、根据实施方式13所述的分离的抗体，所述分离的抗体为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
15、根据实施方式1所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含：重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17的氨基酸序列，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
16、根据实施方式2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含：重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:25的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
17、根据实施方式15和16中任一项所述的分离的抗体，所述分离的抗体为嵌合抗体或人源化抗体。
18、根据实施方式15和16中任一项所述的分离的抗体，所述分离的抗体为免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子。
19、根据实施方式18所述的分离的抗体，所述分离的抗体为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
20、根据实施方式1-19中任一项所述的分离的抗体，其中，所述抗体为单克隆抗体。
21、一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含轻链，所述轻链包含选自SEQID NO:33、SEQ ID NO:37至SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含选自SEQID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40至SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
22、一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含轻链，所述轻链包含选自SEQID NO:43至SEQ ID NO:46的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含选自SEQ ID NO:47至SEQID NO:50的氨基酸序列。
23、一种免疫偶联物，包含与治疗剂连接的根据实施方式1-10、15、16、21和22中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。
24、一种药物组合物，包含根据实施方式1-10、15、16、21和22中任一项所述的抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的转运体。
25、一种刺激受试者的免疫应答的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方式24所述的药物组合物以刺激所述受试者的免疫应答的步骤。
26、一种治疗受试者的传染病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方式24所述的药物组合物以治疗所述传染病的步骤。
27、一种治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方式24所述的药物组合物以治疗所述癌症的步骤。
附图说明
示例性实施方案在参考图中示出。本文公开的实施方案和附图视为说明性而非限制性目的。
图1A和图1B示出了本公开的抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体诱导NF-KB报告基因活化。图2A和图2B示出了本公开的抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体刺激原发性CD3+CD8+T细胞增殖。图2C和图2D示出了刺激原发性CD3+CD8-T细胞增殖的抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体。
图3A和图3B示出了本公开的抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体刺激干扰素-γ分泌。
图4A和图4B示出了本公开的抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体抑制hu4-1BB基因敲入小鼠中的癌症。
发明详述
下面结合系统、组合物和方法对实施方案及其各方面进行描述和说明，这些系统、组合物和方法为示例性和说明性目的，而不是限制范围。
定义
如本文所使用的，术语“包括”或“包含”用于指示对实施方案有用但可包括未指明元素(无论是否有用)的组合物、方法及其各自的组分。本领域技术人员将理解，一般而言，本文中所使用的术语通常旨在作为“开放”术语(例如，术语“包括”应解释为“包括但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包含”应解释为“包含但不限于”等)。
除非另有说明，否则在描述本申请的特定实施方案的上下文中(尤其是在权利要求的上下文中)使用的术语“一种”、“一个”和“所述”以及类似引语可被解释为涵盖单数和复数。本文对数值范围的引用仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的简略表达方法。除非在本文中另有说明，否则每个单独的值均并入说明书中，如同其在本文中被单独引用一样。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可按任何合适的顺序执行。与本文中的某些实施方案相关的所有示例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本申请并且不对另外要求保护的本申请的范围构成限制。缩写词“e.g.”源自拉丁语exempli gratia，在本文中用于指示非限制性示例。因此，缩写词“e.g.”与“例如”一词同义。本说明书中的任何语言均不应被解释为表示对本申请的实践至关重要的任何未要求保护的元素。
如本文所用的术语“约”是指可测量值，诸如数量、持续时间等，并且涵盖指定值±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％或±0.1％的变化值。
如本文所用的术语“表位”可包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常由具有化学活性的分子表面基团组成，诸如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。当平衡解离常数≤1μM(优选≤100nM，最优选≤10nM)时，抗体被称为特异性结合抗原。
术语“KD”可以指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
如本文所用的术语“免疫应答”可以指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞以及由上述细胞或肝脏产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，这些物质会对有机体造成选择性损伤、破坏或消除有机体中的入侵病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或正常的机体细胞或组织(在自身免疫或病理炎症的情况下)。
如本文所用，“抗原特异性T细胞应答”可以指通过T细胞特异性抗原刺激T细胞而引起的T细胞应答。T细胞对抗原特异性刺激的应答的非限制性实例包括增殖和产生细胞因子(例如产生IL-2)。
如本文所用的术语“抗体”是指完整的免疫球蛋白或单克隆或多克隆抗原结合片段，其具有Fc(可结晶片段)区或Fc区的FcRn结合片段，本文称之为“Fc片段”或“Fc区”。抗原结合片段可通过重组DNA技术或酶促或完整抗体的化学裂解产生。抗原结合片段尤其包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、单区抗体、嵌合抗体、双抗体以及包含至少一部分免疫球蛋白的多肽，该免疫球蛋白足以赋予与该多肽结合的特异性抗原。Fc区包括构成两类或三类抗体的两条重链的部分。Fc区可通过重组DNA技术或通过酶促(例如木瓜蛋白酶裂解)或通过完整抗体的化学裂解产生。
如本文所用的术语“抗体片段”是指仅包含完整抗体的一部分的蛋白质片段，通常包括完整抗体的抗原结合位点并因此保留结合抗原的能力。本定义包涵的抗体片段的示例包括：(i)具有VL区、CL区、VH区和CH1区的Fab片段；(ii)Fab'片段，该Fab'片段是在CH1区的C端具有一个或多个半胱氨酸残基的Fab片段；(iii)具有VH区和CH1区的Fd片段；(iv)具有VH区和CH1区以及在CH1区C端的一个或多个半胱氨酸残基的Fd'片段；(v)具有抗体单臂VL区和VH区的Fv片段；(vi)由VH区组成的dAb片段(Ward等人，Nature341，544-546(1989))；(vii)分离的CDR区；(viii)F(ab')2片段(二价片段)，包括在铰链区通过二硫键连接的两个Fab'片段；(ix)单链抗体分子(例如，单链Fv；scFv)(Bird等人，Science 242:423-426(1988)；以及Huston等人，PNAS(USA)85:5879-5883(1988))；(x)具有两个抗原结合位点的“双抗体”，包含连接到同一多肽链中的轻链可变区(VL)的重链可变区(VH)(参见，例如，EP404,097；WO93/11161；以及Hollinger等人，Natl.Acad.Sci.90:6444-6448(1993))；(xi)包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)的“线性抗体”，其与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等人，Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)；以及美国专利号5,641,870)。
如本文所用，“单链可变片段”、“单链抗体可变片段”或“scFv”抗体是指由接头肽连接的包含仅重链(VH)和轻链(VL)的可变区的抗体形式。scFv能够表达为单链多肽。scFv保留了其来源的完整抗体的特异性。轻链和重链可按任意顺序，例如，VH-接头-VL或VL-接头-VH，只要保持scFv对靶抗原的特异性即可。
如本文所用，“分离的抗体”可指的是基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合CD137蛋白的分离的抗体可基本上不含特异性结合CD137蛋白以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合人类CD137蛋白的分离的抗体可能与其他抗原(诸如来自其他物种的CD137蛋白)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其他细胞材料和/或化学品。
可选择、克隆和进一步筛选抗CD137激动剂抗体产生细胞，例如杂交瘤，以获得所需特征，包括健壮生长、高抗体生成和所需的抗体特征。杂交瘤可在同基因动物体内、缺乏免疫系统的动物体内(例如裸鼠)或体外细胞培养物中扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员众所周知的。
如本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”可以指单分子组合物的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物对特定表位表现出单一结合特异性和亲和力。
如本文所用的术语“重组人类抗体”可指通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人类抗体，诸如(a)从为人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或从其制备的杂交瘤(如下所述)分离的抗体，(b)从转化为表达人类抗体的宿主细胞分离的抗体，例如从转染瘤分离的抗体(c)从重组、组合人类抗体库中分离的抗体，以及(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人类抗体具有可变区，其中，框架和CDR区衍生自人种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方案中，此类重组人抗体可经受体外诱变(或者，当使用用于人Ig序列的动物转基因时，经受体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列虽然衍生自于人类种系VH序列和VL序列并与之相关，但在自然条件下，可能不存在于体内人类抗体种系库中
术语“同种型”可指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgGl)。抗体可以是免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子，或衍生自于它们。
在本文中，短语“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”可与术语“与抗原特异性结合的抗体”互换使用。
如本文所用，“特异性结合人类CD137”的抗体可以指结合人类CD137蛋白(以及可能来自一种或多种非人物种的CD137蛋白)但基本上不结合非CD137蛋白的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”结合人类CD137蛋白，即具有1x10-7 M或以下、更优选5x10-8 M或以下、更优选3x10-8 M或以下、更优选1x10-8 M或以下、更优选5x10-9 M或以下或甚至更优选1x10-9 M或以下的KD。
如本文所用的术语“基本上不结合”蛋白质或细胞可表示其不能结合或不以高亲和力结合蛋白质或细胞，即以2x10-6 M或以上、更优选1x10-5 M或以上、更优选1x10-4 M或以上、更优选1x10-3 M或以上、甚至更优选1x10-2 M或以上的KD结合到蛋白质或细胞。
术语对IgG抗体具有“高亲和力”可指对于靶抗原具有1x10-6 M或以下，优选地1x10-7 M或以下，更优选地1x10-8 M或以下，甚至更优选地1x10-9 M或以下，甚至更优选地1x10-10M或以下的KD的抗体。然而，“高亲和力”结合可因其他抗体同种型而异。
术语“药物制剂”是指其形式允许其中所含活性成分的生物活性有效且不含对将施用该制剂的受试者具有不可接受毒性的额外成分的制剂。
药剂(例如，药物制剂或细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内达到期望的治疗结果的有效量，例如用于治疗疾病、病症、或障碍和/或治疗的药代动力学效果或药效学效果。治疗有效量可因诸如受试者的疾病状态、年龄、性别和体重以及施用的细胞群等因素而异。在一些实施方案中，本发明提供的方法涉及以有效量(例如治疗有效量)施用细胞和/或组合物。
如本文所用的“激动剂抗体”是诱导或增加与抗体结合的抗原(例如，CD137)的生物学活性的抗体。例如，由于受体与配体的结合，激动剂可促进受体的磷酸化作用，或者可活化或使由受体活化的细胞生长。在一个实施方案中，本发明的抗体是抗CD137激动剂抗体。
“CDR移植抗体”为包含一个或多个衍生自特定物种或同种型的CDR以及相同或不同物种或同种型的另一抗体的框架的抗体。
“人源化抗体”具有通过一个或多个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同于源于非人类物种的抗体的序列，使得当给人类受试者施用时，与非人类物种抗体相比，人源化抗体不太可能诱导免疫应答和/或诱导不太严重的免疫应答。在一个实施方案中，使非人类物种抗体的重链和/或轻链的框架和恒定区中的某些氨基酸产生突变以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，来自人类抗体的恒定区与非人类物种的可变区融合。在另一个实施方案中，人源化抗体为CDR移植抗体，该CDR移植抗体包含一个或多个衍生自特定物种或同种型的抗体的CDR以及人类抗体框架。在另一个实施方案中，改变非人类抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基以降低非人类抗体施用于人类受试者时可能的免疫原性，其中，改变的氨基酸残基对于抗体与其抗原的免疫特异性结合不是关键的，或者对氨基酸序列所做的改变是保守的改变，使得人源化抗体与抗原的结合不会显著劣于非人类抗体与抗原的结合。有关如何制备人源化抗体的示例，请参见美国专利号6,054,297、5,886,152和5,877,293。
术语“嵌合抗体”是指包含来自一种抗体的一个或多个区以及来自一种或多种其他抗体的一个或多个区的抗体。在一个实施方案中，一个或多个CDR衍生自人类抗CD137抗体。在另一个实施方案中，所有CDR均衍生自人类抗CD137抗体。在另一个实施方案中，来自一种以上人类抗CD137抗体的CDR在嵌合抗体中混合并匹配。例如，嵌合抗体可包含来自第一人类抗CD137抗体的轻链的CDR1、来自第二人类抗CD137抗体的轻链的CDR2和CDR3，以及来自第三抗CD137抗体的重链的CDR。其他组合也是可能的。
术语“受试者”可以指任何人类或非人类动物。受试者可以是男性或女性并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、少年、青少年、成人和老年受试者。术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人类灵长类动物、羊、狗、猫、牛、马、鸡、兔、小鼠、大鼠、两栖动物和爬行动物，尽管优选哺乳动物，诸如非人类灵长类动物、羊、狗、猫、牛和马。
本公开发明的抗体与CD137的结合可通过使用本领域中的一种或多种成熟的技术进行评估。例如，在优选实施方案中，抗体可通过ELISA测定进行测试，例如使用重组CD137蛋白。其他合适的结合测定包括但不限于流式细胞术测定，其中，抗体与表达人类CD137的细胞系反应，诸如已转染以在其细胞表面上表达CD137(例如，人类CD137)的HEK293细胞。此外或可选地，可以在BIAcore结合测定、OctetRed96(Pall)等中测试抗体的结合，包括结合动力学(例如，KD值)。
优选地，本公开发明的抗体结合具有5x10-8 M或以下的KD的人类CD137蛋白，结合具有2x10-8 M或以下的KD的人类CD137蛋白，结合具有2x10-8 M或以下的KD的人类CD137蛋白，结合具有5x10-9 M或以下的KD的人类CD137蛋白质，结合具有4x10-9 M或以下的KD的人类CD137蛋白质，结合具有3x10-9 M或以下的KD的人类CD137蛋白质，结合具有2x10-9 M或以下的KD的人类CD137蛋白质，结合具有1x10-9 M或以下的KD的人类CD137蛋白质。
本公开涉及与CD137结合并使其活化的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分及其用途。在某些实施方案中，本公开发明的抗体衍生自经鉴定的重链和轻链种系序列和/或包含经鉴定的结构特征，诸如包含经鉴定的氨基酸序列的CDR区。本公开提供了本公开发明的分离的抗体、制备此类抗体的方法及其抗原结合部分。本公开还涉及使用抗体的方法，诸如单独使用本公开发明的抗CD137激动剂抗体或与其他免疫刺激抗体组合来刺激免疫应答。因此，还提供了使用本公开发明的抗CD137激动剂抗体的方法，例如，包括但不限于治疗人类癌症。本发明的各个方面涉及抗体和抗体片段、药物组合物、核酸、重组表达载体和用于制备此类抗体和片段的宿主细胞。本发明还包括使用本发明的抗体来检测人类CD137，在体外或体内刺激CD137活性以及预防或治疗诸如癌症等疾病的方法。
互补决定区(CDR)被称为轻链可变区和重链可变区中的超变区。可变区的更高度保守部分称为框架(FR)。给定抗体的互补决定区(CDR)和框架区(FR)可使用上文中Kabat等人；Lefranc等人和/或Honegger和Pluckthun描述的系统来识别。本领域技术人员还熟悉Kabat等人描述的编号系统。(1991,NIH Publication 91-3242,National TechnicalInformation Service,Springfield,Va.)。在这方面，Kabat等人定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员可明确地将这种“Kabat编号”系统分配给任何可变区氨基酸序列，而无需依赖于序列本身以外的任何实验数据。
在某些实施方案中，本发明提供抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中，该抗体或部分包含(a)包含SEQ ID NO:3的轻链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:4的轻链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:5的轻链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:7的重链可变区CDR2；(f)包含SEQ ID NO:8的重链可变区CDR3。在另一个实施方案中，该抗体或部分包含(a)包含SEQ ID NO:26的轻链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:27的轻链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:28的轻链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:29的重链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:30的重链可变区CDR2；(f)包含SEQID NO:31的重链可变区CDR3。
在一个实施方案中，本公开提供了结合CD137表位的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:35具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:36具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列。
鉴于这些抗体Fab中的每一者均可结合人类CD137，VH序列和VL序列可“混合和匹配”以产生本发明的其他抗CD137结合分子。优选地，当VH链和VL链混合和匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列替换为结构相似的VH序列。同样，优选地，来自特定VH/VL配对的VL序列替换为结构相似的VL序列。
在一些实施方案中，人源化抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，该重链可变区包含选自：SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及轻链可变区，该轻链可变区包含选自：SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:12的氨基酸序列。优选的重链和轻链组合包括但不限于：
(a)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变区；
在一些实施方案中，人源化抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，该重链可变区包含选自：SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:25的氨基酸序列，以及轻链可变区，该轻链可变区包含选自SEQ ID NO:18至SEQ ID NO:21的氨基酸序列。优选的重链和轻链组合包括但不限于：
(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链可变区；
(b)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区；
(c)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变区；
(d)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区；
在一些实施方案中，人源化抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分包含轻链，该轻链包含选自SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37至SEQ ID NO:39的氨基酸序列，以及重链，该重链包含选自SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40至SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
在一些实施方案中，人源化抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分包含轻链，该轻链包含选自SEQ ID NO:43至SEQ ID NO:46的氨基酸序列，以及重链，该重链包含选自SEQID NO:47至SEQ ID NO:50的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CD137抗体或其抗原结合片段，包含重链，该重链包含如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:31中任一项所示的CDR3区，并且包含重链可变区，该重链可变区包含与如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:22至SEQID NO:25和SEQ ID NO:36中任一项所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CD137抗体或其抗原结合片段，包含轻链，该轻链包含如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:28中任一项所示的CDR3区，并且具有轻链可变区，该轻链可变区包含与如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:18至SEQID NO:21和SEQ ID NO:35中任一项所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
因此，在某些实施方案中，CDR3区域保持恒定，而可变性可引入重链和/或轻链的剩余CDR和/或框架区域，而抗体或其抗原结合片段保留与CD137结合的能力并保留亲本的功能特性，例如结合亲和力。
在一些实施方案中，在至少95％相同(或至少96％相同、或至少97％相同、或至少98％相同、或至少99％相同)的重链或轻链内进行的置换是保守的氨基酸置换。“保守的氨基酸置换”是至其中一个氨基酸残基被另一个具有类似化学性质(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的氨基酸残基所置换。一般而言，保守的氨基酸置换基本上不会改变蛋白质的功能特性。在两个或多个氨基酸序列因保守置换而彼此不同的情况下，可向上调整序列同一性百分比或相似度以校正置换的保守性质。进行此类调整的手段是本领域技术人员众所周知的。例如，参见通过引用并入本文的Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24：307-331。具有类似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香侧链：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸；(5)基本侧链：赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，(7)含硫侧链为半胱氨酸和蛋氨酸。
本公开还提供了编码本文公开的各种氨基酸序列(例如，抗体或其抗原结合部分的氨基酸序列)的分离的多核苷酸(或核酸分子)、包含多核苷酸的载体、包含载体的细胞(或宿主细胞)、包含或表达本文公开的各种氨基酸序列的细胞、制备抗体(和/或其片段)的方法、包含本文公开的抗体的药物组合物等。
除非另有说明或从上下文中暗示，否则以下术语和短语包括以下提供的含义。除非另有明确说明，或从上下文显而易见，否则以下术语和短语不排除该术语或短语在其所属领域中已获得的含义。提供这些定义旨在帮助描述特定的实施方案，而不是为了限制所要求保护的发明，因为本发明的范围仅由权利要求限制。除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。
本文中的所有公开刊物均以引用方式并入，其程度与每个单独公开刊物或专利申请被明确且单独地指示以引用方式并入的程度相同。以下描述包括可能有助于理解本发明的信息。并非承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明有关，或者任何明确或隐含引用的任何公开刊物是现有技术。
工作实例：
以下示例并非旨在限制本发明的权利要求的范围，而是旨在作为某些实施方案的示例。技术人员想到的示例方法中的任何变化均旨在落入本发明的范围内。
载体构建：
将载体pcDNA3.4TOPO(Invitrogen)连接到包含EcoRI、XhoI和NotI的短多聚接头。所得的质粒通过EcoRI和NotI限制性内切酶消化并通过凝胶电泳纯化。对于重链克隆，使用Gibson组装法组装制备的载体，将制备的载体、编码VH区(IDT)的gblock以及在J链和CH1区连接处加有XhoI内切酶位点的编码人类IgG2的gblock组装起来。制备并通过EcoRI和XhoI消化质粒以适应所有具有IgG2同种型的人源化重链可变区(VH)。所有组装均通过Gibson方法(NEB)完成。通过类似的方法并使用gblock构建轻链可变区，以通过编码恒定kappa(Ck)的gblock片段将Vkappa区组装在一起。
蛋白表达：
使用瞬时表达系统(ThermoFisher)制备质粒并将其转染到Expi293或ExpiCHO细胞中。简而言之，将质粒在1μg质粒DNA总量/毫升培养物中转染到3e6细胞/毫升的细胞中。重链和轻链质粒以1：1的比例混合。培养物在37℃下振荡孵育。16小时后，将转染增强剂1和转染增强剂2添加到培养物中并继续孵育6天。过滤上清液，并使用OctetRed96(Pall)通过IgG定量方案测定蛋白质效价。(表1)在ACTA PURE系统上通过Mab Select Sure Protein-A柱纯化对IgG进行纯化，并在PBS中透析一整晚。
表1：Octet数据。抗4-1BB抗体的单价结合动力学
流式细胞术
将人/食蟹猴/小鼠4-1BB转染的HEK293细胞或PHA-P刺激的PBMC与FACS缓冲液(DPBS+2％FBS+0.05％叠氮化钠)中的连续稀释的抗4-1BB抗体一起孵育，随后用AF647标记F(ab')2山羊抗人IgG和7-AAD。此外，PBMC与FITC小鼠抗人CD3一起孵育。使用FlowJo对表达4-1BB的HEK293染色样本进行分析，方法是在FSC/SSC上设门，然后是活/死细胞设门，以及人/食蟹猴/小鼠4-1BB+细胞(表示为MFI Geo平均值)。使用FlowJo对染色淋巴细胞样本进行分析，方法是在FSC/SSC上设门，然后是活/死细胞设门，以及具有4-1BB阳性的CD3+细胞。(表2和表3)
表2：流式细胞术和NK-kB荧光素酶检测。抗4-1BB单抗(mAb)与细胞表面抗原结合。抗4-1BB单抗(mAb)不与小鼠4-1BB或未受刺激的人类T细胞结合(数据未显示)。
在没有Fc交联的情况下，未观察到NF-kB刺激。
表3：流式细胞术。抗4-1BB抗体与细胞表面抗原结合。
使用来自hFcgRIIA/CHOK1细胞的Fc交联和人类4-1BB 293转染细胞进行NF-κB报告基因检测
NF-κB Hu 4-1BB 293转染细胞通过用4-1BB转染HEK-DualTMTNF-α细胞(Invivogen)制备，并且用于测量TNF-α诱导的NF-kB活化。hFcgRIIA/CHOK1转染细胞用于提供与抗4-1BB IgG的交联。通过Accutase采取，洗涤，并用DMEM(不含酚红)+10％热灭活胎牛血清以1x106个细胞/毫升的速度使细胞重新悬浮。将5x104 NF-κB 4-1BB 293转染细胞与相同数量的hFcgRIIA/CHOK1转染细胞或CHOK1亲本细胞在Costar 3799 96孔U型底板中共培养。在培养基中连续稀释测试抗体、阳性对照抗体(C1和C2)和阴性对照抗体(同种型)并加入细胞中。在37℃下孵育18小时至22小时后，从孔中取出20μl细胞悬液并在不透明的96平底板中与50μl的荧光测定试剂(Quanti-Luc，Invivo-Gen#rep-qlc)混合。在Flexstation3读板机上测量荧光量(RLU)，积分为100ms。(图1A和图1B)(表4)。
表4。NF-KB报告基因活化由抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体诱导。
抗4-1BB介导的T细胞增殖及干扰素γ释放，通过CHOK1mFcgRIIB转染细胞交联的使用Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec产品编号130-096-535)从外周血单核细胞(PBMC)制备T细胞，重新悬浮于冷PBS、0.5％牛血清白蛋白(BSA)和2mM EDTA，pH7.2，并按照试剂盒说明用Cell Trace Violet(ThermoFisher,货号C34557)标记。最后，将标记的泛T细胞以2x106个细胞/毫升的浓度重新悬浮在Advanced RPMI-1640、10％热灭活FBS、2-巯基乙醇(1:1000)中。CHOK1.mFcgRIIB-mCherry细胞在F12 Ham、10％ FBS、5μg/ml嘌呤霉素中培养，通过Accutase采取，并以2x105个细胞/毫升的浓度重新悬浮于Advanced RPMI-1640、10％热灭活FBS、2-巯基乙醇(1:1000)中。CHOK1亲本细胞的制备方法类似，但培养基中不含嘌呤霉素。在96孔U型底培养板上，将100,000个标记的Pan T细胞/孔与CHOK1mFcgRIIB-mCherry或CHOK1以10,000个细胞/孔的比例混合，比例为10：1。向所有孔中加入10ng/mlNA/LE小鼠抗人CD3(克隆UCHT-1)，然后添加起始浓度为1μg/ml的连续稀释的4-1BB测试抗体、阳性对照抗体(C1或C2)和阴性对照抗体(同种型)。对照孔包括CHOK1mFcgRIIB-mCherry、Pan T细胞+CHOK1mFcgRIIB、Pan T细胞+CHOK1mFcgRIIB+抗人CD3、Pan T细胞+抗人CD3和Pan T细胞。培养板在37℃二氧化碳培养箱中培养5天。进一步用FITC抗huCD3、PE抗huCD8和7-AAD对细胞进行流式细胞术染色。使用FlowJo对样本进行分析，方法是在FSC/SSC上设门，随后进行活/死细胞设门，然后是CD3+/CD8+T细胞和CD3+/CD8-T细胞的增殖(CellTrace Violet)。图2A和图2B示出了抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体刺激原发性CD3+CD8+T细胞增殖。图2C和图2D示出了抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体刺激原发性CD3+CD8-T细胞增殖。
细胞因子(IFN-γ)释放试验的制备方法类似，但无需pan T细胞标记。培养板在37℃二氧化碳培养箱中培养48小时，分离培养物上清液并收集到两个U型底96孔板(70-80μl/板)上。对于Elisa，使用试剂稀释剂(R&D Systems，货号DY995)按1:2稀释培养物上清液。请参阅R&D Systems数据表和分析程序(产品编号DY285B)。图3A和图3B示出了抗4-1BB(抗CD137)激动剂抗体刺激干扰素-γ分泌。
MC38在转基因人4-1BB敲入小鼠中受到生长抑制
小鼠结肠癌MC38细胞在含有10％胎牛血清、1％青霉素和1％链霉素和2mM谷氨酰胺的DMEM培养基中在37℃、5％二氧化碳培养箱中扩增。将5E5 Mc38细胞皮下接种到右腋窝，在施用供试品之前，肿瘤生长到50mm3至100mm3。对每组8只h4-1BB敲入雌性小鼠施用0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg的抗4-1BB抗体或3mg/kg的hIgG2，每周两次，共5剂。图4A示出了所有测试转基因hu4-1BB敲入小鼠的体重在施用抗4-1BB抗体后逐渐增加。此外，未观察到与药物相关的毒性。QL1806代表抗4-1BB抗体。图4B示出了抗4-1BB抑制小鼠结肠癌细胞MC38的生长。在第21天，观察到显著抑制(p＜0.01)，1mg/kg和3mg/kg剂量组各包含两只无肿瘤小鼠(表5)。
表5。第21天肿瘤体积、抑制率和肿瘤消退(n＝8)
注意：与hIgG2(3mg/kg组)相比，*p＜0.05；**p＜0.01。
本文描述的图、表和示例中所示的克隆名称(抗体)包括下表6中所示的重链和轻链配对：
表6。克隆名称的序列
名称 重链SEQ ID NO 轻链SEQ ID NO
G28.21 2 1
F1.1 36 35
huG28.21.G2.1.4 32 33
huG28.21.G2.4.4 34 33
huF1.1.G2.2.4 48 46
huF1.1.G2.4.4 50 46
QL1806 34 33

Claims (17)

1.一种分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，包含：
重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO：6，重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:7，以及重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:8；以及
包含SEQ ID NO:3的轻链可变区CDR1，包含SEQ ID NO:4的轻链可变区CDR2；以及包含SEQ ID NO:5的轻链可变区CDR3；
其中，所述抗体或其抗原结合部分与人类CD137特异性结合。
2.一种分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，包含：重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29，重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:30，以及重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:31。
3.根据权利要求1或2所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其包含与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性的轻链可变区氨基酸序列以及与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的重链可变区氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与如SEQ ID NO:2所示的序列具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、单链抗体或双特异性抗体。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为嵌合抗体或人源化抗体。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其包含：重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:13至SEQ ID NO:17的氨基酸序列，以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:9至SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为嵌合抗体或人源化抗体。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子。
12.根据权利要求10所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，其中，所述抗体为单克隆抗体。
14.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含轻链，所述轻链包含选自SEQ IDNO:33、SEQ ID NO:37至SEQ ID NO:39的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含选自SEQ IDNO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40至SEQ ID NO:42的氨基酸序列。
15.一种药物组合物，包含根据权利要求1-13中任一项所述的分离的抗CD137激动剂抗体或其抗原结合部分，或根据权利要求14所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的转运体。
16.根据权利要求15所述的药物组合物在制备用于治疗受试者的癌症的药物中的用途。
17.一种用于评估抗体和人类CD137的结合亲和力的方法，其包括：使所述抗体与重组CD137蛋白接触，以及通过选自ELISA测定、流式细胞术测定、BIAcore结合测定和OctetRed96的方法检测结合亲和力。
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