CN1274339C - 氨杞制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种氨杞康制剂，该制剂选用蚕蛹和名贵中药枸杞子为主要原料配制而成；该制剂富含包括人体八种必需氨基酸在内的二十多种氨基酸、微量元素、维生素以及延年益寿的生理活性物质。经过对118例糖尿病患者，100例高脂血症患者临床观察证明，具有迅速提高机体营养水平，增强免疫功能的作用，通过益肾养阴，润燥清热而达到降糖降脂的目的，主治肝肾不足、肺燥阴虚所致的疲乏无力，头昏头晕，食欲不振，适用于糖尿病，高血脂症。

Description

氨杞制剂及其制备方法和用途

                    技术领域

本发明涉及一种由纯中药制成的氨杞制剂，又称(氨杞康制剂)，用于治糖尿病和高脂血症。

                    背景技术

糖尿病、高脂血症是一种全身性慢性进行性疾病，是一种十分复杂的内分泌代谢性疾病。其基本病理是绝对性或相对性胰岛素分泌不足，β细胞对胰岛素的敏感性降低而导致的内分泌失调症，进而导致人体里的糖、蛋白质、脂肪和水、电解质代谢紊乱。随着时间的延长容易并发全身性血管病变，严重威胁人体健康和生命安全。据报道，到目前为止全世界约有3亿人患有糖尿病，其中国内就有6千多万人。

当前，治疗糖尿病和高脂血症的药物不少，但大多数以降糖西药和控制饮食为主，必要时采用注射胰岛素。西药双胍类、黄酮类药物可控制血糖，尿糖升高以至达到正常。最近又推出中药制剂治疗糖尿病，有“中药活胰素”、“降糖胰复丹”、“降糖宁胶囊”、“糖复康胶囊”等用来降低血糖、尿糖等。

                        发明内容

本发明目的在于，研制的氨杞康制剂选用蚕蛹和名贵中药枸杞子为主要原料，经科学方法精制而成，该制剂富含包括人体八种必需氨基酸在内的二十多种氨基酸、微量元素、维生素以及延年益寿的生理活性物质。经过对118例糖尿病患者，100例高脂血症患者临床观察证明，该制剂具有迅速提高机体营养水平，增强免疫功能的作用，通过益肾养阴，润燥清热而达到降糖降脂的目的，主治肝肾不足、肺燥阴虚所致的疲乏无力，头昏头晕，食欲不振，适用于糖尿病，高血脂症。

本发明所述的氨杞康制剂，该制剂含有蚕蛹2-8份、枸杞子0.5-5份；其中该制剂的剂型为：口服固体剂型和液体剂型。

氨杞康制剂的制备方法，按下例步骤进行：

a、将蚕蛹水洗，磨碎，加水和中性蛋白酶，在温度40-60℃、酶解3-7小时，过滤，提取氨基酸，合并提取液，过滤，冷藏，备用；

b、将枸杞子加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎煮液，静止沉淀，过滤，减压浓缩至1∶1-1∶2冷却，加乙醇，使含醇量达55-70％，静置沉淀48小时，回收乙醇，备用；

c、将提取的蚕蛹液与提取的枸杞子液合并，搅匀，冷藏静置24小时，上清液过滤，加防腐剂、矫味剂，加蒸馏水，分装，流通蒸汽消毒，包装即可，或采用常规方法制成固体剂型。

氨杞康制剂作为制备治糖尿病和高血脂症的药物的用途。临床用于治疗糖尿病、高血脂症，对118例患者全部服用氨杞康口服液，一次10-20ml，每日3次；或一次2-4片，每日3次；1个月为一疗程，一般服用1-3个疗程，其治疗糖尿病的总有效率为89.1％。

本发明所述的氨杞康制剂的药理性能为：

蚕蛹出《纲目》曰：“为末饮，治小儿疳瘦，长肌，退热，除蛔虫，煎汁饮，止消渴。”《日华子本草》治风及劳瘦，又研敷蚕疽恶疮等，另据报道：蚕蛹可治疗高胆固醇血症。

枸杞子，我国传统医学对枸杞子的药理和临床研究资料较多，枸杞子的临床应用在我国传统医药学上已有千余年的历史，是中医常用的一种滋补肝肾，益精明目的药物，中国药典(一部)已作为法定药物收载。《本草经疏》曰：枸杞子润而滋补、兼能退热，专于补肾、润肺、生津、益气，为肝肾真阴不足，劳乏内热补益之要药。

《本草求真》曰：“枸杞甘寒性润，据书皆载祛风明目，强筋健骨，补精壮阳，然究因于肾水亏损，服此甘润，阴从阳长，水至风息，故能明目强筋，是明指为滋水之味，故能治消渴”。

蚕蛹含有多种化合物，其中蛋白质占总量的60％以上。蚕蛹经生化方法可以提取出氨基酸，氨基酸是人体细胞组织蛋白的组成成分，是合成生物酶、激素、免疫抗体的重要组成成分，本品是人体的重要营养物质，配以枸杞，柔润多液，味重而纯，能补阴，阴中有阳，能补气，所以滋阴而不致阴衰，助阳而能使阳旺。两药相和，能强筋骨，补精髓，并能起到降糖降脂及延缓衰老的特殊作用。

本发明所述的氨杞康制剂的药效学试验

氨杞康制剂是以蚕蛹和枸杞子制成的纯中药制剂，对该制剂药效学进行试验研究如下：

一、对正常小鼠血糖量的影响

材料NIH小鼠，新疆地方病研究所动物室提供。消渴丸，沈阳市达康制药厂出品。氨杞康制剂，新疆奇康制药厂研制。

方法与结果  选取NIH小鼠50只，体重21.2±1.1g，雌雄兼用。依体重均衡随机分为生理盐水对照组，消渴丸阳性对照组和3个不同剂量的氨杞康口服液组。灌胃给药，每天1次，连续10天，各组鼠摘取眼球取血，制取血清，查血糖。结果，消渴丸组和中、大剂量的氨杞康制剂有明显降低正常鼠血糖的作用(表1)。^*

           表1  氨杞康制剂对小鼠正常血糖的影响(X±SD)

组别	n	剂量(ml/kg.qb×10)	血糖量(mmol/L)
				对照组(NS)消渴丸组氨杞康制剂	1010101010	200.1g102030	5.43±0.803.02±1.60***5.37±0.71*4.32±0.97***4.18±0.90***

注：*P＞0.05，***P＜0.01均与对照组比较。

二、对正常小鼠血脂量的影响

材料  NIH小鼠、氨杞康制剂，来源同上。月见草油，西安中药厂出品。

办法与结果  选取健康NIH小鼠50只，体重20.5±2.1g，雌雄兼用。依体重均衡随机分为生理盐水对照组，月见草油阳性对照组和3个不同剂量的氨杞康制剂组。灌胃给药，每天1次，连续12天。于末次给药后1.5小时，各组鼠摘取眼球取血，制取血清，测定胆固醇和甘油三酯含量。结果，3个不同剂量的氨杞康制剂均有一定降低胆固醇和甘油三酯的作用。(表2)

             表2  氨杞康制剂对正常鼠血脂的影响(X±SD)

组别	N	剂量(ml/kg.qb×12)	胆固醇(mmol/L)	甘油三酯(mmol/L)
					对照组(NS)月见草油组氨杞康制剂	1010101010	200.3102030	2.43±0.042.00±0.09***2.01±0.09***1.91±0.48***1.82±0.61**	1.38±0.151.00±0.16***1.08±0.09***0.98±0.47**0.88±0.52***

注：***P＜0.05，***P＜0.01均与对照组比较

三、对小鼠脾空斑形成细胞溶血能力影响

材料  NIH纯种小鼠，新疆地方病研究所动物室提供。豚鼠，新疆医学院动物室供给。绵羊红细胞(SRBC)由新疆医学院动物室供血羊抽取。氨杞康制剂，新疆奇康制药厂研制。

方法和结果：取NIH小鼠50只，雌雄兼用，体重19.7±1.7g。依体重均衡随机分为对照组(NS)、环磷酰胺组和不同剂量的氨杞康制剂组。灌胃给药，每天1次，连用3天，每鼠IP5％SRBC0.2ml致敏，再给药4天，小鼠放血致死。按15mg脾重/mg制成脾细胞悬液。取此悬液0.2SRBC和1∶10的豚鼠血清各0.5ml，混匀，37℃温育1小时，3000×g离心5分钟，吸取上清液，以72-1型分光光度计测定样品的吸收率。结果，3个剂量的氨杞康制剂组均明显提高小鼠脾空斑形成细胞的溶血能力(表3)。

       表3  氨杞康制剂对小鼠脾空斑形成细胞溶血能力的影响(X±SD)

组别	n	剂量(ml/kg体重.qd×7)	吸收率
				对照组环磷酰胺组氨杞康制剂组	1010101010	2020mg/kg102030	0.71±0.0390.63±0.031***0.77±0.023***0.80±0.021***0.84±0.036***

注：***P＜0.01，与对照组比较

四、对小鼠SRBC诱导的血清溶血素产生的影响

材料NIH纯种小鼠，新疆地方病研究所动物室提供。豚鼠，新疆医学院动物室供给。绵羊红细胞(SRBC)由新疆医学院动物室供血羊抽取。氨杞康制剂，新疆奇康制药厂研制。环磷酰胺，上海第12制药厂产品。

方法和结果  取NIH小鼠50只，雌雄兼用，体重19.8±2.1g。依体重均衡随机分对照组(NS)、环磷酰胺组和不剂量的氨杞康制剂组。灌胃给药，每天1次，连用3天，每鼠IP3∶5(V/V)SRBC0.2ml，再给药4天，于未次给药后24小时，摘除眼眶取血制取血清。取1∶400稀释的血清样品，加豚鼠血清和SRBC，摇匀，37℃温育20分钟，以72-1型分光光度计测定样品的吸收率，再依“HC50＝(样品吸收率值/半数溶血时吸收率)×血清稀释倍数”公式计算样品的半数溶血值。结果，3个剂量的氨杞康制剂均可提高小鼠血清溶血素的含量，但仅中、大剂量组有显著差异(表4)。

        表4  氨杞康制剂对小鼠血清溶血素的影响(X±SD)

组别	n	剂量(ml/kg体重.qd×7)	HC50
				对照组(NS)环磷酰胺组氨杞康制剂组	1010101010	2020mg/kg103030	79.51±9.0351.67±4.78***81.13±10.56*92.18±9.61***120.19±19.13***

注：*P＞0.05，***P＜0.01均与阳性对照组比较

五、小鼠足跖迟发型超敏反应的影响

材料  NIH纯种小鼠，新疆地方病研究所动物室提供。绵羊红细胞(SRBC)由新疆医学院动物室供血羊抽取。氨杞康制剂，新疆奇康制药厂研制。环磷酰胺，上海第12制药厂产品。

方法和结果  取NIH小鼠50只，雌雄兼用，体重20.0±2.0g。依体重均衡随机分为对照组(NS)、环磷酰胺组和3个不同剂量的氨杞康口服液组。灌胃给药，每天1次，连用7天，首次给药后1小时，用10％SRBC0.5ml左后足跖SC免疫小鼠，7天后右后足跖同法同量攻击，以千分卡尺测量攻击前和攻击后24小右后足跖垫厚度，以其差值表示肿胀度。结果，3个剂量的氨杞康制剂均可明显提高小鼠的迟发型超敏反应(表5)。

    表5  氨杞康制剂对小鼠足跖迟发型超敏反应的影响(X±SD)

组别	n	剂量(ml/kg体重.qd×7)	足跖肿胀度(mm)
				对照组环磷酰胺组氨杞康制剂组	1010101010	2020mg/kg103030	0.23±0.050.15±0.04***0.31±0.07**0.45±0.08***0.53±0.13***

注：***P＜0.05，***P＜0.01，均与对照组比较

六、对[³H]TDR参入的人外周全血T淋巴细胞转化功能的影响

材料：人外周全血，采自本试验室6位志愿献血者，年龄30-58岁，4男(刘发、杨永新、周康、阿斯海)2女(程瑞芬、阿斯亚)。RPMI-1640培养基，美国Life Te-chnologies Inc产品；HEPES，德国E.Merck产品；植物血凝素(PHA)，美国Difco Lab产品；[³H]TDR740GBq/mmol，中国原子能科学研究院出品；新生牛血清，新疆种牛场产品，用前56℃灭活30分钟；G-49型玻璃纤维滤膜，上海红光造纸厂出品。氨杞康制剂，新疆奇康制药厂研制。

方法与结果：在无菌条件下，96孔培养板每孔总量为0.2ml的1640培养液，内含新生牛血清15％，PHA1.25mg/m1，HEPES20mmol/L，青链霉素100u/ml，加人全血0.1ml和口服液容量0.01ml(实加量分别为1ml，3ml，10ml)。分为阴性对照组、阳性对照组(加PHA)和3个不同浓度的口服液组。37℃二氧化碳孵箱中培养48小时后，每孔加[³H]TDR37KBq，继续培养8小时，用多头细胞收集器将各孔样品收集于49型玻璃纤维滤膜上，以LKB-1217型液体闪烁计数器测定各样品的dpm值。并按“实验孔dpm均值/阴性对照组dpm均值)”式计算刺激指数(SI)。结果，3个剂量的氨杞康口服液均显著促进人外周全血T淋巴细胞的增值(表6)。

       表6  氨杞康制剂对人外周全血T淋巴细胞转化的影响(X±SD)。

组别	n	PHA(mg/ml)	剂量(mg/ml)	Dpm	SI
						阴性对照组阳性对照组氨杞康制剂组	66666	-1.251.251.251.25	--0.0010.0030.01	1019.10±113.43**1025.09±592.2913382.90±2835.59**17114.65±801.13***20994.41±1905.40***	10.3613.2117.0320.94

注：**P＜0.05，***P＜0.01均与阳性对照组比较。

七、对[³H]TDR参入的人外周全血白细胞吞噬功能的影响

材料  人外周全血、RPMI-1640培养基、G-49型纤维滤膜、[³H]TDR来源同上。葡萄球菌，新疆医学院微生物教研室提供。氨杞康制剂，来源同上。

方法与结果：采用改良的[³H]TDR参入法，在0.3ml1640培养液中加入人外周血0.1ml、葡萄球菌液0.1ml＝620nm和2个不同剂量的氨杞康口服液(容积均为0.1ml)，混匀，37℃温育1小时，每管加入[³H]TDR37KBq，同样条件再培养1小时，以滤膜法测定dpm值。结果，不同剂量的口服液可明显提高人外周血细胞对葡萄球菌的吞噬作用，人血组dpm值明显高于生理盐水对照组，说明外周血白细胞吞噬葡萄球菌作用很强。(表7)。

     表7  对人外周血白细胞吞噬功能的影响(X±SD)

组别	n	剂量(mg/ml)	DPM
				无血组生理盐水组环磷酰胺组氨杞康制剂组	66666	--20g/ml0.010.03	5993±429***2694±1876231±893***1803±719***913±237***

注：**P＜0.01均与生理盐水组比较。

小结：根据上述药理试验，证明氨杞康制剂有下述药理作用：

(1)、可明显降低正常鼠血糖P＜0.01；

(2)、可使小鼠胆固醇和甘油三酯降低；

(3)、提高鼠脾空斑形成细胞的溶血能力；

(4)使小鼠血清溶血素产生增多；

(5)促进SRBC诱导的小鼠足跖迟发型超敏反应；

(6)促进人外周全血T淋巴细胞的增殖；

(7)提高人外周全血白细胞的吞噬功能；

氨杞康制剂对正常小鼠有降低血糖，降低胆固醇和甘油三酯作用，对人和小鼠的细胞免疫、体液免疫和非特异免疫功能均有促进作用。

本发明所述氨杞康口服液急性毒性和蓄积性毒性测定试验

氨杞康口服液是由蚕蛹和枸杞制成的纯天然制剂，为了解本制剂的毒性大小，特测定其急性毒性和蓄积性毒性。

材料：昆明种小鼠，新疆医学室动物室提供。氨杞康口服液，新疆奇康制药厂，批号940901。

方法与结果：

2、急性毒性(LD50)的测定

应该用序贯法找出本口服液的最大全不致死量和最小全致死量。但在小鼠最大允许灌胃容量范围内，未见死亡，故试验只能按下述方法进行。

选取健康小鼠30只，雌雄各半，体重22.5±0.5g，灌胃给药，0.4ml/10g，连续2次，每次间隔2小时，即总灌胃为0.8ml/10g。给药后记录小鼠死亡数，连续7天观察动物活动与精神状态。

结果30只小鼠无一死亡，活动与精神状态无异常。实验结束时，小鼠平均体重为24.3±2.1g。故本口服液的LD50＞80ml/kg。

2、蓄积性毒性测定

采用毒物蓄积系数法，动物按体重灌胃给药，剂量按期递增，一般剂量可从LD50的0.1倍开始，以后每4天剂量递增1.5倍至出现一半动物死亡时停止实验，最后用蓄积系数查出蓄积毒性分级情况。

选取小鼠30只，雌雄各半，体重20.2±1.7g，灌胃给药，每天1次，剂量见下表。由于灌胃的限制，给药只进行12天。

结果  连续递增的12天给药期间，30只小鼠无一死亡，精神状态和进食量无异常。实验结束时，小鼠平均体重为23.8±2.2g。每鼠12天累积药量为3.8ml/10g，即380ml/kg，为LD50＞80ml/kg的4.75倍。

结论与讨论：

由于小鼠灌胃给药容量的限制，仅测得氨杞康口服液小鼠口服的LD50＞80ml/kg。在蓄积毒性实验中，小鼠累积给药达380ml/kg均无死亡，也未出现精神与活动状态异常，体重增加类似正常小鼠，表明本制剂无任何毒性。本制剂成人每次口服1支(10ml)，为估计LD50的1/8，若按体重计算成人每次0.17ml/kg，LD50＞80ml/kg为其470倍，提示用药非常安全。

本发明对糖尿病及高脂血症的临床应用观察：按世界卫生组织(WHO)关于糖尿病的诊断标准，并以疲乏无力、肢体酸软、口干口渴、尿多而混浊、食欲不振、头昏头晕、形体消瘦等，应用氨杞康制剂，观察了118例糖尿病患者，除症状外，主要以空腹血糖、空腹尿糖、24小时尿糖定量、血脂作为客观指标。研究表明，使用该药后症状明显改善，症状总有效率为89.1％，空腹血糖总有效率88.9％，空腹尿糖总有效率89.3％，24小时尿糖定量总有效率为87.9％，统计学处理有显著性差异。同时，本制剂还有较好的降血脂作用，随着血糖下降，血脂也有改善，一个疗程后TC、TG均明显下降，与治疗前比较，差异非常显著(P＜0.01＝，与对照组比较也有显著差异(P＜0.01～0.05＝，该药治疗期间未见不良反应。临床研究结果表明，氨杞康制剂对糖尿病及高脂血症是有效的。

                    具体实施方式

实施例1

将2份蚕蛹水洗，磨碎，加水和中性蛋白酶，在温度40℃、酶解3小时，过滤，提取氨基酸，合并提取液，过滤，冷藏，备用；

将0.5份枸杞子加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎煮液，静止沉淀，过滤，减压浓缩至1∶1冷却，加乙醇，使含醇量达55％，静置沉淀48小时，回收乙醇，备用；

将提取的蚕蛹液与提取的枸杞子液合并，搅匀，冷藏静置24小时，上清液过滤，加防腐剂、矫味剂，加蒸馏水，分装，流通蒸汽消毒，包装即可。

本制剂口服，一次10～20ml，一日3次，1个月为一疗程，一般服用1-3个疗程，如有少量沉淀，可摇匀后服用。

实施例2

将6份蚕蛹水洗，磨碎，加水和中性蛋白酶，在温度50℃、酶解5小时，过滤，提取氨基酸，合并提取液，过滤，冷藏，备用；

将3份枸杞子加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎煮液，静止沉淀，过滤，减压浓缩至1∶2冷却，加乙醇，使含醇量达60％，静置沉淀48小时，回收乙醇，备用；

将提取的蚕蛹液与提取的枸杞子液合并，搅匀，冷藏静置24小时，上清液过滤，加防腐剂、矫味剂，加蒸馏水，分装，流通蒸汽消毒，采用常规方法制成固体剂型(包括：片剂或粉剂或丸剂或胶囊或颗粒或泡腾片)即可；口服，一次2-4片，一日3次。

实施例3

将8份蚕蛹水洗，磨碎，加水和中性蛋白酶，在温度60℃、酶解7小时，过滤，提取氨基酸，合并提取液，过滤，冷藏，备用；

将5份枸杞子加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎煮液，静止沉淀，过滤，减压浓缩至1∶1冷却，加乙醇，使含醇量达70％，静置沉淀48小时，回收乙醇，备用；

将提取的蚕蛹液与提取的枸杞子液合并，搅匀，冷藏静置24小时，上清液过滤，加防腐剂、矫味剂，加蒸馏水，分装，流通蒸汽消毒，包装即可。

本制剂口服，一次10～20ml，一日3次，1个月为一疗程，一般服用1-3个疗程，如有少量沉淀，可摇匀后服用。

Claims (3)

1、一种氨杞制剂的制备方法，其特征在于该制剂是由蚕蛹2-8份、枸杞子0.5-5份制成，按下列步骤进行：

a、将蚕蛹水洗，磨碎，加水和中性蛋白酶，在温度40-60℃、酶解3-7小时，过滤，提取氨基酸，合并提取液，过滤，冷藏，备用；

b、将枸杞子加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎煮液，静止沉淀，过滤，减压浓缩至1∶1-1∶2冷却，加乙醇，使含醇量达55-70％，静置沉淀48小时，回收乙醇，备用；

c、将提取的蚕蛹液与提取的枸杞子液合并，搅匀，冷藏静置24小时，上清液过滤，加防腐剂、矫味剂，加蒸馏水，分装，流通蒸汽消毒，包装成口服液体剂型，或采用常规方法制成口服固体剂型即可。

2、根据权利要求1所述的制备方法制成的氨杞制剂。

3、根据权利要求2所述的氨杞制剂作为制备治糖尿病和高血脂症的药物中的用途。