CN113813454B - 一种采集器官捐献供体血液的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种采集器官捐献供体血液的方法，它包括如下步骤：1)取灌注管置入器官捐献供体的腹主动脉和门静脉，再从腹主动脉的置管平面另置入灌注管至下腔静脉，最后将各灌注管与自体血回收机连接；2)取抗凝剂冲洗步骤1)所述自体血回收机的储血罐和管道，再采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降；3)取步骤2)所得血液，离心，洗涤，再于血液保存液III中保存。本发明在保证移植器官功能不受影响的情况下，通过自体血回收机安全完成供体红细胞悬液的采集，将得到的供体红细胞悬液输注给受体，能够起到部分替代异基因红细胞悬液的作用，并且能够有效避免输血并发症的发生。

Description

一种采集器官捐献供体血液的方法

技术领域

本发明具体涉及一种采集器官捐献供体血液的方法。

背景技术

由于无偿献血的公民减少，各地的医疗机构都面临着血液供应危机的严峻挑战，又因为接受肝移植手术的患者皆为终末期肝病患者，其凝血功能较差，并且手术复杂，往往需要充足的血液供应作为保障，否则患者将面临较大的风险。因此，为了避免本已稀缺的器官资源浪费，探索出一种能够缓解血液供应危机的方法势在必行。

目前，由于获取器官捐献供体肝肾器官时，缺乏一套规范采集器官捐献供体血液回收利用技术， 导致了宝贵血液资源的浪费，也使器官捐献受体面临无充足，安全血液补给的风险，最终影响受体患者的存活率。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种采集器官捐献供体血液的方法，它是在获取脑死亡和/或心脏死亡的器官捐献供体的器官时采集血液，具体包括如下步骤：

1）取灌注管置入器官捐献供体的腹主动脉和门静脉，再沿腹主动脉上的置管平面另置入灌注管至下腔静脉，最后将各灌注管与自体血回收机连接；

2）取抗凝剂冲洗步骤1）所述自体血回收机的储血罐和管道，再采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降；

3）取步骤2）所得血液，离心，洗涤，再于血液保存液III中保存。

进一步地，步骤2）所述冲洗时抗凝剂的用量为500~1000ml，优选500ml。

进一步地，所述抗凝剂为含肝素的生理盐水；所述含肝素的生理盐水浓度为25000U肝素/500ml生理盐水。

进一步地，步骤3）所述离心是用自体血回收机离心，速度5600rpm，离心至游离血红蛋白、白细胞、血浆、血小板、抗凝液被除去。

进一步地，步骤3）所述洗涤是用林格氏液洗涤；所述林格氏液与离心完的红细胞的体积比为3~5：1，优选4：1。

进一步地，步骤3）所述保存的温度为2~8℃，优选4℃，保存期间每30分钟摇晃一次。

进一步地，所述采集器官捐献供体血液时收缩压维持在70mmhg以上。

更进一步地，所述器官捐献供体捐献的是肝脏和/或肾脏。

本发明还提供了一种同时获取脑死亡和/或心脏死亡的器官捐献供体血液和器官的方法，它包括如下步骤：

a、按前述方法采集供体血液；

b、在采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降时，立即冷灌注，并在肝周、腹腔、右胸腔内放入碎冰；

c、冷灌注至灌洗液清亮，获取器官。

进一步地，所述冷灌注是近右心房剪断肝上下腔静脉，再分别经腹主动脉和门静脉灌注管灌注2~8℃HTK液，优选4℃HTK液；所述HTK液的灌注压力为80~120mmHg，优选100mmHg。

本发明采集器官捐献供体血液的方法，在保证移植器官功能不受影响的情况下，通过自体血回收机安全完成供体红细胞悬液的采集，将得到的供体红细胞悬液输注给受体，即采用供体特异性红细胞输血（Donor-specific Red Blood Cell Transfusion，DRBCST）。在紧急情况，DRBCT能够起到部分替代异基因红细胞悬液的作用，并且由于大多数接受肝移植患者都符合输血原则，这样也能够有效避免输血并发症的发生。因此，将DRBCT应用于DDLT，能够保证在血液供应不足情况下肝移植和/或肾脏移植手术能够正常开展，避免发生因血液供应不足而丢弃供肝或供肾。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1肝脏获取过程中的血液采集模式图

具体实施方式

实施例1 本发明采集器官捐献供体血液

1）取灌注管分别置入捐献器官的脑死亡患者的腹主动脉和门静脉，再沿腹主动脉的置管平面另置入灌注管至下腔静脉，最后将各灌注管与自体血回收机连接；

2）取抗凝剂25000U肝素/500ml生理盐水，冲洗步骤1）所述自体血回收机的储血罐和管道，再采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降（采血时收缩压维持在70mmhg以上）；

3）完成血液采集后，利用自体血回收机离心，速度5600rpm离心，去除游离的血红蛋白、白细胞、血浆、血小板、抗凝液后，将红细胞每250ml用1000ml林格氏液进行洗涤，最后将得到的红细胞转移至血液保存液III中保存于4℃环境，每30分钟摇晃一次。

以下通过试验例来说明本发明的有益效果。

试验例1本发明供体血液采集、处理、保存过程研究

一、研究方法

通过比较同一时期术中接受DRBCT（供体特异性红细胞输血）或仅接受异基因输血（血库库存血）的肝移植受体的短期临床结果来评估DRBCT应用于DDLT（公民逝世后器官捐献肝移植）的安全性和有效性。本项研究获得四川大学华西医院伦理委员会批准，并在中国临床实验中心注册（ChiCTR2000041375），符合《赫尔辛基宣言》中的伦理准则。本研究均获得每位器官捐献者家属和受体的书面知情同意书。

1、供体纳入标准：

所有器官捐献者均被定义为中国I类供体。对于所有捐献者均完成其社会史以及医疗史筛查，具体包括居住史、旅行史、冶游史、环境暴露史、既往感染史以及药物滥用史等。在供肝获取之前，我们还针对供体血液标本、尿液标本、痰液标本完成细菌、真菌培养以及采集供体血液标本进行宏基因二代测序（Metagenomic next-generation sequencing，mNGS）以检测任何潜在的感染。除此之外，我们还进行了巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）、乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）、丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）、梅毒、人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）血清学抗体检测和CMV、HBV、HCV、HIV的核酸分子检测。在符合以下标准的器官捐献者进行血液采集：

①捐献者年龄大于18岁。

②供体家属同意血液捐献。

③捐献者只进行肝脏和肾脏捐献。

④捐献者血液培养结果为阴性。

⑤捐献者痰培养阴性或者供体痰培养阳性但是临床表现、实验室检查、影像学检查均无感染存在的证据（阳性菌为多重耐药菌除外）。

⑥捐献者CMV-DNA结果为阴性。

⑦捐献无输血传播的感染，包括HIV、HBV、HCV和梅毒感染。

⑧供体血液标本的mNGS检查未发现细菌、真菌、病毒、寄生虫的感染。

⑨捐献者重症监护病房（Intensive care unit，ICU）住院时长不超过7天。

2、受体纳入排除标准

疫情期间于四川大学华西医院接受DDLT的所有成年患者纳入此项研究，但是排除接受非常规肝移植的受体，包括ABO血型不合肝移植、再次肝移植、劈离式肝移植、多器官联合移植等。除此之外，术前1周内存在感染迹象的受体也被排除在本研究之外。

3、DRBCT进行标准

供受体在符合以上纳入排除标准情况下，满足如下要求则进行DRBCT：

①血库血液资源紧张。

②供体受体血液交叉配型试验阴性。

③根据指南规定，基于供受体的CMV血清学状态（D/R），受体为CMV感染的低风险（D-/R-） 或中风险（D±/R+）。

④受体术中血红蛋白低于70g/L或术中大量出血超过1000ml或术中出现由于出血引起的血流动力学不稳定。

4、供体血液采集、处理、保存过程

本发明所有血液采集是在器官获取时进行。如图1所示，首先将器官捐献者取仰卧位，消毒铺巾，监测血压、心率、呼吸；腹部行大“十字”切口，靠近髂总动脉分叉处结扎腹主动脉远端，髂总动脉分叉处上方约2cm腹主动脉近端安置灌注管；寻找肠系膜上静脉主干，并远端结扎，近端剪开插入门静脉灌注管，完成腹主动脉以及门静脉灌注管置入。然后于腹主动脉置管平面进行下腔静脉置管，再与自体血回收机（P3000，北京京精医疗设备有限公司）相连接，快速地采集供体血液。在血液采集之前用抗凝剂（25000U肝素/500ml生理盐水）对储血罐以及管道进行预冲洗500ml。整个采集过程持续到供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降，然后立刻进入冷灌注流程（即近右心房水平剪断肝上下腔静脉，经腹主动脉及门静脉灌注管行4℃ HTK液灌注。快速在肝周围、腹腔、右胸腔内放入碎冰，使肝脏快速降温。根据经验，HTK灌注液的灌洗压力为100mmHg。流出的灌洗液清亮后或者经腹主动脉灌洗2 000ml HTK液，经门静脉灌注1 000ml的HTK液后停止灌注）。冷灌注是保证器官移植后移植器官功能恢复的关键，保证移植器官功能不受影响的情况下，安全采集供体血液，在采集过程中需要密切监测血压及血氧饱和度，防止供体出现低血压以及重要器官灌注不足，必要时将采取补液等维护措施，但是禁止增大升压药使用剂量。我们尽可能地在3分钟之内完成血液采集，且维持供体收缩压在70mmhg以上。

完成血液采集后，利用自体血回收系统进行5600rpm离心，尽可能地去除游离的血红蛋白、白细胞、血浆、血小板、抗凝液等物质。将离心完的红细胞每250ml用1000ml林格氏液进行洗涤。最后将得到的红细胞转移至血液保存液III中保存于4℃环境，每30分钟摇晃一次。

在受体术中如果存在输血指征则进行供体特异性红细胞输血DRBCT，且利用白细胞过滤器（FTS-RC102，南京双威生物医学科技有限公司）对血液中的白细胞和杂质等进行进一步的过滤。

5、交叉配血试验步骤

①取两支干净试管，分为主侧管和次侧管。然后准备凝聚胺介质试剂（珠海贝索生物技术有限公司）。

②将患者的2滴血浆以及捐献者的1滴3%-5%红细胞悬液加入主侧管中；将捐献者的2滴血浆以及患者的1滴3%-5%红细胞悬液加入次侧管中。

③分别向主侧管和次侧管内加入0.65ml低离子溶液（Low ionic medium），摇晃试管使其混合均匀。

④分别向主侧管和次侧管内加入2滴凝聚胺溶液（Polybrene reagent），摇晃试管使其混合均匀。

⑤使用离心机进行3400rpm离心10秒钟后去掉上清液。

⑥轻轻摇晃主侧管和次侧管，观察红细胞有无凝集。如果没有出现凝集反应则重复上述步骤。

⑦分别向主侧管和次侧管内加入2滴悬浮液（Resuspending），摇晃试管使其混合均匀。如果60秒内凝集散开，则说明凝集是由凝聚胺溶液引起的，配血结果为相合。如果60秒内凝集不散开，说明凝集是由红细胞抗原抗体特异性结合所引起的，配血结果为不相合。如果结果可疑，需要在显微镜下进一步进行观察。主侧管和次侧管的结果均为相合才能进行DRBCT。

6、经自体血回收机处理后血液质量分析

每次完成供体血液采集、离心、洗涤等操作后，抽取2ml供体血液通过血气分析仪（cobas b 123全自动血气分析仪，罗氏公司）进行血液质量分析。后又随机对100袋库存异基因红细胞悬液进行血气分析。并对两组血液的PH值、钾离子浓度、钠离子浓度、氯离子浓度、乳酸含量进行比较分析，以评估自体血回收机处理后血液的质量。

7、 观察结局

所有患者均接受至少30天的术后随访。

主要终点是移植术后30天内感染并发症的发生。对两组中任何感染（细菌、真菌和病毒）的发生、严重程度和时间进行详细记录。感染是根据美国移植学会所提出的标准来进行定义。

次要终点包括其他输血相关并发症、30天患者生存率和移植物生存率、术后总胆红素（Total bilirubin，TB）、术后谷氨酸-丙酮酸转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、术后碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、术后天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransferase，AST）、术后谷氨酰转移酶（Gamma-glutamyl transferase，GGT）、术后乳酸脱氢酶（Lactic dehydrogenase，LDH）、术后国际标准化比值（International normalized ratio，INR）、术后肌酐（Creatinine，CREA）和受者术后t淋巴细胞亚群的变化。对于输血相关并发症的定义在相关综述中已得到描述。

二、临床应用

1、方法：

在2020年5月-2020年11月期间，按照上述研究方法将接受DRBCT的受体纳入DRBCT组，并将其临床特征与只接受来自血库的异基因型红细胞悬液的受体进行比较，以评估DRBCT的安全性与有效性。

2、结果：

本项研究共纳入患者56名，其中DRBCT组患者23名，异基因型红细胞悬液的对照组患者33名。DRBCT组患者未观察到输血相关并发症的发生，且术后1个月内感染发生率与对照组相似（21.7% vs 18.1%，P=1.000）。DRBCT组患者因输入供体来源红细胞的因素，术中来自血库的异基因红细胞悬液输注量的中位数为4U （0-8U，IQR），而对照组为7U （4-10U，IQR），差异有统计学意义（P =0.034）。除此之外，DRBCT组的术后早期天门冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）峰值水平显著低于对照组（P =0.031），并且术后前2天的AST水平同样显著低于对照组（P =0.019，P =0.045）。

3、结论：

DRBCT应用于DDLT是一种可以缓解血液供应不足情况下的安全有效措施，并且能够在一定程度上降低患者肝移植术后AST水平，为终末期肝病的患者进行挽救生命的移植手术提供安全保障。

综上，本发明采集器官捐献供体血液的方法，通过自体血回收机完成供体红细胞悬液的制备，将DRBCT应用于DDLT，能够保证在血液供应不足情况下肝移植和/或肾脏移植手术能够正常开展，避免发生因血液供应不足而丢弃供肝或供肾。

Claims (11)

1.一种采集器官捐献供体血液的方法，其特征在于：它是在获取脑死亡和/或心脏死亡的器官捐献供体的器官时采集血液，具体包括如下步骤：

1）取灌注管分别置入器官捐献供体的腹主动脉和门静脉，再沿腹主动脉的置管平面另置入灌注管至下腔静脉，最后将各灌注管与自体血回收机连接；

2）取500~1000ml抗凝剂冲洗步骤1）所述自体血回收机的储血罐和管道，再采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降；

3）取步骤2）所得血液，离心，用林格氏液洗涤，再于血液保存液III中2~8℃保存; 所述林格氏液与离心完的红细胞的体积比为3~5：1。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤2）所述冲洗时抗凝剂的用量为500ml。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述抗凝剂为含肝素的生理盐水；所述含肝素的生理盐水浓度为25000U肝素/500ml生理盐水。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤3）所述离心是用自体血回收机离心，速度5600rpm，离心至游离血红蛋白、白细胞、血浆、血小板、抗凝液被除去。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤3）所述林格氏液与离心完的红细胞的体积比为4：1。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤3）所述保存的温度为4℃，保存期间每30分钟摇晃一次。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述采集器官捐献供体血液时收缩压维持在70mmhg以上。

8.根据权利要求1~7任意一项所述方法，其特征在于：所述器官捐献供体捐献的是肝脏和/或肾脏。

9.一种同时获取脑死亡和/或心脏死亡的器官捐献供体血液和器官的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a、按权利要求1~7任意一项所述方法采集供体血液；

b、在采集供体血液至供体出现血流动力学不稳定或者血氧饱和度下降时，立即冷灌注，并在肝周、腹腔、右胸腔内放入碎冰；

c、在冷灌注至灌洗液清亮，获取器官。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于：所述冷灌注是近右心房剪断肝上下腔静脉，再分别经腹主动脉和门静脉灌注管灌注2~8℃HTK液；所述HTK液的灌注压力为80~120mmHg。

11.根据权利要求10所述方法，其特征在于：所述HTK液温度为4℃；所述HTK液的灌注压力为100mmHg。

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