[go: up one dir, main page]

CN113817776A - Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途 - Google Patents

Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113817776A
CN113817776A CN202111242140.6A CN202111242140A CN113817776A CN 113817776 A CN113817776 A CN 113817776A CN 202111242140 A CN202111242140 A CN 202111242140A CN 113817776 A CN113817776 A CN 113817776A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gbp2
mesenchymal stem
preparation
differentiation
huc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111242140.6A
Other languages
English (en)
Inventor
张毅
白海涛
刘伟江
袁福临
刘元林
李雪
王洋
疏梦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Original Assignee
Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA filed Critical Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Priority to CN202111242140.6A priority Critical patent/CN113817776A/zh
Publication of CN113817776A publication Critical patent/CN113817776A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y306/00—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6)
    • C12Y306/05—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6) acting on GTP; involved in cellular and subcellular movement (3.6.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种调控间充质干细胞成骨分化的制剂，所述制剂以GBP2抑制剂或促进剂为活性成分；并公开了所述制剂在制备调控间充质干细胞成骨分化的产品中的应用。本发明通过构建稳定过表达GBP2的hUC‑MSC，研究其生物学特性，发现与正常的MSC相比，GBP2highhUC‑MSC成骨分化功能受到影响，说明GBP2可有效调控hUC‑MSC的成骨分化功能，这一发现有助于更清楚的了解hUC‑MSC的成骨分化，为临床治疗骨质疏松症起到指导作用。

Description

GBP2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及GBP2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)是一种来源于中胚层的具有多项分化潜能和自我更新能力的成体干细胞。MSC来源十分广泛可以从脐带、骨髓、脂肪、胎盘等多种组织分离到，在不同培养条件下可以向脂肪、成骨、成软骨细胞分化。
MSC是脂肪细胞和成骨细胞的共同祖细胞，可以调控成脂分化和成骨分化的平衡，维持骨稳态。研究表明，间充质干细胞增殖分化的改变(成脂分化增加，成骨分化减少)是导致骨质疏松的主要原因之一。因此，揭示间充质干细胞向成骨细胞分化的分子机制将有助于进一步了解间充质干细胞，并可能为骨质疏松症的治疗提供新的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种调控间充质干细胞成骨分化的制剂及其应用。
为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
本发明利用了GBP2过表达的慢病毒，构建了稳定过表达GBP2的间充质干细胞GBP2highhUC-MSC，探究其生物学特性，发现GBP2highhUC-MSC成骨分化能力显著高于正常MSC。碱磷酶(ALP)染色的方法证实，GBP2highhUC-MSC染色面积明显多于正常MSC。q-PCR的方法证实，成骨相关基因ALP、OPN表达显著增加。上述表明，GBP2可以影响人脐带来源MSC的成骨分化。
基于此，本发明第一方面提供了一种调控间充质干细胞成骨分化的制剂，所述制剂以GBP2抑制剂或促进剂为活性成分。
优选地，所述间充质干细胞包括人脐带来源的间充质干细胞。
本发明中，GBP2是γ干扰素(IFN-γ)诱导的鸟苷酸结合蛋白(GBP)家族的一员，它编码的蛋白是一种GTP酶可以将GTP水解成GDP。GBP2主要存在于高尔基体膜上，也可以作为分泌蛋白被分泌到胞外区域。
进一步地，所述GBP2促进剂包括促进GBP2表达或活性功能的试剂。
进一步地，所述促进GBP2表达的试剂为含有GBP2基因的表达载体。
进一步地，所述载体包括慢病毒载体。
第二方面，本发明提供了所述的制剂在制备调控间充质干细胞成骨分化的产品中的应用。
优选的，所述制剂通过过表达GBP2基因使得成骨细胞分化相关标志物表达明显上调，从而促进MSC成骨分化能力。
优选的，所述成骨细胞分化相关标志物包括成骨细胞分化成熟的早期标志物ALP和晚期标志物OPN。
第三方面，本发明提供了所述的制剂在制备治疗骨质疏松症的药物中的应用。
第四方面，本发明提供了一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，包括如下步骤：
1)获取间充质干细胞，进行培养；
2)构建过表达GBP2载体；
3)将构建的过表达GBP2载体转染至间充质干细胞，然后培养。
所述转染具体步骤：将生长状态良好的hUC-MSC接种到6孔板中，待细胞贴壁状态良好，细胞换液并分别加入慢病毒(MOI＝10)和/或感染增强液进行转染；优选的，感染增强液包括感染增强液A(HiTransA)。
所述构建过表达GBP2载体的方法为本领域技术人员熟知的方法。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：本发明通过构建稳定过表达GBP2的hUC-MSC，研究其生物学特性，发现与正常的MSC相比，GBP2highhUC-MSC形态和表型没有发生变化，但成骨分化功能受到影响，说明GBP2可有效调控hUC-MSC的成骨分化功能，这一发现有助于更清楚的了解hUC-MSC的成骨分化，为临床治疗骨质疏松症起到指导作用。
附图说明
图1A：倒置显微镜下观察hUC-MSC细胞形态；图1B,C：Giemsa染色后细胞形态，其中图B为4倍镜下观察，图C为10倍镜下观察；图1D：流式细胞术检测结果；图1E,F：油红O染色检测成脂分化的结果，hUC-MSC成脂的自分化组(E)和诱导组(F)；图1G,H：ALP染色检测成骨分化的结果，hUC-MSC成骨的自分化组(G)和诱导组(H)；图1I,J：q-PCR检测成脂分化相关基因PPAR-γ、ADI(I)，成骨诱导相关基因ALP、OPN(J)的表达。注，自分化组(Control)，诱导组(Induced)。
图2A-C：荧光显微镜观察慢病毒载体转染之后GFP的表达(图2A：没有加增强液，图2B：加A增强液，图2C：加P增强液)，GFP为绿色荧光显微镜下观察呈绿色呈现绿色表明转染成功；图2D,E：流式细胞术检测慢病毒转染效率(GFP通道表达效率)及统计结果；图2F：q-PCR检测GBP2基因mRNA水平的表达。
图3A,B：Giemsa检测GBP2过表达MSC形态，其中图A为显微镜下观察GBP2过表达MSC形态，图B为Giemsa染色后镜下观察形态；图3C：qPCR检测GBP2过表达程度；图3D：流式细胞术检测GBP2过表达MSC表型；图3E，F：油红O对GBP2highhUC-MSC成脂的自分化组(E)和诱导组(F)进行染色，并在显微镜下观察；图3G,H:ALP对GBP2highhUC-MSC成骨的自分化组(G)和成骨诱导组(H)进行染色；图3I,J:q-PCR检测成脂分化的标志基因ADI、PPAR-γ(I)成骨分化标志基因OPN、ALP(J)的表达。
图4A～D.ALP染色分析NC组和GBP2highhUC-MSC组的碱性磷酸酶活性；图4E.imageJ分析NC诱导组和GBP2highMSC诱导组中ALP染色面积。
图5A,B.q-PCR检测NC诱导组和GBP2highhUC-MSC诱导组中成骨标志基因ALP、OPN的相对表达。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所有的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1人脐带来源MSC培养与鉴定
首先按照常规方法从人脐带组织分离获取原代人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)培养后，接种到完全培养基中培养P1代hUC-MSC。冻存用于后续实验。取出一支冻存的hUC-MSC，置于37℃温水中快速解冻，加入含10％FBS的α-MEM中重悬1000rpm离心，离心结束后弃上清，用α-MEM完全培养基重悬细胞并接种到T75细胞培养瓶，置于含5％CO2的37℃恒温培养箱。之后每隔2天进行用0.25％胰蛋白酶消化进行传代。倒置显微镜(图1A)和Giemsa染色(图1B、C)观察细胞形态，结果显示hUC-MSC在贴壁条件下呈长梭型，且呈涡旋状生长。取部分细胞避光孵育流式抗体(APC-CD14、APC-CD34、APC-CD45、PE-CD73、PE-CD90、PE-CD105)检测hUC-MSC表面抗原表达，发现hUC-MSC表面标志物CD73、CD90、CD105高表达(>95％)，CD14、CD34、CD45低表达(<2％)(图1D)。
取另一部分细胞进行成脂成骨诱导分化，成脂分化诱导体系为：地塞米松1×10- 6mol/l，IBMX5×10-4mol/l，胰岛素1×10-5ng/l和吲哚美辛5×10-4mol/l；成骨诱导分化体系为：地塞米松1×10-7mol/l，β-磷酸甘油1×10-2mol/l和维生素C磷酸盐5×10-5mol/l以上均购自美国Sigma公司。成脂分化及成骨分化细胞每隔两天进行换液，培养两周左右，成脂分化细胞进行油红O染色，q-PCR检测成脂分化关键转录因子PPAR-γ、ADI表达。碱性磷酸酶对成骨分化细胞进行染色，q-PCR检测成骨关键转录因子OPN、ALP表达。
油红O染色显示，自分化组未出现脂滴，诱导组出现明显红色脂滴(图1E,F)；ALP染色显示，诱导组碱磷酶活性显著增加(图1G,F)；q-PCR检测显示，诱导组成脂成骨相关基因表达明显高于自分化组(图1I,J)。
实施例2构建稳定过表达GBP2的hUC-MSC
利用常规方法构建慢病毒过表达载体，所用GV492载体，BamHI/AgeI酶切，购自上海吉凯基因化学技术有限公司，增强液属于慢病毒载体的配套试剂，实验按照试剂说明书进行操作。
将生长状态良好的hUC-MSC接种到6孔板中，分为4组：MSC组(未转染过表达GBP2的慢病毒)、单独的过表达GBP2的慢病毒转染组(V)、V+P感染增强液组、V+A感染增强液组，每组设置3个复孔接种细胞量为1×105/孔，第二天待细胞贴壁状态良好，细胞换液并分别加入慢病毒(MOI＝10)和感染增强液P(HiTransP)(REVG005，吉凯基因)和感染增强液A(HiTransA)(REVG005，吉凯基因)进行转染。37℃培养12h加入1ml完全培养基，24h更换完全培养基，转染第三天换液并加入嘌呤霉素(Puromycin)(2μg/ml)，筛选转染的细胞。待细胞长满6孔板，传代至T75培养瓶继续培养，培养至一定时间荧光显微镜下观察转染效率即GFP荧光表达(图2A-C)；收取部分细胞进行流式细胞术检测GFP表达，表明A增强液增强效果优于P增强液(图2D,E)。q-PCR检测GBP2基因表达，A和P增强液均能明显增强GBP2表达(2F)。根据结果选择转染效率更高的A增强液作为最佳感染条件。
综上，发现感染增强液A处理组转染效率明显高于转染增强液P。所述目的基因片段的获取引物见表1及重组质粒构建鉴定引物见表2。
表1目的基因片段的获取引物
Figure BDA0003319583890000051
注：P1/P2含交换配对碱基、酶切位点，并含有目的基因5’端部分序列用于PCR调取目的基因。
表2重组质粒构建鉴定引物
Figure BDA0003319583890000061
实施例3 GBP2对MSC成骨分化作用的研究
将上述构建的过表达载体转染至hUC-MSC中，转染条件参考实施例2中的方法。将实验分为3组：MSC组(未转染载体组)、NC组(转染无序片段的载体的对照组)、GBP2highMSC组(转染过表达GBP2载体组)。采用显微镜(图3A)和Giemsa染色(图3B)观察GBP2过表达MSC形态。流式细胞术检测GBP2过表达hUC-MSC表型(图3D)。说明，转染过表达GBP2的hUC-MSC并不影响细胞形态和表型。采用q-PCR检测GBP2过表达程度，表明慢病毒转染的hUC-MSC GBP2有明显的过表达(图3C)。
将正常hUC-MSC与GBP2highhUC-MSC分别接种到6孔板，分别设为自分化组和诱导组，诱导组加入诱导剂分别进行成脂成骨诱导，自分化组仅加入完全培养基(90％α-MEM培养基+10％FBS)，每隔两天进行换液，14天后进行油红O染色和碱磷酶(ALP)染色。
所述碱磷酶(ALP)染色方法：先用PBS缓冲液洗1次；再加入200μl固定液(柠檬酸40μl+去离子水2ml+丙酮3ml)/孔，固定30秒后弃除固定液，再加入200μl染色液，室温处理30min后弃掉染色液，加入少量PBS缓冲液洗涤2次，最后每孔加入1ml PBS缓冲液，显微镜下观察。
所述油红O染色方法：将培养基弃除后，加入1％中性甲醛固定20min；PBS清洗1遍，经油红O染色，室温避光30min；PBS清洗1遍，每孔各加入1ml PBS，倒置显微镜下观察脂滴的形态大小及分布密度。
油红O对自分化和成脂诱导组染色发现，GBP2highhUC-MSC自分化组未出现脂滴，GBP2highhUC-MSC诱导组出现明显红色脂滴(图3E,F)。ALP对自分化和成骨诱导组染色发现，与GBP2highhUC-MSC自分化组相比，GBP2highhUC-MSC诱导组碱磷酶活性显著增加(图3G,H)。
q-PCR分别对自分化和诱导组进行成脂分化的标志基因ADI、PPAR-γ，成骨分化标志基因OPN、ALP的表达检测，结果发现：在诱导组中，GBP2highhUC-MSC成脂成骨相关基因表达升高，说明GBP2highhUC-MSC可以向脂肪细胞和成骨细胞分化(图3I,J)。
ALP染色分析NC组和GBP2highhUC-MSC组的碱性磷酸酶活性，表明GBP2highhUC-MSC碱磷酶活性明显高于NC组(图4A-D)；imageJ分析ALP染色面积，GBP2highMSC诱导组的ALP染色面积明显大于NC诱导组(图4E)，上述说明GBP2highMSC成骨分化能力明显高于NC组。
q-PCR分析NC诱导组和GBP2highhUC-MSC诱导组中成骨标志基因ALP、OPN的相对表达，结果表明GBP2highhUC-MSC诱导组中ALP、OPN表达明显高于NC诱导组(图5A,B)，说明GBP2highhUC-MSC可以促进MSC成骨分化。
检测ALP、OPN、ADI、PPAR-γ表达所用的引物序列见表3：
表3引物序列
Figure BDA0003319583890000071
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
<120> GBP2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途
<130> P210241
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 1
aggtcgactc tagaggatcc cgccaccatg gctccagaga tcaacttg 48
<210> 2
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 2
tccttgtagt ccataccgag tatgttacat attggctcca atg 43
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 3
taatgatcct cggttgtgca 20
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 4
ccttatagtc cttatcatcg tc 22
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 5
tcaagatcat cagcaatgcc 20
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 6
cgataccaaa gttgtcatgg a 21
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 7
ttccattcac aagaacagat cc 22
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 8
ctttgattgc actttggtac tc 22
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 9
tcacccaagc aacaaagtc 19
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 10
aaagaccaac cagatgcag 19
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 11
cagaagaagg acaaactggg 20
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 12
attgtatgtc ttggacagag c 21
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 13
ccataccagt taaacaggct g 21
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 14
tcagggttta gccatgtgg 19

Claims (10)

1.一种调控间充质干细胞成骨分化的制剂，其特征在于，所述制剂以GBP2抑制剂或促进剂为活性成分。
2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述间充质干细胞包括人脐带来源的间充质干细胞。
3.根据权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，所述GBP2促进剂包括促进GBP2表达或活性功能的试剂。
4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于，所述促进GBP2表达的试剂包括含有GBP2基因的表达载体，优选的，所述载体为慢病毒载体。
5.权利要求1～4任一项所述的制剂在制备调控间充质干细胞成骨分化的产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述制剂通过过表达GBP2基因使得成骨细胞分化相关标志物表达明显上调，从而促进MSC成骨分化能力。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述成骨细胞分化相关标志物包括成骨细胞分化成熟的早期标志物ALP和晚期标志物OPN。
8.权利要求1～4任一项所述的制剂在制备治疗骨质疏松症的药物中的应用。
9.一种促进间充质干细胞成骨分化的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)获取间充质干细胞，进行传代培养；
2)构建过表达GBP2载体；
3)将构建的过表达GBP2载体转染至间充质干细胞，然后培养。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述转染具体步骤：将生长状态良好的hUC-MSC接种到6孔板中，待细胞贴壁状态良好，细胞换液并分别加入慢病毒(MOI＝10)和/或感染增强液进行转染。
CN202111242140.6A 2021-10-25 2021-10-25 Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途 Pending CN113817776A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111242140.6A CN113817776A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111242140.6A CN113817776A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113817776A true CN113817776A (zh) 2021-12-21

Family

ID=78919032

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111242140.6A Pending CN113817776A (zh) 2021-10-25 2021-10-25 Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113817776A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004090161A1 (en) * 2003-04-14 2004-10-21 Novartis Ag Gene expression associated with osteoblast differentiation
US20050059147A1 (en) * 2000-06-05 2005-03-17 Beerelli Seshi Human mesenchymal progenitor cell
EP1923401A2 (en) * 2003-04-14 2008-05-21 Novartis AG Gene expression associated with osteoblast differentiation
AU2007333106A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. miR-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
AU2008261951A1 (en) * 2007-06-08 2008-12-18 Asuragen, Inc. miR-34 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CN102150043A (zh) * 2008-06-25 2011-08-10 贝勒研究院 结核分枝杆菌感染的血液转录标签
CN107907674A (zh) * 2017-10-16 2018-04-13 贵州省人民医院 Drp1作为药物靶标在筛选制备治疗乳腺癌的药物中的应用
KR102246067B1 (ko) * 2020-05-13 2021-04-29 (주)세렌라이프 효능이 증진된 줄기세포를 포함하는 세포 생착능 증진용 조성물

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050059147A1 (en) * 2000-06-05 2005-03-17 Beerelli Seshi Human mesenchymal progenitor cell
WO2004090161A1 (en) * 2003-04-14 2004-10-21 Novartis Ag Gene expression associated with osteoblast differentiation
EP1923401A2 (en) * 2003-04-14 2008-05-21 Novartis AG Gene expression associated with osteoblast differentiation
AU2007333106A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. miR-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20090163434A1 (en) * 2006-12-08 2009-06-25 Bader Andreas G miR-20 Regulated Genes and Pathways as Targets for Therapeutic Intervention
AU2008261951A1 (en) * 2007-06-08 2008-12-18 Asuragen, Inc. miR-34 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CN102150043A (zh) * 2008-06-25 2011-08-10 贝勒研究院 结核分枝杆菌感染的血液转录标签
CN107907674A (zh) * 2017-10-16 2018-04-13 贵州省人民医院 Drp1作为药物靶标在筛选制备治疗乳腺癌的药物中的应用
KR102246067B1 (ko) * 2020-05-13 2021-04-29 (주)세렌라이프 효능이 증진된 줄기세포를 포함하는 세포 생착능 증진용 조성물

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHI BAI等: "Guanylate Binding Protein 1 Inhibits Osteogenic Differentiation of Human Mesenchymal Stromal Cells Derived from Bone Marrow", SCIENTIFIC REPORTS *
X LIN等: "miR-433 is aberrantly expressed in myeloproliferative neoplasms and suppresses hematopoietic cell growth and differentiation", LEUKEMIA *
白海涛等: "鸟苷酸结合蛋白2对人脐带来源间充质干细胞成骨分化的调控作用", 中国生物制品学杂志 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102174468A (zh) 诱导人脐带间充质干细胞分化为睾丸间质细胞的方法与应用
CN111454953B (zh) 一种骨髓间充质干细胞成脂转化促进剂
CN108368501A (zh) 永生化干细胞及其制作方法
WO2006078034A1 (ja) 心筋細胞への分化能を有する細胞
CN116218846B (zh) 一种调控猪Ptrf基因表达的增强子序列的鉴定及其应用
CN106591372A (zh) 延缓人源骨髓间充质干细胞体外培养导致衰老的方法
CN112941106B (zh) 一种通过foxp1基因编辑和突变延缓间充质干细胞衰老的方法
CN110777120B (zh) Tgfbi作为调控间充质干细胞成脂分化的标志物的应用
JP2018011546A (ja) 骨格筋前駆細胞の製造方法
CN111269942A (zh) Tgfbi作为调控间充质干细胞成骨分化的标志物的应用
KR102334203B1 (ko) 불사화(不死化) 땀샘 근상피 세포
CN113881707B (zh) 调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品、方法及用途
CN116064385A (zh) 用于生产工程化外泌体的永生化间充质干细胞的制备方法和应用
WO2006017320A9 (en) Compositions and methods for myogenesis of fat-derived stem cells expressing telomerase and myocardin
CN113817776A (zh) Gbp2在调控间充质干细胞成骨分化中的用途
Guan et al. Effects of gene delivery approaches on differentiation potential and gene function of mesenchymal stem cells
CN107217071A (zh) 一种重组大鼠磷脂酶Cγ2腺病毒、构建方法及其应用
Kozhevnikova et al. Comparative characterization of mesenchymal bone marrow stromal cells at early and late stages of culturing
CN101979520A (zh) 特异促成软骨分化的核心结合因子al基因重组病毒及其制备方法和应用
Tian et al. Inflammation-mediated age-dependent effects of casein kinase 2-interacting protein-1 on osteogenesis in mesenchymal stem cells
JP4540948B2 (ja) 分別マーカーを用いた間葉系幹細胞の識別・分離方法
WO2001048150A1 (en) Cells capable of differentiating into heart muscle cells
CN118662638A (zh) miR-25-3p在调控间充质干细胞成骨分化中的用途
WO2021227573A1 (zh) 无异源培养基及使用其扩增间充质干细胞的方法
CN105441481A (zh) 一种sirtuin6基因缺失人类间充质干细胞的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20211221

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication