CN113194907A - 包含着色剂的颗粒及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及一种组合物，所述组合物被设计成皮内施用给受试者以治疗无色素的皮肤或产生临时纹身。所述组合物包含具有聚合物壳和包含着色剂的核的颗粒。所述颗粒在载体溶液中处于美容有效地延迟延迟着色剂在受试者皮肤中的生物吸收和/或生物降解的浓度。该颗粒的生物吸收和/或生物降解使纹身褪色直到其不再可见。

Description

包含着色剂的颗粒及其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年8月10日提交的美国临时专利申请第62/717,584号的优先权，该专利申请的全部内容通过引用结合到本文中。

背景技术

皮肤装饰的证据可追溯到史前时期并用于表明状况(例如，婚姻状况或军衔)、用于识别附属关系和用于美学目的。纹身也已经在治疗上用于治疗皮肤病症，诸如由白癜风、皮肤移植物和焰色痣引起的色素沉着不足和色素沉着过度。

纹身通常通过使用纹身机(例如，纹身枪)将油墨沉积到真皮中来施加。颜料的载体(例如水)被吸收，而不溶性颜料颗粒保留在最初沉积处的真皮中。纹身油墨颗粒沉积时的惰性和聚集结果会阻止颗粒被免疫系统从组织的间隙中消除，因此导致其永久性效果。

多年来，个人的风格、兴趣和皮肤松弛可能会逐渐演变。尽管可以使用基于激光的方法去除纹身，但是这种方法相对昂贵并且可能无法完全消除纹身。此外，外科手术去除、皮肤磨削术和盐磨擦术是侵入性去除程序，可能会导致瘢痕形成。为了避免这些缺点，一些人转而采用可在皮肤上绘画的油漆(例如指甲花染料)。但是，这些油漆容易被洗掉并且不能为接收者提供具有稍微永久性纹身的真正感觉。存在对可以将其活力保持约2个月至约12个月的半永久性纹身的需求。

发明内容

受益于本公开，本领域普通技术人员可以容易地使用在装置的某些方面有用的各种技术和试剂。可以容易地并入其他特征诸如粘结剂、覆盖物诸如例如绷带、预先加载用于皮内注射的注射器。例如，可以将装置注射到受试者中，或者可以将装置施用于或插入受试者的皮肤。

本公开的一个方面涉及一种包含颗粒和载体溶液的组合物。在一个实施方案中，颗粒包含壳和核。在一个实施方案中，壳包含可生物吸收且可生物降解的聚合物。示例性的聚合物包括聚己内酯(PCL)、聚D-乳酸(PDLA)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、聚原酸酯、脂族聚酸酐和/或芳族聚酸酐或其嵌段共聚物。

在一个实施方案中，核包含分子量为约5至约10 x 10⁶道尔顿的着色剂。

在一个实施方案中，载体溶液是液体、固体、半固体、凝胶、糊膏或蜡。

在一个实施方案中，颗粒的直径小于或等于约100 µm、约90 µm、约80 µm、约70 µm、约60 µm、约50 µm、约40 µm、约30 µm、约20 µm、约15 µm、约10 µm、约9 µm、约8 µm、约7 µm、约6 µm、约5 µm、约4 µm、约3 µm、约2 µm、约1 µm或约0.5 µm。在一个实施方案中，颗粒为一定尺寸，以在结合到动物或人的真皮中时诱导聚集。

在一个实施方案中，聚合物以在结合到动物或人的真皮中时有效于诱导聚集的浓度存在于壳中。尽管不希望受特定理论的束缚，但是在生理环境中疏水相互作用导致颗粒聚集。在一个实施方案中，在动物或人的真皮中，静电、经由表面基团的交联和/或聚电解质相互作用引起颗粒聚集。在一个实施方案中，聚合物以足以防止或抑制着色剂的吞噬(phagocytosis)的量存在于颗粒中。

在一个实施方案中，壳的厚度为约0.2 µm至10 µm、约0.3 µm至9 µm、约0.4 µm至8µm、约0.5 µm至7 µm、约0.6 µm至6 µm、约0.7 µm至5 µm、约0.8 µm至4 µm、约0.9 µm至3 µm、约1 µm至2 µm，包括端点。

在一个实施方案中，聚合物的重均分子量在50 Da至100 kDa之间，包括端点。在一个实施方案中，聚合物是结晶的、半结晶的或非晶的。在一个实施方案中，聚合物在生理pH下是阳离子的、阴离子的或两性离子的。在一个实施方案中，聚合物在水溶液中经历表面侵蚀或本体侵蚀。在一个实施方案中，将聚合物、重均分子量和壳厚度配置成使得生物吸收曲线和生物降解曲线中的至少一个表现出约2个月至约12个月的滞后期。在滞后期后，着色剂迅速释放到真皮中、被吸收和/或降解。

在一个实施方案中，壳还包括热响应性聚合物。在一个实施方案中，当将组合物结合到动物或人的真皮中时，热响应性聚合物诱导颗粒聚集诱导剂。在一个优选的实施方案中，在约98华氏度(体温)或更高的温度下，颗粒聚集，并且在小于98华氏度的温度下，颗粒为非聚集形式。在一些实施方案中，颗粒的非聚集形式促进颗粒在受试者中的施用和分散。在一些实施方案中，组合物的施用通过皮内注射来完成。在一个实施方案中，热响应性聚合物是Pluronic® F-127。在18-50％的浓度下，Pluronic® F-127在高于10℃下会形成凝胶。当冷却至低于10℃则会重新液化。在一些实施方案中，热响应性聚合物是聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)，其可以以下范围存在于壳中：约0.1%至约50%、约0.2%至约50%、约0.3%至约50%、约0.4%至约50%、约0.5%至约50%、约1%至约50%、约2%至约50%、约0.1%至约50%、约3%至约50%、约4%至约50%、约5%至约50%. 约10%至约50%、约15%至约50%、约20%至约50%、约25%至约50%、约30%至约50%、约35%至约50%、约40%至约50%、约45%至约50%、约0.1%至约49%、约0.1%至约48%、约0.1%至约47%、约0.1%至约46%、约0.1%至约45%、约0.1%至约40%、约0.1%至约35%、约0.1%至约30%、约0.1%至约25%、约0.1%至约20%、约0.1%至约15%、约0.1%至约10%、约0.1%至约5%、约0.1%至约4%、约0.1%至约3%、约0.1%至约2%或约0.1%至约1% w/w(PNIPAM/颗粒重量)。

在一个实施方案中，着色剂是染料或颜料。在一个实施方案中，着色剂发荧光或发磷光。在一个实施方案中，着色剂以1 ng至1 µg之间的量存在于核中，包括端点。在一些实施方案中，组合物包含选自以下非限制性实例之一或组合的着色剂：黑色素、[酞菁合(2-)]铜、FD&C红40 (食品红17、诱惑红)、FD&C黄5、苯胺黑、活性黑5、酸性蓝113、颗粒状亮黑BN(食品黑1)、D&C黄10、FD&C蓝1 (食品蓝2)、FD&C蓝2、酸性黑1、酸性黑24、酸性黑172、酸性黑194、酸性黑210、螺旋藻提取物粉末、栀子黄98%、栀子黄40%、栀子黑(Gardenia Black)、栀子蓝(Gardenia Blue)、栀子红(Gardenia Red)、洋红(Cochineal)/胭脂红(Carmine)、果红(Annatto)、β-胡萝卜素、D&C橙4、D&C红33、D&C红22、Ext D&C紫2、D&C黄8、FD&C绿3、FD&C红4、FD&C黄6、FD&C红3、丽春红4R (Ponceau 4R)、酸性红52、淡红(Carmoisine)、苋菜红(Amarnath)、Brown HT、Black PN、Green S、专利蓝V、酒石黄(Tartrazine)、日落黄、喹啉黄(Quinolline Yellow)、赤藓红、亮蓝、靛蓝胭脂红(Indigo Carmine)、D&C绿5、D&C红17、D&C红21、D&C红27、D&C黄11、D&C紫2、D&C绿6、D&C红30、D&C红31、D&C红28、D&C红7、D&C红6、D&C红34、D&C黄10、淡红色淀、丽春红4R色淀、Fanchon黄、甲苯胺红、酸性红52色淀、诱惑红色淀、酒石黄色淀、日落黄色淀、亮蓝色淀、赤藓红色淀、喹啉色淀、靛蓝胭脂红色淀、专利蓝V色淀、Black PN色淀、立索玉红B(Lithol Rubin B)、氧化铁红、氧化铁黄、氧化铁黑、铁蓝、二氧化钛、D＆C红36、炭黑、群青蓝、群青紫、群青红/粉、氧化铬绿、云母、氢氧化铬绿、滑石、锰紫、氧化铁酒红、氧化铁赭色(Iron Oxide Sienna)、氧化铁褐色(Iron Oxide Tan)、氧化铁琥珀色(Iron Oxide Amber)、氧化铁棕-G、氧化铁棕S、叶绿素铜钠、焦糖、核黄素、角黄素、红辣椒、D＆C绿8、Ext D&C黄5、NOIR Brilliant BN、亚铁氰化铵、D＆C黄10色淀、FD＆C黄5色淀、FD＆C黄6色淀、D＆C红21色淀、D＆C红33色淀、FD＆C红40色淀、D＆C红27色淀、D＆C红28色淀、FD＆C蓝1色淀、D＆C红30色淀、D＆C红36色淀、D＆C红6色淀、D＆C红7色淀、D＆C黑2。本公开考虑了以美容有效的浓度的着色剂组合，使得在约2个月至约12个月的滞后期内释放到真皮中或分解。每个颗粒层的内容物的释放和降解可能导致纹身设计的部分或完全颜色变化。

在一个实施方案中，核由着色剂组成，并且着色剂是聚集体。在一个实施方案中，颗粒的直径小于或等于约10 µm、约9 µm、约8 µm、约7 µm、约6 µm、约5 µm、约4 µm、约3µm、约2 µm、约1 µm或约0.5 µm。在一个实施方案中，着色剂溶解或悬浮在整个颗粒中，其不必具有核-壳结构。

在一个实施方案中，核还包含核聚合物。在一个实施方案中，聚合物和核聚合物是相同或不同的。在一个实施方案中，聚合物和核聚合物中的至少一种是嵌段共聚物。在一个实施方案中，嵌段共聚物包括二嵌段共聚物或三嵌段共聚物。在一个实施方案中，核聚合物以约7%-10%、约10%-15%、约15%-20%、约20%-25%、约25%-30%、约30%-35%、约35%-40%、约40%-45%、约45%-50%、约50%-55%、约55%-60%、约60%-65%、约65%-70%、约70%-75%、约75%-80%、约80%-85%、约85%-90%或约90%-92% w/w的浓度存在于颗粒中。

在一个实施方案中，着色剂被吸附至核聚合物、被核聚合物物理截留或共价键合至核聚合物。尽管不希望被束缚，但是发明人猜想随着核聚合物降解，着色剂与降解的聚合物组分一起释放到真皮中并且两者都被身体去除。在一个实施方案中，着色剂包括与核聚合物形成配位键的金属。在一个实施方案中，着色剂的浓度为约0.01％至10％w/w、0.02％至9％、0.03％至8％、0.04％至7％、0.05％至6％、0.06％至5％、0.07％至4％、0.08％至3％、0.09％至2％、0.1％至1％，包括端点，基于颗粒的总聚合物重量。

在一个实施方案中，核包含水凝胶。在一个实施方案中，着色剂被吸附至核聚合物、被核聚合物物理截留、被插入核聚合物、非共价或共价地与共价键合至水凝胶的核聚合物键合。在一个实施方案中，水凝胶包含以下中的至少一种：藻酸盐、壳聚糖盐酸盐、甲基丙烯酸酯改性的透明质酸(HA-MA)、硫醇化的透明质酸(HA-SH)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)和聚乙二醇(PEG)。在一个实施方案中，水凝胶包含这样的水凝胶的盐。在一些实施方案中，着色剂包含与水凝胶形成配位键的金属。

在一个实施方案中，核还包括以下中的至少一种：藻酸盐、果胶、壳聚糖、透明质酸、κ-角叉菜胶、琼脂糖、琼脂、纤维素衍生物、羧甲基纤维素(CMC)、基于蛋白质的亲水性聚合物、胶原蛋白水解物、明胶、合成亲水性聚合物、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙二醇(PEG)和改性的PEG。在一个实施方案中，壳或核还包含选自以下的至少一种聚酸酐：聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷)] (poly(CPP))、聚[1,6-双(对羧基苯氧基)己烷](poly(CPH))、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]以及聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]-共-对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-共-对苯二甲酸酯(P(BHET-EOP/BHET), 80/20)。在一个实施方案中，壳或核还包含至少一种选自以下的聚原酸酯(POE)：POE I、POE II、POEIII和POE IV。POE I、POE II、POE Ill和POE IV分别是第一、二、三和四代聚原酸酯。在一个实施方案中，聚原酸酯包括杂环。

在一个实施方案中，颗粒以约5至约20、约20至约50、约50至约80、约80至约110、约110至约140、约140至约170、约170至约200、约200至约230、约230至约250、约250至约280、约280至约310、约310至约340、约340至约370、约370至约400 mg/ml的浓度存在于载体溶液中。颗粒的浓度也可以％w/v表示，其中

。在一个实施方案中，颗粒以约5至约8、约8至约11、约11至约14、约14至约17、约17至约20、约20至约23、约23至约25、约25至约28、约28至约31、约31至约34、约34至约37、约37至约40、约37至约40、约40至约43、约43至约45、约45至约48、约48至约50、约50至约53、约53至约55、约55至约58或约58至约60% w/v的浓度存在于载体溶液中。在一个实施方案中，组合物的浓度足以维持颗粒内的渗透压至少约2个月至约60个月。

在一个实施方案中，组合物还包含保湿剂、杀生物剂、缓冲剂、表面活性剂和/或共聚物。

在本公开的一个方面，一种对受试者进行纹身的方法包括将本申请中所公开的组合物施用于受试者的步骤。在一个实施方案中，所述施用步骤包括皮内施用美容有效量的本文所公开的组合物。

在一个实施方案中，一种抑制着色剂在受试者皮肤内吸收的方法包括将着色剂包封到本文公开的任何颗粒中的步骤。

本公开的另一方面涉及一种在有需要的受试者中治疗色素障碍的方法，所述方法包括使患有色素分泌失调的受试者的皮肤的一部分与治疗有效剂量的权利要求1至44中的任一项的颗粒接触的步骤。

本公开的颗粒对于活性药剂的施用特别有用。所述组合物对于儿童、老年患者和/或患有精神疾病、难以测试和不服从的患者以及对于军人和没有健康保险的人(例如较低收入者和/或无家可归者)可特别有用。

在一组实施方案中，所述方法包括通过向受试者施加电、磁和/或机械力来改变包埋在受试者中的着色剂的着色的动作。在又一组实施方案中，所述方法包括通过在受试者中测定具有至少两个不同区域(每个区域存在于颗粒表面上)的颗粒来测定受试者中的分析物的动作。

根据另一组实施方案的方法包括以下动作：提供具有至少两个不同区域的第一颗粒，每个区域存在于第一颗粒表面上，第一颗粒包含第一着色剂；提供第二颗粒(在一些实施方案中，其可以具有至少两个不同的区域，每个区域存在于第二颗粒表面上)，第二颗粒包含第二着色剂；和使第一颗粒和第二颗粒相对于彼此变得固定，使得第一着色剂和第二着色剂能够反应。

另一个实施方案总体上涉及一种用于将多个颗粒递送至受试者的真皮或表皮的装置。根据一组实施方案，所述装置包含：基材；和可移除地连接至基材、任选地带有着色剂的多个表皮和/或真皮插入物体(在本文中称作“皮肤插入物体”)。在某些情况下，基材经构造和布置以将多个表皮和/或真皮插入物体施加至受试者的皮肤并促进该物体引入到表皮和/或真皮中，并且基材以一定程度的粘附力固定到所述多个物体上，使得当这些物体递送到真皮和/或表皮时，在从皮肤去除基材时，这些物体中大多数的至少一部分仍保留在真皮和/或表皮中。

另一个方面总体上涉及用于将着色剂递送至真皮和/或表皮的试剂盒。根据一组实施方案的试剂盒包括多个皮肤插入物体，其中的至少一些携带包含着色剂的颗粒组合物，经构造和布置使得当将多个皮肤插入物体施用于皮肤时，颗粒组合物中的至少一些递送至真皮和/或表皮，并在真皮和/或表皮中保留美容可接受量的时间。

尽管不希望受具体理论束缚，但是发明人猜想在将油墨颗粒注射在皮肤区域上之后，油墨颗粒驻留在真皮细胞之间的胞间隙中，在此油墨颗粒形成大聚集体。另外，纹身油墨颗粒会引起异物炎症反应，该异物炎症反应由上皮样细胞、淋巴细胞和巨细胞组成，这些细胞试图吞没并内化外来纹身油墨颗粒和油墨颗粒聚集体。巨噬细胞和树突状细胞变大并发展成上皮样细胞和多核巨细胞。这种类型的反应、油墨颗粒聚集体的大小以及在聚集体周围的胶原蛋白网络在很大程度上负责在较长时间内将纹身油墨维持在真皮中。因此，在将纹身油墨施用到真皮中之后，颗粒的聚集倾向对于在预期壳发生生物吸收和/或生物降解的滞后期期间维持纹身的稳定性至关重要。较小的颗粒由于其较大的表面积而具有较高的聚集倾向。因此，适当的粒度范围对于确保聚集并在一定时间内获得良好的纹身活力是必要的。在一些实施方案中，颗粒尺寸不超过约100微米直径。

附图说明

图1示出了颗粒的示意图。

具体实施方式

在描述本发明的组合物和方法之前，应该理解本公开不限于所描述的特定分子、组合物、方法或方案，因为这些可以变化。还应理解，说明书中使用的术语仅出于描述特定型式或实施方案的目的，并且不旨在限制本公开的范围，本公开的范围仅由所附权利要求书来限定。应当理解，这些实施方案不限于所描述的特定方法、方案、组合物、聚合物、颗粒和试剂，因为这些可以变化。还应理解，本文使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制本发明实施方案或权利要求的范围。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解相同的含义。尽管类似于或等同于本文描述的那些的任何方法和材料都可以用于本公开的实施方案的实践或测试中，但是现在描述优选的方法、装置和材料。本文提及的所有出版物均通过引用并入本文。本文中的任何内容均不应解释为鉴于先前公开就承认本公开无权早于该公开。

除非明确指出相反，否则本文在说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一”和“一个”应理解为是指“至少一个”。本文在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为是指如此联结的要素中的“一者或两者”，即在某些情况下这些要素联合存在而在其他情况下这些要素分别存在。除非明确指出相反，否则可以任选地存在不同于由“和/或”子句具体确定的要素的其他要素，无论与具体确定的那些元素相关还是无关。因此，作为非限制性示例，在与诸如“包括”的开放式语言结合使用时，对“A和/或B”的提及，可以在一个实施方案中指代有A无B(任选地包括不同于B的要素)；在另一个实施方案中，指代有B无A(任选地包括不同于A的要素)；在又一个实施方案中，指代A和B二者(任选地包括其他要素)；等等。

如本文在说明书和权利要求书中所使用的，“或”应理解为具有与如上所定义的“和/或”相同的含义。例如，当在列表中将项目分开时，“或”或“和/或”应解释为包含性的，即包含多个要素或要素列表中的至少一个、但也包括多于一个以及任选的其他未列出的项目。只有明确指出相反的术语，诸如“仅一个”或“恰好一个”，或当在权利要求书中使用时的“由...组成”，是指包括多个要素或要素列表中的恰好一个。一般而言，当在前面有排他性术语“任一”、“一个”、“仅一个”或“恰好一个”时，本文所用的术语“或”仅应解释为是指排他性的备选物(即“一个或另一个，而非两者”)。当在权利要求书中使用时，“基本上由……组成”应具有其在专利法领域中所使用的普通含义。

当提及诸如量、时距等可测量值时，本文所使用的术语“约”意在涵盖偏离指定值±20%、±10%、±5%、±1%、±0.9%、±0.8%、±0.7%、±0.6%、±0.5%、±0.4%、±0.3%、±0.2%或±0.1%的变动，因为此类变动对于进行所公开的方法是合适的。

如本文所使用的短语“X至Y的整数”表示包括端点的任何整数。即，在公开了某个范围的情况下，公开了包括端点的在该范围内的每个整数。例如，短语“X至Y的整数”公开了1、2、3、4或5以及范围1至5。

如本文中所使用的术语“包含(comprising)”(以及“包含”的任何形式，诸如“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprised)”)、“具有(having)”(以及“具有”的任何形式，诸如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及“包括”的任何形式，诸如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(以及“含有”的任何形式，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包含性或开放性的，并且不排除其他未提到的要素或方法步骤。

图1示出了本公开的颗粒的一个实施方案历时100天的生物吸收和/或生物降解的图示。图1A示出了具有包含着色剂的核、包含可生物吸收和/或可生物降解的聚合物或水凝胶的内壳以及包含可生物吸收和/或可生物降解的聚合物的外壳的颗粒。图1B是第0天颗粒的一个实施方案的图示，在那天将颗粒注射到动物或人的皮肤中。到第70天，由于生物吸收和/或生物降解，外壳的厚度已减小，如图1C所示。这70天时间是滞后期，在此期间着色剂基本上保持被内壳和外壳包封，并且纹身色在动物或人的皮肤下显得鲜明。如图1D所示，在约第85天，内壳和外壳二者已经充分降解以使得着色剂释放。图1E示出了着色剂的分散、吸收和/或降解，并且纹身逐渐褪色。到第100天，着色剂和纹身不再明显(图1F)。

在一个实施方案中，提供了一种组合物，其中所述组合物包含：(i)颗粒，其中所述颗粒包含：(a)壳，其包含可生物吸收且可生物降解的聚合物；和(b)核，其包含与壳相似或不同的可生物吸收且可生物降解的聚合物或水凝胶基质以及分子量为约5至约10 x 10⁶道尔顿之间的着色剂，包括端点；其中将所述着色剂插入、非共价或共价连接至聚合物或水凝胶基质；且其中所述可生物吸收且可生物降解的聚合物包括均聚物、共聚物、具有两种/三种或更多种嵌段的嵌段共聚物(例如，二嵌段或三嵌段共聚物)，其选自以下中的一种或其组合：聚己内酯(PCL)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇-二丙烯酸酯(PEGDA)、聚原酸酯、脂族聚酸酐或芳族聚酸酐；和(ii)载体溶液。

另一个实施方案提供了一种组合物，其中所述组合物包含：(i)颗粒，其中所述颗粒包含：(a)壳，其包含可生物吸收且可生物降解的聚合物；和(b)核，其包含分子量为约5至约10 x 10⁶道尔顿之间的着色剂，包括端点；其中所述着色剂被壳聚合物包封；其中所述壳可生物吸收且可生物降解的聚合物包括选自以下中的一种或其组合的第一嵌段或二嵌段聚合物：聚己内酯(PCL)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、聚原酸酯、脂族聚酸酐、聚(癸二酸酐)(poly(SA))或芳族聚酸酐；和(ii)载体溶液。

如本文所用，“颗粒”是物质的微小部分。颗粒可以是微米颗粒和/或纳米颗粒。“微米颗粒”是平均直径为微米量级(即，在约1微米至约1 mm之间)的颗粒，而“纳米颗粒”是平均直径为纳米量级(即，在约1 nm至约1微米之间)的颗粒。在某些情况下，可以使用多个颗粒，并且在某些情况下，颗粒中的一些或基本上全部可以是相同的。例如，至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的颗粒可以具有相同的形状，和/或可以具有相同或异质的组成。

取决于应用，颗粒可以由任何合适的材料形成。例如，颗粒可以包含玻璃和/或聚合物，诸如聚乙烯、聚苯乙烯、有机硅、聚氟乙烯、聚丙烯酸、聚酰胺(例如尼龙)、聚碳酸酯、聚砜、聚氨酯、聚丁二烯、聚丁烯、聚醚砜、聚醚酰亚胺、聚苯醚、聚甲基戊烯、聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚邻苯二甲酰胺、聚苯硫醚、聚酯、聚醚醚酮、聚酰亚胺、聚甲基丙烯酸甲酯和/或聚丙烯。在某些情况下，颗粒可以包含陶瓷诸如磷酸三钙、羟磷灰石、氟磷灰石、氧化铝或氧化锆。在某些情况下(例如，在某些生物学应用中)，颗粒可由生物相容性和/或可生物降解的聚合物形成，诸如聚乳酸和/或聚乙醇酸、聚酸酐、聚己内酯、聚原酸酯、聚环氧乙烷、聚对苯二甲酸丁二醇酯、淀粉、纤维素、壳聚糖和/或这些的组合。在一组实施方案中，颗粒可以包含水凝胶，诸如琼脂糖、胶原蛋白或纤维蛋白。

在某些情况下，颗粒可以包括磁敏感材料，例如，显示出顺磁性或铁磁性的材料。例如，颗粒可以包括铁、氧化铁、磁铁矿、赤铁矿或一些其他含铁化合物。在另一个实施方案中，颗粒可以包括导体材料(例如，金属诸如钛、铜、铂、银、金、钽、钯、铑等)或半导体材料(例如，硅、锗、CdSe、CdS等)。其他颗粒包括ZnS、ZnO、TiO₂、AgI、AgBr、HgI₂、PbS、PbSe、ZnTe、CdTe、In₂S₃、In₂Se₃、Cd₃P₂、Cd₃As₂、InAs或GaAs。

颗粒还可以包括其他物类，诸如细胞、生化物类诸如核酸(例如RNA、DNA、PNA等)、蛋白质、肽、酶、纳米颗粒、量子点、香料、指示剂、染料、荧光物类、化学品、小分子(例如，分子量小于约1 kDa)。在一些实施方案中，除了包含一种或多种反应剂和/或一种或多种信号传送剂之外，颗粒还包含一种或多种着色剂。

在一些实施方案中，颗粒包含一种或多种着色剂。如本文所用，“着色剂”是染料、颜料或在暴露于可见光或紫外光时发射在可见光谱中的波长的光的任何化合物。在一些实施方案中，着色剂是染料。如本文所用，“染料”是指为液体或可溶于液体媒介中的有色分子。在一些实施方案中，着色剂是颜料。如本文所用，“颜料”是指不溶于液体媒介中的有色分子。在一些实施方案中，着色剂是一种或多种荧光团。在一些实施方案中，着色剂是上述物类中的两种或三种的组合。

在本发明的一个实施方案中，提供了在真皮中保留预定时间段(例如2、3、6、9个月或1、2、5、10年等)然后自发消失的纹身油墨。这些“半永久性”或“临时性”纹身油墨通过如下来产生：以美容有效浓度或以允许颜料或着色剂经预定时间段缓慢生物吸收、生物侵蚀、混合和/或生物降解的量，将适当的颜料或着色剂(当其本身存在于真皮中时容易被消除的颜料)截留、包裹、复合、掺入或包封在媒介中。在一些实施方案中，颜料或着色剂经约五年、四年、三年、两年、一年或半年以恒定速率缓慢地生物降解，或者一旦特定百分数的媒介被吸收则可以在短时间段内释放出颜料。例如，所有颜料可在第四年至第五年之间、或在约2个月至约60个月之间的任何一个月时间段释放。

在某些情况下，包含在皮肤内的“纹身”或颗粒可以通过向受试者施加电、磁和/或机械力来改变。例如，通过施加这样的力，可以使颗粒簇集，这可以导致颜色变化，如上所述。因此，本公开的一个实施方案涉及受试者的皮肤中的区域，所述区域可以通过施加外部刺激诸如电、磁和/或机械力和/或施加于皮肤的化学品(例如，为颗粒上的物类的结合伙伴的化学品)来改变。在一些实施方案中，皮肤的该区域可以在没有电、磁或机械力的情况下仅通过颗粒的吸附和/或降解来改变。

存在于皮肤中的纹身(或其他标记)可以具有任何功能，例如，作为装饰艺术品或作为识别系统。例如，可以验证纹身，做法是：对受试者施加刺激(例如，电场、磁场、机械力、化学品等)，并通过识别标记的变化、诸如颜色变化来确认纹身。标记的变化可以是永久性或临时性的。作为具体实例，可以对包含呈现出第一颜色的第一区域和呈现出第二颜色的第二区域的各向异性颗粒施加刺激。在没有该刺激的情况下，颗粒表现出第一和第二颜色的共混色；然而，在施加刺激的情况下，当颗粒对齐时，只呈现出一种颜色。这种颜色变化的识别例如可以在艺术上使用或用作识别性标记。如前所述，在某些情况下，这样的标记可以是永久性或临时性的。作为另一个实例，在没有刺激的情况下颗粒可能是不可见的(例如，非聚集的)，但是当施加刺激时变为可见的(例如，聚集的)。在某些情况下，当施加刺激时，颗粒会改变其外观，但是一旦移除刺激，则会恢复为其原始外观；然而，在其他情况下，在去除刺激之后，颗粒可能能够保持其改变的外观一些时间，并且在某些情况下，颗粒永久地保持其改变的外观。

如本文所用，“真皮”是形成皮肤的一层的、位于表皮之下的活组织的厚层。真皮可能包含毛细血管、神经末梢、汗腺、毛囊、结缔组织、淋巴管和其他结构。表皮是皮肤的最外层，包括制造和储存黑色素色素的细胞。

如本文所用，“可生物降解的”或“可生物侵蚀的”是指能够被自然过程分解。在一些实施方案中，该自然过程发生在受试者体内。类似地，如本文所用，“可生物吸收的”是指能够吸收到活组织中。

适用于纹身的任何常规着色剂以及任何生物学上耐受的颜色都可以用于本发明的纹身油墨的颜色要素。美国食品药品监督管理局(FDA)认为，纹身中使用的颜料是受联邦食品药品和化妆品法令[cf 21 U.S.C. 32l(t)和379(e)章节]中的FDA有色添加剂法规约束的“有色添加剂”。此外，当与媒介结合以形成根据本发明的颜料/媒介复合物时，实际上身体可耐受的任何颜料或有色物质都可以用作合适的纹身油墨。用于本发明的着色剂的非限制性实例包括：黑色素、[酞菁合(2-)]铜、FD&C红40 (食品红17)、FD&C黄5、苯胺黑、活性黑5、酸性蓝113、颗粒状亮黑BN(食品黑1)、D&C黄10、FD&C蓝1 (食品蓝2)、FD&C蓝2、酸性黑1、酸性黑24、酸性黑172、酸性黑194、酸性黑210、螺旋藻提取物粉末、栀子黄98%、栀子黄40%、栀子黑(Gardenia Black)、栀子蓝(Gardenia Blue)、栀子红(Gardenia Red)、洋红(Cochineal)/胭脂红(Carmine)、果红(Annatto)、β-胡萝卜素、D&C橙4、D&C红33、D&C红22、Ext D&C紫2、D&C黄8、FD&C绿3、FD&C红4、FD&C黄6、FD&C红3、丽春红4R (Ponceau 4R)、酸性红52、淡红(Carmoisine)、苋菜红(Amarnath)、Brown HT、Black PN、Green S、专利蓝V、酒石黄(Tartrazine)、日落黄、喹啉黄(Quinolline Yellow)、赤藓红、诱惑红、亮蓝、靛蓝胭脂红、D&C绿5、D&C红17、D&C红21、D&C红27、D&C黄11、D&C紫2、D&C绿6、D&C红30、D&C红31、D&C红28、D&C红7、D&C红6、D&C红34、D&C黄10、淡红色淀、丽春红4R色淀、Fanchon黄、甲苯胺红、酸性红52色淀、诱惑红色淀、酒石黄色淀、日落黄色淀、亮蓝色淀、赤藓红色淀、喹啉色淀、靛蓝胭脂红色淀、专利蓝V色淀、Black PN色淀、立索玉红B(Lithol Rubin B)、氧化铁红、氧化铁黄、氧化铁黑、铁蓝、二氧化钛、D＆C红36、炭黑、群青蓝、群青紫、群青红/粉、氧化铬绿、云母、氢氧化铬绿、滑石、锰紫、氧化铁酒红、氧化铁赭色(Iron Oxide Sienna)、氧化铁褐色(Iron Oxide Tan)、氧化铁琥珀色(Iron Oxide Amber)、氧化铁棕-G、氧化铁棕S、叶绿素铜钠、焦糖、核黄素、角黄素、红辣椒、D＆C绿8、Ext D&C黄5、NOIR Brilliant BN、亚铁氰化铵、D＆C黄10色淀、FD＆C黄5色淀、FD＆C黄6色淀、D＆C红21色淀、D＆C红33色淀、FD＆C红40色淀、D＆C红27色淀、D＆C红28色淀、FD＆C蓝1色淀、D＆C红30色淀、D＆C红36色淀、D＆C红6色淀、D＆C红7色淀、D＆C黑2。

在预定时间段内连续释放着色剂的颗粒的一个实例是其中将着色剂结合到或混合在媒介的整个物质中以形成带颜色颗粒的实例。当将这些着色剂/媒介复合物(以纹身的形式)引入真皮中时，纹身着色剂和媒介缓慢地生物吸收，从溶解媒介中释放出着色剂，从真皮消除着色剂。当所有着色剂/媒介被吸收后，纹身将不再可见。

为了在短时间段内释放着色剂，可以将可生物吸收的微胶囊或微薄片用作媒介。采用微胶囊时，着色剂/媒介复合物包括被媒介包围的着色剂的核，其保持完整性，直到一定阈值百分数的媒介被溶解、被生物侵蚀或被生物吸收。此时，媒介不再保护着色剂免于消除。着色剂释放到真皮中，在此其在相对较短的时间内被消除。

替代地，由着色剂和媒介制成微薄片，其中在整个微薄片中混合有着色剂，在生物吸收过程中该微薄片保持相对恒定的着色剂表面积。在预定的时间段内，可见的着色剂表面溶解，这类似于冰冻的湖泊或池塘的融化。

用于着色剂的媒介包括任何生物学上耐受的材料，该材料在期望的任何时间内或在期望的任何条件下将着色剂保留在真皮中。在这些情况中的任何一种下，媒介携带着色剂，其可以任何图案或构型以类似于常规纹身的方式施用到真皮中。媒介足够透明或半透明，以便允许着色剂的颜色透过显示并可见。

在本发明中可以用作纹身着色剂媒介的其他材料中，有FDA已经发现可接受用作食品添加剂的那些材料，包括琥珀酰化明胶、阿拉伯半乳聚糖、戊二醛、石油蜡及其混合物。根据本发明用作纹身着色剂媒介的其他材料包括poloxanele、聚(丙烯酸-共-次磷酸酯)钠盐、聚丙烯酰胺、藻酸盐/藻酸、酪蛋白酸钙、聚果酸钙、邻苯二甲酸乙酸纤维素、偏苯三酸乙酸纤维素、壳聚糖、食用和天然蜡、脂肪酸、脂肪醇、吉兰糖胶、羟基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、脂质、甘油单-,双-和三酯、果胶、磷脂、聚丙烯酸(C₁₆-C₂₂)烷基酯、聚乙烯、氧化聚乙烯、与1,2-二氯乙烷反应的聚乙烯亚胺、聚氧乙烯(600)二油酸酯、聚氧乙烯(600)单蓖麻油酸酯、聚氧乙烯(23)月桂基醚、聚乙二醇、聚乙二醇(400)二油酸酯、聚乙二醇(400)单-和二-油酸酯、脂肪酸的聚甘油酯、聚异丁烯、椰油脂肪酸的聚邻苯二甲酸甘油酯、聚马来酸和/或其钠盐、聚氧亚乙基二醇(400)单-和二-油酸酯、聚氧乙烯(23)月桂基醚、聚氧乙烯(40)单硬脂酸酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯(2)脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、聚氧亚丙基二醇、聚乙酸乙烯酯、聚山梨酸酯80、聚乙烯基聚吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮和聚(20乙烯基吡啶-共-苯乙烯)。

如本文所用，“改性的PEG”是任何聚乙二醇衍生物，例如其中末端羟基中的一个或两者已被预先修饰的聚乙二醇。合适的PEG衍生物包括其中(一个或多个)末端羟基已转化为烷氧基的烷氧基PEG。

用于形成纹身着色剂媒介的其他材料是生物学上耐受的，并且包括蜡、聚烯烃或石蜡(例如，杨梅蜡、鲸蜡、日本蜡、Ross蜡等)、甘油三酯、磷脂、脂肪酸及其酯(例如月桂酸、棕榈酸、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯等)、聚(棕榈酸乙烯酯)、聚(十六烷基丙烯酰胺)、聚(丙烯酸丁酯)、聚(丙烯酸十六烷基酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚(十二烯)、聚(异丁烯)、聚(戊二酸三甲酯)、聚酸酐、聚原酸酯、聚酯、聚苯乙烯、聚氨酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚四氟乙烯、陶瓷或玻璃。

与媒介一起使用的着色剂的量取决于期望的颜色和着色剂的强度，以及待向其施用着色剂的皮肤的颜色和质地。为了形成纹身油墨，将纹身着色剂/媒介复合物成型为具有所需组成和几何形状的微结构，并以足以产生所需皮肤着色的浓度将其悬浮在载体(诸如乙醇或水)或任何其他常规纹身油墨流体中。替代地，与许多常规纹身油墨类似，纹身着色剂/媒介复合物为在半液体糊膏中的悬浮液形式。选择纹身着色剂/媒介复合物的大小以便使用常规纹身油墨装置将油墨容易地施用到真皮中。

为了产生半永久性纹身，将着色剂截留、包裹、复合、掺入、包封或以其他方式缔合在由可生物吸收、可生物侵蚀或可生物降解的材料构成的媒介中，或与这些媒介结合。该材料被设计为在预定的时间段内被生物吸收、生物侵蚀或生物降解，使得将纹身油墨施用到真皮中时，会产生一种纹身，这种纹身仅持续到纹身着色剂媒介生物吸收为止。纹身着色剂媒介被部分或完全生物吸收时，着色剂被释放，使得其得以从真皮中消除。

存在众多可生物降解的聚合物，并且通过控制媒介的材料类型和组成来决定纹身在真皮中以可见状态持续的时间长度。可以使用的可生物吸收、可生物侵蚀或可生物降解的聚合物有Higuchi等人在美国专利号3,981,303、3,986,510和3,995,635中公开的那些，包括藻酸锌聚乳酸、聚乙烯醇、聚酸酐和聚(乙醇酸)。替代地，微孔聚合物是合适的，包括在Wong的美国专利号4,853,224中公开的那些，诸如聚酯和聚醚，以及在Kaufman的美国专利号4,765,846和4,882,150中公开的那些。

在体内缓慢降解的其他聚合物公开在Davis等人的美国专利号5,384,333中，其为在20-37℃下为固体的可生物降解的聚合物，且在38-52℃的温度范围内可流动、例如为液体。在制备半永久性纹身中，将着色剂掺入聚合物基质中，然后将系统温热至大约50℃，在此其液化。然后将该系统以所需的纹身设计注入真皮中，在此其冷却并重新固化。

例如，对于在施加热时熔化、破坏、削弱或降解的媒介，约40℃至约55℃的熔化温度是有用的。用于制造媒介的这样的不耐热或可熔化材料的实例包括但不限于表1中所列的那些或其组合：

表1：不耐热材料

聚合物	熔化温度(℃)
		聚十六烷基酯	43
聚正十六烷基丙烯酰胺	45
		聚丁基酯	47
聚-1-十二烯	45-48
		聚异丁烯	44-46
聚(十六烷基丙烯酰胺)	45
		聚(丙烯酸丁酯)	47
聚(丙烯酸十六烷基酯)	43
		聚(丙烯酸十八烷基酯)	56
聚(十二烯)	45-49
		聚(异丁烯)	44-46
杨梅蜡	42-48
		鲸蜡	42-50
日本蜡	50-56
		Ross蜡(精制石蜡)	48-50
Carbowax(聚乙二醇1450)	43-46
		Lipoxol 1550或2000(MED PEG-32或40)	40-50
月桂酸	44-46
		棕榈酸	59-61
山梨糖醇单棕榈酸酯	46-47
		山梨糖醇单硬脂酸酯	56-58
Softisan(C<sub>10-18</sub>脂肪酸的142或601甘油酯)	40-45

对于这种类型的半永久性媒介，可以使用具有以下特性的任何可生物降解的聚合物系统，包括均聚物、共聚物、嵌段共聚物、蜡和凝胶及其混合物。优选的聚合物系统是通式[A-B-A]x的三嵌段共聚物，其中A表示疏水性聚合物嵌段，B表示亲水性聚合物，且X表示约1至约90,000的任何正整数。单体和聚合物优选通过酯基连接。优选的疏水性聚合物和低聚物包括但不限于选自聚乙醇酸、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚丁基内酯、聚己内酯、D-聚乳酸、聚四氟乙烯、聚烯烃、聚环氧乙烷、聚乳酸、聚谷氨酸、聚-L-赖氨酸、聚L-天冬氨酸的单元。优选的亲水性聚合物包括聚乙二醇、聚丙二醇和聚(乙烯醇)。

在一个优选的实施方案中，颗粒核包含着色剂和可生物吸收和/或可生物降解的聚合物，所述聚合物包括聚己内酯(PCL)、聚D-乳酸(PDLA)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、聚原酸酯、脂族聚酸酐和芳族聚酸酐或其嵌段共聚物中的至少一种。可以将着色剂结合到核聚合物中，做法是，在预聚物混合物中添加着色剂，然后进行聚合。在本公开的一方面，聚合过程是乳液聚合过程。也可以通过将聚合物和着色剂溶解在溶剂中、然后蒸发溶剂来将着色剂结合到核聚合物中。在本公开的另一方面，溶剂的蒸发是单或双乳液溶剂蒸发过程。也可以通过熔化核聚合物并将着色剂直接溶解和/或悬浮在纯聚合物熔体中来将着色剂结合到核聚合物中。应当理解，这种方法可用于将着色剂结合到聚合物中以形成无层颗粒和/或颗粒壳。

用于制备半永久性纹身油墨的水凝胶基质或媒介通过用蛋白质将多糖或粘多糖交联并将着色剂加载到水凝胶基质中来形成。蛋白质包括全长蛋白质和多肽片段二者，在任一情况下都可以是天然的、重组产生的或化学合成的。多糖包括多糖和粘多糖。

在Feijen的美国专利号5,041,292中公开了一种水凝胶，其中可以将着色剂结合到纹身油墨中。该水凝胶包含蛋白质、多糖和在其间提供网络连接的交联剂，其中基质中多糖与蛋白质的重量比在约10:90至约90:10的范围内。当将水凝胶基质施用于真皮时，着色剂被以足以提供颜色的量混合到该基质中。

合适的多糖的实例包括肝素、分馏的肝素、乙酰肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和右旋糖酐，包括Yannas等人在美国专利号4,060,081中描述的化合物。优选使用肝素或肝素类似物，原因是似乎降低了免疫原性。水凝胶的蛋白质组分可以是全长蛋白质或多肽片段。蛋白质可以是天然形式、重组产生的或化学合成的。蛋白质组合物也可以是全长蛋白质和/或片段的混合物。通常，蛋白质选自白蛋白、酪蛋白、纤维蛋白原、γ-球蛋白、血红蛋白、铁蛋白和弹性蛋白。蛋白质组分也可以是合成多肽，诸如聚(α-氨基酸)、聚天冬氨酸或聚谷氨酸。白蛋白是基质的优选的蛋白质组分，因为白蛋白是通过蛋白水解酶在血液和组织中可生物降解的内源性材料。此外，白蛋白防止血小板粘附，且无毒无热原。

在形成含有着色剂的水凝胶中，将多糖或粘多糖和蛋白质溶解在水性介质中，然后添加形成酰胺键的交联剂。用于该过程的优选的交联剂是碳二亚胺，优选水溶性二亚胺，例如N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺。在该方法中，将交联剂在酸性pH和约0℃至50℃、优选约4至约37℃的温度下添加至多糖和蛋白质的水溶液中，并使其反应长达约48小时。然后通常通过离心，分离如此形成的水凝胶，并用合适的溶剂洗涤以除去未偶联的物质。

替代地，用具有至少两个醛基的交联剂处理所选择的多糖或粘多糖和蛋白质的混合物以在组分之间形成席夫碱键。然后用适当的还原剂还原这些键以得到稳定的碳-氮键。

一旦形成水凝胶，则通过将水凝胶浸入着色剂的溶液或分散液中而将其加载上着色剂。然后蒸发溶剂。平衡后，将经加载的水凝胶在环境条件下真空干燥并储存。

用于制备水凝胶媒介的聚合物的优选的实施方案的实例包括以下中的一种或其组合：藻酸盐、藻酸盐与壳聚糖盐酸盐的组合、甲基丙烯酸酯改性的透明质酸(HA-MA)、硫醇化的透明质酸(HA-SH)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)、聚乙二醇(PEG)、聚己内酯(PCL)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、以PCL、PLLA、PLGA或PEG的任何组合的二嵌段或三嵌段共聚物、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、聚原酸酯和/或脂族或芳族聚酸酐或脂族-芳族均聚酸酐，诸如聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷](poly(CPP))、聚[1,6-双(对羧基苯氧基)己烷](poly(CPH))、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]和/或聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]-共-对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-共-对苯二甲酸酯(P(BHET-EOP/BHET)，80/20)。

实际上可以将任何着色剂加载到水凝胶媒介中，条件是考虑到表面考虑因素，诸如表面电荷、尺寸、几何形状和亲水性。例如，高分子量着色剂的结合和释放通常需要通常具有较低交联度的水凝胶。带电荷着色剂的释放将强烈地受到水凝胶中可用的电荷和电荷密度以及周围介质的离子强度的影响。

着色剂从媒介中释放的速率也可以受到水凝胶制剂的后处理的影响。例如，通过使配制的水凝胶与活化的肝素(即，与羰基二咪唑和糖精反应过的肝素)或与每分子含有一个醛基的肝素反应，可以增加水凝胶表面处的肝素浓度。水凝胶表面处高浓度的肝素在生理学pH值下将形成带正电荷的着色剂的额外“屏障”。获得相同结果的另一种方法是用带正电荷的大分子化合物如硫酸鱼精蛋白、聚赖氨酸或类似的聚合物处理水凝胶。改变水凝胶渗透性的另一种方法是用含有亲水性和疏水性嵌段二者的可生物降解的嵌段共聚物处理表面。亲水性嵌段可以是带正电荷的聚合物如聚赖氨酸，而亲水性嵌段可以是可生物降解的聚(α-氨基酸)，诸如聚(L-丙氨酸)、聚(L-亮氨酸)或类似的聚合物。

用作着色剂的媒介以形成半永久性纹身的另一种缓释系统是包封在微胶囊内的着色剂和酶，该微胶囊具有由被该酶特异性降解的聚合物形成的核和速率控制外皮。当核降解时，壳的完整性会丧失，从而导致着色剂突然从胶囊中释放出来。在这种类型的系统中，微胶囊由聚合物制成的核组成，围绕该核的是离子结合的外皮或壳。外皮或壳的完整性取决于核的结构。酶用生物活性物质包封，以待在制造微胶囊的核期间释放。选择酶以将核降解至核不再能够维持外皮完整性的程度，从而使得胶囊瓦解。这样的系统的一个实例由离子性交联的多糖藻酸钙组成，其由聚-L-赖氨酸的聚阳离子外皮离子性包覆。用于降解由聚-L-赖氨酸包覆的藻酸钙微胶囊的酶是来自细菌Beneckea pelagio或Pseudomonasputida的藻酸酶。存在降解大多数天然存在的聚合物的酶。例如，胶囊核可以由几丁质形成以待用几丁质酶降解。其他天然或合成聚合物也可以使用，并用适当的酶(通常是氢化酶)降解。

特别优选的可生物吸收的聚合物媒介是聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯三嵌段共聚物。该聚合物包含在亲水环境中水解的酯键。在一些实施方案中，可生物降解的聚合物基质应占颗粒的约30％至约99％。

在一些实施方案中，核包含以下中的一种或多种：藻酸盐、壳聚糖盐酸盐、甲基丙烯酸酯改性的透明质酸(HA-MA)、硫醇化的透明质酸(HA-SH)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)和聚乙二醇(PEG)。

在一些实施方案中，壳包含以下中的一种或多种：聚己内酯(PCL)；聚L-乳酸(PLLA)；聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)；以PCL、PLLA、PLGA或聚乙二醇(PEG)的任何组合的二嵌段或三嵌段共聚物；聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)；聚原酸酯(POE)；聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)；和脂族或芳族聚酸酐或脂族-芳族均聚酸酐，诸如聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷](poly(CPP))、聚[1,6-双(对羧基苯氧基)己烷](poly(CPH))、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]或聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]-共-对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-共-对苯二甲酸酯(P(BHET-EOP/BHET)，80/20)。在一些实施方案中，壳包含上述聚合物中任意的一种或多种，其中总聚合物重量/颗粒重量为约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约96%、约97%、约98%或约99%。在一些实施方案中，壳包含上述聚合物中任意的一种或多种，其中总聚合物重量/颗粒重量为约5%至约15%、约10%至约20%、约15%至约25%、约20%至约30%、约25%至约35%、约30%至约40%、约35%至约45%、约40%至约50%、约45%至约55%、约50%至约60%、约55%至约65%、约60%至约70%、约65%至约75%、约70%至约80%、约75%至约85%、约80%至约90%、约85%至约95%或约90%至约99%。

在一些实施方案中，壳包含聚己内酯(PCL)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含聚L-乳酸(PLLA)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。包含PLGA的壳中丙交酯与乙交酯的比率可以为约5:95、约10:90、约15:85、约20:80、约25:75、约30:70、约35:65、约40:60、约45:55、约50:50、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10或约95:5。

在一些实施方案中，壳包含以PCL、PLLA、PLGA或聚乙二醇(PEG)的任何组合的二嵌段或三嵌段共聚物，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含聚原酸酯(POE)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含脂族或芳族聚酸酐或脂族-芳族均聚酸酐，诸如聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷](poly(CPP))、聚[1,6-双(对羧基苯氧基)己烷](poly(CPH))、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]或聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]-共-对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-共-对苯二甲酸酯(P(BHET-EOP/BHET)，80/20)，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含以聚(双(对羧基苯氧基)甲烷)(poly(CPM))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))的任何组合的二嵌段共聚物，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含以聚(1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷)(poly(CPP))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))的任何组合的二嵌段共聚物，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含以聚(1,4-双(对羧基苯氧基)丁烷)(poly(CPB))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))的任何组合的二嵌段共聚物，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳包含以聚(1,6-双(对羧基苯氧基)己烷)(poly(CPH))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))的任何组合的二嵌段共聚物，其中聚合物重量/颗粒重量为约5%至约90%、约10%至约90%、约15%至约90%、约20%至约90%、约25%至约90%、约30%至约90%、约35%至约90%、约40%至约90%、约45%至约90%、约50%至约90%、约55%至约90%、约60%至约90%、约65%至约90%、约70%至约90%、约75%至约90%或约80%至约90%。

在一些实施方案中，壳和/或核还包含聚集剂。在一些实施方案中，聚集剂是氰基丙烯酸烷基酯单体。氰基丙烯酸烷基酯单体可以是氰基丙烯酸甲酯、氰基丙烯酸正丁酯、氰基丙烯酸异丁酯、氰基丙烯酸正己酯、氰基丙烯酸2-己酯、氰基丙烯酸2-辛酯、氰基丙烯酸甲氧基异丙酯或其组合。聚集剂可以以下比率存在于壳和/或核中：约0.2%至约75%、约0.3%至约75%、约0.4%至约75%、约0.5%至约75%、约0.6%至约75%、约1%至约75%、约2%至约75%、约3%至约75%、约4%至约75%、约5%至约75%、约10%至约75%, (g/g)、约15%至约75%、约20%至约75%、约25%至约75%、约30%至约75%、约35%至约75%、约40%至约75%、约45%至约75%、约50%至约75%、约55%至约75%、约60%至约75%、约65%至约75%、约70%至约75%、约0.2%至约74%、约0.2%至约73%、约0.2%至约72%、约0.2%至约71%、约0.2%至约70%、约0.2%至约65%、约0.2%至约60%、约0.2%至约55%、约0.2%至约50%、约0.2%至约45%、约0.2%至约40%、约0.2%至约35%、约0.2%至约30%、约0.2%至约25%、约0.2%至约20%、约0.2%至约15%、约0.2%至约10%或约0.2%至约5% w/w (聚集剂/核聚合物或聚集剂/壳聚合物)。

着色剂释放的速率和程度涉及数种机理。在非常高分子量的颜料的情况下，释放速率更多地取决于媒介生物吸收的速率。在较低分子量的颜料的情况下，颜料释放的速率更主要由扩散决定。在任一情况下，取决于所选的媒介组成，离子交换也可以在总体释放曲线中起主要作用。

在一些实施方案中，着色剂释放可表现出“滞后期”，在“滞后期”中降解非常缓慢或几乎不可察觉，随后是着色剂的快速释放。将本发明的颗粒设计成在施用后约2至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约3至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约4至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约5至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约6至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约7至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，本发明的颗粒被设计为在施用后约8至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，将本发明的颗粒设计成在施用后约9至约12个月的时间段内被吸收。在一些实施方案中，本发明的颗粒被设计为在施用后约10至约12个月的时间段内被吸收。

在一些实施方案中，本公开涉及一种组合物或药物组合物，其包含美容有效量的本文公开的聚合物中的任一种或组合的组合物，使得该组合物在约2个月至约12个月的时间段内防止一种或多种着色剂的吸收。

纹身油墨本身可以是媒介。媒介可以是有色颗粒，该颗粒可以任选地经过物理或化学改性以无限期地保留在真皮中。替代地，可以将这些媒介设计为自发溶解或被生物吸收，使它们在预定时间段后消失，以形成半永久性纹身。在其他实施方案中，这些由颜料组成的媒介对特定的外部施加的能量源敏感，诸如热、声(超声)、光(例如，激光、红外光或紫外光)、电、磁、化学品、酶、机械或任何其他类型的能量或能量组合。用适合的能量源处理经纹身的皮肤以物理或化学方式充分地改变了纹身颜料，从而消除纹身颜料，并因此按需擦除纹身。

颗粒可以具有任何形状或大小。例如，颗粒的平均直径可小于约5 mm或2 mm，或小于约1 mm，或小于约500微米，小于约200微米，小于约100微米，小于约60微米，小于约50微米，小于约40微米，小于约30微米，小于约25微米，小于约10微米，小于约3微米，小于约1微米，小于约300 nm，小于约100 nm，小于约30 nm或小于约10 nm。优选地，颗粒小于约100微米。

颗粒可以是球形或非球形的。例如，颗粒可以是椭圆形或细长的，或具有诸如由S.Mitragotri等人于2007年9月7日提交的题为“Engineering Shape of Polymeric Micro-and Nanoparticles”的美国专利申请序列号11/851,974 (2008年5月15日作为美国公开号2008/0112886公开)；由S. Mitragotri等人于2007年9月7日提交的题为“EngineeringShape of Polymeric Micro- and Nanoparticles”的国际专利申请号PCT/US2007/077889(2008年3月13日作为WO 2008/031035公开)；由J. Lahann等人于2005年11月10日提交的题为“Multi-phasic Nanoparticles”的美国专利申请序列号11/272,194 (2006年9月14日作为美国公开号2006/0201390公开)；或由J. Lahann等人于2007年6月15日提交的题为“Multi-Phasic Bioadhesive Nan-Objects”的美国专利申请序列号11/763,842(2007年10月11日作为美国公开号2007/0237800公开)公开的其他形状，这些文献中每一个通过引用并入本文。非球形颗粒的平均直径是具有与非球形颗粒相同体积的完美球形的直径。如果颗粒是非球形的，则颗粒可以具有例如椭圆形、立方体、纤维、管、棒的形状或不规则形状。在某些情况下，颗粒可能是中空或多孔的。其他形状也是可能的，例如，核/壳结构(例如，具有不同的组成)、矩形盘、高长径比矩形盘、高长径比棒、蜗杆、扁椭圆形、长椭圆形、椭圆形盘、UFO、圆盘、圆桶、子弹、药丸、滑轮、双凸透镜、带、小方饺、扁丸、双锥体、金刚石盘、凹口盘、细长的六角形盘、炸玉米卷、起皱的长椭圆形、起皱的扁椭圆形、多孔椭圆盘、基本上金字塔形、圆锥形或基本上圆锥形或类似形状。

如本文所用，“美容有效量”、“美容有效剂量”或“美容可接受量”是指足以在约1至约60个或更多月的预定时间段内防止或抑制着色剂在受试者体内的吞噬的量。在一些实施方案中，期望的美容效果取决于纹身设计或纹身设计所希望为临时的程度。因此，美容效果可以是与生物降解相关的时间段的减少，或所述一种或多种着色剂从颗粒的释放和/或在施用于受试者后吞噬的(部分或完全)抑制或从受试者的真皮消除。美容有效量也可以是减少施用给受试者后引起的毒性或免疫反应所需的量。在一些实施方案中，可以基于受试者的年龄、健康状况、个头和性别来确定免疫应答。在一些实施方案中，美容有效量也可以基于对受试者对治疗的反应的监测来确定。

在整个说明书中使用术语“受试者”来描述向其提供或施用根据本发明的组合物进行治疗的动物。为了治疗特定受试者诸如人类特有的那些病症，术语“患者”可以互换地使用。在本发明的描述中的某些情况下，术语“受试者”将指人类受试者。在一些实施方案中，受试者可以是向其提供或施用本发明的哺乳动物。在一些实施方案中，受试者可以是向其提供或施用本发明的非哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是驯化的哺乳动物诸如犬、马、猫、猪、牛、鼠、山羊、绵羊或其他驯化的哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者是需要对皮肤进行标识或标记的非人类的驯化的家畜。

本文所用的术语“色素障碍”是指涉及皮肤色素(例如黑色素)的障碍。色素障碍的实例包括但不限于所有形式的白化病、黄褐斑、皮肤损伤后色素缺失、白癜风和皮肤的任何失调的色素分泌。

如本文所用，“施用(administer)”或“施用(administering)”是指以美容有效的方式将本发明中使用的组合物递送至受试者的任何方法。优选地，将组合物施用到皮肤的真皮和/或表皮层中。

术语“盐”是指与无机和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。这些酸和碱的实例是本领域普通技术人员众所周知的。根据本发明的盐可以以多种形式使用，例如无水或水合结晶形式。在一些实施方案中，盐可以是受试者生理上耐受的盐。在本发明的一些实施方案中，术语“盐”是指一种或多种可用于根据本发明的净化产品中的无水化合物。根据本发明的盐可以其无水形式或以水合结晶形式(即与一个或多个水分子络合或结晶)存在。适用于本发明的净化盐例如包括一元、二元和三元盐或一元、二元和三元盐的混合物。活性组合物组分的盐是用相对无毒的酸或碱制备的，这取决于本文所述化合物上可见的特定取代基。当本发明的组分包含相对酸性的官能团时，可以通过使中性形式的这类化合物与足够量的纯净或在合适的惰性溶剂中的所需碱接触而获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物包含相对碱性的官能团时，可以通过使这样的化合物的中性形式与足够量的纯净或在合适的惰性溶剂中的所需酸接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，以及衍生自相对无毒的有机酸的盐，所述有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐诸如精氨酸盐等，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(例如参见Berge等人，Journalof Pharmaceutical Science 66:1-19 (1977))。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性官能团，这使得这些化合物可以转化为碱加成盐或酸加成盐。本领域技术人员已知的其他药学上可接受的载体适用于本发明。盐倾向于更可溶于相应游离碱形式的水性或其他质子溶剂中。在其他情况下，制剂可以是4.5至5.5的pH范围内的以1 mM-50 mM组氨酸、0.1％-2％蔗糖、2％-7％甘露醇的冻干粉末，在使用前将其与缓冲液混合。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treated)”或“治疗(treating)”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic或preventative)措施二者，其中目的是预防或减慢(减轻)生理病症、障碍或疾病，或获得有益或期望的临床结果。为了本公开的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于减轻症状；减轻病症、障碍或疾病的程度；病症、障碍或疾病的稳定状态(即不恶化)；延缓病症、障碍或疾病的发作或减慢其进展；改善病症、障碍或疾病状态或使其(无论是部分或全部)缓解，无论是可检测的还是不可检测的；改善患者不一定能分辨出的至少一个可测量的物理参数；或改进或改善病症、障碍或疾病。治疗包括引起临床上显著的反应而没有过高程度的副作用。因此，“色素障碍的治疗”或“治疗色素障碍”是指预防、减轻或改善与受试者皮肤的一部分或区域内的色素缺乏有关的任何主要现象或次要症状的活性。在一些实施方案中，与色素缺乏有关的症状是受试者皮肤的变色，该症状在施用本文公开的组合物后得到改善或改变。

如本文所用，术语“聚(N-异丙基丙烯酰胺)”或“PNIPAM”是指由表2所示的单体及其官能化衍生物以及其式I的官能化衍生物制得的聚合物。

表2

N-异丙基丙烯酰胺可以例如与甲基丙烯酸或丙烯酸和二丙烯酰胺交联剂共聚，以赋予pH和/或温度敏感性。

式I

其中

R₁是羧基、羟基、氨基或C₁至C₃₀烷基、烯基、烷氧基、苯基、环烷基、苯氧基、芳基或烷基氨基；

且R₂是羧基、羟基、氨基或C₁至C₃₀烷基、烯基、烷氧基、苯基、环烷基、苯氧基、芳基或烷基氨基。在一些实施方案中，R₁和/或R₂独立地选为C₁至C₂₅、C₁至C₂₀、C₁至C₁₅、C₁至C₁₀或C₁至C₅烷基、烯基、烷氧基、苯基、环烷基、苯氧基、芳基或烷基氨基。

还应理解，为清楚起见，在分开的实施方案的上下文中描述的本公开的某些特征也可以以组合提供在单个实施方案中。相反，为简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本公开的各种特征也可以分开地或以任何合适的子组合提供。

应当理解，在适用的情况下，本公开涵盖本文所述颗粒的任何一种或多种组分的立体异构体、非对映异构体和光学立体异构体的用途。另外，应当理解，本公开的组分的立体异构体、非对映异构体和光学立体异构体及其混合物均在本公开的范围内。作为非限制性实例，混合物可以包含着色剂的外消旋物、聚合物或水凝胶，混合物可以包含颗粒中的一种或多种组分的与其他相比不等比例的一种特定立体异构体。另外，化合物可以以基本上纯的立体异构体、非对映异构体和光学立体异构体(诸如差向异构体)的形式提供。

本文所述的组分可以是不对称的(例如，具有一个或多个立体中心)。除非另外指出，否则所有立体异构体、诸如对映异构体和非对映异构体，均旨在包括在本公开的范围内。包含不对称取代的碳原子的化合物可以旋光或外消旋形式分离。由旋光起始原料制备旋光形式的方法是本领域已知的，诸如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃、C-N双键等的许多几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，并且所有这样的稳定的异构体均在本公开中考虑。化合物的顺式和反式几何异构体也包括在本公开的范围内，并且可以作为异构体的混合物或作为经分离的异构体形式分离。当一种化合物在其结构或名称中指定了能够立体异构或几何异构而未提到具体的R/S或顺/反构型时，意在考虑所有这样的异构体。

化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的众多方法中的任一种来进行，包括例如使用手性拆分酸进行分级重结晶，所述手性拆分酸是旋光的成盐性有机酸。用于分级重结晶方法的合适的拆分剂包括但不限于：旋光性酸，诸如D和L形式的酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸以及各种旋光性樟脑磺酸诸如β-樟脑磺酸。适用于分级结晶方法的其他拆分剂包括但不限于立体异构纯形式的-甲基-苄基-胺(例如S和R形式，或非对映体纯形式)、2-苯基甘氨酸、去甲麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙基胺、1,2-二氨基环己烷等。外消旋混合物的拆分也可以通过在装有旋光拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来进行。合适的洗脱溶剂组成可以由本领域技术人员确定。

任何一种或多种颗粒组分也可以包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键的交换以及质子的伴随迁移引起。互变异构形式包括质子转移互变异构体，其是具有相同的经验式和总电荷的异构质子化状态。质子转移互变异构体的实例包括但不限于酮-烯醇对、酰胺-亚氨酸对、内酰胺-内酰亚胺对、酰胺-亚氨酸对、烯胺-亚胺对以及质子可占据杂环系统的两个或更多个位置的环状形式，包括但不限于1H-和3H-咪唑、1H-，2H-和4H-1,2,4-三唑、1H-和2H-异吲哚以及1H-和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡状态或通过适当的取代而在空间上锁定为一种形式。

本公开的颗粒可以包括颗粒中任何组分的水合物和溶剂化物形式。例如，核聚合物或水凝胶、基质材料和着色剂可以无水和/或非溶剂化形式存在。组分还可以包括出现在中间体或最终化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。

在一些实施方案中，所述化合物或其盐是基本上分离的。部分分离可以包括例如富含本公开的着色剂或颗粒的组合物。基本分离可包括含有至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99重量％的本公开的化合物或其盐的组合物。分离化合物或颗粒及其各自的盐的方法是本领域常规的。

在一些实施方案中，可以使用合适的载体将颗粒施用于受试者。例如，在一个实施方案中，通过注射来施用颗粒。颗粒可以溶液、悬浮液或乳液的形式施用。用于注射颗粒的合适载体包括但不限于无菌盐水、磷酸盐缓冲盐水、水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、其合适的混合物，以及油诸如植物油。制剂可以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，诸如分散剂、pH调节剂、缓冲剂、表面活性剂、等渗剂、防腐剂、水溶性聚合物(例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐和羧甲基纤维素)、温度响应性聚合物(例如聚(N-异丙基丙烯酰胺)及其共聚物、聚[甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯](pDMAEMA)、羟丙基纤维素、聚(乙烯基己内酰胺)和聚乙烯基甲基醚)及其组合。水溶性聚合物、温度响应性聚合物(例如聚(N-异丙基丙烯酰胺)及其共聚物、聚[甲基丙烯酸2-(二甲基氨基)乙酯](pDMAEMA)和羟丙基纤维素、聚(乙烯基己内酰胺)和聚乙烯基甲基醚)可以载体溶液的约0.1%至约50%、约0.2%至约50%、约0.3%至约50%、约0.4%至约50%、约0.5%至约50%、约1%至约50%、约2%至约50%、约0.1%至约50%、约3%至约50%、约4%至约50%、约5%至约50%.约10%至约50%、约15%至约50%、约20%至约50%、约25%至约50%、约30%至约50%、约35%至约50%、约40%至约50%、约45%至约50%、约0.1%至约49%、约0.1%至约48%、约0.1%至约47%、约0.1%至约46%、约0.1%至约45%、约0.1%至约40%、约0.1%至约35%、约0.1%至约30%、约0.1%至约25%、约0.1%至约20%、约0.1%至约15%、约0.1%至约10%、约0.1%至约5%、约0.1%至约4%、约0.1%至约3%、约0.1%至约2%或约0.1%至约1% w/v的范围存在于载体中。

在另一个实施方案中，可以使用合适的载体将颗粒局部地施用于受试者皮肤表面或粘膜表面。用于局部施用颗粒的合适载体包括凝胶、泡沫、软膏、糊膏和洗剂。乳霜或洗剂可以包含例如以任何顺序(例如水包油或油包水)分布的疏水性和亲水性材料(例如油和水)的乳液，并且颗粒可以存在于任何一个或多个乳液相中。

如本文所用，“载体溶液”可以指上面列出的任何合适的载体。在一些实施方案中，载体溶液在本发明的颗粒或组合物外。在一些实施方案中，载体溶液在本发明的颗粒或组合物内。例如，载体溶液可以位于颗粒的层之间。

如本文所用，“亲水性”是指具有易于与水相互作用的强极性基团的物质。

如本文所用，“疏水性”是指对水缺乏亲和力的物质；倾向于排斥且不吸收水，并且既不溶于水也不与水混合。

“连续相”是指其中悬浮有固体或分散有另一种液体的液滴的液体，有时称为外相。这也指其中分布有固体或流体颗粒的胶体的流体相。如果连续相是水(或另一种亲水性溶剂)，则水溶性或亲水性药物将溶解在连续相中(与分散是相反的)。在多相制剂(例如乳液)中，离散相悬浮或分散在连续相中。

“乳液”是包含均匀共混在一起的不混溶组分的混合物的组合物。在特定的实施方案中，不混溶组分包括亲脂性组分和水性组分。乳液是如下的制剂，其中一种液体以珠滴分布在第二液体整个主体中。分散的液体是不连续相，而分散介质是连续相。当油为分散的液体而水溶液为连续相时，称为水包油乳液，而当水或水溶液为分散的相而油或油质物质为连续相时，则称为油包水乳液。油相和水相中的任一或两者均可以包含一种或多种表面活性剂、乳化剂、乳液稳定剂、缓冲剂和其他赋形剂。优选的赋形剂包括表面活性剂，尤其是非离子表面活性剂；乳化剂，尤其是乳化蜡；和液体非挥发性非水物质，特别是二醇诸如丙二醇。油相可以包含其他油性药学上许可的赋形剂。例如，诸如羟基化蓖麻油或芝麻油的物质可以在油相中用作表面活性剂或乳化剂。

“洗剂”是低至中粘度的液体制剂。洗剂可以包含细粉状物质，这些物质可通过使用悬浮剂和分散剂溶于分散介质中。替代地，洗剂可以具有作为分散相的液体物质，该物质与媒介不混溶并且通常通过乳化剂或其他合适的稳定剂而分散。洗剂的流动性使其可在宽的表面积上快速均匀地施用。洗剂通常旨在在皮肤上干燥，在皮肤表面留下其药物组分的薄涂层。

“乳霜”是“水包油”或“油包水型”的粘性液体或半固体乳液。乳霜可以包含乳化剂和/或其他稳定剂。在一个实施方案中，制剂为乳霜形式，其粘度大于1000厘沲，通常在20,000-50,000厘沲的范围内。与软膏相比，乳霜通常在时间上更优选，因为它们通常更易于铺展且更易于去除。

乳霜和洗剂之间的差异是粘度，而粘度取决于各种油的量/使用以及用于制备制剂的水的百分数。乳霜通常比洗剂更稠，可具有多种用途并且经常使用更为多种的油/黄油，这取决于对皮肤的期望效果。在乳霜制剂中，对于总体100％，水基百分数为总体的约60-75％，而油基百分数为总体的约20-30％，其他百分数为乳化剂、防腐剂和添加剂。

“软膏”是包含软膏基础物和任选的一种或多种活性剂的半固体制剂。合适的软膏基础物的实例包括烃基础物(例如凡士林、白凡士林、黄色软膏和矿物油)；吸收基础物(亲水性凡士林、无水羊毛脂、羊毛脂和冷霜)；水可去除的基础物(例如，亲水性软膏)和水溶性基础物(例如，聚乙二醇软膏)。通常糊膏与软膏的不同在于它们包含较大百分数的固体。与用相同组分制备的软膏相比，糊膏通常具有更高的吸收性和更少的油腻性。

“凝胶”是半固体系统，其包含在液体媒介中的小分子或大分子的分散体，其通过溶解或悬浮在液体媒介中的增稠剂或聚合材料的作用而变成半固体。液体可包括亲脂性组分、水性组分或两者。一些乳液可以是凝胶或另外包括凝胶组分。但是，一些凝胶不是乳液，因为它们不包含不混溶组分的均质共混物。合适的胶凝剂包括但不限于改性纤维素诸如羟丙基纤维素和羟乙基纤维素；Carbopol®均聚物和共聚物；及其组合。液体媒介中的合适溶剂包括但不限于二甘醇单乙醚；和亚烷基二醇，诸如丙二醇；异山梨醇二甲酯；醇，诸如异丙醇和乙醇。溶剂通常根据其溶解药物的能力来选择。改善制剂的皮肤感觉和/或润肤性的其他添加剂也可以掺入。这样的添加剂的实例包括但不限于肉豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯、苯甲酸C12-C15烷基酯、矿物油、角鲨烷、环聚二甲基硅氧烷、癸酸/辛酸甘油三酯及其组合。

如本文所用，“水凝胶”定义为，当有机聚合物(天然或合成的)凝固或固化以产生截留水或其他溶液分子以形成凝胶的三维开口网格结构时，所形成的物质。固化可以例如通过聚集、凝结、疏水相互作用或交联发生。

泡沫由与气态推进剂组合的乳液组成。气态推进剂主要由氢氟烷烃(HFA)组成。合适的推进剂包括HFA诸如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA 134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(HFA227)，但目前已获批准或可能会被批准用于医疗用途的这些与其他HFA的混合物和互混物是合适的。推进剂优选不是在喷射期间会产生易燃或爆炸性蒸气的烃类推进剂气体。此外，组合物优选不包含在使用期间会产生易燃或爆炸性蒸气的挥发性醇。

缓冲剂用于控制组合物的pH。优选地，所述(一种或多种)缓冲剂将组合物的pH维持在约4的pH至约7.5的pH，更优选地维持在约4的pH至约7的pH，最优选地维持在约5的pH至约7的pH。在一个优选的实施方案中，缓冲剂是三乙醇胺。

防腐剂可用于防止真菌和微生物的生长。合适的抗真菌剂和抗微生物剂包括但不限于苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、丙酸钠、苯扎氯铵、苄索氯铵、苄醇、十六烷基氯化吡啶鎓、氯丁醇、苯酚、苯乙醇和硫柳汞。

替代地，颗粒可以是粘膜粘附性的，并且可以将其喷雾到组织的粘膜表面。例如，颗粒可以由粘膜粘附性聚合物形成。粘膜粘附性聚合物可分为两类：水凝胶和亲水性聚合物。粘膜粘附性聚合物通常包含粘附于组织的官能团，诸如羧酸基、羟基和/或胺基。粘膜粘附性聚合物的种类包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、甲基纤维素(MC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、羟丙基纤维素(HPC)和其他纤维素衍生物、Carbopol、聚丙烯酸酯和交联聚丙烯酸酯、壳聚糖和其衍生物(N-三甲基壳聚糖)、丙烯酸类树脂(可以商品名Eudragits®获得)、聚(甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯)(PDMAEMA)及其组合。

在一些实施方案中，载体溶液包含稳定剂。如本文所用，“稳定剂”是指当添加到聚合材料中时将防止或减慢降解过程的物质。参见例如Concise Chemical and TechnicalDictionary, 第四增编版, Bennet, Chemical Publishing Co., NY, N.Y. (1986)。

在一些实施方案中，组合物还包含杀生物剂。如本文所用，“杀生物剂”是抑制或防止病原体生长的任何化合物。在一些实施方案中，杀生物剂是抗生素。在一些实施方案中，组合物还包含选自以下的抗微生物剂：阿米卡星(amikacin)、茴香霉素(anisomycin)、阿泊拉霉素(apramycin)、阿奇霉素(azithromycin)、杀稻瘟素S(blasticidin S)、布雷菲德菌素A(brefeldin A)、丁酰苷菌素(butirosin)、氯霉素(chloramphenicol)、氯四环素(chlortetracycline)、氯洁霉素(clindamycin)、克霉唑(clotrimazole)、环己酰亚胺(cycloheximide)、地氯霉素(demeclocycine)、地贝卡星(dibekacin)、二氢链霉素(dihydrostreptomycin)、强力霉素(doxycycline)、耐久霉素(duramycin)、依米丁(emetine)、红霉素(erythromycin)、夫西地酸(fusidic acid)、G438、庆大霉素(gentamicin)、烟曲霉酸(helvolic acid)、潮霉素B(hygromycin B)、交沙霉素(josamycin)、卡那霉素(kanamycin)、奇罗霉素(kirromycin)、林可霉素(lincomycin)、甲氯环素(meclocycline)、美帕曲星(mepartricin)、麦迪霉素(midecamycin)、米诺环素(minocycline)、新霉素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、诺尔斯菌素(nourseothricin)、竹桃霉素(oleandomycin)、土霉素(oxytetraeycline)、巴龙霉素(paromomycin)、嘌呤霉素(puromycin)、雷帕霉素(rapamycin)、核糖霉素(rapamycin)、利福平(rifampicin)、利福霉素(rifamyein)、蔷薇霉素(rosamicin)、西苏霉素(sisomicin)、壮观霉素(spectinomycin)、螺旋霉素(spiramycin)、链霉素(streptomycin)、四环素(tetracycline)、甲砜霉素(thiaphenicol)、硫链丝菌素(thiostrepton)、托普霉素(tobramycin)、衣霉素(tunicamycin)、泰乐菌素(tylosin)、紫霉素(viomycin)、维及霉素(virginiamycin)、喜树碱(camptothecin)、10-脱乙酰基浆果赤霉素III(10-deacetylbaccatin Ill)、氮杂胞嘧啶核苷(azacytidine)、7-氨基放射菌素D(7-aminoactinomycin D)、8-羟基喹啉(8-quinolinol)、9-二氢-1,3-乙酰基巴卡亭III(9-dihydro-1,3-acetylbaccatin Ill)、阿柔比星(aclarubicin)、放线菌素D(actinomycinD)、放线菌I素(actinomycin I)、放线菌素V(actinomycin V)、巴佛洛霉素A1(bafilomycinA1)、博来霉素(bleomycin)、卷曲霉素(caprecmycin)、色霉素(chromomycin)、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、顺二氯二氨合铂(II)、香豆霉素A1(coumermycinA1)、L(+)-乳酸、细胞松弛素B(cytochalasin B)、细胞松弛素D(cytochalasin D)、达卡巴嗪(dacarbazine)、道诺霉素(daunorubicin)、远霉素A(distamycin A)、阿霉素(doxorubicin)、棘霉素(echinomycin)、恩诺沙星(enrofloxacin)、依托泊苷(etoposide)、氟甲喹(flumequine)、间型霉素(formycin)、更昔洛韦(ganciclovir)、甲硝哒唑(metronidazole)、光神霉素A(mithramycin A)、丝裂霉素C(mitomycin C)、萘啶酸、诺加霉素(nogalamycin)、无活菌素(nonactin)、新生霉素(novobiocin)、氧氟沙星(ofloxacin)、奥索利酸(oxolinic acid)、紫杉醇(paclitaxel)、吩嗪(phenazine)、腐草霉素(phleomycin)、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、西奈芬净(sinefungin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、琥珀酰磺胺噻唑(succinylsulfathiazole)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺地托辛(sulfadimethoxine)、磺胺胍purum(sulfaguanidine purum)、磺胺甲嘧啶(sulfamethazine)、磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine)、对氨基苯磺酰胺(sulfanilamide)、磺胺喹噁啉(sulfaquinoxaline)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、磺胺噻唑(sulfathiazole)、甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim)、杀结核菌素(tubercidin)、5-氮杂胞苷(5-azacytidine)、间型霉素A(formycin A)、(+)-6-氨基青霉烷酸、7-氨基去乙酰氧头孢烷酸(7-aminodesacetoxycephalosporanic acid)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、枯草菌素(bacitracin)、羧苄青霉素(carbenicillin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢唑啉(cefazolin)、头孢美唑(cefmetazole)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢磺啶(cefsulodin)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢氨苄(cephalexin)、头孢菌素C(cephalosporin C)、先锋霉素(cephalothin)、塞发莱定(cephradine)、氯洒西林(cloxacillin)、D-环丝氨酸(D-cycloserine)、双氯西林(dicloxacillin)、DL-青霉胺(DL-penicillamine)、益康唑(econazole)、乙胺丁醇(ethambutol)、溶葡球菌素(lysostaphin)、拉氧头孢(moxalactam)、萘夫西林(nafcillin)、日光霉素Z(nikkomycinZ)、硝基呋喃妥因(nitrofurantoin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素G(penicillin G)、苯氧乙基青霉素(phenethicillin)、苯氧基甲基青霉酸(phenoxymethylpenicillin acid)、磷霉素(phosphomycin)、吡哌酸(pipemidic acid)、哌拉西林(piperacillin)、瑞斯托霉素(ristomycin)、万古霉素(vancomycin)、2-巯基吡啶、4-溴钙霉素A23187(4-bromocalcimycin A23187)、丙甲菌素(alamethicin)、两性霉素B(amphotericin B)、钙霉素A23187(calcimycin A23187)、洗必泰(chlorhexidine)、粘菌素(colistin)、氢化可的松(hydrocortisone)、菲利宾菌素(filipin)、木霉素(gliotoxin)、短杆菌肽A(gramicidinA)、短杆菌肽D(gramicidin D)、离子霉素(ionomycin)、拉沙里菌素A(lasalocid A)、拉莫霉素(lanomycin)、莫能菌素(monensin)、N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺、那拉霉素(narasin)、尼日利亚菌素(nigericin)、尼生素(nisin)、制霉菌素(nystatin)、匹马菌素(pimaricin)、多粘菌素B(polymyxin B)、DL-青霉胺(DL-penicillamine)、多粘菌素E(polymyxin E)、吡喹酮(praziquantel)、盐霉素(salinomycin)、表面活性素(surfactin)、缬氨霉素(valinomycin)、(+)-地衣酸((+)-usnic acid)、咪康唑(miconazole)、1-脱氧甘露伊霉素(1-deoxymannojirimycin)、2-庚基-4-羟基喹啉-氧化物、虫草素(cordycepin)、1,10-菲咯啉、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、抗霉素(antimycin)、抗蛋白酶肽(antipain)、子囊霉素(ascomycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、巴佛洛霉素(bafilomycin)、浅蓝菌素(cerulenin)、氯喹(chloroquine)、美伐他汀(mevastatin)、卡那霉素A(concanamycin A)、卡那霉素C(concanamycin C)、环孢菌素A(cyclosporin A)、呋喃唑酮(furazolidone)、镰孢菌酸(fusaric acid)、格尔德霉素(geldanamycin)、短杆菌肽C(gramicidin C)、除莠霉素A(herbimycin A)、吲哚美辛(indomethacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、霉酚酸(mycophenolic acid)、粘噻唑(myxothiazol)、纺锤菌素(netropsin)、氯硝柳胺(niclosamide)、日光霉素(nikkomycin)、甲基脱氧野尻霉素、寡霉素(oligomycin)、杀青虫素A(piericidin A)、根赤壳菌素(radicicol)、星形孢菌素(staurosporine)、标桩菌素(stigmatellin)、磺胺胍(sulfaguanidine)、triacsin C、Paraceisin、利福昔明(rifaximin)、氯拉卡比(loracarbef)、厄他培南(ertapenem)、多利培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)、西司他丁(cilastatin)、美罗培南(meropenem)、头孢羟氨苄(cefadroxil)、头孢噻吩(cefalotin)、头孢洛芬(cefalothin)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢丙烯(cefprozil)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢氨苄(cefalexin)、头孢地尼(cefdinir)、头孢托仑(cefditoren)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢布烯(ceftibulen)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢吡肟(cefepime)、头孢他洛林酯(ceftaroline fosamil)、头孢吡普(ceftobiprole)、替考拉宁(teicopianin)、Telavanein、达托霉素(daptomycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地红霉素(dirithromycin)、罗红霉素(roxithromycin)、加替沙星(gatifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin)、Trovailoxacin、格帕沙星(grepafloxacin)、司帕沙星(sparfloxacin)、替马沙星(temafloxacin)、磺胺米隆(mafenide)、磺胺醋酰(sulfacetamide)、磺胺嘧啶银(silver suladiazine)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、磺胺异噁唑(sulfisoxazole)、磺胺米柯定(sulfonam idochrysoidine)、氯法齐明(clofazimine)、氨苯砜(dapsone)、乙硫异酰胺(ethionamide)、异烟肼(isoniazid)、吡嗪酰胺(pyrazinamide)、利福布汀(rifabutin)、利福喷丁(rifapentine)、胂凡纳明(arsphenamine)、磷霉素(fosfomycin)、木匹诺星(mupiroein)、平板霉素(platensimycin)、奎奴普丁(quinupristin)、达福普汀(dalfopristin)、替加环素(tigecycline)、头孢他啶(ceftazidime)、替硝唑(tinidazoie)、青蒿素(artemisinin)、青蒿琥酯(artestmate)、奎宁(quinine)、磺胺多辛-乙胺嘧啶(sulfadoxine pyrimethamine)、羟氯喹(hydroxychloroquine)、阿莫地喹(amodiaquine)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)、长效磺胺(sulphadoxine)、氯胍(proguanil)、甲氟喹(mefloquine)、阿托伐醌(atovaquone)、伯氨喹(primaquine)、和卤方特瑞(halofantrine)。在上述实施方案中的任一个中，所述抗微生物剂选自：庆大霉素(gentamicin)、亚胺培南(imipenem)、哌拉西林(piperacillin)、头孢他啶(ceftazidime)、氨曲南(aztreonam)、头孢曲松(ceftriaxone)、氨苄西林(ampicillin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、利奈唑胺(linezolid)、达托霉素(daptomycin)和卤方特瑞(halofantrine)。在一些实施方案中，所述抗微生物剂选自：茴香霉素(anisomyein)、阿泊拉霉素(apramycin)、杀稻温菌素S(blasticidin S)、布雷菲德菌素A(brefeldin A)、丁酰苷菌素(butirosin)、氯四环素(chlortetracycline)、克霉唑(clotrimazole)、环己酰亚胺(cycloheximide)、地美环素(demeclocycline)、地贝卡星(dibekacin)、二氢链霉素(dihydrostreptomycin)、耐久霉素(duramycin)、依米丁(emetine)、夫西地酸(fusidicacid)、G438、烟曲霉酸(helvolic acid)、潮霉素B(hygromycin B)、卡那霉素(kanamycin)、奇罗霉素(kirromycin)、林可霉素(lincomycin)、甲氯环素(meclocycline)、美帕曲星(mepartricin)、麦迪霉素(midecamycin)、奈替米星(netilmicin)、硝基呋喃妥因(nitrofurantoin)、诺尔斯菌素(nourseothricin)、竹桃霉素(oleandomycin)、巴龙霉素(paromomycin)、嘌呤霉素(puromycin)、雷帕霉素(rapamycin)、核糖霉素(rapamycin)、利福平(rifampicin)、利福霉素(rifamycin)、蔷薇霉素(rosamicin)、壮观霉素(spectinomycin)、螺旋霉素(spiramycin)、链霉素(streptomycin)、甲砜霉素(thiamphenicol)、喜树碱(camptothecin)、10-脱乙酰基浆果赤霉素III(10-deacetylbaccatin Ill)、氮杂胞嘧啶核苷(azacytidine)、7-氨基放射菌素D(7-aminoactinomycin D)、8-羟基喹啉(8-quinolinol)、9-二氢-1,3-乙酰基巴卡亭III(9-dihydro-1,3-acetylbaccatin Ill)、阿柔比星(aclarubicin)、放线菌素D(actinomycinD)、放线菌素I(actinomycin I)、放线菌素V(actinomycin V)、巴佛洛霉素A1(bafilomycinA1)、博来霉素(bleomycin)、卷曲霉素(caprecmycin)、色霉素(chromomycin)、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、顺二氯二氨合铂(II)、香豆霉素A1(coumermycinA1)、L(+)-乳酸、细胞松弛素B(cytochalasin B)、细胞松弛素D(cytochalasin D)、达卡巴嗪(dacarbazine)、道诺霉素(daunorubicin)、远霉素A(distamycin A)、阿霉素(doxorubicin)、棘霉素(echinomycin)、恩诺沙星(enrofloxacin)、依托泊苷(etoposide)、氟甲喹(flumequine)、间型霉素(formycin)、烟曲霉素(fumagillin)、更昔洛韦(ganciclovir)、木霉素(gliotoxin)、甲硝哒唑(metronidazole)、光神霉素A(mithramycinA)、丝裂霉素C(mitomycin C)、萘啶酸、纺锤菌素(netropsin)、硝基呋喃妥因(nitrofurantoin)、诺加霉素(nogalamycin)、无活菌素(nonactin)、新生霉素(novobiocin)、奥索利酸(oxolinic acid)、紫杉醇(paclitaxel)、吩嗪(phenazine)、腐草霉素(phleomycin)、吡哌酸(pipemidic acid)、蝴蝶霉素(rebeccamycin)、西奈芬净(sinefungin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、琥珀酰磺胺噻唑(succinylsulfathiazole)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺地托辛(sulfadimethoxine)、磺胺胍purum(sulfaguanidine purum)、磺胺甲嘧啶(sulfamethazine)、磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine)、对氨基苯磺酰胺(sulfanilamide)、磺胺喹噁啉(sulfaquinoxaline)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、磺胺噻唑(sulfathiazole)、杀结核菌素(tubercidin)、5-氮杂胞苷(5-azacytidine)、虫草素(cordycepin)、间型霉素A(formycin A)、(+)-6-氨基青霉烷酸、7-氨基去乙酰氧头孢烷酸(7-aminodesacetoxycephalosporanic acid)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄西林(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、枯草菌素(bacitracin)、羧苄青霉素(carbenicillin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢唑啉(cefazolin)、头孢美唑(cefmetazole)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢磺啶(cefsulodin)、头孢氨苄(cephalexin)、头孢菌素C(cephalosporin C)、先锋霉素(cephalothin)、塞发莱定(cephradine)、氯洒西林(cloxacillin)、D-环丝氨酸(D-cycloserine)、双氯西林(dicloxacillin)、DL-青霉胺(DL-penicillamine)、益康唑(econazole)、乙胺丁醇(ethambutol)、溶葡球菌素(lysostaphin)、拉氧头孢(moxalactam)、萘夫西林(nafcillin)、日光霉素Z(nikkomycin Z)、硝基呋喃妥因(nitrofurantoin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉酸(penicillic)、青霉素G(penicillin G)、苯氧乙基青霉素(phenethicillin)、苯氧基甲基青霉酸(phenoxymethylpenicillin acid)、磷霉素(phosphomycin)、吡哌酸(pipemidic acid)、哌拉西林(piperacillin)、瑞斯托霉素(ristomycin)、万古霉素(vancomycin)、2-巯基吡啶、4-溴钙霉素A23187(4-bromocalcimycin A23187)、丙甲菌素(alamethicin)、两性霉素B(amphotericin B)、钙霉素A23187(calcimycin A23187)、洗必泰(chlorhexidine)、克霉唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、氢化可的松(hydrocortisone)、菲利宾菌素(filipin)、木霉素(gliotoxin)、短杆菌肽A(gramicidin A)、短杆菌肽D(gramicidin D)、离子霉素(ionomycin)、拉沙里菌素A(lasalocid A)、罗奴霉素A(lonomycin A)、onensin(莫能菌素)、N-(6-氨基己基)-5-氯-1-萘磺酰胺、那拉霉素(narasin)、尼日利亚菌素(nigericin)、尼生素(nisin)、制霉菌素(nystatin)、酚嗪、匹马菌素(pimaricin)、DL-青霉胺(DL-penicillamine)、吡喹酮(praziquantel)、盐霉素(salinomycin)、2-庚基-4-羟基喹诺酮N-氧化物、1,6-二氮杂-5-氧代-L-正亮氨酸、8-羟基喹啉(8-quinolinol)、抗霉素(antimycin)、抗蛋白酶肽(antipain)、子囊霉素(ascomycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、巴佛洛霉素(bafilomycin)、浅蓝菌素(cerulenin)、氯喹(chloroquine)、西诺沙星(cinoxacin)、美伐他汀(mevastatin)、卡那霉素A(concanamycin A)、卡那霉素C(concanamycin C)、香豆霉素A1(coumermycin A1)、环孢菌素A(cyclosporin A)、呋喃唑酮(furazolidone)、根赤壳菌素(radicicol)、雷帕霉素(rapamycin)、星形孢菌素(staurosporine)、磺胺胍(sulfaguanidine)、triacsin C、甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim)、西司他丁(cilastatin)、美罗培南(meropenem)、头孢羟氨苄(cefadroxil)、左氧氟沙星(levofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、Trovailoxacin、格帕沙星(grepafloxacin)、Sparfioxacin、替马沙星(temafloxacin)、磺胺甲二唑(sulfamethizole)、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、偶氮磺胺(sulfonamidochrysoidine)、氯法齐明(clofazimine)、氨苯砜(dapsone)、乙硫异酰胺(ethionamide)、异烟肼(isoniazid)、吡嗪酰胺(pyrazinamide)、利福布汀(rifabutin)、利福喷丁(rifapentine)、胂凡纳明(arsphenamine)、磷霉素(fosfomycin)、木匹诺星(mupiroein)、平板霉素(platensimycin)、奎奴普丁(quinupristin)、达福普汀(dallopristin)、替加环素(tigecycline)、咪唑(imidazole)、Artemistin、青蒿琥酯(artesunate)、奎宁(quinine)、磺胺多辛-乙胺嘧啶(sulfadoxine pyrimethamine)、羟氯喹(hydroxychloroquine)、阿莫地喹(amodiaquine)、长效磺胺(sulphadoxine)、氯胍(proguanil)、甲氟喹(mefloquine)、阿托伐醌(atovaquone)、伯氨喹(primaquine)和卤方特瑞(halofantrine)。在一些实施方案中，所述抗微生物剂选自以下中的一种或组合：亚胺培南(imipenem)、哌拉西林(piperacillin)、氨曲南(aztreonam)、氨苄西林(ampicillin)、利奈唑胺(linezolid)、达托霉素(daptomycin)和卤方特瑞(halofantrine)。

抗微生物剂的量可以基于已知的剂量来确定，在一些实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的抗微生物剂。在一些实施方案中，与施用抗微生物剂本身相比，具有芳基酰胺化合物的药物组合物中的抗微生物剂的量可减少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。

在一些实施方案中，组合物还包含保湿剂。如本文所用，“保湿剂”是指促进水分保持的任何物质。合适的保湿剂包括多元醇或甘油。其他合适的保湿剂包括多元醇诸如乙二醇、丙二醇、三甘醇、四甘醇和山梨糖醇。

本文公开的任何颗粒、载体溶液或组合物可以是药物组合物中的组分。在任何这样的药物组合物中，组合物包含药学有效量的一种或多种公开的组合物和一种或多种药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药物组合物包含纳米颗粒，所述纳米颗粒包含药学有效量的一种或多种公开的组合物。在一些实施方案中，纳米颗粒是在均质或非均质混合物中的含聚合物的纳米颗粒，使得如果混合物均质，则纳米颗粒包含本文公开的相同或基本相同的组合物。在非均质混合物中，药物组合物包含多个纳米颗粒，所述纳米颗粒在每个颗粒内或多个颗粒中包含本文公开的不同组合物。

根据本发明，提供了改进的纹身油墨，做法是，将常规纹身颜料(例如，印度墨)掺入媒介中，这产生了由于其尺寸、附着于真皮成分或被细胞包封而保留在真皮中的颜料/媒介复合物。在本发明的该实施方案中，纹身油墨通过将可扩散的颜料颗粒截留到不可扩散的较大聚集体中而产生具有清晰线条的永久性纹身。用来生产永久性纹身油墨的用作媒介的物质是具有无限期保留在真皮中所必需的物理特性的物质。这些媒介材料用于生产永久性纹身，其中所有颜料/媒介复合物均具有足够大的尺寸，使得纹身设计不会因颜料扩散到相邻真皮中而变得模糊。当纹身油墨仅包含最佳大小(通常约为10至999纳米)的有颜料颗粒时，纹身线条的模糊程度会较低，并且颜料不会部分褪色或扩散到相邻组织中或从真皮中消除掉。

替代地，媒介可以通过离子、共价或其他分子机制结合至真皮成分，诸如胶原蛋白、弹性蛋白、糖胺聚糖等。结合因子包括但不限于天然粘附分子，诸如纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白、细胞间粘附分子-I及各种有记载的粘附肽序列，诸如含有精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸序列(RGD)、其他肽序列(例如YIGSR)的那些，或合成粘结剂诸如氰基丙烯酸酯。

如本文所用，术语“载体”包括药物载体或“赋形剂”，包括任何和所有溶剂、分散介质、稀释剂或其他液体媒介、分散体或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘结剂、润滑剂等，当适用于所需的特定组合物形式时。雷明顿的The Science andPractice of Pharmacy, 第21版, A. R. Gennaro, (Lippincott, Williams & Wilkins,Baltimore, Md., 2006)公开了用于配制药物组合物的各种赋形剂及用于其制备的已知技术。除非任何常规的赋形剂与某种物质或其衍生物不相容，诸如产生了任何不希望的生物学作用或另外以有害的方式与药物组合物的任何其他成分相互作用，否则考虑其用途在本发明的范围内。本文所述的组合物为溶液、悬浮液、乳液、片剂、包含另一种活性剂的片剂的包衣、微胶囊、药丸、胶囊、包含液体的胶囊、粉末、缓释制剂、栓剂、气雾剂、喷雾或适合局部使用的任何其他形式。在一些实施方案中，本文公开的组合物包括具有一种或多种没有生物活性并且不与活性化合物反应的赋形剂的凝胶制剂。片剂的赋形剂可包括填充剂、粘结剂、润滑剂和助流剂、崩解剂、润湿剂和释放速率调节剂。粘结剂促进制剂颗粒的粘附并且对于片剂制剂而言是重要的。粘结剂的实例包括但不限于羧甲基纤维素、纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、卡拉胶、淀粉、淀粉和黄蓍胶、聚丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮。包括3-甲磺酰基丙腈的局部制剂可以是凝胶、乳霜、洗剂、液体、乳液、软膏、喷雾、溶液、悬浮液和贴剂的形式。局部制剂中的非活性成分例如包括但不限于乳酸月桂酯(润肤剂/渗透促进剂)、二乙二醇单乙醚(润肤剂/渗透促进剂)、DMSO(溶解度增强剂)、有机硅弹性体(流变/质地改性剂)、癸酸甘油三酯(润肤剂)、水杨酸辛酯(润肤剂/紫外线过滤剂)、硅油(润肤剂/稀释剂)、角鲨烯(润肤剂)、向日葵油(润肤剂)和二氧化硅(增稠剂)。

在一些实施方案中，药学上可接受的赋形剂或载体的纯度为至少95％、96％、97％、98％、99％或100％。在一些实施方案中，赋形剂被批准用于人类和兽医用途。在一些实施方案中，赋形剂由United States Food and Drug Administration(美国食品和药物管理局)批准。在一些实施方案中，赋形剂是药物级的。在一些实施方案中，赋形剂满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或国际药典的标准，这些标准的全部内容并入本文。

用于制造药物组合物的药学上可接受的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、分散剂和/或制粒剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘结剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。这样的赋形剂可以任选地包含在本发明的制剂中。根据配方师的判断，组合物中可以存在赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和加香剂。

示例性稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠、乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、糖粉等及其组合。

示例性制粒剂和/或分散剂包括但不限于马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羟乙酸淀粉钠、粘土、藻酸、瓜尔胶、柑橘果肉、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联的聚乙烯吡咯烷酮(交联聚维酮)、羧甲基淀粉钠(羟乙酸淀粉钠)、羧甲基纤维素、交联的羧甲基纤维素钠(交联羧甲基纤维素)、甲基纤维素、预糊化淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、水不溶性淀粉、羧甲基纤维素钙、硅酸铝镁(Veegum)、月桂基硫酸钠、季铵化合物等及其组合。

示例性表面活性剂和/或乳化剂包括但不限于天然乳化剂(例如阿拉伯胶、琼脂、藻酸、藻酸钠、黄蓍胶、chondrux、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、胶体粘土(例如膨润土[硅酸铝]和Veegum[硅酸铝镁])、长链氨基酸衍生物、高分子量醇(例如硬脂醇、鲸蜡醇、油醇、三醋精单硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯和丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如羧基聚亚甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧乙烯基聚合物)、角叉菜胶、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素钠、粉状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯[Tween 20]、聚氧乙烯脱水山梨糖醇[Tween 60]、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯[Tween 80]、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯[Span 40]、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯[Span 60]、脱水山梨糖醇三硬脂酸酯[Span 65]、甘油单油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯[Span 80]、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯单硬脂酸酯[Myrj 45]、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧亚甲基硬脂酸酯和Solutol)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如Cremophor)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚[Brij 30]))、聚(乙烯基吡咯烷酮)、二乙二醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸钠、Pluronic F68、Pluronic® F127、Poloxamer 188、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基氯化吡啶鎓、苯扎氯铵、多库酯钠等和/或其组合。

示例性粘结剂包括但不限于淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊)；明胶；糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；天然和合成胶(例如阿拉伯胶、藻酸钠、爱尔兰苔藓提取物、潘瓦尔胶(panwar gum)、茄替胶(ghatti gum)、isapol果壳粘液、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、乙酸纤维素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、硅酸镁铝(Veegum)和落叶松阿拉伯半乳聚糖)；藻酸盐；聚环氧乙烷；聚乙二醇；无机钙盐；硅酸；聚甲基丙烯酸酯；蜡；水；醇；等等；及其组合。

本公开的一个方面涉及一种或多种组合物，其包含在室温或约65至约75华氏度下以非聚集形式的均质或非均质物类的颗粒。在一些实施方案中，所述一种或多种组合物包含在室温下或约65至约75华氏度下以非聚集形式的均质和/或非均质物类的颗粒，但是在体温下或在约98至约100华氏度下暴露于分析物时颗粒会聚集。应该注意的是，颗粒的聚集和非聚集可能不会由将颗粒暴露于分析物引起。例如，在另一组实施方案中，以某种方式外部控制颗粒的簇集或聚集性质。例如，可以使用电、磁和/或机械力使颗粒更靠近在一起和/或使颗粒分开。因此，在某些情况下，对颗粒施加电、磁和/或机械力会导致颗粒在施用时表现出颜色变化和/或分散速率增加。如本文所讨论的颗粒的簇集或聚集不限于通常为球形的聚集物。在某些情况下，由于分析物或其他外力，颗粒可能簇集在表面上，或者颗粒可能以某种方式相对于表面对齐。

另外，应注意，颗粒可以包含反应实体，该反应实体不一定是与分析物的结合伙伴。例如，可能存在包含第一反应实体的第一层和包含与第一反应实体反应的第二反应实体的第二层或空腔；当以某种方式将颗粒或空腔内容物集在一起时(例如，通过暴露于被每个颗粒上的结合伙伴识别的分析物或其他化学品，通过施加电、磁和/或机械力使颗粒更靠近、或生物降解等)，第一和第二反应实体可能会发生反应。作为具体实例，第一反应实体和第二反应实体之间的反应可以是吸热或放热反应；因此，当颗粒集在一起时，会产生温度变化，这可以某种方式确定。作为另一个实例，第一反应物和第二反应物之间的反应可引起材料的释放。在某些情况下，该材料可以是可被受试者感知的材料，例如辣椒素、酸、过敏原等。因此，受试者可以将这种变化感知为温度变化、疼痛、发痒、肿胀等。在一些实施方案中，将第一反应实体与第二反应实体的暴露对着色剂进行了化学改性，使得可以改变设计的颜色。

在某些情况下，颗粒可以悬浮在运载流体例如盐水中，或者颗粒可以包含在基质(例如多孔基质，在递送之后间质液容易进入该基质或变得容易进入该基质，或水凝胶基质等)中。例如，基质可由诸如聚乳酸、聚乙醇酸、聚(乳酸-共-乙醇酸)等或其他类似材料的可生物降解和/或生物相容性材料形成。

在某些情况下，例如如果基质是多孔的，则基质可以防止或至少抑制受试者对颗粒存在的免疫学反应，同时允许分析物等与颗粒发生平衡。例如，多孔基质的孔可以使得免疫细胞不能穿透，而蛋白质、小分子(例如，葡萄糖、离子、溶解的气体等)可以穿透。孔可以例如小于约5微米、小于约4微米、小于约3微米、小于约2微米、小于约1.5微米、小于约1.0微米、小于约0.75微米、小于约0.6微米、小于约0.5微米、小于约0.4微米、小于约0.3微米、小于约0.1微米、小于约0.07微米，并且在其他实施方案中，或小于约0.05微米。基质可以包含例如生物相容性和/或可生物降解的聚合物诸如聚乳酸和/或聚乙醇酸、聚酸酐、聚己内酯、聚环氧乙烷、聚对苯二甲酸丁二醇酯、淀粉、纤维素、壳聚糖和/或这些的组合，和/或其他材料诸如琼脂糖、胶原蛋白、纤维蛋白等。

方法

本公开的实施方案涉及施用本公开的组合物和药物组合物的方法。可以通过典型的纹身机将颗粒递送到受试者的真皮中来施用颗粒。传统上，组织标记程序由用针或类似工具刺穿皮肤以引入油墨组成，该油墨通常包括悬浮在液体载体中的具有广泛尺寸分布的惰性且不溶性颜料颗粒。通常用于使用纹身的机器的实例包括电磁线圈纹身机(诸如在授予Ningingale的美国专利号4,159,659中公开的机器)；旋转式永久性美容品施加机(例如在授予Chou的美国专利号5,472,449中公开的机器)；或任何手动纹身设备(例如，由SoftapInc. (加利福尼亚州圣莱安德罗)销售的无菌一次性设备)。

包封有染料/颜料的聚合物微球可以使用多种方法制备：乳液溶剂蒸发(solvent-in-emulsion evaporation)、相分离、凝聚、喷雾干燥、交联/凝胶化、热熔、研磨、电喷雾和聚合(乳液、悬浮液、分散液和沉淀)。对于聚合技术，起始材料是不饱和单体分子，其在链增长聚合后将形成珠粒。对于随后描述的所有其他技术，起始材料已经是聚合物。

乳液。单乳液技术有两种类型：水包油乳液(o/w)和油包水乳液(w/o)。例如，天然聚合物的微颗粒载体，即蛋白质和碳水化合物的微颗粒载体通过这些单乳液技术制备。将天然聚合物溶解或分散在水性介质中，然后分散在非水性介质如油中。在下一步中，进行分散珠滴的交联。可以通过紫外光或热或通过使用化学交联剂来实现交联。所用的化学交联剂是戊二醛、甲醛、酰氯等。用于稳定乳液相的表面活性剂的性质会极大地影响最终多颗粒产品的尺寸、尺寸分布、表面形态、加载、染料/颜料释放以及生物性能。

制备微球的双乳液方法涉及形成多乳液或w/o/w型的双乳液，并且最适合于水溶性染料/颜料。该方法可用于天然和合成聚合物二者。染料/颜料水溶液分散在亲脂性有机连续相中。连续相通常由聚合物溶液组成，该聚合物溶液最终包封包含在分散的水相中的染料/颜料。然后将初级乳液均质化或超声处理，然后再添加到聚乙烯醇(PVA)的水溶液中。这导致形成双重乳液。然后通过溶剂蒸发或通过溶剂提取除去乳液中的溶剂。

喷雾干燥。在喷雾干燥技术中，首先将聚合物溶解在合适的挥发性有机溶剂诸如二氯甲烷、丙酮等中。然后将固体形式的染料/颜料用高速均质化分散在聚合物溶液中。然后将分散体在热空气流中雾化。雾化导致小液滴或细雾的形成，溶剂从中瞬间蒸发，导致形成200 nm-100 µm尺寸范围内的微球。可以通过改变若干参数来控制尺寸，所述参数诸如聚合物浓度、溶液流速、喷涂速率和干燥温度。借助于旋风分离器将微粒从热空气中分离出来，同时通过真空干燥除去痕量溶剂。该方法的主要优点之一是在无菌条件下操作的可行性。

溶剂蒸发。该过程在液体制造媒介相中进行。将微胶囊涂料分散在挥发性溶剂中，该挥发性溶剂与液体制造媒介相不混溶。将待微胶囊化的核材料(染料/颜料)溶解或分散在涂料聚合物溶液中。在搅拌下，将核材料混合物分散在液体制造媒介相中以获得合适尺寸的微胶囊。然后如果需要，则将混合物加热以蒸发溶剂，以使核材料的聚合物分散在聚合物溶液中，聚合物在核周围收缩。如果核材料溶解在包衣聚合物溶液中，则会形成基质型微胶囊。核材料可以是水溶性或水不溶性材料。溶剂蒸发涉及在聚合物溶液和不混溶连续相之间形成乳液，无论是水性(o/w)还是非水的。

相分离凝聚技术。该过程基于降低聚合物在有机相中的溶解度以影响称为凝聚层的富含聚合物的相的形成的原理。在该方法中，将染料/颜料颗粒分散在聚合物的溶液中，并且将不相容的聚合物添加到系统中，这使第一聚合物相分离并吞没染料/颜料颗粒。添加非溶剂导致聚合物固化。已通过使用丁二烯作为不相容聚合物通过这种方法制备了聚乳酸(PLA)微球。工艺变量非常重要，因为获得凝聚层的速率决定了聚合物膜的分布、粒度和形成颗粒的附聚。必须通过使用合适速度搅拌器搅拌悬浮液来避免附聚，原因是随着微球形成过程的开始，所形成的聚合珠滴开始粘附并形成附聚物。因此，工艺变量至关重要，因为由于不存在限定的平衡获取状态，这些变量控制所形成颗粒的动力学。

溶剂提取。溶剂蒸发法用于制造包含染料/颜料的微粒，涉及通过非水性溶剂的提取来去除有机相。该方法涉及与水混溶的有机溶剂如异丙醇。有机相可以通过用水提取除去。该过程减少了微球的硬化时间。该过程的一种变体涉及将染料或颜料直接掺入聚合物有机溶液中。通过提取方法去除溶剂的速率取决于水的温度、乳液体积与水的比率以及聚合物的溶解度特性。

准乳液溶剂扩散。在文献中已经报道了一种新型的准乳液溶剂扩散方法，以制备具有丙烯酸类聚合物的药物的控释微球。可以使用包含蒸馏水和聚乙烯醇的外相通过准乳液溶剂扩散法制造微粒。内相由染料/颜料、乙醇和聚合物组成。聚合物的浓度是为了增强可塑性。首先，在60℃下制造内相，然后在室温下添加到外相中。乳化过程后，将混合物连续搅拌2小时。然后可以将混合物过滤以分离微粒。然后将产物洗涤并通过真空烘箱在40℃下干燥一天。

聚合技术。常规用于制备微球的聚合技术主要分为以下几类：I. 常规聚合；II.界面聚合。两者均在液相中进行。

I. 常规聚合：通过使用不同的技术如本体、悬浮、沉淀、乳液和胶束聚合方法进行。在本体聚合中，通常将单体或单体的组合与引发剂或催化剂一起加热以引发聚合。可以将如此获得的聚合物模制成微球。染料/颜料的加载可以在聚合过程期间完成。悬浮聚合也称为成珠或珠状聚合。其通过加热作为在连续水相中的液滴分散体的单体或单体组合物来进行。液滴也可以包含引发剂和其他添加剂。乳液聚合不同于悬浮聚合，原因是在水相中存在引发剂，该引发剂随后扩散到胶束表面。本体聚合具有形成纯聚合物的优点。

II. 界面聚合：这涉及各种单体在两种不混溶液体之间的界面处的反应，以形成基本上包封分散相的聚合物膜。

pH触发的微粒。提供了作为染料/颜料释放的媒介的微粒，该微粒设计用于当暴露于酸性条件下释放其有效载荷。任何染料/颜料都可以包封在具有pH触发剂的脂质-蛋白质-糖或聚合物基质中以形成微粒。优选地，pH触发的微粒的直径在50 nm至10微米的范围内。可以使用任何已知的脂质(例如，DPPC)、蛋白质(例如，白蛋白)或糖(例如，乳糖)来制备颗粒的基质。颗粒的基质也可以使用任何合成聚合物诸如聚酯来制备。配制过程包括提供试剂，和与pH触发剂和选自脂质、蛋白质、糖的组分接触，以及喷雾干燥所得混合物以产生微粒。通常，pH触发剂是包括pKa小于7的聚合物的化合物。pH触发的微粒在暴露于酸性环境时会释放包封的染料/颜料。

微流体。已经报道了使用微流体方法的微细加工来合成单分散的微粒。通过生成高度单分散的聚合物和染料/颜料液滴的乳液，由两种不混溶流体的驱动压力和微通道几何形状的组合轻松控制，可以以高通量获得含有平均直径偏差小于5％的染料/颜料的微球。

交联/胶凝。溶胶-凝胶法或凝胶化法用于生产细颗粒。凝胶化法使用包含染料/颜料的聚合物溶液，该溶液从溶胶态(胶体溶液)开始发展为凝胶态(颗粒)，凝胶态被挤出并浸没在凝结溶液中，该凝结溶液充当聚合物的交联剂。

电流体动力学方法或电喷雾。电流体动力学方法或电喷雾是单步骤技术，其具有产生窄尺寸分布的亚微米级颗粒的潜力，其中颗粒的附聚有限且产率高。电喷雾的原理基于电场使液滴界面变形的能力，该原理由Lord Rayleigh在1882年建立。电喷雾方法在概念上很简单：将聚合物溶液加载在注射器中，并以恒定速率使用注射器泵输注通过一个小的但高度带电荷的毛细管(例如16-26号针头)。所使用的施加电压通常至多为+或-30 kV，收集器可放置在距毛细管7至30 cm的距离处。一旦液滴从Taylor锥体上脱落，溶剂就会蒸发，产生致密固体颗粒，并向收集器推进。在染料/颜料加载的情况下，在电喷涂之前将染料/颜料混合到聚合物溶液中。此外，可以通过操纵控制因素诸如系统、溶液、仪器和环境参数来控制最终产品的尺寸。系统参数包括聚合物的分子量和微观结构特征。所用聚合物和溶剂的类型和浓度决定了溶液的性质，即pH、电导率、粘度和表面张力。仪器参数包括施加的电势、溶液的流速、针尖与收集器之间的距离，有时还包括收集器材料的性质。另外，环境条件诸如处理室中的温度、湿度和空气速度共同决定了溶剂从经电喷雾的产品的蒸发速率。

热熔。该方法也已应用于制药领域以制备缓释片剂和透皮递药系统。它也可以应用于油墨颗粒制备。该技术使用低熔点的聚合物。将聚合物加热成熔化相并然后分散在含有染料/颜料的合适分散介质中，并缓慢冷却并制成微球形式。已经报道了SD在1％至5％之间的微球。

精密颗粒制造技术(PPF技术)。精密颗粒制造(PPF)是开发用于生产各种材料的均匀颗粒的技术，并且适应于制造包含可生物降解聚合物的控释微粒系统。PPF的主要装置基于使包含成球材料(即可生物降解的聚合物)和待包封的任何染料/颜料的流体通过小孔(10-100 µm)以形成平滑的圆柱状流。为了将流分裂成均匀的液滴，喷嘴由压电变换器进行声激发，该压电变换器由规定频率下的波发生器驱动。通过采用围绕着聚合物染料/颜料射流以提供额外的“拖曳”力的非溶剂相的环形流(称为载体流)，可以进一步控制微粒大小和形状；甚至可以产生比喷嘴开口还小的颗粒。

除了本文描述的那些之外，根据前述描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将是显而易见的。这样的修改也旨在落入所附权利要求的范围内。本申请中引用的每个参考文献(包括但不限于期刊论文、美国和非美国专利、专利申请公开物、国际专利申请公开物、基因库登录号等)通过引用整体并入本文。

实施例

实施例1

具有水溶性着色剂的PLLA/PLGA颗粒的制备

双壁颗粒的制造组合了当达到临界浓度时两种聚合物在有机溶剂中的相分离现象和溶剂蒸发的过程。加载有着色剂的颗粒通过该改良的水包油包油型(O/O/W)乳液溶剂蒸发技术、利用PLLA与PLGA之间的聚合物不相容性(这导致了它们的完全相分离)来制备。

制备PLLA和PLGA分别在二氯甲烷(DCM)中的溶液(15-20％，w/v)。使用的典型DCM体积在335至1000 µ1之间。PLGA聚合物溶液的制备略有不同，不同之处在于将着色剂添加到DCM中，使用超声探头(型号XL2000, Misonix, NY, USA)以2 W的输出超声处理30秒，以将着色剂的任何晶体破碎成更细的丝(<20 µm)，然后添加聚合物PLGA。然后将这两种聚合物溶液加在一起，并在2 W下超声处理20秒，以形成油包油型(O/O)乳液，由当初澄清的聚合物溶液变成半透明的乳白色外观而明显。将乳液滴加到200 ml 非溶剂PVA的水溶液(2.5％，w/v)中形成O/O/W乳液。

使用机械搅拌器以250 rpm的速度搅拌4小时将允许提取和蒸发DCM以及颗粒的硬化。随后进行过滤、洗涤和真空冻干。将制得的颗粒储存在干燥器中以防止可生物降解聚合物在湿度下发生水解降解。通过将PLLA与PLGA的聚合物质量比(w/w)从3：1改变为1：1以相同的方式制备具有变化的壳厚度和核直径的微球。还使用本领域公知的成熟的单乳液方法来制备旨在用于表征和基线比较的单一聚合物(PLLA和PLGA)颗粒。

用扫描电子显微镜研究未加载的和加载有着色剂的颗粒二者的形态，其中研究了在体外释放的各个阶段颗粒的表面和横截面形态以及降解。首先使用带有冷冻保持介质的切片机刀片横截待检查颗粒，然后用双面碳带将其安装到金属底座上。将样品风干，然后使用自动精细涂覆机涂覆铂层。

使用光学显微镜进行观察，以基于晶体结构的差异来识别双壁颗粒中的不同聚合物层以及识别着色剂在经加载颗粒内的分布。在准备光学显微镜术时，使用切片机刀片将微球切成片并将其安装在载玻片上，以便在十字偏振片下查看。

使用Coulter激光衍射粒度分析仪测定粒度分布和平均粒度。颗粒悬浮在超纯水中，并使其流过分析仪。

为了确定核和壳聚合物的组成，利用了PLLA和PLGA聚合物对在乙酸乙酯中溶解度的不同。PLGA是可溶的，但PLLA不溶。首先大致在中心线处横截双壁颗粒。然后将每一半分别浸入少量乙酸乙酯中，在几乎不搅拌或不搅拌的情况下溶解约10分钟。然后移出经横截颗粒的剩余物以进行光学观察。还检查了溶液以确保在任何情况下都不会掉落出核。因此，根据核或壳是否溶解，可能会产生中空核或核剩余物的两种可能情况。横截视图的光学显微镜观察结果将能够识别剩余的PLLA聚合物是壳的还是核的，以及它们是否已完全相分离。

该方法与通过使用傅立叶变换红外(FTIR)光谱的IR研究一起使用，该傅立叶变换红外(FTIR)光谱通过使用连接到FTIR分光光度计主机的FTIR显微镜获得的，并使用Bio-Rad分析软件在中等IR范围(波数为400-4000cm^-1，分辨率2cm^-1)中进行分析。将单一聚合物的标准颗粒和双壁复合颗粒横截成两半并安装在gold载玻片上进行检查。使用该软件在核和壳中随机选择十个点以获得透射光谱。获得这些光谱的平均值，并将其与单一聚合物颗粒的光谱进行比较，后者用作分析各个区域的组成的参考。

包封效率定义为在颗粒内着色剂的实际加载量与理论加载量的比率，如以下方程式所述：

效率(%)=

其中，C_实际(mg)是颗粒中所含着色剂的实际量，而C_理论(mg)是理论加载量，该量等于最初使用的着色剂的总量。使用提取方法确定包封在颗粒中的着色剂的实际量，其中一式三份精确称取5 mg微球并各自溶解在2 ml DCM、氯仿或二甲基亚砜(DMSO)中。

使用5 ml的去离子水进行提取着色剂，其中水溶性着色剂将优先分配。然后将具有两个不混溶相的溶液在90.6 g下离心10分钟，然后提取顶层水，过滤掉任何残留颗粒，并使用高效液相色谱(HPLC)分析其着色剂浓度。

为了进行释放研究，一式三份精确称取加载有着色剂的颗粒(5±0.5 mg)并放入装有1.8 ml PBS (pH 7.2)的小瓶中。将小瓶在120 rpm下的恒温振荡水浴中保持在37℃的生理温度下。在90.6 g下离心5分钟后，在预先选择的时间处收集1.8 ml体积的等份试样，并将小瓶用相同量的新鲜制备的PBS置换。使用HPLC分析上清液中的着色剂含量。将获得的峰面积与校准值进行比较，以确定在计算出的每个数据点的着色剂浓度和释放的着色剂分数。将新鲜量的PBS添加到颗粒以置换去除的上清液。

使用伽玛室(⁶⁰Co.源，半衰期为5.27年)以2.5Gy/h的剂量率将50 Gy、25 kGy的剂量施加于样品来对样品进行辐照。在辐照过程期间将干冰添加到样品，以降低样品的局部温度并防止样品发生热降解。当采用高辐照剂量时，这是一种常见的做法。

使用连接至冷却系统的配备有控制器的调制差示扫描量热仪进行颗粒的热分析。将样品(约6.5 mg)放在密封的铝盘中并在第一次加热攀升中从-20℃加热到200℃，冷却到-10℃，且在第二次攀升中全程以10℃/min的速率重新加热到200℃。在TA通用分析仪软件上处理获得的数据，并确定玻璃化转变温度(T_g)和晶体熔点(T_m)。

根据以下程序进行降解研究：分别精确称取经加载颗粒和空白颗粒(20±5 mg)并将其置于保持在37℃的在120rpm下的恒温振荡水浴中的装有10 ml PBS缓冲液的小瓶中。在预定的时间处将微球移出，以使用SEM和DSC进行深入研究。对经加载微球进行SEM研究，以研究聚合物降解对着色剂释放的影响以及聚合物物理性质与释放曲线中的特征点之间的关系。空白颗粒旨在用于热DSC研究以表征在降解下聚合物T_g和T_m的任何变化。

实施例2

用水溶性和不溶性着色剂制备POE/PLGA颗粒

通过使用水包油包水型双乳液溶剂蒸发法，制备加载有着色剂的双壁聚原酸酯/聚(丙交酯-共-乙交酯)(POE/PLGA)(含50％重量的POE)颗粒。简而言之，将300 mg POE、300mg PLGA和70 mg水不溶性着色剂(CA1)溶解在12 ml DCM中(有机相)；将70 mg水溶性着色剂(CA2)溶解在0.15 ml含有0.2％(w/v)PVA的水中(内部水相)。将这两种溶液混合并超声处理15秒钟以生产第一油包水乳液。然后将乳液倒入含有0.2％(w/v)作为乳化剂的PVA的250 ml PBS(pH7.4)(外部水相)中以生产水包油包水型双乳液，使用由低温循环器控制的混合器将其在恒定温度(15℃)下搅拌3.5小时。将得到的颗粒过滤，洗涤，冻干过夜并在4℃下保存。

含有CA1或CA2的纯POE和PLGA颗粒通过与以上详述相同的方法制备。内部水相仍用于制造加载有CA1的双壁POE/PLGA颗粒。

为了确定CA2包封效率，将10 mg颗粒溶解在1 ml DCM中并在室温下保持约30分钟。颗粒溶解后，添加10 ml PBS缓冲液(pH 7.4)并将混合物剧烈振摇2分钟。将混合物在室温下静置1小时，然后将水层抽出。然后将水溶液过滤。使用高效液相色谱(HPLC)分析过滤后溶液中的CA2含量。

为了确定CA1包封效率，将5 mg颗粒溶解在1 ml DCM中。颗粒溶解后，添加5 ml己烷以沉淀聚合物并提取CA1。将混合物过滤并将滤液干燥。添加体积为20 ml的乙腈/水(85:15，v/v)以溶解固体样品。通过HPLC分析CA1含量。

将着色剂加载量和包封效率分别计算为着色剂含量与聚合物含量的比率以及实际着色剂含量与理论着色剂含量的比率。

使用扫描电子显微镜分析在37℃下在PBS中体外降解之前和之后的颗粒的表面形态和内部形态。使用剃须刀片制备横截样品以观察其内部结构。使用双面胶带将颗粒及其截取样品安装在金属底座上，并在检查前真空涂覆铂层。

将颗粒样品在37℃下在PBS(pH 7.4)中温育。以预定的时间间隔对颗粒的吸水率进行重量测定，并计算为吸收的水与干燥颗粒的重量比。

在37℃下在PBS (pH 7.4)中一式三份进行颗粒的体外着色剂释放分析。将40 mg量的冻干颗粒分散在10 ml适当搅拌的含0.1(w/v)％ Tween 80的PBS(pH 7.4)中。以预定的时间间隔，从每个样品中取出体外介质，并用新鲜的PBS缓冲液置换。对于加载有CA2的颗粒，如上所述使用HPLC直接分析了体外介质中的CA2含量。对于加载有CA1的微球，采用提取方法从体外介质中分离出水不溶性着色剂。简而言之，将10 ml己烷添加到体外介质中，并将混合物剧烈振摇5分钟以提取CA1。将混合物在室温下放置过夜，然后将有机层排出并干燥。然后添加体积为5 ml的乙腈/水(85:15，v/v)以溶解残留物用于进行进一步的HPLC分析。根据相同的程序制备CA1标准样品。但是，对于加载有CA1-CA2的微球，在提取CA1后，收集水层以分析CA2含量。作为温育时间的函数，研究了CA1或CA2累积释放的重量百分数(％，w/w)。

实施例3

PLLA/P(CPP:SA)颗粒的体外降解

通过溶剂蒸发制备颗粒。对于DW颗粒，如下制备七个批次并在筛分之前合并。制备两种溶液：在二氯甲烷(4 ml)中的15％(w/v)PLLA和在二氯甲烷(4 ml)中的15％(w/v)P(CPP:SA)20:80。通过轻轻摇动短暂地将这两种溶液混合，然后倒入600 ml 0.5％PVA的蒸馏水溶液中。通过顶置式搅拌器(Caframo，RZR50型)以450 rpm的速率进行搅拌。随着溶剂蒸发，聚合物相分离并且PLLA相吞没P(CPP:SA) 20:80相。将颗粒搅拌90-100分钟，然后通过离心收集，在蒸馏水中洗涤，冷冻并冻干。将它们筛分到约100 µm的尺寸范围并在20℃下保存。将合并的颗粒通过一系列筛子，然后在每级进行收集。直径在212至300 µm之间的颗粒用于该研究。

以相似的方式制备SW PLLA颗粒，其中将八个批次合并。颗粒由15％(w/v)的二氯甲烷(8ml)溶液通过以450 rpm速率的顶置搅拌在600 ml 0.5％(w/v)PVA/蒸馏水中乳化来制备。将SW颗粒搅拌60-70分钟，然后如前所述进行处理。使用具有与DW颗粒相同的直径(212-300 µm)的颗粒来进行研究。

为了进行体外研究，将SW颗粒和DW颗粒二者的50 mg等份试样悬浮在1 ml磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS)中。在1天、3天、1周、2周、1个月、2个月、4个月和6个月后，将每组颗粒的等份试样用蒸馏水洗涤，冷冻，并冻干以通过GPC、FTIR光谱、DSC和SEM进行表征。在每个采样时间，对于剩余的样品，用新鲜的PBS置换PBS溶液。

将用于SEM的样品冻干，安装在金属底座上，并用剃须刀片横截以观察内部结构。然后在样品上溅射涂布50-100埃的金-钯层 (Polaron Instrument E5100)，并使用Hitachi S-2700扫描电子显微镜在10 kV的加速电压下进行观察。

用于透射FTIR光谱的样品通过将样品的稀溶液(1％w/v，在氯仿中)流延在氯化钠(NaCl)晶体上来制备。所有光谱均使用Perkin-Elmer 1725x型光谱仪获得，并使用Infrared Data Manager软件(Perkin-Elmer)进行操作。将用于DSC的样品(5-15 mg)密封在铝样品盘(Perkin-Elmer Express)中。使用配备有型号为TAC 7/DX的控制器(Perkin-Elmer)的DSC 7型(Perkin-Elmer)进行颗粒的热分析。在20℃下平衡(1分钟)后，首先将样品从-20加热到200℃，冷却到-10℃，最后再加热到200℃，全都以10℃/分钟的速率进行。在所有情况下都使用来自第一攀升的数据。使用Perkin-Elmer热分析软件分析热谱图以计算玻璃化转变温度(Tg)、熔化温度(Tm)和焓变(ΔH)。

使用GPC系统(Perkin-Elmer)估计聚合物和颗粒的分子量，该系统由250型Isocratic LC泵、101型LC柱箱、LC-30 RI检测器和900系列接口组成。样品在40℃的温度下以1.0 ml/min^-1的流速通过串联连接的PL凝胶5 µ混合柱和5 µm 50埃^-1柱在HPLC级氯仿(Fisher Scientific)中进行洗脱。使用分析用Turbochrom和TC*SEC软件程序(Perkin-Elmer)确定相对于聚苯乙烯标准物(Polysciences，分子量在1000和1,860,000 g/mol之间)的聚合物分子量。注射前将样品过滤以除去不溶性颗粒(存在时)。

实施例4

PLLA/P(CPP:SA)颗粒的体内降解

将30 g颗粒的等份试样装入玻璃小瓶中，用棉花塞住小瓶并包装用于冷循环环氧乙烷灭菌(EtO)。为每只大鼠准备三等份颗粒，其中两份肌肉内植入到四头肌，另一份皮下植入在肩胛骨之间。为了提供足够的材料以供以后提取以表征聚合物，每个时间点使用了四只大鼠。用于研究的时间点是1周、2周、1个月、2个月、4个月和6个月。每个时间点有4只大鼠和6个时间点有24只大鼠植入了DW PLLA和P(CPP:SA) 20:80微球。第二组24只大鼠植入了SW PLLA微球以进行比较。以60 mg/kg的量IP注射戊巴比妥钠(Nembutal®)来麻醉大鼠。剃刮植入部位并先用酒精然后用含碘溶液擦拭。

使用无菌技术，在四头肌上开一个1厘米长的皮肤切口。然后继续开切口到肌肉内。然后将颗粒小心地倒入肌肉切口中，并用5-0 Vicryl的简单间断缝合闭合肌肉筋膜以固定植入物。用也采用5-0 Vicryl的表皮下连续缝合闭合皮肤切口。将颗粒植入两个后肢后，将大鼠的腹部朝上并穿过肩胛骨之间的皮肤划一个1厘米的切口。产生小的皮下囊袋，并将颗粒引入该部位。用5-0 Vicryl以表皮下连续缝合将皮肤切口闭合。允许大鼠在手术后在加热垫上恢复。遵守关于护理和使用实验动物的NIH指南(NIH出版物＃85-23Rev.1985)。在植入后的指定时间点，通过过量IP和心脏内Nembutal®或吸入CO₂将大鼠处死。

然后将植入部位外植以进行分析。将来自每组大鼠的一个皮下植入物和一个肌肉内植入物与周围组织一起小心切除，以进行组织学评估。将它们置于4％(w/v)多聚甲醛/PBS中历时6-8小时，然后30％(w/v)蔗糖/PBS中温育过夜。将经固定的样品安装在包埋介质中，冷冻，然后在低温恒温器上切成40 µm厚的切片用于显微镜检查。合并剩余的外植样品，冷冻并冻干，以准备聚合物提取。用研钵和研杵研磨干燥的组织并添加氯仿。将浆液通过0.2 µm PVDF针筒式过滤器过滤，并使氯仿从滤液中蒸发。然后通过GPC、FTIR光谱和DSC对干燥的经提取聚合物进行表征。通过相同的方法对制造后以及环氧乙烷灭菌后的初始颗粒进行表征。

Claims (52)

1.一种组合物，其包含：

(i) 颗粒，所述颗粒包含：

(a) 壳，其包含可生物吸收且可生物降解的聚合物，

其中所述聚合物包括聚己内酯(PCL)、聚D-乳酸(PDLA)、聚L-乳酸(PLLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚原酸酯、脂族聚酸酐、芳族聚酸酐或其嵌段共聚物；和

(b) 核，其包含分子量为约5至约10 x 10⁶道尔顿的着色剂；和

(ii) 载体溶液。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述颗粒的直径小于或等于约100 µm、约90 µm、约80 µm、约70 µm、约60 µm、约50 µm、约40 µm、约30 µm、约20 µm、约15 µm、约10 µm、约9 µm、约8 µm、约7 µm、约6 µm、约5 µm、约4 µm、约3 µm、约2 µm、约1 µm或约0.5 µm。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中颗粒为一定尺寸，以在结合到动物或人的真皮中时诱导聚集。

4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述聚合物以在结合到动物或人的真皮中时有效于诱导聚集的浓度存在于壳中。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述聚合物以足以防止或抑制着色剂的吞噬的量存在于颗粒中。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述壳的厚度为约0.2 µm至10 µm，包括端点。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述聚合物的重均分子量在50 Da至200 kDa之间，包括端点。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述聚合物是结晶或半结晶的。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述聚合物是非晶的。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述聚合物在生理学pH下是阳离子的。

11.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述聚合物在生理学pH下是阴离子的。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，其中所述聚合物在水溶液中经历表面侵蚀。

13.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，其中所述聚合物在水溶液中经历本体侵蚀。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的组合物，其中将聚合物、重均分子量和壳厚度配置成使得生物吸收曲线和生物降解曲线中的至少一个表现出约2个月至约12个月的滞后期。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的组合物，其中所述壳还包括热响应性聚合物。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中所述着色剂是染料。

17.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中所述着色剂是颜料。

18.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中所述着色剂发荧光或发磷光。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的组合物，其中所述着色剂以1 ng至1 µg之间的量存在于核中，包括端点。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的组合物，其中所述核由着色剂组成，并且所述着色剂是聚集体。

21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述颗粒的直径小于或等于约10 µm、约9 µm、约8 µm、约7 µm、约6 µm、约5 µm、约4 µm、约3 µm、约2 µm、约1 µm或约0.5 µm。

22.根据权利要求1-19中任一项所述的组合物，其中所述核还包含核聚合物。

23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述聚合物和所述核聚合物是相同的。

24.根据权利要求22所述的组合物，其中所述聚合物和所述核聚合物是不同的。

25.根据权利要求22-24中任一项所述的组合物，其中所述聚合物和所述核聚合物中的至少一个是嵌段共聚物，并且其中所述嵌段共聚物包括二嵌段共聚物或三嵌段共聚物。

26.根据权利要求22-25中任一项所述的组合物，其中所述核聚合物以约7%-10%、约10%-15%、约15%-20%、约20%-25%、约25%-30%、约30%-35%、约35%-40%、约40%-45%、约45%-50%、约50%-55%、约55%-60%、约60%-65%、约65%-70%、约70%- 75%、约75%-80%、约80%-85%、约85%-90%或约90%-92% w/w的浓度存在于颗粒中。

27.根据权利要求22-26中任一项所述的组合物，其中所述着色剂被吸附至核聚合物、被核聚合物物理截留或共价键合至核聚合物。

28.根据权利要求22-26中任一项所述的组合物，其中所述着色剂包含与核聚合物形成配位键的金属。

29.根据权利要求22-27中任一项所述的组合物，其中基于颗粒的总聚合物重量，所述着色剂的浓度为约0.01％至10％w/w，包括端点。

30.根据权利要求1-19中任一项所述的组合物，其中所述核包含水凝胶。

31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述着色剂被吸附至水凝胶、被水凝胶物理截留、被插入水凝胶、非共价或共价地与水凝胶键合。

32.根据权利要求30或31所述的组合物，其中所述水凝胶包含以下中的至少一种：藻酸盐、壳聚糖盐酸盐、甲基丙烯酸酯改性的透明质酸(HA-MA)、硫醇化的透明质酸(HA-SH)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)和聚乙二醇(PEG)。

33.根据权利要求30或31所述的组合物，其中所述着色剂包含与水凝胶形成配位键的金属。

34.根据权利要求1-19或22-33中任一项所述的组合物，其中所述核还包括以下中的至少一种：藻酸盐、果胶、壳聚糖、透明质酸、κ-角叉菜胶、琼脂糖、琼脂、纤维素衍生物、羧甲基纤维素(CMC)、基于蛋白质的亲水性聚合物、胶原蛋白水解物、明胶、合成亲水性聚合物、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙二醇(PEG)和改性的PEG。

35.根据权利要求1-19或22-34中任一项所述的组合物，其中所述壳或核还包含选自以下的至少一种聚酸酐：聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷)] (poly(CPP))、聚[1,6-双(对羧基苯氧基)己烷](poly(CPH))、聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]以及聚[对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-交替-乙氧基磷酸酯]-共-对苯二甲酸1,4-双(羟乙酯)-共-对苯二甲酸酯(P(BHET-EOP/BHET), 80/20)。

36.根据权利要求1-19或22-35中任一项所述的组合物，其中所述壳或核还包含至少一种选自以下的聚原酸酯(POE)：POE I、POE II、POE III和POE IV。

37.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述颗粒以约5 mg/ml至约20 mg/ml、约20至约50、约50至约80、约80至约110、约110至约140、约140至约170、约170至约200、约200至约230、约230至约250、约250至约280、约280至约310、约310至约340、约340至约370、约370至约400、约400至约430、约430至约450、约450至约480、约480至约510、约510至约540、约540至约570、约570至约600 mg/ml或80 mg/ml至约800 mg/ml的浓度存在于载体溶液中。

38.根据前述权利要求1-36中任一项所述的组合物，其中所述颗粒以约5%至约8%、约8%至约11%、约11%至约14%、约14至约17、约17至约20、约20至约23、约23至约25、约25至约28、约28至约31、约31至约34、约34至约37、约37至约40、约37至约40、约40至约43、约43至约45、约45至约48、约48至约50、约50至约53、约53至约55、约55至约58、约58至约60%、约5%至约80% w/v、约10%至约80% w/v、约15%至约80% w/v、约20%至约80% w/v、约25%至约80% w/v、约30%至约80% w/v、约35%至约80% w/v、约40%至约80% w/v、约45%至约80% w/v、约50%至约80% w/v或约60%至约80% w/v的浓度存在于载体溶液中。

39.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物的浓度足以维持颗粒内的渗透压至少约2个月至约60个月。

40.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其还包含保湿剂。

41.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其还包含杀生物剂。

42.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其还包含缓冲剂。

43.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其还包含热响应性聚合物。

44.根据权利要求43所述的组合物，其中所述热响应性聚合物之一是聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)。

45.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其还包含表面活性剂。

46.根据权利要求45所述的组合物，其中所述表面活性剂包括共聚物。

47.根据权利要求15所述的组合物，其中所述热响应性聚合物是聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)。

48.根据权利要求25所述的组合物，其中所述嵌段聚合物为包括以下的组合的二嵌段聚合物：聚[双(对羧基苯氧基)甲烷)](poly(CPM))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚[1,3-双(对羧基苯氧基)丙烷)] (poly(CPP))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))、聚(1,4-双(对羧基苯氧基)丁烷)(poly(CPB)和聚(癸二酸酐)(poly(SA))、或聚(1,6-双(对羧基苯氧基)己烷)(poly(CPH))和聚(癸二酸酐)(poly(SA))。

49.一种对受试者进行纹身的方法，其包括将权利要求1至48中任一项所述的组合物施用于受试者。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述施用步骤包括皮内施用美容有效量的权利要求1至48中任一项的组合物。

51.一种抑制着色剂在受试者皮肤内吸收的方法，其包括将着色剂包封在权利要求1至48中任一项所述的颗粒中。

52.一种在有需要的受试者中治疗色素障碍的方法，其包括使受试者的皮肤与治疗有效剂量的权利要求1至48中任一项所述的颗粒接触。

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