CN112603936B - 一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112603936B CN112603936B CN202011578288.2A CN202011578288A CN112603936B CN 112603936 B CN112603936 B CN 112603936B CN 202011578288 A CN202011578288 A CN 202011578288A CN 112603936 B CN112603936 B CN 112603936B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- composition
- extract
- powder
- aeromonas
- ethanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 135
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 title claims abstract description 31
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 113
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 claims abstract description 25
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 80
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 69
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 30
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 23
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 claims description 18
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 4
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 2
- 241001022083 Flemingia Species 0.000 claims 6
- 241000913745 Spatholobus Species 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 241000207929 Scutellaria Species 0.000 abstract description 34
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 5
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 22
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 16
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 241000745988 Phyllostachys Species 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 4
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 244000046101 Sophora japonica Species 0.000 description 3
- 235000010586 Sophora japonica Nutrition 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 description 2
- 240000006322 Sambucus chinensis Species 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 description 2
- LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N iodinated glycerol Chemical compound CC(I)C1OCC(CO)O1 LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000218095 Cladopus japonicus Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 240000007235 Cyanthillium patulum Species 0.000 description 1
- 241000255890 Galleria Species 0.000 description 1
- 241000590008 Helicobacter sp. Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/65—Tetracyclines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/486—Millettia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Birds (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Physiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用，所述的方法为将鸡血藤提取物与千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入多西环素混合均匀后即成。本发明所述的一种抑制气单胞菌属的组合物中含有多西环素、鸡血藤提取物和千斤拔提取物，其三者的组合对气单胞菌属细菌有明显的抑制作用，该组合物可用于制备药剂与饲料添加剂。
Description
技术领域
本发明属于水产领域，尤其是涉及一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
我国是水产养殖大国，水产品的养殖密度和产量均较高，但由于养殖技术和设施落后，常导致鱼类细菌性疾病的频繁发生。目前以抗生素为主的药物防治是仍然是养殖生产中最有效、最直接的方法，对于防治鱼类细菌病发挥着非常重要的作用。但生产实践中长期使用抗生素，会导致短时间内耐药菌株层出不穷。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种抑制气单胞菌属的组合物，该组合物由包括如下重量份的原料制成：
多西环素 0.001-0.1份，
鸡血藤提取物 10-100份，
千斤拔提取物 10-100份。
优选的，所述的组合物由包括如下重量份的原料制成：
多西环素 0.001-0.05份，
鸡血藤提取物 10-50份，
千斤拔提取物 50-100份。
优选的，所述的组合物由包括如下重量份的原料制成：
多西环素 0.008-0.028份，
鸡血藤提取物 32-50份，
千斤拔提取物 85-100份。
进一步，所述的千斤拔提取物由包括如下步骤制备得到：将千斤拔粉碎过筛后得到千斤拔粉末，将所述的千斤拔粉末加入到10-30倍量的浓度为60-70％的乙醇中，浸提1-2小时，将得到的浸提液在80-90℃下回流提取，然后浓缩后得到所述的千斤拔提取物。
所述的抑制气单胞菌属的组合物的制备方法，包括如下步骤：将鸡血藤提取物与千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入多西环素混合均匀后即成。
一种鸡血藤提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，将得到的粉末在60-90℃下加热5-30分钟；
(2)然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为40-55％的乙醇中，浸提12-24小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为60-75％的乙醇中，浸提12-24小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为80-95％的乙醇中，浸提24-48小时，得到浸提液C；
(3)将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后即得。
进一步，所述的步骤(1)中的加热步骤的温度为60-80℃，时间为15-30分钟；所述的步骤(2)中的第一份鸡血藤粉末加入到浓度为50-55％的乙醇中，第二份鸡血藤粉末加入到浓度为60-65％的乙醇中，第三份鸡血藤粉末加入到浓度为80-90％的乙醇中。
一种鸡血藤提取物，述的提取物由所述的方法制备得到。
一种抑制气单胞菌属的组合物在制备抑制气单胞菌属细菌的药物中的应用。
进一步，所述的组合物包含多西环素、鸡血藤提取物和千斤拔提取物。
相对于现有技术，本发明具有以下优势：
本发明所述的一种抑制气单胞菌属的组合物中含有多西环素、鸡血藤提取物和千斤拔提取物，其三者的组合对气单胞菌属细菌有明显的抑制作用，该组合物可用于制备药剂与饲料添加剂。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明。
本发明实施例中所述的舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌由中国水产科学研究院珠江水产研究所水产病害与免疫研究室馈赠。
实施例1鸡血藤提取物的制备
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量600g粉末在80℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为50％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为60％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为90％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物A。
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量600g粉末在50℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为50％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为60％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为90％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物B。
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量600g粉末在50℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为35％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为50％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为70％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物C。
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量1500g粉末在50℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为60％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为80％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为95％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物D。
将千斤拔粉碎过筛后得到千斤拔粉末，准确称量1500g千斤拔粉末加入到20倍量的浓度为70％的乙醇中，浸提2小时，将得到的浸提液在80℃下回流提取，然后浓缩后得到千斤拔提取物。
将48g鸡血藤提取物A与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物A。
将48g鸡血藤提取物B与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物B。
将48g鸡血藤提取物C与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物C。
将48g鸡血藤提取物D与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物D。
准确称量90g千斤拔提取物，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物E。
实施例2鸡血藤提取物对嗜水气单胞菌的抑菌效果
1、培养基的制备
BHI培养基购自美国BD公司；5％绵羊血琼脂平板、细菌生化微量鉴定管等购自广州环凯微生物有限公司。
2、菌悬液的制备
试验菌培养：将嗜水气单胞菌菌株活化，用接种针在固体培养基上划线，再30℃培养24h后，挑取单个菌落，接种到营养肉汤培养基上震荡培养24h。采用平板计数法将菌液稀释到合适浓度，菌液浓度为1×108CFU/mL。
3、药物敏感性试验
药敏试验采用琼脂扩散法，将培养至对数生长期的菌悬液稀释至浓度约为1×103CFU/mL，使用无菌棉签蘸取菌液均匀涂抹在培养基上，涂抹均匀后，在平板上均匀打孔，每个平板上打4个孔，做好标记。每孔加入100μl(1g/mL)组合物，然后将之放入30℃培养箱中培养24h；平板取出后，观察孔周围是否有抑菌圈，若有，则用游标卡尺测量抑菌圈直径。每种药物做三个重复，同时以无菌水做空白对照。结果判断标准按《中药药理学》介绍的标准：抑菌圈≥20mm，属于极敏；抑菌圈15-19mm属于高敏；抑菌圈10-14mm属于中敏；抑菌圈小于10mm，属于低敏；没有抑菌圈，属于不敏(无抑菌效果)。
4、二次筛选试验
用营养肉汤培养基以二倍稀释法对提取物进行梯度稀释，在每个试管中加入细菌悬液，使细菌浓度达到102CFU/mL，在不同的试管中加入组合物A、组合物B、组合物C、组合物E，不加组合物作为空白对照，不加细菌作为阴性对照，每个重复3次。置28℃摇床中震荡(180r/min)培养24h，然后取出与对照管对比观察，抑菌圈直径及抑菌等级如表1所示。
表1抑菌圈直径及抑菌等级
| 项目 | 抑菌圈直径(mm) | 抑菌等级 |
| 组合物A | 22.94±0.15 | +++ |
| 组合物B | 12.35±0.55 | + |
| 组合物C | 17.26±0.28 | ++ |
| 组合物D | 16.63±0.41 | ++ |
| 组合物E | 9.26±0.42 | + |
| 空白对照 | — | — |
| 阴性对照 | — | — |
上述表中，“+++”表示极敏，“++”表示高敏，“+”表示中敏或低敏，“－”表示不敏(无抑菌效果)。
由表1可知，组合物A、组合物B、组合物C、组合物D、组合物E均对嗜水气单胞菌有抑菌效果，其中组合物A的抑菌等级为极敏，组合物C和组合物D等级为高敏，组合物B、组合物E(不含鸡血藤提取物)等级为中敏或低敏，由此可见，含有鸡血藤提取物与千斤拔提取物的组合物对于嗜水气单胞菌具有显著的抑菌效果，其中组合物A的抑菌效果尤其显著，而对于组合物B，在制备鸡血藤提取物时，采用50℃的较低温度进行加热活化，无法对其中的抑菌成分充分的提取出，使其效果与组合物A相比有较大的差距，对于组合物C与组合物D，采用不同浓度梯度的乙醇进行浸提，效果与制备组合物A中浓度梯度的乙醇相比，也存在一定的差距，但不同浓度梯度的乙醇对鸡血藤提取物的抑菌效果的影响远低于活化温度的影响。由此表明，在组合物A中，鸡血藤提取物与千斤拔提取物、多西环素的结合，对嗜水气单胞菌具有显著的抑菌效果，改变加热活化的温度与乙醇的浓度梯度对于组合物对嗜水气单胞菌的抑菌效果也具有较大的影响。
实施例3鸡血藤提取物与千斤拔提取物的配比对抑菌效果的影响
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量600g粉末在80℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为50％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为60％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为90％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物。
将千斤拔粉碎过筛后得到千斤拔粉末，准确称量1500g千斤拔粉末加入到20倍量的浓度为70％的乙醇中，浸提2小时，将得到的浸提液在80℃下回流提取，然后浓缩后得到千斤拔提取物。
将48g鸡血藤提取物与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物A。
将5g鸡血藤提取物与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物B。
将48g鸡血藤提取物与150g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物C。
将5g鸡血藤提取物与150g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物D。
准确称量90g千斤拔提取物，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物E。
准确称量48g鸡血藤提取物，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物F。
准确称量20mg多西环素溶于10倍量的浓度为60％的乙醇中，混合均匀后得到组合物G。
在每个试管中加入嗜水气单胞菌的细菌悬液，使细菌浓度达到102CFU/mL，在不同的试管中加入组合物A、组合物B、组合物C、组合物E、组合物F、组合物G，不加组合物作为空白对照，不加细菌作为阴性对照，每个重复3次。置30℃摇床中震荡(180r/min)培养24h，然后取出与对照管对比观察，抑菌圈直径及抑菌等级如表2所示。
表2抑菌圈直径及抑菌等级
| 项目 | 抑菌圈直径(mm) | 抑菌等级 |
| 组合物A | 22.75±0.18 | +++ |
| 组合物B | 15.82±0.36 | ++ |
| 组合物C | 19.16±0.42 | ++ |
| 组合物D | 12.35±0.22 | + |
| 组合物E | 8.36±0.15 | + |
| 组合物F | 10.84±0.23 | + |
| 组合物G | 7.95±0.55 | + |
| 空白对照 | — | — |
| 阴性对照 | — | — |
上述表中，“+++”表示极敏，“++”表示高敏，“+”表示中敏或低敏，“－”表示不敏(无抑菌效果)。
由表2可知，组合物A、组合物B、组合物C、组合物D、组合物E、组合物F与组合物G均对嗜水气单胞菌有抑菌效果，其中组合物A的抑菌等级为极敏，组合物B和组合物C等级为高敏，组合物D、组合物E(不含鸡血藤提取物)和组合物F(千斤拔提取物)、组合物G(多西环素)等级为中敏或低敏。由此可见，含有鸡血藤提取物与千斤拔提取物的组合物对于嗜水气单胞菌具有显著的抑菌效果，其中组合物A的抑菌效果尤其显著，而组合物B的抑菌效果与组合物A相比，有明显的差距，组合物B与组合物A的区别在于，鸡血藤提取物的添加量为5g，由此可见，过低的鸡血藤提取物的添加量会降低组合物的抑菌效果；组合物C的抑菌效果与组合物A相比，有明显的差距，但效果明显优于组合物B；组合物C与组合物A的区别在于，千斤拔提取物的添加量为150g，由此可见，过高的千斤拔提取物的添加量会降低组合物的抑菌效果，但千斤拔提取物对组合物的抑菌效果的影响小于鸡血藤提取物。组合物D与组合物A的区别在于，鸡血藤提取物的添加量为5g，千斤拔提取物的添加量为150g，其抑菌效果均不及组合物A、组合物B、组合物C，表明鸡血藤提取物与千斤拔提取物的添加量需要在一定范围内才能实现最优的抑菌效果；对于组合物E与组合物F，分别添加鸡血藤提取物或千斤拔提取物的组合物，对嗜水气单胞菌具有一定的抑菌效果，但抑菌效果与同时包含鸡血藤提取物和千斤拔提取物的组合物的抑菌效果差距显著，而对于组合物G，单独的多西环素对于嗜水气单胞菌的抑菌效果低于分别添加鸡血藤提取物或千斤拔提取物的组合物，表明同时含有多西环素、鸡血藤提取物与千斤拔提取物的组合物才能对嗜水气单胞菌实现最优的抑菌效果。
实施例4含有鸡血藤提取物和千斤拔提取物的组合物对于舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌的抑菌效果
将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，准确称量600g粉末在80℃下加热20分钟；然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为50％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为60％的乙醇中，浸提12小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到20倍量的浓度为90％的乙醇中，浸提48小时，得到浸提液C；将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后得到鸡血藤提取物；
将千斤拔粉碎过筛后得到千斤拔粉末，准确称量1500g千斤拔粉末加入到20倍量的浓度为70％的乙醇中，浸提2小时，将得到的浸提液在80℃下回流提取，然后浓缩后得到千斤拔提取物；
将48g鸡血藤提取物与90g千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入20mg多西环素混合均匀后得到组合物。
在不同试管中分别加入舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌的细菌悬液，使细菌浓度达到103CFU/mL，在不同的试管中加入组合物，不加组合物作为空白对照，不加细菌作为阴性对照，每个重复3次。置28℃摇床中震荡(180r/min)培养24h，然后取出与对照管对比观察，抑菌圈直径及抑菌等级如表3所示。
表3组合物对不同气单胞菌属细菌的抑菌效果
上述表中，“+++”表示极敏，“++”表示高敏，“+”表示中敏或低敏，“－”表示不敏(无抑菌效果)。
由表3可知，含有多西环素、鸡血藤提取物与千斤拔提取物的组合物对舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌均有显著的抑菌效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种抑制气单胞菌属的组合物，其特征在于：该组合物由如下重量份的原料制成：
多西环素 0.008-0.028份，
鸡血藤提取物 32-50份，
千斤拔提取物 85-100份；
所述的鸡血藤提取物的制备方法，包括如下步骤：
（1）将鸡血藤粉碎过筛后得到鸡血藤粉末，将得到的粉末在60-90℃下加热5-30分钟；
（2）然后将加热后的粉末分为三份质量相同的鸡血藤粉末，将第一份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为40-55%的乙醇中，浸提12-24小时，得到浸提液A，将第二份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为60-75%的乙醇中，浸提12-24小时，得到浸提液B，将第三份鸡血藤粉末加入到10-30倍量的浓度为80-95%的乙醇中，浸提24-48小时，得到浸提液C；
（3）将所述的浸提液A、浸提液B与浸提液C混合均匀后过滤，将得到的滤液旋转蒸后即得；
所述的步骤（1）中的加热步骤的温度为60-80℃，时间为15-30分钟；所述的步骤（2）中的第一份鸡血藤粉末加入到浓度为50-55%的乙醇中，第二份鸡血藤粉末加入到浓度为60-65%的乙醇中，第三份鸡血藤粉末加入到浓度为80-90%的乙醇中；
所述的千斤拔提取物由包括如下步骤制备得到：将千斤拔粉碎过筛后得到千斤拔粉末，将所述的千斤拔粉末加入到10-30倍量的浓度为60-70%的乙醇中，浸提1-2小时，将得到的浸提液在80-90℃下回流提取，然后浓缩后得到所述的千斤拔提取物；
所述的气单胞菌属为舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌。
2.权利要求1所述的抑制气单胞菌属的组合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：将鸡血藤提取物与千斤拔提取物混合均匀，然后向其中加入多西环素混合均匀后即成。
3.权利要求1所述的抑制气单胞菌属的组合物在制备抑制气单胞菌属细菌的药物中的应用，其特征在于：所述的气单胞菌属为舒伯特气单胞菌菌株、嗜水气单胞菌、斑点气单胞菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011578288.2A CN112603936B (zh) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011578288.2A CN112603936B (zh) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112603936A CN112603936A (zh) | 2021-04-06 |
| CN112603936B true CN112603936B (zh) | 2022-08-02 |
Family
ID=75248551
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011578288.2A Active CN112603936B (zh) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112603936B (zh) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004099594A (ja) * | 2002-07-15 | 2004-04-02 | Kyouwa Yakuhin Kk | ティーツリー精油の新規用途 |
| CN101721489B (zh) * | 2009-12-24 | 2012-07-04 | 江南大学 | 一种抑制嗜水气单胞菌的植物提取物组合物 |
| LT3233843T (lt) * | 2014-12-16 | 2019-12-10 | Novartis Ag | Izoksazolo hidroksamido rūgšties junginiai, kaip lpxc inhibitoriai |
| CN106389621A (zh) * | 2016-08-12 | 2017-02-15 | 株洲千金药业股份有限公司 | 中药组合物联合抗生素在制备抑制炎症因子药物方面的应用 |
-
2020
- 2020-12-28 CN CN202011578288.2A patent/CN112603936B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112603936A (zh) | 2021-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114053383B (zh) | 一种防治仔猪腹泻的发酵中药微生态制剂及其制备方法 | |
| CN106924477B (zh) | 一种混合菌发酵生产的复合中药发酵制剂及其制备方法 | |
| CN110859896A (zh) | 一种替代抗生素预防保育仔猪腹泻的固态发酵中药添加剂 | |
| CN110564508A (zh) | 一种复配精油、制备方法及其在饲料中的应用 | |
| CN113616715B (zh) | 治疗仔猪腹泻及改善其肠道菌群的发酵中药口服液 | |
| CN112603936B (zh) | 一种抑制气单胞菌属的组合物及其制备方法与应用 | |
| KR20190086096A (ko) | 인지기능 개선용 한약재 조성물 | |
| CN113475644B (zh) | 一种饲料组合物及其制备方法与应用 | |
| CN107349402A (zh) | 一种治疗山羊传染性胸膜肺炎的中药组合物及其制备方法 | |
| CN118649191B (zh) | 用于水生动物的保肝护肠的中药组合物及其制备方法 | |
| Rathod et al. | Antifungal activity of some medicinal plant material extract against fungus Aspergillus niger | |
| CN112807348A (zh) | 一种抗病促长的中药复方及其制备和应用 | |
| CN107032872A (zh) | 以中药药渣为原料制备的兰花软腐病有机肥及制法 | |
| CN109350661B (zh) | 一种止咳化痰的发酵中药组合物及其在防治猪呼吸道疾病中的应用 | |
| CN106747965A (zh) | 一种铁皮石斛用缓苗快及高成活率的安全基质 | |
| CN110859251A (zh) | 南美白对虾用抗应激中草药提取物饲料添加剂 | |
| CN110051598A (zh) | 一种宠物护肤清洗液及其制备方法 | |
| CN105055539A (zh) | 具有抗菌作用的中草药提取物及其制备方法 | |
| CN103550770B (zh) | 一种鸡传染性法氏囊病复合泡腾片的制备方法 | |
| CN108077316A (zh) | 一种促进红景天生根的微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN111149951A (zh) | 一种刺参用活性发酵饲料的制作方法 | |
| CN115191448B (zh) | 防治烟草花叶病毒的微生物植物提取物复合剂及其应用 | |
| CN118216537B (zh) | 一种大蒜叶枯病防治药剂及其制备方法 | |
| CN112691184A (zh) | 一种用于抑制水霉的抑菌组合物及其制备方法 | |
| CN119214173B (zh) | 一种防治花生根腐病的微生物菌剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240402 Address after: Building 1, No. 256 Yule East Road, Sanzao Town, Jinwan District, Zhuhai City, Guangdong Province, 519000 Patentee after: Guangdong Jingbo Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: Haizhuqu District textile Ludongsha street in Guangzhou City, Guangdong province 510225 No. 24 Patentee before: ZHONGKAI University OF AGRICULTURE AND ENGINEERING Country or region before: China |