CN112011570A - 特异杀伤肿瘤细胞的溶瘤病毒系统及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种表达系统。根据本发明的实施例的表达系统在胃癌、胰腺癌细胞中的翻转能力高，具有该表达系统的表达载体，如腺病毒载体等，对胃癌、胰腺癌细胞的特异性杀伤效率高。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及特异杀伤肿瘤细胞的溶瘤病毒系统及其应用，更具体地，本发明涉及表达系统、重组病毒、重组细胞以及表达系统、重组病毒、重组细胞在制备药物中的用途以及药物组合物。
背景技术
溶瘤病毒是指一类具有复制与包装能力实现肿瘤杀伤作用的病毒。目前，多数研究通过改造一些自然界存在的致病力较弱的毒种，使其特异的在肿瘤细胞中表达包装继而实现溶瘤作用。利用溶瘤病毒识别肿瘤细胞的原理主要有两种：第一，利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞；第二，选择利用肿瘤特异性的启动子调控病毒关键基因的表达使溶瘤病毒在肿瘤细胞内大量复制并表达毒性蛋白摧毁肿瘤细胞，并/或同时分泌细胞因子刺激自身免疫系统攻击肿瘤细胞。相应的溶瘤病毒无法在正常机体细胞内复制而不具有杀伤作用，因此溶瘤病毒具有更高的抗肿瘤效应和更低的副作用。近几十年来，溶瘤病毒治疗引起了广泛关注，相关研究取得了巨大进展。目前腺病毒(adenovirus)、单纯疱疹病毒-1(herpes simplex virus-1，HSV-1)、新城疫病毒等相继被改造成溶瘤病毒。2006年，溶瘤腺病毒产品(oncorine)在中国已经用于临床治疗，主要用于治疗头颈部肿瘤、鼻窦癌等。Gendicine和oncorine的原理类似，将人5型腺病毒E1B-55kD区删除，使该病毒可在p53基因突变的癌细胞中繁殖并杀伤宿主细胞，产生溶瘤治疗作用。但是，临床数据显示这两种基于单一p53基因突变的溶瘤腺病毒的治疗效果并不十分理想。美国生物治疗公司Jennerex的JX-594是一种经过修改的牛痘病毒。在2013年完成的二期临床试验中，发现原发性肝癌患者在注射了高剂量的病毒后，其生命延长时间的中间值可达到14.1个月，而接受低剂量注射的患者只有6.7个月的生命延长期。目前该药物已经处于肝癌治疗的三期临床阶段。生物技术公司BioVex研发的基因工程化的单纯疱疹病毒OncoVEXGM-CSF已于2015年10月通过了FDA的批准成为美国和欧洲首个上市的溶瘤病毒产品。OncoVex可选择性地杀灭肿瘤细胞同时表达分泌GM-CSF启动机体产生系统的免疫反应杀伤剩余肿瘤细胞及其转移位点。2009年BioVex公布的一项转移性黑色素瘤II期试验的结果显示50名患者中有26％对治疗有反应，有8名患者完全恢复健康。该公司于2011年被Agmen以10亿美元的价格收购，用于推进三期临床试验。2013年3月，安进(Amgen)公布了OncoVex的治疗数据，临床证明它能成功地让晚期患者的肿瘤缩小，并在超过400名试验患者的III期研究中，Amgen的该药物要比同类其他药物表现得更加出色。
综上所述，溶瘤病毒确实在肿瘤的靶向治疗方面具有巨大的应用前景。但目前传统的溶瘤病毒研发平台仍然存在调控单一，靶向性差，平台转化能力低的问题。发明人前期构建了一个响应多输入信号的互抑制闭合回路，该回路通过开关调控E1A的表达进而调控腺病毒在癌细胞中的表达、复制和包装，在闭合回路中，去除一些病毒包装非必要的基因减少病毒对非靶标细胞的毒性，同时提高病毒的包装容量，如E3，E4等，替换腺病毒的外壳蛋白，改变病毒对特定细胞和组织的靶向性。
但基于该闭合回路仍存在较大的改进空间，发明人在前期工作的基础上，对该闭合回路进行了更深入和全面的研究和改进，以使该闭合回路应用于溶瘤病毒后，溶瘤病毒对疾病的治疗更加安全和有效。
发明内容
本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
发明人在对前期开发的闭合回路进一步改进的过程中，惊喜地发现，闭合回路中，某些肿瘤细胞特异性启动子在特定肿瘤细胞中对某些特异性肿瘤细胞microRNA的翻转能力显著高，而某些肿瘤细胞特异性启动子在某些肿瘤细胞中对其特异性microRNA的翻转能力却不高或没有翻转能力。基于此，发明人在前期研究平台的基础上，提出了特异性针对某种癌症的闭合回路，该闭合回路在特异癌症细胞中的翻转能力高，承载该闭合回路的溶瘤病毒对特异癌症细胞的杀伤效率高而有效，且对正常细胞没有杀伤，安全性也更高。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种表达系统。根据本发明的实施例，所述系统包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子含有细胞特异性启动子；第二核酸分子，所述第二核酸分子与所述第一核酸分子可操作地连接，所述第二核酸分子编码转录激活因子；第三核酸分子，所述第三核酸分子含有所述转录激活因子的第一识别序列；第四核酸分子，所述第四核酸分子与所述第三核酸分子可操作地连接，所述第四核酸分子含有第一启动子和第一调控元件；第五核酸分子，所述第五核酸分子与第四核酸分子可操作地连接，所述第五核酸分子编码第一调控蛋白和目的蛋白，并且所述目的蛋白包括选自病毒复制包装蛋白、免疫效应因子的至少之一；第六核酸分子，所述第六核酸分子含有所述转录激活因子的第二识别序列；第七核酸分子，所述第七核酸分子与所述第六核酸分子可操作地连接，所述第七核酸分子含有第二启动子和第二调控元件；第八核酸分子，所述第八核酸分子与第七核酸分子可操作地连接，并且所述第八核酸分子编码第二调控蛋白；第九核酸分子，所述第九核酸分子与所述第五核酸分子可操作地连接，所述第九核酸分子被配置为条件性抑制所述第一调控蛋白的表达；以及第十核酸分子，所述第十核酸分子与所述第八核酸分子可操作地连接，所述第十核酸分子被配置为条件性抑制所述第二调控蛋白的表达，其中，所述第一调控元件适于通过结合所述第二调控蛋白抑制所述第一启动子的功能，所述第二调控元件适于通过结合所述第一调控蛋白抑制所述第二启动子的功能；所述第九核酸分子与所述第十核酸分子分别独立地借助RNA干扰抑制所述第一调控蛋白或所述第二调控蛋白的表达；所述第九核酸分子含有被第一microRNA特异性识别的核酸序列，所述第十核酸分子含有被第二microRNA特异性识别的核酸序列，所述第一microRNA为正常细胞特异性microRNA，所述第二microRNA为异常细胞特异性microRNA；所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21；或所述细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p所述第二microRNA为mir-21。根据本发明的实施例的表达系统在胃癌、胰腺癌细胞中的翻转能力高，具有该表达系统的表达载体，如腺病毒载体等，对胃癌、胰腺癌细胞的特异性杀伤效率高。
根据本发明的实施例，所述表达系统还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述第一识别序列与所述第二识别序列分别独立地选自UAS,tetO以及dCas9的靶标序列至少之一。其中，所述UAS或tetO片段的重复次数可根据需要进行调整，如可选择2×UAS、3×UAS、4×UAS或5×UAS，5×tetO、6×tetO或7×tetO。
根据本发明的实施例，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS。发明人在实验中意外地发现，使用癌特异启动子CEA368与癌特异microRNA mir-21及mir-143-3p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒、使用癌特异启动子CEA205与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒、使用癌特异启动子CEA368与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒、使用癌特异启动子CXCR4与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒、使用癌特异启动子Survivin1与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胃癌细胞系AGS，5×UAS开关线路相较于4×UAS开关线路对胃正常细胞系GES1影响更小。
根据本发明的实施例，所述转录激活因子为选自Gal4VP16、Gal4VP64、Gal4esn、dCas9-VP16、dCas9-VP64、dCas9-VPR、dCas9-VTR以及rtTA至少之一。
根据本发明的实施例，所述第一识别序列与所述第二识别序列分别独立地选自5×UAS,7×tetO和dCas9的靶标序列至少之一。
根据本发明的实施例，所述第一启动子与所述第二启动子分别独立地选自miniCMV、TATA box。
根据本发明的实施例，所述第一调控蛋白和第二调控蛋白分别独立地选自Lacl、tetR、zinc finger(锌指)、TALE、KRAB、tetR-KRAB、、TALE-KRAB、dCas9-KRAB、miniCas9-KRAB、分割dCas9-KRAB至少之一。
根据本发明的实施例，所述第一调控元件和所述第二调控元件分别独立地选自tetO、LacO、锌指蛋白目的序列(zinc finger target site)、TALE蛋白靶标序列、dCas9的靶标序列以及miniCas9的靶标序列至少之一。
根据本发明的实施例，所述第一调控蛋白是LacI，所述第二调控元件包括多个重复的LacO序列，所述多个重复的LacO序列的至少之一设置在所述第二启动子的下游。LacI表达后，可特异性结合LacO序列，进而抑制第二启动子的功能。根据本发明的实施案例的LacI/LacO抑制系统，通过实验表明该系统可以有效地抑制启动子下游基因的表达。
根据本发明的实施例，所述第二调控蛋白是tetR-KRAB所述第一调控元件包括多个重复的tetO序列，所述多个重复的tetO序列的至少之一设置在所述第一启动子的下游。根据本发明的实施案例的tetR-KRAB/tetO抑制系统，可以有效的抑制启动子下游基因的表达。
根据本发明的实施例，所述病毒复制包装蛋白、免疫效应因子可以以融合蛋白的形式存在。病毒复制包装蛋白可有效保证表达系统载体在宿主中的存活和复制；免疫效应因子的表达可有效激活机体的免疫系统，进而促进对胃癌细胞、胰腺癌细胞的免疫杀伤。
根据本发明的实施例，所述病毒复制包装相关蛋白包括选自腺病毒E1基因,E1A基因，E1B基因，E2基因，E4基因至少之一。
根据本发明的实施例，所述免疫效应因子包括选自拮抗PD-1基因的抑制序列、拮抗PD-L1基因的抑制序列、拮抗CTLA4基因的抑制序列、拮抗Tim-3基因的抑制序列、GM-CSF、IL-2、IL-12、IL-15至少之一。任选地，上述的免疫效应因子可以以融合蛋白的形式存在。
根据本发明的实施例，所述目的蛋白与所述第一调控蛋白是以融合蛋白的形式表达的，并且所述目的蛋白与所述第一调控蛋白之间通过可切割的连接肽连接的。目的蛋白与第一调控蛋白在相同启动子下被调控表达，其表达后在连接肽处被切割，目的蛋白与第一调控蛋白分开，目的蛋白和第一调控蛋白相互独立地发挥功能。
根据本发明的实施例，所述第一核酸分子与所述第二核酸分子负载在第一表达载体上，所述第三核酸分子、所述第四核酸分子、所述第五核酸分子以及所述第九核酸分子负载在第二表达载体上，所述第六核酸分子、所述第七核酸分子、所述第八核酸分子以及所述第十核酸分子负载在第三表达载体上。第一、第二和第三表达载体作为表达系统的负载载体，实现目的蛋白在胃癌细胞、胰腺癌细胞的特异性表达。
所述表达载体的选择不受特别限制，只要能够实现表达系统在胃癌细胞、胰腺癌细胞的特异性发挥功能即可。根据本发明的具体实施例，所述第一表达载体、第二表达载体和第三表达载体分别独立地选自下列的至少之一：
质粒、病毒、稳定细胞系以及其他材料载体如纳米材料，脂质体，分子耦联载体、裸露DNA、染色体载体、多聚物。
根据本发明的实施例，所述病毒包括选自腺病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、逆转录病毒的至少之一。
根据本发明的实施例，所述第一表达载体、第二表达载体和第三表达载体构建负载在同一个载体上。需要说明的是，第一表达载体、第二表达载体和第三表达载体的连接顺序不受特别限制，只要不影响系统的生物学功能的实现即可。根据本发明的具体实施例，负载在同一表达载体上可以有效的解决多个大片段载体共转染效率极低的问题。
根据本发明的实施例，所述同一个载体为腺病毒载体。腺病毒作为基因治疗载体具有主范围广，对人致病性低、在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因、滴度高、与人类基因同源、无插入致突变性、能在悬浮培养液中扩增、能同时表达多个基因的优点。
根据本发明的实施例，所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS。根据本发明实施例的上述元件组成的表达系统控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胃癌细胞，同时具有5×UAS的开关线路相较于具有4×UAS开关线路胃正常细胞的杀伤影响更小。
根据本发明的实施例，所述细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS。根据本发明实施例的上述元件组成的表达系统控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胰腺癌细胞。
根据本发明的实施例，所述腺病毒载体携带具有SEQ ID NO：1～26任一所示核苷酸序列的核酸。
具有SEQ ID NO:1所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA205、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGGTGCCGCCCCCCGCGGGTGACCGCCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGACTACTGTAGTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGCGGATGACTGTCATCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGATGGCGCATGCCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGGACGGGGATTCCCCGGGTCCGGGATTTACCCCCCACGACTCCGCCCCCTACGGCGCTCTGGATATGGCCGACTTCGAGTTTGAGCAGATGTTTACCGATGCCCTTGGAATTGACGAGTACGGTGGGACGCGTATGAAGCTACTGTCTTCTATCGAACAAGCATGCGATATTTGCCGACTTAAAAAGCTCAAGTGCTCCAAAGAAAAACCGAAGTGCGCCAAGTGTCTGAAGAACAACTGGGAGTGTCGCTACTCTCCCAAAACCAAAAGGTCTCCGCTGACTAGGGCACATCTGACAGAAGTGGAATCAAGGCTAGAAAGACTGGAACAGCTATTTCTACTGATTTTTCCTCGAGAAGACCTTGACATGATTTTGAAAATGGATTCTTTACAGGATATAAAAGCATTGTTAACAGGATTATTTGTACAAGATAATGTGAATAAAGATGCCGTCACAGATAGATTGGCTTCAGTGGAGACTGATATGCCTCTAACATTGAGACAGCATAGAATAAGTGCGACATCATCATCGGAAGAGAGTAGTAACAAAGGTCAAAGACAGTTGACTGTATAAAAGCTTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATC(SEQ ID NO:1)。
具有SEQ ID NO:2所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA205、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:2)。
具有SEQ ID NO:3所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为LacI与tetR-KRAB、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGGTGCCGCCCCCCGCGGGTGACCGCCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGACTACTGTAGTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGCGGATGACTGTCATCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTCTCCCAGGGGATGGGGGTCCATCCACCTTGCCGAAAAGATTTGTCTGAGGAACTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGC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ID NO:3)。
具有SEQ ID NO:4所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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IDNO:4)。
具有SEQ ID NO:5所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CXCR4、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统(SEQ ID NO:5)。
CGGGGTGCCGCCCCCCGCGGGTGACCGCCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGACTACTGTAGTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGCGGATGACTGTCATCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTTACCGACCACCCGCAAACAGCAGGGTCCCCTGGGCTTCCCAAGCCGCGCACCTCTCCGCCCCGCCCCTGCGCCCTCCTTCCTCGCGTCTGCCCCTCTCCCCCACCCCGCCTTCTCCCTCCCCGCCCCAGCGGCGCATGCGCCGCGCTCGGAGCGTGTTTTTATAAAAGTCCGGCCGCGGCCAGAAACTTCAGTTTGTTGGCTGCGGCAGCAGGTAGCAAAGTGACGCCGAGGGCCTGAGTGCTCCAGTAGCCACCGCATCTGGAGAACCAGCGGTTACCCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAG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ID NO:5)。
具有SEQ ID NO:6所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CXCR4、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:6)。
具有SEQ ID NO:7所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子Survivin1、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGGTGCCGCCCCCCGCGGGTGACCGCCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGACTACTGTAGTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGCGGATGACTGTCATCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTTAGGTGTGGGCAGGGACGAGCTGGCGCGGCGTCGCTGGGTGCACCGCGACCACGGGCAGAGCCACGCGGCGGGAGGACTACAACTCCCGGCACACCCCGCGCCGCCCCGCCTCTACTCCCAGAAGGCCGCGGGGGGTGGACCGCCTAAGAGGGCGTGCGCTCCCGACATGCCCCGCGGCGCGCCATTAACCGCCAGATTTGAATCGCGGGACCCGTTGGCAGAGGTGGCGGCGGCGGCATGGGTGCCCCGACGTTGCCCCCTGCCTGGCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGAT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ID NO:7)。
具有SEQ ID NO:8所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子Survivin1、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:8)。
具有SEQ ID NO:9所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGGTGCCGCCCCCCGCGGGTGACCGCCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAAAGCGGACTACTGTAGTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGCGGATGACTGTCATCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTCTCCCAGGGGATGGGGGTCCATCCACCTTGCCGAAAAGATTTGTCTGAGGAACTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTC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ID NO:9)。
具有SEQ ID NO:10所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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CCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACTCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCCACGATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAAGCATTGTGGCCCAGCTGAGCCGGCCTGATCCGGCGTTGGCCGCGTTGACCAACGACCACCTCGTCGCCTTGGCCTGCCTCGGCGGACGTCCTGCCATGGATGCAGTGAAAAAGGGATTGCCGCACGCGCCGGAATTGATCAGAAGAGTCAATCGCCGTATTGGCGAACGCACGTCCCATCGCGTTGCCGACTACGCGCAAGTGGTTCGCGTGCTGGAGTTTTTCCAGTGCCACTCCCACCCAGCGTACGCATTTGATGAGGCCATGACGCAGTTCGGGATGAGCAGGAACGGGTTGGTACAGCTCTTTCGCAGAGTGGGCGTCACCGAACTCGAAGCCCGCGGTGGAACGCTCCCCCCAGCCTCGCAGCGTTGGGACCGTATCCTCCAGGCATCAGGGATGAAAAGGGCCAAACCGTCCCCTACTTCAGCTCAAACACCGGATCAGGCGTCTTTGCATGCATTCGCCGATTCGCTGGAGCGTGACCTTGATGCGCCCAGCCCAATGCACGAGGGAGATCAGACGCGGGCAAGCAGCCGTAAACGGTCCCGATCGGATCGTGCTGTCACCGGCCCCTCCGCACAGCAGGCTGTCGAGGTGCGCGTTCCCGAACAGCGCGATGCGCTGCATTTGCCCCTCAGCTGGAGGGTAAAACGCCCGCGTACCAGGATCTGGGGCGGCCTCCCGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTCTCCCAGGGGATGGGGGTCCATCCACCTTGCCGAAAAGATTTGTCTGAGGAACTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGGTGAACTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGATGGCGCATGCCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGAGCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGAGCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGAGCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGGACGGGGATTCCCCGGGTCCGGGATTTACCCCCCACGACTCCGCCCCCTACGGCGCTCTGGATATGGCCGACTTCGAGTTTGAGCAGATGTTTACCGATGCCCTTGGAATTGACGAGTACGGTGGGACGCGTATGAAGCTACTGTCTTCTATCGAACAAGCATGCGATATTTGCCGACTTAAAAAGCTCAAGTGCTCCAAAGAAAAACCGAAGTGCGCCAAGTGTCTGAAGAACAACTGGGAGTGTCGCTACTCTCCCAAAACCAAAAGGTCTCCGCTGACTAGGGCACATCTGACAGAAGTGGAATCAAGGCTAGAAAGACTGGAACAGCTATTTCTACTGATTTTTCCTCGAGAAGACCTTGACATGATTTTGAAAATGGATTCTTTACAGGATATAAAAGCATTGTTAACAGGATTATTTGTACAAGATAATGTGAATAAAGATGCCGTCACAGATAGATTGGCTTCAGTGGAGACTGATATGCCTCTAACATTGAGACAGCATAGAATAAGTGCGACATCATCATCGGAAGAGAGTAGTAACAAAGGTCAAAGACAGTTGACTGTATAAAAGCTTCACTCCTCAGGTGCAGGCTGCCTATCAGAAGGTGGTGGCTGGTGTGGCCAATGCCCTGGCTCACAAATACCACTGAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATC(SEQ ID NO:10)。
具有SEQ ID NO:11所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA205、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGTGACCGCCCTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGGGTGCCGCCCCCCGCGGACTACTGTAGTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGATGGCGCATGCCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTGGACATGTTGGGGGACGGGGATTCCCCGGGTCCGGGATTTACCCCCCACGACTCCGCCCCCTAC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ID NO:11)。
具有SEQ ID NO:12所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA205、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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ID NO:12)。
具有SEQ ID NO:13所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGTGACCGCCCTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGGGTGCCGCCCCCCGCGGACTACTGTAGTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTCTCCCAGGGGATGGGGGTCCATCCACCTTGCCGAAAAGATTTGTCTGAGGAACTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGGTGAACTCGAGACCGG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IDNO:13)。
具有SEQ ID NO:14所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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ID NO:14)。
具有SEQ ID NO:15所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CXCR4、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGTGACCGCCCTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGGGTGCCGCCCCCCGCGGACTACTGTAGTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTTACCGACCACCCGCAAACAGCAGGGTCCCCTGGGCTTCCCAAGCCGCGCACCTCTCCGCCCCGCCCCTGCGCCCTCCTTCCTCGCGTCTGCCCCTCTCCCCCACCCCGCCTTCTCCCTCCCCGCCCCAGCGGCGCATGCGCCGCGCTCGGAGCGTGTTTTTATAAAAGTCCGGCCGCGGCCAGAAACTTCAGTTTGTTGGCTGCGGCAGCAGGTAGCAAAGTGACGCCGAGGGCCTGAGTGCTCCAGTAGCCACCGCATCTGGAGAACCAGCGGTTACCCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGATGGCGCATGCCGACGCGCTAGACG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ID NO:15)。
具有SEQ ID NO:16所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CXCR4、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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ID NO:16)。
具有SEQ ID NO:17所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子Survivin1、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGTGACCGCCCTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATATCACATAGGAATAAAAAGCCATAGAAAGCGGGGTGCCGCCCCCCGCGGACTACTGTAGTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTTAGGTGTGGGCAGGGACGAGCTGGCGCGGCGTCGCTGGGTGCACCGCGACCACGGGCAGAGCCACGCGGCGGGAGGACTACAACTCCCGGCACACCCCGCGCCGCCCCGCCTCTACTCCCAGAAGGCCGCGGGGGGTGGACCGCCTAAGAGGGCGTGCGCTCCCGACATGCCCCGCGGCGCGCCATTAACCGCCAGATTTGAATCGCGGGACCCGTTGGCAGAGGTGGCGGCGGCGGCATGGGTGCCCCGACGTTGCCCCCTGCCTGGCTCGAGACCGGTATGGCCCCCCCGACCGATGTCAGCCTGGGGGACGAGCTCCACTTAGACGGCGAGGACGTGGCGATGGCGCATGCCGACGCGCTAGACGATTTCGATCTG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ID NO:17)。
具有SEQ ID NO:18所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子Survivin1、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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IDNO:18)。
具有SEQ ID NO:19所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-143-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGGTGACCGCCCTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGTTACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCACAAACACCATTGTCACACTCCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAGCTACAGTGCTTCATCTCAGAAAGCGGGGTGCCGCCCCCCGCGGACTACTGTAGTCCGCGGACGACTGTCGTCCGCGGAGCACTGTGCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGCCTTTTGCTCACATGTCTCCCAGGGGATGGGGGTCCATCCACCTTGCCGAAAAGATTTGTCTGAGGAACTGAAAATAGAAGGGAAAAAAGAGGAGGGACAAAAGAGGCAGAAATGAGAGGGGAGGGGACAGAGGACACCTGAATAAAGACCACACCCATGACCCACGTGATGCTGAGAAGTACTCCTGCCCTAGGAAGAGACTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGGTGAACTCGAGACCGGTATGGCCC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ID NO:19)。
具有SEQ ID NO:20所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子CEA368、第一microRNA为mir-135a-5p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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ID NO:20)。
具有SEQ ID NO:21所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGCCATATGTCTTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGTACCGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTGGCTGCAGAGCCTCCTTCTACTGGGCACCGTGGCTTGCAGCATCTCGGCCCCCGCCAGAAGTCCCAGCCCCAGCACCCAGCCCTGGGAACACGTAAATGCAATCCAGGAGGCCCGCCGCCTCCTGAACTTGTCACGGGACACGGCAGCCGAGATGAATGAAACTGTGGAGGTCATCAGTGAAATGTTTGACTTGCAGGAGCCCACATGCCTGCAGACTCGGCTGGAGCTCTACAAACAGGGCCTGCGTGGCAGCCTCACCAAGCTGAAGGGCCCACTGACCATGATGGCTAGCCATTACAAGCAGCACTGCCCGCCGACCCCTGAGACATCCTGTGCCACTCAGATCATTACCTTTGAGTCTTTCAAGGAGAACCTCAAGGACTTTCTGCTGGTCATCCCATTTGACTGCTGGGAACCCGTCCAGGAAAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGCGGCCGCTAACCAATGTGCAGACTACTGTTAACCAATGTGCAGACTACTGTGAATTCTAACCAATGTGCAGACTACTGTTAACCAATGTGCAGACTACTGTAAGCTTCGAATTGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGGTCGACAATACTAGTTAAGAAAGCGGTCCACTGTGTGCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGCGGTCTTTCGTCCGCGGGTGACCGCCCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGACTAGTGTTCATCGGAGCCCAGGTTTACTCCCTTAAGTGGAAATTTCTTCCCCCACTCCCTCCTTGGCTTTCTCCAAGGAGGGAACCCAGGCTACTGGAAAGTCCGGCTGGGGCGGGGACTGTGGGTTTCAGGGTAGAACTGCGTGTGGAACGGGACAGGGAGCGGTTAGAAGGGTGGGGCTATTCCGGGAAGTGGTGGGGGGAGGGAGCCCAAAACTAGCACCTAGTCCACTCATTATCCAGCCCTCTTATTTCTCGGCCCCGCTCTGCTTCAGTGGACCCGGGGAGGGCGGGGAAGTGGAGTGGGAGACCTAGGGGTGGGCTTCCCGACCTTGCTGTAC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ID NO:21)。
具有SEQ ID NO:22所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为Lacl、tetR-KRAB、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGCCATATGTCTTCCGCGGAGTGCTGTACTCCGCGGAGTACTGTCCTCCGCGGAGTGCCGCACTCCGAGCGGAGACTCTAGACTCCCTATCAGTGATAGAGATAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCTCCCTATCAGTGATAGAGAGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCACTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTCCCATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGACGCTCGCTGCCAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCGTGGTGCAGCCCGGCAGGAGCCTGAGGCTGGACTGCAAGGCCAGCGGCATCACCTTCAGCAACAGCGGCATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCGTGATCTGGTACGACGGCAGCAAGAGGTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTTCCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCAACGACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGTGGAGGCGGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCGGAGATCGTGCTGACCCAGAGCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGCGAGAGGGCCACCCTGAGCTGCAGGGCCAGCCAGAGCGTGAGCAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGGCTGCTGATCTACGACGCCAGCAACAGGGCCACCGGCATCCCCGCCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGGAGCCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGCAGCAACTGGCCCAGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCATGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGGGTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCGGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGAGCAGCCTGAGGCCTCCTAAGAAGAAGAGGAAGGTTGCGGCCGCTAACCAATGTGCAGACTACTGTTAACCAATGTGCAGACTACTGTGAATTCTAACCAATGTGCAGACTACTGTTAACCAATGTGCAGACTACTGTAAGCTTCGAATTGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGAGTAGTGCTTTCTACTTTATGGTCGACAATACTAGTTAAGAAAGCGGTCCACTGTGTGCCGCGGGTGACAGCCCTCCGCGGCGGTCTTTCGTCCGCGGGTGACCGCCCTCCGAGCGGAGACTCTAGAAATTGTGAGCGGATAACAATTGGGTATATAATGGGGGCCGTCAGCTACTACCAGAGCCGATCGAACACTCGAGCCGAGCAGACGTGCCTACAATTGTGAGCGCTCACAATTACTAGAAGATCTTGAATTCGCCACCATGGCTAGATTAGATAAAAGTAAAGTGATTAACAGCGCATTAGAGCTGCTTAATGAGGTCGGAATCGAAGGTTTAACAACCCGTAAACTCGCCCAGAAGCTAGGTGTAGAGCAGCCTACATTGTATTGGCATGTAAAAAATAAGCGGGCTTTGCTCGACGCCTTAGCCATTGAGATGTTAGATAGGCACCATACTCACTTTTGCCCTTTAGAAGGGGAAAGCTGGCAAGATTTTTTACGTAATAACGCTAAAAGTTTTAGATGTGCTTTACTAAGTCATCGCGATGGAGCAAAAGTACATTTAGGTACACGGCCTACAGAAAAACAGTATGAAACTCTCGAAAATCAATTAGCCTTTTTATGCCAACAAGGTTTTTCACTAGAGAATGCATTATATGCACTCAGCGCTGTGGGGCATTTTACTTTAGGTTGCGTATTGGAAGATCAAGAGCATCAAGTCGCTAAAGAAGAAAGGGAAACACCTACTACTGATAGTATGCCGCCATTATTACGACAAGCTATCGAATTATTTGATCACCAAGGTGCAGAGCCAGCCTTCTTATTCGGCCTTGAATTGATCATATGCGGATTAGAAAAACAACTTAAATGTGAAAGTGGGTCGCCAAAAAAGAAGAGAAAGGTGGATGGTGGCGGAGCACTGTCTCCCCAGCATTCAGCTGTGACCCAGGGATCAATCATTAAGAACAAGGAAGGTATGGATGCTAAGTCCCTGACCGCTTGGTCAAGAACTTTGGTAACTTTTAAGGACGTGTTCGTCGATTTTACTCGGGAGGAGTGGAAACTATTGGATACCGCCCAGCAAATCGTGTATAGAAACGTTATGCTCGAGAACTATAAGAATCTTGTGTCACTGGGCTACCAACTGACAAAGCCTGACGTTATCCTGAGGCTGGAAAAGGGTGAGGAGCCTTGGTTGGTCGAGCGGGAGATCCACCAGGAAACTCACCCAGACAGTGAGACTGCTTTCGAGATCAAGTCCTCTGTGTAATACAAGGCGGCCGCAAATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTATCAACATCAGTCTGATAAGCTAAAGCTTCGAATTCTGATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCAGCTCGACTAGTGTTCA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IDNO:22)。
具有SEQ ID NO:23所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为4×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAT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ID NO:23)。
具有SEQ ID NO:24所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为Gal4VP16、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:24)。
具有SEQ ID NO:25所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为分割dCas9、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:25)。
具有SEQ ID NO:26所述核苷酸序列的核酸编码由细胞特异性启动子hMUC1、第一microRNA为mir-199a-3p、第二microRNA为mir-21、转录激活因子为分割dCas9、第一调控蛋白和第二调控蛋白分别为TALE蛋白、第一和第二识别序列为5×UAS的元件组成的表达系统。
CGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTACTGTCCTCCGAGCGGAGTTCTGTCCTCCGAGCGGAGACTCTAGATACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTCGAGTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTTACCCCTCTCCGCTTCTGAATTCGACCGCCACCATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTTTGTGTTAGATTATGTGGAGCACCCCGGGCACGGTTGCAGGTCTTGTCATTATCACCGGAGGAATACGGGGGACCCAGATATTATGTGTTCGCTTTGCTATATGAGGACCTGTGGCATGTTTGTCTACAGTAAGTGAAAATTATGGGCAGTGGGTGATAGAGTGGTGGGTTTGGTGTGGTAATTTTTTTTTTAATTTTTACAGTTTTGTGGTTTAAAGAATTTTGTATTGTGATTTTTTTAAAAGGTCCTGTGTCTGAACCTGAGCCTGAGCCCGAGCCAGAACCGGAGCCTGCAAGACCTACCCGCCGTCCTAAAATGGCGCCTGCTATCCTGAGGCGCCCGACATCACCTGTGTCTAGAGAATGCAATAGTAGTACGGATAGCTGTGACTCCGGTCCTTCTAACACACCTCCTGAGATACACCCGGTGGTCCCGCTGTGCCCCATTAAACCAGTTGCCGTGAGAGTTGGTGGGCGTCGCCAGGCTGTGGAATGTATCGAGGACTTGCTTAACGAGCCTGGGCAACCTTTGGACTTGAGCTGTAAACGCCCCAGGCCAGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTATGGAGGCTTGGGAGTGTTTGGAAGATTTTTCTGCTGTGCGTAACTTGCTGGAACAGAGCTCTAACAGTACCTCTTGGTTTTGGAGGTTTCTGTGGGGCTCATCCCAGGCAAAGTTAGTCTGCAGAATTAAGGAGGATTACAAGTGGGAATTTGAAGAGCTTTTGAAATCCTGTGGTGAGCTGTTTGATTCTTTGAATCTGGGTCACCAGGCGCTTTTCCAAGAGAAGGTCATCAAGACTTTGGATTTTTCCACACCGGGGCGCGCTGCGGCTGCTGTTGCTTTTTTGAGTTTTATAAAGGATAAATGGAGCGAAGAAACCCATCTGAGCGGGGGGTACCTGCTGGATTTTCTGGCCATGCATCTGTGGAGAGCGGTTGTGAGACACAAGAATCGCCTGCTACTGTTGTCTTCCGTCCGCCCGGCGATAATACCGACGGAGGAGCAGCAGCAGCAGCAGGAGGAAGCCAGGCGGCGGCGGCAGGAGCAGAGCCCATGGAACCCGAGAGCCGGCCTGGACCCTCGGGAATGAATGTTGTACAGGTGGCTGAACTGTATCCAGAACTGAGACGCATTTTGACAATTACAGAGGATGGGCAGGGGCTAAAGGGGGTAAAGAGGGAGCGGGGGGCTTGTGAGGCTACAGAGGAGGCTAGGAATCTAGCTTTTAGCTTAATGACCAGACACCGTCCTGAGTGTATTACTTTTCAACAGATCAAGGATAATTGCGCTAATGAGCTTGATCTGCTGGCGCAGAAGTATTCCATAGAGCAGCTGACCACTTACTGGCTGCAGCCAGGGGATGATTTTGAGGAGGCTATTAGGGTATATGCAAAGGTGGCACTTAGGCCAGATTGCAAGTACAAGATCAGCAAACTTGTAAATATCAGGAATTGTTGCTACATTTCTGGGAACGGGGCCGAGGTGGAGATAGATACGGAGGATAGGGTGGCCTTTAGATGTAGCATGATAAATATGTGGCCGGGGGTGCTTGGCATGGACGGGGTGGTTATTATGAATGTAAGGTTTACTGGCCCCAATTTTAGCGGTACGGTTTTCCTGGCCAATACCAACCTTATCCTACACGGTGTAAGCTTCTATGGGTTTAACAATACCTGTGTGGAAGCCTGGACCGATGTAAGGGTTCGGGGCTGTGCCTTTTACTGCTGCTGGAAGGGGGTGGTGTGTCGCCCCAAAAGCAGGGCTTCAATTAAGAAATGCCTCTTTGAAAGGTGTACCTTGGGTATCCTGTCTGAGGGTAACTCCAGGGTGCGCCACAATGTGGCCTCCGACTGTGGTTGCTTCATGCTAGTGAAAAGCGTGGCTGTGATTAAGCATAACATGGTATGTGGCAACTGCGAGGACAGGGCCTCTCAGATGCTGACCTGCTCGGACGGCAACTGTCACCTGCTGAAGACCATTCACGTAGCCAGCCACTCTCGCAAGGCCTGGCCAGTGTTTGAGCATAACATACTGACCCGCTGTTCCTTGCATTTGGGTAACAGGAGGGGGGTGTTCCTACCTTACCAATGCAATTTGAGTCACACTAAGATATTGCTTGAGCCCGAGAGCATGTCCAAGGTGAACCTGAACGGGGTGTTTGACATGACCATGAAGATCTGGAAGGTGCTGAGGTACGATGAGACCCGCACCAGGTGCAGACCCTGCGAGTGTGGCGGTAAACATATTAGGAACCAGCCTGTGATGCTGGATGTGACCGAGGAGCTGAGGCCCGATCACTTGGTGCTGGCCTGCACCCGCGCTGAGTTTGGCTCTAGCGATGAAGATACAGATCTCGAGGGGTCCGGAGCTACAAATTTTTCCCTCCTCAAACAGGCTGGAGATGTCGAAGAAAATCCTGGGCCTACCGGTATGTATAGGATGCAGTTGCTCTCTTGCATCGCCCTGTCTCTAGCGTTGGTGACTAATAGCGCCCCTACTTCTTCTTCCACGAAGAAAACCCAGCTGCAACTGGAACACCTTCTGCTGGATCTCCAGATGATCCTTAACGGGATTAACAACTATAAGAACCCGAAGCTCACGGCTATGCTGACGGCGAAGTTCGCTATGCCTAAAAAGGCTACTGAGCTGAAACACTTACAGTGTCTCGAAGAGGCACTCAAACCCCTCGAGGAGGTACTCAATCTGGCGCAAAGCAAAAACTTCCATCTCCGCCCACGGGACCTAATCTCCAACATCAACGTGATTGTGCTGGAGCTCAAGGGGTCTGAAACCACGTTTATGTGCGAGTACGCAGATGAAACTGCTACCATAGTGGAATTCCTCAATCGTTGGATCACTTTCTGCCAGTCAATCATTTCAACCCTGACCAGATCTGAGGGCCGCGGCAGCCTGCTGACCTGCGGCGACGTGGAGGAAAACCCCGGCCCCGGATCCTTGTCGACCATTCGTCCGCGCAGGCCAAGTCCTGCCCGCGAGCTTCTGCCCGGACCCCAACCGGATAGGGTTCAGCCGACTGCAGATCGTGGGGTGTCTGCGCCTGCTGGCAGCCCTCTGGATGGCTTGCCCGCTCGGCGGACGGTGTCCCGGACCCGGCTGCCATCTCCCCCTGCGCCCTCACCTGCGTTCTCGGCGGGCAGCTTCAGCGATCTGCTCCGTCCGTTCGATCCGTCGCTTCTTGATACATCGCTTCTTGATTCGATGCCTGCCGTCGGCACGCCGCATACAGCGGCTGCCCCAGCAGAGTGGGATGAGGCGCAATCGGCTCTGCGTGCAGCCGATGACCCGCCACCCACCGTGCGTGTCGCTGTCACTGCCGCGCGGCCGCCGCGCGCCAAGCCGGCCCCGCGACGGCGTGCTGCGCAACCCTCCGACGCTTCGCCGGCCGCGCAGGTGGATCTACGCACGCTCGGCTACAGTCAGCAGCAGCAAGAGAAGATCAAACCGAAGGTGCGTTCGACAGTGGCGCAGCACCACGAGGCACTGGTGGGCCATGGGTTTACACACGCGCACATCGTTGCGCTCAGCCAACACCCGGCAGCGTTAGGGACCGTCGCTGTCACGTATCAGCACATAATCACGGCGTTGCCAGAGGCGACACACGAAGACATCGTTGGCGTCGGCAAACAGTGGTCCGGCGCACGCGCCCTGGAGGCCTTGCTCACGGATGCGGGGGAGTTGAGAGGTCCGCCGTTACAGTTGGACACAGGCCAACTTGTGAAGATTGCAAAACGTGGCGGCGTGACCGCAATGGAGGCAGTGCATGCATCGCGCAATGCACTGACGGGTGCCCCCCTGAACCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACGGTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACATTGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGGTGGCTATCGCCAGCAACAATGGCGGCAAGCAAGCGCTCGAAACGGTGCAGCGGCTGTTGCCGGTGCTGTGCCAGGACCATGGCCTGACCCCGGACCAAGTGG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ID NO:26)。
根据本发明的实施例，所述腺病毒是通过如下方式获得的：所述的腺病毒载体去除了与腺病毒复制包装相关的E1基因和部分E3基因，E1A基因通过逐级Golden Gate的方法构建到基因线路中，最终通过Gateway或Gibson的方式将基因线路插入到腺病毒载体中。上述获得腺病毒的方式实现了复杂、大片段溶瘤腺病毒载体的快速改造。具体构建方法可参考201780002478.X。
根据本发明的实施例，所述腺病毒载体为去除E1基因与部分E3基因的的B、C亚型腺病毒。
根据本发明的实施例，所述腺病毒载体为去除E1基因与部分E3基因的5、11、12、34或35型腺病毒。
根据本发明的实施例，SEQ ID NO:1～26任一所示的核苷酸序列在所述5型腺病毒载体的插入位点为E1基因区域、E3基因区域或E4基因区域。例如，去除E1基因与部分E3基因5型腺病毒载体的图谱可参见图13，其序列如SEQ ID NO:27所示，其插入位点可以选择在该序列的第458个碱基后第459个碱基前。
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GCATGGGCGGCGATATAAAATGCAAGGTGCTGCTCAAAAAATCAGGCAAAGCCTCGCGCAAAAAAGAAAGCACATCGTAGTCATGCTCATGCAGATAAAGGCAGGTAAGCTCCGGAACCACCACAGAAAAAGACACCATTTTTCTCTCAAACATGTCTGCGGGTTTCTGCATAAACACAAAATAAAATAACAAAAAAACATTTAAACATTAGAAGCCTGTCTTACAACAGGAAAAACAACCCTTATAAGCATAAGACGGACTACGGCCATGCCGGCGTGACCGTAAAAAAACTGGTCACCGTGATTAAAAAGCACCACCGACAGCTCCTCGGTCATGTCCGGAGTCATAATGTAAGACTCGGTAAACACATCAGGTTGATTCACATCGGTCAGTGCTAAAAAGCGACCGAAATAGCCCGGGGGAATACATACCCGCAGGCGTAGAGACAACATTACAGCCCCCATAGGAGGTATAACAAAATTAATAGGAGAGAAAAACACATAAACACCTGAAAAACCCTCCTGCCTAGGCAAAATAGCACCCTCCCGCTCCAGAACAACATACAGCGCTTCCACAGCGGCAGCCATAACAGTCAGCCTTACCAGTAAAAAAGAAAACCTATTAAAAAAACACCACTCGACACGGCACCAGCTCAATCAGTCACAGTGTAAAAAAGGGCCAAGTGCAGAGCGAGTATATATAGGACTAAAAAATGACGTAACGGTTAAAGTCCACAAAAAACACCCAGAAAACCGCACGCGAACCTACGCCCAGAAACGAAAGCCAAAAAACCCACAACTTCCTCAAATCGTCACTTCCGTTTTCCCACGTTACGTCACTTCCCATTTTAAGAAAACTACAATTCCCAACACATACAAGTTACTCCGCCCTAAAACCTACGTCACCCGCCCCGTTCCCACGCCCCGCGCCACGTCACAAACTCCACCCCCTCATTATCATATTGGCTTCAATCCAAAATAAGGTATATTATTGATGATG(SEQ ID NO:27)。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种重组病毒。根据本发明的实施例，所述重组病毒包括：第一核酸分子，所述第一核酸分子含有肿瘤细胞特异性启动子；第二核酸分子，所述第二核酸分子与所述第一核酸分子可操作地连接，所述第二核酸分子编码转录激活因子，所述转录激活因子为Gal4VP16；第三核酸分子，所述第三核酸分子含有所述转录激活因子的第一识别序列；第四核酸分子，所述第四核酸分子与所述第三核酸分子可操作地连接，所述第四核酸分子含有第一启动子和第一调控元件，所述第一启动子为miniCMV，所述第一调控元件包括多个重复的tetO序列，所述多个重复的tetO序列的至少之一设置在所述第一启动子的下游；第五核酸分子，所述第五核酸分子与第四核酸分子可操作地连接，所述第五核酸分子编码第一调控蛋白，所述第一调控蛋白为LacI；所述第五核酸分子进一步包括编码所述目的蛋白的序列，并且所述目的蛋白包括病毒复制蛋白、免疫效应因子，所述免疫效应因子是以单独或融合蛋白的形式表达的，并且所述毒复制蛋白和所述效应因子之间通过可切割的连接肽连接的，所述目的蛋白与所述第一调控蛋白是以融合蛋白的形式表达的，并且所述目的蛋白与所述第一调控蛋白之间通过可切割的连接肽连接的；第六核酸分子，所述第六核酸分子含有所述转录激活因子的第二识别序列；第七核酸分子，所述第七核酸分子与所述第六核酸分子可操作地连接，所述第七核酸分子含有第二启动子和第二调控元件，所述第二启动子为miniCMV，所述第二调控元件包括多个重复的LacO序列，所述多个重复的LacO序列的至少之一设置在所述第二启动子的下游；第八核酸分子，所述第八核酸分子与第七核酸分子可操作地连接，并且所述第八核酸分子编码第二调控蛋白,所述第二调控蛋白为tetR-KRAB；第九核酸分子，所述第九核酸分子与所述第五核酸分子可操作地连接，所述第九核酸分子被配置为条件性抑制所述第一调控蛋白的表达，所述第九核酸分子含有被第一microRNA特异性识别的核酸序列，所述第一microRNA为正常细胞特异性microRNA；以及第十核酸分子，所述第十核酸分子与所述第八核酸分子可操作地连接，所述第十核酸分子被配置为条件性抑制所述第二调控蛋白的表达，所述第十核酸分子含有被第二microRNA特异性识别的核酸序列，所述第二microRNA为肿瘤细胞特异性microRNA，其中，所述第一调控元件适于通过结合所述第二调控蛋白抑制所述第一启动子的功能，所述第二调控元件适于通过结合所述第一调控蛋白抑制所述第二启动子的功能；所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或所述肿瘤细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS。利用根据本申请实施例的重组病毒，在肿瘤细胞特异性启动子和第九核酸分子、第十核酸分子的共同调控下，第一调控蛋白LacI、目的蛋白在胃癌、胰腺癌细胞中特异性表达，第二调控蛋白tetR-KRAB在胃癌、胰腺癌细胞中特异性不表达或低表达，进而tetR-KRAB介导的第一启动子miniCMV的抑制机制解除，第一调控蛋白LacI、目的蛋白在第一启动子miniCMV的启动调控下有效表达，LacI介导的抑制机制有效抑制了第二启动子miniCMV的功能，tetR-KRAB的表达进一步受到抑制。进而，利用根据本发明实施例的重组病毒，可实现蛋白在胃癌、胰腺癌细胞中更加特异性的表达(如目的蛋白或LacI)或不表达(如tetR-KRAB)，在胃癌、胰腺癌细胞中的目的蛋白表达表达效率和特异性高。根据本发明实施例的重组病毒可实现对胃癌、胰腺癌细胞的特异、高效、安全的杀伤。
根据本发明的实施例，上述重组病毒还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述重组病毒为选自逆转录病毒、腺病毒、疱疹病毒、牛痘病毒的至少之一。
根据本发明的实施例，所述重组病毒为腺病毒。如前所述，腺病毒作为基因治疗载体具有宿主范围广，对人致病性低、在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因、滴度高、与人类基因同源、无插入致突变性、能在悬浮培养液中扩增、能同时表达多个基因的优点。
根据本发明的实施例，所述免疫效应因子包括选自拮抗PD-1基因的抑制序列、拮抗PD-L1基因的抑制序列、拮抗CTLA4基因的抑制序列、拮抗Tim-3基因的抑制序列、IL-2、IL-15、IL-12、GM-CSF至少之一。任选地，所述免疫效应因子可以以融合蛋白的形式存在。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，所述重组细胞含有前面所述的表达系统。根据本发明实施例的重组细胞可有效激活人体的系统性的免疫反应，特异性攻击胃癌、胰腺癌细胞，安全性高，特异性强。
根据本发明的实施例，上述重组细胞还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述表达系统的至少一部分整合于所述重组细胞的基因组中。表达系统随着重组细胞基因组的复制而复制，表达系统对目的蛋白的表达调控持续而有效。
在本发明的第四方面，本发明提出了前面所述的表达系统、前面所述的重组病毒、前面所述的重组细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗胃癌或胰腺癌。
在本发明的第五方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物包含前面所述的重组病毒或前面所述的重组细胞。根据本发明实施例的药物组合物对胃癌或胰腺癌的治疗效果显著。
根据本发明的实施例，上述药物组合物还可以进一步包括药学上可接受的辅料。
根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括其他治疗胃癌的药物。
根据本发明的实施例，所述其他治疗胃癌的药物包括选自Pembrolizumab、Ogivri、Everolimus、Lanreotide、Ramucirumab、Apatinib、Trastuzumab的至少之一。
根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括其他治疗胰腺癌的药物。
根据本发明的实施例，所述其他治疗胰腺癌的药物包括选自Lanreotide、Abraxane、Olaparib、Afinitor、Erlotinib、Everolimus、5-FU、Gemzar、Sunitinib、Onivyde、Gemzar的至少之一。
本发明的药物组合物可以在治疗或预防胃癌、胰腺癌时被给药。
在本文中所使用的术语“给药”指将预定量的物质通过某种适合的方式引入病人。本发明的药物组合物可以通过任何常见的途径被给药，只要它可以到达预期的组织。给药的各种方式是可以预期的，包括腹膜，静脉，肌肉，皮下，皮层，口服，局部，鼻腔，肺部和直肠，但是本发明不限于这些已举例的给药方式。然而，由于口服给药时，口服给药的组合物的活性成分应该被包被或被配制以防止其在胃部被降解。优选地，本发明的组合物可以注射制剂被给药。此外，本发明的药物组合物可以使用将活性成分传送到靶细胞的特定器械来给药。
本发明的药物组合物的给药频率和剂量可以通过多个相关因素被确定，该因素包括要被治疗的疾病类型，给药途径，病人年龄，性别，体重和疾病的严重程度以及作为活性成分的药物类型。根据本发明的一些实施例，日剂量可分为适宜形式的1剂、2剂或多剂，以在整个时间段内以1次、2次或多次给药，只要达到治疗有效量即可。
术语“治疗有效量”是指化合物足以显著改善某些与疾病或病症相关的症状的量，也即为给定病症和给药方案提供治疗效果的量。例如，在胃癌或胰腺癌的治疗中，减少、预防、延缓、抑制或阻滞疾病或病症的任何症状的药物或化合物应当是治疗有效的。治疗有效量的药物或化合物不需要治愈疾病或病症，但将为疾病或病症提供治疗，使得个体的疾病或病症的发作被延缓、阻止或预防，或者疾病或病症的症状得以缓解，或者疾病或病症的期限被改变，或者例如疾病或病症变得不严重，或者加速康复。
术语“治疗”用于指获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖哺乳动物、特别是人的疾病(主要指胃癌或胰腺癌)的治疗，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病(例如预防胃癌或胰腺癌)或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本文使用的“治疗”涵盖将药物或化合物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本文所述的药物给予有需要的个体。
根据本发明的实施例，本发明的药物组合物可与常规治疗方法和/或疗法相结合使用，或者可与常规治疗方法和/或疗法分开使用。当本发明的药物在采用与其它药物的联合疗法中给药时，它们可序贯地或同时地给予个体。或者，本发明的药物组合物可包含本发明的重组病毒或药学上可接受的赋形剂以及本领域已知的其它治疗药或预防药的组合。
需要说明的是，如无特别说明，本申请所述的融合蛋白是指在同一启动子调控下共转录的蛋白，包括蛋白间无连接的融合蛋白，或以其他连接肽(如GGGS或2A序列)连接的融合蛋白。
如无特别说明，本申请所述的闭合回路或表达系统的“翻转能力”是指受第一microRNA和第二microRNA输入信号分别控制时输出水平的差异，具体体现在目的蛋白(包括选自病毒复制包装蛋白、免疫效应因子的至少之一)表达水平的差异。
本申请所述的“几×序列”是指几段重复的序列顺序连接，重复序列之间没有间隔碱基，例如，“5×UAS”是指5段重复的UAS顺利连接所组成的序列，“6×tetO”是指6段重复的tetO顺序连接所组成的序列。
附图说明
图1为根据本发明实施例的靶向特定肿瘤的溶瘤腺病毒构建与测试流程示意图；
图2为根据本发明实施例的不同癌特异启动子在胃癌与胃正常细胞系中的表达测试；
图3为根据本发明实施例的不同癌特异启动子在胃癌与胃正常细胞系中翻转开关线路的测试；
图4为根据本发明实施例的不同microRNA靶位点在胃癌与胃正常细胞系中的抑制效率测试；
图5(包括图5A～5J)为根据本发明实施例的不同腺病毒在胃癌与正常细胞系中的杀伤能力测试；
图6为根据本发明实施例的不同癌特异启动子在乳腺癌与乳腺正常细胞系中的表达测试；
图7为根据本发明实施例的不同癌特异启动子在乳腺癌与乳腺正常细胞系中翻转开关线路的测试；
图8为根据本发明实施例的不同microRNA靶位点在乳腺癌与乳腺正常细胞系中的抑制效率测试。
图9(包括图9A～9D)为根据本发明实施例的不同腺病毒在乳腺癌与正常细胞系中的杀伤能力测试；
图10为不同癌特异启动子在胰腺癌与胰腺正常细胞系中的表达测试；
图11为根据本发明实施例的不同癌特异启动子在胰腺癌与胰腺正常细胞系中翻转开关线路的测试；
图12为根据本发明实施例的不同腺病毒在胰腺癌与正常细胞系中的杀伤能力测试；以及
图13为根据本发明实施例的5型腺病毒载体的图谱。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在以下实施例中，涉及的构建靶向特定肿瘤的溶瘤腺病毒的方法以及测试流程可参照示意图，图1；所涉及的病毒代号如表1所示。
表1：
实施例1靶向胃癌的溶瘤腺病毒的构建与功能验证
实验一
测定癌特异性启动子CEA205、CEA368、cerbB2、COX2、CXCR4、hMUC1、Survivin1与Survivin3在胃癌细胞系AGS与胃正常细胞系GES1中的表达强度与特异性。
将CEA205-Gal4VP16的质粒、UAS-EYFP质粒、hEF1a-EBFP2质粒共转染胃癌细胞系AGS与胃正常细胞系GES1(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度。归一化报告基因表达水平＝(实验组EYFP荧光强度/实验组EBFP2荧光强度)/(对照组EYFP荧光强度/对照组EBFP2荧光强度)。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用cerbB2-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用COX2-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用hMUC1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用Survivin3-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。
归一化报告基因表达水平见图2。各癌特异启动子在胃正常细胞系GES1中表达量均很低，而在胃癌细胞系AGS中，CEA205、CEA368、CXCR4与Survivin1表达量较高。结果表明：癌特异启动子可以特异性地在胃癌细胞系中启动Gal4VP16的表达并激活UAS下游的报告基因。CEA205、CEA368、CXCR4与Survivin1有较好的表达强度与特异性。
实验二
在实验一的基础上，测定具有较好表达强度与特异性的CEA205、CEA368、CXCR4与Survivin1启动5×UAS或4×UAS开关线路的翻转能力。
将CEA205-Gal4VP16质粒、5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒、5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒、CAG-EYFP质粒、pDT7004质粒共转染胃癌细胞系AGS与胃正常细胞系GES1(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度，表示无输入信号时开关线路的表达水平。报告基因表达水平＝EBFP2荧光强度/EYFP荧光强度。
用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示一侧输入信号时开关线路的表达水平；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示另一侧输入信号时开关线路的表达水平。
用4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
报告基因表达水平见图3。与实验一结果一致，被测试的所有启动子在胃正常细胞系GES1中表达量均很低，而在胃癌细胞系AGS中均可以启动开关线路翻转。在胃癌细胞系AGS中CEA368与Survivin1表达量略高于CEA205与CXCR4，而5×UAS开关线路表达强度略高于4×UAS开关线路。结果表明：被测试的所有启动子均可以特异性地在胃癌细胞系AGS中启动4×UAS或5×UAS开关线路翻转。
实验三
测定癌特异性microRNA mir-143-3p、mir-145-5p、mir-551b-3p、mir-1-3p、mir-133a-3p、mir-133b-3p、mir-139-3p、mir-139-5p、mir-145-3p、mir-204-5p、mir-195-3p、mir-935、mir-135a-5p、mir-135b-5p、mir-135b-3p、mir-196a-3p与mir-21在胃癌细胞系AGS与胃正常细胞系GES1中对各靶位点的抑制强度。
将CMV-EYFP-T143 3p x4质粒、CMV-EBFP2质粒、pDT7004质粒共转染胃癌细胞系AGS与胃正常细胞系GES1(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度。设置用CMV-EYFP质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒的对照处理。归一化报告基因表达水平＝(实验组EBFP2荧光强度/实验组EYFP荧光强度)/(对照组EBFP2荧光强度/对照组EYFP荧光强度)。
用CMV-EYFP-T145 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T551 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T1 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T133a3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T133b 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T139 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T139 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T145 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3px4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T204 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T195 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T935 x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T135a 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T135b 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T135b 3px4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T196a 5p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T196a 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T21x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3px4质粒后，进行上述步骤。
归一化报告基因表达水平见图4。mir-21可以通过靶位点特异性地在胃癌细胞系AGS中抑制报告基因表达，并有很高的抑制强度。mir-143-3p与mir-135a-5p可以通过靶位点特异性地在胃正常细胞系GES1中抑制报告基因表达，并有一定地抑制强度。结果表明：癌特异高表达或低表达的microRNA可以通过靶位点特异性地在胃癌细胞系AGS或胃正常细胞系GES1中抑制报告基因表达。癌特异高表达microRNA mir-21、癌特异低表达microRNAmir-143-3p与mir-135a-5p有较好的抑制强度。
实验四
实验一、二、三的基础上，构建使用CEA205/CEA368/CXCR4/Survivin1启动子、mir-21与mir-135a-5p/mir-143-3p调控的4×UAS或5×UAS开关线路控制的溶瘤腺病毒，测试对胃癌细胞系AGS、胃正常细胞系GES1、肝正常细胞系Chang与L02的杀伤能力。
在96孔板中每孔接种数量为1e4的细胞。接种24小时后分别加入感染复数为1、10、20、50、100、200、500的A1病毒，设置不加入病毒的空白对照。病毒侵染6天后使用MTS法检测细胞存活率。细胞存活率＝实验组MTS检测值/对照组MTS检测值。
使用A2病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A3病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A4病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A5病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A6病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A7病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A8病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A9病毒代替A1病毒，进行上述步骤。使用A10病毒代替A1病毒，进行上述步骤。
细胞存活率见图5。与实验一、二、三结果一致，使用癌特异启动子CEA205/CEA368/CXCR4/Survivin1与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p/mir-143-3p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胃癌细胞系AGS，而对胃正常细胞系GES1及肝正常细胞系Chang、L02杀伤作用不明显。5×UAS开关线路控制的溶瘤腺病毒A1在感染复数约10～20间时就表现出明显的杀伤特异性，而A2、A4、A5与A1杀伤效果相近。4×UAS开关线路控制的溶瘤腺病毒A10与A1杀伤效果相近。结果表明：使用癌特异启动子CEA205/CEA368/Survivin1与癌特异microRNA mir-21及mir-135a-5p/mir-143-3p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胃癌细胞系AGS，5×UAS开关线路相较于4×UAS开关线路效果更好。
实施例2靶向乳腺癌的溶瘤腺病毒的构建与功能验证
实验一
结合实施例1实验结果，测定癌特异性启动子CEA205、CEA368、CXCR4、hMUC1与Survivin1在乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231与乳腺正常细胞系MCF10A中的表达强度与特异性。
将CEA205-Gal4VP16的质粒、UAS-EYFP质粒、CMV-EBFP2质粒共转染乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231与乳腺正常细胞系MCF10A(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度。归一化报告基因表达水平＝(实验组EYFP荧光强度/实验组EBFP2荧光强度)/(对照组EYFP荧光强度/对照组EBFP2荧光强度)。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用hMUC1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。
归一化报告基因表达水平见图6。所测试癌特异启动子中，CEA205与CXCR4在乳腺癌细胞系MCF7与MDA-MB-231中表达较高而在乳腺正常细胞系MCF10A中表达较低。结果表明：癌特异启动子可以特异性地在乳腺癌细胞系中启动Gal4VP16的表达并激活UAS下游的报告基因。CEA205与CXCR4有较好的表达强度与特异性。
实验二
测定CEA205、CEA368、CXCR4、hMUC1与Survivin1启动5×UAS或4×UAS开关线路的翻转能力。
将CEA205-Gal4VP16质粒、5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒、5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒、CAG-EYFP质粒、pDT7004质粒共转染乳腺癌细胞系MCF7与乳腺正常细胞系MCF10A(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度，表示无输入信号时开关线路的表达水平。报告基因表达水平＝EBFP2荧光强度/EYFP荧光强度。
用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示一侧输入信号时开关线路的表达水平；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示另一侧输入信号时开关线路的表达水平。
用4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CEA368-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CXCR4-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用hMUC1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用hMUC1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用Survivin1-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
报告基因表达水平见图7。在乳腺正常细胞系MCF10A中所测试的启动子翻转5×UAS开关线路表达量较低，而翻转4×UAS开关线路有一定表达。在乳腺癌细胞系MCF7中所测试的启动未能表现中对5×UAS与4×UAS开关线路较好的翻转能力。结果表明：所测试的启动子在乳腺癌细胞系MCF7中对开关线路的翻转能力不强。
实验三
测定癌特异性microRNA mir-205-5p、mir-141-3p与mir-21在乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231与乳腺正常细胞系MCF10A中对各靶位点的抑制强度。
将CMV-EYFP-T205 5p x4质粒、CMV-EBFP2质粒、pDT7004质粒共转染乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231与乳腺正常细胞系MCF10A(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度。设置用CMV-EYFP质粒代替CMV-EYFP-T205 5px4质粒的对照处理。归一化报告基因表达水平＝(实验组EBFP2荧光强度/实验组EYFP荧光强度)/(对照组EBFP2荧光强度/对照组EYFP荧光强度)。
用CMV-EYFP-T141 3p x4质粒代替CMV-EYFP-T205 5p x4质粒后，进行上述步骤。用CMV-EYFP-T21x4质粒代替CMV-EYFP-T143 3p x4质粒后，进行上述步骤。
归一化报告基因表达水平见图8。mir-205-5p可以通过靶位点特异性地在乳腺正常细胞系MCF10A中抑制报告基因表达，并有很高的抑制强度，与调研结果一致。mir-141-3p虽然在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中抑制强度较低，但在MCF7中有一定的抑制强度。mir-21虽然在乳腺癌细胞系MCF7与MDA-MB-231中抑制强度很高，但在乳腺正常细胞系MCF10A中抑制强度也很高。结果表明：癌特异高表达或低表达的microRNA可以通过靶位点在乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231与乳腺正常细胞系MCF10A中抑制报告基因表达，但特异性不够好。
实验四
实验一、二、三的基础上，构建使用CEA205/Survivin1启动子、mir-21与mir-141-3p调控的5×UAS开关线路控制的溶瘤腺病毒，测试对乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB-231、乳腺正常细胞系MCF10A、肝正常细胞系Chang与L02的杀伤能力。
在96孔板中每孔接种数量为1e4的细胞。接种24小时后分别加入感染复数为1、10、20、50、100、200、500的B1病毒，设置不加入病毒的空白对照。病毒侵染6天后使用MTS法检测细胞存活率。细胞存活率＝实验组MTS检测值/对照组MTS检测值。
使用B2病毒代替B1病毒，进行上述步骤。使用B3病毒代替B1病毒，进行上述步骤。
使用B4病毒代替B1病毒，进行上述步骤。
细胞存活率见图9。四种腺病毒均未能有效杀伤乳腺癌细胞系MCF7与MDA-MB-231而对乳腺正常细胞系MCF10A有一定杀伤作用。结果表明：使用癌特异启动子CEA205/Survivin1与癌特异microRNA mir-21及mir-141-3p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒未能特异性地杀伤乳腺癌细胞系MCF7与MDA-MB-231。
实施例3靶向胰腺癌的溶瘤腺病毒的构建与功能验证
实验一
结合实施例1实验结果，测定癌特异性启动子hMUC1在胰腺癌细胞系PANC1与胰腺正常细胞系HTERT-HPNE中的表达强度与特异性。
将hMUC1-Gal4VP16的质粒、UAS-EYFP质粒、CMV-EBFP2质粒共转染胰腺癌细胞系PANC1与胰腺正常细胞系HTERT-HPNE(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度。归一化报告基因表达水平＝(实验组EYFP荧光强度/实验组EBFP2荧光强度)/(对照组EYFP荧光强度/对照组EBFP2荧光强度)。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，进行上述步骤。
归一化报告基因表达水平见图10。hMUC1在胰腺癌细胞系PANC1中表达较高而在胰腺正常细胞系HTERT-HPNE中表达较低。结果表明：癌特异启动子hMUC1可以特异性地在乳腺癌细胞系中启动Gal4VP16的表达并激活UAS下游的报告基因。
实验二
测定hMUC1启动5×UAS或4×UAS开关线路的翻转能力。
将hMUC1-Gal4VP16质粒、5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒、5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒、CAG-EYFP质粒、pDT7004质粒共转染胰腺癌细胞系PANC1与胰腺正常细胞系HTERT-HPNE(每孔转染各质粒各100ng)，转染48小时后进行流式细胞术分析，检测EYFP与EBFP2荧光强度，表示无输入信号时开关线路的表达水平。报告基因表达水平＝EBFP2荧光强度/EYFP荧光强度。
用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示一侧输入信号时开关线路的表达水平；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤，表示另一侧输入信号时开关线路的表达水平。
用4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
用CAG-Gal4VP16质粒代替CEA205-Gal4VP16质粒，4×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒代替5×UAS-TetO-E1A-P2A-EBFP2-2A-LacI-FF4质粒，4×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒代替5×UAS-LacO-TetRKrab-FF5质粒后，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF4-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤；用U6-shRNA-FF5-CMV-iRFP质粒代替pDT7004质粒，进行上述步骤。
报告基因表达水平见图11。在胰腺癌细胞系PANC1中hMUC1可以翻转5×UAS与4×UAS开关线路，但在胰腺正常细胞系HTERT-HPNE中也有一定表达。结果表明：hMUC1在胰腺癌细胞系PANC1中对开关线路有一定翻转能力，但在胰腺正常细胞系HTERT-HPNE中有一定泄漏。
实验三
实验一、二基础上，构建用hMUC1启动子、mir-21与mir-199a-3p调控的5×UAS与4×UAS开关线路控制的溶瘤腺病毒，测试对胰腺癌细胞系PANC1、肝正常细胞系Chang与L02的杀伤能力。
在96孔板中每孔接种数量为1e4的细胞。接种24小时后分别加入感染复数为0.1、1、5、10、20、50、100的C1病毒，设置不加入病毒的空白对照。病毒侵染6天后使用MTS法检测细胞存活率。细胞存活率＝实验组MTS检测值/对照组MTS检测值。
使用C2病毒代替C1病毒，进行上述步骤。
细胞存活率见图12。两种腺病毒均能有效地特异性地杀伤胰腺癌细胞系PANC1。C1在感染复数约20～50间时就表现出明显的杀伤特异性，而C2杀伤效果略弱于pAD043。结果表明：使用癌特异启动子hMUC1与癌特异microRNA mir-21、mir-199a-3p调控的开关线路控制的溶瘤腺病毒可以特异性地杀伤胰腺癌细胞系PANC1
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (11)
1.一种表达系统，其特征在于，包括:
第一核酸分子，所述第一核酸分子含有细胞特异性启动子；
第二核酸分子，所述第二核酸分子与所述第一核酸分子可操作地连接，所述第二核酸分子编码转录激活因子；
第三核酸分子，所述第三核酸分子含有所述转录激活因子的第一识别序列；
第四核酸分子，所述第四核酸分子与所述第三核酸分子可操作地连接，所述第四核酸分子含有第一启动子和第一调控元件；
第五核酸分子，所述第五核酸分子与第四核酸分子可操作地连接，所述第五核酸分子编码第一调控蛋白和目的蛋白，并且所述目的蛋白包括选自病毒复制包装蛋白、免疫效应因子的至少之一；
第六核酸分子，所述第六核酸分子含有所述转录激活因子的第二识别序列；
第七核酸分子，所述第七核酸分子与所述第六核酸分子可操作地连接，所述第七核酸分子含有第二启动子和第二调控元件；
第八核酸分子，所述第八核酸分子与第七核酸分子可操作地连接，并且所述第八核酸分子编码第二调控蛋白；
第九核酸分子，所述第九核酸分子与所述第五核酸分子可操作地连接，所述第九核酸分子被配置为条件性抑制所述第一调控蛋白的表达；以及
第十核酸分子，所述第十核酸分子与所述第八核酸分子可操作地连接，所述第十核酸分子被配置为条件性抑制所述第二调控蛋白的表达，
其中，
所述第一调控元件适于通过结合所述第二调控蛋白抑制所述第一启动子的功能，所述第二调控元件适于通过结合所述第一调控蛋白抑制所述第二启动子的功能；
所述第九核酸分子与所述第十核酸分子分别独立地借助RNA干扰抑制所述第一调控蛋白或所述第二调控蛋白的表达；
所述第九核酸分子含有被第一microRNA特异性识别的核酸序列，所述第十核酸分子含有被第二microRNA特异性识别的核酸序列，所述第一microRNA为正常细胞特异性microRNA，所述第二microRNA为异常细胞特异性microRNA；
所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或
所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或
所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21；或
所述细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p所述第二microRNA为mir-21。
2.根据权利要求1所述的表达系统，其特征在于，所述第一识别序列与所述第二识别序列分别独立地选自UAS，tetO以及dCas9的靶标序列至少之一；
优选地，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；
任选地，所述转录激活因子为选自Gal4VP16、Gal4vp64、dCas9-VPR、dCas9-VP64、dCas9-VP16、dCas9-VTR以及rtTA至少之一；
任选地，所述第一启动子与所述第二启动子分别独立地选自miniCMV、TATA box；
任选地，所述第一调控蛋白和第二调控蛋白分别独立地选自Lacl、tetR、zinc finger、TALE、KRAB、tetR-KRAB、TALE-KRAB、dCas9-KRAB、miniCas9-KRAB、分割dCas9-KRAB至少之一；
任选地，所述第一调控元件和所述第二调控元件分别独立地选自tetO、LacO、锌指蛋白靶标序列、TALE蛋白靶标序列、dCas9的靶标序列、miniCas9的靶标序列至少之一；
任选地，所述第一调控蛋白是LacI，所述第二调控元件包括多个重复的LacO序列，所述多个重复的LacO序列的至少之一设置在所述第二启动子的下游；
任选地，所述第二调控蛋白是tetR-KRAB所述第一调控元件包括多个重复的tetO序列，所述多个重复的tetO序列的至少之一设置在所述第一启动子的下游；
任选地，所述病毒复制包装相关蛋白包括选自腺病毒E1基因、E1A基因、E1B基因、E2基因和E4基因至少之一；
任选地，所述免疫效应因子包括选自拮抗PD-1基因的抑制序列、拮抗PD-L1基因的抑制序列、拮抗CTLA4基因的抑制序列、拮抗Tim-3基因的抑制序列、GM-CSF、IL-2、IL-12、IL-15至少之一；
任选地，所述目的蛋白与所述第一调控蛋白是以融合蛋白的形式表达的，并且所述目的蛋白与所述第一调控蛋白之间通过可切割的连接肽连接的；
任选地，所述第一核酸分子与所述第二核酸分子负载在第一表达载体上，所述第三核酸分子、所述第四核酸分子、所述第五核酸分子以及所述第九核酸分子负载在第二表达载体上，所述第六核酸分子、所述第七核酸分子、所述第八核酸分子以及所述第十核酸分子负载在第三表达载体上；
任选地，所述第一表达载体、第二表达载体和第三表达载体分别独立地选自下列的至少之一：
质粒、病毒、纳米材料、脂质体、分子耦联载体、裸露DNA、染色体载体、多聚物；
任选地，所述病毒包括选自腺病毒、牛痘病毒、疱疹病毒、逆转录病毒的至少之一；
任选地，所述第一表达载体、第二表达载体和第三表达载体负载在同一个载体上；
任选地，所述同一个载体为腺病毒载体。
3.根据权利要求1所述的表达系统，其特征在于，所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS。
4.根据权利要求3所述的表达系统，其特征在于，所述腺病毒载体携带具有SEQ ID NO：1～26任一所示核苷酸序列的核酸；
任选地，所述腺病毒是通过如下方式获得的：
所述的腺病毒载体去除了与腺病毒复制包装相关的E1基因和部分E3基因，E1A基因通过逐级Golden Gate的方法构建到基因线路中，最终通过Gateway或Gibson的方式将基因线路插入到腺病毒载体中；
任选地，所述腺病毒载体为去除E1基因与部分E3基因的B、C亚型腺病毒；
任选地，所述腺病毒载体为去除E1基因与部分E3基因的5、11、12、34或35型腺病毒；
任选地，SEQ ID NO:1～26任一所示的核苷酸序列在所述5型腺病毒载体的插入位点为E1基因区域、E3基因区域或E4基因区域。
5.一种重组病毒，其特征在于，包括：
第一核酸分子，所述第一核酸分子含有肿瘤细胞特异性启动子；
第二核酸分子，所述第二核酸分子与所述第一核酸分子可操作地连接，所述第二核酸分子编码转录激活因子，所述转录激活因子为Gal4VP16；
第三核酸分子，所述第三核酸分子含有所述转录激活因子的第一识别序列；
第四核酸分子，所述第四核酸分子与所述第三核酸分子可操作地连接，所述第四核酸分子含有第一启动子和第一调控元件，所述第一启动子为miniCMV，所述第一调控元件包括多个重复的tetO序列，所述多个重复的tetO序列的至少之一设置在所述第一启动子的下游；
第五核酸分子，所述第五核酸分子与第四核酸分子可操作地连接，所述第五核酸分子编码第一调控蛋白，所述第一调控蛋白为LacI；
所述第五核酸分子进一步包括编码目的蛋白的序列，并且所述目的蛋白包括病毒复制蛋白、免疫效应因子，所述免疫效应因子是以单独或融合蛋白的形式表达的，并且所述毒复制蛋白和所述效应因子之间通过可切割的连接肽连接的，
所述目的蛋白与所述第一调控蛋白是以融合蛋白的形式表达的，并且所述目的蛋白与所述第一调控蛋白之间通过可切割的连接肽连接的；
第六核酸分子，所述第六核酸分子含有所述转录激活因子的第二识别序列；
第七核酸分子，所述第七核酸分子与所述第六核酸分子可操作地连接，所述第七核酸分子含有第二启动子和第二调控元件，所述第二启动子为miniCMV，所述第二调控元件包括多个重复的LacO序列，所述多个重复的LacO序列的至少之一设置在所述第二启动子的下游；
第八核酸分子，所述第八核酸分子与第七核酸分子可操作地连接，并且所述第八核酸分子编码第二调控蛋白，所述第二调控蛋白为tetR-KRAB；
第九核酸分子，所述第九核酸分子与所述第五核酸分子可操作地连接，所述第九核酸分子被配置为条件性抑制所述第一调控蛋白的表达，所述第九核酸分子含有被第一microRNA特异性识别的核酸序列，所述第一microRNA为正常细胞特异性microRNA；以及
第十核酸分子，所述第十核酸分子与所述第八核酸分子可操作地连接，所述第十核酸分子被配置为条件性抑制所述第二调控蛋白的表达，所述第十核酸分子含有被第二microRNA特异性识别的核酸序列，所述第二microRNA为肿瘤细胞特异性microRNA，
其中，
所述第一调控元件适于通过结合所述第二调控蛋白抑制所述第一启动子的功能，所述第二调控元件适于通过结合所述第一调控蛋白抑制所述第二启动子的功能；
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为5×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA205，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CXCR4，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为Survivin1，所述第一microRNA为mir-135a-5p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为CEA368，所述第一microRNA为mir-143-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS；或
所述肿瘤细胞特异性启动子为hMuc1，所述第一microRNA为mir-199a-3p，所述第二microRNA为mir-21，所述第一识别序列与所述第二识别序列为4×UAS。
6.根据权利要求5所述的重组病毒，其特征在于，所述重组病毒为选自腺病毒、牛痘病毒、逆转录病毒、疱疹病毒的至少之一；
优选地，所述重组病毒为腺病毒；
任选地，所述免疫效应因子包括选自拮抗PD-1基因的抑制序列、拮抗PD-L1基因的抑制序列、拮抗CTLA4基因的抑制序列、拮抗Tim-3基因的抑制序列、IL-2、IL-12、IL-15、GM-CSF至少之一。
7.一种重组细胞，其特征在于，含有权利要求1～4任一项所述的表达系统。
8.根据权利要求7所述的重组细胞，其特征在于，所述表达系统的至少一部分整合于所述重组细胞的基因组中。
9.权利要求1～4任一项所述的表达系统、权利要求5～6任一项所述的重组病毒、权利要求7～8任一项所述的重组细胞在制备药物中的用途，所述药物用于治疗胃癌；
任选地，所述药物用于治疗胰腺癌。
10.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求5～6任一项所述的重组病毒或权利要求7～8任一项所述的重组细胞。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，进一步包括药学上可接受的辅料；
任选地，进一步包括其他治疗胃癌的药物；
任选地，所述其他治疗胃癌的药物包括选自Pembrolizumab、Ogivri、Everolimus、Lanreotide、Ramucirumab、Apatinib、Trastuzumab的至少之一；
任选地，进一步包括其他治疗胰腺癌的药物；
任选地，所述其他治疗胰腺癌的药物包括选自Lanreotide、Abraxane、Olaparib、Afinitor、Erlotinib、Everolimus、5-FU、Gemzar、Sunitinib、Onivyde、Gemzar的至少之一。
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