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CN111971303B - 抗cd27抗体及其用途 - Google Patents

抗cd27抗体及其用途 Download PDF

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CN111971303B
CN111971303B CN201880092226.5A CN201880092226A CN111971303B CN 111971303 B CN111971303 B CN 111971303B CN 201880092226 A CN201880092226 A CN 201880092226A CN 111971303 B CN111971303 B CN 111971303B
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Abstract

本申请提供了抗体、其抗原结合片段或其变体，其与CD27结合并显示出以下特性的至少一种：与CD27特异性结合，其中KD为10‑8M或更小；激活和/或增强CD27介导的NF‑κB活性；刺激CD4+和/或CD8+T细胞增殖；与在细胞表面上表达的人CD27结合；刺激CD4+和/或CD8+T细胞分泌IFN‑γ。本申请还提供了用于制备和使用所述抗体的方法。

Description

抗CD27抗体及其用途
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抗CD27抗体及其用途。
背景技术
CD27是TNF受体家族的一个成员，属于I型跨膜糖蛋白。CD27以一对二硫键连接的同二聚体的形式存在于细胞表面上(van Lier等人，1987)。与其它TNF受体家族成员不同，CD27在T细胞、NK细胞和一些记忆B细胞的表面组成型表达(van Lier等人，1987；Sugita等人，1992年；Xiao等，2004)。当T细胞被活化时，CD27的表达被上调，从而对朊病毒细胞的活化具有协同共刺激作用。
CD70作为CD27的配体，与CD27相互作用，并将细胞内TRAF蛋白募集到CD27的胞内结构域，从而激活下游信号，包括典型和非典型NF-κB信号传导途径和JNK信号传导途径的激活。其在CD8+T细胞的增殖、活化和细胞毒性中起重要作用(Carr等人，2006；Rowley和Al-Shamkhani，2004年；Taraban等人，2006年)。除了在正常细胞上表达外，CD27还在B细胞淋巴瘤和B细胞慢性淋巴细胞性白血病细胞中高度表达(EA等人，1995)。
先前的研究表明，CD27的激动性抗体可在许多小鼠肿瘤模型中增强T细胞的杀伤能力，并具有抗肿瘤活性(Li-zhen He等人，2013)。然而，仍然强烈需要具有更好的亲和力和/或活性的CD27抗体。
发明内容
本申请提供了抗体、其抗原结合片段或其变体，其能够结合CD27，并可表现出至少一种以下特性:1)对CD27具有高亲和力；2)与人CD27和猴CD27特异性结合；3)能够激活和/或增强CD27介导的NF-κB活性；4)能够刺激CD4+和/或CD8+T细胞增殖；5)能够刺激CD4+和/或CD8+T细胞分泌IFN-γ；6)具有相对高的稳定性；和7)在长期储存期间作为二聚体留在溶液中。另外，本申请还提供了制备和/或使用抗体、其抗原结合片段或其变体的一种方法。
一方面，本申请提供了抗体、其抗原结合片段或其变体。所述抗体、其抗原结合片段或其变体可与CD27结合并表现至少一种以下特性:1)与CD27特异性结合，并且基本上不与CD137、OX40或GITR结合；2)以10-8M或更小的KD与CD27结合；3)激活和/或增强CD27介导的NF-κB活性，如在荧光素酶报告测定所示的；4)刺激CD4+和/或CD8+T细胞增殖；5)与在细胞表面上表达的人CD27结合；6)与在细胞表面上表达的猴CD27结合；7)刺激CD4+和/或CD8+T细胞分泌IFN-γ；8)具有如通过DSC法测试的至少为60℃的Tm；9)在约30天的过程中，在45℃下，当以约10mg/ml的浓度溶解在pH约为7.4的PBS溶液中时，在SEC-HPLC分析中显示了小于约5％的二聚化的相对减少；和10)在约30天的过程中，在45℃下，当以约8-12mg/ml的浓度溶解在pH约为7.4的PBS溶液中时，显示了小于约20％的浓度变化。
在一些实施方案中，抗体选自:单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、完全人抗体和双特异性抗体。
在一些实施方案中，抗原结合片段选自:Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、F(ab)2片段、Fv片段和ScFv。
在一些实施方案中，变体选自:1)通过一个或多个氨基酸的添加、缺失或替换得到的不同于抗体或其抗原结合片段的多肽；和2)与抗体或其抗原结合片段具有至少80％的序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或其变体与参考抗体竞争与CD27的结合。所述参考抗体可包含：1)分别包含SEQ ID NO:8-10中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:5-7中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；2)分别包含SEQ ID NO:18-20中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:15-17中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；3)分别包含SEQ ID NO:28-30中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:25-27中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；4)分别包含SEQ ID NO:38-40中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:35-37中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；5)分别包含SEQ ID NO:48-50中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:45-47中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；6)分别包含SEQ ID NO:58-60中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:55-57中所示的氨基酸序列的重链CDR1-3；7)分别包含SEQ ID NO:68-70中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:65-67中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；8)分别包含SEQ ID NO:78-80中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:75-77中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；9)分别包含SEQ ID NO:88-90中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:85-87中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；10)包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区；11)包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区；12)包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区；13)包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的重链可变区；14)包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的重链可变区；15)包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ IDNO:51中所示的氨基酸序列的重链可变区；16)包含SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列的重链可变区；17)包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列的重链可变区；18)包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列的重链可变区；19)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列的重链可变区；20)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列的重链可变区；21)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的重链可变区；22)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQID NO:99中所示的氨基酸序列的重链可变区；23)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列的重链可变区；24)包含SEQ IDNO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列的重链可变区；25)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列的重链可变区；26)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列的重链可变区；27)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的重链可变区；28)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列的重链可变区；29)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链可变区；或30)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗体包含轻链或其片段。轻链或其片段可包含轻链CDR1，并且轻链CDR1包含选自SEQ ID NO:8、18、28、38、48、58、68、78和88的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链或其片段包含轻链CDR2，并且轻链CDR2包含选自SEQ ID NO:9、19、29、39、49、59、69、79和89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链或其片段包含轻链CDR3，并且轻链CDR3包含选自SEQID NO:10、20、30、40、50、60、70、80和90的氨基酸序列。
在一些实施方案中，轻链或其片段包含轻链可变区，并且轻链可变区包含选自SEQID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83和91的氨基酸序列。
在一些实施方案，轻链或其片段包含轻链恒定区，并且轻链恒定区包含人Igκ恒定区。
在一些实施方案中，轻链或其片段包含选自SEQ ID NO:117、119、121、123、125、127、129、131和133的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含重链或其片段。重链或其片段可以包含重链CDR1，并且重链CDR1包含选自SEQ ID NO:5、15、25、35、45、55、65、75和85的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链或其片段包含重链CDR2，并且重链CDR2包含选自SEQ ID NO:6、16、26、36、46、56、66、76和86的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链或其片段包含重链CDR3，并且重链CDR3包含选自SEQ ID NO:7、17、27、37、47、57、67、77和87的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重链或其片段包含重链可变区，并且重链可变区包含选自SEQID NO:1、11、21、31、41、51、61、71、81、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113和115的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重链或其片段包含重链恒定区，并且重链恒定区包含人IgG恒定区。在一些实施方案中，人IgG恒定区包括IgG1恒定区。
在一些实施方案中，重链或其片段包含选自SEQ ID NO:118、120、122、124、126、128、130、132和134的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CD27选自:人CD27、小鼠CD27和猴子CD27。
在一些实施方案中，抗体、其抗原结合片段或其变体包含:1)分别包含SEQ ID NO:8-10中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:5-7中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；2)分别包含SEQ ID NO:18-20中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:15-17中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；3)分别包含SEQ ID NO:28-30中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:25-27中所示的氨基酸序列的重链CDR1-3；4)分别包含SEQ ID NO:38-40中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:35-37中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；5)分别包含SEQ ID NO:48-50中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:45-47中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；6)分别包含SEQ ID NO:58-60中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:55-57中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；7)分别包含SEQ ID NO:68-70中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:65-67中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；8)分别包含SEQ ID NO:78-80中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:75-77中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；9)分别包含SEQ ID NO:88-90中所示的氨基酸序列的轻链CDR 1-3，和分别包含SEQ ID NO:85-87中所示的氨基酸序列的重链CDR 1-3；10)包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区；11)包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的重链可变区；12)包含SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的重链可变区；13)包含SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列的重链可变区；14)包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列的重链可变区；15)包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列的重链可变区；16)包含SEQID NO:63中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列的重链可变区；17)包含SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列的重链可变区；18)包含SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列的重链可变区；19)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列的重链可变区；20)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列的重链可变区；21)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的重链可变区；22)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列的重链可变区；23)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列的重链可变区；24)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列的重链可变区；25)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列的重链可变区；26)包含SEQID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列的重链可变区；27)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ IDNO:93中所示的氨基酸序列的重链可变区；28)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列的重链可变区；29)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链可变区；或30)包含SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和包含SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的重链可变区。
另一方面，本申请提供了一种包含根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体的融合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种或多种分离的核酸分子，其编码根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体，或根据本申请的融合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含根据本申请的一种或多种分离的核酸分子。
另一方面，本发明提供了一种细胞，其包含根据本申请的一种或多种分离的核酸分子或一种或多种载体。
另一方面，本申请提供了一种产生根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体或融合蛋白的方法，其包括在使得能够表达所述抗体、其抗原结合片段或其变体或所述融合蛋白的条件下培养根据本申请的细胞。
在一些实施方案中，该方法还包括收获根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体，或根据本申请的融合蛋白。
另一方面，本申请提供了一种组合物，其包含根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞，以及任选的药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本申请提供了一种根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞在制备用于预防和/或治疗癌症的药物方面的用途。
另一方面，本申请提供了一种根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体或融合蛋白在制备用于确定样品中CD27的存在和/或量的试剂方面的用途。
另一方面，本申请提供了一种用于在有此需要的受试者中预防和/或治疗癌症的方法，包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
另一方面，本申请提供了一种用于在有此需要的受试者中诱导或增强免疫反应的方法，包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
在一些实施方案中，所述免疫反应由T细胞介导。
另一方面，本发明提供了一种刺激T细胞增殖的方法，其包括向T细胞施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
另一方面，本申请提供了一种用于激活CD27介导的信号传导或用于在有此需要的受试者中增强信号传导活性的方法，其包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
另一方面，本申请提供了一种用于确定样品中CD27的存在和/或量的方法，其包括:a)将样品与根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体，或融合蛋白接触；以及b)确定与样品结合的所述抗体、其抗原结合片段或其变体或融合蛋白的存在和/或量。
另一方面，本申请提供了根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体，或细胞，其用于a)预防和/或治疗癌症，b)诱导或增强免疫反应，c)刺激T细胞增殖，d)激活CD27介导的信号传导或增加信号传导的活性，和/或e)确定样品中CD27的存在和/或量。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
通过引用并入
本申请中所提及的所有专利、公开专利申请及非专利出版物均以全文引用的方式明确并入本文中，其并入程度如同特定地及个别地指出将每一个专利或出版物以引用的方式并入。
附图说明
在所附权利要求中具体阐述了本申请的新颖特征。通过参考以下阐述了采用了本申请原理的说明性实施方案的详细描述以及附图(本文中也称为“图(figure)”和“图(FIG)”)将获得对本申请的特征和有利方面的更好理解，其中所述附图：
图1显示的是通过FACS所检测的，本申请的抗CD27抗体与细胞表面CD27的结合。
图2显示的是通过FACS检测到的本申请的抗CD27抗体与人CD27的特异性结合。
图3A-3B显示的是本申请的抗CD27抗体的激活活性。
图4A-4B显示的是本申请的抗CD27抗体刺激T细胞增殖的活性。
图5A-5B显示的是通过ELISA所检测到的本申请的抗CD27抗体与人CD27的结合。
图6显示的是通过FACS所检测到的本申请的抗CD27抗体与人细胞表面上的CD27的结合。
图7显示的是通过FACS所检测到的本申请的抗CD27抗体与猴细胞表面上的CD27的结合。
图8显示的是本申请的抗CD27抗体的激活活性。
图9A显示的是本申请的抗CD27抗体刺激T细胞增殖的活性。
图9B显示的是本申请的抗CD27抗体刺激T细胞分泌IFN-γ的活性。
图10A-10D显示的是本申请的抗CD27抗体的稳定性。
图11A-11D显示的是本申请的抗CD27抗体的稳定性。
图12A-12B显示的是通过SDS-PAGE检测CD27重组蛋白的表达。
图13A-13F显示的是通过SDS-PAGE所检测的根据本申请的抗CD27抗体的表达。
具体实施方式
虽然本文中已经显示和描述了本申请的各种实施方案，但对于本领域技术人员来说，此类实施方案显然仅作为示例提供。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员可实施许多变化、改变和替换。应当理解，可以采用本文描述的本申请的实施方案的各种替代方案。
如本文中所用，术语“抗体”通常指由两对相同的多肽链组成的免疫球蛋白分子，每对多肽链具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链。抗体的轻链可被分为к和λ轻链。重链可被分类为μ、δ、γ、α或ε，并且抗体的同型被分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，并且重链还包括约3个或更多个氨基酸的“D”区。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由三个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。每个轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。VH和VL区还可细分为称为互补决定区(CDR)的具有高度可变性的区域，所述互补决定区散布在称为框架区(FR)的更保守的区域之间。每个VH和VL从N端到C端按以下顺序排列由3个CDR和4个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。每个重/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合位点。氨基酸至区域或结构域的分布遵循免疫学相关蛋白的Kabat序列(KabatSequences of Proteins of Immunological Interest)(National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1987and 1991))或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。本发明中所述的氨基酸位置基于abysis工具(http://www.bioinf.org.uk/abysis/index.html)的在线比较，并且不代表氨基酸序列中的实际位置。术语“抗体”不受任何抗体产生方法的限制。例如，其包括重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG 1、IgG2、IgG3或IgG4亚型)、IgAl、IgA2、IgD、IgE或IgM抗体。
如本文中所用，术语“抗原结合片段”通常指全长抗体的一个或多个片段，其保持与所述抗体所结合的相同抗原(例如CD27)结合的能力，并与完整抗体竞争抗原特异性结合。抗原结合片段可通过重组DNA技术或通过酶促或化学切割完整抗体来产生。在一些情况下，抗原结合位点包括Fab、Fab’、F(ab’)2、F(ab)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体和多肽，其至少包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的一部分。
如本文中所用，术语“变体”通常指与母体分子(例如，多肽)至少有一个氨基酸不同的蛋白质。变体可以指分子本身，包含该分子的组合物。当这种分子是多肽或蛋白质时，其也可以指分子的氨基酸序列。在一些情况下，变体与其母体分子(例如，蛋白质)相异在于一个或多个氨基酸，诸如1-50、1-40、1-30、1-20、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2个氨基酸的添加、缺失或替换。在一些情况下，变体可以与其母体分子的氨基酸序列具有至少约80％(例如，至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高)的序列同源性。
如本文中所用，术语“CD27”通常指蛋白质CD27或编码其的核酸分子。CD27是肿瘤坏死因子受体超家族的一个成员。其与配体CD70结合，并在调节B细胞活化和免疫球蛋白合成方面起关键作用。CD27传导导致NF-κB和MAPK8/JNK活化的信号。
如本文中所用，术语“结合特异性”通常指一种物质特异性结合另一种物质，并且不容易随机结合任何其它物质的能力。例如，一种蛋白质可由于其特定的结构而与另一种蛋白质特异性结合。例如，靶向部分可以表现出对相应肿瘤抗原的结合特异性。
如本文中所用，术语“基本上不”通常是指很少或几乎不结合特定物质。例如，非常少或几乎没有(例如，少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％、少于1％、少于0.5％、少于0.1％或少于0.01％)根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体与CD137、OX40或GITR结合。
如本文中所用，术语“CD137”通常指蛋白质CD137或编码其的核酸分子。CD137是肿瘤坏死因子受体(TNF)家族的一个成员。CD137是共刺激免疫检查点分子，其也被称为4-1BB、TNFRSF9和ILA。CD137可由活化的T细胞表达，另外，树突细胞、B细胞、滤泡树突细胞、天然杀伤细胞、粒细胞和炎症部位的血管壁细胞也可表达该分子。
如本文中所用，术语“OX40”通常指蛋白质OX40或编码其的核酸分子。OX40也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)，或CD134。OX40是次级共刺激免疫检查点分子。OX40L与T细胞上的OX40受体结合，防止它们死亡，并随后增加细胞因子的产生。OX40由于其延长活期的能力，在最初几天之后维持免疫反应以及之后维持记忆反应中具有关键作用。OX40在体内Th1和Th2介导的反应中也起着关键作用。
如本文中所用，术语“GITR”通常指糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白，或肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)。在人中，其由TNFRSF18基因编码。GITR是共刺激免疫检查点分子。已经证明其参与抑制调节性T细胞的抑制活性和延长效应T细胞的存活期。在小鼠模型中，GITR最初被发现选择性地富集在调节性T细胞的表面。
如本文中所用，术语“KD”通常指离解常数，其为一种特定类型的测量较大物体可逆地分离(离解)成较小组分的倾向(如当复合物分离成其组分分子时)的平衡常数。离解常数是缔合常数的倒数。在抗体(Ab)与抗原(Ag)结合的特定情况下，通常术语亲和常数是指缔合常数。这种化学平衡也是结合速率(kforward)和解离速率(kback)常数的比率。两种抗体可具有相同的亲和力，但一种抗体可具有高的结合以及解离速率常数，而另一种抗体可以具有低的结合以及解离速率常数。
如本文中所用，术语“CD27介导的NF-κB活性”通常指由CD27介导的非典型核因子-κB(NF-κB)信号传导途径，其介导p52/RelB NF-κB复合物的激活，从而调节特定的免疫过程。这种NF-κB途径依赖于NF-κB前体蛋白p100的可诱导加工，而不是典型NF-κB途径中的IκBα降解。非典型NF-κB途径的中心信号传导组分是NF-κB诱导激酶(NIK)，其与下游激酶，NF-κB激酶α的抑制剂(IKKα)一起起作用，以诱导p100的磷酸化依赖性遍在蛋白化和加工。在正常条件下，NIK可被肿瘤坏死因子受体相关因子-3(TRAF3)依赖性E3泛素蛋白连接酶靶向持续降解。响应于由一个亚组的TNF受体超家族成员介导的信号，由于TRAF3的降解，NIK变得稳定，导致非典型NF-κB的激活。发现一个特定亚组的TNFR超家族成员介导非典型NF-κB信号传导的诱导；这些TNFR超家族成员包括LTβR、CD40、BAFFR、RANK、TNFR2、CD27等。
如本文中所用，术语“Tm”通常指稳定性曲线的中点值(解链温度，也称为疏水暴露温度Th)。其可通过逐渐升高温度以使蛋白质解折叠并测量每个点的荧光来获得。Tm越高，蛋白质越稳定。
如本文中所用，术语“二聚化”通常指二聚体形成的过程。二聚体是由通过共价键或非共价键彼此结合在一起的两个单体组成的寡聚物。当两个单体相同时，二聚体是同二聚体；当两个单体不相同时，二聚体是异二聚体。
如本文中所用，术语“单克隆抗体”通常指由相同的免疫细胞产生的抗体，所述免疫细胞都是独特的亲代细胞的克隆。单克隆抗体可具有单价亲和力，因为它们与同一表位(抗原被抗体识别的部分)结合。其已经成为生物化学、分子生物学和医学的重要工具。近年来已开发了多种单克隆抗体技术，诸如噬菌体展示、单B细胞培养、来自各种B细胞群体的单细胞扩增和单浆细胞询问技术(single plasma cell interrogation technologies)。
如本文中所用，术语“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中轻链和重链的可变(V)区来自小鼠，而恒定(C)区来自人，因此整个抗体分子的近三分之二来自人，与原始小鼠单克隆抗体相比，这大大降低了小鼠来源蛋白质的免疫原性程度。一般而言，嵌合抗体保留了原始小鼠单克隆抗体的特异性和亲和力，并且HAMA反应也显著降低。
如本文中所用，术语“人源化抗体”通常指来自非人物种的抗体，其蛋白质序列已被修饰以增加其与人中天然产生的抗体变体的相似性。当开发特定抗体的过程涉及非人免疫系统(诸如小鼠中的免疫系统)的产生时，人源化可以是必要的。以这种方式产生的抗体的蛋白质序列部分不同于天然存在于人中的同源抗体，因此当向人患者施用时具有潜在的免疫原性。人源化抗体的蛋白质序列与人变体的序列基本相同，尽管负责抗体与其靶抗原结合的能力的其互补决定区(CDR)区段中的一些是非人来源的。
如本文中所用，术语“完全人抗体”通常指具有完全人氨基酸序列衍生的抗体区域治疗剂的抗体，其中已通过使用遗传修饰的小鼠或通过结合筛选的抗体工程方法在体内选择了抗原特异性。与小鼠或嵌合抗体相比，完全人抗体和人源化抗体在人中诱导免疫反应的风险较低。
如本文中所用，术语“双特异性抗体”通常指能够同时与两种不同类型的抗原结合的人工蛋白质。制造方法的主要类型有四重杂交瘤(quadromas)、化学缀合和基因重组。IgG样形式，除两个Fab位点结合不同的抗原外，保留了两个Fab臂和一个Fc区的常规单克隆抗体(mAb)结构。每个重链和轻链对来自独特的mAb。由两条重链制成的Fc区形成第三个结合位点。非IgG样形式包括化学连接的Fab，仅由Fab区组成，以及各种类型的二价和三价单链可变片段(scFvs)。还有模拟两种抗体可变结构域的融合蛋白。双特异性抗体具有较高的细胞毒性潜能，并与在较低有效剂量下表达相对弱的抗原结合。另外，靶向一种以上的分子可用于规避平行途径的调节并避免对治疗的抗性。
如本文中所用，术语“Fab片段”通常指免疫球蛋白分子的一部分(诸如抗原结合片段)。Fab片段可以包含一条轻链和重链的一部分，具有单个抗原结合位点。Fab片段可以通过木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白分子而获得。例如，Fab片段可由每个重链和轻链的一个恒定结构域和一个可变结构域组成。可变结构域可在免疫球蛋白分子的氨基末端含有包含一组互补决定区的互补位(抗原结合位点)。木瓜蛋白酶可用于将免疫球蛋白分子裂解成两个Fab片段和一个Fc片段。胃蛋白酶在铰链区下方裂解，从而形成一个F(ab’)2片段和一个pFc’片段。二价F(ab)2或F(ab’)2片段具有两个通过二硫键连接的抗原结合区。F(ab)2或F(ab’)2片段的还原产生2个单价Fab或Fab’片段，其具有可用于与其它分子缀合的游离巯基。
本文所用的术语“Fv片段”通常指由IgG和IgM类抗体的酶促裂解制成的最小片段。Fv片段具有由VH和VL区制成的抗原结合位点，但它们缺少CH1和CL区。通过非共价相互作用，VH和VL链在Fv片段中结合在一起。
如本文中所用，术语“ScFv”通常指单链抗体片段。ScFv可指重组单链多肽分子，其中抗体的轻链和重链可变区通过肽接头连接。单链抗体(ScFv)通常不包括抗体的Fc区的涉及效应子功能的部分，因此是裸抗体，尽管已知有将此类区域添加到已知ScFv分子中(如果需要的话)的方法。参见Helfrich等人，A rapid and versatile method for harnessingScFv antibody fragments with various biological functions.J Immunol Methods237:131-145(2000)和de Haard等人，Creating and engineering human antibodies forimmunotherapy.Advanced Drug Delivery Reviews 31:5-31(1998)。
如本文中所用，术语“IgG”通常指一种亚型的抗体。每个IgG具有两个抗原结合位点。代表了约75％的人血清抗体，IgG是在循环中发现的最常见的抗体类型。被识别的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。
如本文中所用，术语“融合蛋白”通常可以指包含与异源多肽(即，与前一多肽或其结构域无关的多肽)的氨基酸序列直接或间接(例如，通过接头)融合的多肽的氨基酸序列，或者由其组成的多肽。
如本文中所用，术语“一种或多种分离的核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的核苷酸(无论是脱氧核糖核苷酸还是核糖核苷酸或其类似物)的聚合形式。
如本文中所用，术语“一种或多种载体”通常指可将编码蛋白质的多核苷酸插入其中并表达的核酸媒介物。载体中携带的遗传物质元件可以通过用载体转化、转导或转染宿主细胞而在宿主细胞中表达。载体的实施方案包括:质粒；噬菌粒；粘粒；人工染色体，诸如酵母人工染色体(YACs)、细菌人工染色体(BACs)或P1衍生的人工染色体(PACs)；噬菌体诸如λ噬菌体或M13噬菌体和动物病毒。用作载体的动物病毒包括逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(诸如单纯疱疹病毒)、黄疸病毒、杆状病毒、乳头状瘤病毒、乳多空病毒(诸如SV40病毒)。载体可包含多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件和报告基因。另外，载体还可包含复制起点。载体还可能包括有助于其进入细胞的组分，诸如病毒颗粒、脂质体或蛋白壳，但不仅仅是这些物质。
如本文中所用，术语“细胞”通常指向其中引入载体的细胞，包括许多细胞类型，诸如原核细胞诸如大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、真菌细胞诸如酵母细胞或曲霉属(Aspergillus)细胞、昆虫细胞诸如S2果蝇细胞或Sf9，或动物细胞诸如成纤维细胞、CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞、HEK293细胞或人细胞。
如本文中所用，术语“使得能够表达的条件”通常指使得能够表达本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体的条件。在一些实施方案中，使得能够表达的条件包括但不限于孵育时间、温度和培养基，并且可以取决于细胞类型，以及可由本领域普通技术人员容易地确定。在一些实施方案中，在产生本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体的过程中，将细胞在培养中生长，并且在可用于生长培养物的任何装置(包括发酵罐)中生长。可将细胞生长成单层或附着至表面。或者，可将细胞悬浮生长。可将细胞在无血清培养基中生长。
如本文中所用，术语“癌症”通常指一组涉及异常细胞生长的疾病，其具有侵入或扩散到身体其它部位的潜力。癌症从根本上说是一种组织生长调节的疾病。为了使正常细胞转化为癌细胞，必须改变调节细胞生长和分化的基因。受影响的基因分为两大类。癌基因是促进细胞生长和繁殖的基因。肿瘤抑制基因是抑制细胞分裂和存活的基因。恶性转化可通过新型癌基因的形成、正常癌基因的不适当过表达或肿瘤抑制基因的表达不足或失活而发生。通常，要将正常细胞转化为癌细胞，需要多个基因的改变。癌症按细胞类型分类，包括癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病、生殖细胞肿瘤和母细胞瘤。
如本文中所用，术语“T细胞”通常指在细胞介导的免疫中起核心作用的一种类型的淋巴细胞(白细胞的一种亚型)。通过细胞表面存在的T细胞受体，可以将T细胞与其它淋巴细胞(诸如B细胞和天然杀伤细胞)区分开来。它们被称为T细胞，因为它们在胸腺中从胸腺细胞成熟。大多数人T细胞在细胞受体上重新排列它们的α和β链，并被称为alpha beta T细胞(αβT细胞)，是适应性免疫系统的一部分。特化γδT细胞(人体内的一小部分T细胞，在反刍动物中更常见)具有不变的T细胞受体，其多样性有限，能够有效地向其它T细胞呈递抗原，并被认为是先天免疫系统的一部分。
如本文中所用，术语“药学上可接受的赋形剂”通常指与药物施用相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂等。
如本文中所用，术语“约”通常是指基于本领域普通技术可以合理推断的给定值的近似值，包括由于该给定值的实验和/或测量条件而产生的等价值和近似值。例如，其可以指比该术语所修饰的值高或低不超过10％的值。例如，术语“约5μg/kg”是指4.5μg/kg至5.5μg/kg的范围。作为另一个实例，“约1小时”意指48分钟到72分钟的范围。
如本文中所用，术语“有效量”通常是指足以提供足够高的浓度以赋予其接受者有益效果的剂量。任何特定受试者的特定治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症、病症的严重程度、特定组分的活性、施用途径、清除率、治疗持续时间、受试者的年龄、体重、性别、饮食和一般健康状况以及其它相关因素。
如本文中所用，术语“结合特异性”通常指特异性结合(例如，与之免疫反应)给定靶标(同时不结合或基本上不结合非靶标)的能力。本申请的抗体(或其抗原结合片段或变体)可以是单特异性的，并且包含一个或多个特异性结合靶标的结合位点，或者可以是多特异性的(例如双特异性或三特异性)，并且包含两个或更多个特异性结合相同或不同靶的结合位点。
如本文中所用，术语“修饰”通常指对多肽的肽骨架(例如氨基酸序列)的任何操作或任何翻译后修饰(例如糖基化)。例如，修饰与相应野生型多肽的序列相比较。修饰可以是一个或多个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)的替换、添加和/或缺失。
如本文中所用，术语“氨基酸替换”通常指多肽特定位置处的一个氨基酸被另一个氨基酸替换。
如本文中所用，术语“KABAT数的EU指数”通常是指根据Kabat等人，(1971)Ann.NYAcad,Sci.190:382-391和Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services,NIHPublication No.91-3242的对应于氨基酸序列的EU编号的指数。
如本文中所用，术语“分离的多核苷酸”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的核苷酸(无论是脱氧核糖核苷酸还是核糖核苷酸，或其类似物)的聚合形式。
CD27抗体、其抗原结合片段或其变体
一方面，本申请提供了可与CD27结合的抗体、其抗原结合片段或其变体。
抗体、其抗原结合片段或其变体可与CD27特异性结合，并且基本上不与CD137、OX40或GITR结合。例如，如通过FACS所测量的，抗体、其抗原结合片段或其变体可以以至少30％(例如，至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或更多)的百分比与CD27结合。此外，如通过FACS所测量的，抗体、其抗原结合片段或其变体可以以至多5％(例如，至多4.5％，至多4％，至多3.5％，至多3％，至多2.5％，至多2％，至多1.5％，至多1％，至多0.5％，或更少)的百分比与OX40结合。
另外，如通过FACS所测量的，抗体、其抗原结合片段或其变体可以以至多5％(例如，至多4.5％，至多4％，至多3.5％，至多3％，至多2.5％，至多2％，至多1.5％，至多1％，至多0.5％，或更少)的百分比与CD137结合。此外，如通过FACS所测量的，抗体、其抗原结合片段或其变体可以以至多5％(例如，至多4.5％，至多4％，至多3.5％，至多3％，至多2.5％，至多2％，至多1.5％，至多1％，至多0.5％，或更少)的百分比与GITR结合。
抗体、其抗原结合片段或其变体可以与CD27结合，其中KD为10-7M或更小，例如其中KD为10-8M或更小、9x10-9M或更小、8x10-9M或更小、7x10-9M或更小、6x10-9M或更小、5x10-9M或更小、4x10-9M或更小、3x10-9M或更小、2x10-9M或更小、1x10-9M或更小、9x10-10M或更小、8x10-10M或更小、7x10-10M或更小、5x10-10M或更小或1x10-10M或更小。
抗体、其抗原结合片段或其变体可以激活和/或增加CD27介导的NF-κB活性。例如，如在荧光素酶报告测定中所示的。
抗体、其抗原结合片段或其变体可以刺激CD4+和/或CD8+T细胞增殖。例如，CD4+和/或CD8+T细胞的增殖率可以提高20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、60％或更多、70％或更多、80％或更多、90％或更多、100％或更多、150％或更多、200％或更多、250％或更多、300％或更多、350％或更多或者400％或更多。
抗体、其抗原结合片段或其变体可与在细胞表面上表达的人CD27结合。抗体、其抗原结合片段或其变体还可与在细胞表面上表达的猴CD27结合。
抗体、其抗原结合片段或其变体可刺激CD4+和/或CD8+T细胞分泌IFN-γ。例如，IFN-γ的分泌可增强至至少200pg/mL、至少400pg/mL、至少600pg/mL、至少800pg/mL、至少1000pg/mL、至少2000pg/mL、至少2500pg/mL、至少3000pg/mL、至少3500pg/mL或至少4000pg/mL或更多。
抗体、其抗原结合片段或其变体的Tm可为至少50℃(例如，至少55℃、至少59℃、至少60℃、至少61℃、至少62℃、至少63℃、至少64℃、至少65℃、至少66℃、至少67℃、至少68℃、至少69℃、至少70℃或更高)，例如如通过DSC测试的。
在SEC-HPLC分析中，抗体、其抗原结合片段或其变体可显示出小于约10％(例如，小于约9％、小于约8％、小于约7％、小于约6％、小于约5.5％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％或更小)的二聚化的相对减少。例如，当溶解在PBS中时，浓度为5-15mg/ml(例如，约5-14mg/ml、约5-13mg/ml、约5-12mg/ml、约5-11mg/ml、约5-10mg/ml、约5-9mg/ml、约5-8mg/ml、约5-7mg/ml、约5-6mg/ml)。pH值可为约6.5-约8.5(例如，约6.8至约8.5、约7.0至约8.5、约7.1至约8.5、约7.2至约8.5、约7.3至约8.5、约7.4至约8.5、约7.5至约8.5、约7.6至约8.5、约7.7至约8.5、约7.8至约8.5、约7.9至约8.5或约8.0至约8.5)可以在约30℃至约70℃的温度(例如，约35℃至约70℃、约40℃至约70℃、约41℃至约70℃、约42℃至约70℃、约43℃至约70℃、约44℃至约70℃、约45℃至约70℃、约46℃至约70℃、约47℃至约70℃、约48℃至约70℃、约49℃至约70℃、约50℃至约70℃、、约55℃至约70℃、约60℃至约70℃或约65℃至约70℃)下。在约10-45天(例如，约15-45天、约20-45天、约25-45天、约26-45天、约27-45天、约28-45天、约29-45天、约30-45天、约31-45天、约32-45天、约33-45天、约34-45天、约35-45天至约40-45天)的过程中。
在本申请中，优选抗体、其抗原结合片段或其变体保持二聚体的形式(例如，而非单体、三聚体或其它多聚体)。
当溶解在溶剂溶液(例如，PBS)中时，抗体、其抗原结合片段或其变体可显示小于约30％(例如，小于约25％，小于约20％，小于约19％，小于约18％，小于约17％，小于约16％，小于约15％，小于约14％，小于约13％，小于约12％，小于约11％，小于约10％，小于约9％，小于约8％，小于约7％，或小于约5％或更小)的浓度变化。可将抗体、其抗原结合片段或其变体以约5-15mg/ml(例如，约6-15mg/ml、约7-15mg/ml、约8-15mg/ml、约9-15mg/ml、约10-15mg/ml、约11-15mg/ml、约12-15mg/ml、约13-15mg/ml或约14-15mg/ml，诸如约8-12mg/ml、约9-11mg/ml或约9.5-10.5mg/ml)的浓度溶解。pH值可为约6.5-约8.5(例如，约6.8至约8.5、约7.0至约8.5、约7.1至约8.5、约7.2至约8.5、约7.3至约8.5、约7.4至约8.5、约7.5至约8.5、约7.6至约8.5、约7.7至约8.5、约7.8至约8.5、约7.9至约8.5或约8.0至约8.5)可以在约30℃至约70℃的温度(例如，约35℃至约70℃、约40℃至约70℃、约41℃至约70℃、约42℃至约70℃、约43℃至约70℃、约44℃至约70℃、约45℃至约70℃、约46℃至约70℃、约47℃至约70℃、约48℃至约70℃、约49℃至约70℃、约50℃至约70℃、约55℃至约70℃、约60℃至约70℃或约65℃至约70℃)下。在约10-45天(例如，约15-45天、约20-45天、约25-45天、约26-45天、约27-45天、约28-45天、约29-45天、约30-45天、约31-45天、约32-45天、约33-45天、约34-45天、约35-45天至约40-45天)的过程中。
根据本申请的抗体可以选自：单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、完全人抗体和双特异性抗体。
根据本申请的抗原结合片段可以选自：Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、Fv片段和ScFv。
在一些情况下，变体可以是与根据本申请的抗体或其抗原结合片段相异在于一个或多个氨基酸(诸如1-50个、1-40个、1-30个、1-20个、1-15个、1-14个、1-13个、1-12个、1-11个、1-10个、1-9个、1-8个、1-7个、1-6个、1-5个、1-4个、1-3个或1-2个氨基酸)的添加、缺失或替换的多肽。
在一些情况下，变体可以是与根据本申请的抗体或其抗原结合片段具有至少80％(例如，至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高)序列同一性的多肽。
在本申请中，抗体、其抗原结合片段或其变体可与参考抗体竞争与CD27的结合。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:8中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:18中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:28中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:38中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:48中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:58中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:68中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:78中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链CDR1-3和重链CDR1-3，轻链CDR1可包含如SEQID NO:88中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:85中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:86中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:3中所示的氨基酸序列以及重链可变区可包含如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:13中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:23中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:33中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:43中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:53中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:63中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:73中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:83中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，参考抗体包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体、其抗原结合片段或其变体可包含抗体轻链或其片段。
例如，抗体轻链或其片段可包含LCDR1，并且LCDR1可包含选自SEQ ID NO:8、18、28、38、48、58、68、78和88的氨基酸序列。抗体轻链或其片段可包含LCDR2，并且LCDR2可包含选自SEQ ID NO:9、19、29、39、49、59、69、79和89的氨基酸序列。抗体轻链或其片段可包含LCDR3，并且LCDR3可包含选自SEQ ID NO:10、20、30、40、50、60、70、80和90的氨基酸序列。
另外，抗体轻链或其片段可包含轻链可变区VL，轻链可变区VL可包含选自SEQ IDNO:3、13、23、33、43、53、63、73、83和91的氨基酸序列。
抗体轻链或其片段还可包含恒定区。轻链恒定区可包含Igκ恒定区，例如人Igκ恒定区。
在一些实施方案中，轻链或其片段包含选自SEQ ID NO:117、119、121、123、125、127、129、131和133的氨基酸序列。
在本申请中，抗体、其抗原结合片段或其变体可包含抗体重链或其片段。
例如，抗体重链或其片段可包含HCDR1，并且HCDR1可包含选自SEQ ID NO:5、15、25、35、45、55、65、75和85的氨基酸序列。抗体重链或其片段可包含HCDR2，并且HCDR2可包含选自SEQ ID NO:6、16、26、36、46、56、66、76和86的氨基酸序列。抗体重链或其片段可包含HCDR3，并且HCDR3可包含选自SEQ ID NO:7、17、27、37、47、57、67、77和87的氨基酸序列。
另外，抗体重链或其片段可包含重链可变区VH，并且重链可变区VH可包含选自SEQID NO:1、11、21、31、41、51、61、71、81、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113和115的氨基酸序列。
抗体重链或其片段还可包含人恒定区。例如，人恒定区可包含人IgG的恒定区。例如，IgG恒定区可包含人IgG的恒定区。
在一些实施方案中，重链或其片段包含选自SEQ ID NO:118、120、122、124、126、128、130、132和134的氨基酸序列。
在本申请中，CD27可以选自:人CD27、小鼠CD27和猴子CD27。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQID NO:5中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列以及重链CDR2可包含如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:25中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:37中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:50中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:58中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:59中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:55中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:65中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:66中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:79中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:75中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:77中所示的氨基酸序列。
在本申请中，抗体或其抗原结合片段可以包含轻链CDR 1-3和重链CDR 1-3，轻链CDR1可包含如SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列，轻链CDR2可包含如SEQ ID NO:89中所示的氨基酸序列，轻链CDR3可包含如SEQ ID NO:90中所示的氨基酸序列，重链CDR1可包含如SEQ ID NO:85中所示的氨基酸序列，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:86中所示的氨基酸序列以及重链CDR3可包含如SEQ ID NO:87中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:31中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:63中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:61中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:73中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:71中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列。
在一些情况下，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，轻链可变区可包含如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列，并且重链可变区可包含如SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列。
例如，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2E7的LCDR 1-3和HCDR 1-3相同的LCDR1-3和HCDR 1-3。抗体m2E7的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:28-30中所示的，并且抗体m2E7的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:25-27中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2B8的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m2B8的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:18-20中所示的，并且抗体m2B8的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:15-17中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m4H3的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m4H3的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:68-70中所示的，并且抗体m4H3的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:65-67中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m3E7的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m3E7的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:38-40中所示的，并且抗体m3E7的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:35-37中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m1A8的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m1A8的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:8-10中所示的，并且抗体m1A8的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:5-7中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m4G1的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m4G1的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:58-60中所示的，并且抗体m4G1的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:55-57中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2G3的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m2G3的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:78-80中所示的，并且抗体m2G3的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:75-77中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2F11的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m2F11的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:88-90中所示的，并且抗体m2F11的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:85-87中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m3B8的LCDR 1-3和HCDR1-3相同的LCDR 1-3和HCDR 1-3。抗体m3B8的LCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:48-50中所示的，并且抗体m3B8的HCDR 1-3分别是如SEQ ID NO:45-47中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2E7的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m2E7的轻链可变区是如SEQ ID NO:21中所示的，并且抗体m2E7的重链可变区是如SEQ ID NO:23中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d16647的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d16647的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d16647的重链可变区是如SEQ ID NO:115中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d12996的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d12996的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d12996的重链可变区是如SEQ ID NO:107中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d9419的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d9419的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d9419的重链可变区是如SEQ ID NO:95中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d9424的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d9424的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d9424的重链可变区是如SEQ ID NO:99中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d14822的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d14822的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d14822的重链可变区是如SEQ ID NO:111中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体d12674的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体d12674的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体d12674的重链可变区是如SEQ ID NO:103中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体16647的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体16647的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体16647的重链可变区是如SEQ ID NO:113中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体12996的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体12996的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体12996的重链可变区是如SEQ ID NO:105中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体9419的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体9419的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体9419的重链可变区是如SEQ ID NO:93中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体9424的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体9424的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体9424的重链可变区是如SEQ ID NO:97中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体14822的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体14822的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体14822的重链可变区是如SEQ ID NO:109中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体12674的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体12674的轻链可变区是如SEQ ID NO:91中所示的，并且抗体12674的重链可变区是如SEQ ID NO:101中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2B8的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m2B8的轻链可变区是如SEQ ID NO:13中所示的，并且抗体m2B8的重链可变区是如SEQ ID NO:11中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m4H3的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m4H3的轻链可变区是如SEQ ID NO:63中所示的，并且抗体m4H3的重链可变区是如SEQ ID NO:61中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m3E7的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m3E7的轻链可变区是如SEQ ID NO:33中所示的，并且抗体m3E7的重链可变区是如SEQ ID NO:31中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m1A8的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m1A8的轻链可变区是如SEQ ID NO:3中所示的，并且抗体m1A8的重链可变区是如SEQ ID NO:1中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m4G1的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m4G1的轻链可变区是如SEQ ID NO:53中所示的，并且抗体m4G1的重链可变区是如SEQ ID NO:51中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2G3的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m2G3的轻链可变区是如SEQ ID NO:73中所示的，并且抗体m2G3的重链可变区是如SEQ ID NO:71中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m2F11的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m2F11的轻链可变区是如SEQ ID NO:83中所示的，并且抗体m2F11的重链可变区是如SEQ ID NO:81中所示的。
作为另一个实例，抗体或其抗原结合片段可包含与抗体m3B8的轻链可变区和重链可变区相同的轻链可变区和重链可变区。抗体m3B8的轻链可变区是如SEQ ID NO:43中所示的，并且抗体m3B8的重链可变区是如SEQ ID NO:41中所示的。
在一些实施方案中，根据本申请的抗体选自：m2E7、m2B8、m4H3、m3E7、m1A8、m4G1、m2G3、m2F11、m3B8、d16647、d12996、d9419、d9424、d14822、d12674、16647、12996、9419、9424、14822、12674。
另一方面，本申请提供了融合蛋白。所述融合蛋白可包含根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体。
例如，所述融合蛋白可包含一种或多种另外的组分，诸如其它药物活性组分。可将另外的组分直接或间接(例如，通过接头，诸如肽接头)地与抗体、其抗原结合片段或其变体融合。所述融合蛋白仍可具有根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体的至少一些性质。
核酸、载体、细胞及其制备方法
另一方面，本申请提供了一种或多种分离的核酸，其编码根据本申请的抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白。
所述分离的核酸可包含一个或多个核酸分子，其中每个核酸分子编码本申请的抗体、其抗原结合片段或变体。例如，所述分离的核酸可包含至少两个核酸分子，其中一个编码抗体重链或其片段/变体，一个编码抗体轻链或其片段/变体。在某些情况下，所述分离的核酸可编码融合蛋白。
一种或多种分离的核酸可使用本领域公知的重组技术来合成。例如，一种或多种分离的核酸可用自动的DNA合成器来合成。
标准的重组DNA和分子克隆技术包括由以下文献描述的那些技术：Sambrook,J.,Fritsch,E.F.和Maniatis,T.Molecular Cloning:A Laboratory Manual；Cold SpringHarbor Laboratory Press:Cold Spring Harbor,(1989)(Maniatis)以及T.J.Silhavy,M.L.Bennan和L.W.Enquist,Experiments with Gene Fusions,Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1984)和Ausubel,F.M.等人，Current Protocolsin Molecular Biology,pub.by Greene Publishing Assoc.and Wiley-Interscience(1987)。简言之，本发明的核酸可从基因组DNA片段、cDNA和RNA中制备，所有这些都可以直接从细胞中提取或通过各种扩增过程(包括但不限于PCR和RT-PCR)重组产生。
核酸的直接化学合成通常包括将3’-封闭的和5’-封闭的核苷酸单体顺序添加到生长的核苷酸聚合物链的末端5’-羟基，其中每次添加都是通过生长链的末端5’-羟基对添加的单体的3’-位置的亲核进攻来实现的，所述添加的单体通常是磷衍生物，诸如磷酸三酯、亚磷酰胺等。参见例如，Matteuci等人，Tet.Lett.521:719(1980)；属于Caruthers等人的美国专利第4,500,707号；以及属于Southern等人的美国专利第5,436,327号和5,700,637号。
另一方面，本申请提供了一种或多种载体，其包含一种或多种分离的核酸分子。
载体可以是任何线性核酸、质粒、噬菌粒、粘粒、RNA载体、病毒载体等。病毒载体的非限制性实例可包括逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒。在一些实施方案中，载体是表达载体，例如噬菌体展示载体。
表达载体可以适用于特定类型的宿主细胞，而不适用于其它类型的宿主细胞。例如，可将表达载体引入宿主生物，然后监测其生存力和载体中包含的任何基因/多核苷酸的表达。
表达载体还可包含一种或多种选择性标记基因，其在表达时赋予一个或多个用于选择或以其它方式鉴定携带所述表达载体的宿主细胞的表型特征。用于真核细胞的合适的选择性标记的非限制性实例包括二氢叶酸还原酶和新霉素抗性。
可通过各种已建立的技术将主题载体稳定地或瞬时地引入宿主细胞。例如，一种方法包括氯化钙处理，其中通过钙沉淀引入表达载体。还可按照类似的程序使用其它盐，例如磷酸钙。另外，可使用电穿孔(即，施加电流以增加细胞对核酸的通透性)。转化方法的其它实例包括显微注射、DEAE葡聚糖介导的转化和在乙酸锂存在下的热激。脂质复合物、脂质体和树枝状大分子也可用于转染宿主细胞。
另一方面，本申请提供了细胞(例如，分离的细胞，诸如宿主细胞)，其包含一种或多种本申请的分离的核酸分子或本申请的一种或多种载体。
细胞可表达本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、或本申请的融合蛋白。该细胞可以是真核细胞或原核细胞。可用本申请的一种或多种核酸或一种或多种载体转化或转染合适的细胞，并将其用于抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白的表达和/或分泌。例如，细胞可以是大肠杆菌细胞、其它细菌宿主细胞、酵母细胞或各种高等真核细胞。
另一方面，本申请提供了用于产生本申请的抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白的方法，其包括在使得能够表达抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白的条件下培养本申请的细胞。
该方法还可包括收获本申请的抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白。
药物组合物
另一方面，本申请提供了组合物，其包含根据本申请的抗体、其抗原结合片段或变体、一种或多种载体、融合蛋白和/或一种或多种分离的核酸分子，以及任选的药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，药物组合物还包含有效量的用于癌症治疗的另外的治疗活性成分。例如，用于癌症治疗的另外的治疗活性组分可以是化学治疗剂。在一些实施方案中，化学治疗剂是细胞毒性试剂。每种活性组分可以以药物活性量存在于药物组合物中。
下文描述了非限制性示例性药物组合物及其制备方法。例如，药物组合物可呈适于口服施用的形式，诸如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液、混悬液，用于胃肠外注射的形式如无菌溶液、混悬液或乳剂，用于局部施用的形式如软膏或乳膏，或用于直肠施用的形式如栓剂。药物组合物可以是适于精确剂量的单次施用的单位剂型。在一些实施方案中，药物组合物可以是适于口服的液体药物组合物。
适用于口服施用的本申请的药物组合物可呈现为离散剂型，诸如胶囊剂、扁囊剂或片剂，或液体或气溶胶喷雾剂(每一种剂型都含有预定量的活性成分，其形式为粉末或颗粒、溶液或水性或非水性液体中的混悬液、水包油乳液或油包水液体乳液)。此类剂型可通过任何药剂学方法制备，但所有方法通常包括将活性成分与载体结合的步骤，所述载体构成一种或多种其它成分。通常，通过将活性成分与液体载体或细粒固体载体或两者均匀而紧密地混合，然后，如果需要，将产品成形为所需的外观来制备组合物。
可按照常规药物配制技术与药物载体紧密混合来组合本发明的抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白。取决于施用所需的制剂形式，载体可采取多种形式。在制备用于口服剂型的组合物时，任何常用的药物介质都可以用作载体，例如，在口服液体制剂(诸如混悬液、溶液和酏剂)或气雾剂的情况下，水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等；或者在口服固体制剂的情况下，在一些不使用乳糖的实施方案中，可使用载体诸如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。例如，合适的载体包括粉末、胶囊剂和片剂，以及固体口服制剂。如果需要，可通过标准的水性或非水性技术对片剂进行包衣。
组合物还可包含一种或多种药学上可接受的添加剂和赋形剂。此类添加剂和赋形剂包括但不限于防粘剂、消泡剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂、调味剂、着色剂、加臭剂(odorant)、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填料、增塑剂、润滑剂及其混合物。
本申请的药物组合物可包含治疗有效量的活性剂(例如，本申请的抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白)。治疗有效量是能够预防和/或治愈(至少部分)患有所述疾患或病症或有发生所述疾患或病症风险的受试者的疾患或病症(例如，癌症)和/或其任何并发症的主题药物组合物的量。所包含的活性剂的具体量/浓度可根据施用方法和患者的需要而变化，并且可以基于例如体积、粘度和/或患者的体重等来确定。例如，合适的剂量可以是约0.1mg或l mg/kg/日至约50mg/kg/日；有时，剂量甚至更高。在一些实施方案中，施用的剂量可以为约3mg/kg/日至约3.5mg/kg/日、3.5mg/kg/日至约7.2mg/kg/日、约7.2mg/kg/日至约11.0mg/kg/日、约11.0mg/kg/日至约15.0mg/kg/日。在一些实施方案中，施用的剂量为约10mg/kg/日至约50mg/kg/日，例如约20mg至约50mg/口，每日施用两次。应当理解，本领域技术人员(例如，医生或药剂师)可基于特定患者、制剂和/或疾病的状况方便地调整这些特定剂量。
医疗用途和治疗方法
另一方面，本申请提供了根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞在制备用于预防和/或治疗癌症的药物方面的用途。
例如，癌症可包括CD27表达升高的肿瘤细胞。例如，癌症可以是血液肿瘤(诸如CD27+淋巴瘤)或实体瘤。例如，所述癌症可选自：肾细胞癌、胸腺癌、鼻咽癌、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、沃尔登斯图姆巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病、T细胞白血病、多发性骨髓瘤、EBV相关和HTLV-1相关恶性肿瘤、胰腺癌、喉癌、咽癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌(包括肺腺癌)、结肠癌、乳腺癌和脑癌。
另一方面，本申请提供了根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体或融合蛋白在制备用于确定样品中CD27的存在和/或量的试剂方面的用途。
另一方面，本申请提供了用于在有此需要的受试者中预防和/或治疗癌症的方法，包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
另一方面，本申请提供了用于在有此需要的受试者中诱导或增强免疫反应的方法，包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。例如，可通过T细胞介导免疫反应。
另一方面，本发明提供了刺激T细胞增殖的方法，其包括向T细胞施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。所述方法可以是体外方法。
另一方面，本申请提供了用于激活CD27介导的信号传导或用于在有此需要的受试者中增强信号传导活性的方法，其包括向受试者施用有效量的根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体和/或细胞。
另一方面，本申请提供了用于确定样品中CD27的存在和/或量的方法，其包括:a)将样品与根据本申请的抗体或其抗原结合片段或变体，或融合蛋白接触；以及b)确定与样品结合的所述抗体、其抗原结合片段或变体或融合蛋白的存在和/或量。
另一方面，本申请提供了根据本申请的抗体、其抗原结合片段或其变体、融合蛋白、一种或多种分离的核酸分子、一种或多种载体或细胞，其用于a)预防和/或治疗癌症，b)诱导或增强免疫反应，c)刺激T细胞增殖，d)激活CD27介导的信号传导或增加信号传导的活性，和/或e)确定样品中CD27的存在和/或量。
虽然本文已经显示和描述了本申请的优选实施方案，但对于本领域技术人员来说，显然此类实施方案仅作为实例提供。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员现将进行许多变化、改变和替换。应当理解，在实践本申请中，可采用这本文所述的本申请的实施方案的各种替代方案。以下权利要求书旨在限定本申请的范围，并且由此涵盖这些权利要求及其等同物的范围内的方法和结构。
实施例
阐述以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何制作和使用本申请的完整公开内容和描述，并不旨在限制本申请人认为是其申请的范围，也不旨在表示下面的实验是所有或唯一进行的实验。已努力确保所用数字(例如数量、温度等)的准确性，但应该考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是在大气压下或接近大气压。可使用标准缩写，例如bp，一个或多个碱基对；kb，一个或多个千碱基；pl，一或多皮升；s或sec,一或多秒；min,一或多分钟；h或hr，一或多小时；aa，一个或多个氨基酸；nt，一个或多个核苷酸；i.m.,肌内(地)；i.p.,腹膜内(地)；s.c.，皮下(地)；等等。
实施例1重组人CD27蛋白的表达和相关EGFP细胞的制备
根据蛋白质数据库Uniprot，人CD27胞外结构域的氨基酸序列(即，P26842的1至192位残基)是根据人CD27(hCD27)的氨基酸序列(hCD27，并且Uniprot中的登录号为P26842)获得的。猴CD27的胞外结构域的氨基酸序列(即，F7BYS2的1-192位残基)是根据猴CD27的氨基酸序列(RhCD27，并且Uniprot中的登录号为F7BYS2)获得的。人IgG1-Fc结构域(Fc)的氨基酸序列(即，P01857的104至330位残基)是根据人免疫球蛋白γ1的氨基酸序列(hIgG1，并且Uniprot中的登录号为P01857)获得的。小鼠IgG1-Fc(muFc)的氨基酸序列(即，P01868的98至324位残基)是根据小鼠免疫球蛋白γ1的氨基酸序列(mIgG1，并且Uniprot的登录号为P01868)获得的。利用在线工具DNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计了相应的编码序列，从而获得了融合蛋白hCD27-Fc、hCD27-muFc和RhCD27-muFc的相应编码序列。
绿色荧光蛋白EGFP(登录号为C5MKY7)、人CD137(hCD137，登录号为Q07011)、人OX40(hOX40，登录号为P43489)、人GITR(hGITR，登录号为Q9Y5U5)、人CD27(hCD27，登录号为P26842)、鼠CD27(mCD27，登录号为P41272)和猴CD27(RhCD27，登录号为F7BYS2)的氨基酸序列获自Uniprot数据库。用在线工具DNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计它们相应的编码DNA序列，从而获得分别编码下列EGFP融合蛋白的DNA序列：hCD137-EGFP、hOX40-EGFP、hCD27-EGFP、hGITR-EGFP、mCD27-EGFP和RhCD27-EGFP。
将合成的DNA序列在用Fermentas’HindIII和PmeI酶消化后亚克隆到商购可得的载体pcDNA4/myc-HisA(Invitrogen,V863-20)中。通过测序验证质粒，并获得以下重组质粒：pcDNA4-hCD27-hFc、pcDNA4-hCD27-muFc、pcDNA4-RhCD27-muFc、pcDNA4-hOX40-EGFP、pcDNA4-hCD137-EGFP、pcDNA4-mCD27-EGFP、pcDNA4-hCD27-EGFP、pcDNA4-hGITR-EGFP、pcDNA4-mCD27-EGFP和pcDNA4-RhCD27-EGFP。
然后，通过转染将重组质粒引入HEK293(ATCC,CRL-1573TM)细胞中，通过荧光激活信号分选(FACS)在转染后48小时确认hOX40、hCD137、hGITR、hCD27、mCD27和RhCD27的表达。
通过转染将质粒pcDNA4-hCD27-Fc、pcDNA4-hCD27-muFc和pcDNA4-RhCD27-muFc瞬时引入HEK293细胞，并产生相应的蛋白质。简言之，用Freestyle 293培养基稀释这些质粒，并加入适当的PEI(聚乙烯亚胺)溶液。然后，将每种质粒/PEI混合物加入到细胞悬浮液中，并在37℃、10％CO2和90rpm下孵育。5-6天后，收集培养物上清液并通过蛋白A亲和色谱进行初步纯化，以获得hCD27-Fc、hCD27-muFc和RhCD27-muFc蛋白样品。用SDS-PAGE分析获得的蛋白质样品(图12A-12B)，并确认所需靶蛋白的表达。
图12A-12B显示CD27-Fc、CD27-muFc、RhCD27-muFc被成功表达和纯化。在图12A中，泳道1加载了CD27-Fc(原始样品)；泳道2加载了CD27-Fc(流通物(flow-through))；泳道3加载了CD27-Fc(洗脱物(eluted))；泳道4加载了标记(26630)；泳道5加载了CD27-muFc(洗脱物)；泳道6加载了CD27-muFc(原始样品)；泳道7加载了CD27-muFc(流通物)；泳道8加载了1μg标准品(Std)；泳道9是空的；泳道10加载了CD27-Fc(洗脱物，非还原型)；泳道11加载了CD27-Fc(洗脱物，非还原型)。
在图12B中，泳道1加载了marker(26619)；泳道2加载了RhCD27-muFc(洗脱物)；泳道3加载了RhCD27-muFc(原始样品)；泳道4加载了RhCD27-muFc(流通物)；泳道5加载了1μg标准品(Std)；泳道6是空白(blank)；泳道7是空的(empty)；泳道8加载了RhCD27-muFc(洗脱物，非还原型)。
实施例2从杂交瘤获得的抗CD27抗体
用如实施例1中所述制备的hCD27-muFc蛋白免疫小鼠，并在三次免疫后测定抗体滴度。选择显示高滴度的小鼠进行第四次免疫。在第四次免疫后从小鼠中分离脾细胞，并将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。对从融合细胞获得的上清液进行ELISA结合测试，总共获得400个能够与CD27结合的杂交瘤克隆。
简言之，ELISA板用2μg/ml CD27-Fc(100μl/孔)包被，并在4℃下孵育过夜。然后，用10mM,pH 7.4PBS/Tween(0.05％)洗涤一次，用含5％脱脂奶粉的PBST封闭，在37℃下孵育2小时。洗涤平板4次后，加入杂交瘤上清液，并在37℃孵育40分钟。然后将平板洗涤4次，加入缀合有抗小鼠IgG-HRP的第二抗体(Abcam，目录号ab97040)，并在37℃孵育40分钟。洗涤后，用TMB底物产生信号，并在OD450下进行分光光度分析。OD大于0.5的克隆被认为是阳性的。
通过FACS检查所选阳性克隆的结合活性和活化能力，并选择显示活化活性的抗体用于进一步研究。按照说明进行FACS分析。简言之，将实施例1中制备的5x 105CD27-EGFP细胞在PBS中洗涤两次，加入50μl杂交瘤上清液以及50μl PBS，并在4℃孵育30分钟。然后将它们在PBS中洗涤两次，并加入抗小鼠Ig-PE(eBioscience,目录号2-4010-8)，在4℃孵育30分钟，用PBS洗涤两次，重悬浮于300μl PBS中，并用流式细胞术进行检查。共获得300个阳性克隆。
选择50个具有强结合亲和力的克隆用于活化测定。如下进行活化测定：用胰蛋白酶消化293T-CD27-NF-κB细胞，2-3分钟后，加入DMEM完全培养基。将细胞轻轻悬浮并转移至96孔板，100μl/孔。将50个选定克隆的上清液与抗小鼠交联抗体(Jackson ImmunoResearchLaboratories:115-006-008)混合并添加到96孔板中。向对照组中加入完全培养基。30小时后裂解细胞，然后用荧光素酶测定系统(Promega:E1501)进行测试。选择9种抗体，进行亚克隆，并对获得的克隆进行测序。这九种抗体是2E7、2B8、4H3、3E7、1A8、4G1、2G3、2F11和3B8。
测序后，所述9种选择的抗体的氨基酸序列测定如下：克隆2E7的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:23中所示的，克隆2E7的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:21中所示的。克隆2B8的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:13中所示的，并且克隆2B8的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:11中所示的。克隆4H3的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:63中所示的，并且克隆4H3的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:61中所示的。克隆3E7的VL的氨基酸序列是如SEQ IDNO:33中所示的，并且克隆3E7的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:31中所示的。克隆1A8的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:3中所示的，并且克隆1A8的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:1中所示的。克隆4G1的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:53中所示的，并且克隆4G1的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:51中所示的。克隆2G3的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:73中所示的，并且克隆2G3的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:71中所示的。克隆2F11的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:83中所示的，并且克隆2F11的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:81中所示的。克隆3B8的VL的氨基酸序列是如SEQ ID NO:43中所示的，并且克隆3B8的VH的氨基酸序列是如SEQ ID NO:41中所示的。
实施例3抗CD27嵌合抗体的制备
人IgG1恒定区的氨基酸序列是根据人免疫球蛋白γ1的氨基酸序列(hIgG1，Uniprot中的登录号为P01857)获得的。使用在线工具DNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计相应的编码核酸序列。将编码实施例2中所选抗体的VH的核酸序列分别与人IgG1恒定区序列融合。然后将获得的融合序列亚克隆到载体pcDNA4/myc-HisA中，以获得每种抗体的重链表达质粒。
人κ轻链恒定区(Igκ)的氨基酸序列是根据人免疫球蛋白κ的氨基酸序列(Uniprot中的登录号为P01934)获得的。使用在线工具DNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计相应的编码核酸序列。将编码实施例2中所选抗体的VL的核酸序列分别与人Igκ恒定区序列融合。然后将获得的融合序列亚克隆到载体pcDNA4/myc-HisA中，以获得每种抗体的轻链表达质粒。
使用由AidLab提供的质粒提取试剂盒(PL14)提取如上所述获得的重链和轻链质粒。然后将重链和轻链质粒共转染入HEK293细胞以进行抗体表达。简言之，用Freestyle293培养基稀释表达质粒，并加入聚PEI(乙烯亚胺)溶液。将质粒/PEI混合物加入细胞悬液中，在37℃、10％CO2下以90rpm孵育，加入50μg/L IGF-1。4小时后，加入EX293培养基、2mM谷氨酰胺和50μg/L IGF-1，并在135rpm下进行孵育。24小时后，加入3.8m MVPA。在培养5至6天后，收获瞬时表达培养上清液，并通过蛋白A亲和色谱纯化，获得抗CD27嵌合抗体，其分别命名为m2E7、m2B8、m4H3、m3E7、m1A8、m4G1、m2G3、m2F11和m3B8。
实施例4抗CD27嵌合抗体的表征
4.1与细胞表面CD27的结合(FACS)
将实施例1中制备的5x 105CD27-EGFP细胞在PBS中洗涤两次，向细胞中加入10μg/ml实施例3中制备的每种嵌合抗体(m2E7、m2B8、m4H3、m3E7、m1A8、m4G1、m2G3、m2F11和m3B8)，并在4℃孵育30分钟。然后将其在PBS中洗涤两次，加入抗人Ig-APC(JacksonImmunoResearch Laboratories，目录号109-135-098)，在4℃孵育30分钟，用PBS洗涤两次，并重新悬浮在300μl PBS中。然后用流式细胞术检测，结果如图1所示。在图1中，NC代表阴性对照(PBS)，a-hlg-APC仅代表第二抗体，另外的图分别代表针对每个相应克隆获得的结果。
从图1的结果可以看出，从实施例3获得的所有嵌合抗体都可与细胞表面CD27结合。
4.2与hCD27的结合特异性(FACS)
将如实施例1中所述的hCD137-EGFP、hOX40-EGFP和hGITR-EGFP细胞在PBS中洗涤两次，将10μg/ml实施例3中制备的每种嵌合抗体(m2E7、m2B8、m4H3、m3E7、m1A8、m4G1、m2G3、m2F11和m3B8)加入每种类型的细胞中，并在4℃孵育30分钟。然后用PBS洗涤两次，加入抗人Ig-APC(Jackson ImmunoResearch Laboratories,目录号109-135-098)，在4℃孵育30分钟，用PBS洗涤两次，并重悬浮于300μl PBS中。然后，进行流式细胞术，结果如图2所示。在图2中，NC代表阴性对照(PBS)，a-hlg-APC仅代表第二抗体，另外的图分别代表针对每个相应克隆获得的结果。
从图2的结果可以看出，在实施例3中制备的嵌合抗体中没有一种能与hCD137、hOX40或hGITR显著结合，证明了抗体对hCD27的结合特异性。
4.3激活测定
用胰蛋白酶消化293T-CD27-NF-κB细胞，2-3分钟后，加入DMEM完全培养基。将细胞轻轻悬浮并转移至96孔板，100μl/孔。将来自50个选定克隆的上清液与抗小鼠交联抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories:109-006-008)混合，并加入到96孔板中。向对照组中加入完全培养基。30小时后裂解细胞，然后用荧光素酶测定系统(Promega:E1501)进行测试。
结果如图3A-3B所示。图3B中所示的抗体1F5已被包括作为基准对照。可以看出，实施例3中制备的所有嵌合抗体都能激活下游信号传导，并且具有比基准抗体1F5更高的激活能力。
4.4T细胞增殖的刺激
用人淋巴细胞的分离液(Tianjin Gengyang)通过密度梯度离心从健康供体的外周血浓缩物中分离外周血单个核细胞(PBMCs)，用EasySep Negative Human CD4试剂盒(干细胞:19052)分离外周血单个核细胞以获得CD4+T细胞。用PBS洗涤细胞两次，并计数细胞数。然后按照Biolegend说明，用CFSE(Biolegend，目录号：422701)标记细胞，用PBS洗涤两次，计数，并加入到96孔板中，每孔1.5x 105个细胞。用3μg/ml抗CD3抗体和实施例3中制备的嵌合抗体预包被96孔板，在4℃孵育过夜。将阴性对照仅与抗CD3抗体一起孵育，将阳性对照与可溶性抗CD28抗体一起孵育。第二天用PBS洗涤细胞3次。将CD4+T细胞加入96孔板后，将96孔板置于CO2培养箱中并孵育5天。然后，收集细胞，用流式细胞术检查细胞增殖。结果如图4A和图4B所示，抗体1F5是基准对照。从图4A-4B可以看出，克隆m2F11在促进T细胞增殖方面具有最强的活性，甚至比基准抗体1F5更强。
实施例5抗CD27抗体的人源化
基于在上述实施例中获得的结果，选择克隆m2F11作为用于人源化的实施。通过改变重链可变区和轻链可变区的框架区中的某些氨基酸残基来对抗体进行人源化。总共获得12种人源化重链可变区和1种人源化轻链可变区，产生12种人源化抗体。12种人源化抗体的氨基酸序列如下表1所示。
Figure BDA0002715552270000371
表1
5.1人源化抗体的表达和纯化
合成了编码人源化VH和VL的核酸分子。如实施例3中针对嵌合抗体所描述的，将编码VH的核酸与编码人IgG1重链恒定区的核酸融合以获得编码抗体重链的序列，并将编码VL的核酸与编码人κ轻链恒定区的核酸融合以获得编码抗体轻链的序列。然后将获得的核酸分子分别克隆到载体pcDNA4/myc-HisA中，获得12种重链表达质粒和一种轻链表达质粒。将每种重链表达质粒与轻链表达质粒配对，并将它们瞬时转染到HEK293细胞(ATCC，CRL-1573TM)中以用于蛋白质生产。简言之，用Freestyle 293培养基稀释表达质粒，并加入聚PEI(乙烯亚胺)溶液。将质粒/PEI混合物加入到细胞悬浮液中，并在37℃、10％CO2下以90rpm进行孵育。培养5-6天后，收获瞬时表达培养上清液，并通过蛋白A亲和色谱进行纯化，获得12种人源化抗体：d16647、d12996、d9419、d9424、d14822、d12674、16647、12996、9419、9424、14822和12674，将它们用于以下实施例。通过SDS-PAGE验证获得的人源化抗体(图13A-13F)，目标条带清晰可见。人源化抗体的产率如表2所示。
图13A-13F显示人源化抗体d16647、16647、d9419、9419、9424、d12996、14822、12674、d12674、12996、d14822被成功表达和纯化。在图13A中，泳道1加载了16647(原始样品)；泳道2加载了16647(流通物)；泳道3加载了16647(洗脱物)；泳道4加载了标记(26630)；泳道5加载了d16647(洗脱物)；泳道6加载了d16647(原始样品)；泳道7加载了d16647(流通物)；泳道8加载了1μg Std；泳道9是空白；泳道10道是空的；泳道11加载了16647(洗脱物，非还原型)；泳道12加载了d16647(洗脱物，非还原型)。
在图13B中，泳道1加载了d9419(原始样品)；泳道2加载了d9419(流通物)；泳道3加载了d9419(洗脱物)；泳道4加载了标记(26619)；泳道5加载了1μg Std；泳道6是空白；泳道7是空的，泳道8加载了d9419(洗脱物，非还原型)。
在图13C中，泳道1加载了9419(原始样品)；通道2加载有9419(流通物)；泳道3加载了9419(洗脱物)；泳道4加载了标记(26630)；泳道5加载了9424(洗脱物)；泳道6加载有9424(原始样品)；泳道7加载了9424(流通物)；泳道8加载了1μg Std；泳道9是空白；泳道10是空的；泳道11加载了9419(洗脱物，非还原型)；泳道12加载了94924(洗脱物，非还原型)。
在图13D中，泳道1加载了d12996(原始样品)；泳道2加载了d12996(流通物)；泳道3加载了d12996(洗脱物)；泳道4加载了标记(26619)；泳道5加载了14822(洗脱物)；泳道6加载有14822(原始样品)；泳道7加载有14822(流通物)；泳道8加载了1μg Std；泳道9是空白；泳道10是空的；泳道11加载了d12996(洗脱物，非还原型)；泳道12加载了14822(洗脱物，非还原型)。
在图13E中，泳道1加载了12674(原始样品)；泳道2加载有12674(流通物)；泳道3加载了12674(洗脱物)；泳道4加载了标记(26630)；泳道5加载了d12674(洗脱物)；泳道6加载了d12674(原始样品)；泳道7加载了d12674(流通物)；泳道8加载了1μg Std；泳道9是空白；泳道10是空的；泳道11加载了12674(洗脱物，非还原型)；泳道12加载了d12674(洗脱物，非还原型)。
在图13F中，泳道1加载了12996(原始样品)；泳道2加载了12996(流通物)；泳道3加载了12996(洗脱物)；泳道4加载了标记(26619)；泳道5加载了d14822(洗脱物)；泳道6加载了d14822(原始样品)；泳道7加载了d14822(流通物)；泳道8加载了1μg Std；泳道9是空白；泳道10是空的；泳道11加载了12996(洗脱物，非还原型)；泳道12加载了d14822(洗脱物，非还原型)。
抗体 产率(μg/ml)
m2F11 91.2
d16647 43
d12996 7.28
d9419 22.32
d9424 5
d14822 114.6
d12674 132.6
16647 13.2
12996 32
9419 16
9424 29.2
14822 44
12674 79.92
表2
5.2人源化抗体与人CD27的结合(ELISA)
用2μg/ml hCD27-muFc(100μl/孔)包被ELISA板，并在4℃孵育过夜。然后用10mM,pH 7.4PBS/Tween(0.05％)将其洗涤一次，用含5％脱脂奶粉的PBST封闭，并在37℃孵育2小时。洗涤平板4次后，加入人源化抗体并在37℃孵育40分钟，然后将其洗涤4次。加入缀合有抗人IgG-HRP的第二抗体(Sigma,目录号A0170-1M)，并在37℃孵育40分钟。清洗后，用TMB底物对平板进行显影，并在OD450下进行分光光度分析。结果如图5A-5B和表3所示。在图5A-5B中，每条曲线代表针对所述人源化抗体之一获得的结合结果。从结果可以看出，所有这些人源化抗体都能与人CD27结合。
Figure BDA0002715552270000391
Figure BDA0002715552270000401
表3
5.3与细胞表面CD27的结合(FACS)
基于ELISA的上述结果，选择7种人源化抗体来检查它们与细胞表面CD27的亲和力。简言之，将实施例1中制备的5x 105个CD27-EGFP细胞在PBS中洗涤两次，加入每种人源化抗体(d16647、d12996、d9419、14822、9424、d14822、d12674)。将抗体从20μg/ml开始进行3倍系列稀释，以对每种抗体获得8种梯度稀释物。将抗体和细胞在4℃孵育30分钟。然后，用PBS将其洗涤两次，加入抗人Ig-APC(Jackson ImmunoResearch Laboratories,目录号109-135-098)，在4℃孵育30分钟，用PBS洗涤两次，并重悬浮于300μl PBS中。然后进行流式细胞术，结果如图6所示。将m2F11用作对照。
从图6的结果可以看出，所有这些人源化抗体都可以与细胞表面CD27结合。
5.4与人CD27蛋白的结合动力学
使用BLI法，将每种人源化抗体以10μg/ml的浓度固定在蛋白A生物传感器上，同时将hCD27-muFc从100nM开始，进行2倍系列稀释，以对每种抗体获得5种梯度稀释物。将反应板置于Octet K2仪上。将参数设置为基线(Baseline)70s、缔合(Baseline)80s、解离(Disscociation)300s、基线(Baseline)260s、加载(Loading)40s和自定义(Custom)5s。结果如表4所示。
Figure BDA0002715552270000402
Figure BDA0002715552270000411
表4
5.5与猴细胞表面CD27的结合(FACS)
将实施例1中制备的5x105个RhCD27-EGFP细胞用PBS洗涤两次，加入10μg/ml实施例5中制备的人源化抗体(d9419、d16647、d14822、d12674)，并在4℃孵育30分钟。然后用PBS洗涤两次，加入抗人Ig-APC(Jackson ImmunoResearch Laboratories,目录号109-135-098)，在4℃孵育30分钟，用PBS洗涤两次，并重悬浮于300μl PBS中。然后进行流式细胞术，结果如图7所示。将m2F11用作对照。
从图7的结果可以看出，这些人源化抗体可与猴细胞表面的RhCD27结合。
5.6激活测定
用胰蛋白酶消化293T-CD27-NF-κB细胞，2-3分钟后，加入DMEM完全培养基。将细胞轻轻悬浮并转移至96孔板，100μl/孔。将实施例5中制备的人源化抗体从10μg/ml开始，进行10倍稀释，并将稀释的抗体与抗人交联抗体(Jackson Immuno Research Laboratories:109-006-008)混合并添加到96孔板中。向对照组中加入完全培养基。30小时后裂解细胞，然后用荧光素酶测定系统(Promega:E1501)进行测试。结果如图8所示，图8中的每条曲线代表针对一种人源化抗体获得的结果，将m2F11用作对照。
从图8的结果可以看出，人源化抗体仍然可以激活下游信号传导。
5.7刺激T细胞增殖
用人淋巴细胞的分离液(Tianjin Gengyang)通过密度梯度离心从健康供体的外周血浓缩物中分离外周血单个核细胞(PBMCs)，用EasySep Negative Human CD4试剂盒(干细胞:19052)分离外周血单个核细胞以获得CD4+T细胞。用PBS洗涤细胞两次，并计数细胞数。然后按照Biolegend说明，用CFSE(Biolegend，目录号：422701)标记细胞，用PBS洗涤两次，计数，并加入到96孔板中，每孔1.5x 105个细胞。用3μg/ml抗CD3抗体和实施例3中制备的嵌合抗体预包被96孔板，在4℃孵育过夜。将阴性对照仅与抗CD3抗体一起孵育，将阳性对照与可溶性抗CD28抗体一起孵育。第二天用PBS洗涤细胞3次。将CD4+T细胞加入96孔板后，将96孔板置于CO2培养箱中并孵育5天。然后，收集细胞，用流式细胞术检查细胞增殖。另外，收集上清液，并使用CBA检测试剂盒(BD，目录号：551809)检查上清液中IFN-γ的分泌。
结果如图9A和图9B所示。图9A显示抗CD27人源化抗体能刺激T细胞增殖，甚至比抗体m2F11更显著。图9B显示抗CD27人源化抗体可刺激T细胞分泌IFN-γ。
实施例6抗体稳定性
6.1通过差示扫描量热法(DSC)测试抗体稳定性
用DSC测试人源化抗体的热稳定性。将仅用缓冲液获得的和用包含蛋白质的缓冲液获得的DSC获取的结果作为对照。将每种人源化抗体稀释至1mg/ml(PBS缓冲液)。使用了以下参数:10-110℃，每小时100℃，每次扫描前15分钟的平衡时间。样品体积为0.5ml。对照仅用缓冲液收集的扫描数据以及用包含蛋白质的缓冲液收集的扫描数据校准结果。然后，获得了人源化抗体的Tm值，如表5所示。
抗体 T<sub>m</sub>(℃)
m2F11 65.7
d16647 67
d12996 59.5
d9419 66.5
d14822 67.5
d12674 68
16647 65.5
12996 64.5
9419 64.2
9424 66.8
14822 66.2
12674 66.7
表5
6.2加速稳定试验
对人源化抗体进行45℃加速稳定试验。简言之，将一步蛋白A纯化的抗体溶解在PBS(pH7.4)中，并将抗体浓缩至约10mg/ml。将100μg抗体加入200μl PCR反应管中，在45℃孵育。在第0天、第10天、第20天和第30天采集样品，以用于A280下的检测以及SEC-HPLC分析。结果分别如图10和图11所示。图10显示了抗体浓度随时间的变化，图11显示了抗体二聚体的百分比随时间的变化。从这些结果可以看出，抗体浓度没有随时间显著变化，抗体二聚体的百分比也没有随时间显著变化。另外，未观察到三聚体或聚集体的形成。
虽然本文已经显示和描述了本申请的优选实施方案，但对于本领域技术人员来说，这些实施方案显然仅作为实例提供。这并不意味着本申请受说明书中提供的具体实施例的限制。虽然已经参考前述说明书描述了本申请，但本文中的实施方案的描述和说明并不意味着在限制的意义上进行解释。在不脱离本申请的情况下，本领域技术人员将会进行许多变化、改变和替换。此外，应当理解的是，本申请的所有方面不限于本文阐述的具体描述、配置或相对比例，其取决于各种条件和变量。应当理解，在实践本申请时，可采用本文所述的本申请的实施方案的各种替代方案。因此，设想了本申请还将涵盖任何此类替代方案、修改、变化或等同物。以下权利要求旨在限定本申请的范围，并且由此涵盖这些权利要求及其等同物的范围内的方法和结构。
序列表
<110> 苏州丁孚靶点生物技术有限公司
<120> 抗CD27抗体及其用途
<130> 0027-PA-020CN
<160> 152
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 VH
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Asp Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Arg Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ser Tyr Tyr Asp Thr Ser Tyr Thr Ser Met Asp Phe Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Asn Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 VH 核苷酸
<400> 2
gaggtgcagc tgcaggagtc tggggctgaa ttggtaaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta cagtttcacc agctcctgga tgcactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggaatg attcatcctg atagtggttt tactaactac 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcgcctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggacctct 300
tactacgata ctagctacac ttctatggac ttctggggtc aaggaaactc agtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8VL
<400> 3
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 4
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8VL 核苷酸
<400> 4
gatattgtgc tgacccagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatac attggtatca gcaaagaaca 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtaatagct ggccactcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 HCDR1
<400> 5
Ser Ser Trp Met His
1 5
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 HCDR2
<400> 6
Met Ile His Pro Asp Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 7
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 HCDR3
<400> 7
Thr Ser Tyr Tyr Asp Thr Ser Tyr Thr Ser Met Asp Phe
1 5 10
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 LCDR1
<400> 8
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 LCDR2
<400> 9
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1A8 LCDR3
<400> 10
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 VH
<400> 11
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Tyr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Glu Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
85 90 95
Phe Cys Val Arg Glu Leu Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 VH 核苷酸
<400> 12
gaggtgcagc tgcaggagtc tggtggagga ttggtgcagc ctaaagggtc attgaaactc 60
tcatgtgcag cctctggatt caacttcaat acctacacca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccaggaaagg gtttggaatg ggttgctcgc ataagatata aaagtaataa ttatgcaaca 180
tattatgccg attcagtgaa agacagattc accatctcca gagatgattc agaaagcatc 240
ctctatctgc aaatgaacaa cttgagaact gacgacacag ccatttattt ctgtgtgagg 300
gaactgggac tgtggtactt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8VL
<400> 13
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Arg Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 14
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8VL 核苷酸
<400> 14
gacattgtga tgacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 60
ataaattgca gggcaagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtatcg agagaaacct 120
gggaaaacta ataatcttct tatctactct ggatccactt tgcaatctgg aattccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct 240
gaagattttg caatgtatta ctgtcaacag cataatgaat acccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 HCDR1
<400> 15
Thr Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 16
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 HCDR2
<400> 16
Arg Ile Arg Tyr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 HCDR3
<400> 17
Glu Leu Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 LCDR1
<400> 18
Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 LCDR2
<400> 19
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2B8 LCDR3
<400> 20
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 21
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 VH
<400> 21
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ser Gly Val Pro Thr Tyr Val Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Ser Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 VH 核苷酸
<400> 22
gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca acctatggaa tgagctgggt gaaacaggct 120
ccaggaaagg gtttacagtg gatgggctgg ataaacacca actctggagt gccaacctat 180
gttgaggact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaat cctctgccaa cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctatat acttctgtac aagagagggg 300
gatgctctgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca 348
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7VL
<400> 23
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Thr Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asn Thr Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 24
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7VL 核苷酸
<400> 24
gatattgtga tgacacaatc tacagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca gaagatggat ttatgacaca tccagactgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtaataccc cacccttcac gttcggtgct 300
gggaccaagt tggagctgaa a 321
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 HCDR1
<400> 25
Thr Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 HCDR2
<400> 26
Trp Ile Asn Thr Asn Ser Gly Val Pro Thr Tyr Val Glu Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 HCDR3
<400> 27
Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 LCDR1
<400> 28
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 LCDR2
<400> 29
Asp Thr Ser Arg Leu Ala Ser
1 5
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2E7 LCDR3
<400> 30
Gln Gln Trp Ser Asn Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 31
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 VH
<400> 31
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu His Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Ala Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Ile Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 VH 核苷酸
<400> 32
cagatccagc tggtgcagag cggaccagaa ctgaagaagc caggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctggata tacgttcaca acctatggaa tgagctgggt gaaacaggct 120
ccaggaaagg gtttgcactg gatgggctgg ataaacaccc actctggagc gccaacatat 180
gttgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt 240
ttgcagatca acaacctcat aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagagagggg 300
gatgctctgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca 348
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7VL
<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr Ala Ile Met Ser Ala Phe Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 34
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7VL 核苷酸
<400> 34
gacattgtga tgacccaaac tacagcaatc atgtctgcat ttccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcaacat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattattg ccagcagtgg agtcgtaacc cacccttcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 HCDR1
<400> 35
Thr Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 HCDR2
<400> 36
Trp Ile Asn Thr His Ser Gly Ala Pro Thr Tyr Val Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 HCDR3
<400> 37
Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 LCDR1
<400> 38
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 LCDR2
<400> 39
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3E7 LCDR3
<400> 40
Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 41
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 VH
<400> 41
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ile Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Glu Gly Asp Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 42
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 VH 核苷酸
<400> 42
caggtccagc tgcaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acatgcactg tctcagggtt ctcattaacc aactatgctg taagctgggt tcgccagcct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggtg acgggaccac aaattatcat 180
tcagctctca tatccagact gattatcagc aaggataact ccaagagcca agttttctta 240
aaactgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccacgtact actgtgccaa agagggcgac 300
tatggtgact acgtaggctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
gca 363
<210> 43
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8VL
<400> 43
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Phe Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 44
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8VL 核苷酸
<400> 44
gatatcgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagagccacc 60
atctcctgca gagccagtga aagtgttgaa tattatggca caagtttaat gcagtggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cgtagaatct 180
ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240
cctgtggagg aggatgattt tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaggaa gattccttac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 333
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 HCDR1
<400> 45
Asn Tyr Ala Val Ser
1 5
<210> 46
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 HCDR2
<400> 46
Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile Ser
1 5 10
<210> 47
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 HCDR3
<400> 47
Glu Gly Asp Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 LCDR1
<400> 48
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln
1 5 10 15
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 LCDR2
<400> 49
Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3B8 LCDR3
<400> 50
Gln Gln Ser Arg Lys Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 51
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 VH
<400> 51
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Lys Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Asn Tyr Ala Thr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Ser Tyr Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 VH 核苷酸
<400> 52
caggtccagc tgcagcagtc cggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcatgcaagg cttctggtta ctcattcact gcctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aagggaaaga gccttgagtg gattggacta attaatccta actatgccac gactagttac 180
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtggacc aatcttccag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc ctactatagt 300
tactatagtt acgggggggg atatgctatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1VL
<400> 53
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 54
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1VL 核苷酸
<400> 54
gatatcttgc tgacccaatc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttttcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatac actggtatca gcaaagaaca 120
aatgggtctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttattctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaggatattg ctgattatta ctgtcagcaa agtaatagct ggccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaggc tggaaatcaa a 321
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 HCDR1
<400> 55
Ala Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 HCDR2
<400> 56
Leu Ile Asn Pro Asn Tyr Ala Thr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 57
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 HCDR3
<400> 57
Tyr Ser Tyr Tyr Ser Tyr Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 58
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 LCDR1
<400> 58
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 LCDR2
<400> 59
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4G1 LCDR3
<400> 60
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Trp Thr
1 5
<210> 61
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 VH
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Asn Ile Asn Trp Val Lys Gln Thr Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asn Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Ala Met Asp Ser Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 VH 核苷酸
<400> 62
caggtgcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gcctacaaca ttaactgggt gaagcagacc 120
aatggaaaga gccttgagtg gattggaata attaatccta actatggtac tactagttac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagacc aatcttccag tacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagacggaat 300
ggtgactacg tgggatatgc tatggactcc tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3VL
<400> 63
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Met His Trp Tyr Gln Gln Arg Lys Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Phe Lys
100 105
<210> 64
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3VL 核苷酸
<400> 64
gatatcgttc tcacccagtc tccagccatc ctctctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatgc actggtatca gcaaagaaaa 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaggatattg cagattatta ctgtcaacaa actaataact ggccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaattcaa a 321
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 HCDR1
<400> 65
Ala Tyr Asn Ile Asn
1 5
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 HCDR2
<400> 66
Ile Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 HCDR3
<400> 67
Arg Asn Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Ala Met Asp Ser
1 5 10
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 LCDR1
<400> 68
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Met His
1 5 10
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 LCDR2
<400> 69
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4H3 LCDR3
<400> 70
Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Trp Thr
1 5
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 VH
<400> 71
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asn Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser His Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asn Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 VH 核苷酸
<400> 72
gaggtgaagc tgcaggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttgcca tgtcttggat tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcggcc attagtgatg gtggtactta cacctactat 180
ccaaacaatg taaagggccg attcaccatc tccagagacg atgccaagaa taacctgtac 240
ctgcaaatga gtcatctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagaaatagg 300
gggggaccct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 73
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3VL
<400> 73
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 74
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3VL 核苷酸
<400> 74
gatatcgtgc tcactcagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg aatagtaacc cacccacgtt cggtgctggg 300
accaagctgg agctgaaa 318
<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 HCDR1
<400> 75
Ser Phe Ala Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 HCDR2
<400> 76
Ala Ile Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asn Asn Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 HCDR3
<400> 77
Asn Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 LCDR1
<400> 78
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 LCDR2
<400> 79
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2G3 LCDR3
<400> 80
Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 81
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 VH
<400> 81
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser His Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 VH 核苷酸
<400> 82
gaggtgcagc tgcaggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcaatc attggtgatg gtgatactta cacctactat 180
ccagacagtg taaagggccg attcaccgtc tccagagaca atgccaagaa caacctctac 240
ctgcaaatga gccatctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagaactagg 300
gggggaccct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 83
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11VL
<400> 83
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 84
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11VL 核苷酸
<400> 84
gatatcgtgc tcacccaaac tccagcactc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaggt tccatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccaacagtgg agtagtatcc cacccacgtt cggtgctggg 300
accacgctgg agctgaaa 318
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 HCDR1
<400> 85
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 86
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 HCDR2
<400> 86
Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 HCDR3
<400> 87
Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 LCDR1
<400> 88
Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Met His
1 5 10
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 LCDR2
<400> 89
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2F11 LCDR3
<400> 90
Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Pro Thr
1 5
<210> 91
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 16647VL
<400> 91
Glu Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 92
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 16647VL 核苷酸
<400> 92
gagatcctgc tgacccagag ccctgccttt atgagcgcca cccccggcga gaaggtgacc 60
atcacctgca gcgccagcag cagcgtgggc agcatgcact ggtatcaaca gaagagcggc 120
cagagcccca ggaggctgat ctacgacacc agcaagctgg ccagcggcgt gcctgacagg 180
ttctctggta gcggcagcgg caccgactac accctgacca tcagcagcct ggaggccgaa 240
gacgccgcca cctactactg ccagcagtgg agcagcatcc ctcccacctt cggcgctgga 300
accaccctgg agctgaag 318
<210> 93
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9419VH
<400> 93
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 94
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9419VH 核苷酸
<400> 94
gaggtgcacc tgcaggagtc tggtggagcc ctggtgaagc ccggaggaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctgagaagg gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgctaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga gcaacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccagggc accaccctga cagtgagcag c 351
<210> 95
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d9419VH
<400> 95
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Lys Pro Glu Lys Asn Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 96
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d9419VH 核苷酸
<400> 96
gaggtgcatc tgcaggagag cggcggagcc ctggtgaaac ctggcggaag cctgagactg 60
agctgcgccg cctccggctt caccttcagc tcctacgcca tgagctgggt gaggcagaag 120
cccgagaaga acctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga gcgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgactattg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 97
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9424VH
<400> 97
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 98
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9424VH 核苷酸
<400> 98
gaggtgcacc tgcaggagtc tggtggaggc ctggtgaagc ccggaggaag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gagacagacc 120
cctgagaagg gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgctaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccagggc accaccctga cagtgagcag c 351
<210> 99
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d9424VH
<400> 99
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Asn Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 100
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d9424 核苷酸
<400> 100
gaggtgcatc tgcaggagag cggcggaggc ctggtgaaac ctggcggaag cctgagactg 60
agctgcgccg cctccggctt caccttcagc tcctacgcca tgagctgggt gaggcagacg 120
cccgagaaga acctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgactattg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 101
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 12674VH
<400> 101
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 102
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 12674VH 核苷酸
<400> 102
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgctg ccagcggctt caccttctcc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcg 120
cccggcaaag gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccaggga accaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 103
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d12674VH
<400> 103
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d12674 核苷酸
<400> 104
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggcgga ctggtgaaac ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcc 120
cccggtaagg gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagggaca actccaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgattactg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 105
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 12996VH
<400> 105
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 106
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 12996VH 核苷酸
<400> 106
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgctg ccagcggctt caccttctcc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggcg 120
cccgagaaag gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccaggga accaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 107
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d12996VH
<400> 107
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Glu Pro Glu Lys Asn Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 108
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d12996VH 核苷酸
<400> 108
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggcgga ctggtgaaac ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcaggaa 120
cccgagaaga acctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagggaca actccaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgattactg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 109
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 14822VH
<400> 109
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 110
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 14822VH 核苷酸
<400> 110
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgctg ccagcggctt caccttctcc agctacgcca tgagctgggt gaggcagatg 120
cccggcaaag gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa cacgctgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccaggga accaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 111
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d14882VH
<400> 111
Glu Val His Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 112
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d14882VH 核苷酸
<400> 112
gaggtgcacc tgcaagagag cggaggcgga ctggtgaaac ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcagacc 120
cccgataagg gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagggaca actccaagaa cacgctgtac 240
ctgcagatga acgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgattactg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 113
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 16647VH
<400> 113
Gln Val Glu Leu Arg Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 114
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 16647VH 核苷酸
<400> 114
caggtggagc tgagagagag cggaggaggc ctggtgaaac ctggcggcag cctgaggctg 60
agctgtgctg ccagcggctt caccttctcc agctacgcca tgagctgggt gaggcagatg 120
cccggcaaag gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccaga 300
ggcggccctt tcgactactg gggccaggga accaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 115
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d16647VH
<400> 115
Gln Val Glu Leu Arg Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 116
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> d16647VH 核苷酸
<400> 116
caggtggagc tgagggagag cggaggcgga ctggtgaaac ctggcggcag cctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgcca tgagctgggt gaggcagacc 120
cccgataagg gcctggagtg ggtggccatc atcggcgacg gcgacaccta cacctactac 180
cccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagggaca actccaagaa caggctgtac 240
ctgcagatga acgacctgaa gagcgaggac accgccatgt actactgcgt gaggaccagg 300
ggcggccctt tcgattactg gggccagggc acaaccctga ccgtgagcag c 351
<210> 117
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2E7轻链
<400> 117
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Thr Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Arg Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asn Thr Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 118
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2E7 重链
<400> 118
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ser Gly Val Pro Thr Tyr Val Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Ser Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 119
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2B8 轻链
<400> 119
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Arg Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 120
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2B8 重链
<400> 120
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Tyr Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Glu Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr
85 90 95
Phe Cys Val Arg Glu Leu Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 121
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4H3 轻链
<400> 121
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Met His Trp Tyr Gln Gln Arg Lys Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Phe Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 122
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4H3 重链
<400> 122
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Asn Ile Asn Trp Val Lys Gln Thr Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asn Gly Asp Tyr Val Gly Tyr Ala Met Asp Ser Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 123
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3E7 轻链
<400> 123
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr Ala Ile Met Ser Ala Phe Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
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65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 124
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3E7 重链
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Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
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Gly Met Ser Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu His Trp Met
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50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Ile Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
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Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 125
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m1A8 轻链
<400> 125
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 126
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m1A8 重链
<400> 126
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
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Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Asp Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Arg Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Ser Tyr Tyr Asp Thr Ser Tyr Thr Ser Met Asp Phe Trp
100 105 110
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115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 127
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4G1 轻链
<400> 127
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 128
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4G1 重链
<400> 128
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Lys Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Ser Tyr Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 129
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2G3 轻链
<400> 129
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
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Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
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Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
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100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 130
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2G3 重链
<400> 130
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asn Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 131
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2F11 轻链
<400> 131
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Ser Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 132
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2F11 重链
<400> 132
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Gly Asp Gly Asp Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser His Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Thr Arg Gly Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 133
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3B8 轻链
<400> 133
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Phe Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 134
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3B8 重链
<400> 134
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ile Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Glu Gly Asp Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 135
<211> 652
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2E7轻链(核苷酸)
<400> 135
gatattgtga tgacacaatc tacagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca gaagatggat ttatgacaca tccagactgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtaataccc cacccttcac gttcggtgct 300
gggaccaagt tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggtaccgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttttat 420
ccacgggagg ctaaggtgca gtggaaagtg gacaatgccc tccagagcgg aaatagccaa 480
gagtccgtta ccgaacagga ctctaaagac tctacatact ccctgtcctc cacactgacc 540
ctctccaagg ccgactatga gaaacacaag gtttacgcat gcgaggtcac acaccaggga 600
ctctcctctc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggagaat gctaatgaat tc 652
<210> 136
<211> 1348
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2E7 重链(核苷酸)
<400> 136
gaggtgcagc tgcaggagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca acctatggaa tgagctgggt gaaacaggct 120
ccaggaaagg gtttacagtg gatgggctgg ataaacacca actctggagt gccaacctat 180
gttgaggact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaat cctctgccaa cactgcctat 240
ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctatat acttctgtac aagagagggg 300
gatgctctgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctcagc cagcactaag 360
gggccctctg tgtttccact cgccccttct agcaaaagca cttccggagg cactgcagca 420
ctcgggtgtc tggtcaaaga ttatttccct gagccagtca ccgtgagctg gaactctggc 480
gccctcacct ccggggttca cacctttcca gccgtcctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgagcagcg tcgttaccgt gccatcctct tctctgggga cccagacata catctgcaat 600
gtcaaccata agcctagcaa caccaaggtg gacaaaaagg tcgagccaaa gagctgcgat 660
aagacacaca cctgccctcc atgccccgca cctgaactcc tgggcgggcc ttccgttttc 720
ctgtttcctc ccaagcccaa ggatacactg atgattagcc gcacccccga agtcacttgc 780
gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatcca gaagttaagt ttaactggta tgtggacggg 840
gtcgaggtgc acaatgctaa aacaaagccc agggaggagc aatataactc cacatacaga 900
gtggtgtccg ttctgacagt cctgcaccag gactggctga acgggaagga atacaagtgc 960
aaggtgtcta ataaggcact gccagccccc atagagaaga caatctctaa agctaaaggc 1020
caaccacgcg agcctcaggt ctacacactg ccaccatcca gggacgaact gaccaagaat 1080
caggtgagcc tgacttgtct cgtcaaagga ttctacccaa gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gaatccaacg gccaaccaga gaacaactac aagaccaccc caccagtcct ggactctgat 1200
gggagctttt tcctgtattc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca acagggcaac 1260
gtgttcagct gctccgtgat gcatgaagcc ctgcataacc actataccca gaaaagcctc 1320
agcctgtccc ccgggaaata atgaattc 1348
<210> 137
<211> 652
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2B8 轻链(核苷酸)
<400> 137
gacattgtga tgacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 60
ataaattgca gggcaagtaa gagcattagc aaatatttag cctggtatcg agagaaacct 120
gggaaaacta ataatcttct tatctactct ggatccactt tgcaatctgg aattccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagtag cctggagcct 240
gaagattttg caatgtatta ctgtcaacag cataatgaat acccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggtaccgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttttat 420
ccacgggagg ctaaggtgca gtggaaagtg gacaatgccc tccagagcgg aaatagccaa 480
gagtccgtta ccgaacagga ctctaaagac tctacatact ccctgtcctc cacactgacc 540
ctctccaagg ccgactatga gaaacacaag gtttacgcat gcgaggtcac acaccaggga 600
ctctcctctc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggagaat gctaatgaat tc 652
<210> 138
<211> 1360
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2B8 重链(核苷酸)
<400> 138
gaggtgcagc tgcaggagtc tggtggagga ttggtgcagc ctaaagggtc attgaaactc 60
tcatgtgcag cctctggatt caacttcaat acctacacca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccaggaaagg gtttggaatg ggttgctcgc ataagatata aaagtaataa ttatgcaaca 180
tattatgccg attcagtgaa agacagattc accatctcca gagatgattc agaaagcatc 240
ctctatctgc aaatgaacaa cttgagaact gacgacacag ccatttattt ctgtgtgagg 300
gaactgggac tgtggtactt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
gccagcacta aggggccctc tgtgtttcca ctcgcccctt ctagcaaaag cacttccgga 420
ggcactgcag cactcgggtg tctggtcaaa gattatttcc ctgagccagt caccgtgagc 480
tggaactctg gcgccctcac ctccggggtt cacacctttc cagccgtcct gcagtcctcc 540
ggcctgtact ccctgagcag cgtcgttacc gtgccatcct cttctctggg gacccagaca 600
tacatctgca atgtcaacca taagcctagc aacaccaagg tggacaaaaa ggtcgagcca 660
aagagctgcg ataagacaca cacctgccct ccatgccccg cacctgaact cctgggcggg 720
ccttccgttt tcctgtttcc tcccaagccc aaggatacac tgatgattag ccgcaccccc 780
gaagtcactt gcgtggtggt ggatgtgagc catgaagatc cagaagttaa gtttaactgg 840
tatgtggacg gggtcgaggt gcacaatgct aaaacaaagc ccagggagga gcaatataac 900
tccacataca gagtggtgtc cgttctgaca gtcctgcacc aggactggct gaacgggaag 960
gaatacaagt gcaaggtgtc taataaggca ctgccagccc ccatagagaa gacaatctct 1020
aaagctaaag gccaaccacg cgagcctcag gtctacacac tgccaccatc cagggacgaa 1080
ctgaccaaga atcaggtgag cctgacttgt ctcgtcaaag gattctaccc aagcgacatc 1140
gccgtggagt gggaatccaa cggccaacca gagaacaact acaagaccac cccaccagtc 1200
ctggactctg atgggagctt tttcctgtat tccaagctga cagtggacaa gtctcggtgg 1260
caacagggca acgtgttcag ctgctccgtg atgcatgaag ccctgcataa ccactatacc 1320
cagaaaagcc tcagcctgtc ccccgggaaa taatgaattc 1360
<210> 139
<211> 652
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4H3 轻链(核苷酸)
<400> 139
gatatcgttc tcacccagtc tccagccatc ctctctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatgc actggtatca gcaaagaaaa 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaggatattg cagattatta ctgtcaacaa actaataact ggccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaattcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggtaccgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttttat 420
ccacgggagg ctaaggtgca gtggaaagtg gacaatgccc tccagagcgg aaatagccaa 480
gagtccgtta ccgaacagga ctctaaagac tctacatact ccctgtcctc cacactgacc 540
ctctccaagg ccgactatga gaaacacaag gtttacgcat gcgaggtcac acaccaggga 600
ctctcctctc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggagaat gctaatgaat tc 652
<210> 140
<211> 1363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4H3 重链(核苷酸)
<400> 140
caggtgcagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gcctacaaca ttaactgggt gaagcagacc 120
aatggaaaga gccttgagtg gattggaata attaatccta actatggtac tactagttac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagacc aatcttccag tacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagacggaat 300
ggtgactacg tgggatatgc tatggactcc tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tcagccagca ctaaggggcc ctctgtgttt ccactcgccc cttctagcaa aagcacttcc 420
ggaggcactg cagcactcgg gtgtctggtc aaagattatt tccctgagcc agtcaccgtg 480
agctggaact ctggcgccct cacctccggg gttcacacct ttccagccgt cctgcagtcc 540
tccggcctgt actccctgag cagcgtcgtt accgtgccat cctcttctct ggggacccag 600
acatacatct gcaatgtcaa ccataagcct agcaacacca aggtggacaa aaaggtcgag 660
ccaaagagct gcgataagac acacacctgc cctccatgcc ccgcacctga actcctgggc 720
gggccttccg ttttcctgtt tcctcccaag cccaaggata cactgatgat tagccgcacc 780
cccgaagtca cttgcgtggt ggtggatgtg agccatgaag atccagaagt taagtttaac 840
tggtatgtgg acggggtcga ggtgcacaat gctaaaacaa agcccaggga ggagcaatat 900
aactccacat acagagtggt gtccgttctg acagtcctgc accaggactg gctgaacggg 960
aaggaataca agtgcaaggt gtctaataag gcactgccag cccccataga gaagacaatc 1020
tctaaagcta aaggccaacc acgcgagcct caggtctaca cactgccacc atccagggac 1080
gaactgacca agaatcaggt gagcctgact tgtctcgtca aaggattcta cccaagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggaatc caacggccaa ccagagaaca actacaagac caccccacca 1200
gtcctggact ctgatgggag ctttttcctg tattccaagc tgacagtgga caagtctcgg 1260
tggcaacagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcatg aagccctgca taaccactat 1320
acccagaaaa gcctcagcct gtcccccggg aaataatgaa ttc 1363
<210> 141
<211> 652
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3E7 轻链(核苷酸)
<400> 141
gacattgtga tgacccaaac tacagcaatc atgtctgcat ttccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcaacat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattattg ccagcagtgg agtcgtaacc cacccttcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggtaccgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttttat 420
ccacgggagg ctaaggtgca gtggaaagtg gacaatgccc tccagagcgg aaatagccaa 480
gagtccgtta ccgaacagga ctctaaagac tctacatact ccctgtcctc cacactgacc 540
ctctccaagg ccgactatga gaaacacaag gtttacgcat gcgaggtcac acaccaggga 600
ctctcctctc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggagaat gctaatgaat tc 652
<210> 142
<211> 1348
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3E7 重链(核苷酸)
<400> 142
cagatccagc tggtgcagag cggaccagaa ctgaagaagc caggagagac agtcaagatc 60
tcctgcaagg cttctggata tacgttcaca acctatggaa tgagctgggt gaaacaggct 120
ccaggaaagg gtttgcactg gatgggctgg ataaacaccc actctggagc gccaacatat 180
gttgatgact tcaagggacg gtttgccttc tctttggaaa cctctgccag cactgccttt 240
ttgcagatca acaacctcat aaatgaggac acggctacat atttctgtgc aagagagggg 300
gatgctctgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctcagc cagcactaag 360
gggccctctg tgtttccact cgccccttct agcaaaagca cttccggagg cactgcagca 420
ctcgggtgtc tggtcaaaga ttatttccct gagccagtca ccgtgagctg gaactctggc 480
gccctcacct ccggggttca cacctttcca gccgtcctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgagcagcg tcgttaccgt gccatcctct tctctgggga cccagacata catctgcaat 600
gtcaaccata agcctagcaa caccaaggtg gacaaaaagg tcgagccaaa gagctgcgat 660
aagacacaca cctgccctcc atgccccgca cctgaactcc tgggcgggcc ttccgttttc 720
ctgtttcctc ccaagcccaa ggatacactg atgattagcc gcacccccga agtcacttgc 780
gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatcca gaagttaagt ttaactggta tgtggacggg 840
gtcgaggtgc acaatgctaa aacaaagccc agggaggagc aatataactc cacatacaga 900
gtggtgtccg ttctgacagt cctgcaccag gactggctga acgggaagga atacaagtgc 960
aaggtgtcta ataaggcact gccagccccc atagagaaga caatctctaa agctaaaggc 1020
caaccacgcg agcctcaggt ctacacactg ccaccatcca gggacgaact gaccaagaat 1080
caggtgagcc tgacttgtct cgtcaaagga ttctacccaa gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gaatccaacg gccaaccaga gaacaactac aagaccaccc caccagtcct ggactctgat 1200
gggagctttt tcctgtattc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca acagggcaac 1260
gtgttcagct gctccgtgat gcatgaagcc ctgcataacc actataccca gaaaagcctc 1320
agcctgtccc ccgggaaata atgaattc 1348
<210> 143
<211> 652
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m1A8 轻链(核苷酸)
<400> 143
gatattgtgc tgacccagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatac attggtatca gcaaagaaca 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtaatagct ggccactcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggtaccgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttttat 420
ccacgggagg ctaaggtgca gtggaaagtg gacaatgccc tccagagcgg aaatagccaa 480
gagtccgtta ccgaacagga ctctaaagac tctacatact ccctgtcctc cacactgacc 540
ctctccaagg ccgactatga gaaacacaag gtttacgcat gcgaggtcac acaccaggga 600
ctctcctctc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggagaat gctaatgaat tc 652
<210> 144
<211> 1366
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m1A8 重链(核苷酸)
<400> 144
gaggtgcagc tgcaggagtc tggggctgaa ttggtaaagc ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta cagtttcacc agctcctgga tgcactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggaatg attcatcctg atagtggttt tactaactac 180
aatgagaagt tcaagagcaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcgcctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggacctct 300
tactacgata ctagctacac ttctatggac ttctggggtc aaggaaactc agtcaccgtc 360
tcctcagcca gcactaaggg gccctctgtg tttccactcg ccccttctag caaaagcact 420
tccggaggca ctgcagcact cgggtgtctg gtcaaagatt atttccctga gccagtcacc 480
gtgagctgga actctggcgc cctcacctcc ggggttcaca cctttccagc cgtcctgcag 540
tcctccggcc tgtactccct gagcagcgtc gttaccgtgc catcctcttc tctggggacc 600
cagacataca tctgcaatgt caaccataag cctagcaaca ccaaggtgga caaaaaggtc 660
gagccaaaga gctgcgataa gacacacacc tgccctccat gccccgcacc tgaactcctg 720
ggcgggcctt ccgttttcct gtttcctccc aagcccaagg atacactgat gattagccgc 780
acccccgaag tcacttgcgt ggtggtggat gtgagccatg aagatccaga agttaagttt 840
aactggtatg tggacggggt cgaggtgcac aatgctaaaa caaagcccag ggaggagcaa 900
tataactcca catacagagt ggtgtccgtt ctgacagtcc tgcaccagga ctggctgaac 960
gggaaggaat acaagtgcaa ggtgtctaat aaggcactgc cagcccccat agagaagaca 1020
atctctaaag ctaaaggcca accacgcgag cctcaggtct acacactgcc accatccagg 1080
gacgaactga ccaagaatca ggtgagcctg acttgtctcg tcaaaggatt ctacccaagc 1140
gacatcgccg tggagtggga atccaacggc caaccagaga acaactacaa gaccacccca 1200
ccagtcctgg actctgatgg gagctttttc ctgtattcca agctgacagt ggacaagtct 1260
cggtggcaac agggcaacgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaagccct gcataaccac 1320
tatacccaga aaagcctcag cctgtccccc gggaaataat gaattc 1366
<210> 145
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4G1 轻链(核苷酸)
<400> 145
gatatcttgc tgacccaatc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttttcctgca gggccagtca gagcattggc acaagcatac actggtatca gcaaagaaca 120
aatgggtctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttattctta gcatcaacag tgtggagtct 240
gaggatattg ctgattatta ctgtcagcaa agtaatagct ggccgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaggc tggaaatcaa a 321
<210> 146
<211> 1369
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m4G1 重链(核苷酸)
<400> 146
caggtccagc tgcagcagtc cggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60
tcatgcaagg cttctggtta ctcattcact gcctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120
aagggaaaga gccttgagtg gattggacta attaatccta actatgccac gactagttac 180
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgtggacc aatcttccag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc ctactatagt 300
tactatagtt acgggggggg atatgctatg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 360
gtctcctcag ccagcactaa ggggccctct gtgtttccac tcgccccttc tagcaaaagc 420
acttccggag gcactgcagc actcgggtgt ctggtcaaag attatttccc tgagccagtc 480
accgtgagct ggaactctgg cgccctcacc tccggggttc acacctttcc agccgtcctg 540
cagtcctccg gcctgtactc cctgagcagc gtcgttaccg tgccatcctc ttctctgggg 600
acccagacat acatctgcaa tgtcaaccat aagcctagca acaccaaggt ggacaaaaag 660
gtcgagccaa agagctgcga taagacacac acctgccctc catgccccgc acctgaactc 720
ctgggcgggc cttccgtttt cctgtttcct cccaagccca aggatacact gatgattagc 780
cgcacccccg aagtcacttg cgtggtggtg gatgtgagcc atgaagatcc agaagttaag 840
tttaactggt atgtggacgg ggtcgaggtg cacaatgcta aaacaaagcc cagggaggag 900
caatataact ccacatacag agtggtgtcc gttctgacag tcctgcacca ggactggctg 960
aacgggaagg aatacaagtg caaggtgtct aataaggcac tgccagcccc catagagaag 1020
acaatctcta aagctaaagg ccaaccacgc gagcctcagg tctacacact gccaccatcc 1080
agggacgaac tgaccaagaa tcaggtgagc ctgacttgtc tcgtcaaagg attctaccca 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggaatccaac ggccaaccag agaacaacta caagaccacc 1200
ccaccagtcc tggactctga tgggagcttt ttcctgtatt ccaagctgac agtggacaag 1260
tctcggtggc aacagggcaa cgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaagc cctgcataac 1320
cactataccc agaaaagcct cagcctgtcc cccgggaaat aatgaattc 1369
<210> 147
<211> 649
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2G3 轻链(核苷酸)
<400> 147
gatatcgtgc tcactcagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg aatagtaacc cacccacgtt cggtgctggg 300
accaagctgg agctgaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg taccgctagc gttgtgtgcc tgctgaataa cttttatcca 420
cgggaggcta aggtgcagtg gaaagtggac aatgccctcc agagcggaaa tagccaagag 480
tccgttaccg aacaggactc taaagactct acatactccc tgtcctccac actgaccctc 540
tccaaggccg actatgagaa acacaaggtt tacgcatgcg aggtcacaca ccagggactc 600
tcctctcccg tgaccaagag cttcaaccgg ggagaatgct aatgaattc 649
<210> 148
<211> 1351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2G3 重链(核苷酸)
<400> 148
gaggtgaagc tgcaggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttgcca tgtcttggat tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcggcc attagtgatg gtggtactta cacctactat 180
ccaaacaatg taaagggccg attcaccatc tccagagacg atgccaagaa taacctgtac 240
ctgcaaatga gtcatctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagaaatagg 300
gggggaccct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccagcact 360
aaggggccct ctgtgtttcc actcgcccct tctagcaaaa gcacttccgg aggcactgca 420
gcactcgggt gtctggtcaa agattatttc cctgagccag tcaccgtgag ctggaactct 480
ggcgccctca cctccggggt tcacaccttt ccagccgtcc tgcagtcctc cggcctgtac 540
tccctgagca gcgtcgttac cgtgccatcc tcttctctgg ggacccagac atacatctgc 600
aatgtcaacc ataagcctag caacaccaag gtggacaaaa aggtcgagcc aaagagctgc 660
gataagacac acacctgccc tccatgcccc gcacctgaac tcctgggcgg gccttccgtt 720
ttcctgtttc ctcccaagcc caaggataca ctgatgatta gccgcacccc cgaagtcact 780
tgcgtggtgg tggatgtgag ccatgaagat ccagaagtta agtttaactg gtatgtggac 840
ggggtcgagg tgcacaatgc taaaacaaag cccagggagg agcaatataa ctccacatac 900
agagtggtgt ccgttctgac agtcctgcac caggactggc tgaacgggaa ggaatacaag 960
tgcaaggtgt ctaataaggc actgccagcc cccatagaga agacaatctc taaagctaaa 1020
ggccaaccac gcgagcctca ggtctacaca ctgccaccat ccagggacga actgaccaag 1080
aatcaggtga gcctgacttg tctcgtcaaa ggattctacc caagcgacat cgccgtggag 1140
tgggaatcca acggccaacc agagaacaac tacaagacca ccccaccagt cctggactct 1200
gatgggagct ttttcctgta ttccaagctg acagtggaca agtctcggtg gcaacagggc 1260
aacgtgttca gctgctccgt gatgcatgaa gccctgcata accactatac ccagaaaagc 1320
ctcagcctgt cccccgggaa ataatgaatt c 1351
<210> 149
<211> 649
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2F11 轻链(核苷酸)
<400> 149
gatatcgtgc tcacccaaac tccagcactc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaggt tccatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccaacagtgg agtagtatcc cacccacgtt cggtgctggg 300
accacgctgg agctgaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg taccgctagc gttgtgtgcc tgctgaataa cttttatcca 420
cgggaggcta aggtgcagtg gaaagtggac aatgccctcc agagcggaaa tagccaagag 480
tccgttaccg aacaggactc taaagactct acatactccc tgtcctccac actgaccctc 540
tccaaggccg actatgagaa acacaaggtt tacgcatgcg aggtcacaca ccagggactc 600
tcctctcccg tgaccaagag cttcaaccgg ggagaatgct aatgaattc 649
<210> 150
<211> 1351
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m2F11 重链(核苷酸)
<400> 150
gaggtgcagc tgcaggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcaatc attggtgatg gtgatactta cacctactat 180
ccagacagtg taaagggccg attcaccgtc tccagagaca atgccaagaa caacctctac 240
ctgcaaatga gccatctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagaactagg 300
gggggaccct ttgactactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc agccagcact 360
aaggggccct ctgtgtttcc actcgcccct tctagcaaaa gcacttccgg aggcactgca 420
gcactcgggt gtctggtcaa agattatttc cctgagccag tcaccgtgag ctggaactct 480
ggcgccctca cctccggggt tcacaccttt ccagccgtcc tgcagtcctc cggcctgtac 540
tccctgagca gcgtcgttac cgtgccatcc tcttctctgg ggacccagac atacatctgc 600
aatgtcaacc ataagcctag caacaccaag gtggacaaaa aggtcgagcc aaagagctgc 660
gataagacac acacctgccc tccatgcccc gcacctgaac tcctgggcgg gccttccgtt 720
ttcctgtttc ctcccaagcc caaggataca ctgatgatta gccgcacccc cgaagtcact 780
tgcgtggtgg tggatgtgag ccatgaagat ccagaagtta agtttaactg gtatgtggac 840
ggggtcgagg tgcacaatgc taaaacaaag cccagggagg agcaatataa ctccacatac 900
agagtggtgt ccgttctgac agtcctgcac caggactggc tgaacgggaa ggaatacaag 960
tgcaaggtgt ctaataaggc actgccagcc cccatagaga agacaatctc taaagctaaa 1020
ggccaaccac gcgagcctca ggtctacaca ctgccaccat ccagggacga actgaccaag 1080
aatcaggtga gcctgacttg tctcgtcaaa ggattctacc caagcgacat cgccgtggag 1140
tgggaatcca acggccaacc agagaacaac tacaagacca ccccaccagt cctggactct 1200
gatgggagct ttttcctgta ttccaagctg acagtggaca agtctcggtg gcaacagggc 1260
aacgtgttca gctgctccgt gatgcatgaa gccctgcata accactatac ccagaaaagc 1320
ctcagcctgt cccccgggaa ataatgaatt c 1351
<210> 151
<211> 664
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3B8 轻链(核苷酸)
<400> 151
gatatcgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagagccacc 60
atctcctgca gagccagtga aagtgttgaa tattatggca caagtttaat gcagtggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cgtagaatct 180
ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240
cctgtggagg aggatgattt tgcaatgtat ttctgtcagc aaagtaggaa gattccttac 300
acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggtaccg ctagcgttgt gtgcctgctg 420
aataactttt atccacggga ggctaaggtg cagtggaaag tggacaatgc cctccagagc 480
ggaaatagcc aagagtccgt taccgaacag gactctaaag actctacata ctccctgtcc 540
tccacactga ccctctccaa ggccgactat gagaaacaca aggtttacgc atgcgaggtc 600
acacaccagg gactctcctc tcccgtgacc aagagcttca accggggaga atgctaatga 660
attc 664
<210> 152
<211> 1363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> m3B8 重链(核苷酸)
<400> 152
caggtccagc tgcaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60
acatgcactg tctcagggtt ctcattaacc aactatgctg taagctgggt tcgccagcct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggtg acgggaccac aaattatcat 180
tcagctctca tatccagact gattatcagc aaggataact ccaagagcca agttttctta 240
aaactgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccacgtact actgtgccaa agagggcgac 300
tatggtgact acgtaggctg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 360
gcagccagca ctaaggggcc ctctgtgttt ccactcgccc cttctagcaa aagcacttcc 420
ggaggcactg cagcactcgg gtgtctggtc aaagattatt tccctgagcc agtcaccgtg 480
agctggaact ctggcgccct cacctccggg gttcacacct ttccagccgt cctgcagtcc 540
tccggcctgt actccctgag cagcgtcgtt accgtgccat cctcttctct ggggacccag 600
acatacatct gcaatgtcaa ccataagcct agcaacacca aggtggacaa aaaggtcgag 660
ccaaagagct gcgataagac acacacctgc cctccatgcc ccgcacctga actcctgggc 720
gggccttccg ttttcctgtt tcctcccaag cccaaggata cactgatgat tagccgcacc 780
cccgaagtca cttgcgtggt ggtggatgtg agccatgaag atccagaagt taagtttaac 840
tggtatgtgg acggggtcga ggtgcacaat gctaaaacaa agcccaggga ggagcaatat 900
aactccacat acagagtggt gtccgttctg acagtcctgc accaggactg gctgaacggg 960
aaggaataca agtgcaaggt gtctaataag gcactgccag cccccataga gaagacaatc 1020
tctaaagcta aaggccaacc acgcgagcct caggtctaca cactgccacc atccagggac 1080
gaactgacca agaatcaggt gagcctgact tgtctcgtca aaggattcta cccaagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggaatc caacggccaa ccagagaaca actacaagac caccccacca 1200
gtcctggact ctgatgggag ctttttcctg tattccaagc tgacagtgga caagtctcgg 1260
tggcaacagg gcaacgtgtt cagctgctcc gtgatgcatg aagccctgca taaccactat 1320
acccagaaaa gcctcagcct gtcccccggg aaataatgaa ttc 1363

Claims (17)

1.一种抗体、其抗原结合片段或其变体，其与CD27结合，其中所述抗体包含轻链或其片段，所述轻链或其片段包含轻链CDR1，并且所述轻链CDR1为SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列；其中所述轻链或其片段包含轻链CDR2，并且所述轻链CDR2为SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列；其中所述轻链或其片段包含轻链CDR3，并且所述轻链CDR3为SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列；且，其中所述抗体包含重链或其片段，所述重链或其片段包含重链CDR1，并且所述重链CDR1为SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列；其中所述重链或其片段包含重链CDR2，并且所述重链CDR2为SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列；其中所述重链或其片段包含重链CDR3，并且所述重链CDR3为SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述抗体选自以下组：单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、完全人抗体和双特异性抗体。
3.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述抗原结合片段选自以下组：Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、Fv片段和ScFv。
4.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述轻链或其片段包含轻链可变区，并且所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:83和91的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述轻链或其片段包含SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述重链或其片段包含重链可变区，并且所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:81、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113和115的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述重链或其片段包含SEQ ID NO:132所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其中所述CD27选自以下组：人CD27、小鼠CD27和猴子CD27。
9.根据权利要求1所述的抗体、其抗原结合片段或其变体，其包含：
1)如SEQ ID NO:83中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:81中所示的氨基酸序列的重链可变区；
2)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:115中所示的氨基酸序列的重链可变区；
3)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列的重链可变区；
4)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:95中所示的氨基酸序列的重链可变区；
5)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列的重链可变区；
6)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列的重链可变区；
7)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列的重链可变区；
8)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:113中所示的氨基酸序列的重链可变区；
9)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列的重链可变区；
10)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:93中所示的氨基酸序列的重链可变区；
11)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:97中所示的氨基酸序列的重链可变区；
12)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列的重链可变区；或
13)如SEQ ID NO:91中所示的氨基酸序列的轻链可变区，和如SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列的重链可变区。
10.一种融合蛋白，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体。
11.一种或多种分离的核酸分子，其编码根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体，或根据权利要求10的融合蛋白。
12.一种或多种载体，其包含根据权利要求11的一种或多种分离的核酸分子。
13.一种细胞，其包含根据权利要求11的一种或多种分离的核酸分子或根据权利要求12的一种或多种载体。
14.一种用于产生根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体或根据权利要求10的融合蛋白的方法，其包括在使得根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体或根据权利要求10的融合蛋白能够表达的条件下培养根据权利要求13的细胞。
15.一种组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体、根据权利要求10的融合蛋白、根据权利要求11的一种或多种分离的核酸分子、根据权利要求12的一种或多种载体和/或根据权利要求13的细胞，以及任选的药学上可接受的赋形剂。
16.根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体、根据权利要求10的融合蛋白、根据权利要求11的一种或多种分离的核酸分子、根据权利要求12的一种或多种载体和/或根据权利要求13的细胞在制备预防和/或治疗癌症的药物中的用途。
17.根据权利要求1-9中任一项的抗体、其抗原结合片段或其变体、或根据权利要求10的融合蛋白在制备确定样品中CD27的存在和/或量的试剂中的用途。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116262790A (zh) * 2021-12-15 2023-06-16 泰泽惠康生物医药有限责任公司 嵌合的抗cd27抗体组合物及其应用
CN116262788A (zh) * 2021-12-15 2023-06-16 泰泽惠康生物医药有限责任公司 抗cd27抗体分子
CN116262789A (zh) * 2021-12-15 2023-06-16 泰泽惠康生物医药有限责任公司 嵌合的抗cd27抗体

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102007147A (zh) * 2008-06-30 2011-04-06 协和发酵麒麟株式会社 抗cd27抗体
CN102918059A (zh) * 2009-12-29 2013-02-06 协和发酵麒麟株式会社 抗cd27抗体
CN103154034A (zh) * 2010-04-13 2013-06-12 塞尔德克斯医疗公司 结合人cd27的抗体及其用途
WO2013138586A1 (en) * 2012-03-15 2013-09-19 Janssen Biotech, Inc. Human anti-cd27 antibodies, methods and uses

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5700637A (en) 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
GB8822228D0 (en) 1988-09-21 1988-10-26 Southern E M Support-bound oligonucleotides
US20090041783A1 (en) * 2005-04-28 2009-02-12 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-platelet membrane glycoprotein vi monoclonal antibody
GB0620894D0 (en) * 2006-10-20 2006-11-29 Univ Southampton Human immune therapies using a CD27 agonist alone or in combination with other immune modulators
JP6023706B2 (ja) 2010-07-09 2016-11-09 アデュロ・バイオテック・ホールディングス・ヨーロッパ・ベスローテン・フエンノートシャップＡｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ， Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ．Ｖ． Ｃｄ２７に対するアゴニスト抗体
US9427464B2 (en) * 2011-11-22 2016-08-30 Chiome Bioscience Inc. Anti-human TROP-2 antibody having an antitumor activity in vivo
WO2013126810A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Stem Centrx, Inc. Anti sez6 antibodies and methods of use
EP3268037B1 (en) * 2015-03-09 2022-08-31 Celldex Therapeutics, Inc. Cd27 agonists
JOP20190055A1 (ar) * 2016-09-26 2019-03-24 Merck Sharp & Dohme أجسام مضادة ضد cd27

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102007147A (zh) * 2008-06-30 2011-04-06 协和发酵麒麟株式会社 抗cd27抗体
CN102918059A (zh) * 2009-12-29 2013-02-06 协和发酵麒麟株式会社 抗cd27抗体
CN103154034A (zh) * 2010-04-13 2013-06-12 塞尔德克斯医疗公司 结合人cd27的抗体及其用途
WO2013138586A1 (en) * 2012-03-15 2013-09-19 Janssen Biotech, Inc. Human anti-cd27 antibodies, methods and uses
CN104284678A (zh) * 2012-03-15 2015-01-14 詹森生物科技公司 人抗cd27抗体、方法和用途

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