CN111979172A - 一种让细胞保持较长时间活性的输注液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种让细胞保持较长时间活性的输注液及其制备方法，输注液包括下列原料组分，各组分的质量配比为：DMSO4—8、乙二醇5—7、血清蛋白1—4、黄原胶1—2、海藻糖2—5、甘露醇4—8、精氨酸6—8、卡那霉素0.2—0.5、青霉素0.1—0.3和制霉菌素0.06—0.1；制备方法包括：优质选料、一次水浴振荡、加压通氧、二次水浴振荡、混合搅拌、抑制除菌、抽样检测。本发明能够使细胞在2℃—37℃环境下维持活性72h，相比与现有的细胞培养液相比，细胞所能维持活性的温度范围更广，且保持活性的时间更长；根据细胞在人体内保持活性所必须的条件，在体外进行模仿培养，与现有技术相比提高了体外细胞培养的存活率，实用性更强，能广泛应用于生物细胞领域。
Description
技术领域
本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种让细胞保持较长时间活性的输注液及其制备方法。
背景技术
在细胞培养时，细胞的活性是至关重要的，由于细胞脱离了生物个体，因此供养其稳定生存分裂的外界条件是十分苛刻的，细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。
现有的细胞培养过程，培养基中细胞代谢所需要的养分较多，因此需要经常对培养基进行养分检测，但是常常由于操作人员的疏忽，导致细胞失活。因此设计一种同体积下能够在细胞培养时使细胞维持更长时间活性的输注液是符合实际需要的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种让细胞保持较长时间活性的输注液及其制备方法，解决了现有技术中细胞在培养基中代谢所需养分大，需要经常向培养基中添加养分的问题。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种让细胞保持较长时间活性的输注液，其特征在于，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：DMSO4—8、乙二醇5—7、血清蛋白1—4、黄原胶1—2、海藻糖2—5、甘露醇4—8、精氨酸6—8、卡那霉素0.2—0.5、青霉素0.1—0.3和制霉菌素0.06—0.1。
所述输注液的原料组分中至少包含卡那霉素、青霉素和制霉菌素中的一种。
所述输注液的各原料组分质量浓度为：DMSO1.3％—2％、乙二醇1％—2.5％、血清蛋白13％—15％、黄原胶6％—10％、海藻糖19％—25％、甘露醇2％—4％、精氨酸3％—6％、卡那霉素8％—10％、青霉素5％—8％、制霉菌素3％—5％。
一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取原料；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，水浴条件下振荡，振荡结束后静置；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在水浴条件下振荡，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素、青霉素和制霉菌素，缓慢搅拌，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
所述S2中控制水浴温度为35℃—45℃，振荡时间为8—15min，振荡后静置时间为10—20min。
所述S3中控制氧气流速为0.8—1.5L/min。
所述S4中控制水浴温度为30℃—40℃，振荡时间为15—18min，二氧化碳流速为1—1.2L/min。
所述S5中控制搅拌转速为200—300rpm，搅拌时间为15—30min。
所述S6中控制搅拌时间为5—15min。
本发明的有益效果：
1、本发明能够使细胞在2℃—37℃环境下维持活性72h，相比与现有的细胞培养液相比，细胞所能维持活性的温度范围更广，且保持活性的时间更长；
2、本发明根据细胞在人体内保持活性所必须的条件，在体外进行模仿培养，与现有技术相比提高了体外细胞培养的存活率，实用性更强，能广泛应用于生物细胞领域。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例的整体制备流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“开孔”、“上”、“下”、“厚度”、“顶”、“中”、“长度”、“内”、“四周”等指示方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
实施例1
一种让细胞保持较长时间活性的输注液，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：二甲基亚砜(DMSO)5、乙二醇6、血清蛋白2、黄原胶1、海藻糖3、甘露醇7、精氨酸8、卡那霉素0.2、青霉素0.1和制霉菌素0.06。
一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取5千克质量浓度为1.5％的DMSO、6千克质量浓度为1％的乙二醇、2千克质量浓度为15％的血清蛋白、1千克质量浓度为8％的黄原胶、3千克质量浓度为25％的海藻糖、7千克质量浓度为2％的甘露醇、8千克质量浓度为5％的精氨酸、0.2千克质量浓度为10％的卡那霉素、0.1千克质量浓度为6％的青霉素和0.06千克质量浓度为3％的制霉菌素；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，并在40℃下水浴条件下振荡10min，振荡结束后静置10min；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气，控制其流速为1L/min；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在30℃下水浴条件下振荡15min，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳，控制其流速为1L/min；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌，控制其搅拌转速为200rpm，搅拌20min；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素、青霉素和制霉菌素，缓慢搅拌5min，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取5ml输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
实施例2
一种让细胞保持较长时间活性的输注液，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：二甲基亚砜(DMSO)4、乙二醇7、血清蛋白3、黄原胶2、海藻糖5、甘露醇4、精氨酸6、卡那霉素0.3、青霉素0.2和制霉菌素0.1。
一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取4千克质量浓度为1.3％的DMSO、7千克质量浓度为1.5％的乙二醇、3千克质量浓度为13％的血清蛋白、2千克质量浓度为10％的黄原胶、5千克质量浓度为22％的海藻糖、4千克质量浓度为3％的甘露醇、6千克质量浓度为6％的精氨酸、0.3千克质量浓度为8％的卡那霉素、0.2千克质量浓度为5％的青霉素和1千克质量浓度为5％的制霉菌素；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，并在35℃下水浴条件下振荡15min，振荡结束后静置15min；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气，控制其流速为0.8L/min；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在40℃下水浴条件下振荡18min，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳，控制其流速为1.2L/min；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌，控制其搅拌转速为250rpm，搅拌30min；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素、青霉素和制霉菌素，缓慢搅拌8min，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取5ml输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
实施例3
一种让细胞保持较长时间活性的输注液，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：二甲基亚砜(DMSO)8、乙二醇5、血清蛋白1、黄原胶2、海藻糖5、甘露醇6、精氨酸7、卡那霉素0.5和制霉菌素0.08。
一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取8千克质量浓度为2％的DMSO、5千克质量浓度为1.5％的乙二醇、1千克质量浓度为14％的血清蛋白、2千克质量浓度为6％的黄原胶、5千克质量浓度为20％的海藻糖、6千克质量浓度为3％的甘露醇、7千克质量浓度为3％的精氨酸、0.5千克质量浓度为9％的卡那霉素和0.08千克质量浓度为5％的制霉菌素；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，并在45℃下水浴条件下振荡8min，振荡结束后静置20min；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气，控制其流速为1.5L/min；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在40℃下水浴条件下振荡15min，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳，控制其流速为1L/min；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌，控制其搅拌转速为300rpm，搅拌15min；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素和制霉菌素，缓慢搅拌10min，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取5ml输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
实施例4
一种让细胞保持较长时间活性的输注液，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：二甲基亚砜(DMSO)7、乙二醇5、血清蛋白4、黄原胶2.5、海藻糖2、甘露醇8、精氨酸8和青霉素0.3。
一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取7千克质量浓度为2％的DMSO、5千克质量浓度为2.5％的乙二醇、4千克质量浓度为15％的血清蛋白、2.5千克质量浓度为10％的黄原胶、2千克质量浓度为19％的海藻糖、8千克质量浓度为4％的甘露醇、8千克质量浓度为4％的精氨酸和0.3千克质量浓度为8％的青霉素；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，并在40℃下水浴条件下振荡15min，振荡结束后静置15min；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气，控制其流速为1.2L/min；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在38℃下水浴条件下振荡18min，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳，控制其流速为1L/min；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌，控制其搅拌转速为200rpm，搅拌15min；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素、青霉素和制霉菌素，缓慢搅拌15min，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取5ml输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
上述实施例与现有技术的对比结果如下表所示。
综上所述，本发明所提出的输注液能够有效增强细胞的温度适应区间，增强细胞的成活率，同时增强细胞的活性维持时间。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
Claims (9)
1.一种让细胞保持较长时间活性的输注液，其特征在于，包括下列原料组分，各组分的质量配比为：DMSO4—8、乙二醇5—7、血清蛋白1—4、黄原胶1—2、海藻糖2—5、甘露醇4—8、精氨酸6—8、卡那霉素0.2—0.5、青霉素0.1—0.3和制霉菌素0.06—0.1。
2.根据权利要求1所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液，其特征在于，所述输注液的原料组分中至少包含卡那霉素、青霉素和制霉菌素中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液，其特征在于，所述输注液的各原料组分质量浓度为：DMSO1.3％—2％、乙二醇1％—2.5％、血清蛋白13％—15％、黄原胶6％—10％、海藻糖19％—25％、甘露醇2％—4％、精氨酸3％—6％、卡那霉素8％—10％、青霉素5％—8％、制霉菌素3％—5％。
4.根据权利要求1所述一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、优质选料
按质量配比称取原料；
S2、一次水浴振荡
将称取的DMSO与乙二醇混合，水浴条件下振荡，振荡结束后静置；
S3、加压通氧
待水浴振荡之后，用玻璃棒将称取的血清蛋白和黄原胶依次缓慢引流至DMSO和乙二醇的混合物的最上层，然后将无菌处理过的气管插入DMSO和乙二醇的混合物最下层，接着向其中通入氧气；
S4、二次水浴振荡
将称取的海藻糖、甘露醇和精氨酸混合，并在水浴条件下振荡，振荡结束后使用无菌处理过的气管插入其混合物的最下层，接着向其中通入二氧化碳；
S5、混合搅拌
将加压通氧后的DMSO、乙二醇、血清蛋白和黄原胶的混合物与海藻糖、甘露醇和精氨酸的混合物倒入搅拌机内，然后启动搅拌机对其进行搅拌；
S6、抑制除菌
待搅拌混合结束后向其混合物中倒入称取的卡那霉素、青霉素和制霉菌素，缓慢搅拌，使其与混合物充分混合，制备得到让细胞保持较长时间活性的输注液；
S7、抽样检测
选取输注液置于细胞培养基中，连续一周检测细胞活性以及成活率。
5.根据权利要求4所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，所述S2中控制水浴温度为35℃—45℃，振荡时间为8—15min，振荡后静置时间为10—20min。
6.根据权利要求4所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，所述S3中控制氧气流速为0.8—1.5L/min。
7.根据权利要求4所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，所述S4中控制水浴温度为30℃—40℃，振荡时间为15—18min，二氧化碳流速为1—1.2L/min。
8.根据权利要求4所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，所述S5中控制搅拌转速为200—300rpm，搅拌时间为15—30min。
9.根据权利要求4所述的一种让细胞保持较长时间活性的输注液的制备方法，其特征在于，所述S6中控制搅拌时间为5—15min。
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|---|---|---|---|---|
| EP4345158A4 (en) * | 2021-07-05 | 2024-08-21 | Advanced Institute of Reproductive Technologies | SOLUTION FOR CELLULAR MANIPULATION, METHOD FOR CELLULAR CRYOPRESERVATION, AND METHOD FOR CELLULAR THAWING |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1556715A (zh) * | 2001-09-05 | 2004-12-22 | 韩士生科有限公司 | 制备用于组织修复的生物材料的方法 |
| AU2008331434A1 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Proteobioactives Pty Ltd | Protection of progenitor cells and regulation of their differentiation |
| CN109744227A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-05-14 | 广州益养生物科技有限公司 | 一种细胞冻存液及其应用 |
| CN109790514A (zh) * | 2016-10-04 | 2019-05-21 | 全崴生技股份有限公司 | 维持细胞存活率的组合物和方法 |
| CN109907036A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-06-21 | 北京益华生物科技有限公司 | 细胞冻存液、细胞冻存液制备方法和细胞冻存方法 |
-
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1556715A (zh) * | 2001-09-05 | 2004-12-22 | 韩士生科有限公司 | 制备用于组织修复的生物材料的方法 |
| AU2008331434A1 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Proteobioactives Pty Ltd | Protection of progenitor cells and regulation of their differentiation |
| CN109790514A (zh) * | 2016-10-04 | 2019-05-21 | 全崴生技股份有限公司 | 维持细胞存活率的组合物和方法 |
| CN109843052A (zh) * | 2016-10-04 | 2019-06-04 | 全崴生技股份有限公司 | 用于细胞冷冻保存的组合物和方法 |
| CN109744227A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-05-14 | 广州益养生物科技有限公司 | 一种细胞冻存液及其应用 |
| CN109907036A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-06-21 | 北京益华生物科技有限公司 | 细胞冻存液、细胞冻存液制备方法和细胞冻存方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 宋志刚 等: "黄原胶在医药领域研究进展", 《济宁医学院学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4345158A4 (en) * | 2021-07-05 | 2024-08-21 | Advanced Institute of Reproductive Technologies | SOLUTION FOR CELLULAR MANIPULATION, METHOD FOR CELLULAR CRYOPRESERVATION, AND METHOD FOR CELLULAR THAWING |
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