CN111965274A - 一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，采用高效液相色谱‑质谱联用法检测，使用2％的氢氧化钠水溶液提取待测样品，并通过添加回收试验验证了该方法的有效性和准确性。二氯吡啶酸在油菜籽中的添加范围在0.05～4mg/kg时，回收率在98～104％之间，相对标准偏差(RSD)在0.7～2.8％之间。解决了油料作物中杂质干扰大的难题，本发明可以高效精准的检测出油菜籽基质中二氯吡啶酸的含量。

Description

一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法

技术领域

本发明涉及农药残留检测技术领域，尤其涉及一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法。

背景技术

二氯吡啶酸的化学名称为3,6-二氯吡啶-2-羧酸，是一种人工合成的植物生长激素，通过植物的根和叶进行吸收，然后在植物体内进行传导，低浓度的二氯吡啶酸可有效刺激植物的DNA、RNA和蛋白质的合成从而导致细胞分裂的失控和无序生长，最后导致管束被破坏，广泛用于防除油菜、玉米、草坪等田间一年生阔叶杂草和深根多年生阔叶杂草。

现有资料文献中报道二氯吡啶酸的检测方法有液相色谱法、气相色谱法和液相色谱-质谱联用法。对于油料作物，现有的液相色谱法和气相色谱法的定量限都比较高，不能够检测出残留量较少的样品，达不到痕量分析要求；现有的液相色谱-质谱联用法的适用性较差，前处理过程不能够有效的去除油料作物中的杂质，回收率不能达到要求，基于此需要开展研究发现一种检测油菜籽中二氯吡啶酸可靠的检测方法。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，本发明可以快速便捷且准确检测油菜籽基质中二氯吡啶酸的含量。

本发明提出的一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，采用高效液相色谱-质谱联用法检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.2mL/min，进行梯度洗脱，

所述梯度洗脱程序为：0-0.5min内，流动相A的比例为90％，流动相B的比例为10％；0.5-1.2min内，流动相A的比例从90％渐变为40％；1.2-2.0min内，流动相A的比例从40％渐变为10％；2.0-2.5min内，流动相A的比例维持10％；2.5-2.51min内，流动相A的比例从10％渐变为90％；2.51-5min内，流动相A的比例维持90％；

质谱条件为：离子源为大气压下电喷雾离子源，负离子模式，三重四级杆质量分析器，接口电压为3.5kv，DL管温度为250℃，加热块温度为400℃，雾化气流量为3L/min，干燥气流量为15L/min，碰撞气为氩气；监测模式为多反应监测模式。

优选地，二氯吡啶酸的多反应监测条件为：定性离子对的质荷比为190.00>146.00和192.00>147.95，定量离子对的质荷比为190.00>146.00；其中，离子对190.00>146.00对应的Q1pre偏差电压、碰撞电压CE和Q3pre偏差电压分别为21V、12、27V，离子对192.00>147.95对应的Q1pre偏差电压、碰撞电压CE和Q3pre偏差电压分别为21V、9、27V，驻留时间均为100msec。

上述离子对中的符号“>”是本领域技术人员表示离子对时的常用符号。

Q1pre偏差电压、碰撞电压CE和Q3pre偏差电压为日本岛津公司液相色谱-质谱联用仪特有的表示方式。

优选地，Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱的规格为2.0mmi.d×75mm。

优选地，柱温为40℃。

优选地，进样量为2μL。

优选地，具体检测步骤为：取二氯吡啶酸标准物质，用油菜籽空白基质提取液配制成不同浓度的系列标准工作溶液，进样并绘制标准曲线获得线性回归方程，再取待测油菜籽提取液进样，通过线性回归方程计算油菜籽中二氯吡啶酸的含量。

优选地，油菜籽空白基质是指不含二氯吡啶酸的油菜籽基质。

优选地，油菜籽空白基质提取液与待测油菜籽提取液的配制方法相同，均为：称取5.000g粉碎混匀的油菜籽空白基质或待测油菜籽，与15mL质量分数为2％的氢氧化钠水溶液涡旋5min，再用浓盐酸调节pH＝2～3，然后加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀，离心，移取2mL上清液，用氮气吹干，然后用1mL甲醇溶解吹干后剩余的残渣，离心，取上清液过0.22μm有机滤膜即可。

为了证明验证方法的有效性，为此做了二氯吡啶酸在油菜籽中添加回收试验，结果如下：

二氯吡啶酸在油菜籽中的添加浓度为0.05～4mg/kg时，回收率在98～104％之间，相对标准偏差(RSD)在0.7～2.8％之间，回收率和相对标准偏差符合NY/T788-2018要求；二氯吡啶酸在油菜籽中的最小检出量为40pg，二氯吡啶酸的定量限为0.05mg/kg，满足国内外最大残留限量要求(GB 2763-2019规定油菜籽中二氯吡啶酸最大残留限量值为0.05mg/kg)。

有益效果：

本发明使用LC-MS/MS(高效液相色谱-质谱联用)分析技术，通过保留时间和离子丰度比双重条件对待测物质进行定性；通过改变提取和净化方法，同时优化仪器检测条件，提高仪器灵敏度和分辨能力，解决了油菜籽基质中杂质干扰大的难题，突破定量限高的限制，能够满足痕量级别二氯吡啶酸残留量的检测。本发明可以高效精准的检测出油菜籽基质中二氯吡啶酸的含量。

附图说明

图1为实施例1标准工作溶液中二氯吡啶酸的标准曲线。

图2为实施例1中空白溶剂的提取离子流色谱图。

图3为实施例1中油菜籽空白基质提取液的提取离子流色谱图。

图4为实施例1中标准工作溶液中二氯吡啶酸的提取离子流色谱图。

图5为实施例1中待测油菜籽提取液的提取离子流色谱图。

图6为实施例2中样品A提取液的提取离子流色谱图。

图7为实施例2中样品B提取液的提取离子流色谱图。

图8为实施例2中样品C提取液的提取离子流色谱图。

图9为实施例2中样品D提取液的提取离子流色谱图。

图10为实施例2中样品E提取液的提取离子流色谱图。

图11为实施例2中样品F提取液的提取离子流色谱图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

主要仪器设备：

液相色谱-质谱联用仪(LCMS-8040)，日本岛津公司；

十万分之一电子天平(AUW-220D)，日本岛津公司；

涡旋混合器(XH-D)，上海汗诺仪器有限公司；

水浴恒温振荡器(GY2016-SW)，常州国宇仪器制造有限公司；

离心机(TDZ5-WS)，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司。

主要试剂：

二氯吡啶酸标准物质(纯度98.1％)；甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；乙酸乙酯(色谱纯)；氢氧化钠(分析纯)；盐酸(分析纯)；纯水(一级水)。

实施例1

一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，采用日本岛津公司，液相色谱串联质谱仪LCMS-8050检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱(2.0mmi.d×75mm)，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.2mL/min，柱温为40℃，进样量为2μL，进行梯度洗脱，

所述梯度洗脱程序为：0-0.5min内，流动相A的比例为90％，流动相B的比例为10％；0.5-1.2min内，流动相A的比例从90％渐变为40％；1.2-2.0min内，流动相A的比例从40％渐变为10％；2.0-2.5min内，流动相A的比例维持10％；2.5-2.51min内，流动相A的比例从10％渐变为90％；2.51-5min内，流动相A的比例维持90％；

质谱条件为：离子源为大气压下电喷雾离子源，负离子模式，三重四级杆质量分析器，接口电压为3.5kv，DL管温度为250℃，加热块温度为400℃，雾化气流量为3L/min，干燥气流量为15L/min，碰撞气为氩气；监测模式为多反应监测模式；

二氯吡啶酸的多反应监测条件如表1所示：

表1二氯吡啶酸的多反应监测条件

注：加“*”表示定量离子。

溶液配制：

空白溶液：甲醇。

油菜籽空白基质和待测油菜籽的前处理过程相同。

样品制备：取空白油菜籽或待测油菜籽，于不锈钢盆中混合均匀，四分法缩分，将缩分的样品用粉碎机粉碎均匀，密封储藏，做好标识备用。

油菜籽空白基质提取液：称取5.001g粉碎混匀的油菜籽空白基质于50mL离心管中，加入15mL质量分数为2％的氢氧化钠水溶液，涡旋提取5min，再用浓盐酸调节pH＝2～3，涡旋混匀3min，然后加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀5min，以5000r/min离心5min，准确移取2mL上清液于10mL离心管中，用水浴氮吹仪氮吹至干，然后用1mL色谱甲醇溶解吹干后剩余的残渣，涡旋1min，以3000r/min离心1min，取上清液过0.22μm有机滤膜得到待测油菜籽溶液。

待测油菜籽溶液：称取5.003g粉碎混匀的待测油菜籽于50mL离心管中，加入15mL质量分数为2％的氢氧化钠水溶液，涡旋提取5min，再用浓盐酸调节pH＝2～3，涡旋混匀3min，然后加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀5min，以5000r/min离心5min，准确移取2mL上清液于10mL离心管中，用水浴氮吹仪氮吹至干，然后用1mL色谱甲醇溶解吹干后剩余的残渣，涡旋1min，以3000r/min离心1min，取上清液过0.22μm有机滤膜得到待测油菜籽溶液。

标准工作溶液：分别称取(精确到0.00001g)二氯吡啶酸标准物质适量，用色谱纯乙腈溶解，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液；然后精密移取标准储备液适量于容量瓶中，用油菜籽空白基质提取液稀释并定容，配制成不同浓度的系列标准工作溶液。

操作方法：按照上述色谱和质谱条件设置仪器参数，待仪器稳定后，编辑批处理表，依次采集试剂空白溶剂、油菜籽空白基质提取液、一系列标准工作溶液以及待测油菜籽提取液；分析采集数据，绘制标准曲线获得线性回归方程，再通过外标法按线性回归方程计算待测油菜籽中二氯吡啶酸的含量。

图1为实施例1中二氯吡啶酸标准物质的标准曲线，横坐标为二氯吡啶酸标准物质的浓度X，纵坐标为二氯吡啶酸标准物质峰面积f(x)，求得的线性回归方程为f(x)＝242428x+1328.69，R²＝0.9998023；图1中右侧的表格为标准工作溶液中不同浓度(mg/L)的二氯吡啶酸对应的峰面积。

待测油菜籽中二氯吡啶酸残留量的计算公式如下：

X_待测物＝C_待测物×V₀/m_油菜籽

式中：

X_待测物-油菜籽中待测物的残留量，单位为mg/kg；

C_待测物-油菜籽提取液中待测物的浓度，单位为mg/L；

V₀-配制油菜籽提取液时，加入的提取试剂的体积，L；

m_油菜籽-称取待测油菜籽的质量，kg。

测得油菜籽中二氯吡啶酸的含量为2.03mg/kg。

典型提取离子流色谱图参见图2-5。

图2为实施例1中空白溶剂的提取离子流色谱图。

图3为实施例1中油菜籽空白基质提取液的提取离子流色谱图。

图4为实施例1中标准工作溶液的提取离子流色谱图，其中，二氯吡啶酸的保留时间为3.945min。

图5为实施例1中待测油菜籽提取液的提取离子流色谱图，其中，二氯吡啶酸的保留时间为3.927min。

实施例2回收率试验

通过添加已知浓度的样品，按照实施例1的方法和检测条件检测样品中的二氯吡啶酸的残留量，计算回收率。

实验过程：

取油菜籽空白基质，称取6份，每份称取2.000g，编号为A、B、C、D、E、F，然后取二氯吡啶酸的标准储备液(同实施例1)分别稀释至不同浓度，加至A、B、C、D、E、F油菜籽空白基质中，混合均匀，使得A、B样品中二氯吡啶酸的添加浓度均为0.05mg/kg；C、D样品中二氯吡啶酸的添加浓度均为2mg/kg；E、F样品中二氯吡啶酸的添加浓度均为4mg/kg；随后将样品静置2h；

按照实施例1中待测油菜籽提取液的方法进行处理分别得到A、B、C、D、E、F样品的提取液。

空白溶剂、油菜籽空白基质提取液、标准工作溶液同实施例1。

操作方法：按照上述色谱和质谱条件设置仪器参数，待仪器稳定后，编辑批处理表，依次采集试剂空白溶剂、油菜籽空白基质提取液、一系列标准工作溶液以及A、B、C、D、E、F提取液；分析采集数据，绘制标准曲线获得线性回归方程，再通过外标法按线性回归方程计算A、B、C、D、E、F样品中二氯吡啶酸的含量并计算样品回收率。

样品回收率计算公式为：

式中：X为回收率(％)；C₁为油菜籽空白基质样品中添加农药后的检测值，mg/kg；C₀为空白样品中实际添加农药的浓度值，mg/kg。

回收率计算结果如表2所示。

表2回收率计算结果

典型色谱图如图6-11所示。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱-质谱联用法检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈，流速为0.2mL/min，进行梯度洗脱，

所述梯度洗脱程序为：0-0.5min内，流动相A的比例为90％，流动相B的比例为10％；0.5-1.2min内，流动相A的比例从90％渐变为40％；1.2-2.0min内，流动相A的比例从40％渐变为10％；2.0-2.5min内，流动相A的比例维持10％；2.5-2.51min内，流动相A的比例从10％渐变为90％；2.51-5min内，流动相A的比例维持90％；

质谱条件为：离子源为大气压下电喷雾离子源，负离子模式，三重四级杆质量分析器，接口电压为3.5kv，DL管温度为250℃，加热块温度为400℃，雾化气流量为3L/min，干燥气流量为15L/min，碰撞气为氩气；监测模式为多反应监测模式。

2.根据权利要求1所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，二氯吡啶酸的多反应监测条件为：定性离子对的质荷比为190.00>146.00和192.00>147.95，定量离子对的质荷比为190.00>146.00；其中，离子对190.00>146.00对应的Q1pre偏差电压、碰撞电压CE和Q3pre偏差电压分别为21V、12、27V，离子对192.00>147.95对应的Q1pre偏差电压、碰撞电压CE和Q3pre偏差电压分别为21V、9、27V，驻留时间均为100msec。

3.根据权利要求1或2所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱的规格为2.0mmi.d×75mm。

4.根据权利要求1-3任一项所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，柱温为40℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，进样量为2μL。

6.根据权利要求1-5任一项所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，具体检测步骤为：取二氯吡啶酸标准物质，用油菜籽空白基质提取液配制成不同浓度的系列标准工作溶液，进样并绘制标准曲线获得线性回归方程，再取待测油菜籽提取液进样，通过线性回归方程计算油菜籽中二氯吡啶酸的含量。

7.根据权利要求6所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，油菜籽空白基质是指不含二氯吡啶酸的油菜籽基质。

8.根据权利要求6所述油菜籽中二氯吡啶酸的分析检测方法，其特征在于，油菜籽空白基质提取液与待测油菜籽提取液的配制方法相同，均为：称取5.000g粉碎混匀的油菜籽空白基质或待测油菜籽，与15mL质量分数为2％的氢氧化钠水溶液涡旋5min，再用浓盐酸调节pH＝2～3，然后加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀，离心，移取2mL上清液，用氮气吹干，然后用1mL甲醇溶解吹干后剩余的残渣，离心，取上清液过0.22μm有机滤膜即可。

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