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CN111956751A - 一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法 Download PDF

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CN111956751A
CN111956751A CN202010965377.6A CN202010965377A CN111956751A CN 111956751 A CN111956751 A CN 111956751A CN 202010965377 A CN202010965377 A CN 202010965377A CN 111956751 A CN111956751 A CN 111956751A
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CN
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pharmaceutical composition
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preparation
liver
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CN202010965377.6A
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黄河清
李金波
张棕仁
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Guangdong Renhe Kangyuan Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Guangdong Renhe Kangyuan Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法，由以下重量份的原料药制成：薏苡仁2‑8份，枸杞2‑8份，显齿蛇葡萄0.5‑3份，甘草0.5‑3份。其制备方法包括：按重量配比分别称取薏苡仁、枸杞、显齿蛇葡萄、甘草备用；将薏苡仁、枸杞、甘草三味药采用水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；显齿蛇葡萄水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；将上述所得的浸膏粉混匀，加入辅料，制成制剂。经药效试验表明，本发明提供的“药食同源”药物组合物具有健脾益肾补肝以治本、清热解毒化湿以治标的作用，可显著降低尿酸，对肝、肾功能损伤及肾脏病理改变具有较好的保护作用。

Description

一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于中草药技术领域，具体涉及一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法。
背景技术
高尿酸血症(hyperuricemia，HUA)是一种因嘌呤代谢紊乱引起的代谢性疾病，由各种原因引起尿酸在体内生成过多或肾脏排出减少，进而使细胞外液的尿酸盐含量呈超饱和状态的一种临床多发疾病。国际上将高尿酸血症的诊断标准定义为正常嘌呤饮食状态下，非同日2次空腹血尿酸水平男＞420μmoL/L(7mg/dL)，女＞357μmoL/L(6mg/dL)。无症状高尿酸血症是未发生痛风的高尿酸血症。它的发病与多种因素相关，如饮食因素、年龄、性别、遗传、地区等；随着经济水平的提高、饮食结构的改变，近年来高尿酸血症患病率呈现出逐年上升及年轻化的趋势，发病率已高达10％以上。高尿酸血症是痛风、尿酸性肾病、高血压、糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病的危险因素，危害严重。
目前临床上用于防治高尿酸血症的药物主要分为减少尿酸生产和促进尿酸排泄两大类。一类是黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)抑制剂，减少尿酸生成以别嘌醇、非布司他等为代表；一类是作用于肾近曲小管的尿酸盐转运体，从而抑制尿酸的重吸收，代表的苯溴马隆等；另有文献报道雌激素有一定的降尿酸作用。这些药物虽有一定的降低尿酸作用，但各自有不同程度的副作用。如：别嘌醇在治疗痛风及高尿酸过程中有严重的皮肤损害的报道，最近美国FDA公布一项研究表明，与别嘌醇相比较，抗痛风药非布司他可能增加心脏相关性死亡的分险；而近年来文献报道苯溴马隆在治疗痛风以及高尿酸血症时存在肝损害等风险。
如上所述，西药在治疗高尿酸血症上有皮肤损害、心血管事件、、肝脏损害等不同程度的副作用与风险，在临床运用中受到一定限制。而具有多成分、多靶点调控作用的中草药在降低尿酸方面具有毒副反应小、疗效稳定等特点，临床运用优势明显。因此，积极探索具有整体调理、使用安全、疗效突出、方便经济的“药食同源”类中草药制剂在高尿酸血症的防治中具有重要的研究意义。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种药物组合物，该药物组合物能显著降低尿酸，对高尿酸血症具有突出的治疗效果。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种治疗高尿酸血症的药物组合物，由以下重量份的原料药制成：
薏苡仁2-8份，枸杞2-8份，显齿蛇葡萄0.5-3份，甘草0.5-3份。
高尿酸血症(HUA)是现代医学概念，在中医学尚无明确认识，医家各有其见解。按症状可归属于“痛风”“痹证”“历节”等疾病范畴。根据高尿酸血症的临床特点，中医学大致可认定为本虚标实之候，主要由先天禀赋不足或后天失养导致肝、脾、肾三脏和三焦气化功能失调，水液代谢紊乱，积聚生湿，湿浊久滞体内，难以泄化，势必郁久化热聚毒，形成湿浊热毒之邪，留滞体内最终导致本病的发生。本病患者并无特殊不适主诉，可见纳呆、乏力或腰痠、大便不成形，舌质淡胖，舌苔白腻或黄腻等症候。本病病机常以脾、肾、肝虚弱为本，热毒湿浊为标。
在此病机认识的基础上，本发明采用健脾益肾补肝，清热解毒化湿的方法防治高尿酸血症，在临床应用与文献研究的基础上成了本复方药物。
本发明药物组合物由“药食同源”类药物薏苡仁、枸杞、显齿蛇葡萄和甘草组成，各药配伍比例为2-8、2-8、0.5-3、0.5-3、0.5-3，上述药物组合物按比例称取后，薏苡仁、枸杞、甘草采用水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；显齿蛇葡萄水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；将制备得到的浸膏粉混合，加入辅料，制剂即得本发明药物组合物。
本发明药物组合物中薏苡仁健脾渗湿、清热化浊，为方中主药；枸杞益肾补肝协助薏苡仁以调养本虚，显齿蛇葡萄又名藤茶，增强薏苡仁清热解毒化湿之力，共为辅佐药；甘草健脾清热、调和诸药，为使药。四味组合共凑健脾益肾补肝，清热解毒化湿之功，契合高尿酸血症的中医病机特点，对临床高尿酸血症疗效突出。
各原料现代药理研究如下：
薏苡仁与枸杞是临床常用降尿酸的药食同源物，薏苡仁中绿原酸等酚类成分被证实是黄嘌呤氧化酶抑制剂与自由基清除剂；枸杞提取物能明显降低慢性高尿酸血症小鼠血尿酸水平及黄嘌呤氧化酶(XOD)活性，同时能抑制TNF-α、IL-1β等炎症因子的升高。
显齿蛇葡萄(又名藤茶)，主产湖北、湖南等地，是葡萄科植物显齿蛇葡萄的干燥嫩枝叶，为国家卫计委批准的新食品原料。其有效成分二氢杨梅素能明显降低小鼠高尿酸血症模型中血尿酸水平。
甘草中甘草素能显著降低急性高尿酸血症小鼠血尿酸水平，其作用机制可能是抑制尿酸重吸收转运体尿酸转运蛋白1(URAT1)和有机阴离子转运蛋白4(OAT4)，同时甘草素与异甘草素还具有黄嘌呤氧化酶抑制剂样作用。
作为本发明进一步优选的技术方案，本发明一种治疗高尿酸血症的药物组合物，各原料的质量份数为：薏苡仁3-6份，枸杞3-6份，显齿蛇葡萄1-2份，甘草1-2份。
本发明还提供了上述治疗高尿酸血症的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：
(a)按重量配比分别称取薏苡仁、枸杞、显齿蛇葡萄、甘草备用；
(b)将薏苡仁、枸杞、甘草三味药采用水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；显齿蛇葡萄水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；
(c)将上述所得的浸膏粉混匀，加入辅料，制成制剂。
上述方法所述的辅料为药学上可接受的载体，如糊精、甘露醇、阿斯巴甜、微晶纤细素、乳糖、二氧化硅、淀粉、羧甲基淀粉钠等，制成制剂。优选的，所述制剂可以为颗粒剂(冲服剂)、片剂(素片、包衣片等)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊)、口服液等。
高尿酸血症是一本虚标实之病，本虚以脾、肾、肝虚弱为主，标实以热毒湿浊突出。经药效试验表明，本发明提供的“药食同源”药物组合物具有健脾益肾补肝以治本、清热解毒化湿以治标的作用，可显著降低尿酸，对肝、肾功能损伤及肾脏病理改变具有较好的保护作用。本发明药物组合物配伍精简、清补兼施，对临床高尿酸血症疗效突出。
附图说明
图1为本发明药物对高尿酸大鼠肾脏病理改变的影响(HE×200)的显微镜图(A.正常组，B.模型组，C.低剂量组，D.中剂量组，E.高剂量组，F.阳性组)；
图2为本发明药物组合物对肾脏及肝脏中SOD活性、MDA含量的影响的柱形图；(***P＜0.001vs.正常组.###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05vs.模型组)；
图3为本发明药物组合物对肝脏组织中XOD活性的影响的柱形图(*P＜0.05vs.正常组.#P＜0.05vs.模型组)；
图4为本发明药物组合物对肾脏中URAT1，GLUT9，OAT1，OAT3蛋白表达的影响的柱形图(***P＜0.001＜0.05vs.正常组.###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05vs.模型组)。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
实施例1：
一种治疗高尿酸血症的药物组合物，由以下重量份的原料药制成：
薏苡仁2-8份，枸杞2-8份，显齿蛇葡萄0.5-3份，甘草0.5-3份。
其制备方法，包括以下步骤：
(a)按重量配比分别称取薏苡仁、枸杞、显齿蛇葡萄、甘草备用；
(b)将薏苡仁、枸杞、甘草三味药采用水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；显齿蛇葡萄水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；
(c)将上述所得的浸膏粉混匀，加入辅料，制成制剂。
实施例2：
薏苡仁∶枸杞∶显齿蛇葡萄∶甘草各原料配比为6∶6∶2∶2。
其余同实施例1。
实施例3：
薏苡仁∶枸杞∶显齿蛇葡萄∶甘草各原料配比为4∶4∶1∶1。
其余同实施例1。
实施例4：
薏苡仁∶枸杞∶显齿蛇葡萄∶甘草各原料配比为3∶2∶0.5∶0.5。
其余同实施例1。
药效学试验研究
以下通过药效学试验来进一步阐述本发明的有益效果。
一、本发明药物组合物对高尿酸血症大鼠降尿酸效应及其作用机制观察
1.实验目的
建立高尿酸血症大鼠模型评价降尿酸受试样品的功效及其相关作用机制，为其进一步开发提供实验依据。
2.实验原理
腺嘌呤是一种含氮杂环嘌呤类化合物，大量腺嘌呤可增加动物体内尿酸的合成。氧嗪酸钾是一种尿酸酶竞争性抑制剂，可抑制动物体内尿酸酶活性，减少尿酸的分解与排泄。同时对大鼠灌服大量腺嘌呤和氧嗪酸钾可稳定复制高尿酸血症模型，用于评价本发明药物的降尿酸功效及其作用机制。
3.实验动物及饲养条件
3.1.实验动物
3.1.1.等级、种系：SPF级SD大鼠。
3.1.2.动物管理：动物由取得实验动物管理资格认可的人员饲养管理。
3.1.3.购入时体重、数量、性别：150+20g，60只，雄性。
3.1.4.繁育单位：广州中医药大学实验动物中心，实验动物生产许可证号为：SCXK(粤)2013-0034，动物质量合格证：No.44005800021140。
3.1.5.检疫过程：动物检疫观察7天。在此期间，观察动物的外观体征、行为活动、粪便性状、体重及饮食等指标。
3.1.6.动物标识方法：用饱和苦味酸溶液，在动物体表不同部位的被毛涂染斑点，以示不同号码。
3.1.7.笼标记法，将填好的标签卡(标明实验名称、专题负责人、动物种系、性别、编号、组别、喂食开始日期等)挂在笼正面。
3.2.饲养条件
3.2.1.饲养房间：中山大学(实验动物中心北校园)实验动物中心。实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2017-0081，动物实验证明号：No.00239656。
3.2.2.温、湿度：20～25℃；湿度：40％～70％。
3.2.3.换气次数：大于10次/小时。
3.2.4.饲养密度：3只/笼。
3.2.5.照明时间：12小时(上午7：00开灯～下午7：00关灯)。
3.3.饲料
3.3.1.种类：SPF级大小鼠饲料。
3.3.2.给料方法：自由摄取。
3.3.3.饲料常规营养成分指标：经广东省实验动物监测所(参照中华人民共和国国家标准GB14924.3-2010)检测，检测频度：每年两次。
3.3.4.饲料的保存：保存在专门的饲料间里，保持通风、清洁、干燥。
3.4.饮用水
3.4.1.饮用水种类：经121℃(1.0kg/cm2)、30min灭菌高质水，符合《饮用净水水质标准》(CJ94-2005)。
3.4.2.给水方法：经动物饮用瓶自由摄取。
3.5.动物尸体处理
动物尸体暂存于动物暂存间内的-20℃专用冰箱内，集中交给广东生活环境无害化处理中心进行无害化处理。
4.主要仪器及试剂
4.1.主要仪器
4.1.1.MG416A电子天平，义乌市摩格电子科技有限公司；
4.1.2.TLE 104电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
4.1.3.MIKRO 200R低温高速离心机，德国Hettich公司；
4.1.4.DW-86L828超低温冰箱，青岛海尔特种电器有限公司；
4.1.5.日立LST008全自动生化分析仪，日本日立公司；
4.1.6.Epoch2微孔板分光光度计，美国Biotek公司；
4.1.7.其他：注射器、灌胃针等。
4.2.主要试剂
4.2.1.氧嗪酸钾，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，分析纯；
4.2.2.腺嘌呤，上海瑞永生物科技有限公司，分析纯；
4.2.3.水合氯醛，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，分析纯；
4.2.4.黄嘌呤氧化酶(XOD)检测试剂盒，北京索莱宝公司；
4.2.5.脂质氧化(MDA)检测试剂盒，碧云天生物技术有限公司；
4.2.6.总SOD活性检测试剂盒，碧云天生物技术有限公司；
4.2.7.抗体URAT1、GLUT9、β-actin，Proteintech公司；
4.2.8.抗体OAT1、OAT3，Affinity公司
4.2.9.辣根过氧化物结合二抗，Promega公司。
5.实验方法
5.1.受试样品剂量及给药途径
本发明药物组合物样品根据临床使用剂量，设低、中、高，共3个剂量，低剂量为0.85g/kg、中剂量为1.7g/kg、高剂量为3.4g/kg。
各样品灌胃体积均设定为10mL/kg·bw。根据每周体重变化调整给药剂量。
5.2.苯溴马隆片剂量及给药途径
苯溴马隆的人服用量为50～100mg/天，按100mg/天计算，经体表面积计算得大鼠剂量为10mg/kg，每天灌胃1次；经过15d大鼠血清尿酸及生化指标的测定结果将苯溴马隆剂量调整为20mg/kg，每天灌胃1次。
5.3.造模剂混悬液的配制
按10mL/kg灌胃体积计算，取腺嘌呤8g、氧嗪酸钾100g用蒸馏水配制成1000mL混悬液。
5.4.受试样品混悬液的配制(根据实际体重调整配药体积)
取适量药物组合物样品，加入蒸馏水，混匀，配制成50mL混悬液。
5.5.苯溴马隆混悬液的配制
取苯溴马隆片1片(50mg)，研细，加入蒸馏水混匀，配制成50mL混悬液。
5.6.动物分组与处理
动物模型的复制参照现有文献及实验室建立的方法进行。60只SPF级SD大鼠，雄性，体重180～220g。预留10只作为正常对照组(蒸馏水)。其余大鼠连续3天灌胃给予腺嘌呤(80mg/kg)+氧嗪酸钾(1000mg/kg)建立高尿酸血症模型，取血清检测尿酸(UA)，按UA水平随机分为正常对照组(蒸馏水)、模型对照组(蒸馏水)、样品低剂量组(0.85g/kg)、中剂量组(1.7g/kg)、高剂量组(3.4g/kg)、阳性对照组(苯溴马隆前15d 10mg/kg，后15d 20mg/kg)，共6组，每组10只。分组后，每天上午除正常组大鼠外各组灌胃给予腺嘌呤(80mg/kg)+氧嗪酸钾(1000mg/kg)维持高尿酸血症模型；每天下午分别对所有组别灌服相应治疗药物。上述药物造模及给药治疗过程持续30天。
5.7.一般状态观察
每天观察动物的状态(外观体征、行为活动、粪便性状、摄食情况等)。
5.8.体重称量
每周称重观察动物的生长情况。
5.9.血清生化指标测定
分别于给药前及给药15、30d取血。取血前一天晚上开始空腹，灌胃给予腺嘌呤+氧嗪酸钾，2h后给予各组受试药物，给药2h后腹腔注射7％水合氯醛溶液(350mg/kg)镇静，眼眶静脉丛取血1.5mL，离心分离血清，检测血清中尿酸(UA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)的水平。末次7％水合氯醛溶液(350mg/kg)镇静后，下腔静脉取血5mL，检测上述指标。
5.10.病理学观察
末次7％水合氯醛溶液(350mg/kg)镇静后，下腔静脉取血，处死大鼠，肉眼对肾脏及肝脏整体进行大体观察，记录色泽、形态等是否出现异常。取部分肾组织用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色、光镜下观察并作病理学评价。
肾脏病理评分：肾小管明显扩张，上皮细胞变性或坏死视为异常肾小管。肾小管未见扩张，上皮细胞结构正常计0分；异常肾小管约占视野内全部肾小管的1/4，计1分；异常肾小管约占视野内全部肾小管的2/4，计2分；异常肾小管约占视野内全部肾小管的3/4，计3分；视野内肾小管几乎均为异常肾小管，计4分。
5.11.肝、肾组织匀浆指标
末次取血后，处死大鼠，取部分肾组织及肝大叶组织放入液氮中保存备用，肝、肾组织用全自动组织研磨仪制备组织匀浆，按试剂盒说明书检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，部分肝脏组织按试剂盒说明书检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活性。部分肾脏组织采用Western Blot检测，肾脏尿酸转运蛋白1(URAT1)和人葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运蛋白1(OAT1)和有机阴离子转运蛋白3(OAT3)的蛋白表达。
Western blotting实验
(一)提取组织蛋白
首先将RIPA裂解液置于室温融化，随后加入1％的蛋白酶抑制剂Cocktail(100×)以及1％的磷酸酶抑制剂(100×)，混合均匀。用天平称取约20mg的肾脏组织，加入上述配好的RIPA裂解液300μL，充分匀浆，并置于冰上孵育，充分裂解30min，随后4℃，12000g离心15min，上清即为得到的组织蛋白，可暂时保存于-80℃，或者直接用于后续检测。
(二)Western blotting检测
组织蛋白样品制备好后，使用SDS-PAGE胶进行分离，然后转移到PVDF膜(Millipore，USA)上。最后利用仪器GE ImageQuant LAS4000mini对PVDF膜免疫反应信号进行捕获拍照，然后采用Quantity One Protein Analysis Software(Bio-RadLaboratories，Hercules，CA)进行灰度分析。
6.数据处理
实验数据由GraphPad Prism 8.0生物统计学软件进行统计学处理：体重及各生化指标以Mean±SD表示，采用方差分析结合Dunnett′s多重比较法进行分析；病理评分采用Kruskal-Wallis秩和检验。
7.实验记录及报告撰写
除计算机或自动化仪器直接采集的数据外，其他所有在实验中产生的数据、资料都直接、及时、准确地用墨水笔或签字笔记录在事先准备好的表格或记录纸上，注明日期，并由记录人签名。记录的所有数据均由另一人(非记录人)进行核查签名。实验结束后由研究负责人撰写实验总结报告。
8.实验结果
8.1.一般状态观察及体重
实验期内各组动物的精神状态均良好、毛色光洁、活动自如、呼吸均匀、摄食量、粪便未见明显异常、尿多、口鼻内无异常分泌物。
由表1可见，与正常组比较，模型组0～4周体重均无显著差异(P＞0.05)。与模型组比较，各给药组0～4周体重均无显著差异(P＞0.05)。
表1大鼠体重(g，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000091
注：各组间比较无显著差异。
8.2.对高尿酸大鼠血清尿酸的影响
由表2可见，与正常组比较，模型组0d、15d、30d血清UA均显著提高(P＜0.01)，提示模型建立成功。0d与模型组比较，本发明药物组合物样品组与阳性样品组血清UA均无显著差异(P＞0.05)，15d与模型组比较，受试样品中、高剂量组血清UA有降低的趋势，但无统计学差异(P＞0.05)。30d与模型组比较，本发明药物组合物高剂量组和阳性组血清UA均显著降低(P＜0.05)。
表2对高尿酸大鼠血清UA的影响(μmol/L，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000092
注：与模型组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。
8.3.对高尿酸大鼠肝肾功能的影响
由表3和表4可见，与正常组比较，模型组15d血清ALT和AST均无显著差异(P＞0.05)；与模型组比较，各给药组15d血清ALT和AST均无显著差异(P＞0.05)；与模型组比较，各给药组15d血清ALT和AST均无显著差异(P＞0.05)。与正常组比较，模型组30d血清ALT显著升高(P＜0.01)提示肝细胞受损，AST无显著差异(P＞0.05)；与模型组比较，各给药组30d血清ALT显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，提示本发明药物组合物对肝功能有保护作用。
表3.对高尿酸大鼠血清ALT的影响(IU/L，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000101
注：与模型组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。
表4对高尿酸大鼠血清AST的影响(IU/L，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000102
注：各组间比较无显著差异。
由表5可见，与正常组比较，模型组15d、30d血清BUN均显著提高(P＜0.01)，提示模型组肾小球滤过功能受损。与模型组比较，15d本发明药物高剂量组血清BUN显著降低(P＜0.05)；30d本发明药物中、高剂量组和阳性组血清BUN显著降低(P＜0.01)，提示本发明药物组合物对肾功能损伤有改善。
由表6可见，与正常组比较，模型组15d、30d血清CREA均显著提高(P＜0.01)，提示模型组肾小球滤过功能受损。与模型组比较，15d、30d本发明药物中、高剂量组血清CREA显著降低(P＜0.01)；30d阳性组血清CREA显著降低(P＜0.05)，提示本发明药物组合物对肾功能损伤有改善。
表5对高尿酸大鼠血清BUN的影响(mmol/L，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000111
注：与模型组比较，**：P＜0.01。
表6对高尿酸大鼠血清CRE的影响(μmol/L，Mean±SD，n＝10)
Figure BDA0002680236510000112
注：与模型组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。
8.4.对高尿酸大鼠肾脏病理学的影响
肉眼观察，正常对照组大鼠肾脏表面光滑无肿胀，呈红褐色，质软有光泽；模型组及各给药组大鼠肾脏明显增大，两肾灰白，表面呈颗粒状。
如图1所示，经HE染色，200×显微镜下观察，正常对照组的肾脏结构正常，肾小管无肿胀变性，肾小球正常大小；模型组肾脏结构改变明显，肾小管肿胀变性，肾小管管腔明显扩张，肾小球肿胀增大；与模型组比较，各给药组的上述病理变化均有所改善，其中本发明药物中、高剂量组，阳性苯溴马隆组的肾脏病理改善较为明显。
如表7所示，与正常组比较，模型组肾脏病理评分显著增加(P＜0.01)。与模型组比较，各给药组肾脏病理评分均有所降低，其中本发明药物中剂量组肾脏病理评分显著降低(P＜0.05)。
表7对高尿酸大鼠肾脏病理学评分的影响(n＝10)
Figure BDA0002680236510000121
注：E.高剂量n＝9；与模型组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。
8.5.对高尿酸大鼠肝脏和肾脏组织SOD、MDA的影响
嘌呤代谢紊乱引起的高尿酸血症状态下，人体中主要的抗氧化成分如超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著降低，而由脂质过氧化引起的丙二醛(MDA)合成则明显增加，而由抗氧化失调引起的氧化应激将加剧肾脏功能损害及肝脏相关代谢酶的紊乱，进一步促进尿酸累积。因此在降尿酸的同时改善肾脏及肝脏中的氧化应激损伤将有组于高尿酸血症的治疗。由图2A，B可知，与正常组相比，模型组肾脏中SOD活性明显降低，MDA含量则显著增加，提示伴有氧化应激反应的发生；与模型组相比，给予中剂量及高剂量的本发明药物治疗后能显著增加肾脏SOD活性，降低MDA的合成，并且高剂量与阳性对照药效果相当，提示本发明药物组合物能够改善肾脏组织中氧化应激。同样地，由图2C，D可知，给予本发明药物治疗后能够增加模型条件下肝脏组织中SOD活性，并且高剂量能够有效抑制肝脏中MDA的生成，表明其在肝脏中也具有一定的抗氧化作用。
8.6.对高尿酸大鼠肝脏中组织XOD的影响
黄嘌呤氧化酶(XOD)是生成尿酸的关键酶，嘌呤代谢关键酶缺陷导致嘌呤利用障碍或嘌呤氧化酶活性增强是尿酸生成增加的主要原因。当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，并催化黄嘌呤产生尿酸，对肝损害的诊断具有特异性的意义。由图3可知，与正常组相比，模型组肝脏组织中XOD的活性显著增加，提示模型条件下肝脏功能可能受损，而高剂量的本发明药物能够有效抑制肝脏中XOD的活性，表明本发明药物组合物可能通过抑制肝脏XOD酶活性，降低尿酸的生成。
8.7.对肾脏中尿酸转运蛋白1(URAT1)、葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运蛋白1(OAT1)及有机阴离子转运蛋白3(OAT3)的蛋白表达水平的影响
URAT1主要位于肾皮质近曲小管的上皮细胞刷状缘膜，是肾小管腔尿酸重吸收至肾小管上皮细胞内的主要转运蛋白，在肾脏尿酸盐重吸收的过程中起重要作用，是促尿酸排泄药物重要的作用靶点。由图4A可知，与正常组相比，模型组大鼠的肾脏组织中URAT1的表达明显上调，而给予中剂量及高剂量本发明药物治疗后能够显著减少肾脏中URAT1的蛋白表达，并且其作用效果与阳性对照药苯溴马隆相近。GLUT9既是葡萄糖转运蛋白也是尿酸转运蛋白，负责肾脏近曲小管顶膜尿酸盐的重吸收。由图4B可知，相比于正常组，模型组大鼠肾脏中GLUT9的表达明显增加，而中剂量及高剂量本发明药物能够显著降低GLUT9的蛋白表达，并且高剂量组作用与苯溴马隆效果相当。OAT1在肾脏主要分布于近曲小管的基底膜，在尿酸从管周间隙摄取入肾小管的过程中起重要的作用；OAT3是尿酸盐转运蛋白，主要分布于近曲小管基底侧膜，参与外周小管对尿酸的摄取，即参与尿酸的分泌。由图4C，D可知，与正常组相比，模型组大鼠肾脏中OAT1及OAT3的蛋白表达均显著下调，而中剂量及高剂量的本发明药物均能有效增加肾脏中OAT1及OAT3的蛋白表达，并且中高剂量增加OAT1及OAT3的蛋白表达的作用均与苯溴马隆相当。以上结果提示，本发明药物组合物可能通过抑制肾脏中促尿酸重吸收蛋白URAT1及GLUT9的蛋白表达，减少尿酸在肾小管中的重吸收；此外本发明药物组合物可能通过增加肾脏中促尿酸排泄蛋白OAT1及OAT3的蛋白表达，促进尿酸经肾脏排泄。
9.结论
本发明药物组合物可显著降低高尿酸大鼠的血清尿酸，对高尿酸大鼠的肝、肾功能损伤及肾脏病理改变具有较好的保护作用；其作用机制与其抗氧化，抑制肝脏黄嘌呤氧化酶活性，调节肾脏尿酸转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白9、有机阴离子转运蛋白1及有机阴离子转运蛋白3的蛋白表达水平等相关联。

Claims (4)

1.一种治疗高尿酸血症的药物组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：
薏苡仁2-8份，枸杞2-8份，显齿蛇葡萄0.5-3份，甘草0.5-3份。
2.根据权利要求1所述的一种治疗高尿酸血症的药物组合物，其特征在于，各原料的质量份数为：薏苡仁3-6份，枸杞3-6份，显齿蛇葡萄1-2份，甘草1-2份。
3.权利要求1或2所述的一种治疗高尿酸血症的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）按重量配比分别称取薏苡仁、枸杞、显齿蛇葡萄、甘草备用；
（b）将薏苡仁、枸杞、甘草三味药采用水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；显齿蛇葡萄水浸、加热回流提取，浓缩，形成浸膏粉；
（c）将上述所得的浸膏粉混匀，加入辅料，制成制剂。
4.根据权利要求3所述的一种治疗高尿酸血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
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