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CN111909863A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其用途 - Google Patents

一株解淀粉芽孢杆菌及其用途 Download PDF

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CN111909863A CN201910379871.1A CN201910379871A CN111909863A CN 111909863 A CN111909863 A CN 111909863A CN 201910379871 A CN201910379871 A CN 201910379871A CN 111909863 A CN111909863 A CN 111909863A
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Abstract

本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其用途，该解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.17050。实验证明，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1具有解钾、解磷和固氮作用，可促进植物对钾元素、磷元素和氮元素的吸收；能够产生铁载体，可促进植物对铁元素的吸收；能够产生ACC脱氨酶，可增强植物的抗逆性；能够提高作物的产量和品质；能够抑制尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌和立枯丝核菌，从而防治多种植物真菌病害。本发明具有重要的应用价值。

Description

一株解淀粉芽孢杆菌及其用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其用途。
背景技术
土壤是人们赖以生存的物质基础，也是极其宝贵的自然资源，在农牧业的可持续发展中，占有极为重要的地位。我国人多地少，土地资源极其有限，人均耕地面积远远低于世界平均水平。为了提高单位面积作物产量，大量使用化肥和农药。化肥和农药的大量使用不仅造成了严重生态环境问题(如土壤恶化、水体污染、空气污染等)，而且直接危害人类健康。因此，亟需研发环境友好的新型肥料和农药，以实现农业和社会的可持续发展。
微生物肥料是含有特定微生物活体的制品，将其应用于农业生产，通过其中所含微生物的生命活动，增加植物养分的供应量或促进植物生长，防治作物病害，提高产量，改善农产品品质及农业生态环境。但在微生物肥料产业中，仍然存在着菌种功能单一、应用效果不稳定等问题。因此亟需筛选活性高、功能多样、效果稳定的菌种，以促进微生物行业的蓬勃发展。目前微生物肥料的菌种多侧重于具有固氮、解磷、解钾、分泌激素等能力的根瘤菌、芽孢杆菌、假单胞菌等，而生物农药的菌种多侧重于拮抗植物病原菌的芽孢杆菌、假单胞菌等。同时具备促生和抗病能力的菌种可增强微生物肥料功能，提升其效果和稳定性，扩大应用范围。
尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)属半知菌亚门真菌，能引起田间禾本科作物病害(如有性态引致小麦赤霉病)；禾谷镰刀菌在贮粮病害中能使小麦、玉米等粮食作物发热霉变。立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)属半知菌亚门真菌，是一种不产生任何无性孢子，在自然界广泛存在并呈世界性分布的土壤习居菌。作为引起根腐和茎腐症状的重要菌种，立枯丝核菌被认为是最具破坏力的土传植物病原物之一。目前立枯丝核菌的分布已经相当普遍，寄主范围极广，可侵染小麦、水稻、芝麻、花生、棉花、玉米等50科200余种植物，极易造成重大危害。
发明内容
本发明的目的是提供一种多功能的植物根际促生菌。
本发明首先保护解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1，该菌株已于2018年12月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.17050。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1 CGMCC No.17050简称解淀粉芽孢杆菌FH1。
本发明还保护一种菌剂，其可含有解淀粉芽孢杆菌FH1。
所述菌剂的用途可为如下a1)-a26)的至少一种：a1)解钾；a2)制备具有解钾能力的产品；a3)解磷；a4)制备具有解磷能力的产品；a5)固氮；a6)制备具有固氮能力的产品；a7)产生铁载体；a8)制备产生铁载体的产品；a9)调控营养元素吸收；a10)制备调控营养元素吸收的产品；a11)调控植物产量；a12)制备调控植物产量的产品；a13)调控植物品质；a14)制备调控植物品质的产品；a15)调控植物生长；a16)制备调控植物生长的产品；a17)产生ACC脱氨酶；a18)制备产生ACC脱氨酶的产品；a19)调控植物抗逆性；a20)制备调控植物抗逆性的产品；a21)调控植物抗病性；a22)制备调控植物抗病性的产品；a23)抑制植物病原真菌；a24)制备抑制植物病原真菌的产品；a25)防治植物真菌病害；a26)制备防治植物真菌病害的产品。
本发明还保护所述菌剂的制备方法，可包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌FH1接种至细菌培养基并进行培养，获得的菌液即为菌剂。
所述细菌培养基可为LB液体培养基。
所述菌剂的制备方法中，所述培养的具体条件可为：30±2℃、150-250r/min(如150-180r/min、180-250r/min、150r/min、180r/min或250r/min)振荡培养1-3d(如1d、2d或3d)。
除了活性成分，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为麸皮、豆粕、玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
本发明还保护解淀粉芽孢杆菌或含有解淀粉芽孢杆菌的菌剂的应用，可为如下a1)-a28)的至少一种：
a1)解钾；
a2)制备具有解钾能力的产品；
a3)解磷；
a4)制备具有解磷能力的产品；
a5)固氮；
a6)制备具有固氮能力的产品；
a7)产生铁载体；
a8)制备产生铁载体的产品；
a9)调控营养元素吸收；
a10)制备调控营养元素吸收的产品；
a11)调控植物产量；
a12)制备调控植物产量的产品；
a13)调控植物品质；
a14)制备调控植物品质的产品；
a15)调控植物生长；
a16)制备调控植物生长的产品；
a17)产生ACC脱氨酶；
a18)制备产生ACC脱氨酶的产品；
a19)调控植物抗逆性；
a20)制备调控植物抗逆性的产品；
a21)调控植物抗病性；
a22)制备调控植物抗病性的产品；
a23)抑制植物病原真菌；
a24)制备抑制植物病原真菌的产品；
a25)防治植物真菌病害；
a26)制备防治植物真菌病害的产品；
a27)改良土壤；
a28)制备用于改良土壤的产品。
上述应用中，所述a2)、a4)、a6)、a8)、a10)、a12)、a14)、a16)、a18)、a20)或a22)中，产品可为肥料或拌种剂。所述a24)或a26)中，产品可为农药、抑菌剂或拌种剂。所述a28)中，产品可为土壤改良剂。
上述任一所述的应用中，所述解淀粉芽孢杆菌可为所述解淀粉芽孢杆菌FH1。含有所述解淀粉芽孢杆菌FH1的菌剂可为上述任一所述菌剂。
本发明还保护一种产品，其含有解淀粉芽孢杆菌或含有解淀粉芽孢杆菌的菌剂；所述产品的功能可为a1)或a3)或a5)或a7)或a9)或a11)或a13)或a15)或a17)或a19)或a21)或a23)或a25)或a27)：
a1)解钾；
a3)解磷；
a5)固氮；
a7)产生铁载体；
a9)调控营养元素吸收；
a11)调控植物产量；
a13)调控植物品质；
a15)调控植物生长；
a17)产生ACC脱氨酶；
a19)调控植物抗逆性；
a21)调控植物抗病性；
a23)抑制植物病原真菌；
a25)防治植物真菌病害；
a27)改良土壤。
所述a1)、a3)、a5)、a7)、a9)、a11)、a13)、a15)、a17)、a19)或a21)的产品可为肥料或拌种剂。所述a23)或a25)的产品可为农药、抑菌剂或拌种剂。所述a27)的产品可为土壤改良剂。
上述任一所述的产品中，所述解淀粉芽孢杆菌可为所述解淀粉芽孢杆菌FH1。含有所述解淀粉芽孢杆菌FH1的菌剂可为上述任一所述菌剂。
本发明还保护如下任一所述方法。
K1)一种提高植物产量和/或品质的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物产量和/或品质。
K2)一种提高植物抗逆性的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物抗逆性。
K3)一种提高植物抗病性的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物抗病性。
K4)一种促进植物生长的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而促进植物生长。
K5)一种促进植物营养元素吸收的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而促进植物营养元素吸收。
K6)一种改良土壤的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理土壤。
上述任一所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理植物”可通过向植物根系施加解淀粉芽孢杆菌实现。
上述任一所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理植物”可通过向植物种子中加入解淀粉芽孢杆菌实现，即解淀粉芽孢杆菌作为拌种剂的组分之一。
上述任一所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理植物”还可通过向植物地上部分(如叶片)喷施解淀粉芽孢杆菌实现。
上述任一所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理植物”具体可为采用上述任一所述菌剂处理植物。
上述任一所述“采用上述任一所述菌剂处理植物”可通过向植物根系施加上述任一所述菌剂实现。
上述任一所述“采用上述任一所述菌剂处理植物”可通过向植物种子中加入上述任一所述菌剂实现，即上述任一所述菌剂作为拌种剂的组分之一。
上述任一所述“采用上述任一所述菌剂处理植物”还可通过向植物地上部分(如叶片)喷施上述任一所述菌剂实现。
上述任一所述“采用所述解淀粉芽孢杆菌FH1或上述任一所述菌剂处理植物”可为向植物根系施加所述肥料、向植物种子中加入所述肥料(即所述肥料作为拌种剂的组分之一)或向植物地上部分(如叶片)喷施所述肥料。
所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理土壤”可通过向土壤施加解淀粉芽孢杆菌实现。
所述“采用解淀粉芽孢杆菌处理土壤”可通过向土壤施加上述任一所述菌剂实现。
上述任一所述的方法中，所述解淀粉芽孢杆菌可为所述解淀粉芽孢杆菌FH1。
上述任一所述提高植物产量可表现为穗长、单株穗数、单穗粒数和千粒重的至少一种增加。
上述任一所述提高植物品质可表现为直链淀粉含量增加。
上述任一所述抗逆性可为抗盐性。
上述任一促进植物生长表现为株高增加、植株的干重增加、植株的鲜重增加、茎的鲜重增加、茎的干重增加、茎的长度增加、根的鲜重增加、根的干重增加、根的长度增加和根长增加中的至少一种。
上述任一所述调控营养元素吸收可为促进营养元素吸收。
上述任一所述调控植物产量可为提高植物产量。
上述任一所述调控植物品质可为植物品质提高。
上述任一所述调控植物生长可为促进植物生长。
上述任一所述调控植物抗逆性可为提高植物抗逆性。
上述任一所述调控植物抗病性可为提高植物抗病性。
上述任一所述植物病原真菌可为尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌和立枯丝核菌中的至少一种。
上述任一所述植物真菌病害可为枯萎病、赤霉病、根腐病和茎腐病中的至少一种。
所述植物真菌病害具体可为尖孢镰刀菌引起的病害(如枯萎病)。
所述植物真菌病害具体可为禾谷镰刀菌引起的病害(如赤霉病)。
所述植物真菌病害具体可为立枯丝核菌引起的病害(如根腐病、茎腐病)。
上述任一所述营养元素可为钾、铁、氮和磷中的至少一种。
上述任一所述植物可为如下c1)至c13)中的任一种：c1)双子叶植物；c2)单子叶植物；c3)禾本科植物；c4)葫芦科植物；c5)黄瓜；c6)黄瓜品种中农8号；c7)水稻；c8)水稻品种甬优1540；c9)玉米；c10)芝麻；c11)花生；c12)棉花；c13)小麦。
上述任一所述肥料可为微生物肥料。所述微生物肥料可为复合微生物肥料和/或生物有机肥。所述复合微生物肥可为菌剂、营养物质和有机质复合而成的肥料。所述复合微生物肥既有微生物的作用，又有化肥的作用。所述生物有机肥可为菌剂和腐熟的有机肥复合而成的一类肥料。复合微生物肥料和/或生物有机肥的剂型可为颗粒剂。
实验证明，本发明提供的解淀粉芽孢杆菌FH1可将土壤中的不溶性磷溶解为有效磷，可将土壤中的不溶性钾溶解为有效钾，促进植物对磷和钾元素的吸收；具有固氮能力，能够将空气中氮气固定为有效氮，有助于植物对氮元素的吸收；可产生ACC脱氨酶，增强作物抗逆性；可提高作物的产量和品质；还能够产生铁载体、对病原真菌(如禾谷镰刀菌、立枯丝核菌、尖孢镰刀菌)具有拮抗作用，从而拮抗病原真菌，防治植物真菌性病害。由此可见，解淀粉芽孢杆菌FH1可以作为植物根际促生菌，能够促进植物生长、防治植物真菌性病害和增强植物抗逆性。本发明具有重要的应用价值。
附图说明
图1为细菌FH1在LB固体培养基(A)、LB液体培养基(B)、阿须贝固体培养基(D)、解钾固体培养基(E)和ADF固体培养基(F)上培养的单菌落形态和细菌FH1的解淀粉能力鉴定(C)。
图2为解淀粉芽孢杆菌FH1的解磷能力的测定(A)和产生铁载体能力的测定(B)。
图3为解淀粉芽孢杆菌FH1对禾谷镰刀菌(A)、立枯丝核菌(B)和尖孢镰刀菌(C)的拮抗作用。
图4为解淀粉芽孢杆菌FH1可以提高水稻产量和品质。
图5为解淀粉芽孢杆菌FH1可以提高水稻的抗逆性。
保藏说明
菌种名称：解淀粉芽孢杆菌
拉丁名：Bacillus amyloliquefaciens
菌株编号：FH1
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2018年12月29日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.17050
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
以下实施例中的试验，均设置三或四次重复实验，结果取平均值。
LB液体培养基：向适量蒸馏水中加入酵母提取物5g、胰蛋白胨10g和氯化钠10g，调节pH值至7.0-7.5，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
LB固体培养基：向适量蒸馏水中加入酵母提取物5g、胰蛋白胨10g、氯化钠10g和琼脂20g，调节pH值至7.0-7.5，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
实施例1、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1 CGMCC No.17050的分离、鉴定和保藏
一、分离
1、在90mL无菌水中加入10g土壤样品(采自安徽省黄山市徽州区西溪南镇茶树的根际土壤)，高速振荡10min，静置30s，得到上清液；将该上清液置于100℃沸水中加热10min，自然冷却，得到土壤悬液(此时稀释度记为10-1)。
2、吸取1mL土壤悬液加入盛有9mL无菌水的试管中充分混匀(此时稀释度为10-2)，然后从此试管中吸取1mL加入到另一盛有9mL无菌水的试管中混合均匀，制成稀释液(稀释度为10-3)。
3、将稀释液均匀涂布在LB固体培养基上，30℃培养3d。将在LB固体培养基上可以生长的菌落进行菌种纯化。
将筛选到的一株细菌命名为细菌FH1。
二、鉴定
1、形态学鉴定
将细菌FH1接种至LB固体培养基，30℃培养，3d后观察单菌落的形态。
结果见图1中A。结果表明，细菌FH1的菌落为乳白色，中心突出，不透明，形状不规则，表面褶皱。
将细菌FH1接种至LB液体培养基，30℃培养，2d后利用扫描电镜(Hitachi SU8010)观察细菌的形态。
结果见图1中B。结果表明，细菌FH1的菌体为长约2.25μm、宽约688nm的杆菌，两端钝圆，二分横裂生殖。
2、16S rRNA序列同源性分析
(1)提取细菌FH1的基因组DNA并以其作为模板，采用引物27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492R：5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
反应体系为25μL，由12.5μL2×Master Mix(TaKaRa公司的产品)、1μL引物27F水溶液(浓度为2.5pmol/μL)、1μL 1492R水溶液(浓度为2.5pmol/μL)、1μL模板和9.5μL ddH2O组成。
反应条件为：94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃90s，30个循环；72℃10min。
(2)将步骤(1)得到的PCR扩增产物进行测序。
测序结果表明，步骤(1)得到的PCR扩增产物中含有序列表中序列1所示的DNA分子。
将序列表中序列1所示的核苷酸序列在NCBI上进行比对。比对结果显示，细菌FH1与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的同源性最高。因此，细菌FH1被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
3、解淀粉能力鉴定
将细菌FH1接种至含0.2％可溶性淀粉的LB固体培养基，30℃培养3d后，在培养基上滴加卢哥式碘液(将5克碘和10克碘化钾溶于85mL蒸馏水获得)染色，然后用70％(v/v)乙醇水溶液洗板，然后进行如下判断：如果菌落周围有透明圈产生，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有解淀粉能力；否则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有解淀粉能力。
实验结果见图1中C。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1的菌落周围有透明晕产生，说明其具有解淀粉能力。
三、保藏
步骤一分离的细菌FH1已于2018年12月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.17050。细菌FH1的全称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1CGMCC No.17050，简称为解淀粉芽孢杆菌FH1。
实施例2、解淀粉芽孢杆菌FH1固氮能力的测定
阿须贝固体培养基：向适量蒸馏水中加入甘露醇10.0g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O0.2g、NaCl0.2g、CaCO3 5.0g、CaSO4·2H2O0.1g和琼脂粉20g，调节pH值至7.0-7.5，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
1、将解淀粉芽孢杆菌FH1的单克隆接种至10mL LB液体培养基，30℃、180rpm振荡培养48h，得到培养菌液。
2、完成步骤1后，取所述培养菌液，4℃、10000rpm离心5min，收集菌体。
3、完成步骤2后，取所述菌体，用无菌水稀释，得到浓度为1×108个/mL的解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液。
4、完成步骤3后，将5μL解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液点接在阿须贝固体培养基上，30℃培养3d，然后进行如下判断：如果解淀粉芽孢杆菌FH1可以在阿须贝固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有固氮能力；如果解淀粉芽孢杆菌FH1不可以在阿须贝固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有固氮能力。
实验结果见图1中D。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1可以在阿须贝固体培养基上生长，说明其具有固氮能力。由此可见，解淀粉芽孢杆菌FH1具有将空气中氮气固定为有效氮的能力，有助于植物对氮元素的吸收，从而促进植物生长。
实施例3、解淀粉芽孢杆菌FH1解钾能力的测定
解钾固体培养基：向适量蒸馏水中加入磷酸氢二钠2.0g、七水硫酸镁0.5g、氯化铁0.005g、碳酸钙0.1g、蔗糖5.0g、钾长石粉1.0g和琼脂粉20g，调节pH值至7.0-7.5，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
将5μL实施例2中步骤3制备的解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液点在解钾固体培养基上，30℃培养3d，然后进行如下判断：如果解淀粉芽孢杆菌FH1可以在解钾固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有解钾能力；如果解淀粉芽孢杆菌FH1不可以在解钾固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有解钾能力。
实验结果见图1中E。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1可以在解钾固体培养基上生长，说明其具有解钾能力。由此可见，解淀粉芽孢杆菌FH1具有将土壤中不溶性钾转化为有效钾的能力，有助于植物对土壤中钾的吸收，从而促进植物生长。
实施例4、解淀粉芽孢杆菌FH1产生ACC脱氨酶能力的测定
组分一溶液：向适量蒸馏水中加入H3BO3 10mg、MnSO4·H2O11.19mg、ZnSO4·7H2O124.6mg、CuSO4·5H2O 78.22mg和MoO3 10mg，然后用蒸馏水定容至100mL，过滤灭菌。
组分二溶液：将FeSO4·7H2O 100mg溶于10mL蒸馏水，过滤灭菌。
DF液体培养基：向适量蒸馏水中加入KH2PO4 4.0g、Na2HPO4 6.0g、MgSO4·7H2O0.2g、葡萄糖2.0g、葡萄糖酸钠2.0g、柠檬酸2.0g、0.1mL组分一溶液和0.1mL组分二溶液，调节pH值至7.2，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
ADF液体培养基：待DF液体培养基冷却至55℃左右，加入ACC(1-氨基环丙烷-1-羧基)水溶液(已过滤灭菌)，得到ADF液体培养基。ADF液体培养基中，ACC的浓度为3.0mmol/L。
ADF固体培养基：在DF液体培养基中添加20g/L琼脂，121℃灭菌15min，冷却至55℃左右，加入ACC(1-氨基环丙烷-1-羧基)水溶液(已过滤灭菌)，得到ADF固体培养基。ADF固体培养基中，ACC的浓度为3.0mmol/L。
考马斯亮蓝G250溶液：准确称取100mg考马斯亮蓝G250，先用50mL95％(v/v)乙醇水溶液溶解，再加入100mL85％(v/v)磷酸水溶液，用蒸馏水定容至1000mL。抽滤，保存于棕色瓶中备用。
2，4-二硝基苯肼溶液的溶质及其浓度为0.2％(m/v)2，4-二硝基苯肼，溶剂为浓度为2M的HCl溶液。2，4-二硝基苯肼为Sigma-Aldrich公司的产品。
ACC脱氨酶是测定根际促生菌提升植物抗逆能力的指标之一。
一、解淀粉芽孢杆菌FH1产生ACC脱氨酶能力的定性测定
将实施例2中步骤3制备的解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液接种至ADF固体培养基，30℃培养3d，然后进行如下判断：如果解淀粉芽孢杆菌FH1可以在ADF固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有产生ACC脱氨酶的能力；如果解淀粉芽孢杆菌FH1不可以在ADF固体培养基上生长，则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有产生ACC脱氨酶的能力。
实验结果见图1中F。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1可以在ADF固体培养基上生长，说明其具有产生ACC脱氨酶的能力。
二、解淀粉芽孢杆菌FH1产生ACC脱氨酶能力的定量测定
1、将解淀粉芽孢杆菌FH1的单克隆接种至10mL LB液体培养基，30℃、180rpm振荡培养48h，得到培养菌液1。
2、取培养菌液1，4℃、8000rpm离心10min，收集菌体1。
3、取菌体1，先用15mL DF液体培养基离心洗涤2次，然后用24mL ADF液体培养基重悬，得到重悬液1。
4、取重悬液1，30℃、180rpm振荡培养24h，得到培养菌液2。
5、取培养菌液2，先用pH7.6、0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液离心洗涤2次，然后用1mLpH7.6、0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液重悬，得到重悬液2。
6、取重悬液2，4℃、12000rpm离心5min，收集菌体2。
7、取菌体2，用600μL pH8.5、0.1mol/L Tris-HCl缓冲液重悬，得到重悬液3。
8、取重悬液3，加入30μL甲苯，迅速振荡30s破碎细胞，得到粗酶液。
9、取粗酶液，测定ACC脱氨酶比活力(实验重复三次取平均值)，具体步骤如下：
(1)测定总蛋白质含量
(1-1)建立牛血清蛋白标准曲线
取0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL或1.0mL牛血清蛋白溶液(浓度为100μg/mL)，加水定容至1mL，混匀后加入5mL考马斯亮蓝G250溶液，摇匀；静置3min后，在595nm处检测吸光度值。以牛血清蛋白含量为横坐标，相应的吸光度值为纵坐标，绘制牛血清蛋白标准曲线。
(1-2)测定总蛋白质含量
取100μL粗酶液，加水定容至1mL，混匀后加入5mL考马斯亮蓝G250溶液，摇匀；静置3min后，在595nm处检测吸光度值。
根据牛血清蛋白标准曲线，获得粗酶液中总蛋白质含量。
(2)测定ACC脱氨酶活性
(2-1)建立丁酮酸标准曲线
将丁酮酸梯度稀释至0.1-1μmol；向梯度稀释后的丁酮酸溶液中分别加入300μL2，4-二硝基苯肼溶液，30℃保温30min；然后加入2mL NaOH水溶液(浓度为2mol/L)，混匀，在540nm处检测吸光度值。以丁酮酸物质的量(μmol)为横坐标，相应的吸光度值为纵坐标，绘制丁酮酸标准曲线。
(2-2)测定ACC脱氨酶活性
(2-2-1)取200μL粗酶液，加入20μL ACC水溶液(浓度为0.5mol/L)，混匀，30℃反应15min。
(2-2-2)完成步骤(2-2-1)后，先加入1mL HCl水溶液(浓度为0.56mol/L)终止反应，然后4℃、12000rpm离心5min，收集上清液。
(2-2-3)完成步骤(2-2-2)后，取所述上清液，加入800μL HCl水溶液(浓度为0.56mol/L)和300μL2，4-二硝基苯肼溶液，30℃保温30min；最后加入2mL NaOH水溶液(浓度为2mol/L)，混匀，在540nm处检测吸光度值。
根据丁酮酸标准曲线，获得粗酶液中生成丁酮酸物质的量。
(3)按照下述公式，计算ACC脱氨酶比活力：
Figure BDA0002053007820000121
结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1的ACC脱氨酶比活力为0.42U/mg。
实施例5、解淀粉芽孢杆菌FH1解磷能力的测定
无机磷固体培养基：向适量蒸馏水中加入氯化钠0.30g、硫酸0.30g、氯化钾0.30g、硫酸铵0.50g、硫酸亚铁0.03g、硫酸锰0.03g、磷酸钙5.00g、葡萄10.00g和琼脂20.00g，调节pH值至7.0-7.5，然后用蒸馏水定容至1.0L，121℃灭菌15min。
将5μL实施例2中步骤3制备的解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液点接在无机磷固体培养基上，30℃培养3d，观察菌落周围的颜色变化，然后进行如下判断：如果菌落周围有透明圈产生，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有解磷能力；否则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有解磷能力。
实验结果见图2中A。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1的菌落周围有透明晕产生，说明其具有解磷能力。
5、测量产生的透明圈和菌落的直径。
结果表明，产生的透明圈与菌落的直径比为2.00。
上述结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1具有解磷能力。
实施例5、解淀粉芽孢杆菌FH1产生铁载体能力的测定
CAS染液：将50mL a液(0.079g铬天青(chrome azurol S，CAS)溶于50mL去离子水获得)和10mL b液(0.00162g FeCl·6H2O溶于10mL HCl水溶液(浓度为12mM)获得)混合得60mL c液；将60mL c液沿烧杯壁缓缓加入40mL d液(0.069g HDTMA(十六烷基三甲基溴化胺)溶于40mL去离子水获得)混合得到100mL CAS染液，121℃灭菌15min。
0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)：每100mL去离子水中含Na2HPO4·12H2O2.427g、NaH2PO4·2H2O0.5905g、KH2PO4 0.075g、NH4Cl0.250g和NaCl0.125g，121℃灭菌15min，使用时稀释10倍。
CAS固体培养基：向适量去离子水中加入20％蔗糖溶液1mL、10％酸水解酪素3mL、1mmol/L CaCl2 100μL和1mmol/L MgSO4 2mL，用去离子水定容至100mL，加入2g琼脂后，121℃灭菌15min。冷却至60℃时，缓慢加入5mL0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)和10mL CAS染液，混合均匀后，倒入平皿，即得CAS固体培养基。
1、将实施例2中步骤3制备的解淀粉芽孢杆菌FH1菌悬液接种至CAS固体培养基上，30℃培养5d，观察菌落周围的颜色变化，然后进行如下判断：如果菌落周围有橘黄色透明晕圈产生，则解淀粉芽孢杆菌FH1具有产生铁载体的能力；否则解淀粉芽孢杆菌FH1不具有产生铁载体的能力。
实验结果见图2中B。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1的菌落周围有橘黄色透明晕圈产生，说明其具有产生铁载体的能力。
2、测量产生的橘黄色透明晕圈的直径。
结果表明，产生的橘黄色透明晕圈与菌落的直径比为2.3。
上述结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1具有产生铁载体的能力。
实施例6、解淀粉芽孢杆菌FH1对病原菌的拮抗作用
PDA固体培养基：取去皮马铃薯200g，切成小块，加入1.0L蒸馏水，煮沸30min；纱布过滤后收集滤液，向滤液中加入葡萄糖20.0g、KH2PO4 3.0g、MgSO4.7H2O1.5g、维生素B1 10μg和琼脂20.0g，调节pH值至6.0并用蒸馏水定容至1.0L，然后115℃灭菌15min。
PDA固体平板：将20mL温度为55℃左右的马铃薯固体培养基倒入培养皿，冷却后即为PDA固体平板。
禾谷镰刀菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌均记载于如下文献中：Jingjing Wang，Huiwen Zhang，Xiaoli Zhang，Shenghong Qin，Huanbo Tan，Xinyu Li.Effects of long-term chlorimuron-ethyl application on the diversity and antifungal activityof soilPseudomonasspp.in a soybean field in Northeast China.Annals ofMicrobiology.March2013，Volume 63，Issue 1，pp 335–341.
采用平板对峙法研究解淀粉芽孢杆菌FH1对禾谷镰刀菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的拮抗作用。具体步骤如下：
1、按照实施例2中步骤3的方法制备解淀粉芽孢杆菌FH1菌悬液。
2、在待测病原菌(禾谷镰刀菌、立枯丝核菌或尖孢镰刀菌)的菌落边缘用规格为1mL的无菌枪头插取直径为5mm的琼脂块，置于PDA固体平板中心。
3、完成步骤2后，将所述PDA固体平板均匀分为四等分，在每等分的中心分别点接2μL解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液，进行平板对峙实验，30℃静置培养5d，观察抑菌效果。
抑菌效果见图3(A为禾谷镰刀菌，B为立枯丝核菌，C为尖孢镰刀菌)。结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1在禾谷镰刀菌、立枯丝核菌或尖孢镰刀菌生长的平板上产生了明显的抑菌圈，解淀粉芽孢杆菌FH1对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌的抑制率(抑制率＝拮抗真菌菌落半径/无拮抗真菌菌落半径)分别为47％、41％和43％。
由此可见，解淀粉芽孢杆菌FH1对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌均具有一定的抑制效果，即解淀粉芽孢杆菌FH1具有较强的拮抗尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌和立枯丝核菌的能力，可用于制备生物农药或生防菌剂等用于防治真菌性病害(如立枯丝核菌引起的病害、尖孢镰刀菌引起的病害和禾谷镰刀菌引起的病害)。
实施例7、解淀粉芽孢杆菌FH1对黄瓜苗的促生效果
供试土壤取自天津市空港经济区。
供试黄瓜为黄瓜品种中农8号。
采用盆栽试验进行黄瓜苗的促生实验，实验重复三次取平均值，每次实验的具体步骤如下：
1、将供试土壤在阴凉避光处晾干，过筛(孔径为1mm)，然后将200g土壤装入花盆(直径为8cm)中。共装6盆。
2、完成步骤1后，将生长至7天的供试黄瓜植株(大小基本一致)移植于花盆中，每个花盆移植2株供试黄瓜植株。
3、完成步骤2后，随机选择3盆均匀添加20mL解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液(实施例2中步骤3制备)，剩余3盆均匀添加20mL无菌生理盐水(作为对照)。
4、完成步骤3后，将装有供试黄瓜植株的花盆置于人工气候培养箱，培养(28℃，14h光照培养；12℃，16h黑暗培养)50天，培养期间每隔48h均浇水30mL。
5、完成步骤4后，分别测量供试黄瓜植株的株高、供试黄瓜植株的鲜重、供试黄瓜植株的干重、茎的鲜重、茎的干重、茎的长度、根的鲜重、根的干重和根的长度。
统计结果见表1。结果表明，与施加无菌生理盐水(即对照)相比，施加解淀粉芽孢杆菌FH1的菌悬液的供试黄瓜植株的鲜重、供试黄瓜植株的干重、供试黄瓜植株的株高、茎的鲜重、茎的干重、茎的长度、根的鲜重、根的干重和根的长度均明显增加。
表1
Figure BDA0002053007820000151
实施例8、解淀粉芽孢杆菌FH1对水稻产量和品质的提升效果
将-80℃的解淀粉芽孢杆菌FH1的菌液(浓度为1010 CFU/mL)按照1％(v/v)的比例接种至100mL LB液体培养基中，30℃、180rpm振荡培养48h；之后按照5％(v/v)的比例在LB液体培养基中扩大培养；最后按照5％(v/v)的比例在装有50L工业LB液体培养基的发酵罐中培养(培养条件为：温度30℃，转速150r/min，通气量3m3/h，罐压0.05Mpa)24h，获得FH-1菌液。工业LB液体培养基为使用价格低廉、配方简单的工业酵母粉、蛋白胨配制而成。
2、解淀粉芽孢杆菌FH1对水稻产量和品质的影响
实验地点为浙江省湖州市，该地点为水稻种植区，一年2-3季。该地区气候潮湿，属亚热带季风，年平均气温16℃，年平均降雨量约为1200mm。
实验设置两个处理：
空白对照(CK)：水稻插秧期撒施尿素5kg/亩、氯化钾7-8kg/亩、有机肥80kg/亩；水稻中期撒施有机肥80kg/亩；水稻抽穗期撒施80kg/亩；
FH-1处理(FH)：水稻插秧期撒施尿素5kg/亩、氯化钾7-8kg/亩、有机肥80kg/亩，并冲施FH-1菌液2L/亩；水稻中期撒施有机肥80kg/亩，并喷施FH-1菌液2L/亩；水稻抽穗期撒施有机肥80kg/亩，并喷施FH-1菌液2L/亩。
每个处理5个重复，共10个小区，每个处理小区130平方米，采用随机设计布置实验区块。各处理施肥、浇水等管理措施均按照当地农民的习惯进行，栽培作物为水稻，品种为甬优1540。
在水稻成熟期，根据水稻成熟采样方法在每个小区中采集5株甬优1540水稻植株，利用铁锹将水稻从土壤中移出，利用尺子测量水稻的株高、根长和穗长，并统计水稻的穗数、单穗粒数、千粒重和产量。
测定水稻的垩白率。胚乳中有白色(包括腹白、心白和背白)不透明部分的米粒为垩白粒。垩白粒占试样米粒数的百分率为垩白率。
测定稻米粉的蛋白质含量，具体步骤如下：
(1)标准曲线的制作
取6支具塞试管编号，按表2加入蛋白质标准液(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司的产品)、蒸馏水和考马斯亮蓝G250溶液，摇匀，放置3min，测定在595nm波长下的吸光值。
以蛋白质含量为横坐标，相应的在595nm波长下的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
表2
Figure BDA0002053007820000161
(2)测定样品中的蛋白质含量
准确称取稻米粉0.5g，放入研钵中，加2mL浓度为0.1mol/L的NaOH水溶液，研磨10min成匀浆后转入到10mL离心管中，再用6mL浓度为0.1mol/L的NaOH水溶液分三次洗涤研钵，洗液一并转入50mL离心管中，用玻棒搅拌，放置30min，放置过程间断搅动数次。4000r/min离心15min，上清液转入50mL容量瓶中，然后再用8mL浓度为0.1mol/L的NaOH水溶液重复上述过程再洗涤样品一次。用蒸馏水定容到刻度，摇匀，得到碱溶性蛋白提取液。吸取碱溶性蛋白提取液0.1mL，放入10mL具塞刻度试管中，加5mL考马斯亮蓝G250溶液，混匀，放置2min，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色(比色空白用0.1mL蒸馏水代替提取液与5mL考马斯亮蓝G250溶液混合)，记录OD595nm值。然后根据所测OD595nm值在标准曲线上查出所对应的蛋白质浓度。
测定水稻直链淀粉含量，具体步骤如下：
(1)标准品及样品的前处理
(1-1)脱脂
分别称取直链淀粉标准品、支链淀粉标准品和粉碎后过80目筛的样品各150mg，然后用滤纸筒包好并分别置于索式抽提器中，用85％(v/v)甲醇水溶液进行脱脂，以5-6滴/s的速度回流抽提4-6h，依次得到脱脂的直链淀粉标准品、脱脂的支链淀粉标准品和脱脂的样品。
(1-2)水分校准
分别将脱脂的直链淀粉标准品、脱脂的支链淀粉标准品和脱脂的样品在培养皿中铺开，放置3-4h，待甲醇挥发后，再置于温度已达130℃恒温干燥箱内干燥3h，然后置于干燥器内冷却1h，依次得到水分校准后的直链淀粉标准品、水分校准后的支链淀粉标准品和水分校准后的样品。
(1-3)溶液的制备
准确称取水分校准后的直链淀粉标准品或水分校准后的支链淀粉标准品(100±0.5)mg，置于100mL锥形瓶中，小心加入1.0mL95％(v/v)乙醇水溶液，将粘在瓶壁上的标准品冲下；加入9.0mL浓度为1.0mol/L的氢氧化钠水溶液，轻轻摇匀，得到混合物；将混合物在沸水浴中加热10min以完全分散淀粉标准品。取出冷却到室温，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水定容并剧烈振摇混匀，得到标准溶液。直链淀粉标准溶液的浓度为1mg/mL。支链淀粉标准溶液的浓度1mg/mL。
准确称取水分校准后的样品(100±0.5)mg，置于100mL锥形瓶中，小心加入1.0mL95％(v/v)乙醇水溶液，将粘在瓶壁上的标准品冲下；加入9.0mL浓度为1.0mol/L的氢氧化钠水溶液，轻轻摇匀，得到混合物；将混合物在沸水浴中加热10min，然后冷却到室温，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水定容并剧烈振摇混匀，得到样品溶液。
取5.0mL浓度0.09mol/L的氢氧化钠水溶液，加入9.0mL浓度为1.0mol/L的氢氧化钠水溶液，轻轻摇匀，得到混合物；将混合物在沸水浴中加热10min，然后冷却到室温，转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水定容并剧烈振摇混匀，得到空白溶液。
(2)校准曲线的绘制与样品测定
系列标准液的配制：准确吸取直链淀粉标准溶液0.0、2.00、4.00、5.00、6.00、7.00mL于6个100mL容量瓶中，再准确吸取支链淀粉标准溶液18.0、16.0、14.0、13.0、12.0、11.0mL分别加入上述6个容量瓶中，再分别加入浓度为0.09mol/L的氢氧化钠水溶液2.00mL混匀，依次得到大米直链淀粉含量分别为0、10％、20％、25％、30％、35％的标准溶液系列。
校准曲线的绘制：分别准确吸取5.00mL标准溶液系列到预先加入大约50mL蒸馏水的6个100mL容量瓶中，再分别加入浓度为1.0mol/L的乙酸水溶液1.0mL，摇匀；再分别加入2.0mL碘试剂，加水至刻度，摇匀，静置10min。用空白溶液调零，在720nm处测定系列标准液的吸光度。以吸光度为纵坐标，直链淀粉含量为横坐标，绘制校准曲线。
样品测定：准确吸取5.00mL样品溶液到预先加入大约50mL蒸馏水的100mL容量瓶中，然后加入1.0mol/L的乙酸水溶液1.0mL，摇匀；再加入2.0mL碘试剂，加水至刻度，摇匀，静置10min。用空白溶液调零，在720nm处测定样品溶液的吸光度值。根据校准曲线计算被测样品中直链淀粉的含量。
结果见表3和图4。结果表明，与空白对照相比，FH-1处理的水稻植株的根长、株高、穗长、单株穗数、单穗粒数、千粒重、产量和直链淀粉含量均显著增加，垩白率显著降低。
表3
对照 解淀粉芽孢杆菌FH1菌剂 提升率(％)
根长(cm) 10.48±0.72b 16.38±2.22a 56.30
株高(cm) 113.16±3.96b 130.02±2.51a 14.90
穗长(cm) 17.16±0.26b 23.32±1.64a 35.90
单株穗数(个) 12.20±1.79b 23.00±5.24a 88.52
单穗粒数(个) 199.40±41.25b 309.00±23.23a 54.96
千粒重(g) 19.72±1.52b 22.22±1.01a 12.68
产量(Kg/亩) 550±20.00a 600±26.46a 9.09
垩白率(％) 7.60±2.88a 5.60±1.51a -26.32
蛋白含量(g) 6.38±0.29a 4.80±0.23b -24.76
直链淀粉含量(％) 15.82±0.47a 16.82±1.74a 6.32
注：不同的小写字母代表数据在不同处理组中水稻各个性质存在显著差异(P<0.05)。
实施例9、解淀粉芽孢杆菌FH1可以提高水稻的抗逆性
实验重复三次取平均值，每次重复的步骤如下：
1、将解淀粉芽孢杆菌FH1的单克隆接种至100mL LB液体培养基，30℃、180rpm振荡培养48h，得到培养菌液。
2、将大小一致、饱满的水稻品种甬优1540的种子在2％(v/v)次氯酸钠水溶液中浸泡15min，然后用去离子水清洗干净，得到洗净的种子。
3、将40粒洗净的种子置于100mL LB液体培养基，40粒洗净的种子置于100mL培养菌液，30℃、180rpm振荡培养8h，进行如下处理：
CK：从LB液体培养基中取20粒洗净的种子，置于铺有一层无菌滤纸的玻璃培养皿中，倒入20mL蒸馏水；
CK100：从LB液体培养基中取20粒洗净的种子，置于铺有一层无菌滤纸的玻璃培养皿中，倒入20mL浓度为100mmol的NaCl水溶液；
FH：从培养菌液中取20粒洗净的种子，置于铺有一层无菌滤纸的玻璃培养皿中，倒入20mL蒸馏水；
FH100：从培养菌液中取20粒洗净的种子，置于铺有一层无菌滤纸的玻璃培养皿中，倒入20mL浓度为100mmol的NaCl水溶液。
4、完成步骤3后，30℃黑暗处理(期间补充水分保持玻璃培养皿内湿度)。
分别在黑暗处理第3天和第8天，统计发芽率并按组取平均值。
在黑暗处理第8天，测定水稻幼苗的重量并按组取平均值。
实验结果见图5(A为黑暗处理第3天种子的生长状态；B为黑暗处理第3天，发芽率的统计结果；C为黑暗处理第8天，发芽率的统计结果；D为黑暗处理第8天，水稻幼苗重量的统计结果)。结果表明，盐胁迫下，与蒸馏水相比，施加培养菌液的发芽率和重量均显著增加。
上述结果表明，解淀粉芽孢杆菌FH1可将土壤中的不溶性磷溶解为有效磷，可将土壤中的不溶性钾溶解为有效钾，促进植物对磷和钾元素的吸收；具有固氮能力，能够将空气中氮气固定为有效氮，有助于植物对氮元素的吸收；可产生ACC脱氨酶，增强作物抗逆性；可提高作物的产量和品质；还能够产生铁载体、对病原真菌(如禾谷镰刀菌、立枯丝核菌、尖孢镰刀菌)具有拮抗作用，从而拮抗病原真菌，防治植物真菌性病害。由此可见，解淀粉芽孢杆菌FH1可以作为植物根际促生菌，能够促进植物生长、防治植物真菌性病害和增强植物抗逆性。
<110> 中国科学院天津工业生物技术研究所
<120> 一株解淀粉芽孢杆菌及其用途
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1393
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 1
gtcgagcgga cagatgggag cttgctccct gatgttagcg gcggacgggt gagtaacacg 60
tgggtaacct gcctgtaaga ctgggataac tccgggaaac cggggctaat accggatggt 120
tgtttgaacc gcatggttca gacataaaag gtggcttcgg ctaccactta cagatggacc 180
cgcggcgcat tagctagttg gtgaggtaac ggctcaccaa ggcgacgatg cgtagccgac 240
ctgagagggt gatcggccac actgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag 300
cagtagggaa tcttccgcaa tggacgaaag tctgacggag caacgccgcg tgagtgatga 360
aggttttcgg atcgtaaagc tctgttgtta gggaagaaca agtgccgttc aaatagggcg 420
gcaccttgac ggtacctaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa 480
tacgtaggtg gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa agggctcgca ggcggtttct 540
taagtctgat gtgaaagccc ccggctcaac cggggagggt cattggaaac tggggaactt 600
gagtgcagaa gaggagagtg gaattccacg tgtagcggtg aaatgcgtag agatgtggag 660
gaacaccagt ggcgaaggcg actctctggt ctgtaactga cgctgaggag cgaaagcgtg 720
gggagcgaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt 780
tagggggttt ccgcccctta gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta 840
cggtcgcaag actgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt 900
ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatcctct gacaatccta 960
gagataggac gtccccttcg ggggcagagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg 1020
tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgatctt agttgccagc 1080
attcagttgg gcactctaag gtgactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg 1140
tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cagaacaaag 1200
ggcagcgaaa ccgcgaggtt aagccaatcc cacaaatctg ttctcagttc ggatcgcagt 1260
ctgcaactcg actgcgtgaa gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg 1320
aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca cgagagtttg taacacccga 1380
agtcggtgag gta 1393

Claims (10)

1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.17050。
2.一种菌剂，其含有权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1 CGMCC No.17050。
3.权利要求2所述菌剂的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)FH1 CGMCC No.17050接种至细菌培养基并进行培养，获得的菌液即为菌剂。
4.解淀粉芽孢杆菌或含有解淀粉芽孢杆菌的菌剂的应用，为如下a1)-a28)的至少一种：
a1)解钾；
a2)制备具有解钾能力的产品；
a3)解磷；
a4)制备具有解磷能力的产品；
a5)固氮；
a6)制备具有固氮能力的产品；
a7)产生铁载体；
a8)制备产生铁载体的产品；
a9)调控营养元素吸收；
a10)制备调控营养元素吸收的产品；
a11)调控植物产量；
a12)制备调控植物产量的产品；
a13)调控植物品质；
a14)制备调控植物品质的产品；
a15)调控植物生长；
a16)制备调控植物生长的产品；
a17)产生ACC脱氨酶；
a18)制备产生ACC脱氨酶的产品；
a19)调控植物抗逆性；
a20)制备调控植物抗逆性的产品；
a21)调控植物抗病性；
a22)制备调控植物抗病性的产品；
a23)抑制植物病原真菌；
a24)制备抑制植物病原真菌的产品；
a25)防治植物真菌病害；
a26)制备防治植物真菌病害的产品；
a27)改良土壤；
a28)制备用于改良土壤的产品。
5.一种产品，其含有解淀粉芽孢杆菌或含有解淀粉芽孢杆菌的菌剂；所述产品的功能为a1)或a3)或a5)或a7)或a9)或a11)或a13)或a15)或a17)或a19)或a21)或a23)或a25)或a27)：
a1)解钾；
a3)解磷；
a5)固氮；
a7)产生铁载体；
a9)调控营养元素吸收；
a11)调控植物产量；
a13)调控植物品质；
a15)调控植物生长；
a17)产生ACC脱氨酶；
a19)调控植物抗逆性；
a21)调控植物抗病性；
a23)抑制植物病原真菌；
a25)防治植物真菌病害；
a27)改良土壤。
6.如权利要求4所述的应用或权利要求5所述的产品，其特征在于：
所述调控营养元素吸收为促进营养元素吸收；
所述调控植物产量为提高植物产量；
所述调控植物品质为植物品质提高；
所述调控植物生长为促进植物生长；
所述调控植物抗逆性为提高植物抗逆性；
所述调控植物抗病性为提高植物抗病性。
7.如权利要求4或6所述的应用、或、权利要求5或6所述的产品，其特征在于：
所述植物病原真菌为尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌和立枯丝核菌中的至少一种；
所述植物真菌病害为枯萎病、赤霉病、根腐病和茎腐病中的至少一种。
8.如下任一所述方法：
K1)一种提高植物产量和/或品质的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物产量和/或品质；
K2)一种提高植物抗逆性的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物抗逆性；
K3)一种提高植物抗病性的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而提高植物抗病性；
K4)一种促进植物生长的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而促进植物生长；
K5)一种促进植物营养元素吸收的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理植物，从而促进植物营养元素吸收；
K6)一种改良土壤的方法，为采用解淀粉芽孢杆菌处理土壤。
9.如权利要求4、6或7所述的应用、或、权利要求5至7任一所述的产品、或、权利要求8所述的方法，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌为权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)FH1 CGMCC No.17050。
10.如权利要求4、6、7或9所述的应用、或、权利要求5至7任一所述的产品、或、权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述植物为如下c1)至c13)中的任一种：c1)双子叶植物；c2)单子叶植物；c3)禾本科植物；c4)葫芦科植物；c5)黄瓜；c6)黄瓜品种中农8号；c7)水稻；c8)水稻品种甬优1540；c9)玉米；c10)芝麻；c11)花生；c12)棉花；c13)小麦。
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