CN111879877A - 对羟基苯甲酸甲酯在替考拉宁定量分析中的应用及使用方法 - Google Patents
对羟基苯甲酸甲酯在替考拉宁定量分析中的应用及使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种将对羟基苯甲酸甲酯作为内标物的用途，以及将其用于替考拉宁定量分析的具体方法。对羟基苯甲酸甲酯，也称尼泊金甲酯或羟苯甲酯，主要作为有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂或饲料防腐剂。本发明提供的方法以对羟基苯甲酸甲酯作为内标，该化合物性质稳定，在优化的色谱条件下，其保留时间与待测物替考拉宁TA2‑2组分有相近的保留时间和相似的提取回收率，适合在替考拉宁定量分析时作为内标物使用。
Description
技术领域
本发明涉及测量分析领域，尤其涉及到一种化合物在药物定量测定中的应用及方法，更具体地说是将对羟基苯甲酸甲酯作为内标物用于替考拉宁的定量分析。
背景技术
替考拉宁是临床常用的糖肽类抗生素，其血药浓度与临床疗效密切相关。液相色谱法是目前替考拉宁分析方法中报道最多的技术，其中内标法是色谱分析中一种比较准确的定量方法，而选择合适的内标可以提高生物样本分析方法的准确度和精密度。合适的内标应与待测物具有相近的保留时间，相似的提取回收率等色谱行为。现有文献中的内标物有哌拉西林、哌拉西林钠、克拉霉素、青霉素钠等；在患者合并用药(替考拉宁+哌拉西林/克拉霉素/青霉素)的情况下，待测血浆样本中会出现相应的干扰，使内标峰面积出现偏倚，影响内标法的使用。另外，内标物在室温下的稳定性也是需要考虑的因素之一，而哌拉西林钠在室温放置6.5小时后不稳定，在分析批次较多时需要控制加样时间。
对羟基苯甲酸甲酯，也称尼泊金甲酯或羟苯甲酯，主要作为有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂或饲料防腐剂。
发明内容
本发明的目的之一是针对现有技术的不足，提供一种将对羟基苯甲酸甲酯作为内标物的新用途，以及将其用于替考拉宁定量分析的具体方法。
本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是：
1.将对羟基苯甲酸甲酯作为内标物用于替考拉宁定量分析，其特征在于：本发明为一种优化的、以内标法检测血浆等生物样本中替考拉宁含量的液相色谱方法，选择的内标物为对羟基苯甲酸甲酯。
2.进一步的，对羟基苯甲酸甲酯内标储备液的浓度为0.01～2.5mg/ml；优选的，对羟基苯甲酸甲酯内标储备液的浓度为0.05mg/ml。
3.进一步的，样本预处理时每0.40ml样本加入0.05ml对羟基苯甲酸甲酯内标储备液，用乙腈沉淀蛋白。
4.进一步的，为测定替考拉宁TA2-2成分和对羟基苯甲酸甲酯成分，设定检测波长为215nm或240nm。
本发明的优点在于：
1.测定生物样本中替考拉宁的含量时可避免受到替考拉宁合并用药的干扰；
2.对羟基苯甲酸甲酯内标液在室温条件下48h内性质稳定，分析批次较多时也可使用。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、特征、达成目的与功效易于明白了解，进一步阐述本发明的具体实施步骤。
具体实施例
一、试剂配制：
1.替考拉宁对照品储备液：准确称取替考拉宁标准品20.0mg于10ml容量瓶中，加超纯水溶解稀释至刻度，充分混匀，配制成2mg/ml的替考拉宁标准品储备液。分装后于-80℃保存。
2.对羟基苯甲酸甲酯内标溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯5.0mg于100ml容量瓶中，加乙腈溶解稀释至刻度，充分混匀，配制成0.05mg/ml的等内标储备液，分装后于-80℃保存。
3.校准品(标准曲线试剂)：
吸取替考拉宁对照品溶液50μL，加空白血浆950μL，配制成100μg/mL溶液A。
吸取A 500μL，加入空白血浆500μL，配制成浓度为50μg/mL溶液B。
吸取B 500μL，加入空白血浆500μL，配制成浓度为25μg/mL溶液C。
吸取C 500μL，加入空白血浆500μL，配制成浓度为12.5μg/mL溶液D。
吸取D 500μL，加入空白血浆500μL，配制成浓度为6.25μg/mL溶液E。
吸取E 500μL，加入空白血浆500μL，配制成浓度为3.125μg/mL溶液F。
4.质控品：用空白血浆稀释替考拉宁对照品储备液，配制成高中低三个浓度，分别为33.3μg/mL、11.11μg/mL、3.70μg/mL，-80℃保存。
5.流动相：0.01mol/L NaH2PO4(pH＝3.3):乙腈＝75:25
二、样本预处理：
准确吸取含替考拉宁的血浆样本0.40ml，加入0.050ml内标储备液。加入乙腈：水(90％，v/v)0.600ml，剧烈震荡1min，12000r/min，离心15min，转移上清液于样品瓶中。
三、检测分析
1.适用仪器：高效液相色谱仪、紫外吸收检测器。
2.色谱条件：采用Waters Symmetry C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱；柱温：35℃；流速：1.0ml·min-1，等度洗脱。
3.检测波长：215nm。
4.测定：替考拉宁定量成分TA2-2(保留时间约为8.7min)、内标成分(保留时间约为11.4min)，按照浓度由低到高顺序测定不同浓度的标准曲线系列样品、质控品及待测样本。
5.质量控制：每1分析批样本随行1条标准曲线(7个不同浓度值校准品样本各1个)和2个质控样本(从高、中、低浓度中选择相近的2个)。质控品样本测定结果偏差应小于10％，最多允许1/3的质控品样本结果超过上述限度，但不能出现在同一浓度质控品样本中。如质控品样本测定结果不符合上述要求，则该分析批样品测试结果作废，重新检测。
6.结果计算
(1)标准曲线绘制：以TA2-2峰面积与内标峰面积的比值作为X对替考拉宁总浓度Y作线性回归分析，采用加权最小二乘法，获得回归方程。
(2)回收率的计算：高、中、低三个浓度的质控样品各五份，同时配制高、中、低三个浓度的不含血浆质控样品各五份，检测1次，计算提取回收率。根据公式“回收率(％)＝实测浓度/标示浓度×100”，结果在100±10％范围内。
(3)样本结果计算：将待测样本中TA2-2与内标物的峰面积比值代入标准曲线方程，计算样本中的替考拉宁浓度。
总结
通过优化液相色谱条件，对羟基苯甲酸甲酯与待测物替考拉宁TA2-2组分有相近的保留时间(分别约为11.4min、8.7min)和相似的提取回收率，适合在替考拉宁定量分析时作为内标物使用。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的要点，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会进一步优化，优化后的参数也包含在本发明要求保护的范围内，具体权限由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (7)
1.对羟基苯甲酸甲酯在替考拉宁定量分析中的应用及使用方法，其特征在于，提出了一种对羟基苯甲酸甲酯(又称为尼泊金甲酯)新的用途，即将其作为内标物用于替考拉宁的定量分析。
2.对羟基苯甲酸甲酯在替考拉宁定量分析中的应用及使用方法，其特征还在于，将对羟基苯甲酸甲酯作为内标物用于替考拉宁定量分析的具体使用方法包括以下步骤：
(1)配制对羟基苯甲酸甲酯内标储备液以及替考拉宁标准品、质控品；
(2)在含有替考拉宁的待测样本中加入对羟基苯甲酸甲酯内标液，进行预处理；
(3)液相色谱法测定替考拉宁TA2-2成分和对羟基苯甲酸甲酯成分。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：对羟基苯甲酸甲酯内标储备液的浓度为0.01～2.5mg/ml。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：对羟基苯甲酸甲酯内标储备液的浓度为0.05mg/ml。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：样本预处理时每0.40ml血浆样本加入0.05ml对羟基苯甲酸甲酯内标储备液，用乙腈沉淀蛋白。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：液相色谱法测定时可用的仪器包括高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：液相色谱法设定的检测波长为215nm或240nm。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20201103 |