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CN111836880B - 番茄病原性真菌的检测装置及使用了该检测装置的检测方法 - Google Patents

番茄病原性真菌的检测装置及使用了该检测装置的检测方法 Download PDF

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CN111836880B CN201980018500.9A CN201980018500A CN111836880B CN 111836880 B CN111836880 B CN 111836880B CN 201980018500 A CN201980018500 A CN 201980018500A CN 111836880 B CN111836880 B CN 111836880B
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Abstract

本公开提供简易并且可靠的、番茄病原性真菌的选择性检测装置和检测方法。本公开涉及的番茄病原性真菌的检测装置，其特征在于，具有：人工细胞壁；设置在上述人工细胞壁的上部的试验试样液投入部；以及设置在上述人工细胞壁的下部的培养液储存部，在上述培养液储存部中，培养液包含15～30mM的柠檬酸盐缓冲液，并且上述培养液的pH值为5～5.5。

Description

番茄病原性真菌的检测装置及使用了该检测装置的检测方法
技术领域
本发明涉及番茄病原性真菌的检测装置以及使用了该检测装置的选择性检测方法。
背景技术
关于植物病原性真菌，作为与植物侵入性有关的性质，具有在植物表面形成附着器而附着后，寻找气孔组织等细孔并从这里将菌丝伸到植物体中，或从菌丝分泌植物细胞壁分解酶(纤维素酶、果胶酶)等特征。
利用这些特征，例如，在专利文献1中公开了使用微多孔膜支持体的真菌计量方法。此外，在非专利文献1中公开了：作为植物病原性卵菌的1种的大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)的假菌丝好像试图向下潜入而非水平地生长，并且贯通具有3μm的孔的PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)膜。
此外，着眼于该性质，本发明人等已经提出了植物病原性卵菌类的判定方法(专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2005-287337号公报
专利文献2：日本专利第6167309号公报
专利文献3：国际公开第2018/011835号
非专利文献
非专利文献1：Paul F.Morris.et.al.“Chemotropic and Contact Responses ofPhytophthora sojae Hyphae to Soybean Isoflavonoids and ArtificialSubstrates”，Plant Physiol.(1998)117：1171-1178
非专利文献2：Noboru Shirane et al.，”Mineal Salt Medium for the Growthof Botrytis cinerea in vitro”，Ann.Phytopath.Soc.Japan 53：191-197(1987)
发明内容
发明所要解决的课题
对于作为本发明的对象植物的番茄，由真菌引起的病害的比率高，成为其原因的病原性真菌可以说以番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、番茄煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、番茄黄褐钉孢(Passalora fulva)这3种占大部分。关于这些病原性真菌，灰葡萄孢(Botrytis cinerea)具有多犯性，也感染其它植物，但煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、和黄褐钉孢(Passalora fulva)只有番茄的感染例，是植物特异性高的病原性真菌。本发明者们认为，对于这些也可以说是对番茄特异性的病原性真菌，需要在不清楚实际的番茄的叶中存在哪种菌的阶段，即发病前阶段检测番茄病原性真菌并进行了研究。
另一方面，作为专利文献2所记载那样的本发明人等使用的选择性真菌检测的基本技术的使用了人工细胞壁的病原性真菌的挑选技术具有“只要是植物病原菌就不限于番茄病原性真菌而检测到”的可能性。即，假设其它植物的病原性真菌附着于番茄的叶，则可能将其作为番茄病原性真菌而检测到。番茄栽培大部分不是从种子而是从苗栽培，在苗圃场，因为与其它植物混栽、相同设施中的多种植物的共用等，因此不能否定除番茄病原性真菌以外的植物病原性真菌对番茄苗的附着可能性。此外，即使在实际的栽培现场、塑料大棚等栽培设施中，也与上述苗圃场相同地，具有番茄以外的植物的病原性真菌对番茄苗的附着可能性。如果对其置之不理，则番茄病原性真菌以外的植物病原性真菌可能在使用了人工细胞壁的病原性真菌的挑选技术中提示假阳性，有时不必要的投药、苗更新等栽培方面产生很大问题。
对发生该假阳性的可能性进行了研究/调查，结果，实际上，在番茄病原性真菌以外的真菌中，在研究途中的使用了人工细胞壁的检测方法中，遭遇到提示假阳性的真菌。它们是双座炭壳菌属(Biscogniauxia属)真菌、青霉属(Penicillium属)真菌、茎点霉属(Phoma属)真菌、木霉属(Trichoderma属)真菌这4种，需要进行为了不检测它们的研究。
本发明是鉴于这样的情况而提出的，其目的是提供番茄病原性真菌的选择性检测装置和检测方法。
用于解决课题的方法
本发明人等进行了深入研究，结果发现，通过下述构成的检测装置能够解决上述课题，基于这样的认识而进一步反复进行了研究，从而完成了本发明。
即，本发明的一个方案涉及的番茄病原性真菌的检测装置的特征在于，具有：人工细胞壁；设置在上述人工细胞壁的上部的试验试样液投入部；以及设置在上述人工细胞壁的下部的培养液储存部，在上述培养液储存部中，培养液包含15～30mM的柠檬酸盐缓冲液，并且上述培养液的pH值为5～5.5。
发明的效果
根据本发明，可以提供能够简易并且安全地选择性地检测番茄病原性真菌的装置和方法。通过本发明，可以在由番茄病原性真菌引起的发病前阶段检测菌的存在，此时，可以避免由除番茄以外的植物病原菌引起的假阳性的提示，因此在产业利用上是非常有用的。
附图说明
图1为显示本实施方式的检测装置的一例的概略截面图。
图2为显示本实施方式的检测装置所具备的人工细胞壁的一例的概略截面图。
图3为显示本实施方式的检测装置的一例的概略截面图。
图4为显示番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea)贯通了人工细胞壁的情形的人工细胞壁背面的显微镜照片。
图5为显示比较例1的结果的图。
图6为显示比较例2的结果的图。
图7为显示比较例3的结果的图。
图8为显示实施例1的结果的图。
具体实施方式
以下，对本发明涉及的实施方式具体地说明，但本发明不限定于此。
本实施方式涉及的、检测番茄病原性真菌的装置1如图1所示，其特征在于，具有：人工细胞壁2；设置在上述人工细胞壁2的上部的试验试样液投入部3；以及设置在上述人工细胞壁2的下部的培养液储存部4，在上述培养液储存部4中，培养液5包含15～30mM的柠檬酸盐缓冲液，并且，上述培养液的pH值为5～5.5。
试验试样液投入部3为用于投入试验试样液的容器，期望该容器在上端具备凸缘。而且，试验试样液投入部3的底面由人工细胞壁2形成。
人工细胞壁2如图2所示，优选至少具备具有贯通孔22的基板21、和设置在上述基板21的一面的纤维素膜23。通过使用这样的人工细胞壁，从而选择性地检测作为目标的番茄病原性真菌变得更容易。
上述贯通孔22从基板21的表面侧的面贯通到背侧的面，该贯通孔的孔径优选为2～7μm(截面积4.5～38.5μm2)。通过孔径为上述范围，从而可以更可靠地选择性地检测目标的病原性真菌。
此外，为了更可靠地选择性地检测目标的病原性真菌，优选也调整纤维素膜23的厚度。具体而言，纤维素膜23的厚度优选为0.5～2μm。
在本实施方式的人工细胞壁2中，通过将基板21的贯通孔22的孔径和纤维素膜23的膜厚如上述范围那样调整，从而番茄非病原性真菌不贯通纤维素膜23的情况多，因此可以认为能够将番茄非病原性真菌的一部分在该阶段排除。另一方面，在本实施方式中作为目标的番茄病原性真菌选择性地出现在基板的背面。
此外，上述基板21的厚度没有特别限定，作为一例，优选为5～150μm左右。
如图1所示，向试验试样液投入部3的内部供给试验试样液。在该试验试样液含有番茄病原性真菌的情况下，在基板21的表面侧的面上存在番茄病原性真菌。
在本实施方式中，试验试样液为包含主要附着于番茄的叶的真菌的液体(菌回收液)，只要是具有包含目标的病原性真菌的可能性的液体，就没有特别限定。例如为为了洗涤番茄的叶而使用后的液体、浸渍了番茄的叶的液体，可举出水、生理盐水、表面活性剂配合水(Tween80 0.01～0.1％)等。
本实施方式的检测装置作为目标的番茄病原性真菌优选为选自番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、番茄煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、和番茄黄褐钉孢(Passalora fulva)中的至少一种。
此外，本实施方式的检测装置优选不检测出有时存在于番茄叶但作为番茄非病原性真菌的真菌的、例如双座炭壳菌属(Biscogniauxia属)真菌、青霉属(Penicillium属)真菌、茎点霉属(Phoma属)真菌、和木霉属(Trichoderma属)真菌。更具体而言，上述番茄非病原性真菌为海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicilliumolsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
另外，在本说明书中，术语“番茄病原性”是指对番茄具有病原性。术语“番茄非病原性”是指对番茄不具有病原性。即使真菌具有病原性，只要对番茄不具有病原性，则该真菌是“番茄非病原性”。换言之，只要真菌对番茄不产生不良影响，则该真菌是“番茄非病原性”。术语“番茄非病原性”所包含的前缀“非”不修饰“番茄”，前缀“非”修饰“病原性”。
在本实施方式的检测装置中，在设置在上述人工细胞壁2的下部的培养液储存部4中加入培养液5。作为培养液5，只要是可以培养真菌的培养液，就没有特别限定，可以使用一般的培养基、培养液。例如，能够使用作为一般的真菌培养用培养基的马铃薯葡萄糖培养基、沙氏葡萄糖培养基等。另外，为了加速真菌的培养，不仅可以在培养液储存部4中添加培养液，也可以在上述试验试样液中添加培养液。
在本实施方式中，该培养液5的pH值为5～5.5，并且，培养液5包含15～30mM的柠檬酸盐缓冲液是重要的。通过这样的构成，在病原性真菌的检测中可以排除显示假阳性的妨碍菌(番茄非病原性真菌)，能够选择性地检测目标的番茄病原性真菌。
如果上述培养液5的pH值小于5，或超过5.5，则可能不能够将妨碍番茄病原性真菌的检测的番茄非病原性真菌全部排除。此外，如果上述培养液5所包含的柠檬酸盐缓冲液的浓度小于15mM，则可能不能够将妨碍番茄病原性真菌的检测的番茄非病原性真菌全部排除。另一方面，如果上述柠檬酸盐缓冲液的浓度超过50mM，则可能连作为目标的番茄病原性真菌的一部分或全部也排除。
上述柠檬酸盐没有特别限定，但优选为柠檬酸一价盐，更具体而言，优选为柠檬酸钠和柠檬酸钾等。
进一步，在上述试验试样液中，EC(电导率)通常优选为2～4mS/cm左右。
对于本实施方式的检测装置，通过在经过了一定培养期间后，观察在上述人工细胞壁2的纤维素膜23的背面是否出现番茄病原性真菌，来检测试样中有无番茄病原性真菌。观察的方法没有特别限定，例如，如图3所示，可以将显微镜6配置在人工细胞壁2的下部，通过该显微镜6进行光学观察。
真菌的培养期间没有特别限定，但优选为72小时以上。此外，关于培养温度，优选为20～28℃左右。
进一步，在本发明中包含番茄病原性真菌的检测方法，其包含下述步骤：使用上述那样的检测装置，选择性地检测番茄病原性真菌。
本实施方式的番茄病原性真菌的检测方法只要使用上述检测装置，就对其它工序没有特别限定，例如包含下述工序：向上述检测装置的试验试样液投入部3投入试验试样液的工序；将试验试样液在检测装置内静置的工序(进行培养的工序)；静置后，对上述检测装置的人工细胞壁2(纤维素膜23)的背面进行观察的工序；以及在上述纤维素膜23的背面观察到真菌的情况下，判定为上述试验试样液包含番茄病原性真菌的工序。
本说明书如上所述公开了各种方案的技术，但以下汇总其中的主要技术。
本发明的一个方案涉及的番茄病原性真菌的检测装置的特征在于，具有：人工细胞壁；设置在上述人工细胞壁的上部的试验试样液投入部；以及设置在上述人工细胞壁的下部的培养液储存部，在上述培养液储存部中，培养液包含15～30mM的柠檬酸盐缓冲液，并且上述培养液的pH值为5～5.5。
通过这样的构成，可以提供能够简易并且安全地选择性地检测番茄病原性真菌的装置和方法。
进一步，在上述检测装置中，优选上述人工细胞壁至少具备具有孔径2～7μm的贯通孔、并且厚度5～150μm的基板、和设置在该基板的一面的厚度0.5～2μm的纤维素膜。由此，可以认为能够更可靠地获得上述效果。
此外，在上述检测装置中，上述柠檬酸盐优选为选自柠檬酸钠和柠檬酸钾中的至少一种。由此，可以认为能够更可靠地获得上述效果。
进一步，在上述检测装置中，作为检测对象的番茄病原性真菌优选为选自番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、番茄煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、和番茄黄褐钉孢(Passalora fulva)中的至少一种。在那样的情况下，可以认为能够更加发挥上述效果。
此外，上述检测装置优选不检测出有时存在于番茄叶但作为番茄非病原性真菌的双座炭壳菌属(Biscogniauxia属)真菌、青霉属(Penicillium属)真菌、茎点霉属(Phoma属)真菌、和木霉属(Trichoderma属)真菌。在那样的情况下，可以认为能够更加发挥上述效果。
上述番茄非病原性真菌更优选为海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)或棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
本发明的另一方案涉及的番茄病原性真菌的检测方法，其特征在于，包含下述工序：使用上述检测装置，选择性地检测番茄病原性真菌。
以下，通过实施例进一步具体地说明本发明，但本发明的范围不限定于此。
实施例
[真菌类的调制]
(灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的培养)
作为番茄病原菌的一种且为番茄灰霉病的病原性真菌的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)被接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(DifcoTM Potato Dextrose Agar)。接着，培养基在摄氏25度的温度下静置1周。灰葡萄孢(Botrytis cinerea)由属于岐阜大学应用生物科学部的清水准教授提供。然后，将菌丝充分生长了的灰葡萄孢(Botrytis cinerea)培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基在黑光照射下放置4天以上后，在室温环境放置2周以上，促进了孢子形成。在进行了上述处理的灰葡萄孢(Botrytis cinerea)培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基中滴加数ml灭菌纯水，用铂环、笔等擦蹭菌丝表面，获得了破碎菌丝/孢子混合悬浮液。
(煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)的培养)
作为番茄病原菌的一种且为番茄煤霉病的病原性真菌的煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)被接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基。接着，将培养基在摄氏28度的温度下静置1周。煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)由国立研究開発法人農業·食品産業技術総合研究機構遺伝資源センター(国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构遗传资源中心)分售(MAFF No.306728)。然后，将煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)菌丝从马铃薯葡萄糖琼脂培养基移植到牛蒡粉末琼脂培养基，进一步，在摄氏28度的温度下静置1～2周，菌丝再次充分生长后，将菌丝表面用铂环、笔等擦蹭等施与机械压力，然后，在黑光照射下放置4天以上后，在室温环境放置2周以上，再次促进了孢子形成。在进行了上述处理的煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)培养牛蒡粉末琼脂培养基中滴加数ml灭菌纯水，用铂环、笔等擦蹭菌丝表面，获得了破碎菌丝/孢子混合悬浮液。
(黄褐钉孢(Passalora fulva)的培养)
作为番茄病原菌的一种且为番茄叶霉病的病原性真菌的黄褐钉孢(Passalorafulva)被接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基。接着，将培养基在摄氏23度的温度下静置1～2周。黄褐钉孢(Passalora fulva)由国立研究開発法人農業·食品産業技術総合研究機構遺伝資源センター(国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构遗传资源中心)分售(MAFF No.726744)。然后，在菌丝充分生长了的黄褐钉孢(Passalora fulva)培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基中滴加数ml灭菌纯水，用铂环、笔等擦蹭菌丝表面，获得了破碎菌丝/孢子混合悬浮液。
(海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicilliumolsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)、和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)的培养)
将不是番茄病原菌但存在于番茄叶的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)从番茄叶采集、分离后，接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基。从多个场所取作为分离源的番茄。分离方法是，将采集的番茄叶数片与由包含0.1％的表面活性剂Tween80(SIGMA-ALDRICH)的生理盐水构成的菌回收液一起投入到透明的树脂容器或树脂袋中，搅拌1分钟而将附着于叶的菌向菌回收液移动，将该菌回收液稀释，通过平板琼脂涂抹法涂布于包含链霉素硫酸盐(Wako)100mg/L的马铃薯葡萄糖琼脂培养基后，在摄氏25度下培养数天，将出现的真菌菌落分离。鉴定委托(一般财团法人)日本食品分析センター多摩研究所(日本食品分析中心多摩研究所)。将接种于上述离析后马铃薯葡萄糖琼脂培养基的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)在摄氏25度的温度下静置1周。然后，在菌丝充分地生长了、或充分形成了孢子的这4个菌种培养马铃薯葡萄糖琼脂培养基中滴加数ml灭菌纯水，用铂环、笔等擦蹭菌丝表面，获得了破碎菌丝/孢子混合悬浮液。
[人工细胞壁的调制]
检测装置中的人工细胞壁如下准备。
首先，将纤维素(SIGMA-ALDRICH，商品名：Avicel PH-101)溶解于离子液体，调制出具有1％的浓度的纤维素溶液。离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑氯化(1-Butyl-3-methyl imidazolium chloride)(SIGMA-ALDRICH制)。该纤维素溶液被加热到摄氏60度，接下来，通过旋转涂布法在30秒、2000rpm的旋转速度的条件下涂布纤维素溶液于底面具有聚对苯二甲酸乙二醇酯膜的容器(Millipore，商品名：Millicell PISP12R 48)的背面。上述聚对苯二甲酸乙二醇酯膜作为图2的人工细胞壁中的基板21起作用，随机具有直径3μm的多个贯通孔。这样操作，在聚对苯二甲酸乙二醇酯膜的背侧的面形成具有0.5微米的厚度的纤维素膜。
将在该底面的聚对苯二甲酸乙二醇酯膜背面形成了纤维素膜的容器在乙醇中在室温下静置12小时。这样操作，将1-丁基-3-甲基咪唑氯化(1-Butyl-3-methylimidazolium chloride)置换为乙醇并除去后，最后在真空干燥器内干燥。这样操作，获得了在本实施例/比较例中供试的人工细胞壁。
[番茄病原性真菌的检测装置的调制]
将作为上述人工细胞壁的、在底面的聚对苯二甲酸乙二醇酯膜(基板)背面形成了纤维素膜的容器叠加于培养基容器(培养液储存部)，制成番茄病原性真菌的检测装置。培养基容器为24孔平底培养板(Corning Incorporated，商品名：24Well Cell ClutureCluster Flat Bottom)，在培养基容器与人工细胞壁形成容器之间，以接触人工细胞壁形成容器的背面的方式填充了液体的培养基(培养液)600μL。该液体的培养基为稀马铃薯葡萄糖液体培养基(DifcoTM Potato Dextrose Broth 2.4g/L水溶液)。
[实施例1]
在上述人工细胞壁形成容器的内部分别添加包含200个灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、黄褐钉孢(Passalora fulva)、海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)的菌丝片和孢子的、破碎菌丝/孢子混合悬浮液，将灭菌纯化水以与上述获得的破碎菌丝/孢子混合悬浮液的合计体积成为200μL的方式添加，获得了试验试样液。
此外，在上述调制的检测装置的培养液中，将柠檬酸钠缓冲液以浓度成为20mM的方式调整而添加。添加后的培养液储存部的内部的含有柠檬酸钠缓冲液的稀马铃薯葡萄糖液体培养基(培养液)为pH 5.3，EC3.1mS/cm。
进而，将添加了上述7种真菌的试验试样液配置于上述检测装置，将该检测装置在摄氏25度的温度下静置72小时。然后，通过经由了光学显微镜的目视来计数贯通上述人工细胞壁而在其背面观察到的菌丝的数目。将利用光学显微镜观察的照片的一例(番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea))示于图4中。
[比较例1]
在培养液中不添加柠檬酸钠缓冲液，而直接使用了稀马铃薯葡萄糖液体培养基，除此以外，与实施例1同样地操作而进行了试验。
[比较例2]
在上述调制的检测装置的培养液中，将柠檬酸钠缓冲液以浓度成为10mM的方式调整而添加，除此以外，与实施例1同样地操作而进行了试验。培养液的pH值为5.4，EC为1.7mS/cm。
[比较例3]
在上述调制的检测装置的培养液中，将柠檬酸钠缓冲液以浓度成为60mM的方式调整而添加，除此以外，与实施例1同样地操作而进行了试验。培养液的pH值为5.5，EC为12mS/cm。
[考察]
将比较例1的结果示于图5中，将比较例2的结果示于图6中，将比较例3的结果示于图7中，将实施例1的结果示于图8中。
在培养液中不添加柠檬酸钠缓冲液的比较例1(图5)中，作为有时存在于番茄叶但应该由检测排除的番茄非病原性真菌的海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phoma multirostrata)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)这4种、与应该检测出的番茄病原性真菌的煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、黄褐钉孢(Passalora fulva)这3种在全部没有差别的状态下观察到人工细胞壁贯通菌丝，在本比较例中不能进行番茄病原性真菌的选择性检测。
此外，在比较例2(图6)中，也是作为番茄非病原性真菌的1种的棘孢木霉(Trichoderma asperellum)与应该检测出的番茄病原性真菌的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、黄褐钉孢(Passalora fulva)这3种在没有差别的状态下观察到人工细胞壁贯通菌丝，在比较例2中也不能排除全部妨碍菌，不能进行番茄病原性真菌的选择性检测。
进一步，在比较例3(图7)中，供试的7个菌种全部观察不到人工细胞壁贯通菌丝，由于连应该检测到的番茄病原性真菌也排除，因此不能进行番茄病原性真菌的选择性检测。
与此相对，在作为实施例结果的图8中，作为番茄病原性真菌的灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、煤污假尾孢(Pseudocercospora fuligena)、和黄褐钉孢(Passalorafulva)比有时存在于番茄叶但应该由检测排除的番茄非病原性真菌、海双座炭壳菌(Biscogniauxia maritima)、奥尔森青霉(Penicillium olsonii)、多喙茎点霉(Phomamultirostrata)、和棘孢木霉(Trichoderma asperellum)这4种更早地观察到人工细胞壁贯通菌丝，确认到在实施例1中能够进行番茄病原性真菌的选择性检测。
产业可利用性
本公开的番茄病原性真菌的检测装置可以排除显示假阳性的番茄非病原性真菌而选择性地检测目标的番茄病原性真菌。因此，本公开的检测装置可以在对番茄产生不良影响的番茄病原性真菌的排除、以及与番茄有关的农业等技术领域中适合地利用。
符号的说明
1 检测装置
2 人工细胞壁
3 试验试样液投入部
4 培养液储存部
5 培养液
6 显微镜
21 基板
22 贯通孔
23 纤维素膜。

Claims (4)

1.一种番茄病原性真菌的检测装置，其特征在于，具有：人工细胞壁；设置在所述人工细胞壁的上部的试验试样液投入部；以及设置在所述人工细胞壁的下部的培养液储存部，
所述人工细胞壁至少具备：
具有孔径为2～7μm的贯通孔、并且厚度为5～150μm的基板，以及
设置在该基板的一面的厚度为0.5～2μm的纤维素膜，在所述培养液储存部中，培养液为包含20mM的柠檬酸钠缓冲液的稀马铃薯葡萄糖液体培养基，并且所述培养液的pH值为5.3，所述培养液的电导率即EC为3.1mS/cm；
所述培养液储存部中的培养液与所述人工细胞壁接触。
2.权利要求1所述的番茄病原性真菌的检测装置的用于检测番茄病原性真菌的用途，作为检测对象的番茄病原性真菌为选自番茄灰葡萄孢即Botrytis cinerea、番茄煤污假尾孢即Pseudocercospora fuligena、和番茄黄褐钉孢即Passalora fulva中的至少一种。
3.权利要求1所述的番茄病原性真菌的检测装置的用于检测番茄病原性真菌的用途，其不检测作为番茄非病原性真菌的、海双座炭壳菌即Biscogniauxia maritima、奥尔森青霉即Penicillium olsonii、多喙茎点霉即Phoma multirostrata和棘孢木霉即Trichoderma asperellum。
4.一种番茄病原性真菌的检测方法，其包含下述步骤：使用权利要求1所述的检测装置，选择性地检测番茄病原性真菌，
作为检测对象的番茄病原性真菌为选自番茄灰葡萄孢即Botrytis cinerea、番茄煤污假尾孢即Pseudocercospora fuligena、和番茄黄褐钉孢即Passalora fulva中的至少一种，
其不检测作为番茄非病原性真菌的、海双座炭壳菌即Biscogniauxia maritima、奥尔森青霉即Penicillium olsonii、多喙茎点霉即Phoma multirostrata和棘孢木霉即Trichoderma asperellum。
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