CN111836795A - 作为抗炎剂、免疫调节剂和抗增殖剂的新型钙盐多晶型物 - Google Patents

Abstract

本发明主题是一种式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中所述式I的化合物或其溶剂化物和/或水合物与钙的摩尔比为2±0.3。本发明的主题尤其是一种式I的化合物或其溶剂化物和/或水合物，其特征为X射线粉末衍射图形在以下所示值±0.2处具有以2θ度表示的特征峰：2θ＝5.91°、9.64°、16.78°、17.81°、19.81°、25.41°。本发明尤其是指抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的新型多晶型物、它们的生产方法、包含它们的药用组合物和它们在疾病的治疗和预防中的用途，尤其是它们在抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)中具有益处的疾病中的用途。

Description

作为抗炎剂、免疫调节剂和抗增殖剂的新型钙盐多晶型物

技术领域和背景技术

本发明的主题是一种式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中所述式I的化合物或其溶剂化物和/或水合物与钙的摩尔比为2±0.3。本发明的主题尤其是一种式I的化合物或其溶剂化物和/或水合物，其特征在于具有在下示值±0.2处以2θ度表示的特征峰的X射线粉末衍射图形：2θ＝5.91°、9.64°、16.78°、17.81°、19.81°、25.41°。本发明尤其是指抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物新型多晶型物、它们的生产方法、包含它们的药用组合物和它们在治疗和预防疾病中的用途，尤其是它们在抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)中提供益处的疾病中的用途。相关疾病的实施例在下文给出。

炎症性肠病(IBD)是一组结肠和小肠的炎症性疾病。克罗恩氏病和溃疡性结肠炎为其主要类型。克罗恩氏病可影响小肠和大肠，以及口腔、食道、胃和肛门。溃疡性结肠炎主要影响结肠和直肠。

类风湿性关节炎(RA)是一种在老年人中相当常见的疾病。用例如非甾类抗炎剂作为常规药物的治疗不理想。鉴于尤其在发达西方国家或在日本日益增加的人口老龄化，迫切需要开发治疗RA的新药。

WO 2003/006425描述了某些特定化合物，可用于治疗和预防其中抑制二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)有利的疾病。但是，其没有公开根据本发明的特定的盐。WO 2012/001148描述了所述化合物的钙盐。但是，没有公开根据本发明的特定多晶型物。

WO 99/38846和EP 0646578公开了据报道对RA的治疗有用的化合物。

一种以新作用机制对抗类风湿性关节炎的药物，来氟米特(leflunomide)，由Aventis公司以商标ARAVA投入市场[EP 780128，WO 97/34600]。来氟米特具有免疫调节和抗炎的性能[EP 217206，DE 2524929]。作用机制是基于对二氢乳清酸脱氢酶(DHODH，一种嘧啶生物合成酶)的抑制。

De Julian-Ortiz(J.Med.Chem.1999,42,3308-3314)描述了有环戊烯酸部分的某些潜在抗疱疹化合物。

DE 3346814A1描述了用于治疗、预防和改善与脑功能障碍有关的疾病和由其引发的症状的某些碳酸酰胺衍生物。

在人体中，DHODH催化尤其对于细胞代谢而言必需的嘧啶的合成。DHODH的抑制导致代谢激活的细胞中敏感基因的转录受阻，然而正常代谢活性的细胞从嘧啶补救途径得到所需的嘧啶结构砌块且表现出正常的转录活性。与激活淋巴细胞有关的疾病依赖于从头嘧啶合成且对于DHODH抑制的反应特别敏感。一些抑制DHODH的物质是治疗慢性炎性疾病和自免疫疾病的重要药物。

一种名为来氟米特(ARAVA)的化合物成为了第一个被批准的DHODH抑制剂且用于人类疾病的治疗，尤其是类风湿性关节炎的治疗。WO 99/45926是另一个参考文献，其公开了作为DHODH抑制剂的化合物。另一种靶向DHODH的药物是特立氟胺

是来氟米特的代谢产物。特立氟胺在一些国家被批准用于多发性硬化的治疗。

JP-A-50-121428公开了作为除草剂的N-取代的环戊烯-1,2-二羧酸单酰胺类和它们的合成。例如，通过将1-环戊烯-1,2-二羧酸酐和4-氯苯胺反应产生N-(4-氯苯基)-1-环戊烯-1,2-二羧酸单酰胺。

在Journal of Med.Chemistry,1999,第42卷,第3308-3314页中，描述了新的潜在抗疱疹化合物的虚拟组合合成和计算筛选。在3313页的表3中呈现了2-(2,3-二氟苯基氨基甲酰基)-1-环戊烯-1-羧酸、2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)-1-环戊烯-1-羧酸和2-(2,3,4-三氟苯基氨基甲酰基)-1-环戊烯-1-羧酸的关于IC₅₀和细胞毒性的实验结果。

DE 3346814和US 4661630公开了羧酸酰胺类。这些化合物对于伴有脑功能障碍的疾病的治疗有用且也有抗溃疡、抗哮喘、抗炎和降低胆固醇的活性。

EP 0097056、JP 55157547、DE 2851379和DE 2921002中描述了四氢邻氨甲酰苯甲酸衍生物。

发明内容

本发明的一个目的是提供有效制剂，具体地以它们的钙盐的某些多晶型物的形式，所述制剂可用于治疗需要抑制DHODH的疾病。

本发明的另一个目的在于提供化合物，所述化合物在与WO 2003/006425和WO2012/001148中公开的化合物相似的范围内抑制DHODH，且同时显示白色以便于双盲安慰剂对照临床研究。

本发明的另一个目的在于提供化合物和包含所述化合物的组合物，所述化合物在与WO 2003/006425和WO 2012/001148中公开的化合物相似的范围内抑制DHODH，且其特征为THF含量在720ppm以下，以与欧洲药品管理局的指南(例如，2016年12月的第6版；EMA/CHMP/ICH/82260/2006)相适应。

具体地，之前已发现本文下文所示的通式(I)的某些化合物，例如2-(3-氟-3’-甲氧基-联苯-4基氨基甲酰基)-环戊-1-烯羧酸(INN维多莫司)，呈现出良好的抗炎活性且已经解决了它们在治疗例如类风湿性关节炎或炎症性肠病等自免疫疾病的口服疗法中的可用性(usability)。

因此，提供了一种被称为多晶型物A的钙-维多莫司的新型白色多晶型物，所述多晶型物对DHODH尤其是人类DHODH有抑制作用。此外，提供了一种包含所述被称为多晶型物A的钙-维多莫司的白色多晶型物的组合物，其特征为四氢呋喃(THF)的含量低于720ppm。

本发明涉及根据式(I)的2-({3-氟-3’-甲氧基-[1,1’-联苯]-4-基}氨基甲酰基)环戊-1-烯-1-羧酸)(CAS-No 717824-30-1)或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体钙盐。

因此，本发明的主题是维多莫司与钙的摩尔比为2±0.3的维多莫司的白色晶体钙盐，或其溶剂化物和/或水合物。与EP 2588446B1中描述的浅黄色多晶型物(例如实施例4)不同，本发明的主题是白色的。

白色晶体可被定义为有类似于RAL色号RAL9010的纯白色晶体，与美国联邦标准595色号“白色506”、#27885相同或类似。

本发明所有实施方案的溶剂化物可选自乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、THF、水。在本发明所有实施方案的一个优选实施方案中，所述溶剂化物是水合物。在本发明所有实施方案的一个优选实施方案中，所述溶剂化物是钙二水合物。

本发明的主题尤其是根据式(I)的化合物(维多莫司)的钙盐或其溶剂合物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，所述化合物的特征在于具有在下示值±0.2处的以2θ度表示的特征峰的X射线粉末衍射图形：

2θ＝5.91°、9.64°、16.78°、17.81°、19.81°、25.41°。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是根据式(I)的化合物(维多莫司)的钙盐(钙-维多莫司)或其水合物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其具有在下示值±0.2处的2θ的特征峰如下表所示：

在本申请中提到的所有2θ值涉及来自铜Kα源的X射线辐射的波长。因此，所述2θ值通过Cu K-α；0.15418nm的辐射波长得到。

表1：钙-维多莫司多晶型物A的峰列表

在一个具体实施方案中，本发明的主题是钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于如图1所示的X射线粉末衍射图形。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1644、1624、1617、1532、1449、1338的FT拉曼吸收光谱，所述光谱如图2所示。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1980、1659、1584、1335、1145的IR吸收光谱，所述光谱如图3所示。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以ppm表示的特征峰15.2、8.3、7.6、7.5、7.4、7.2、6.8、3.8、2.7、1.6的¹H-NMR谱图。所述谱图如图4所示。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其为维多莫司与水的摩尔比为1:1的水合物。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是一种药用配制物，所述药用配制物中包含钙-维多莫司的白色晶体多晶型物A或可从钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物获得，优选地可从维多莫司的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物获得，例如通过下文更加详述的方法可从维多莫司的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物B获得。

这是第一次使提供含有少于720ppm THF的包含维多莫司钙盐多晶型物的药用配制物或组合物成为可能。

因此，在一个具体实施方案中，本发明的主题是包含维多莫司多晶型物的药用配制物或组合物，其THF含量少于720ppm THF、优选地少于650ppm、优选地少于600ppm、优选地少于500ppm、优选地少于400ppm、优选地少于300ppm、优选地少于250ppm、优选地少于200ppm、优选地少于100ppm。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是一种药用配制物，所述药用配制物中包含钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物，所述钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物可从钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物获得，优选地可从维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物获得，例如，可通过下文更加详述的方法从维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物B获得，其中所述药用配制物的THF含量少于720ppm，优选地少于650ppm、优选地少于600ppm、优选地少于500ppm、优选地少于400ppm、优选地少于300ppm、优选地少于250ppm、优选地少于200ppm、优选地少于100ppm。

本发明的主题是根据本发明的钙-维多莫司的白色晶体多晶型物A或根据本发明的药用配制物，其作为药物的用途。

本发明的主题是根据本发明的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物A或根据本发明的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：风湿病，急性免疫病，自身免疫病，由恶性细胞增殖引起的疾病，炎性疾病，人和动物中由原生动物感染引起的疾病，由病毒感染和卡氏肺孢子虫引起的疾病，纤维化，葡萄膜炎，鼻炎，哮喘或关节病。

本发明的主题是根据本发明的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物A或根据本发明的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：其中疾病和治疗适应症选自移植物抗宿主和宿主抗移植物反应、类风湿性关节炎、银屑性关节炎、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化症、红斑狼疮、狼疮性肾炎、炎症性肠病、1型糖尿病、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、原发性胆管炎和银屑病。在本发明的一个具体实例中，所述患者患有炎症性肠病，尤其是溃疡性结肠炎和克罗恩氏病。

本发明的主题是制造如上述任何实施方案所定义的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，其中所述方法是一种开始于钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的浆-浆方法，优选地可从维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物获得，其中所述方法包含以下步骤：

·用非质子有机溶剂洗涤维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物，所述溶剂选自选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或(甲醇/CH₂Cl₂(1:3))，优选丙酮，和

·将获得的经分离的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中浆化并向浆中加入水。

通过本发明的方法，有可能转化钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物，优选地维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物，例如，将维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物B转化为THF含量少于720ppm的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物A。

本发明的主题是一种制造如上述任何实施方案中所定义的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，

所述方法包括以下步骤：

a)向氢氧化钙和维多莫司游离酸的混合物中加入有机溶剂和水，

b)向步骤a)中获得的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的所述悬浮液中加入完全能与水混溶的非质子有机溶剂，

c)从步骤b)获得的混合物中回收钙-维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物，和

d)用步骤b)提到的非质子有机溶剂洗涤步骤c)中获得的钙-维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

e)将步骤d)中获得的经分离的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中于15-80℃浆化，以得到钙-维多莫司多晶型物B。

f)于15-80℃向步骤e)获得的浆中加入水以再次得到非质子有机溶剂含量减少的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物的多晶型物A。

根据所述步骤a)的有机溶剂可选自THF、2-甲基-THF、二恶烷或类似溶剂。

根据所述步骤c)的蒸发可以通过用真空蒸馏或常压蒸馏蒸馏掉a)中所用的有机溶剂实现。

所述非质子有机溶剂可选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或(甲醇/CH₂Cl₂(1:3))。

悬浮液/浆是结晶性固体产物在所用溶剂混合物中的混合物。用目视检查来确定所获得的是浆或悬浮液还是溶液。

可如下实现从所述步骤e)获得的混合物中回收维多莫司(4SC-101，SC12267)的钙盐或其溶剂化物和/或水合物：通过任何类型的固/液分离例如过滤、离心或类似方法来分离产物。

所述根据步骤e)的醇溶剂可选自甲醇、乙醇或异丙醇。

在一个实施方案中，从所述步骤e)获得的混合物中回收维多莫司(4SC-101，SC12267)的钙盐或其溶剂化物和/或水合物可实现如下：通过任何类型的固/液分离例如过滤、离心或类似方法来分离产物。

在一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中在步骤f)之后增加了干燥步骤，并任选地随后增加研磨步骤和任选地随后增加重结晶步骤。

在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中在步骤b)之后和步骤c)之前将所述溶液过滤且用所述有机溶剂洗涤过滤器。

在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中将步骤a)的悬浮液加热至25-30℃。

在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中将步骤e)的悬浮液加热至15-25℃。

在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中所述有机溶剂为THF。

在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中所述非质子有机溶剂为丙酮。在另一个具体实施方案中，本发明的主题是根据如上所述方法制造晶体多晶型物的方法，其中所述醇类溶剂优选为乙醇。

在另一个具体的实施方案中，本发明的主题是可通过如上所述方法获得的晶体的维多莫司(4SC-101，SC12267)钙盐，其中维多莫司与钙的摩尔比为2±0.3。

根据本发明的多晶型物可以本身作为治疗剂、作为相互的混合物或以可肠内或肠外使用的药用配制物形式给药于动物，尤其是哺乳类，且尤其是人类、狗和鸡，所述药用配制物中在通常的药用无害的赋形剂和添加剂之外，包含有效剂量的至少一种上文所述的本发明的多晶型物作为活性成分。

所述治疗剂可经口给药，例如以丸剂、片剂、包衣片、糖衣片、硬或软的明胶胶囊、溶液、糖浆、乳液或悬浮液或气溶胶混合物的形式。但可也通过例如以栓剂的形式经直肠给药，或通过例如注射或输液的形式肠外给药，或通过例如以软膏、乳膏或酊剂的形式经皮给药。

对于临床试验，如果包含活性化合物的配制物是白色，是一个巨大的优势。临床试验通常是双盲的，以避免“安慰剂效应”，即避免如果医生或患者可能识别安慰剂的偏见。由此产生的不足可能导致试验推迟和经费的增加。Mandy Wan等Arch Dis Child 2013年9月，第98卷，第9期。因此，如果包含活性成分的组合物是有颜色的，必须采取手段以安慰剂和活性配制物平等。因此，如果临床配制物是白色的，这是一个巨大的优势。

在上述本发明的多晶型物之外，所述药用组合物还可包含其他常规的、通常为惰性的载体材料或赋形剂。因此，所述药用配制物也可包含添加剂，例如，比如填料、补充剂、崩解剂、结合剂、助流剂、润湿剂、稳定剂、乳化剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调味剂或芳香剂、缓冲物质和另外的溶剂或溶解剂或实现仓储效果的试剂、以及改变渗透压的盐、包衣剂或抗氧化剂。它们也可包含上述的两种或多种本发明的多晶型物的盐和其他有治疗活性的物质。

因此，本发明的多晶型物可以单独使用或与其他活性化合物结合使用，例如和已知治疗上文所述疾病的药物一起，由此在后一种情况中注意到加和性的增强效果。对人给药的适合量的范围为从5至500mg，尤其是10mg至100mg。

为了制备药用配制物，可使用药学惰性的无机或有机赋形剂。为了制备丸剂、片剂、包衣片剂和硬明胶胶囊，可使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等。软明胶胶囊和栓剂的赋形剂是例如脂肪、蜡、半固体和液体多元醇、天然或硬化油等。生产溶液和糖浆的合适赋形剂是例如水、蔗糖、转化糖、葡萄糖、多元醇等。生产注射液的合适赋形剂是例如水、酒精、甘油、多元醇或植物油。

剂量可在宽范围内变化且应适合于每个个别情况的个别条件。对于以上使用，合适的剂量可根据给药方式、治疗的具体情况和所需效果变化。但通常，实现让人满意结果的剂量率为约1至100mg/kg动物体重，尤其为1至50mg/kg。对于较大哺乳类例如人类，合适的剂量率在从约10mg至3g/天的级别，方便地一次或以分次剂量，例如一天2至4次给药，或以持续释放的形式给药。

通常，在口服给药的情况下，每人每日剂量约10mg至100mg，尤其是10至50mg是合适的。在其他给药形式的情况下，每日剂量也在相似范围内。

本发明的实施方案为：

1.式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的一种白色晶体多晶型物A

其中所述式I的化合物与钙的摩尔比为2±0.3。

2.根据实施方案1所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有在下示数值±0.2处以2θ度表示的特征峰的X射线粉末衍射图形：

2θ＝5.91°、9.64°、16.78°、17.81°、19.81°、25.41°。

3.根据实施方案1或2所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中具有在下示值±0.2处的2θ的特征峰如下表所示：

表1维多莫司钙盐的多晶型物A的峰列表

4.根据实施方案1或2所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于如图1所示的X射线粉末衍射图形，

图1：维多莫司钙的多晶型物A的PXRD。

5.根据实施方案1至4任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1664、1624、1617、1532、1449、1338的FT拉曼吸收光谱，所述光谱如图2所示，

图2：维多莫司钙的多晶型物A的拉曼光谱。

6.根据实施方案1至5任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1980、1659、1584、1335、1145的IR吸收光谱，所述光谱如图3所示，

图3a：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，完整区

图3b：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，指纹区。

7.根据实施方案1至6任一项所示的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以ppm表示的特征峰15.2、8.3、7.6、7.5、7.4、7.2、6.8、3.8、2.7、1.6的¹H-NMR谱图，所述谱图如图4所示，

图4.维多莫司钙的多晶型物A的¹H-NMR谱图。

8.根据实施方案1至8任一项所示的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其是具有式I的化合物与水的摩尔比为约1:1的水合物。

9.一种药用配制物，其包含根据实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A。

10.根据实施方案1所述的药用配制物，其具有低于720ppm的THF含量。

11.根据实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据实施方案9或10所述的药用配制物，其用作药物。

12.根据实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据实施方案9或10所述的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：风湿病，急性免疫病，自身免疫病，由恶性细胞增殖引起的疾病，炎性疾病，人和动物中由原生动物感染引起的疾病，由病毒感染和卡氏肺孢子虫引起的疾病，纤维化，葡萄膜炎，鼻炎，哮喘或关节病。

13.根据实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据实施方案9或10所述的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：其中疾病和治疗适应症选自移植物抗宿主和宿主抗移植物反应、类风湿性关节炎、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化症、红斑狼疮、炎症性肠病和银屑病。

14.一种生产如实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，所述方法包含以下步骤：

·提供钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物，优选维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物，

·用非质子有机溶剂洗涤钙-维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物，所述溶剂优选地选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或(甲醇/CH₂Cl₂(1:3))，优选丙酮，且

·将获得的经分离的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中浆化并向浆中加入水。

15.一种生产如实施方案1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，所述方法包含以下步骤：

a)向氢氧化钙和式I的化合物游离酸或其溶剂化物和/或水合物的混合物中加入有机溶剂和水，

b)搅拌步骤a)中获得的悬浮液，直至获得溶液，

c)至少部分蒸发所述有机溶剂和水以得到式I化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的悬浮液，

d)向步骤c)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的所述悬浮液中加入完全能与水混溶的非质子有机溶剂，

e)搅拌步骤d)中获得的悬浮液，

f)从步骤e)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，和

g)用步骤d)中提到的非质子有机溶剂洗涤步骤f)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

h)将从步骤g)获得的经分离的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中于15-80℃浆化。

i)于15-80℃向步骤h)获得的浆中加入水，

j)从步骤i)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，和

k)用步骤d)中提到的非质子有机溶剂洗涤步骤j)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

16.根据实施方案14或15所述的生产晶体多晶型物的方法，其中在步骤g)和步骤k)之后增加干燥步骤，且任选地随后增加研磨步骤和任选地随后增加重结晶步骤。

17.根据实施方案14至16任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中在步骤b)之后和步骤c)之前将所述溶液过滤且用所述有机溶剂洗涤过滤器。

18.根据实施方案14至17任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中将步骤a)的悬浮液加热至25-30℃。

19.根据实施方案14至18任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中将步骤e)的悬浮液加热至15-25℃。

20.根据实施方案14至19任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中所述有机溶剂选自THF、2-甲基-THF、二恶烷。

21.根据实施方案14至20任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中所述非质子有机溶剂选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或1:3的甲醇/CH₂Cl₂。

22.可通过根据实施方案14至21任一项所述的方法获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化合和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中式I的化合物与钙的摩尔比为2±0.3。

附图说明

图1：维多莫司钙的多晶型物A的PXRD。

图2：维多莫司钙的多晶型物A的拉曼光谱。

图3a：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，完整区。

图3b：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，指纹区。

图4：维多莫司钙的多晶型物A的¹H-NMR谱图。

图5：式I的化合物钙盐的多晶型物C的PXRD。

图6：式I的化合物钙盐的多晶型物B的PXRD。

具体实施方式

实施例1

所述式(I)化合物可以通过不同方法得到，包括在JP-A-50-121428中描述的方法。尤其是用到下列两种合成方法。

方法1：在第一步中，如R.N.Mc DonaldR.R.Reitz,J.Org.Chem.37,(1972)2418-2422所述，从相应的α,α’-二溴烷二羧酸得到环烯-1,2-二羧酸。也可由庚二酸大量得到环烯-1,2-二羧酸[D.C.Owsley和J.J.Bloomfield,Org.Prep.Proc.Int.3,(1971)61-70；R.

J.Chem.Soc.(1926),655-663]。

在环系中或环系上被取代的二羧酸通常可通过氰醇合成法合成[Shwu-Jiüan Lee等,Bull.Inst.Chem.Academia Sinica Number 40,(1993),1-10或B.R.Baker等，J.Org.Chem.13,1948,123-133；以及B.R.Baker等，J.Org.Chem.12,1947,328-332；L.A.Paquette等，J.Am.Chem.Soc.97,(1975),6124-6134]。

通过与醋酸酐反应，二羧酸可随后被转化成相应的酸酐[P.Singh和S.M.Weinreb,Tetrahedron 32,(1976),2379-2380]。

其他制备不同的根据式(II)的酸酐的方法描述于V.A.Montero等，J.Org.Chem.54,(1989),3664-3667；P.ten Haken,J.Heterocycl.Chem.7,(1970),1211-1213；K.Alder,H.Holzrichter,J.Lieb.Annalen d.Chem.524,(1936),145-180；K.Alder,E.Windemuth,J.Lieb.Annalen d.Chem.543,(1940),56-78；以及W.Flaig,J.Lieb.Annalend.Chem.568,(1950),1-33。

这些酐可随后与相应的胺反应，生成所需的式(I)的酰胺。这个反应可以通过使用如J.V.de Julian Ortiz等，J.Med.Chem.42,(1999),3308中所描述的反应条件(在实施例1中指定为路线A)或通过使用4-二甲基氨基吡啶(在实施例1中指定为路线B)实现。

方法2：式(I)的酰胺也可通过将式(IV)的胺与通式(V)的芳基硼酸反应合成[M.P.Winters,Tetrahedron Lett.,39,(1998),2933-2936]。

二芳基苯胺通常可通过钯偶联合成[G.W.Kabalka等，Chem.Commun.,(2001),775；A.Demeter,Tetrahedron Lett.38,(1997),5219-5222；V.Snieckus,Chem.Commun.22,(1999),2259–2260]。

方法3：式(I)的酰胺还可通过将式(VI)的卤素衍生物与通式(VII)的芳基硼酸反应来合成[N.E.Leadbeater,S.M.Resouly,Tetrahedron,55,1999,11889-11894]。

实施例2

实验/器材设置

¹H-NMR：使用Bruker DPX300谱图仪记录¹H-NMR谱图，质子频率为300.13MHz、激发脉冲为30°、循环延迟时间为1s。累积16次扫描；使用D2O、MeOD或d6-DMSO为溶剂。

DSC：使用Perkin Elmer DSC-7仪器(N₂气氛下，封闭的金样品盘)进行差示扫描量热法。将样品以10K/分钟的速率加热至熔点，然后冷却(200K/分钟的冷却速率)且随后以10K/分钟的速率再次加热。

DVS(SMS)：Surface Measurement Systems Ltd.的DVS-1水蒸气吸附分析仪。将样品放置在铂样品盘上并在通常为50％相对湿度的给定相对湿度下平衡。然后，启动预设定的湿度程序，扫描速率为每小时变化5％相对湿度。第一步：从50％相对湿度至0％相对湿度(在起始材料可能为水合物的情况下，50％相对湿度至95％相对湿度)，第二步：0％相对湿度至95％相对湿度(在起始材料可能为水合物的情况下，95％相对湿度至0％相对湿度)。

FT-拉曼光谱法：用Bruker RFS 100FT-拉曼系统记录FT-拉曼光谱，使用在1064nm运行的近红外Nd:YAG激光器和液氮冷却的锗探测器。对于每个样品，累积精度为2cm^-1的至少64次扫描。使用300mW标称激光功率。在3500至100cm^-1之间的区域显示了FT-拉曼数据。由于瑞利滤波器截止，低于100cm^-1的数据是不可靠的。

光学显微镜：装备了Leica DFC280相机和IM50 v.5图像采集软件的LeitzOrthoplan 110680显微镜。使用或不使用正交偏振片并用4x、10x或25x放大来记录图像。

粉末X射线散射：Bruker D8；铜Ka辐射，40kV/40mA；LynxEye探测器，0.02°2θ步长大小、37s步长时间。样品制备：通常在除了施加轻微压力得到平坦表面之外没有任何特殊处理的条件下测量样品。使用硅单晶样品夹(0.1、0.5或1mm深)。在测量中旋转样品。

拉曼显微镜：Renisha inVia Reflex拉曼系统。具有785nm激发光的稳定二极管激光器和用NIR增强的Peltier冷却CCD相机作为探测器。用长工作距离20x物镜进行测量。波数范围2000-100cm^-1、10s探测时间、每个光谱三次累积。

溶剂：对于所有的实验，使用Fluka、Merck或ABCR分析级溶剂。

TG-FTIR：通过与Bruker FTIR光谱矢量22或IFS28偶联的Netzsch热微天平TG209(带针孔的样品盘，N₂气氛，加热速率10℃/分钟，范围25℃至350℃)进行热重力测量。

实施例3

DHODH活性抑制试验

标准试验混合物包含50μM脱环泛醌(decyclo ubichinone)、100μM二氢乳清酸、60μM 2,6-二氯靛酚以及20mU DHODH。所使用的重组酶的体积活性为30U/ml。测量在30℃在50mM TrisHCl(150mM KCl，0.1％Triton X-100，pH 8.0)中进行，终体积为1ml。混合所述成份，并通过加入二氢乳清酸开始反应。通过分光光度法测量在600nm吸收的减少2分钟来跟踪反应进程。

用有其他不同量抑制剂的标准试验来进行抑制研究。为了确定IC₅₀值(50％抑制所需的抑制剂浓度)，使用至少五个不同的抑制剂浓度。

用M.

教授(德国，马尔堡)提供的重组人类以及重组小鼠DHODH来进行这些研究[M.

Chem.Biol.Interact.124,(2000),61-76]。

作为参考，使用活性代谢产物来氟米特A77-1726(化合物12)[J.

等，Biochemical Pharmacology 56(1998),1053-1060]。

抑制试验的结果展示于上述

等出版物的表1。从IC₅₀值的比较中可以明显看出，用于制备根据本发明的盐的化合物对于人类酶不仅有与活性代谢产物来氟米特相当或甚至更好的抑制活性，也对人类酶有更高的特异性。

实施例4

人类T细胞增殖试验

从健康志愿者中获得人外周血单核细胞(PBMC)并转移到含10％透析胎牛血清的RPMI1640细胞培养基中。向96孔板的每孔中加入80000个细胞并加入磷酸缓冲盐溶液中的植物凝集素(PHA)至终浓度为20μg/ml，以刺激T细胞增殖。加入在二甲基亚砜(DMSO，终浓度：0.1Vol％)中的维多莫司至终浓度范围从20nM至50μM。温育48小时后，根据制造商的说明使用“细胞增殖ELISA BrdU(Roche)”来定量细胞增殖。用4参数的Sigmoidal曲线拟合计算半最大抑制。维多莫司以4.1μM的IC₅₀抑制T细胞增殖。

实施例5

钙盐的制备

式(I)化合物的钙盐的合成具体描述在WO 2012/001148中，通过引用将其并入本文。

此外，图5所示的粉末X射线衍射显示得到了晶体材料，然而其图谱与游离酸的图谱(见图6)不同。通过光学显微镜使晶体可视化(图4)，DSC(差示扫描量热法)显示约155℃的熔点(表明溶剂化物和非溶剂化形式的熔融)，TG-FTIR(热重分析仪-傅里叶变换红外联用)表明可能形成了甲醇溶剂化物和水合物，且动态蒸汽吸附表明脱溶剂化之后有在85％相对湿度的0.3％水吸收和在95％相对湿度的0.4％水吸收(不可逆)。

实施例6

多晶型物A的合成

如下产生维多莫司多晶型物A：

a)向氢氧化钙和式I的维多莫司游离酸或其溶剂化物或水合物的混合物中加入有机溶剂和水，

b)搅拌步骤a)中获得的悬浮液，直至获得溶液，

c)至少部分蒸发所述有机溶剂和水，以得到式I化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的悬浮液，

d)向步骤c)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的所述悬浮液中加入完全能与水混溶的丙酮，

e)搅拌步骤d)中获得的悬浮液，

f)从步骤e)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，和

g)用步骤d)中提到的非质子有机溶剂洗涤步骤f)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

h)将从步骤g)获得的经分离的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中于15-80℃浆化。

i)于15-80℃向步骤h)获得的浆中加入水，

j)从步骤i)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，和

k)用步骤d)中提到的非质子有机溶剂洗涤步骤j)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

实施例7

生物利用度的确定

在雄性Wistar大鼠中比较维多莫司的钙盐和游离酸的口服生物利用度。将所述游离酸或钙盐填充入明胶胶囊且使动物接受剂量水平约每千克体重10mg游离酸当量的单次给药。

每组四只雄性Wistar大鼠(体重范围：250-275g)分别用维多莫司游离酸或其钙盐进行处理。使用应用装置将胶囊给药进入动物的食道。在给药后的下列时间点：30分钟；1小时；2小时；4小时；6小时；8小时；24小时；28小时；32小时和48小时，从在异氟醚麻醉下的动物中采集静脉血样。用肝素钠抑制凝结且通过离心血样产生血浆。通过LC-MS/MS分析血浆样品的维多莫司并根据混合对数线性梯形法计算药代动力学参数。

为了检查钾盐，用维多莫司游离酸或其钾盐以30mg/kg(游离酸当量)的剂量水平处理6只雌性Lewis大鼠(体重约200g)。所述化合物在0.5％甲基纤维素的磷酸缓冲盐溶液中配制且通过经口灌胃处理动物。在给药后的下列时间点：30分钟；1小时；2小时；4小时；8小时；33小时；48小时和72小时，从在异氟醚麻醉下的动物中采集静脉血样。用肝素钠抑制凝结且通过离心血样产生血浆。通过LC-MS/MS分析血浆样品的维多莫司并根据线性梯形规则法计算药代动力学参数(AUC)。

所述盐的口服生物利用度通过比较给药所述盐或给药游离酸后获得的血浆浓度-时间曲线(AUC)下的面积和维多莫司最大血浆浓度(Cmax值)来衡量。这些比值在表2中示出。

表2：对大鼠口服给药维多莫司后的PK参数比较

化合物	AUC<sub>inf</sub>/AUC<sub>inf,游离酸</sub>	C<sub>max</sub>/C<sub>max,游离酸</sub>
			维多莫司游离酸	1	1
钾盐	0.96	1.09
			钙盐	1.72	1.67

实施例8

在I期研究所用的药物维多莫司钙的先前GMP批次(IM90838；批号RL01L156A1)在与当前批次相同的工厂(即，德国雷根斯堡的Patheon DPx Fine Chemicals RegensburgGmbH-

)由中间物维多莫司(VIDO-05；SC12267)生产。所用的中间物维多莫司在瑞典卡尔斯塔德的Cambrex Karlskoga AB生产。

由于药物维多莫司钙通常包含水平约为6000至10000ppm的溶剂四氢呋喃(THF)，所以对生产方法的最后一步进行优化，以降低THF水平：

用乙醇处理维多莫司钙粗产物，形成乙醇溶剂化物中间物，所述中间物在用水处理时以二水合物形式产生所需的维多莫司钙多晶型物。在最后的药物中，乙醇以约2000至6000ppm的可接受水平被保留。所述方法在2.1.S.2.2节中描述。

初步实验室方法的结果总结如下。实验室规模批次的约20g维多莫司(VIDO-5)通过在3.2.S.2.2节中描述的方法转化成维多莫司钙。分析的结果总结于表1。

表1：实验室批次的维多莫司钙(IM90838)的分析结果

n.d.:未检出

¹⁾SC12219(VIDO-03；RRT 0.77,2)SC44107：RRT0.13,3)报告>0.05％，

⁴⁾未确定(n.det.)因为不相关；在维多莫司中确定总重金属≤20ppm且在实验室批次中预计不会有其他金属杂质。

可注意，实验室批次的维多莫司钙的THF含量低于NMT720 ppm的指南限制；但确定的乙醇含量达到约5000ppm。试验和杂质水平中没有观察到变化。

Claims (22)

1.式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，

其中所述式I的化合物与钙的摩尔比为2±0.3。

2.根据权利要求1所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有在下示值±0.2处以2θ度表示的特征峰的X射线粉末衍射图形：

2θ＝5.91°、9.64°、16.78°、17.81°、19.81°、25.41°。

3.根据权利要求1或2所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中具有在下示值±0.2处的2θ的特征峰如下表所示：

表1：维多莫司钙盐的多晶型物A的峰列表

4.根据权利要求1或2所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于如图1所示的X射线粉末衍射图形：

图1：维多莫司钙的多晶型物A的PXRD。

5.根据权利要求1至4任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1664、1624、1617、1532、1449、1338的FT拉曼吸收光谱，所述光谱如图2所示：

图2：维多莫司钙的多晶型物A的拉曼光谱。

6.根据权利要求1至5任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以cm^-1表示的特征峰1980、1659、1584、1335、1145的IR吸收光谱，所述光谱如图3所示，

图3a：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，完整区

图3b：维多莫司钙的多晶型物A的IR光谱，指纹区。

7.根据权利要求1至6任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其特征在于具有以ppm表示的特征峰15.2、8.3、7.6、7.5、7.4、7.2、6.8、3.8、2.7、1.6的¹H-NMR谱图，所述谱图如图4所示，

图4.维多莫司钙的多晶型物A的1H-NMR谱图。

8.根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其是具有式I的化合物与水的摩尔比为约1:1的水合物。

9.一种药用配制物，所述药用配制物包含根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A。

10.根据权利要求1所述的药用配制物，其具有低于720ppm的THF含量。

11.根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据权利要求9或10所述的药用配制物，其用作药物。

12.根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据权利要求9或10所述的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：风湿病，急性免疫病，自身免疫病，由恶性细胞增殖引起的疾病，炎性疾病，人和动物中由原生动物感染引起的疾病，由病毒感染和卡氏肺孢子虫引起的疾病，纤维化，葡萄膜炎，鼻炎，哮喘或关节病。

13.根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A或根据权利要求9或10所述的药用配制物，其用于治疗选自以下的疾病：其中疾病和治疗适应症选自移植物抗宿主和宿主抗移植物反应、类风湿性关节炎、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化症、红斑狼疮、炎症性肠病和银屑病。

14.一种生产根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，所述方法包含步骤：

·提供钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物，优选维多莫司钙盐或其溶剂化物和/或水合物的晶体多晶型物，

·用非质子有机溶剂洗涤钙-维多莫司的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，所述溶剂优选地选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或1:3的甲醇/CH₂Cl₂，优选丙酮，且

·将获得的经分离的钙-维多莫司或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中浆化并向浆中加入水。

15.一种生产根据权利要求1至8任一项所述的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的白色晶体多晶型物A的方法，所述方法包含步骤：

a)向氢氧化钙和式I的化合物的游离酸或其溶剂化物和/或水合物的混合物中加入有机溶剂和水，

b)搅拌步骤a)中获得的悬浮液直至获得溶液，

c)至少部分蒸发所述有机溶剂和水以获得式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的悬浮液，

d)向步骤c)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物的所述悬浮液中加入完全能与水混溶的非质子有机溶剂，

e)搅拌步骤d)中获得的悬浮液，

f)从步骤e)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，且

g)用步骤d)提到的非质子有机溶剂洗涤步骤f)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，

h)将步骤g)中获得的经分离的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物在醇溶剂中于15-80℃浆化，

i)于15-80℃向步骤h)获得的浆中加入水，

j)从步骤i)获得的混合物中回收式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物，且

k)用步骤d)提到的非质子有机溶剂洗涤步骤j)中获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化物和/或水合物。

16.根据权利要求14或15所述的生产晶体多晶型物的方法，其中在步骤g)和步骤k)之后增加干燥步骤，且任选地随后增加研磨步骤和任选地随后增加重结晶步骤。

17.根据权利要求14至16任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中在步骤b)之后和步骤c)之前将所述溶液过滤且用所述有机溶剂洗涤过滤器。

18.根据权利要求14至17任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中将步骤a)的悬浮液加热至25-30℃。

19.根据权利要求14至18任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中将步骤e)的悬浮液加热至15-25℃。

20.根据权利要求14至19任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中所述有机溶剂选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或1:3的甲醇/CH₂Cl₂。

21.根据权利要求14至20任一项所述的生产晶体多晶型物的方法，其中所述非质子有机溶剂选自DMF、DMSO、NMP、THF、丙酮、二恶烷、2-甲基-THF或1:3的甲醇/CH₂Cl₂，优选丙酮。

22.可通过权利要求14至21任一项所述的方法获得的式I的化合物的钙盐或其溶剂化合和/或水合物的白色晶体多晶型物A，其中式I的化合物与钙的摩尔比为2±0.3。

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