CN111544473A - 一种治疗冠心病心绞痛的精制冠心颗粒提取制备工艺、中药及其提取物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗冠心病心绞痛的中药提取物，由包括丹参、赤芍、川芎、红花和降香的生药提取得到，所述提取物中，以质量百分含量计，包括：大于等于3％的丹酚酸B；大于等于1％的芍药苷。发明人将“精制冠心颗粒”进行二次开发，将“精制冠心颗粒”进行现代工艺的提取分离、质量控制、工艺优化研制出标准化的现代中药，对新研制的“精制冠心颗粒”进行验证试验，新的精制冠心颗粒有效成分有较大提高，制备工艺优化，患者服用量明显减少，药理实验显示新的精制冠心颗粒改善心功能作用优于药典的“精制冠心颗粒”。

Description

一种治疗冠心病心绞痛的精制冠心颗粒提取制备工艺、中药 及其提取物

技术领域

本发明涉及中药技术领域，特别是一种治疗冠心病心绞痛的中药提取物、中药及制备工艺。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病系指冠状动脉粥样硬化使血管腔狭窄或闭塞，以及血栓形成造成管腔闭塞.导致心肌缺血缺氧而引起的心脏病，在我国，随着人民生活水平的提高，冠心病的发病率有逐年增高的趋势。根据国家卫计委发布的《中国卫生和计划生育统计年鉴》，心血管病已经成为我国居民死亡的首要原因。

冠心病心绞痛，急性心肌梗死，可归属于中医学“胸痹”、“真心痛”、“厥心痛”、“卒心痛”等的范畴，《内径》中，《灵枢·本藏》记载：“肺大则多饮，善病胸痹、喉痹、逆气”，《灵枢·厥论》也记载：“真心痛，手足青至节，心痛甚，旦发夕死，夕发旦死”，可见冠心病心绞痛以胸部憋闷、疼痛，甚则胸痛彻背，短气，喘息不得卧等为主要表现，而急性心肌梗死之病情危重，疼痛剧烈，也可变生厥证、脱证等危重证候。中医认为冠心病、急性心肌梗死的发生多在年老体衰、久患夙疾致使心脉痹阻的基础上，复因饮食失节、情志失调、起居不慎诸因素而诱发，其发病的关键在于胸阳痹阻、气滞血瘀痰凝。

冠心II号方是治疗冠心病心绞痛的经典方药，该方自上个世纪70年代以来一直应用于临床治疗冠心病、急性心肌梗死后等的心肌缺血患者，是由中国中医研究院西苑医院已故著名中医学家郭士魁先生所创制的，1972年经由中国中医科学院西苑医院、中国医学科学院阜外心血管病医院等7家医院联合的北京地区防治冠心病协作组经过数以千计的患者应用临床治疗，疗效显著，是国内卓有成效治疗冠心病心绞痛的有效方药。

冠心病的药物治疗仍是所有治疗方式的基础和保障。冠心病适用的药物种类繁多，根据患者病情和治疗目的的不同，可分为冠心病心绞痛预防、术后治疗、冠心病心绞痛发作急救等几种。如何根据自身病情，在专业医生指导下合理规范的坚持用药，是冠心病患者长期治疗的关键环节。

冠心II号制剂已经入选国家药典，更名为“精制冠心片”和“精制冠心颗粒”，2015版国家药典的“精制冠心颗粒”由丹参351g、赤芍175g、川芎175g、红花175g、降香117g组成。

制备方法为：以上五味，除红花外，其余丹参等四味加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过；红花加水适量，80℃温浸二次，第一次2小时，第二次1小时，合并浸液，滤过，与上述滤液合并，浓缩至稠膏状，在80℃干燥，粉碎成细粉，加入蔗糖和糊精适量，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，各l0ul注入液相色谱仪，测定，即得，本品每袋含赤芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于25.0mg，约。

但是，“精制冠心颗粒”的中成药制药工艺粗放，质控技术单一，患者服用量大。因此，如何在保证正常治疗效果的前提下，明显减少患者服用量是亟待解决的技术问题。

减少服用量的一种思路是提升精制冠心颗粒中有效成分的含量，但是，国家药典原方的提取工艺已经是经过反复大量实验后得到的，在此基础上如果想要让提取得到的有效成分含量提升几个百分点都十分困难，成倍提升更加难以达到，存在十分巨大的技术障碍。

因鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗冠心病的中药提取物、中药及制备工艺，使得中药提取物中的丹酚酸B含量较药典冠心II号原方提升5倍以上，芍药苷含量提升3倍以上。

为实现上述目的，第一方面，本发明实施例提供一种治疗冠心病心绞痛的中药提取物，由包括丹参、赤芍、川芎、红花和降香的饮片(生药)提取得到，所述提取物中，以质量百分含量计，包括：

大于等于3％的丹酚酸B；

大于等于1％的芍药苷。

进一步地，丹酚酸B的质量百分含量大于等于20％，芍药苷的质量百分含量大于等于5％。

进一步地，丹酚酸B的质量百分含量大于等于30％，芍药苷的质量百分含量大于等于10％。

进一步地，丹酚酸B的质量百分含量大于等于32％，芍药苷的质量百分含量大于等于12％。

进一步地，丹参、赤芍、川芎、红花和降香的重量比为丹参：赤芍：川芎：红花：降香＝(2.5-3.5):(1-2)：(1-2)：(1-2)：(0.5-1.3)。

进一步地，丹参、赤芍、川芎、红花和降香的重量比为丹参：赤芍：川芎：红花：降香＝3:1.5:1.5:1.5:1。

功能主治：用于行气活血，化瘀通脉。用于气滞血瘀所致的胸痹，心痛，舌瘀斑，脉弦；冠心病，心绞痛，心肌梗塞属上述证候者。

方中丹参活血养血，化瘀通脉为主药。辅以川芎行气活血，化瘀止痛；红花、赤芍活血化瘀通脉。佐以降香温通经脉，行气散瘀止痛。诸药合用，共奏行气活血，化瘀通脉之功。

中医辨证用于瘀血内停所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。

第二方面，本发明实施例提供一种治疗冠心病的中药，包括上述的中药提取物，并制成颗粒剂、胶囊、软胶囊、冲剂、滴丸剂或煎膏剂。

第三方面，本发明实施例提供一种治疗冠心病心绞痛的精制冠心颗粒的提取制备工艺，包括制备上述提取物的步骤，具体包括：

配比丹参、赤芍、川芎、红花和降香，组成生药组合物；

提取：按照处方称取2-10Kg生药组合物，分别加入20-100L水，加热回流提取2次，每次0.2-1h，滤过，合并提取液；

精滤：将提取液进行精滤，去除固体杂质，得到精制过滤液，取部分精制过滤液，进行喷雾干燥，得到精制过滤样品干粉。干粉中以质量百分含量计含有大于等于3％的丹酚酸B和大于等于1％的芍药苷。

进一步地，在提取步骤中，按照处方称取5Kg生药组合物，分别加入50L水，加热回流提取2次，每次0.5h。

进一步地，在精滤后，还包括：

纯化：取部分精制过滤液，进行选择性高效纯化制备，得到纯化洗脱液；

浓缩干燥，将目标馏分浓缩后，进行喷雾干燥，得到纯化制备样品干粉。

与现有技术相比，本发明的具有如下有益效果：发明人将“精制冠心颗粒”进行二次开发，将“精制冠心颗粒”进行现代工艺的提取分离、质量控制、工艺优化研制出标准化的现代中药，对新研制的“精制冠心颗粒”进行验证试验，新的精制冠心颗粒有效成分有较大提高，制备工艺优化，患者服用量明显减少，药理实验显示新的精制冠心颗粒改善心功能作用优于药典的“精制冠心颗粒”。

附图说明

图1为三种精制冠心颗粒有效成分的指纹图谱，其中：A为精制冠心颗粒(国家药典)；B为新精滤冠心颗粒；C为新纯化冠心颗粒。

图2为心脏超声观察三种冠心颗粒对AMI后大鼠心脏功能的影响，其中：A.假手术组；B.模型组；C.尼可地尔组；D.精制冠心组；E.精滤冠心组；F.优化冠心组。

具体实施方式

下面将参考附图中示出的若干示例性实施方式来描述本发明的原理和精神。应当理解，描述这些实施方式仅仅是为了使本领域技术人员能够更好地理解进而实现本发明，而并非以任何方式限制本本发明的范围。

本发明实施例提供的治疗冠心病药物的制备工艺按照如下步骤进行：

根据2015版国家药典的“精制冠心颗粒”重量配比丹参、赤芍、川芎、红花、降香＝3:1.5:1.5:1.5:1。得到生药药材。

步骤一：提取，按照处方称取5Kg药材，分别加入50L水，加热回流提取2次，每次0.5h，滤过，合并提取液，共得到提取液90L，约含有1792g固体物。

步骤二：精滤，将提取液进行精滤，去除固体杂质，共得到精制过滤液106L，取21.25L精制过滤液，进行喷雾干燥，得到精制过滤样品干粉302g。

该步骤中得到的干粉即可以作为本实施例的精滤冠心颗粒。

步骤三：纯化，选择性高效纯化制备，取53L精制过滤液，进行选择性高效纯化制备，得到纯化洗脱液6L。

步骤四：浓缩干燥，将目标馏分浓缩后，进行喷雾干燥，得到纯化制备样品干粉112g。

该步骤得到的干粉即可以作为本实施例的纯化冠心颗粒。

将样品进行提取液、精制过滤液、纯化洗脱液处理。经过S6000高效液相色谱仪(色谱柱：Tnature C18(4.6×250mm，5μm)，流动相，A：乙腈，B：水；C：2％H₃PO₄/H₂O，D：40％异丙醇/甲醇处理，流速为1.5ml/min。

结果表明，精滤过滤样品100g，生药当量为：3.31，即1g精制过滤样品干粉相当于3.31g药材。

纯化制备样品50g，生药当量为：16.74，即1g精制过滤样品干粉相当于16.74g药材。

2015版国家药典的“精制冠心颗粒”，由中国中医科学院西苑医院制剂室提供，按照国家药典制剂，100g，生药当量为：1.44，即1g精制过滤样品干粉相当于1.44g药材。

结论：“精制冠心颗粒”原方药品(国家药典方)样品100g，生药当量为1.44，即1g精制过滤样品干粉相当于1.44g药材；新精滤药品样品100g，生药当量为3.31，即1g精制过滤样品干粉相当于3.31g药材；新纯化药品样品50g，生药当量为：16.74，即1g精制过滤样品干粉相当于16.74g药材，综上所述，新的“精制冠心颗粒”生药含量显著升高。

本发明防治心肌缺血的药物含有丹参、赤芍、川芎、红花、降香的有效成分，其中丹酚酸B外标含量分别为精制冠心颗粒4.247％、纯化冠心颗粒32.758％，芍药苷外标含量分别为精制冠心颗粒1.546％、纯化冠心颗粒12.150％。两种冠心颗粒提取后的干粉可制成颗粒剂、胶囊、软胶囊、冲剂、滴丸剂及煎膏剂，其制作工艺简单，成本低，完全由天然植物制成，不含激素，也不添加色素等其它化学合成品，连续使用后，对人体无毒副作用。该中药含有易被人体吸收的丹酚酸类、芍药苷成分，能有效用于适用于冠心病心绞痛、急性心肌梗死的治疗，对心脏功能具有保护作用，可缓解心肌缺血，增强心脏功能的作用，具有益气活血、化瘀止痛的功效。

三种精制冠心颗粒有效成分的比较

参照国家药典(2015年版)一部精制冠心颗粒项下【含量测定】项下规定检测。条件：色谱柱，Tnature C18(4.6×250mm，5 m)，流动相，A，乙腈，B，0.1％磷酸溶液，流速，1mL/min，检测波长UV(230nm)，进样体积，20L，药物洗脱条件见表1.。

表1.药物的洗脱条件

丹酚酸B外标含量分别为精制冠心颗粒(国家药典用药)0.767％、精滤冠心颗粒样品4.247％、纯化冠心颗粒样品32.758％，芍药苷外标含量分别为精制冠心颗粒(国家药典用药)0.418％、精滤冠心颗粒样品1.546％、纯化冠心颗粒样品12.150％。结果见表2，表3.。

表2.三种精制冠心颗粒有效成分的比较

表3.三种精制冠心颗粒有效成分的比较

三种冠心II号制剂样品经大孔树脂分离吸收峰及HPLC的保留时间显示，洗脱峰为同一组分，具有良好的对应性，结果见图1.。

结论：“精制冠心颗粒”原方药品(国家药典方)、本实施例的精滤冠心颗粒药品、本实施例的纯化冠心颗粒药品有效成分芍药苷的含量分别是0.418％、1.471％、12.100％，丹酚酸B含量分别是0.767％、4.247％、32.758％，通过含量测定结果可以看出，精滤冠心颗粒药品、纯化冠心颗粒药品中有效成分芍药苷及丹酚酸B的含量明显高于药典的“精制冠心颗粒”，说明本实施例的精滤冠心颗粒药品、纯化冠心颗粒药品制备工艺能够较大程度上保留指标性成分，其中纯化制备样品中芍药苷及丹酚酸B含量约为精制过滤样品7～9倍，纯化制备工艺较精滤过滤工艺在纯化药材有效成分方面优势性更强。

三种精制冠心颗粒的药效药理作用比较

1.材料与方法

1.1动物

Wistar大鼠，SPF级，体质量(200-230)g，雄性，动物质量合格证号：11400700262477，许可证号:SCXK(京)2016-0006，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。屏障环境实验动物室饲养，全价饲料喂食，光照和黑暗交界各12h，动物自由饮食和摄水，适用性饲养7天后开始进行实验。

1.2药物与试剂

本实施例的精滤冠心颗粒，制备样品干粉相当于3.31生药g/g；本实施例的纯化冠心颗粒，制备样品干粉相当于16.74g生药/g，由中国科学院大连化学物理研究所提供。精制冠心颗粒(国家药典原方制剂)，1.44g生药/g，批准文号：京药制字Z20163025，由中国中医科学院西苑医院中药制剂室提供，尼克多尔片，商品名为欣地平，5mg/片，批号：1906031，由西安汉丰药业有限公司提供。

1.3模型制作与分组

实验前一天，大鼠禁食不禁水，空腹12h，第2天开始进行造模，4％的水合氯醛水溶液腹腔注射麻醉(9ml/kg体质量)，观察动物进入深度麻醉状态后，用小型宠物剃毛器脱毛备皮，将其固定于动物手术台上，碘伏消毒。确定大鼠心脏的位置(3～4肋间)剪开皮肤，然后逐层钝性分离胸部肌肉层，暴露心脏，快速挤出心脏，消毒的带线缝合针穿行大鼠左冠状动脉前降支处结扎动静脉血管，稳定后，心电图机记录肢体导联心电图，以心电图出现R波振幅降低、ST段偏移、T波改变(弓背样抬高或T波高耸)判断心肌缺血和急性心肌梗死(AMI)的形成，肉眼观察缺血心肌呈暗红色为结扎成功。逐层缝合胸骨和肌肉层，术后肌肉注射青霉素钠20万U/d，连续3d预防感染。假手术组手术方式一样，但在心肌组织的血管处仅穿线不结扎。造模后24h存活的大鼠进入实验分组。动物实验过程中严格遵守国家科学技术委员会《关于善待实验动物的指导性意见》和《北京市实验动物福利伦理审查指南》有关动物伦理学的要求。

大鼠随机分为模型组、阳性对照药组(尼可地尔片，2.7mg/Kg体质量)、精制冠心颗粒组(国家药典，4.60g生药/Kg体质量)、精滤冠心颗粒组(精滤冠心，4.60g生药/Kg体质量)、纯化冠心颗粒组(纯化冠心，4.60g生药/Kg体质量)组，另设假手术组，每组10只。各给药组术后第2天开始，连续灌胃给药28天，假手术组，模型组灌胃等量纯净水，于末次给药后40min后，大鼠腹腔注射4％水合氯醛溶液(0.9ml/100g体质量)麻醉，仰位固定于鼠板上，进行心脏超声。

1.4指标检测

同一心动周期心脏心脏功能指标，左室舒张末期容积(LVEDV)，左室收缩末期容积(LVESV)、二尖瓣舒张早期血流速度(E)，二尖瓣心房收缩期最大血流(A)，左室射血分数(LVEF)。大鼠心脏功能测量时，每组原始数据连续测定3个心动周期的平均值，超声检查的操作及分析均由不知道大鼠分组情况的两名专科医生完成。

1.5三种冠心颗粒对AMI后大鼠心脏功能的影响

结扎冠状动脉前降支造成AMI四周后，和假手术组比较，模型组大鼠EDV和ESV显著升高(P<0.05，P<0.05),E’值显著增加(P<0.05)，A值显著降低(P<0.05)，比值倒置小于1，LVEF显著降低(P<0.05)。和模型组比较，精制冠心颗粒组、精滤冠心颗粒组和纯化冠心颗粒组的EDV和ESV有不同程度减轻(P<0.05，P<0.05),E’和A值倒置程度减轻(P<0.05，P<0.05)，LVEF有不同程度的改善(P<0.05，P<0.05)。结果见图2，表4。

左室射血分数(LVEF)与心肌的收缩能力有关，心肌收缩能力越强，则每搏输出量越多，射血分数也越大。结果表明，提高射血分数、防治心肌缺血较好的药物顺序分别为纯化冠心颗粒组61.79％＞精滤冠心颗粒组54.97％＞精制冠心颗粒组49.24％。

1.6三种冠心颗粒对大鼠内皮功能及抗血栓指标的影响

AMI造模四周后，和假手术组比较，模型组大鼠血中内皮素-1(ET-1)含量和血栓素B₂(TXB₂)水平显著升高(P<0.05，P<0.05)，降钙素基因相关肽(CGRP)含量和6-酮前列环素_1α(6-Keto-PGF_1α)水平无显著差异。与模型组比较，川丹颗粒组、精制冠心Ⅱ组和纯化冠心Ⅱ组的ET-1含量和TXB₂水平显著降低(P<0.05，P<0.05)，大鼠血中CGRP含量有一定程度的升高，但无显著差异，各给药之间比较，改善血管内皮功能和抗血栓(ET,TXB₂)较好的药物顺序为纯化冠心颗粒组(81.36pg/ml,81.83pg/ml)＞精滤冠心颗粒组(87.12pg/ml,86.72pg/ml)＞精制冠心颗粒组(91.98pg/ml,97.55pg/ml)。结果见表5.。

表4.三种冠心颗粒组对AMI后大鼠心脏功能的影响(

n＝10)

注：与假手术组比较，▲P<0.05；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

表5.三种冠心颗粒对ET,CGRP,6-Keto-PGF1α,TXB2的影响(

n＝10)

注：与假手术组比较，▲P<0.05；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种治疗冠心病心绞痛的中药提取物，由包括丹参、赤芍、川芎、红花和降香的生药提取得到，其特征在于，所述提取物中，以质量百分含量计，包括：

大于等于3％的丹酚酸B；

大于等于1％的芍药苷。

2.根据权利要求1所述的治疗冠心病心绞痛的中药提取物，其特征在于，丹酚酸B的质量百分含量大于等于20％，芍药苷的质量百分含量大于等于5％。

3.根据权利要求1所述的治疗冠心病心绞痛的中药提取物，其特征在于，丹酚酸B的质量百分含量大于等于30％，芍药苷的质量百分含量大于等于10％。

4.根据权利要求1所述的治疗冠心病心绞痛的中药提取物，其特征在于，丹酚酸B的质量百分含量大于等于32％，芍药苷的质量百分含量大于等于12％。

5.根据权利要求1所述的治疗冠心病心绞痛的中药提取物，其特征在于，丹参、赤芍、川芎、红花和降香的重量比为丹参：赤芍：川芎：红花：降香＝(2.5-3.5):(1-2)：(1-2)：(1-2)：(0.5-1.3)。

6.根据权利要求1所述的治疗冠心病心绞痛的中药提取物，其特征在于，丹参、赤芍、川芎、红花和降香的重量比为丹参：赤芍：川芎：红花：降香＝3:1.5:1.5:1.5:1。

7.一种治疗冠心病心绞痛的中药，包括权利要求1-6任一所述的中药提取物，并制成颗粒剂、胶囊、软胶囊、冲剂、滴丸剂或煎膏剂。

8.一种治疗冠心病心绞痛的精制冠心颗粒的提取制备工艺，其特征在于，包括：

配比丹参、赤芍、川芎、红花和降香，组成饮片组合物；

提取：按照处方称取2-10kg饮片组合物，分别加入20-100L水，加热回流提取2次，每次0.2-1h，滤过，合并提取液；

精滤：将提取液进行精滤，去除固体杂质，得到精制过滤液，取部分精制过滤液，进行喷雾干燥，得到精制过滤样品干粉。

9.根据权利要求8所述的制备工艺，其特征在于，在提取步骤中，按照处方称取5kg饮片(生药)组合物，分别加入50L水，加热回流提取2次，每次0.5h。

10.根据权利要求8所述的制备工艺，其特征在于，在精滤后，还包括：

纯化：取部分精制过滤液，进行选择性高效纯化制备，得到纯化洗脱液；

浓缩干燥，将目标馏分浓缩后，进行喷雾干燥，得到纯化制备样品干粉。

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