CN111426773A - 高效液相色谱法检测盐酸胺碘酮中的碘化物杂质 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的检测方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，流动相为包含PH3.5～5.5的磷酸盐缓冲溶液，等梯度洗脱。采用这种新型的高效液相色谱法检测盐酸胺碘酮中碘化物杂质的方法，可对主药及有关物质进行分离，同时降低各辅料的干扰，节约了检测时间，提高了检测结果的灵敏度，提高了检测效率。本发明提供的方法可对碘化物进行准确检测，保障盐酸胺碘酮注射液的质量，提高了产品的安全性。

Description

高效液相色谱法检测盐酸胺碘酮中的碘化物杂质

技术领域

本发明涉及一种检测原料药及注射液中碘化物杂质的分析方法，尤其涉及一种检测盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的方法。

背景技术

盐酸胺碘酮是目前临床应用最多、最广泛的抗心律失常药物之一，其能选择性扩张冠状动脉血流量，减少心肌耗氧量，减慢心率，降低房室传导速度与β-受体阻滞剂的效应相似。

盐酸胺碘酮注射液，英文英文名称为Amiodarone Hydrochloride Injection，辅料为苯甲醇60mg，聚山梨酯80。适应症为当不宜口服给药时应用本品治疗严重的心律失常，尤其适用于下列情况：房性心律失常伴快速室性心律；W-P-W综合征的心动过速；严重的室性心律失常；体外电除颤无效的室颤相关心脏停搏的心肺复苏。

本品的主要成分为盐酸胺碘酮，化学名称为(2-丁基-3-苯并呋喃基)[4-[2-(二乙氨基)乙氧基]-3，5-二碘苯基]甲酮盐酸盐，分子式为C₂₅H₂₉I₂NO₃·HCl，分子量为681.78，结构式如下：

根据上述结构式分析，1mol盐酸胺碘酮分子中含有2mol碘原子，当其降解时即产生碘离子。碘离子的量侧面反应该药物降解情况，同时其本身也是一个杂质。制药过程中为了保证药物的安全有效，需要对药物原料及其制剂中的杂质进行研究、检测和监控。药品在临床使用过程中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关，与杂质的影响也密不可分。为保证临床安全用药，必须严格控制药品中的碘化物。

目前中国药典(2015)并未对该药品中碘化物进行控制，美国药典(USP43-NF38)收载的盐酸胺碘酮注射液碘化物检查的方法是采用紫外分光光度计检测。基本原理为溶液中的碘离子在盐酸溶液中与碘酸钾反应，生成单质碘。通过测定碘单质在420nm下的吸光度，扣除空白溶液的吸光度，计算注射液中碘化物的量。上述方法需要通过衍生化，将碘离子转变为碘单质进行测定，需要至少4个小时的反应时间，且该实验必须在避光条件下平行制备，对试验操作要求较高。该方法本身的灵敏度较低，仪器或其他条件的波动会对检测结果产生较大影响，生产检验中其经济实用性及对产品质量控制有待进一步提高。因此急需寻找一种更加适用的盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的检测方法，包括如下步骤：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，检测波长优选为210nm～250nm，流动相为包含PH3.5～5.5的磷酸盐缓冲溶液，等梯度洗脱。

进一步地，所述碘化物杂质是以碘离子形式存在，其中碘化物杂质与盐酸胺碘酮的相对保留时间是0.05。

进一步地，色谱柱规格为：150×4.6mm，填料粒径5μm，优选的型号为ItertsilODS-2。

进一步地，检测波长优选为220nm。

进一步地，等梯度洗脱的流速优选为0.8ml/min～1.5ml/min，更优选的为1.0ml/min。

进一步地，流动相的PH值为4.5。

进一步地，流动相为磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的混合溶液。

进一步地，流动相为体积比为(15～25)：(25～35)：(45～55)的磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的混合溶液。

进一步地，流动相为体积比为20：30：50的磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的混合溶液。

进一步地，盐酸胺碘酮中含有以下结构中的一种或多种，

本发明的有益效果如下：

采用这种新型的高效液相色谱法检测盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的方法，可对主药及有关物质进行分离，同时降低各辅料的干扰，节约了检测时间，提高了检测结果的灵敏度，提高了检测效率。本发明提供的方法可对碘化物杂质进行准确检测，保障盐酸胺碘酮注射液的质量，提高了产品的安全性。

附图说明

图1为实施例1空白溶剂的色谱图；

图2为实施例1对照品溶液的色谱图；

图3为实施例1供试品溶液的色谱图；

图4为实施例2碘化物与各杂质及胺碘酮主成分的色谱图；

图5为实施例3采用美国药典检测有关物质的方法检测碘化物杂质的色谱图；

图6为实施例3流动相选用磷酸盐缓冲溶液-乙腈(40∶60)，对照品溶液色谱图；

图7为实施例3流动相采用磷酸盐缓冲液-乙腈(30:70)，供试品溶液中碘化物杂质的峰形色谱图；

图8为实施例3流动相体系为磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈(20∶30∶50)，供试品溶液色谱图；

图9为实施例5碘化物杂质的线性关系图；

具体实施方式

下面结合说明书附图对本发明实施例做进一步详细描述。实施例是用来更清楚的阐述本发明的技术方案，而不是对技术方案的限制。

实施例1

溶液的配制

供试品溶液的配制：精密量取供试品溶液(盐酸胺碘酮注射液，浓度为50mg/mL)1.0ml，置10ml棕色量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得(约5mg/ml)。

对照品贮备液：取碘化钾对照品约16.35mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加稀释剂适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得碘化钾贮备液(约0.16mg/ml)；

对照品溶液的配制：精密量取对照品贮备液1.0ml，置100ml棕色量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(1.6μg/ml)。

磷酸盐缓冲溶液的配制：取磷酸二氢钾7.5g，加水1000ml溶解后，加氢氧化钾溶液调pH值至4.5。

色谱条件：

仪器：waters e2695 2489UV/2998PDA高效液相色谱仪

色谱柱：Inertsil ODS-2-C₁₈(150×4.6mm，5μm)

流动相：磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈体积比为20∶30∶50

柱温为30℃；

检测波长为220nm；

进样量10μl

流速为1ml/min；等度洗脱。

测定：取空白溶剂(流动相)，对照品溶液，供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，色谱图分别如图1、图2、图3所示。空白溶剂对测定结果无干扰。

实施例2有关物质定位试验

配制盐酸胺碘酮与各有关物质及辅料的混合溶液，制成其浓度为每1ml中约含杂质A 10μg、杂质B 10mg、杂质C 10μg、杂质D 10μg、杂质E 10μg、杂质F 10μg、杂质G 10μg、辅料H 10μg及盐酸胺碘酮10μg的溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，如图4所示。碘化物杂质与各杂质及胺碘酮主成分能够很好的分离，其它杂质的存在不影响盐酸胺碘酮中碘化物杂质的检测。

实施例3实验条件筛选

当选用美国药典检测有关物质的方法，具体方法如下：

乙酸缓冲溶液的配制：将3mL乙酸加入到800mL水中，用稀释的氨水调节PH至4.9，最后用水稀释至1000mL

待测溶液的配制：配制盐酸胺碘酮与各有关物质(杂质A～杂质G)的混合溶液；配制成溶度为每1ml中约含杂质A10μg、杂质B10mg、杂质C10μg、杂质D10μg、杂质E10μg、杂质F10μg、杂质G10μg及盐酸胺碘酮10μg的溶液。

仪器：waters e2695 2489UV/2998PDA高效液相色谱仪

色谱柱：Inertsil ODS-2-C₁₈(150×4.6mm，5μm)

流动相：体积比为4:3:3的乙腈-甲醇-乙酸缓冲溶液；

柱温为30℃；

检测波长为240nm；

进样量10μl；

流速为1ml/min；等度洗脱。

记录色谱图，如图5所示。盐酸胺碘酮中的碘化物杂质在该色谱条件下不出峰，该方法不能检测出盐酸胺碘酮中的碘化物杂质。

当选用高比例的磷酸盐缓冲溶液-乙腈做流动相时，检测实施例1中的对照溶液，由于盐的浓度较高，有无机盐析出现象，且碘化物杂质的峰形较差；当流动相选用磷酸盐缓冲溶液-乙腈(体积比为40∶60)，对照品溶液色谱图如图6所示，峰形较差；

当流动相采用磷酸盐缓冲液-乙腈(体积比为30:70)，供试品溶液中碘化物杂质峰形如图7所示，峰形较差；

更换流动相体系为磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈(体积比为20∶30∶50)，供试品溶液中其他杂峰干扰较小，如图8所示，峰形稍有改善。

更换不同的色谱柱，当选用Inertsil ODS-2-C1₈(150×4.6mm，5μm)时，供试品溶液中碘化物杂质的峰形明显改善。

实施例4：检测限、定量限试验

采用信噪比法测定胺碘酮注射液中碘化物杂质的检测限和定量限。碘化钾贮备液的配制按照本领域技术人员常规的方法进行配制，稀释至一定浓度并进样，计算峰高与噪声的比值(信噪比)，其信噪比(S/N)约为10的样品检测量即为定量限，信噪比(S/N)约为3的样品检测量即为检测限。

定量限(LOQ)浓度水平溶液为0.06μg/ml溶液，连续进样6次，峰高的信噪比S/N为13～16；峰面积的RSD为2.5％。

检测限(LOD)浓度水平溶液为0.025μg/ml溶液，进样1次；峰高的信噪比S/N为6。

实施例5线性试验

实验条件，液相色谱方法和溶液的配制如实施例1所示，碘化钾溶液的配制也可以按照本领域技术人员熟知的方法进行配制。

精密称取碘化钾，配制成6份不同浓度的溶液，在LOQ(定量限)浓度不低于200％指标浓度的范围内取6个浓度点进行研究。线性关系以测得的响应信号(峰面积)对被分析物浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，至少报告相关系数r来证实良好的线性关系，要求该系数应该在0.990-1.000之间。

表1线性测定结果

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到线性回归方程，y＝56125x+2481.5，相关系数r为0.9997；截距比为3.4％，在0.0628～2.5106μg/ml范围内线性关系良好，线性关系图如图9所示。

Claims (10)

1.一种检测盐酸胺碘酮中的碘化物杂质的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，检测波长为210nm～250nm，流动相为包含PH3.5～5.5的磷酸盐缓冲溶液，等梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的碘化物杂质是以碘离子形式存在，所述碘化物杂质与所述胺碘酮的相对保留时间是0.05。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱规格为：150×4.6mm，填料粒径5μm，优选的型号为Itertsil ODS-2。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测波长为220nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的PH值为4.5。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相为磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的混合溶液。

7.根据权利要求1、5或6所述的方法，其特征在于，所述流动相为体积比为(15～25)：(25～35)：(45～55)的磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的混合溶液，优选的，磷酸盐缓冲溶液-甲醇-乙腈的体积比为20：30：50。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述等梯度洗脱的流速为0.8ml/min～1.5ml/min，更优选的为1.0ml/min。

9.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的方法，其特征在于，所述盐酸胺碘酮中还包括以下结构中的一种或多种，

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述盐酸胺碘酮还包括以下结构中的一种或多种，

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