CN111411084A - 一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 - Google Patents
一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111411084A CN111411084A CN202010348114.0A CN202010348114A CN111411084A CN 111411084 A CN111411084 A CN 111411084A CN 202010348114 A CN202010348114 A CN 202010348114A CN 111411084 A CN111411084 A CN 111411084A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- organoid
- final concentration
- cells
- culture medium
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 title claims abstract description 58
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 48
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 78
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012574 advanced DMEM Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000044880 Wnt3A Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108700013515 Wnt3A Proteins 0.000 claims abstract description 3
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 6
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 claims description 5
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 229940126560 MAPK inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 5
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 claims description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 5
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 4
- 101000669917 Homo sapiens Rho-associated protein kinase 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100039313 Rho-associated protein kinase 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 4
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 4
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 claims description 3
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 claims description 3
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 3
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- -1 diabody Proteins 0.000 claims description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 101100156752 Caenorhabditis elegans cwn-1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 2
- 102000052547 Wnt-1 Human genes 0.000 claims 2
- 108700020987 Wnt-1 Proteins 0.000 claims 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 22
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 5
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- 102100028412 Fibroblast growth factor 10 Human genes 0.000 abstract 1
- 108090001047 Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 11
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 9
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 8
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 8
- 102000005711 Keratin-7 Human genes 0.000 description 7
- 108010070507 Keratin-7 Proteins 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 6
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 6
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 6
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 6
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 6
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 5
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 5
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 5
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 5
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 5
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 4
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 102000027791 CD44 antigen Human genes 0.000 description 3
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 3
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 3
- 102000015098 Tumor Suppressor Protein p53 Human genes 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 238000012605 2D cell culture Methods 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N chembl176323 Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@]3(C)CC(N=C4C[C@]5(C)CCC6[C@]7(C)CC[C@@H]([C@]7(CC[C@]6(C)[C@@]5(C)CC4=N4)C)CCCCCCCC)=C4C[C@]3(C)CCC2[C@]2(C)CC[C@H](CCCCCCCC)[C@]21C YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000011337 individualized treatment Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008558 metabolic pathway by substance Effects 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/12—Hepatocyte growth factor [HGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/405—Cell cycle regulated proteins, e.g. cyclins, cyclin-dependant kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/415—Wnt; Frizzeled
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
- C12N2509/10—Mechanical dissociation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法。所述培养基含有以下成分：Advanced DMEM/F12、FBS、双抗、N‑2、Noggin、B‑27、EGF、FGF‑10、Y‑27632、A83‑01、SB202190、R‑Spondin、N‑乙酰半胱氨酸、Nicotinamide、Wnt3A、HGF和PrimocinTM。培养方法是将分离获取原代肿瘤细胞加入上述专用培养基重悬，计数后接种至超低吸附U型孔板中，离心培养，至形成类器官。本发明培养基及培养方法可实现肝癌原代细胞的体外增殖，可快速构建肝肿瘤无支架类器官，并能保持肝肿瘤类器官的长期稳定生长。采用本发明技术形成的肿瘤类器官保留了患者肿瘤组织的异质性，适用于体外肝癌化疗药物的药敏检测及肿瘤发生、发展相关研究。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法。
背景技术
肝细胞癌在世界癌症死亡率排名中排名第二位，其具有高转移率、低预后率、难以治疗等特点。肿瘤的恶性侵袭与转移，导致患者肿瘤复发，治疗效果不佳，预后效果比较差。肿瘤细胞一旦转化为恶性细胞，它的侵袭和迁移能力也会变得异常强大。肿瘤细胞并不只限于单个细胞的迁移。在许多肿瘤类型中，通常观察到的侵袭单元是细胞群，群体的行为决定恶性功能。二维(two-dimensional，2D)细胞培养已广泛应用于生物学研究，但在二维水平生长的细胞并不能精确地模拟体内的状态。相比于2D培养，三维(three-dimensiona，3D)细胞培养通过运用再造细胞外基质(比如Matrigel、collagen I、水凝胶等)、构建支架或借助一定的载体，能够模拟体内细胞生存环境，为细胞提供一个更加接近体内生存条件的微环境，更有利于开展肿瘤细胞向周围组织侵袭和迁移的研究，以及建立更接近体内真实环境的药敏筛选模型。但目前的肿瘤类器官3D培养技术还存在一定不足(Science 364,2019，952–955.)，如：不同器官肿瘤类模型形态不易区分，缺乏代表性；培养周期较长，培养价格相对还是太高；类器官培养多局限于基质胶、水凝胶等基质材料中，该类方式限制了类器官与外界的气体交换和物质代谢，交换局限性严重影响了类器官所需营养物质的吸收以及代谢废物的清除。针对上述不足，本专利技术提供了一种肝肿瘤无支架3D类器官的培养方法，并将其应用于抗肿瘤药物药敏筛选。该培养体系可实现肝肿瘤原代细胞的外快速增殖、提高肝肿瘤3D类器官建模及培养成功率、大幅度降低培养成本和培养周期。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的本发明采用以下技术方案：一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基，其特征在于，由血清替代物N2和B27、Noggin、双抗、表皮生长因子、成纤维生长因子、选择性ROCK1抑制剂、ALK5抑制剂、p38 MAPK抑制剂、N-乙酰半胱氨酸、R-Spondin蛋白、烟酰胺、Wnt3A细胞因子、肝细胞生长因子、PrimocinTM、胎牛血清和基础培养基AdvancedDMEM/F12组成。
作为本发明进一步的方案，所述血清替代物N2和B27的终浓度分别为1％和2％(体积百分含量)；所述Noggin的终浓度为100ng/mL；所述双抗的终浓度为1-2％(体积百分含量)；所述表皮生长因子(EGF)的终浓度为50-100ng/mL；所述成纤维生长因子(FGF-10)的终浓度为10-20ng/mL；所述选择性ROCK1抑制剂(Y-27632)的终浓度为10-20μmol/L；所述ALK5抑制剂(A83-01)的终浓度为0.5-1.0μmol/L；所述p38 MAPK抑制剂(SB202190)的终浓度为5-15μmol/L；所述N-乙酰半胱氨酸的终浓度为0.5-1.5mmol/L；所述R-Spondin蛋白的终浓度为100-200ng/mL；所述烟酰胺的终浓度为5-15mmol/L；所述Wnt3A细胞因子的终浓度为50-100ng/mL；所述肝细胞生长因子(HGF)的终浓度为50-100ng/mL；所述PrimocinTM的终浓度为100-200μg/mL；胎牛血清的终浓度为5％(体积百分含量)；余量均为Advanced DMEM/F12。
表1肝癌类器官专用完全培养基组成
作为本发明进一步的方案，双抗(青霉素/链霉素混合液)中添加有GlutaMax成分，该成分的添加有利于类器官3D细胞球的生长。
一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，将将分离获取的肝肿瘤原代细胞接种至超低吸附U型96孔板中，并加入上述培养基，对孔板进行离心，1000rpm离心3min，促进肝肿瘤原代细胞聚集，培养至形成肝肿瘤组织类器官。
作为本发明进一步的方案，肝肿瘤原代细胞接种数量范围为1000～12000细胞/孔。
作为本发明进一步的方案，纯化后的原代细胞接种数量范围为2000-6000细胞/孔。
作为本发明进一步的方案，细胞接种且离心孔板后，在24h内可形成凝聚的细胞球形态，此时为了维持初步形成的细胞球的稳定，在接种前4天内每2天更换一次培养基，4天后再每天更换培养基，以维持养分的供应。
所用基础培养基为Advanced DMEM/F12培养基。所用原代细胞抗生素为PrimocinTM，此成分的添加有助于避免原代细胞的污染，尤其可避免乙肝病毒的感染。上述肝癌类器官培养方法中，必须添加R-Spondin，此成分有助于肝癌类器官的形成。上述肝癌类器官培养方法中，必须添加N-乙酰半胱氨酸，此成分有助于维持肝癌类器官外形的规则圆润。
作为本发明进一步的方案，将手术取下的肝癌组织剪碎成1mm2大小的组织碎块，随后使用含双抗的PBS溶液漂洗干净，100g离心2min收集组织块沉淀，加入2-3倍体积的组织消化液，充分混匀后37℃消化30～60min，每隔10min观察一次消化状态，并用力震荡，直至观察到组织出现弥散状态时即可终止消化，收集细胞；
分离的原代肿瘤细胞悬液1000rpm/min离心3分钟，除上清，收集沉淀，加入适量专用培养基重悬，利用差速贴壁法进行细胞纯化。纯化后的细胞进行接种，按照2500细胞/孔的密度接种至超低吸附96孔板U形培养板中，每孔补充表1的专用培养基150μL，放入37℃、5％CO2培养箱中培养；
接种后30分钟细胞由于重力聚集，24小时内即可形成3D细胞球，之后细胞球开始组装，越来越紧致，3-4天之后达到稳定，体积开始增大，每天更换一次完全培养基，所培养的球体形态完整规则、圆润饱满、边界清晰，连续培养10天仍可维持细胞球形态与活力的稳定。
作为本发明进一步的方案，所述组织消化液为0.1％Ⅰ型胶原酶+0.1％Ⅳ型胶原酶+Hank's溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供的专用肝肿瘤类器官培养基针对肝癌患者来源肿瘤细胞的生长特点，实现肿瘤原代细胞的体外增殖，并可快速构建无支架肝肿瘤类器官，24小时内即可形成3D细胞球。本发明提供的无支架肝肿瘤类器官培养基及培养方法，可促进肝肿瘤类器官的长期稳定生长，形成的类器官保留了患者肿瘤组织的异质性，适用于体外肝癌化疗药的药敏检测及肿瘤相关的研究。本发明为化疗药物的体外药敏筛选提供了一种有效的体外研究模型，可以准确预测患者对药物的反应，有助于临床患者的个体化治疗，降低耐药，提高疗效。
附图说明
图1为本发明实施例建立类器官体系效果图(其中a为接种后1天，b为接种后5天，c为接种后10天)。
图2为本发明实施例完全培养基中缺少不同成分时所形成类器官的外观形态差异对比图(其中a为专用完全培养基，b为缺R-Spondin培养基，c为缺N-乙酰半胱氨酸培养基)。
图3为本发明实施例2D普通培养原代肝癌细胞免疫荧光鉴定结果图(其中a为CEA抗原鉴定结果，b为CK7抗原鉴定结果，c为p53抗原鉴定结果，d为CD44抗原鉴定结果)。
图4为本发明实施例3D培养无支架类器官细胞球免疫荧光鉴定结果图(其中a为CEA抗原鉴定结果，b为CK7抗原鉴定结果，c为p53抗原鉴定结果，d为CD44抗原鉴定结果)。
图5本发明实施例给药第7天后2D常规培养(A)和类器官3D培养(B)的细胞活性抑制率图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的阐述。
肝癌原代细胞类器官的制备：
将手术取下的肝癌组织剪碎成1mm2大小的组织碎块，随后使用含双抗的PBS溶液漂洗干净，100g离心2min收集组织块沉淀。加入2-3倍体积的组织消化液(0.1％Ⅰ型胶原酶+0.1％Ⅳ型胶原酶+Hank's溶液)，充分混匀后37℃消化30～60min，每隔10min观察一次消化状态，并用力震荡，直至观察到组织出现弥散状态时即可终止消化，收集细胞。
分离的原代肿瘤细胞悬液1000rpm/min离心3分钟，除上清，收集沉淀，加入适量专用培养基重悬，利用差速贴壁法进行细胞纯化。纯化后的细胞进行接种，按照2500细胞/孔的密度接种至超低吸附96孔板U形培养板中(SUMITOMO BAKELITE公司，或其他同类型市售产品)，每孔补充表1的专用培养基150μL，放入37℃、5％CO2培养箱中培养。
接种后30分钟细胞由于重力聚集，24小时内即可形成类器官球，之后细胞球开始组装，越来越紧致，3-4天之后达到稳定，体积开始增大。每天更换一次完全培养基。实验结果如图1所示，本发明技术能够有效地培养肝癌原代细胞无支架类器官球，且接种24h内即可形成类器官，所培养的球体形态完整规则、圆润饱满、边界清晰，连续培养10天仍可维持细胞球形态与活力的稳定。
专用完全培养基中，PrimocinTM必须添加，因临床获取的肝癌组织，其来源患者多伴有乙肝，乙肝病毒会导致该患者原代肿瘤细胞提取分离的失败。
R-Spondin和N-乙酰半胱氨酸在类器官模型建立中的作用比较；
实验分为3组：专用完全培养基组、缺R-Spondin培养基组(其余成分组成与专用完全培养基组完全一致)和缺N-乙酰半胱氨酸培养基组(其余成分组成与专用完全培养基组完全一致)。分离得到的原代肝癌肿瘤细胞悬液，随机等分为3份，离心后分别用三种不同的培养基进行混悬后计数。按2500细胞/孔的密度接种至超低吸附96孔板U形培养板中，每实验组接种不少于9个复孔。
结果如图2所示，按照本发明专用完全培养基所培养的类器官细胞球形态圆润完整、边界线分明；缺少其中的成分R-Spondin时，所成细胞球边缘有崩解现象出现，球体完整性降低；缺少其中的成分N-乙酰半胱氨酸时，所成细胞球球体规则性降低，甚至会出现一孔多球的现象。
肝癌原代细胞及肿瘤类器官的表面抗原鉴定；
对培养稳定的肝癌原代细胞(2D)及形成的类器官(无支架3D细胞球)进行CEA(癌胚抗原)、CK7(细胞角蛋白7)、p53(抑制基因p53抗原)和CD44(多肽抗原)四个抗原的表达分布鉴定。CD44抗原可作为肝细胞癌干细胞表面标志物。
鼠抗人单克隆CEA抗体购自EastCoast Bio公司；鼠抗人单克隆CK7、p53、CD44抗体购自Abcam公司；二抗驴抗鼠488抗体购自Southern Biotech公司；DAPI购自碧云天公司。
免疫荧光鉴定采用间接免疫荧光法，结果见图3、4所示。CEA、CK7、p53、CD44这四种表面抗原在原代细胞及类器官细胞球都有表达，且在原代细胞表面CEA、CD44的表达更强，CK7、p53的表达则相对较弱；而在类器官上这4个抗原的荧光信号强度都有显著增强，且相对而言仍然是CEA、CD44的表达更强。免疫荧光结果显示从肝癌组织分离所得的原代细胞确为肝癌原代细胞，而此原代细胞培养而成的类器官细胞球后能够增强原代细胞的干性，从而体现类器官细胞球在结构及原代特性上的优势。
药敏筛选；
采用生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)，研究比较了肝癌原代细胞体外2D常规培养和采用本专利培养体系建立的肝癌原代细胞类器官3D细胞球对药物的敏感性。普通96孔板(2D常规培养)和类器官培养96孔板(无支架类器官3D培养)的接种密度均为：2500细胞/孔；类器官培养96孔板接种后离心3min，1000rpm。化疗药选择治疗肝癌的一线用药吉西他滨、奥沙利铂、紫杉醇、索拉菲尼及两药联合，给药浓度依据其血浆峰值浓度(PPC)进行设定，吉西他滨为25μg/mL，奥沙利铂为1.0μg/mL，紫杉醇为13.8μg/mL，索拉菲尼为10μg/mL。给药浓度梯度设定为0％、25％、50％、100％、200％PPC。分别再给药第3、5、7天进行细胞ATP测定，计算药物对细胞活性的抑制率，给药第7天的检测结果见图5。根据细胞ATP测定结果对测试药物的敏感性进行评价，如表2所示。
表2药物敏感性评价结果
从类器官的接种到获得药敏结果最少仅需10天，类器官形成3天即可达到稳定状态，开始药敏筛选实验，给药7天即可获得药敏结果。根据ATP-TCA药敏评价标准，给药7天后类器官对吉西他滨、奥沙利铂及二者的联合给药反应为耐药；对紫杉醇反应为耐药，对索拉菲尼反应为轻度敏感，对二者的联合给药反应为强敏感。2D普通培养状态下的原代肝癌细胞对吉西他滨、联合给药反应为强敏感，对奥沙利铂反应为耐药；对紫杉醇反应为耐药，对索拉菲尼及二者的联合用药反应为强敏感。通过比较2D细胞培养和类器官3D细胞球的药敏筛选结果，提示类器官与临床有更好的相关性，类器官3D细胞球药敏筛选会得到更精准的结果，相较于目前常规培养的2D原代肿瘤细胞，本专利技术说建立的类器官3D模型更有利于个体化治疗方案的提出。
另外，从检测结果来看，2D普通培养和类器官3D细胞球状态的肝癌细胞均对奥沙利铂、紫杉醇反应为耐药，反应了此例患者对这两种药物的个体化耐药特性；而含有索拉菲尼的给药方案体现了对肝癌细胞活性的显著抑制作用，这与索拉菲尼在临床肝癌治疗中的广泛应用相一致。
以上所述为本发明较佳实施例，对于本领域的普通技术人员而言，根据本发明的教导，在不脱离本发明的原理与精神的情况下，对实施方式所进行的改变、修改、替换和变型仍落入本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基，其特征在于，由血清替代物N2和B27、Noggin、双抗、表皮生长因子、成纤维生长因子、选择性ROCK1抑制剂、ALK5抑制剂、p38 MAPK抑制剂、N-乙酰半胱氨酸、R-Spondin蛋白、烟酰胺、Wnt3A细胞因子、肝细胞生长因子、PrimocinTM、胎牛血清和基础培养基Advanced DMEM/F12组成。
2.根据权利要求1所述的用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基，其特征在于，所述血清替代物N2和B27的终浓度分别为1％和2％；所述Noggin的终浓度为100ng/mL；所述双抗的终浓度为1-2％；所述表皮生长因子的终浓度为50-100ng/mL；所述成纤维生长因子的终浓度为10-20ng/mL；所述选择性ROCK1抑制剂的终浓度为10-20μmol/L；所述ALK5抑制剂的终浓度为0.5-1.0μmol/L；所述p38 MAPK抑制剂的终浓度为5-15μmol/L；所述N-乙酰半胱氨酸的终浓度为0.5-1.5mmol/L；所述R-Spondin蛋白的终浓度为100-200ng/mL；所述烟酰胺的终浓度为5-15mmol/L；所述Wnt3A细胞因子的终浓度为50-100ng/mL；所述肝细胞生长因子的终浓度为50-100ng/mL；所述PrimocinTM的终浓度为100-200μg/mL；胎牛血清的终浓度为5％；余量均为Advanced DMEM/F12。
3.根据权利要求1所述的用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基，其特征在于，双抗中添加有利于类器官3D细胞球的生长的GlutaMax成分。
4.一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，将将分离获取的肝肿瘤原代细胞接种至超低吸附U型96孔板中，并加入上述培养基，对孔板进行离心，1000rpm离心3min，促进肝肿瘤原代细胞聚集，培养至形成肝肿瘤组织类器官。
5.根据权利要求4所述的一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，肝肿瘤原代细胞接种数量范围为1000～12000细胞/孔。
6.根据权利要求4所述的一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，纯化后的原代细胞接种数量范围为2000-6000细胞/孔。
7.根据权利要求4所述的一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，细胞接种且离心孔板后，在24h内可形成凝聚的细胞球形态，此时为了维持初步形成的细胞球的稳定，在接种前4天内每2天更换一次培养基，4天后再每天更换培养基，以维持养分的供应。
8.根据权利要求4所述的一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，将手术取下的肝癌组织剪碎成1mm2大小的组织碎块，随后使用含双抗的PBS溶液漂洗干净，100g离心2min收集组织块沉淀，加入2-3倍体积的组织消化液，充分混匀后37℃消化30～60min，每隔10min观察一次消化状态，并用力震荡，直至观察到组织出现弥散状态时即可终止消化，收集细胞；
分离的原代肿瘤细胞悬液1000rpm/min离心3分钟，除上清，收集沉淀，加入适量专用培养基重悬，利用差速贴壁法进行细胞纯化。纯化后的细胞进行接种，按照2500细胞/孔的密度接种至超低吸附96孔板U形培养板中，每孔补专用培养基150μL，放入37℃、5％CO2培养箱中培养，24小时内即可形成类器官球；之后细胞球开始组装，越来越紧致，3-4天之后达到稳定，体积开始增大，每天更换一次完全培养基，所培养的球体形态完整规则、圆润饱满、边界清晰，连续培养10天仍可维持细胞球形态与活力的稳定。
9.根据权利要求4所述的一种肝肿瘤无支架类器官培养方法，其特征在于，所述组织消化液为0.1％Ⅰ型胶原酶+0.1％Ⅳ型胶原酶+Hank's溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010348114.0A CN111411084A (zh) | 2020-04-28 | 2020-04-28 | 一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010348114.0A CN111411084A (zh) | 2020-04-28 | 2020-04-28 | 一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111411084A true CN111411084A (zh) | 2020-07-14 |
Family
ID=71490197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010348114.0A Pending CN111411084A (zh) | 2020-04-28 | 2020-04-28 | 一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111411084A (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112725279A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-30 | 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 | 一种基于肿瘤类器官模型的药敏检测和标准建立方法以及微流控芯片结构的应用 |
| CN112961819A (zh) * | 2020-12-01 | 2021-06-15 | 保信亚太生物科技（深圳）有限公司 | 博卡病毒小肠上皮类器官感染模型的构建方法 |
| CN113186163A (zh) * | 2021-01-18 | 2021-07-30 | 南昌五元生物科技有限公司 | 一种基于p53突变筛选肿瘤类器官的培养方法 |
| CN113774106A (zh) * | 2021-04-27 | 2021-12-10 | 上海益诺思生物技术股份有限公司 | 一种利用3d肝细胞体外微核细胞组学检测遗传毒性的方法 |
| CN114438032A (zh) * | 2022-01-07 | 2022-05-06 | 南方医科大学南方医院 | 一种用于喉癌组织3d培养的组合物、培养基及方法 |
| CN114854690A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-08-05 | 南宁云幂方生物医药技术有限责任公司 | 用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途 |
| CN114908039A (zh) * | 2022-06-17 | 2022-08-16 | 浙江弘瑞医疗科技有限公司 | 胃癌类器官的培养基及其无支架培养方法 |
| CN115772498A (zh) * | 2021-09-08 | 2023-03-10 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 一种用于肝癌类器官培养的培养基、及其培养方法和应用 |
| CN115948337A (zh) * | 2023-02-03 | 2023-04-11 | 复旦大学附属中山医院 | 一种肝细胞癌类器官的培养基和培养方法 |
| CN115975937A (zh) * | 2021-10-14 | 2023-04-18 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法 |
Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102459574A (zh) * | 2009-06-18 | 2012-05-16 | 塞拉提斯股份公司 | 用于人多潜能干(hPS)细胞的生长和分化的3D培养系统 |
| CN103237888A (zh) * | 2010-07-29 | 2013-08-07 | 荷兰皇家科学院 | 肝脏的类器官、其用途以及获得它们的培养方法 |
| CN106190980A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-12-07 | 张云霞 | 一种基于人食管癌组织用于体外培养食管癌肿瘤类器官的专用培养基及培养方法 |
| CN106635962A (zh) * | 2017-01-20 | 2017-05-10 | 李晖 | 一种人正常阴道上皮3d分化培养物模型的构建方法与用途 |
| CN107012116A (zh) * | 2017-05-09 | 2017-08-04 | 华东师范大学 | 一种小肠3d类器官研究bcrp介导药物转运模型的构建方法与应用 |
| CN109880791A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-06-14 | 南通大学附属医院 | 一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法 |
| CN110004109A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-12 | 南通大学附属医院 | 一种肝癌类器官模型的体外构建方法 |
| CN110317775A (zh) * | 2018-03-30 | 2019-10-11 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 用于肝细胞培养及肝脏类器官制备的培养基 |
| CN110452875A (zh) * | 2018-05-07 | 2019-11-15 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基 |
| CN110592022A (zh) * | 2019-09-17 | 2019-12-20 | 罗国安 | 一种肺肿瘤类器官专用培养基及无支架3d培养方法 |
| CN110592020A (zh) * | 2018-06-13 | 2019-12-20 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种用于培养结直肠癌实体瘤原代细胞的培养基 |
| CN110592018A (zh) * | 2018-06-13 | 2019-12-20 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种结直肠癌实体瘤原代细胞的培养方法 |
| CN110809625A (zh) * | 2017-05-29 | 2020-02-18 | 加拿大干细胞技术公司 | 用于获得类器官的组合物和方法 |
| CN110878286A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-03-13 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | 一种用于肝癌类器官细胞球培养的培养基 |
| CN110903976A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-03-24 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | 一种用于类器官球体培养的孔板装置 |
| CN111989569A (zh) * | 2017-12-21 | 2020-11-24 | 荷兰皇家科学院 | 免疫细胞类器官共培养物 |
-
2020
- 2020-04-28 CN CN202010348114.0A patent/CN111411084A/zh active Pending
Patent Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102459574A (zh) * | 2009-06-18 | 2012-05-16 | 塞拉提斯股份公司 | 用于人多潜能干(hPS)细胞的生长和分化的3D培养系统 |
| CN103237888A (zh) * | 2010-07-29 | 2013-08-07 | 荷兰皇家科学院 | 肝脏的类器官、其用途以及获得它们的培养方法 |
| CN106190980A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-12-07 | 张云霞 | 一种基于人食管癌组织用于体外培养食管癌肿瘤类器官的专用培养基及培养方法 |
| CN106635962A (zh) * | 2017-01-20 | 2017-05-10 | 李晖 | 一种人正常阴道上皮3d分化培养物模型的构建方法与用途 |
| CN107012116A (zh) * | 2017-05-09 | 2017-08-04 | 华东师范大学 | 一种小肠3d类器官研究bcrp介导药物转运模型的构建方法与应用 |
| CN110809625A (zh) * | 2017-05-29 | 2020-02-18 | 加拿大干细胞技术公司 | 用于获得类器官的组合物和方法 |
| CN111989569A (zh) * | 2017-12-21 | 2020-11-24 | 荷兰皇家科学院 | 免疫细胞类器官共培养物 |
| CN110317775A (zh) * | 2018-03-30 | 2019-10-11 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 用于肝细胞培养及肝脏类器官制备的培养基 |
| CN110452875A (zh) * | 2018-05-07 | 2019-11-15 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基 |
| CN110592020A (zh) * | 2018-06-13 | 2019-12-20 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种用于培养结直肠癌实体瘤原代细胞的培养基 |
| CN110592018A (zh) * | 2018-06-13 | 2019-12-20 | 北京吉尚立德生物科技有限公司 | 一种结直肠癌实体瘤原代细胞的培养方法 |
| CN109880791A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-06-14 | 南通大学附属医院 | 一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法 |
| CN110004109A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-12 | 南通大学附属医院 | 一种肝癌类器官模型的体外构建方法 |
| CN110592022A (zh) * | 2019-09-17 | 2019-12-20 | 罗国安 | 一种肺肿瘤类器官专用培养基及无支架3d培养方法 |
| CN110903976A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-03-24 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | 一种用于类器官球体培养的孔板装置 |
| CN110878286A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-03-13 | 江苏信安佳医疗科技有限公司 | 一种用于肝癌类器官细胞球培养的培养基 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LAURA BROUTIER等: "Human primary liver cancer–derived organoid cultures for disease modeling and drug screening", 《NATURE MEDICINE》 * |
| 王璇: "构建人多能性干细胞来源具有双向分化潜能的肝脏类器官的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112961819A (zh) * | 2020-12-01 | 2021-06-15 | 保信亚太生物科技（深圳）有限公司 | 博卡病毒小肠上皮类器官感染模型的构建方法 |
| CN112725279A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-30 | 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 | 一种基于肿瘤类器官模型的药敏检测和标准建立方法以及微流控芯片结构的应用 |
| CN112725279B (zh) * | 2020-12-31 | 2023-10-24 | 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 | 一种基于肿瘤类器官模型的药敏检测和标准建立方法以及微流控芯片结构的应用 |
| CN113186163A (zh) * | 2021-01-18 | 2021-07-30 | 南昌五元生物科技有限公司 | 一种基于p53突变筛选肿瘤类器官的培养方法 |
| CN113774106B (zh) * | 2021-04-27 | 2023-08-15 | 上海益诺思生物技术股份有限公司 | 一种利用3d肝细胞体外微核细胞组学检测遗传毒性的方法 |
| CN113774106A (zh) * | 2021-04-27 | 2021-12-10 | 上海益诺思生物技术股份有限公司 | 一种利用3d肝细胞体外微核细胞组学检测遗传毒性的方法 |
| JP7779582B2 (ja) | 2021-09-08 | 2025-12-03 | 合肥中科普瑞昇生物医▲薬▼科技有限公司 | 肝細胞癌オルガノイド培養のための培養培地、肝細胞癌オルガノイドの培養方法、及び、それらの用途 |
| JP2024531603A (ja) * | 2021-09-08 | 2024-08-29 | 合肥中科普瑞昇生物医▲薬▼科技有限公司 | 肝細胞癌オルガノイド培養のための培養培地、肝細胞癌オルガノイドの培養方法、及び、それらの用途 |
| CN115772498A (zh) * | 2021-09-08 | 2023-03-10 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 一种用于肝癌类器官培养的培养基、及其培养方法和应用 |
| CN115772498B (zh) * | 2021-09-08 | 2025-09-12 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 一种用于肝癌类器官培养的培养基、及其培养方法和应用 |
| CN115975937B (zh) * | 2021-10-14 | 2025-10-17 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法 |
| WO2023060695A1 (zh) * | 2021-10-14 | 2023-04-20 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法 |
| CN115975937A (zh) * | 2021-10-14 | 2023-04-18 | 合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司 | 肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法 |
| CN114438032A (zh) * | 2022-01-07 | 2022-05-06 | 南方医科大学南方医院 | 一种用于喉癌组织3d培养的组合物、培养基及方法 |
| CN114854690A (zh) * | 2022-04-20 | 2022-08-05 | 南宁云幂方生物医药技术有限责任公司 | 用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途 |
| CN114908039B (zh) * | 2022-06-17 | 2024-08-13 | 浙江弘瑞医疗科技有限公司 | 胃癌类器官的培养基及其无支架培养方法 |
| CN114908039A (zh) * | 2022-06-17 | 2022-08-16 | 浙江弘瑞医疗科技有限公司 | 胃癌类器官的培养基及其无支架培养方法 |
| CN115948337A (zh) * | 2023-02-03 | 2023-04-11 | 复旦大学附属中山医院 | 一种肝细胞癌类器官的培养基和培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111411084A (zh) | 一种用于构建肝肿瘤无支架类器官的培养基及培养方法 | |
| CN106834212B (zh) | 一种用于肺组织3d培养的培养基 | |
| CN114181903B (zh) | 结直肠癌类器官培养基及无支架3d培养方法 | |
| Jiang et al. | Organoids: opportunities and challenges of cancer therapy | |
| CN112852714B (zh) | 构建原位原发肺癌动物模型的方法 | |
| Wang et al. | Establishment of a patient-derived organoid model and living biobank for nasopharyngeal carcinoma | |
| US6117674A (en) | Pathogen propagation in cultured three-dimensional tissue mass | |
| CN111690615B (zh) | 一种鼻咽癌类器官专用培养基及无支架培养方法 | |
| CN112592896A (zh) | 一种肺腺癌类器官的培养液及其培养方法 | |
| CN111057680A (zh) | 用于肺部肿瘤细胞的培养基和三维培养方法 | |
| CN114908039B (zh) | 胃癌类器官的培养基及其无支架培养方法 | |
| CN114717190B (zh) | 一种人乳腺恶性叶状肿瘤细胞系bpt0713及其应用 | |
| CN118726262A (zh) | 一种肿瘤类器官的培养方法 | |
| CN117106724A (zh) | 一种h3k27m突变型脊髓胶质瘤细胞及其培养方法 | |
| Tan et al. | Screening of an individualized treatment strategy for an advanced gallbladder cancer using patient-derived tumor xenograft and organoid models | |
| CN114891749B (zh) | 一种胰腺癌类器官的培养基及胰腺癌类器官的培养方法 | |
| CN114075539B (zh) | 构建原位原发膀胱癌动物模型的方法 | |
| CN118460471A (zh) | 宫颈神经内分泌癌类器官及其培养基与培养方法 | |
| CN116536265A (zh) | 一种肝癌专用的类器官培养基、培养方法与传代方法 | |
| CN111424015A (zh) | 用于前列腺肿瘤细胞的培养基和三维培养方法 | |
| US20130196349A1 (en) | In Vitro Tumor Metastasis Model | |
| CN114958753B (zh) | 一种舌癌类器官的培养基、培养方法及鉴定方法 | |
| CN111012767A (zh) | 一种酶抑制剂在制备预防雾霾导致肺癌的药物中的用途 | |
| CN120813681A (zh) | 建立新型人体组织类器官培养体系 | |
| CN116555181A (zh) | 一种胰腺癌类器官、培养基及培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200714 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |