CN111419846A - 罗通定在制备治疗脂肪肝的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了罗通定在制备治疗脂肪肝的药物中的用途，属于医药领域。其中，本发明主要提供了式I所示的化合物、或其盐在制备治疗脂肪肝和/或降脂的药物中的用途。本发明研究发现罗通定能够显著抑制脂肪肝患者肝脏中脂质沉积，具有降脂作用，对于脂肪肝具有良好的治疗作用，且对脂肪肝患者健康无损害，为脂肪肝的治疗提供了一种新的方法。同时，本发明为老药新用，可以大大节约开发时间和成本：已经上市的药物药动力学以及安全性资料较为详尽，新用途的开发很快就能进行二期临床评估，缩短研发周期，节约开发成本，最大化利用资源。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及罗通定在制备治疗脂肪肝的药物中的用途。
背景技术
脂肪肝是指各种原因引起的肝细胞内脂类，特别是甘油三脂过度积累。正常人肝的总脂量占肝重量的5％，内含磷脂、三酰甘油、脂酸、胆固醇及胆固醇脂等。若总脂量超过肝重量的5％，即称为脂肪肝，总脂量超过越多，则脂肪肝病情越重。脂肪肝已经成为我国第一大慢性肝脏疾病。酒精性和非酒精性脂肪肝病属于生活方式相关的慢性肝病，需要结合合理膳食、加强锻炼，结合良好心态长期综合治疗。目前尚无脂肪肝的针对性治疗药物，所以临床谨慎用药。一般情况下，在3-6月生活方式干预效果不佳时，尝试针对代谢紊乱进行药物治疗，一般使用降脂药(如他汀类)，或者保肝药(如水飞蓟素等)等药物，这类药物本身存在较多不良反应，且用于脂肪肝治疗时，原先用药目的也可能成为新的不良反应引起机体不适。
罗通定(Rotundine)又名延胡索乙素，即左旋四氢巴马汀(L-Tetrahydropalmatine,L-THP)，是从罂粟科植物延胡索的干燥块茎中提取的一种生物碱，其结构如下：
罗通定具有安定、镇静、镇痛和中枢性肌肉松弛等作用，主要用于治疗内科疾病引起的钝痛、痛经及分娩止痛等，其作用机制与阿片受体无关，无明显的成瘾性，现已被制成片剂和注射剂广泛用于临床。随着对罗通定药理作用的研究逐渐深入，其临床应用范围也逐渐扩大。现在还用于与其他药物联合治疗稽延性戒断症状，II型糖尿病失眠和原发性高血压等。但是，目前尚未见使用罗通定治疗脂肪肝的报道。
发明内容
本发明的目的是提供罗通定在制备治疗脂肪肝的药物中的用途。
本发明提供了式I所示的化合物、或其盐在制备治疗脂肪肝和/或降脂的药物中的用途；
其中，R1～R4分别独立选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硝基。
进一步地，R1～R4分别独立选自氢、C1～C3烷基、C1～C3烷氧基。
进一步地，所述化合物为式II所示化合物：
进一步地，所述药物为抑制肝脏中脂质沉积的药物。
本发明还提供了一种用于治疗脂肪肝和/或降脂的药物，它是以式I所示的化合物、或其盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂：
其中，R1～R4分别独立选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硝基。
进一步地，R1～R4分别独立选自氢、C1～C3烷基、C1～C3烷氧基。
进一步地，所述化合物为式II所示化合物：
进一步地，所述药物为抑制肝脏中脂质沉积的药物。
本发明研究发现罗通定能够显著抑制脂肪肝患者肝脏中脂质沉积，具有降脂作用，对于脂肪肝具有良好的治疗作用，且对脂肪肝患者健康无损害，为脂肪肝的治疗提供了一种新的方法。同时，本发明为老药新用，可以大大节约开发时间和成本：已经上市的药物药动力学以及安全性资料较为详尽，新用途的开发很快就能进行二期临床评估，缩短研发周期，节约开发成本，最大化利用资源。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为罗通定对油酸钠诱导L02细胞脂质沉积模型的影响。
图2为实验期间SD大鼠体重(A)、摄食量(B)和饮水量(C)的变化。
图3为罗通定对高脂饲料诱导的SD大鼠模型肝脏中脂质沉积的影响(油红O染色)。
图4为罗通定对高脂饲料诱导的SD大鼠模型肝脏中脂质沉积的影响(HE染色)。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1、罗通定对油酸钠诱导L02细胞建立的细胞脂质沉积模型的作用
实验方法：
(一)油酸钠诱导L02细胞建立细胞脂质沉积模型：
1、用镊子夹出浸泡在酒精中干净的玻片，待酒精挥发干后放入24孔板；
2、将对数生长期的人正常肝细胞(L02细胞)从直径10cm的培养皿消化下来后，根据细胞密度按1:6-1:10稀释至密度为105个/mL的细胞悬浮液，将细胞悬浮液接种到24孔板中的玻片上，每个孔板中加入800μL细胞悬浮液，再加入含10％胎牛血清的RPMI1640完全培养基后，放入细胞培养箱中(37℃，5％CO2)，待细胞爬片；
3、细胞爬片24h后，配制油酸钠母液5mg/mL(即14.69mM)，用相应完全培养基稀释油酸钠母液至最终浓度为100μM，替换原有培养基，在细胞培养箱(37℃，5％CO2)孵育24h；
4、24h后可在普通倒置显微镜下看到细胞质中有小泡，即形成的脂滴，说明模型建造成功。
(二)给药：
1、罗通定的给药浓度为1.1μM、3.3μM、10μM和30μM。
2、待造模成功后，将罗通定用相应的完全培养基，按上述浓度稀释，替换原先的诱导培养基，在细胞培养箱(37℃，5％CO2)孵育24h。
(三)油红O染色
1、药物处理24h后，取出孔板，弃去培养基，用PBS清洗2次，加入4％PFA固定20min；
2、弃去4％PFA，用PBS清洗2次，加入油红O工作液，染色45min；
3、弃去染色液，加入60％异丙醇稍微晃洗1遍，倒掉，再使用PBS清洗2遍，加入苏木素染1min；
4、弃去苏木素溶液，加入PBS清洗3遍，再使用ddH2O清洗4遍，至看不见浮色；
5、用甘油封片，显微镜下观察及拍照，放至-20℃冰箱保存。
实验结果：
罗通定对油酸钠诱导L02细胞建立的细胞脂质沉积模型的作用结果如图1所示。由图1可知：油酸钠明显诱导L02细胞发生脂质沉积，该模型成功建立。罗通定在3.3μM、10μM和30μM剂量时能显著抑制L02细胞内的脂质沉积，尤其是剂量为30μM时，细胞内的脂质沉积基本消失。说明罗通定对脂质沉积有明显的抑制效果，在较低剂量就能显著抑制细胞内脂质沉积，且随着浓度增加，抑制效果更优。
实施例2、罗通定对SD大鼠高脂饲料喂养的脂肪肝大鼠模型的作用
实验方法：
(一)SD大鼠高脂饲料喂养的脂肪肝大鼠模型的建立
1、8周龄SD雄性大鼠称重，根据体重随机分为五组，每组8只，适应性喂养3天。
2、对照组大鼠(没有造模的SD大鼠)使用普通饲料喂养，模型组大鼠使用高脂饲料喂养，罗通定高、中、低剂量组大鼠使用高脂饲料喂养。喂养造模时间为12周，期间记录大鼠摄食量、饮水量和大鼠体重。
(二)给药
1、造模成功后，以质量浓度为0.3％的CMC-Na溶液为溶剂配制罗通定溶液；
2、对照组和模型组大鼠每日灌胃给予2mL生理盐水连续两周，罗通定高剂量组大鼠每日灌胃给予罗通定溶液的剂量为13.5mg/kg(每kg的SD大鼠给予罗通定13.5mg)连续两周，罗通定中剂量组大鼠每日灌胃给予罗通定溶液的剂量为4.5mg/kg(每kg的SD大鼠给予罗通定4.5mg)连续两周，罗通定低剂量组大鼠每日灌胃给予罗通定溶液的剂量为1.5mg/kg(每kg的SD大鼠给予罗通定1.5mg)连续两周。期间记录大鼠摄食量、饮水量和大鼠体重。
(三)检测
1、给药结束后处死大鼠，取肝脏，一部分用OCT剂包埋做冰冻切片，再采用油红O染色，一部分用多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片后做HE染色。
2、冰冻切片及油红O染色：载玻片需提前用多聚赖氨酸处理，冰冻组织切15μm切片，贴片用载玻片置于室温下自然晾干；用移液枪将60％油红O染色液300μL滴于切片上，室温下反应7min；缓慢倾斜去除染色液，滴加等量1％盐酸水分化3s，双蒸水缓慢冲洗5s终止分化；苏木染核30s，自来水冲洗返蓝1min；阿拉伯胶封片后显微镜下观察。
3、石蜡切片及HE染色：肝脏多聚甲醛固定后，石蜡包埋，切5μm切片，65℃烤片；随后脱蜡入水，二甲苯I处理15min，二甲苯II处理15min，100％乙醇I处理15min，100％乙醇II处理15min，95％乙醇处理10min，80％乙醇处理5min，70％乙醇处理5min，自来水流水缓慢冲洗至水中无色，蒸馏水水化5min；苏木精液染色3-10min，流水缓慢冲洗至水中无色，用PBS洗5min，蒸馏水水化2min；伊红水溶液染色5-10min，流水缓慢充分冲洗至无色；脱水透明，中性树脂封片；在显微镜下观察并拍照。
实验结果：
如图2所示：与普通饲料喂养相比，高脂饲料喂养的SD大鼠体重显著增加，摄食量和饮水量无显著差异；给药后，各罗通定剂量给药组SD大鼠体重、摄食量和饮水量均无显著差异。如图3和4所示，油红O染色和HE染色结果均显示，罗通定在剂量为4.5mg/kg和13.5mg/kg时能显著抑制高脂饲料诱导的SD大鼠脂肪肝模型肝脏中的脂质沉积。结合图2的结果分析，罗通定抑制肝脏脂质沉积的作用不是通过减少大鼠摄食或降低大鼠体重达到的。实验结果说明罗通定能显著抑制脂肪肝患者肝脏中的脂质沉积，对于脂肪肝有有效的治疗作用，同时在治疗过程中不会减少患者摄食、摄水或降低患者体重，对于患者健康没有损害。
综上，本发明研究发现罗通定能够显著抑制脂肪肝患者肝脏中脂质沉积，具有降脂作用，对于脂肪肝具有良好的治疗作用，且对脂肪肝患者健康无损害，为脂肪肝的治疗提供了一种新的方法。同时，本发明为老药新用，可以大大节约开发时间和成本：已经上市的药物药动力学以及安全性资料较为详尽，新用途的开发很快就能进行二期临床评估，缩短研发周期，节约开发成本，最大化利用资源。
Claims (8)
1.式I所示的化合物、或其盐在制备治疗脂肪肝和/或降脂的药物中的用途；
其中，R1～R4分别独立选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硝基。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：R1～R4分别独立选自氢、C1～C3烷基、C1～C3烷氧基。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述化合物为式II所示化合物：
4.根据权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于：所述药物为抑制肝脏中脂质沉积的药物。
5.一种用于治疗脂肪肝和/或降脂的药物，它是以式I所示的化合物、或其盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂：
其中，R1～R4分别独立选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基、羧基、氨基、硝基。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：R1～R4分别独立选自氢、C1～C3烷基、C1～C3烷氧基。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述化合物为式II所示化合物：
8.根据权利要求5～7任一项所述的药物，其特征在于：所述药物为抑制肝脏中脂质沉积的药物。
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|---|---|---|---|---|
| CN114042066A (zh) * | 2021-11-17 | 2022-02-15 | 长春中医药大学 | 延胡索乙素在治疗非酒精性脂肪性肝病中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090048246A1 (en) * | 2007-06-22 | 2009-02-19 | Haiyan Liu | Compounds, compositions and methods for reducing lipid levels |
| CN102256973A (zh) * | 2008-12-23 | 2011-11-23 | Cvi制药有限公司 | 用于降低脂类水平的紫堇碱衍生物 |
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