CN111407900B

CN111407900B - 一种雌激素受体靶向放射性示踪剂、制备方法及应用

Info

Publication number: CN111407900B
Application number: CN202010115833.8A
Authority: CN
Inventors: 张现忠; 许多; 彭晨钰; 高菲; 郭志德; 庄荣强
Original assignee: Xiamen University
Current assignee: Xiamen University
Priority date: 2020-02-25
Filing date: 2020-02-25
Publication date: 2021-07-13
Anticipated expiration: 2040-02-25
Also published as: CN111407900A

Abstract

本发明公开了一种雌激素受体靶向放射性示踪剂、制备方法及应用。该示踪剂为炔雌醇二聚体结构，其分子中包括两个相同的17α‑炔雌醇基团，通过一个聚乙二醇短链，应用“点击”化学反应进行一步标记放射性信号基团制备而成。该示踪剂在雌激素受体阳性的子宫、卵巢、乳腺癌细胞和肿瘤中具有较高的摄取,可以在体内外区分雌激素阳性受体和雌激素阴性受体，具有很强的特异性，满足用作乳腺癌雌激素受体显像剂的条件。该示踪剂的结构式为：

Description

一种雌激素受体靶向放射性示踪剂、制备方法及应用

技术领域

本发明属于医学影像技术领域，具体涉及一种雌激素受体靶向放射性示踪剂、制备方法及应用。

背景技术

尽管近年来随着医疗水平的不断发展，乳腺癌的死亡率有所下降，但在全世界范围内，乳腺癌依旧是女性死亡的主要原因。统计表明，大约有70-80％的乳腺癌呈雌激素受体(ER)阳性，ER阳性乳腺癌会比其他受体类型的乳腺癌生长更缓慢，分化程度更好，并且总体预后稍好一些。因此，ER是否表达已经成为少数预后因素之一，连同腋窝淋巴结状态、肿瘤大小和组织学分级一起指导临床对乳腺癌的治疗。特别是用于指导内分泌治疗，乳腺肿瘤中低水平的 ER，往往对内分泌治疗的反应较差。因此，明确ER的表达状况十分重要。

乳腺癌治愈的关键是早发现、早治疗以及精准分型分期。目前乳腺癌的诊断技术主要包括乳房X线照相术、计算机断层扫描(CT)、超声检查和骨骼闪烁扫描技术等，这些无创检测方式提供了有效治疗原发性和转移性乳腺癌的相关形态学信息。而想要获得分子细胞层面的信息，还需采用分子成像方式进行显像。分子成像方式用于乳腺癌主要包括磁共振成像(MRI)、光学成像、靶向超声，单光子发射计算机断层扫描(SPECT)和正电子发射断层扫描(PET)。在这些成像方式中，基于放射性核素的成像模式(PET和SPECT)似乎是对活体内受体显像的最佳方式。这主要是由于细胞内受体的量往往极其微少，与特异性配体的结合能力大大受限，因此需要具有高比活性的配体与之结合，而PET和SPECT是最灵敏的分子成像技术，它们能够在体内定位浓度低于皮摩尔范围的特异性生物分子。

基于受体的乳腺癌成像方法的发展需要用适当的放射性核素来标记受体配体，然后用于 SPECT(例如¹²³I或^99mTc)或PET(例如¹⁸F)来成像受体。这些放射性标记的受体配体需要满足三个条件：1.对靶受体具有高结合亲和力；2.对非特异性结合位点具有低结合亲和力；3. 合适的化学以及代谢稳定性。雌激素(包括雌二醇和炔雌醇等)是人体内源性激素，对ER具有高亲和力，是ER最好的特异性配体。将雌激素及其衍生物进行放射性标记，然后进行SPECT 或PET显像可以提供非侵入性方法来定位原发性和转移性病灶，有助于预测患者生存机会以及预测患者对各种疗法的反应。相比于目前临床上使用的有创的乳腺癌分期分型“金标准”-组织活检以及免疫学分析，这种无创的显像方式具有诸多优势，势必会在将来蓬勃发展。

分子影像技术的发展需要探针的发展作为支撑，多年来研究人员已经设计和评估了几类可能用作诊断和治疗的放射性ER靶向特异性配体。尽管PET成像具有更高的分辨率，更高的灵敏度和更好的定量能力，但是由于SPECT显像使用中长寿命放射性核素，与雌激素在体内代谢的生物学周期更加匹配，因此SPECT仍然是核医学常规临床研究中更为实用的成像方式。到目前为止，已经合成和评估一系列用PET和SPECT放射性核素标记的雌二醇的卤代衍生物，然而，由于这些放射性ER配体在体内往往代谢不稳定并且在血液中快速清除，最终使放射性示踪剂的靶向能力大打折扣，因此这些探针很少能够达到临床使用的目的。

许多研究表明，用放射性同位素氟和碘标记的雌激素衍生物能够保持较高的ER结合亲和力，在体内具有良好的选择性。在这些靶向ER的放射性示踪剂中，由Kiesewetter等人于1980 年合成并标记的[¹⁸F]FES最为经典。[¹⁸F]FES对未成熟雌性大鼠的生物分布研究表明，ER丰富的子宫摄取要高于其他组织和器官，并且该摄取可以被ER抑制剂雌二醇抑制。Mintun等人于 1988年首次将[¹⁸F]FES用于原发性乳腺癌患者中，成功的确定了18例乳腺癌患者的ER表达状态。并发现在PET成像确定的ER含量与活检样本中体外测定的ER含量具有88％的一致性，证明了[¹⁸F]FES可用于早期乳腺癌的检测。但是，在对[¹⁸F]FES在人体内的清除和代谢的研究中发现，[¹⁸F]FES从血液中迅速清除并代谢(20分钟时只有20％的[¹⁸F]FES参与循环)。由于 [¹⁸F]FES清除速率过快，所以导致靶向部位摄取[¹⁸F]FES不够充分。

为了改善[¹⁸F]FES在体内的生物学行为，Katzenellenbogen等制备了许多含有11位和17 位取代基的雌二醇类似物，包括17α-乙炔基-FES、17β-乙炔基-FES、11β-甲氧基-FES和11 β-乙基-FES衍生物等。11位和17位取代基通过改变结合特性或雌激素代谢途径来增加体内效力或改善体内吸收选择性。研究表明，11β-甲氧基部分降低了ER结合亲和力，而11β-乙基增加了对受体的亲和力。17β-乙炔基取代基也提高了结合亲和力，但不如11β-乙基显着，17 α-羟基和17β-乙炔基会降低分子的的结合亲和力。还有研究表明，在雌二醇的2或4位引入氟，可以降低体内代谢速率。Seimbille等人制备了一系列2位或4位被氟原子取代的具有或不具有11β-甲氧基的FES衍生物，并且对这些化合物对ER的结合亲和力进行评估，结果证明在[¹⁸F]FES的2或4位加入氟可以延长血液循环时间，从而提高其在富含ER的靶组织中的摄取。然而，这些取代基改造对[¹⁸F]FES代谢稳定性的提升仅限于代谢产物种类的减少，血液循环时间也并没有明显的提升。

16α-[¹²⁵I]碘代雌二醇是第一个单光子发射ER显像剂，在大鼠子宫中具有一定的ER摄取。但是，甲状腺的高放射性摄取表明体内发生了严重的脱碘。在之后的许多研究中也试图通过对雌二醇进行官能团修饰，来提高代谢稳定性，然而，甲状腺中明显较高的放射性摄取表明代谢稳定性依旧没有得到改善，代谢脱碘导致的非特异性摄取已成为该类探针的普遍问题。所以，迄今为止，几乎没有放射性碘标记的探针已进行临床试验阶段，放射性碘-125/131标记的雌激素配体的研究几乎停滞了。

从以前的研究中，我们了解到增加代谢稳定性对于开发ER显像剂至关重要。据文献报道，铜(II)介导的叠氮化物，炔烃和[¹²⁵I]碘化物反应生成5-[¹²⁵I]碘-1,2,3-三唑的反应具有很高的放射化学产率，并且生成的5-[¹²⁵I]碘-1,2,3-三唑结构可有效防止体内代谢脱碘。与其他多步放射性标记方法相比，单步碘标记方法更便于应用和推广，并且目前还没有利用该方法进行ER 显象剂标记的研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种雌激素受体靶向放射性示踪剂、制备方法及应用，解决了上述背景技术中的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：所述示踪剂为炔雌醇二聚体结构，其分子中包括两个相同的17α-炔雌醇基团、聚乙二醇链和放射性信号基团；所述聚乙二醇链的聚合度n＝1～5；所述示踪剂的结构式如下：

其中，R为放射性信号基团。

在本发明一较佳实施例中，所述放射性信号基团为放射性碘同位素¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I或者¹⁸F。

在本发明一较佳实施例中，反应路线如下：

其中，TsO表示对甲苯磺酰氧基。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的制备方法，具体包括如下步骤：

1)将化合物1和对甲基苯磺酰氯以摩尔比1～5：2.5～15的比例混合，在三乙胺作用下，得到化合物2；

2)将化合物2与叠氮化钠以摩尔比1～5：5～1的比例混合，得到化合物3；

3)将化合物3与17α-炔雌醇发生“点击”反应，得到化合物4；

4)将化合物4与叠氮化钠以摩尔比1～5：5～1的比例混合，得到化合物5；

5)将化合物5标记放射性信号基团，得到目标标记产物化合物6，即为雌激素受体靶向放射性示踪剂。

在本发明一较佳实施例中，所述步骤5)中，将化合物5标记放射性碘同位素¹²³I、¹²⁴I、 ¹²⁵I、¹³¹I，得到化合物7，所述化合物7的结构式为

在本发明一较佳实施例中，还包括6)将化合物7通过卤素交换的方法标记18F，得到目标标记产物化合物8，其反应路线如下：

本发明的制备方法合成了第一个放射性碘标记的雌二醇二聚体-化合物6，并且以化合物6 的标准参照化合物为前体，通过卤素交换的方法制得了氟-18标记的雌二醇二聚体-化合物8。此外，PEG链的引入可降低化合物6和8的亲脂性，从而降低非特异性摄取。我们对这类化合物进行了体外/体内稳定性研究、受体结合研究、生物分布实验以及小动物SPECT/CT成像等研究，实验结果表明化合物6在体内代谢的时间被成功延长，而且对ER阳性细胞及乳腺癌具有很高的特异性，化合物8在体外对ER阳性细胞具有高特异性。

本发明还提供了上述一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的应用，用于标记¹²³I、¹²⁵I的单光子发射计算机化断层显像剂，或用于标记¹²⁴I、¹⁸F的正电子发射型计算机断层显像剂，以及用于标记¹³¹I的雌激素受体阳性细胞显像剂。

本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：

1、本发明的示踪剂具有雌二醇二聚体分子骨架，具有高ER亲和力：具有良好的化学稳定性和体内代谢稳定性，合适的血液清除时间；在体内外对ER阳性细胞以及ER丰富的子宫和卵巢具有高特异性摄取，靶向性强；

2、本发明的制备方法简便易行，放射化学产率高；

3、本发明一类雌激素受体示踪剂具有优良的体内生物学性能：在雌激素受体阳性肿瘤中具有较高的特异性摄取，靶与非靶比值较高，非特异性背景低，较低的非靶脏器摄取可以减少不必要的放射性损伤，可用于进行雌激素受体阳性肿瘤的SPECT和PET显像。

附图说明

图1化合物6(下)及其标准参照化合物(上)的高效液相色谱(HPLC)分析图；

图2化合物8(下)及其标准参照化合物(上)的高效液相色谱(HPLC)分析图；

图3放射性-HPLC分析化合物6在尾静脉注射后10分钟、20分钟、30分钟和60分钟时，在血液(a～d)和尿液(e～h)样本中的代谢情况；

图4中(a)化合物6的细胞饱和结合曲线；(b)MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞对化合物6的摄取比率随时间的变化趋势，以及被抑制剂抑制后的MCF-7细胞对化合物6的摄取随时间的变化趋势；(c)MCF-7细胞被抑制前后对化合物6的摄取变化情况；(d)MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞对化合物6的摄取对比；

图5中(a)化合物8的细胞饱和结合曲线；(b)MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞对化合物8的摄取比率随时间的变化趋势以及被抑制剂抑制后的MCF-7细胞对化合物8的摄取随时间的变化趋势；(c)MCF-7细胞被抑制前后对化合物8的摄取变化情况；(d)MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞对化合物8的摄取对比；

图6中(a)化合物6在正常未成熟的雌性SD大鼠体内1小时、2小时以及雌二醇共注射抑制组1小时时的组织器官分布情况，不同组织器官摄取值以每克组织百分注射剂量率(％ID/g) 的形式表示；(b)各组实验的子宫与血液的放射性摄取比值；(c)各组实验的子宫与肌肉的放射性摄取比值；

图7中(a)各组SPECT显像；(b)各组SPECT显像肿瘤摄取值之间的差异对比；(c)各组SPECT显像肿瘤与肌肉比值之间的差异对比。

具体实施方式

实施例1

本实施例的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂(化合物6)的制备方法，包括如下步骤：

1)化合物2的合成：

首先将反应装置至于冰水浴中，然后将1.5g化合物1和1.7mL三乙胺分别溶解在10mL 二氯甲烷中，最后加入2.29g溶于20mL二氯甲烷的对甲基苯磺酰氯，先0℃反应1小时，再室温反应5小时。反应结束后，用水洗涤产物并用二氯甲烷萃取反应液三次，收集有机相并旋蒸除去溶剂。将粗产物过硅胶柱进行纯化，流动相比例为石油醚：乙酸乙酯＝2：1。得到化合物2为纯白色晶体。

2)化合物3的合成：

室温下，将0.65g叠氮化钠加入到10mLN,N-二甲基甲酰胺中，不断搅拌，使其充分溶解。再加入4.59g化合物2，室温搅拌5小时。反应完成后，用40mL去离子水洗涤，用50mL乙酸乙酯来萃取产物，收集有机相并旋蒸除去大部分乙酸乙酯。粗产物用硅胶柱纯化，流动相比例为石油醚：乙酸乙酯＝2：1。得到化合物3为浅黄色油状物。

3)化合物4的合成：

在室温下，将0.59g 17α-炔雌醇和0.26g N，N-二异丙基乙胺分别溶于5mL四氢呋喃中，然后将0.04g碘化亚铜加入反应瓶，搅拌过夜。反应完成后，除去溶剂，粗产物用硅胶柱纯化，流动相比例为石油醚：乙酸乙酯＝1：10，得到化合物4为黄色油状产物。

4)化合物5的合成：

化合物5的合成与化合物3类似。室温下，将0.13g叠氮化钠加入到2mL N,N-二甲基甲酰胺中，使其充分溶解。然后，加入0.63g化合物4，室温搅拌5小时。反应完成后，用乙酸乙酯萃取产物。收集有机相并旋转蒸发除去乙酸乙酯，粗产物用硅胶柱纯化，流动相比例为石油醚：乙酸乙酯＝1：2，得到化合物5为白色粉末。

5)化合物6的标记：

首先，在标记的前一天将134μg氯化铜和151μg无水三乙胺添加到40μL无水乙腈中，充分溶解得到红棕色混合溶液。标记时取40μL红棕色混合液于1.5mL离心管中，然后取40μL 17α-炔雌醇的乙腈溶液加到反应体系中。混合均匀后，加入6μL Na¹²⁵I或者Na¹³¹I的水溶液，再取20μL化合物5的无水乙腈溶液加入到反应管中，60℃敞口反应1.5小时。反应完成后，用高效液相色谱(HPLC)纯化。HPLC条件为：C18柱(250×4.6mm，5μm)，流动相A相为水，B相为乙腈：0至5分钟：35％B，5至10分钟：35％至60％B，10至30分钟：60％B；流速为1mL/min。纯化后的化合物6与其非放射性标准参照化合物的HPLC分析图如图1所示，二者出峰时间相近，证明了化合物6标记的正确性。

一、化合物6的代谢稳定性实验：

正常小鼠尾静脉注射3.7MBq化合物6后，分别于注射后10，20，30和60分钟断颈处死。收集小鼠的血液和尿液样本，并迅速将血液样品以10,000rpm的转速离心5分钟，每份尿液样品直接用1mLPBS(pH 7.4)稀释待用。取离心后的上层血清加入0.5mL乙腈，充分混合后再离心。取二次离心后的血液上清液以及稀释后的尿液样本，过C18小柱，再分别用水和乙腈洗涤该柱，将滤液过滤后进行HPLC分析。HPLC流动相比例与标记时的比例相同。

如图3所示，化合物6在进入血液和尿液中的前20分钟保持稳定，20-30分钟开始逐步代谢。相比于经典ER探针，化合物6在体内的代谢稳定性已经得到极大提升，血液中的保留时间也得到显著延长。

二、化合物6的细胞实验

A.MCF-7细胞的饱和结合实验

1)将形成单层贴壁细胞的24孔板中的培养基全部吸出，然后再向每孔加入0.5mL新鲜的培养基用来洗掉没有贴壁的细胞。

2)取HPLC纯化后的化合物6，用培养基稀释，得到1-100nM的不同浓度的化合物6，将不同浓度的化合物6加入到细胞中进行培养，37℃孵育1小时，每个浓度三个平行实验。

3)孵育完成后，吸出放射性培养基，并用1mL PBS(pH＝7.4)洗涤细胞三次。最后用1 mL氢氧化钠裂解细胞，使细胞完全脱壁，用移液枪将细胞裂解液吸出，用伽马计数器检测每孔的放射性计数。

如图4a所示，经过计算，得到化合物6的解离常数K_d为49.66±7.71nM，最大结合量Bmax 为1.27×10⁴/细胞；如图5a所示，得到化合物8的K_d为85.18±8.45nM，Bmax为9.60×10⁴。

B.细胞摄取及抑制随时间的变化

1)同上诉MCF-7细胞的饱和结合实验步骤1)

2)取HPLC纯化后的化合物6，用培养基稀释至放射性量为3μCi/mL。

3)抑制组：向孔板中加入10μL 1mg/mL的雌二醇溶液，然后向每孔加入100μL化合物 6，37℃孵育5-360min。

实验组：不加抑制剂，直接向每孔加入100μL化合物6，37℃孵育5-360min。

4)同上诉MCF-7细胞的饱和结合实验步骤3)。

如图4b-d所示，ER阳性的MCF-7对化合物6的摄取要远远高于ER阴性的MDA-MB-231细胞(^***P<0.0001)，并且MCF-7细胞的特异性摄取可以被雌二醇抑制剂抑制(^***P<0.0001)。说明化合物6在细胞受体层面对ER具有高特异性。

如图5b-d所示，ER阳性的MCF-7对化合物8的摄取也要远远高于ER阴性的MDA-MB-231 细胞(^*P＝0.012)，并且MCF-7细胞的特异性摄取可以被雌二醇抑制剂抑制(^**P＝0.0016)。同样说明化合物8在细胞受体层面对ER具有高特异性。

三、化合物6的生物分布实验

化合物6的生物分布实验选用3-4周龄的正常雌性Sprague Dawley大鼠。对这些大鼠分别尾静脉注射1.85MBq的化合物6，抑制组实验通过与1.85MBq的化合物6共注射60μg雌二醇实现，于注射后1小时或者2小时将这些大鼠进行麻醉并处死。这些大鼠各个器官对化合物 6的摄取情况如图6a所示，ER丰富的子宫和卵巢的摄取要明显高于其他组织和器官，并且可以被抑制(^*P＝0.0004)。说明化合物6在大鼠体内对ER具有很强的特异性。

四、化合物6的SPECT显像

分别将8周大的Balb/c雌性裸鼠的右肩皮下注射ER阳性的MCF-7细胞和ER阴性的MDA-MB-231细胞，不断检测成瘤状态。当皮下肿瘤长至直径为0.6-1cm时，进行SPECT显像。实验组每只MCF-7模型鼠的尾静脉注射碘-125标记的化合物6的剂量约18.5MBq，分别于显像前对小鼠进行麻醉，于注射后15分钟和1小时将小鼠俯卧固定，进行SPECT显像。ER 阴性的MDA-MB-231肿瘤对照组和MCF-7肿瘤抑制组与实验组注射的化合物6的剂量相同，抑制组MCF-7肿瘤模型鼠需在显像前48小时肿瘤周围皮下注射氟维司群，来抑制ER受体。

各组显像结果如图7所示，(实验组：化合物6在荷MCF-7瘤裸鼠体内15分钟以及1小时时的SPECT显像；抑制组：化合物6在被ER抑制剂氟维司群处理后的MCF-7瘤裸鼠体内 1小时时的SPECT显像；对照组：化合物6在荷MDA-MB-231瘤裸鼠体内1小时时的SPECT 显像；)实验组ER阳性的乳腺癌肿瘤对化合物6具有很高的摄取，并且在化合物6注射到体内 1小时时达到了摄取高峰，肌肉等非特异性组织的摄取不高，具有很高的靶与非靶比，说明化合物6对ER阳性的肿瘤在体内具有靶向性。对照组ER阴性的MDA-MB-231肿瘤对化合物6 的摄取与肌肉等组织相近，明显低于实验组的摄取(^**P＝0.0014)，说明化合物6在体内可以作为ER的特异性配体。氟维司群抑制组的化合物6摄取也与非靶组织相近，肿瘤未见明显摄取，明显低于实验组摄取(^**P＝0.0065)，这也证明了化合物6对ER具有很高的特异性。SPECT 显像1小时时，实验组的瘤肉比为2.30±0.61，对照组的瘤肉比为0.61±0.09(^*P＝0.013)，抑制组的瘤肉比为0.73±0.25(^*P＝0.021)，实验组与对照组、抑制组存在明显的统计学差异。

实施例2

本实施例的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂(化合物8)的制备方法，包括如下步骤：

将1mg化合物7加入到5mL的微波反应管中，再加入0.1mL乙腈作为溶剂，最后加入0.1mL氟-18水溶液，180℃微波反应10分钟。反应完成后，进行HPLC纯化。HPLC条件为：流动相A相为水，B相为乙腈：0至10分钟：35％B，10至20分钟：60％B，20至30分钟： 35％B；流速为1mL/min。纯化后的化合物8与其非放射性标准参照化合物的HPLC分析图如图2所示，二者出峰时间相近，证明了化合物8标记的正确性。

本实施例的化合物8是用化合物6的标准参照化合物为前体进行标记的，标记方法简单易行。化合物8从标记开始算起直至HPLC纯化完毕，总耗时为40-50分钟，得到产物的放射化学产率为34.79±5.28％，放射化学纯度大于99％。根据紫外吸收标准曲线算出化合物8的摩尔活性为3±0.17MBq/μmol。

化合物8是对化合物6应用范围的拓展，使其既可以适用于SPECT显像，又可以适用于 PET显像。另外，放射性碘同位素的化学性质相似，采用化合物6制备方法同样可以获得其它用途的放射性碘标记化合物，比如用于人体SPECT显像的碘-123标记化合物、用于人体PET 显像的碘-124标记化合物以及用于治疗目的的碘-131标记化合物6，为实现雌激素受体靶向的乳腺癌诊疗一体化提供可能。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims

1.一种雌激素受体靶向放射性示踪剂，其特征在于：其分子中包括两个相同的雌激素受体靶向基团、聚乙二醇链和放射性信号基团；所述雌激素受体靶向基团为17α-炔雌醇基，所述聚乙二醇链的聚合度n＝1～5；

所述示踪剂的结构式如下：

其中，R为放射性信号基团。

2.根据权利要求1所述的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂，其特征在于：所述放射性信号基团为放射性碘同位素¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I或者¹⁸F。

3.一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的制备方法，其特征在于：其反应路线如下：

4.根据权利要求3所述的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的制备方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

2)将化合物2与叠氮化钠以摩尔比1～5∶5～1的比例混合，得到化合物3；

3)将化合物3与17α-炔雌醇发生“点击”反应，得到化合物4；

4)将化合物4与叠氮化钠以摩尔比1～5∶5～1的比例混合，得到化合物5；

5.根据权利要求4所述的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，将化合物5标记放射性碘同位素¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I，得到化合物7，所述化合物7的结构式为

6.根据权利要求5所述的一种雌激素受体靶向放射性示踪剂的制备方法，其特征在于：还包括如下步骤：

6)将化合物7通过卤素交换的方法标记¹⁸F，得到目标标记产物化合物8，其反应路线如下：