CN111321126A - 一种生物酶制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物酶制作方法，具体包括以下步骤：S1、原料培养：取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，本发明涉及生物酶技术领域。该生物酶制作方法，通过取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，利用该方法进行生物酶的制作，可以有效地提高生物酶的获取，另外通过在气流烘干前先进行烘干箱可以较大程度提高生物酶的活性，减少生物酶制作原料的浪费，采用液体发酵法有效地提高生物酶产品外观质量，采用离子交换层析与凝胶过滤层析大大的降低制作出来的生物酶杂质含量。
Description
技术领域
本发明涉及生物酶技术领域，具体为一种生物酶制作方法。
背景技术
生物酶是由活细胞产生的具有催化作用的有机物，大部分为蛋白质，也有极少部分为RNA，生物酶是一种无毒、对环境友好的生物催化剂，其化学本质为蛋白质，酶的生产和应用，在国内外已具有80多年历史，进入20世纪80年代，生物工程作为一门新兴高新术在我国得到了迅速发展，酶的制造和应用领域逐渐扩大，酶在纺织工业中的应用也日臻成熟，由过去主要用于棉织物的退浆和蚕丝的脱胶，至现在纺织染整的各领域的广泛应用，体现了生物酶在染整工业中的优越性，现在酶处理工艺已被公认为是一种符合环保要求的绿色生产工艺，它不仅使纺织品的服用性能得到改善和提高，又因无毒无害，用量少，可生物降解废水，无污染而有利于生态环保的保护。
现有技术中对于生物酶的制作方法，存在一定的缺陷，现有方法制作出来的生物酶获取率较低，并且生物酶的活性较差，造成大量的原料浪费，另外，目前生产厂家只能采用直接干燥粉碎得到固体酶制剂或用水浸泡后压滤得到液体酶制剂，产品外观粗糙，成品质量不稳定，杂质含量高。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种生物酶制作方法，解决了现有方法制作出来的生物酶获取率较低，并且生物酶的活性较差，造成大量的原料浪费，另外，目前生产厂家只能采用直接干燥粉碎得到固体酶制剂或用水浸泡后压滤得到液体酶制剂，产品外观粗糙，成品质量不稳定，杂质含量高的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种生物酶制作方法，具体包括以下步骤：
S1、原料培养：取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，接着使用pH为5.0的标准缓冲液对混合溶液的pH值进行校准，在完成混合溶液pH值校准后将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，从pH计的刻度读出培养基的pH值，将复合电极和电阻温度计置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，使培养基达到并保持pH值为5.5；
S2、原料发酵：将步骤S1中烧杯内部的培养基置于容量250mL的三角瓶中，对三角瓶采用变温培养，完成原料的发酵；
S3、生物酶提取：取用步骤S2中的发酵液100mL置于烧杯中，向100mL发酵液中加入絮凝剂，在室温下利用搅拌器对发酵液进行搅拌，搅拌速率为2500转/分钟，搅拌时间为10分钟，接着将混合液装入离心管中，将离心管放入离心机中，利用离心机对离心管内部的混合溶液进行离心处理，对完成离心处理后的混合溶液进行脱色处理，使用过滤纸板对发酵液进行一级过滤，接着对发酵液采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行二级过滤处理，在完成发酵液的过滤处理后，选用聚丙烯膜对发酵液进行浓缩处理，对经过浓缩处理后的发酵液先通过在烘干箱中进行烘干，最后利用热气流对发酵液进行完全干燥，获得含有生物酶的冻干品。
优选的，所述步骤S1中，在进行混合溶液的pH值调整时，混合溶液置于25摄氏度的环境中。
优选的，所述步骤S2中，三角瓶采用的变温培养过程为：30摄氏度堆积培养48小时,接着对三角瓶中的培养基进行翻料，最后将温度调至27摄氏度继续培养至120小时。
优选的，所述步骤S3中，离心机对混合溶液离心处理的离心条件为：离心温度5摄氏度，离心速率为8500转/分钟，离心时间为5分钟。
优选的，所述步骤S3中，脱色处理使用质量分数为1％的中颗粒活性炭。
优选的，所述步骤S3中，过滤纸板由孔径45Hm棉花纤维、石棉和硅藻土组成，纸板过撞机的压力为0.3MPa。
优选的，所述步骤S3中，离子交换层析使用φ216cmX30cmDEAESepharoseCL6B层析柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HC1缓冲液，洗脱液为含NaC1、pH8.0的TrisHC1缓冲液。
优选的，所述步骤S3中，凝胶过滤层析使用的介质为Hiload16/60Superdex200pg预装柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HCl缓冲液。
(三)有益效果
本发明提供了一种生物酶制作方法。与现有技术相比具备以下有益效果：
该生物酶制作方法，通过取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，接着使用pH为5.0的标准缓冲液对混合溶液的pH值进行校准，在完成混合溶液pH值校准后将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，从pH计的刻度读出培养基的pH值，将复合电极和电阻温度计置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，使培养基达到并保持pH值为5.5，将步骤S1中烧杯内部的培养基置于容量250mL的三角瓶中，对三角瓶采用变温培养，完成原料的发酵，取用步骤S2中的发酵液100mL置于烧杯中，向100mL发酵液中加入絮凝剂，在室温下利用搅拌器对发酵液进行搅拌，搅拌速率为2500转/分钟，搅拌时间为10分钟，接着将混合液装入离心管中，将离心管放入离心机中，利用离心机对离心管内部的混合溶液进行离心处理，对完成离心处理后的混合溶液进行脱色处理，使用过滤纸板对发酵液进行一级过滤，接着对发酵液采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行二级过滤处理，在完成发酵液的过滤处理后，选用聚丙烯膜对发酵液进行浓缩处理，对经过浓缩处理后的发酵液先通过在烘干箱中进行烘干，最后利用热气流对发酵液进行完全干燥，获得含有生物酶的冻干品，利用该方法进行生物酶的制作，可以有效地提高生物酶的获取，另外通过在气流烘干前先进行烘干箱可以较大程度提高生物酶的活性，减少生物酶制作原料的浪费，采用液体发酵法有效地提高生物酶产品外观质量，采用离子交换层析与凝胶过滤层析大大的降低制作出来的生物酶杂质含量。
附图说明
图1为本发明生物酶制作的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明实施例提供一种技术方案：一种生物酶制作方法，具体包括以下步骤：
S1、原料培养：取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，接着使用pH为5.0的标准缓冲液对混合溶液的pH值进行校准，在完成混合溶液pH值校准后将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，从pH计的刻度读出培养基的pH值，将复合电极和电阻温度计置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，使培养基达到并保持pH值为5.5；
S2、原料发酵：将步骤S1中烧杯内部的培养基置于容量250mL的三角瓶中，对三角瓶采用变温培养，完成原料的发酵；
S3、生物酶提取：取用步骤S2中的发酵液100mL置于烧杯中，向100mL发酵液中加入絮凝剂，在室温下利用搅拌器对发酵液进行搅拌，搅拌速率为2500转/分钟，搅拌时间为10分钟，接着将混合液装入离心管中，将离心管放入离心机中，利用离心机对离心管内部的混合溶液进行离心处理，对完成离心处理后的混合溶液进行脱色处理，使用过滤纸板对发酵液进行一级过滤，接着对发酵液采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行二级过滤处理，在完成发酵液的过滤处理后，选用聚丙烯膜对发酵液进行浓缩处理，对经过浓缩处理后的发酵液先通过在烘干箱中进行烘干，最后利用热气流对发酵液进行完全干燥，获得含有生物酶的冻干品。
本发明中，步骤S1中，在进行混合溶液的pH值调整时，混合溶液置于25摄氏度的环境中。
本发明中，步骤S2中，三角瓶采用的变温培养过程为：30摄氏度堆积培养48小时,接着对三角瓶中的培养基进行翻料，最后将温度调至27摄氏度继续培养至120小时。
本发明中，步骤S3中，离心机对混合溶液离心处理的离心条件为：离心温度5摄氏度，离心速率为8500转/分钟，离心时间为5分钟。
本发明中，步骤S3中，脱色处理使用质量分数为1％的中颗粒活性炭。
本发明中，步骤S3中，过滤纸板由孔径45Hm棉花纤维、石棉和硅藻土组成，纸板过撞机的压力为0.3MPa。
本发明中，步骤S3中，离子交换层析使用φ
216cmX30cmDEAESepharoseCL6B层析柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HC1缓冲液，洗脱液为含NaC1、pH8.0的TrisHC1缓冲液。
本发明中，步骤S3中，凝胶过滤层析使用的介质为Hiload16/60Superdex200pg预装柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HCl缓冲液。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种生物酶制作方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、原料培养：取用新鲜麸皮8.5g，米糠3.5g、豆饼粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的烧杯中进行混合，利用磁力搅拌器对烧杯中的混合溶剂进行混合搅拌，接着使用pH为5.0的标准缓冲液对混合溶液的pH值进行校准，在完成混合溶液pH值校准后将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，从pH计的刻度读出培养基的pH值，将复合电极和电阻温度计置于培养基中，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，使培养基达到并保持pH值为5.5；
S2、原料发酵：将步骤S1中烧杯内部的培养基置于容量250mL的三角瓶中，对三角瓶采用变温培养，完成原料的发酵；
S3、生物酶提取：取用步骤S2中的发酵液100mL置于烧杯中，向100mL发酵液中加入絮凝剂，在室温下利用搅拌器对发酵液进行搅拌，搅拌速率为2500转/分钟，搅拌时间为10分钟，接着将混合液装入离心管中，将离心管放入离心机中，利用离心机对离心管内部的混合溶液进行离心处理，对完成离心处理后的混合溶液进行脱色处理，使用过滤纸板对发酵液进行一级过滤，接着对发酵液采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行二级过滤处理，在完成发酵液的过滤处理后，选用聚丙烯膜对发酵液进行浓缩处理，对经过浓缩处理后的发酵液先通过在烘干箱中进行烘干，最后利用热气流对发酵液进行完全干燥，获得含有生物酶的冻干品。
2.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S1中，在进行混合溶液的pH值调整时，混合溶液置于25摄氏度的环境中。
3.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S2中，三角瓶采用的变温培养过程为：30摄氏度堆积培养48小时,接着对三角瓶中的培养基进行翻料，最后将温度调至27摄氏度继续培养至120小时。
4.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，离心机对混合溶液离心处理的离心条件为：离心温度5摄氏度，离心速率为8500转/分钟，离心时间为5分钟。
5.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，脱色处理使用质量分数为1％的中颗粒活性炭。
6.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，过滤纸板由孔径45Hm棉花纤维、石棉和硅藻土组成，纸板过撞机的压力为0.3MPa。
7.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，离子交换层析使用φ216cmX30cmDEAESepharoseCL6B层析柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HC1缓冲液，洗脱液为含NaC1、pH8.0的TrisHC1缓冲液。
8.根据权利要求1所述的一种生物酶制作方法，其特征在于：所述步骤S3中，凝胶过滤层析使用的介质为Hiload16/60Superdex200pg预装柱，缓冲液体系采用pH8.0的Tris-HCl缓冲液。
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