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CN111315403A - 用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的方法和系统 - Google Patents

用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的方法和系统 Download PDF

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CN111315403A
CN111315403A CN201880060078.9A CN201880060078A CN111315403A CN 111315403 A CN111315403 A CN 111315403A CN 201880060078 A CN201880060078 A CN 201880060078A CN 111315403 A CN111315403 A CN 111315403A
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seq
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CN201880060078.9A
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D.苏萨奇克
J.乌林
M.科芬
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Kite Pharma Inc
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Abstract

描述了用于进行患者特异性免疫疗法规程的方法和装置。计算装置接收为患者创建经转染的T细胞的请求。计算装置生成与细胞订购请求相关联的患者特异性标识符。计算装置启动创建用于输注到患者的血流中的经转染的T细胞的过程，包括：对患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从样品中收集T细胞，将收集的T细胞转移到容器，用患者特异性标识符标记容器，将收集的T细胞传输到制造设施，使用细胞修饰技术从收集的T细胞创建经转染的T细胞，从制造设施接收经转染的T细胞，并且将经转染的T细胞输注到患者的血流中。计算装置记录每个步骤的跟踪事件，包括患者特异性标识符，以生成患者T细胞的监管链。

Description

用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免 疫疗法规程的方法和系统
相关申请
本申请要求2017年9月15日提交的美国临时专利申请No.62/559,330和2017年10月2日提交的美国临时专利申请No.62/566,912的优先权，每篇通过引用完整并入本文。
技术领域
一般地，本申请涉及用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的方法和装置，包括计算机程序产品
背景技术
近年来，医疗技术的进步导致了免疫疗法治疗不同类型的病和疾病，包括各种形式的癌症的新兴使用。通常，免疫疗法是通过刺激或抑制免疫应答来治疗疾病。通常，将患者自身生物材料(例如免疫细胞)的修饰形式重新引入患者中，以启动和/或补充免疫应答。
例如，已显示了工程化的免疫细胞在治疗性处理中，特别是在肿瘤学中拥有期望的质量。工程化免疫细胞的两种主要类型是含嵌合抗原受体(称为“CAR”或“CAR-T”)和T细胞受体(“TCR”)的细胞。这些工程化的细胞经过工程化改造，使其具有抗原特异性，同时保留或增强它们识别和杀死靶细胞的能力。嵌合抗原受体可包含例如(i)抗原特异性成分(“抗原结合分子”)，(ii)胞外域，(iii)一个或多个共刺激域，和(iv)一个或多个活化域。每个域可以是异质的，即由源自(或对应于)不同蛋白质链的序列构成。
由于许多经历免疫疗法的患者是重病的，此类免疫疗法规程的功效中的关键因素是尽快向患者提供经修饰的生物材料的能力，从而可以使治疗益处最大化。另外，由于针对特定患者定制多种类型的免疫疗法(即使用患者自身的细胞)，重要的是确保在整个免疫疗法过程中准确跟踪患者的生物材料——从提取到修饰，再到输注回患者中——以避免制造中的延迟、材料的错误标记和患者的错误鉴定。但是，现有的免疫疗法规程通常缺乏自动跟踪患者生物材料并确保在整个制造过程中将生物材料与特定患者身份联系在一起的技术机制。
发明内容
因此，需要用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的方法和系统。与现有系统相比，本文所述的技术提供特定的技术优势，即为免疫疗法规程中的患者特异性生物样品提供连续且自动的监管链和身份链，以创建计算机化的信息门户，使感兴趣的各方——例如患者、内科医生、制造商和其他医务人员——可以用来快速了解和跟踪免疫疗法规程的当前阶段以及该规程过程中患者生物样品的状态。此种先进的跟踪是对现有系统的改进，所述现有系统没有用于维持监管链和身份链的技术解决方案——导致制造过程中的延误，对于处理危及生命的疾病的患者而言，这可能是极其严重的。
在一方面，本发明的特征在于一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法。计算装置接收细胞创建用于患者的经转染的T细胞的订购请求。计算装置生成与细胞订购请求相关的患者特异性标识符，所述患者特异性标识符包括患者身份要素、销售订购标识符和细胞订购批号。计算装置启动创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品中收集T细胞，将收集的T细胞转移到容器，用所述患者特异性标识符标记所述容器，将收集的T细胞传输到制造设施，使用细胞修饰技术从收集的T细胞创建经转染的T细胞，从所述制造设施接收所述经转染的T细胞，以及将所述经转染的T细胞输注到所述患者的血流中。计算装置为所述过程中的每个步骤记录跟踪事件，每个跟踪事件包括所述患者特异性标识符。跟踪事件包括在所述过程期间所述患者的T细胞的监管链。
在另一方面，本发明的特征在于一种在免疫疗法规程期间跟踪细胞订购的方法。计算装置接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求。计算装置生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符，所述患者特异性标识符包括患者身份要素、销售订购标识符和细胞订购批号。计算装置监视创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：接收已经对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品收集T细胞的记号(indicia)，接收已经将收集的T细胞转移到容器的记号，接收所述容器已经用所述患者特异性标识符标记的记号，接收已经将收集的T细胞传输到制造设施的记号，接收已经使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞的记号，接收已经从所述制造设施接收所述经转染的T细胞的记号，以及接收已经将所述转染的T细胞输注到所述患者的血流中的记号。当接收记号时通过所述计算装置记录跟踪事件，每个跟踪事件包括所述患者特异性标识符。通过存储所述过程期间的所述跟踪事件，计算装置维护所述患者的T细胞的监管链。
在另一方面，本发明的特征在于一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法。接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求。在处理器上执行的事件跟踪模块生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符。启动创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品中收集T细胞，将收集的T细胞转移到容器，用所述患者特异性标识符标记所述容器，将收集的T细胞传输到制造设施，使用细胞修饰技术从收集的T细胞创建经转染的T细胞，从所述制造设施接收所述经转染的T细胞，以及将所述经转染的T细胞输注到所述患者的血流中。事件跟踪模块从位于所述白细胞单采术规程点处的第一客户端装置接收第一跟踪事件，其确认所述白细胞单采术规程并含有所述患者特异性标识符。事件跟踪模块将所述第一跟踪事件集成在与所述患者特异性标识符有关的数据结构中，其中在数据库中存储所述数据结构，并且集成步骤记录具有所述第一跟踪事件的第一时间戳。事件跟踪模块从位于所述制造设施处的第二客户端装置接收第二跟踪事件，其确认在所述制造设施处收到收集的T细胞并含有所述患者特异性标识符。事件跟踪模块将所述第二跟踪事件集成在所述与所述患者特异性标识符有关的数据结构中，其中集成步骤记录具有所述第二跟踪事件的第二时间戳。
在另一方面，本发明的特征在于一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法，处理器上执行的跟踪模块接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求。跟踪模块生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符和细胞订购批次，所述患者特异性标识符识别患者。数据库生成用于跟踪所述细胞订购的数据记录，所述数据记录根据所述患者特异性标识符在所述数据库中识别。跟踪模块接收第一跟踪事件，所述第一跟踪事件指示收集的T细胞已准备好运输到制造设施。根据所述第一跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录。基于容器已经由所述制造设施接收，跟踪模块接收第二跟踪事件，所述第二跟踪事件指示所述收集的T细胞已经由制造设施接收。根据所述第二跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录。基于所述制造设施已经使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞，跟踪模块接收第三跟踪事件，所述第三跟踪事件指示已经创建所述经转染的T细胞。根据所述第三跟踪事件更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录。基于所述经转染的T细胞已经从所述制造设施接收，跟踪模块接收第四跟踪事件，所述第四跟踪事件指示已经接收所述经转染的T细胞。根据所述第四跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录。基于所述经转染的T细胞已经输注到所述患者的血流中，跟踪模块接收第五跟踪事件，所述第五跟踪事件指示已经将经转染的T细胞输注到所述患者的血流中。根据所述第五跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录，其中，所述第一、第二、第三、第四和第五跟踪事件中的每个含有所述患者特异性标识符、时间戳和事件标识符，以及其中当根据相应事件更新所述数据记录时，与所述患者特异性标识符对应的数据记录以有序顺序存储所述第一、第二、第三、第四和第五跟踪事件。
上述任何方面可以包括以下一个或多个特征：
在一些实施方案中，通过用编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸转染收集的T细胞来创建经转染的T细胞，所述CAR包含特异性结合靶分子的抗原结合分子。优选地，抗原结合分子是单链可变片段(scFv)。
设想在一些实施方案中，靶分子是血源性癌症相关抗原。本发明的血源性癌症相关抗原与一种或多种选自下组的癌症相关：急性髓样白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、青少年骨髓单核细胞性白血病、非典型慢性髓样白血病、急性早幼粒细胞性白血病(APL)、急性单核母细胞性白血病、急性红系白血病、急性巨核细胞性白血病、淋巴母细胞性白血病、B谱系急性淋巴母细胞性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、B细胞非何杰金氏淋巴瘤、脊髓发育不良综合征(MDS)、骨髓增生病症、髓样新生物、髓样肉瘤)和母细胞性浆细胞样树突细胞新生物(BPDCN)。
在一些实施方案中，靶分子是病毒感染相关抗原。本发明的病毒感染可以由任何病毒，包括例如HIV引起。
本发明的嵌合抗原受体(CAR)可以进一步包含至少一个共刺激域。本发明的共刺激域包括但不限于以下各项的信号传导区或其它合适的部分：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、诱导性T细胞共刺激物(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDl la/CD18)、CD3 gamma、CD3 delta、CD3 epsilon、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Ig alpha(CD79a)、DAP-10、Fc gamma受体、MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8alpha、CD8beta、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7R alpha、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl la、LFA-1、ITGAM、CDl lb、ITGAX、CDl lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。
优选地，共刺激域包含CD28。本发明的CD28共刺激域包括例如选自下组的序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.8。
在其他实施方案中，共刺激域包括CD8。本发明的CD8共刺激域包括例如SEQ IDNO.14。
本发明的嵌合抗原受体(CARs)可以进一步包含至少一个活化域。本发明的活化域包括例如CD3。优选地，CD3活化域包含CD3 zeta。本发明的CD3 zeta活化域包括例如SEQ IDNO.10。
在一个优选的实施方案中，嵌合抗原受体(CAR)包含抗CD19 scFv，CD28和CD3zeta的全部或部分。
在另外的优选实施方式中，嵌合抗原受体(CAR)包括：
-以下全部或部分：抗CD19 scFv、CD8和4-1BB；
-以下全部或部分：抗BCMA scFv和CD8；
-以下全部或部分：抗CD19 scFv、CD28和4-1BB；
-以下全部或部分：抗CD22 scFv和CD8；
-以下全部或部分：抗CD19 scFv、CD28和EGFRt/19-28z/4-1BBL；
-以下全部或部分：抗MUC16 scFv和CD28；
-以下全部或部分内容：抗CD171；
-以下全部或部分：抗CD123和CD28；
-以下全部或部分：抗BCMA、CD8和4-1BB；
-以下全部或部分：抗CD19和CD28；
-以下全部或部分：抗CD19和CD8；或者
-以下全部或部分内容：CD28。
在另一个优选的实施方案中，CAR包含前导序列(CSF2RA)、抗CD19 scFv、Whitlow接头、CD28间隔物、CD28共刺激域和CD3 zeta。此类CAR的一个实例是由SEQ ID NO.146的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.147的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，CAR包含前导序列(CD8)、抗CD19 scFv、Whitlow接头、CD28T间隔物、CD28共刺激域和CD3 zeta。此类CAR的一个实例是由SEQ ID NO.148的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.149的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，CAR包含前导序列(CD8a)、CD19 scFv、Whitlow接头，CD8a间隔区和跨膜域、CD28共刺激域和CD3 zeta。此类CAR的一个实例是由SEQ ID NO.150的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.151的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，CAR包含前导序列(CD8)、抗CLL-1 scFv、G4S接头、微型间隔物(Minispacer)、CD28T(CD28的细胞外/跨膜区)、CD28(CD28的细胞内共刺激)和CD3zeta。此类CAR的一个实例是由SEQ ID NO.154的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.155的氨基酸序列。
在另一个优选的实施方案中，CAR包含前导序列(CD8a)、抗BCMA scFv、Whitlow接头、CD28T间隔物、CD28共刺激域和CD3 zeta。此类CAR的一个实例是由SEQ ID NO.156的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.157的氨基酸序列。
在一些实施方案中，通过用编码T细胞受体(TCR)的多核苷酸转染收集的T细胞来创建经转染的T细胞。本发明的TCR可以结合肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原与一种或多种选自下组的癌症相关：肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、类癌癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、颅外生殖细胞癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、生殖细胞瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、头颈癌、下咽癌、胰岛细胞癌、肾癌、大肠癌、喉癌、白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、恶性间皮瘤、默克尔细胞癌、蕈样肉芽肿病、脊髓发育不良综合征、骨髓增生病症、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞癌、胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、垂体癌、浆细胞瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、唾液腺癌、Sezary综合征、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌和Wilms肿瘤。
在某些方面，本申请可以适用于血液学癌症的靶分子。在一些实施方案中，癌症是白细胞的癌症。在其他实施方案中，癌症是浆细胞的癌症。在一些实施方案中，癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在某些实施方案中，癌症是急性淋巴母细胞性白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性淋巴样白血病(ALL)和嗜血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH))、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞样白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突细胞新生物、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性髓样白血病(CML)、慢性或急性肉芽肿性疾病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、噬血细胞性综合征(巨噬细胞活化综合征(MAS)、何杰金氏病、大细胞肉芽肿、白细胞粘附缺乏、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆gamma病变(gammapathy)(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合症(MDS)、髓样疾病，包括但不限于急性髓样白血病(AML)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性疾病(例如无症状骨髓瘤(隐袭性多发性骨髓瘤或无痛性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突细胞新生物、浆细胞瘤(例如浆细胞体液不调；孤立性骨髓瘤；孤立性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤和多发性浆细胞瘤)，POEMS综合征(Crow-Fukase综合征；Takatsuki病；PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变性、T细胞急性淋巴样白血病(TALL)、T细胞淋巴瘤、转化的滤泡性淋巴瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症或其组合。
在另外的优选实施方案中，TCR包含AV38-2可变alpha链、BV7-2可变beta链、鼠恒定alpha域、鼠恒定beta域、TRAJ40、弗林蛋白酶-SG SG-P2A和TRBJ1-3。此类TCR的一个实例是由SEQ ID NO.152的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.153的氨基酸序列。
在进一步的优选实施方案中，TCR包含TCR beta链可变区、TCR beta链恒定区、P2A肽(具有弗林蛋白酶切割位点和接头)、TCR alpha链可变区和TCR alpha链恒定区。此类TCR的一个实例是由SEQ ID NO.158的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.159的氨基酸序列。此类TCR的另一个实例由SEQ ID NO.160的核苷酸序列编码和SEQ ID NO.161的氨基酸序列。
在其他实施方案中，本发明的TCR结合病毒感染相关抗原。本发明的病毒感染可以由任何病毒，包括例如HIV引起。
本发明的多核苷酸可以是载体的组分。合适的载体包括但不限于逆转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。优选地，载体是慢病毒载体。本发明的慢病毒载体包括但不限于pGAR及其衍生物。
在一些实施方案中，启动用于创建经转染的T细胞的过程进一步包括从远程计算装置请求用于进行白细胞单采术规程的时隙，响应于时隙的请求接受时隙可用于进行白细胞单采术规程的记号，并用远程计算装置确认可用时隙的接受。
在一些实施方案中，启动创建经转染的T细胞的过程进一步包括接收创建后已经从第一位点运输经转染的T细胞的记号，以及接收输注前已经在第二地点处接收经转染的T细胞的记号，其中计算装置在接收已经运输经转染的T细胞的记号时记录跟踪事件，并且计算装置在接收已经在第二地点处接收经转染的T细胞时记录跟踪事件。
在一些实施方案中，患者身份要素包括与免疫疗法规程相关的第一患者ID和与实施以下一种或多种方法的设施相关的第二患者ID：白细胞单采术规程或经转染的T细胞的输注。在一些实施方案中，计算装置以有序顺序存储跟踪事件。在一些实施方案中，该有序顺序按时间顺序排列。
通过以下结合附图的详细描述，本发明的其他方面和优点将变得明显，所述附图仅通过示例的方式示出了本发明的原理。
附图简述
通过参考以下结合附图的描述，可以更好地理解上述本发明的优点以及其他优点。附图不一定按比例绘制，而是通常将重点放在说明本发明的原理上。
图1A是用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的系统的框图。
图1B是用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的系统的详细框图。
图2是进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的计算机化方法的流程图。
图3A和3B是由用户界面模块生成的示例性屏幕截图，以在患者特异性的免疫疗法规程期间接收患者特异性的信息。
图4A至图4D是由用户界面模块生成的示例性屏幕截图，以在患者特异性免疫疗法规程期间接收提取和输注部位的确认并安排预约。
图5A和图5B是由用户界面模块生成的示例性屏幕截图，以显示患者特异性免疫疗法规程期间生物材料的监管链。
发明详细
图1A是用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的系统100的框图。图1A的系统包括多个客户端计算装置102a-102d、通信网络104、具有用户接口模块108a、事件跟踪模块108b和监管链模块108c的服务器计算装置106以及数据库110。
客户端计算装置102a-102d连接到通信网络104，以便与服务器计算装置106进行通信，以提供输入和接收与具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的过程有关的输出，如本文所述。在一些实施方案中，每个客户端计算装置102a-102d可以偶联到相应的显示装置，以例如提供详细的图形用户界面(GUI)，该图形用户界面接收本文描述的方法和系统的输入并呈现源自本文描述的方法和系统的输出。例如，客户端计算装置102a-102d可以连接到服务器计算装置106的用户界面模块108a，例如，其向客户端计算装置102a-102c的用户提供基于网络的门户，以访问与本文描述的方法相关的功能性。
示例性客户端装置102a-102d包括但不限于台式计算机、膝上型计算机、平板电脑、移动装置、智能电话和互联网装置。应当理解，在不脱离本发明范围的情况下。也可以使用能够连接到图1A的系统的组件的其他类型的计算装置。还应当理解，客户端计算装置102a-102d中的每个可以与不同的用户类型相关联——例如，客户端计算装置102a可以与访问图1A的系统的患者相关联，以生成用户简档并接收有关患者特异性免疫疗法规程的更新；客户端计算装置102b可以与正在治疗患者并且访问图1A的系统的内科内科医生联系，以为患者启动免疫疗法规程；客户端计算装置102c可以与正在对患者施用免疫疗法规程的医院或其他设施联系；并且客户端计算装置102d可以与制造设施联系，该制造设施正在创建患者特异性免疫疗法产品(如会在本文中进行描述)以用于免疫疗法规程。
通信网络104使系统100的其他组件能够相互通信，以进行实施具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的过程，如本文所述。网络104可以是诸如LAN的局域网，或者诸如因特网和/或蜂窝网络的广域网。在一些实施方案中，网络104由使得图1A的系统的组件能够彼此通信的几个离散网络和/或子网络(例如，蜂窝到因特网)构成。
服务器计算装置106是硬件和软件模块的组合，该组合包括专化硬件和/或软件模块，它们在处理器上执行并且与服务器计算装置106的存储模块进行交互以进行用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的功能，如本文描述。服务器计算装置106包括在服务器计算装置106的处理器上进行和/或与之交互的用户界面模块108a、事件跟踪模块108b和监管链模块108c(如上文提及)。
在一些实施方案中，用户界面模块108a、事件跟踪模块108b和监管链模块108c是被编程到服务器计算装置106中的一个或多个专用处理器上的计算机软件指令的专化集合，并且可以包括专门指定的存储器位置和/或寄存器，用于执行专化计算机软件指令。尽管在图1A中显示了模块108a-108c，如在同一服务器计算装置106内执行，在一些实施方案中，模块108a-108c的功能性可以分布在多个服务器计算装置之间。如图1A所示，服务器计算装置106使模块108a-108c能够彼此通信，以便交换数据以进行所描述的功能。应当理解，可以在不脱离本发明的范围的情况下使用以多种架构、资源和配置(例如，集群计算、虚拟计算、云计算)布置的任何数量的计算装置。下面详细描述了模块108a-108c的示例性功能性。
数据库110是偶联到服务器计算装置106的计算装置(或者在一些实施方案中，一组计算装置)，并且配置为接收、生成和存储与进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的过程有关的数据的特定段，如本文描述。在一些实施方案中，数据库110的全部或部分可以与服务器计算装置106集成或位于分开的一个或多个计算装置上。数据库110可以包括一个或多个数据库，其配置为存储由图1A的系统的其他组件使用的数据的部分，如将在下面更详细地描述。在一些实施方案中，数据库110包括企业业务套件，例如Oracle E-Business Suite(EBS)，该企业业务套件包括使一批功能性能够支持本文描述的方法和系统的各种模块，包括后勤、供应链、运输、CRM和其他类型的模块。
图1B是用于进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的图1A的系统的详细框图。在图1B中所示，服务器计算装置106是总体硬件架构中的中心组件，其与客户端计算装置102a-102e和数据库110接口，并且还与调度模块114和内科医生主数据馈送116接口。在一些实施方案中，服务器计算装置106和相应的模块108a-108c利用可从加利福尼亚州旧金山的Salesforce.com,Inc.获得的Salesforce平台来集成本文描述的某些功能。客户端计算装置102a-102e与服务器计算装置106通信，以进行免疫疗法规程中的患者登记并监视监管链和身份链跟踪(例如，经由基于浏览器的用户界面)，如本文中描述。
例如，客户端计算装置102a可以与正在进行免疫疗法规程的患者联系，并且可以包括浏览器软件和电子邮件软件，以使患者既能够监视跟踪又能够对参与免疫疗法规程所需要的文件进行电子签名(例如，经由DocuSign或其他类似技术)。类似地，客户端计算装置102b-102d可以位于不同的医院，在那里内科医生可以在免疫疗法规程中登记患者，向系统下达细胞订购，并使用浏览器软件监视监管链和身份链跟踪。客户端计算装置102b-102d还包括单点登录(SSO)模块，该模块使装置能够向服务器计算装置106认证(例如，使用支持SAML 2.0的SSO或服务器的特定用户名/密码)。客户端计算装置102e可以位于管理或制造地点，以使服务器计算装置106的管理员能够与服务器进行通信，从系统中的其他参与者接收诸如电子邮件的通信并使用浏览器软件监视监管链和身份链跟踪。
如上所述，数据库110可以包括企业商务套件，该企业商务套件管理用于服务器计算装置106的数据，并且包括模块以实现生物样品的监管链和身份链的跟踪以及后勤。例如，数据库110可以在请求时将批准的客户地点发送到服务器106，从服务器106接收单元订购条目数据，并且向服务器106提供细胞订购预订和单采血液成分术批次更新信息。
调度模块114可以集成到服务器计算装置106中或驻留在分开的计算装置上。调度模块114可以向服务器计算装置106认证并与服务器计算装置106通信，以接收关于细胞订购和免疫疗法规程的某些信息(例如，患者ID、单采血液成分术地点、输注地点和产品代码)，并且向服务器106提供日历确定和调度功能性(例如，使治疗内科医生能够选择单采血液成分术日期/时间，并在生物样品经过制造过程后为其提供估计的递送日期/时间)。此外，服务器计算装置106可以与内科医生主数据馈送116通信(例如，使用与HerokuTM应用规程集成的VeevaTMCRM平台提供)以接收关于治疗内科医生的某些信息。
图2是使用图1A的系统和/或图1B的系统进行具有监管链和身份链生物样品跟踪的患者特异性免疫疗法规程的计算机化方法200的流程图。如应当理解，在进行患者特异性免疫疗法规程的背景下提出本文描述的方法和系统。如本文所用，“患者特异性免疫疗法规程”是指使用免疫系统的分子或细胞成分靶向和/或破坏癌症、病原性或其他致病细胞的任何规程。若免疫疗法利用患者免疫系统的成分来治疗该患者自身的癌症、病理学或其他疾病，则该免疫疗法是“患者特异性的”。
如本文所用，术语“患者”和“受试者”可互换使用，并且包括人和非人动物，以及具有正式诊断的病症的、没有正式识别的病症的、接收医疗关注的、有风险形成病毒的，等等。除人以外，本发明范围内的动物类别还包括例如农用动物、家畜、实验动物等。农用动物的一些实例包括牛、猪、马、山羊等。家畜的一些实例包括狗、猫等。实验动物的一些实例包括大鼠、小鼠、兔、豚鼠等。
术语“白细胞单采术”是指涉及从血液样品中选择性分离和去除白细胞的单采血液成分术的特定形式。在白细胞单采术期间，取出的血液通过细胞分离装置，该装置将有核的白细胞(包括T细胞)与红细胞和血浆分离。然后可以收集分离的T细胞以用于本发明的细胞修饰技术。在某些实施方案中，红细胞和血浆作为分离过程的一部分返回给个体。在另外的实施方案中，弃去或存储红细胞和血浆以用于进一步分析。
如本文所用，术语“T细胞”和“T淋巴细胞”是可互换的。T细胞是由它们在胸腺中的发育以及与CD3复合物蛋白质缔合的异二聚体受体定义的淋巴细胞子集。本发明的T细胞包括但不限于幼稚T细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、抑制性T细胞、调节性T细胞、记忆性T细胞、NKT细胞、γδ细胞、CD8αα细胞、淋巴因子活化的细胞、表达TCR的细胞、其亚型以及可以表达嵌合受体链的任何其他细胞类型。
可以将T细胞工程化改造成对一种或多种期望靶标具有特异性。例如，可以用编码抗原结合分子，诸如抗体的一个或多个单链可变片段(“scFv”)，连同一种或多种信号传导分子和/或一个或多个活化域，例如CD3 zeta的DNA或其它遗传材料转导T细胞。除了CAR-T细胞识别和破坏靶细胞的能力外，成功的T细胞疗法受益于CAR-T细胞持续存在和维持响应抗原而增殖能力。
如本文所用，术语“细胞修饰技术”包括但不限于转染和转导。术语“转染”及其语法变化是指将外来或外源DNA导入细胞。许多转染技术是本领域中公知的，并在本文中公开。参见例如Graham等人,1973,Virology 52:456；Sambrook等人,2001,MolecularCloning:A Laboratory Manual,上文；Davis等人,1986,Basic Methods in MolecularBiology,Elsevier；Chu等人,1981,Gene 13:197。转染技术包括但不限于磷酸钙-DNA共沉淀、DEAE-右旋糖酐介导的转染、阳离子脂质介导的递送、聚凝胺介导的转染、电穿孔、声穿孔、显微注射、脂质体融合、脂转染(脂质转染)、聚合物转染、纳米颗粒、多聚复合物(Polyplex)、受体介导的基因传递、由聚赖氨酸、组蛋白、壳聚糖和肽介导的递送、原生质体融合、逆转录病毒感染和生物射弹(例如基因枪)。术语“转导”及其语法变体是指经由病毒载体将外来DNA导入细胞中的过程。参见Jones等人,(1998).Genetics:principles andanalysis.Boston:Jones&Bartlett Publ。
如本文所用，术语“输注”及其语法变化是指通过血管将溶液引入体内。本发明的输注包括但不限于将除全血以外的流体治疗性引入血管。例如，可以将本发明的经转染的T细胞例如在肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下输注到患者的血流中。
应当理解，嵌合抗原受体(CAR或CAR-T)是遗传工程化受体，并且T细胞受体(TCR)可以是遗传工程化受体。根据本领域已知的技术，这些工程化的受体可以容易地插入包括T细胞在内的免疫细胞中并由其表达。使用CAR，可以对单个受体进行编程以既识别特定抗原，又与该抗原结合时活化免疫细胞以攻击并破坏带有该抗原的细胞。当这些抗原存在于肿瘤细胞上时，表达CAR的免疫细胞可以靶向并杀死肿瘤细胞。
可以将CAR工程化改造成结合抗原(例如细胞表面抗原)，其通过掺入与该靶定抗原相互作用的抗原结合分子进行。如本文所用，“抗原结合分子”是指结合规定靶分子的任何蛋白质。抗原结合分子包括但不限于抗体及其结合部分，例如免疫功能片段。肽体(peptibody)(即包含肽结合域的Fc融合分子)是合适的抗原结合分子的另一个实例。
抗原结合分子的术语“免疫功能片段”(或“片段”)是包含抗体部分(无论如何获得或合成该部分)的抗原结合分子种类，该抗体部分缺乏全长抗体中存在的至少一些氨基酸但仍能与抗原特异性结合。此类片段具有生物活性，因为它们与靶抗原结合并且可以与包括完整抗体在内的其他抗原结合分子竞争与给定表位的结合。在一些实施方案中，片段是中和片段。一方面，此类片段将保留存在于全长轻链或重链中的至少一个CDR，并且在一些实施方案中，将包含单个重链和/或轻链或其部分。这些片段可以通过重组DNA技术产生，或者可以通过包括完整抗体在内的抗原结合分子的酶促或化学裂解来产生。
免疫学功能性免疫球蛋白片段包括但不限于scFv片段、Fab片段(Fab’、F(ab’)2等)、一个或多个CDR、双抗体(通过短肽接头连接的与轻链可变域在相同多肽上的重链可变域，该接头太短而无法在同一条链上的两个域之间配对)、域抗体和单链抗体。这些片段可以源自任何哺乳动物来源，包括但不限于人、小鼠、大鼠、骆驼科动物(camelid)或兔。如本领域技术人员将理解的，抗原结合分子可包括非蛋白质组分。
在一些实施方案中，抗原结合分子与肿瘤细胞上的抗原结合。在一些实施方案中，抗原结合分子与参与过度增殖性疾病的细胞上的抗原或与病毒或细菌抗原结合。在另外的实施方案中，抗原结合分子是抗体或其片段，包括其一个或多个互补决定区(CDR)。在进一步的实施方案中，抗原结合分子是单链可变片段(scFv)。
优选地，抗原结合分子是其抗体片段。更优选地，抗原结合分子包含一个或多个单链可变片段(“scFv”)。scFv是单链抗体片段，其具有连接在一起的抗体的重链和轻链的可变区。参见美国专利No.7,741,465,6,319,494,PCT申请WO88/01649和美国专利No.4,946,778和5,260,203，其公开内容通过引用完整并入本文，以及Eshhar等人,Cancer ImmunolImmunotherapy(1997)45:131-136。scFv保留了亲本抗体与靶抗原特异性相互作用的能力。scFv优选用于嵌合抗原受体，因为它们可以工程化改造成与其他CAR成分一起表达为单链的一部分。同上。还参见Krause等人,J.Exp.Med.,Volume 188,No.4,1998(619–626)；Finney等人,Journal of Immunology,1998,161:2791–2797。
应当理解，抗原结合分子通常包含在CAR的胞外部分内，使得它能够识别和结合感兴趣的抗原。在本发明的范围内考虑了双特异性和多特异性CAR，其对超过一种感兴趣的靶标具有特异性。
在某些实施方案中，抗原结合分子的多肽结构基于抗体，包括但不限于单克隆抗体、双特异性抗体、微型抗体、域抗体、合成抗体(有时在本文中称为“抗体模拟物”)、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、抗体融合物(有时在本文中称为“抗体缀合物”)及其片段。在一些实施方案中，抗原结合分子包含avimer或由avimer组成。
当解离常数(Kd)为约1x10-7M时，抗原结合分子称为“特异性结合”其靶抗原。当Kd为1-5x10-9M时，抗原结合分子以“高亲和力”特异性结合抗原，并且当Kd为l-5x10-10M时以“非常高的亲和力”特异性结合抗原。在一个实施方案中，抗原结合分子具有10-9M的Kd。在一个实施方案中，解离速率为<1x10-5。
本领域普通技术人员将理解，本发明的靶分子可以是期望针对其的特异性转移至经转染的T细胞的任何分子。术语“靶分子”或“抗原”是指能够被抗原结合分子结合的分子或分子的一部分。在某些实施方案中，靶物可以具有一个或多个表位。
优选地，本发明的靶分子包括但不限于血源性癌症相关抗原。血源性癌症相关抗原的非限制性实例包括与一种或多种癌症相关的抗原，所述癌症选自下组：急性髓样白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、青少年骨髓单核细胞性白血病、非典型慢性髓样白血病、急性早幼粒细胞性白血病(APL)、急性单核母细胞性白血病、急性红系白血病、急性巨核细胞性白血病、淋巴母细胞性白血病、B谱系急性淋巴母细胞性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、B细胞非何杰金氏淋巴瘤、脊髓发育不良综合征(MDS)、骨髓增生病症、髓样新生物、髓样肉瘤)和母细胞性浆细胞样树突细胞新生物(BPDCN)。
在一些实施方案中，抗原选自肿瘤相关表面抗原，例如5T4、甲胎蛋白(AFP)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、BCMA、B-人绒毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特异性抗原、CSPG4、CTLA-4、二唾液酸神经节苷脂GD2、导管上皮粘蛋白(mucine)、EBV特异性抗原、EGFR变体III(EGFRvIII)、ELF2M、内皮糖蛋白(endoglin)、ephrin B2、上皮生长因子受体(EGFR)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、上皮肿瘤抗原、ErbB2(HER2/neu)、成纤维细胞相关蛋白(fap)、FLT3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、胶质瘤相关抗原、鞘糖脂、gp36、HBV特异性抗原、HCV特异性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3组合、HERV-K、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HPV特异性抗原、人端粒酶逆转录酶、IGFI受体、IGF-II、IL-11Ralpha、IL-13R-a2、流感病毒特异性抗原；CD38、胰岛素生长因子(IGF1)-1、肠羧基酯酶、kappa链、LAGA-la、lambda链，拉沙病毒特异性抗原、凝集素反应性AFP、谱系特异性或组织特异性抗原，例如CD3、MAGE、MAGE-A1、主要组织相容性复合物(MHC)分子、呈递肿瘤特异性肽表位的主要肿瘤相容性复合物(MHC)分子、M-CSF、黑素瘤相关抗原、间皮素、间皮素、MN-CA IX、MUC-1，mut hsp72、突变的p53、突变的p53、突变的ras、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、蛋白酶、蛋白酶特异性抗原(PSA)、前列腺癌肿瘤抗原1(PCTA-1)、前列腺素特异性抗原、prostein、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2(AS)、表面粘附分子、存活和端粒酶、TAG-72、纤连蛋白的额外域A(EDA)和额外域B(EDB)以及腱糖蛋白-C的Al域(TnC A1)、甲状腺球蛋白、肿瘤基质抗原、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、病毒特异性表面抗原，例如HIV特异性抗原(例如HIV gp120)，以及这些表面标志物的任何衍生物或变体。
在一些实施方案中，本发明的靶分子包括病毒感染相关抗原。本发明的病毒感染可以由任何病毒引起，包括例如HIV。
可能的靶分子的此列表并不意图是排他的，并且本领域普通技术人员将知道许多可用于用本发明的嵌合抗原受体靶向的其他分子。
嵌合抗原受体可以掺入共刺激(信号传导)域以增加其效力。参见美国专利Nos.7,741,465和6,319,494以及Krause等人和Finney等人(上文),Song等人,Blood 119:696-706(2012)；Kalos等人,Sci Transl.Med.3:95(2011)；Porter等人,N.Engl.J.Med.365:725-33(2011),和Gross等人,Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.56:59–83(2016)。例如，CD28是在T细胞上自然发现的共刺激蛋白。本文阐述了多种共刺激分子，但应理解，其他共刺激分子也包括在本发明的范围内。
CD28的完整天然氨基酸序列在NCBI参考序列：NP_006130.1中描述。完整的天然CD28核酸序列在NCBI参考序列：NM_006139.1中描述。
某些CD28域已用于嵌合抗原受体。根据本发明，现已发现，称为“CD28T”的新型CD28胞外(铰链)构建体在用于CAR构建体时出乎意料地提供了某些益处。尽管从细胞外CD28序列中截短(去除)了多个氨基酸，该构建体证明保留(并且有时超过)含CD28的CAR的特性的能力。这些益处包括等同或优异的细胞因子产生、等同或优异的细胞溶解活性和/或等同或优异的CAR表达水平。
包括胞外域以及CD28跨膜和细胞内域的CD28T分子的核苷酸序列在SEQ ID NO.1中列出：
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC
相应的氨基酸序列在SEQ ID NO.2中列出：
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYM NMTPRRPGPT RKHYQPYAPP RDFAAYRS
CD28T的胞外部分的核苷酸序列在SEQ ID NO.3中列出：
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCA
CD28T胞外域的相应氨基酸序列在SEQ ID NO.4中列出：
LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP
CD28跨膜域的核苷酸序列在SEQ ID NO.5中列出：
TTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTT
CD28跨膜域的氨基酸序列在SEQ ID NO.6中列出：
FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWV
CD28胞外信号传导域的核苷酸序列在SEQ ID NO.7中列出：
AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC
CD28胞内信号传导域的氨基酸序列在SEQ ID NO.8中列出：
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
适合用于本发明的另外的CD28序列包括SEQ ID NO.11中列出的CD28核苷酸序列：
ATTGAGGTGATGTATCCACCGCCTTACCTGGATAACGAAAAGAGTAACGGTACCATCATTCACGTGAAAGGTAAACACCTGTGTCCTTCTCCCCTCTTCCCCGGGCCATCAAAGCCC
相应的氨基酸序列在SEQ ID NO.12中列出：
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP
应当理解，本发明涉及包含SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3的至少一个分离的核酸序列的抗原结合分子、CAR、TCR等。还应理解，本发明涉及抗原结合分子、CAR、TCR等，其中胞外部分由SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3的至少一个分离的核酸序列组成。另外，应当理解，本发明涉及抗原结合分子、CAR、TCR等，其中胞外部分基本上由SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3的至少一个分离的核酸序列组成。
应当理解，本发明涉及包含SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4的至少一个氨基酸序列的抗原结合分子、CAR、TCR等。还应理解，本发明涉及抗原结合分子、CAR、TCR等，其中胞外部分由SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4的至少一个氨基酸序列组成。另外，应当理解，本发明涉及抗原结合分子、CAR、TCR等，其中胞外部分基本上由SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4的至少一个氨基酸序列组成。
胞外和/或跨膜域的另一个合适的来源可以源自(或对应于)部分或整个CD8。
合适的CD8胞外和跨膜域的核苷酸序列在SEQ ID NO.13中列出：
GCTGCAGCATTGAGCAACTCAATAATGTATTTTAGTCACTTTGTACCAGTGTTCTTGCCGGCTAAGCCTACTACCACACCCGCTCCACGGCCACCTACCCCAGCTCCTACCATCGCTTCACAGCCTCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCTTGCCGACCGGCCGCAGGGGGCGCTGTTCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGATATCTATATCTGGGCACCCCTGGCCGGAACCTGCGGCGTACTCCTGCTGTCCCTGGTCATCACGCTCTATTGTAATCACAGGAAC
相应的氨基酸序列在SEQ ID NO.14中列出：
AAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN
在结构上，应理解，本文所述的域对应于相对于免疫细胞或其他细胞的位置。因此，这些域可以是(i)“铰链”或胞外(EC)域、(ii)跨膜(TM)域和/或(iii)胞内/胞质域(IC)的部分。胞内组分经常部分包含活化域，例如CD3家族成员，优选CD3 zeta的部分。当抗原结合分子与其靶标结合时，该域能够活化T细胞。应当理解，胞内域通常还包含一种或多种如本文所述的共刺激分子。
如本文所用，“共刺激分子”是指提供介导T细胞应答的信号的分子，包括但不限于增殖、活化、分化等。如本文所述，共刺激分子还可提供除由活化分子提供的主要信号外的信号。
应当理解，在本发明范围内的合适的共刺激域可以源自(或对应于)共刺激分子，例如，CD28、CD28T、OX40、4-1BB/CD137、CD2、CD3(alpha、beta、delta、epsilon、gamma、zeta)、CD4、CD5、CD7、CD9、CD16、CD22、CD27、CD30、CD 33、CD37、CD40、CD 45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDl la/CD18)、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、NKG2C、Ig alpha(CD79a)、DAP-10、Fc gamma受体、MHC I类分子、TNF、TNFr、整联蛋白、信号传导淋巴细胞活化分子、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8alpha、CD8beta、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7R alpha、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl-ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl-la、LFA-1、ITGAM、CDl-lb、ITGAX、CDl-lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、CD83配体或其片段或组合。应当理解，以上未列出的其他共刺激分子或其片段在本发明的范围内。
在一些实施方案中，共刺激域可以包含整个或部分的SEQ ID NO.140中列出的4-1BB核酸序列和如SEQ ID NO.141中列出的相应氨基酸序列。在其他实施方案中，共刺激域可以包含整个或部分如SEQ ID NO.141列出的OX40的氨基酸序列。还参见Hombach等人，Oncoimmunology.2012Jul.1；1(4):458–466。在其他实施方案中，共刺激域可包含整个或部分的ICOS分子，如Guedan等人，August 14,2014；Blood:124(7)和Shen等人,Journal ofHematology&Oncology(2013)6:33。在其他实施方案中，如Song等人，Oncoimmunology.2012Jul.1；1(4):547–549中所述，共刺激域可以包含整个或部分CD27。
本发明的工程化的T细胞包含抗原结合分子(例如scFv)、胞外域(其可以包含“铰链”域)、跨膜域和胞内域。胞内域可以至少部分包含活化域，优选由CD3家族成员，例如CD3zeta、CD3 epsilon、CD3 gamma或其部分构成。
将进一步理解，对抗原结合分子(例如，一个或多个scFv)工程化改造，使得其位于分子/构建体的胞外部分中，从而其能够识别并结合其一个或多个靶标。
应当理解，铰链区可以含有免疫球蛋白家族的一些或全部成员，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM或其片段。
在一些实施方案中，胞外域位于抗原结合分子和跨膜域之间。
在本发明中特别使用的胞外域可以源自(即包括)以下一些或全部：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、诱导性T细胞共刺激物(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1、CDl-la/CD18)、CD3 gamma、CD3 delta、CD3epsilon、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Ig alpha(CD79a)、DAP-10、Fcgamma受体、MHC 1类分子、TNF配体受体、免疫球蛋白蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8alpha、CD8beta、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7R alpha、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl la、LFA-1、ITGAM、CDl lb、ITGAX、CDl lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。胞外域可源自天然或合成来源。
胞外域通常包含铰链部分，有时称为“间隔物”区域。根据本发明，可以使用多种铰链，包括本文所述分子的部分或衍生物。
可以设计具有与CAR的胞外域融合的跨膜域的CAR。它可以类似地融合至CAR的胞内域。在一些情况下，可以通过氨基酸取代来选择或修饰跨膜域，以避免此类域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜域结合，以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。跨膜域可以源自天然或合成来源。若来源是天然的，则该域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。在本发明中特别使用的跨膜区可以源自(包括或对应于)CD28、CD28T、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、诱导性T细胞共刺激物(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1、CDl-la/CD18)、CD3 gamma、CD3 delta、CD3 epsilon、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Ig alpha(CD79a)、DAP-10、Fc gamma受体、MHC 1类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号转导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8alpha、CD8beta、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7R alpha、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl la、LFA-1、ITGAM、CDl lb、ITGAX、CDl lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。
任选地，短接头可以在CAR的细胞外、跨膜和胞内域的任何或一些之间形成连接。
在其他实施方案中，本发明的CAR中的跨膜域是CD8跨膜域。在一个实施方案中，CD8跨膜域包含SEQ ID NO:13的核酸序列的跨膜部分。在另一个实施方案中，CD8跨膜域包含编码SEQ ID NO:14中包含的跨膜氨基酸序列的核酸序列。
在某些实施方案中，本发明的CAR中的跨膜域是CD28跨膜域。在一个实施方案中，CD28跨膜域包含SEQ ID NO:5的核酸序列。在一个实施方案中，CD28跨膜域包含编码SEQ IDNO:6的氨基酸序列的核酸序列。CD28跨膜域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
本发明的工程化T细胞的胞内(胞质)域可以提供免疫细胞的正常效应器功能中的至少一种的活化。例如，T细胞的效应期功能可以指细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。
应当理解，合适的胞内分子包括但不限于源自或对应于以下项的信号传导域：CD28、CD28T、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序性死亡-1(PD-1)、诱导性T细胞共刺激物(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1、CDl-la/CD18)、CD3 gamma、CD3delta、CD3 epsilon、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT、(TNFSF14)、NKG2C、Ig alpha(CD79a)、DAP-10、Fc gamma受体、MHC 1类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号转导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8alpha、CD8beta、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7Ralpha、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CDl ld、ITGAE、CD103、ITGAL、CDl la、LFA-1、ITGAM、CDl lb、ITGAX、CDl lc、ITGBl、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、与CD83特异性结合的配体或其任何组合。
在优选的实施方案中，可以将CAR的胞内/胞质域设计成包含单独或与本发明的CAR的背景下有用的任何其他期望的胞内域组合的CD3 zeta域。例如，CAR的胞内域可以包含CD3 zeta链部分和共刺激信号传导分子的部分。本发明的CAR的胞内信号传导部分内的胞内信号传导序列可以以随机或规定顺序彼此连接。
在另一个优选的实施方案中，将胞内域设计为包含CD3 zeta的活化域和CD28的信号传导域。在另一个实施方案中，将胞内域设计为包含CD3 zeta的活化域和4-1BB的信号传导域。在另一个实施方案中，将CAR中的细胞内域设计为包含CD28和CD3 zeta的部分，其中胞内CD28包含SEQ ID NO:7中列出的核酸序列和SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。CD3 zeta核酸序列在SEQ ID NO:9中列出，并且氨基酸序列在SEQ ID NO:8中列出。
如本文所用，“活化”或“刺激”指通过活化分子与其关联配体的结合而诱导的主要反应，其中所述结合介导信号转导事件。
“活化分子”或“刺激分子”是指与抗原呈递细胞上存在的关联刺激配体特异性结合的T细胞上的分子，例如TCR/CD3复合物。本文描述了合适的活化分子。
应当理解，在本发明范围内的合适的活化域可以源自(或对应于)活化/刺激分子，诸如例如CD3或CD3 zeta。CD3是天然T细胞上T细胞受体的元件，并且已显示是CAR中重要的胞内活化元件。
在优选的实施方案中，CD3是CD3 zeta，其核苷酸序列在SEQ ID NO.9中列出：
AGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG
胞内CD3 zeta的相应氨基酸在SEQ ID NO.10中列出：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
应当理解，根据本发明的CAR的一种优选的取向包括与胞外和/或铰链域、共刺激域和活化域串联的抗原结合分子(例如scFv)。应当进一步理解，可以串联使用多个域。
表1列出了根据本发明的示例性CAR构建体：
表1
构建体名称 scFv 铰链域 活化域
24C1 CD28T 24C1 CD28T CD3 zeta
24C1 CD28 24C1 CD28 CD3 zeta
24C1 CD8 24C1 CD8 CD3 zeta
24C8 CD28T 24C8 CD28T CD3 zeta
24C8 CD28 24C8 CD28 CD3 zeta
24C8 CD8 24C8 CD8 CD3 zeta
20C5.1 CD28T 20C5.1 CD28T CD3 zeta
20C5.1 CD28 20C5.1 CD28 CD3 zeta
20C5.1 CD8 20C5.1 CD8 CD3 zeta
20C5.2 CD28T 20C5.2 CD28T CD3 zeta
20C5.2 CD28 20C5.2 CD28 CD3 zeta
20C5.2 CD8 20C5.2 CD8 CD3 zeta
术语“载体”是指用于将蛋白质编码信息转移到宿主细胞中的任何分子或实体(例如，核酸、质粒、噬菌体或病毒)。术语“表达载体”或“表达构建体”是指适于转化宿主细胞并包含指导和/或控制(与宿主细胞结合)与其可操作连接的一种或多种异源编码区域表达的核酸序列的载体。表达构建体可包括但不限于影响或控制转录、翻译和(若存在内含子)影响与其可操作连接的编码区的RNA剪接的序列。
术语“宿主细胞”是指已经被核酸序列转化或能够被转化并由此表达感兴趣的基因的细胞。该术语包括亲代细胞的后代，无论该后代在形态或遗传组成上是否与原始亲代细胞相同，只要存在感兴趣的基因即可。
术语“转化”是指细胞遗传特性的改变，并且当细胞被修饰以包含新的DNA或RNA时，细胞已经得到转化。例如，通过经由转染、转导或其他技术导入新的遗传物质转化细胞，其中其从天然状态进行遗传修饰。转染或转导后，转化的DNA可以通过物理整合到细胞的染色体中而与细胞的DNA重组，或者可以作为附加体元件瞬时维持而不被复制，或者可以作为质粒独立复制。当转化的DNA随细胞分裂而复制时，认为细胞已经“稳定转化”。
本发明进一步涉及编码本发明的嵌合抗原受体(CAR)和T细胞受体(TCR)的分离的多核苷酸，以及包含该多核苷酸的载体。本领域已知的任何载体可适用于本发明。在一些实施方案中，载体是病毒载体。在一些实施方案中，载体是逆转录病毒载体(例如pMSVG1)、DNA载体、鼠白血病病毒载体、SFG载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、埃巴病毒载体、乳头瘤病毒载体、牛痘病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体(AAV)、慢病毒载体(例如pGAR)或其任何衍生物或组合。
pGAR序列如下：
CTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGCTTACAATTTGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGACCCGGGGATGGCGCGCCAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGCTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCCGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGTATCGGTTAACTTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAATTCAAAATTTTATCGCGATCGCGGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAAAATACATAACTGAGAATAGAGAAGTTCAGATCAAGGTTAGGAACAGAGAGACAGCAGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCCGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTCTGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGCGCGCCAGTCCTTCGAAGTAGATCTTTGTCGATCCTACCATCCACTCGACACACCCGCCAGCGGCCGCTGCCAAGCTTCCGAGCTCTCGAATTAATTCACGGTACCCACCATGGCCTAGGGAGACTAGTCGAATCGATATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTTCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGTTAATTAAAGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCGAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGGCATGCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTGGCGCGCCATCGTCGAGGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTGCGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
合适的另外的示例性载体包括例如pBABE-puro、pBABE-neolargeTcDNA、pBABE-hygro-hTERT、pMKO.1GFP、MSCV-IRES-GFP、pMSCVPIG(Puro IRES GFP空质粒)、pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE、MSCV IRES萤光素酶、pMIG、MDH1-PGK-GFP_2.0、TtRMPVIR、pMSCV-IRES-mCherry FP、pRetroX GFP T2A Cre、pRXTN、pLncEXP、和pLXIN-Luc。
在另一个实施方案中，不同表达载体的混合物可以用于遗传修饰免疫效应细胞的供体群体，其中每个载体编码如本文公开的不同CAR。所得的转导的免疫效应细胞形成工程化细胞的混合群体，其中一定比例的工程化细胞表达超过一种不同的CAR。
在本发明的优选实施方案中，CAR包含抗-CD19 scFv、CD28和CD3 zeta的全部或部分。
还可以通过用编码T细胞受体(TCR)的多核苷酸转染收集的T细胞来创建本发明的转染的T细胞。T细胞受体(TCR)是在T细胞表面上发现的分子，其负责以与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的肽识别抗原片段。TCR由两条不同的蛋白质链组成-在约95％的人TCR中，TCR由一条alpha(α)和beta(β)链组成。在约5％的人T细胞中，TCR由gamma和delta(γ/δ)链组成。每条链由都为免疫球蛋白超家族的两个胞外域组成：可变(V)区和恒定(C)区。与其他免疫球蛋白中一样，TCRα链和β链(或gamma和delta(γ/δ)链)的可变域各具有三个高变或互补决定区(CDR)。当TCR与抗原肽和MHC(肽/MHC)结合时，T细胞被活化，使其能够攻击并破坏靶细胞。
本发明的TCR可以结合例如肿瘤相关抗原。如本文所用，“肿瘤相关抗原”是指与一种或多种选自下组的癌症相关的抗原：肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、类癌癌、癌瘤、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、颅外生殖细胞癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、生殖细胞瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、头颈癌、下咽癌、胰岛细胞癌、肾癌、大肠癌、喉癌、白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、恶性间皮瘤、默克尔细胞癌、蕈样肉芽肿病、脊髓发育不良综合征、骨髓增生病症、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞癌、胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、垂体癌、浆细胞瘤、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、唾液腺癌、Sezary综合征、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌和Wilms肿瘤。
在某些方面，本申请可以适用于血液学癌症的靶分子。在一些实施方案中，癌症是白细胞的癌症。在其他实施方案中，癌症是浆细胞的癌症。在一些实施方案中，癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在某些实施方案中，癌症是急性淋巴母细胞性白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性淋巴样白血病(ALL)和嗜血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH))、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞样白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突细胞新生物、伯基特氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性髓样白血病(CML)、慢性或急性肉芽肿性疾病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、噬血细胞性综合征(巨噬细胞活化综合征(MAS)、何杰金氏病、大细胞肉芽肿、白细胞粘附缺乏、恶性淋巴增生性病况、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆gamma病变(gammapathy)(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合症(MDS)、髓样疾病，包括但不限于急性髓样白血病(AML)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性疾病(例如无症状骨髓瘤(隐袭性多发性骨髓瘤或无痛性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突细胞新生物、浆细胞瘤(例如浆细胞体液不调；孤立性骨髓瘤；孤立性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤和多发性浆细胞瘤)，POEMS综合征(Crow-Fukase综合征；Takatsuki病；PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变性、T细胞急性淋巴样白血病(TALL)、T细胞淋巴瘤、转化的滤泡性淋巴瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症或其组合。
在一些实施方式中，抗原选自肿瘤相关表面抗原，例如例如5T4、甲胎蛋白(AFP)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、BCMA、B-人绒毛膜促性腺激素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特异性抗原、CSPG4、CTLA-4、二唾液酸神经节苷脂GD2、导管上皮粘蛋白(mucine)、EBV特异性抗原、EGFR变体III(EGFRvIII)、ELF2M、内皮糖蛋白(endoglin)、ephrin B2、上皮生长因子受体(EGFR)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、上皮肿瘤抗原、ErbB2(HER2/neu)、成纤维细胞相关蛋白(fap)、FLT3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、胶质瘤相关抗原、鞘糖脂、gp36、HBV特异性抗原、HCV特异性抗原、HER1-HER2、HER2-HER3组合、HERV-K、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HPV特异性抗原、人端粒酶逆转录酶、IGFI受体、IGF-II、IL-11Ralpha、IL-13R-a2、流感病毒特异性抗原；CD38、胰岛素生长因子(IGF1)-1、肠羧基酯酶、kappa链、LAGA-la、lambda链，拉沙病毒特异性抗原、凝集素反应性AFP、谱系特异性或组织特异性抗原，例如CD3、MAGE、MAGE-A1、主要组织相容性复合物(MHC)分子、呈递肿瘤特异性肽表位的主要肿瘤相容性复合物(MHC)分子、M-CSF、黑素瘤相关抗原、间皮素、间皮素、MN-CA IX、MUC-1，mut hsp72、突变的p53、突变的p53、突变的ras、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、蛋白酶、蛋白酶特异性抗原(PSA)、前列腺癌肿瘤抗原1(PCTA-1)、前列腺素特异性抗原、prostein、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2(AS)、表面粘附分子、存活和端粒酶、TAG-72、纤连蛋白的额外域A(EDA)和额外域B(EDB)以及腱糖蛋白-C的Al域(TnC A1)、甲状腺球蛋白、肿瘤基质抗原、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、病毒特异性表面抗原，例如HIV特异性抗原(例如HIV gp120)，以及这些表面标志物的任何衍生物或变体。
本发明的TCR也可以结合病毒感染相关抗原。病毒感染相关抗原包括与任何病毒感染相关的抗原，包括例如由HIV引起的病毒感染。
为了启动本文所述的患者特异性免疫疗法规程，客户端计算装置102a处的内科医生或其他医务人员访问服务器计算装置106的用户界面模块108a(例如，经由门户网站、网站或其他类似平台)。用户界面模块108a生成用于在客户端计算装置102a上呈现给内科医生的用户界面屏幕和/或元件，以便内科医生登记患者并启动患者特异性免疫疗法规程。用户界面模块108a可以生成UI屏幕，以使内科医生能够输入患者的识别信息(例如，全名，出生日期)、人口统计学(例如，性别)和医疗保健提供者信息(例如，内科医生名称，医院名称)。用户界面模块108a还可以提供用于输入医疗保健提供者特异性或医院特异性用户标识符(例如，病历号，医院患者ID)的UI元件。图3A和3B是由用户界面模块108a生成的示例性屏幕截图，其使新患者能够登记到系统中；图3A描述了患者登记数据输入屏幕，而图3B描绘了患者信息回顾和确认屏幕。
返回图2，客户端计算装置102a生成请求以创建用于患者的经转染的T细胞，并且服务器计算装置106接收(202)该请求。如上所述，客户端计算装置102a处的内科医生与用户界面模块108a交互以通过提供必要的患者信息来登记患者。一旦用户界面模块108a从客户端计算装置102a接收患者信息已经被完全输入并且是准确的确认，则用户界面模块108a将数据存储在数据库110中。用户界面模块108a还生成(204)患者特异性标识符，其将用作以下所述的样品跟踪和监管链/身份链过程的一部分。在一个实施方案中，患者特异性标识符包括患者身份元件(例如，患者ID号)、销售订购标识符和细胞订购批次号。例如，用户界面模块108a可以通过将患者身份元件、销售订购号和细胞订购批次号映射到以标识符(例如，九位数字代码)作为索引的数据库表中来生成患者特异性标识符。所述标识符独特识别患者、销售订购和细胞批次组合。
接下来，客户端计算装置102a处的内科医生与用户界面模块108a交互以安排预约以从患者获得生物材料，并且由于将改变的生物材料快速提供给患者的时间敏感性，确认制造设施具有在获得材料后不久处理生物材料的利用度。用户界面模块108a请求确认材料提取地点(例如，站点名称、地址、联系信息)以用于提取试剂盒(例如，白细胞单采术试剂盒)的寄件以及改变的材料递送和处理地点(例如，站点名称、地址、联系信息)的确认，用于从制造设施递送材料(例如，经转染的T细胞)。图4A-4D是由用户界面模块108a生成的示例性屏幕截图，其使得能够确认这些地点并安排预约；图4A描绘了寄件地点确认屏幕。图4B描绘了材料递送地点确认屏幕。图4C描绘了打开预定调度程序的屏幕；并且图4D描绘了预约调度程序。在一些实施方案中，用户界面模块108a与制造设施的远程计算装置以及数据库110通信，以协调生物材料修改的调度，以确保最有效的处理日程表，从而使经修饰的材料快速返回到患者。
返回图2，如上所述，一旦完成细胞订购过程，启动过程206以在提取地点处进行生物材料提取规程，将提取的材料运输到制造设施以进行修饰，然后将经修饰的材料发送回递送地点，以输注回患者血液中。首先，患者到达材料提取地点，并对患者的血液样品进行规程(例如白细胞分离规程)(206a)，以从样品中收集T细胞。当进行该规程时，提取地点处的客户端计算装置(例如，装置102b)与服务器计算装置106的事件跟踪模块108b通信，以将与该规程的进行相对应的跟踪事件发送给模块108b。例如，客户端计算装置102b处的临床医生可以通过将信息输入用户界面来提交跟踪事件。在另一个实例中，当客户端计算装置102b捕获关于规程的信息(例如，扫描条形码)时，客户端计算装置102b可以自动将跟踪事件传输给模块108b(例如，经由API)。
跟踪事件可以包括患者特异性标识符、时间戳、事件ID(例如，其指示进行材料提取规程)以及与该过程有关的其他信息(例如，细胞订购批次号、销售订购号、地点位置等)。事件跟踪模块108b基于从客户端计算装置102b接收的信息将跟踪事件存储在数据库110中。因为这是生物材料提取和修饰过程中的第一步，所以事件跟踪模块108b对监管链模块108c通知跟踪事件的收据。监管链模块108c生成监管链数据结构(例如，数据库110中)，该结构以使患者、内科医生、制造商和其它各方了解生物材料的确切状态，并确保始终对生物材料进行说明以避免丢失或处理不当的有序顺序掺入跟踪事件(以及本文描述的每个后续跟踪事件)。在一个实例中，监管链数据结构可以是链接列表，该链接列表根据例如跟踪事件的时间戳以顺序的方式将每个跟踪事件连接在一起。
接下来，将收集的T细胞转移(206b)到容器(例如管、小瓶或其他类型的生物材料载体)中，并捕获另一个跟踪事件，并将其传输到事件跟踪模块108b中以整合到上文描述的监管链数据结构链中。然后，用患者特异性标识符对容器进行标记(206c)，并捕获另一个跟踪事件，并将其传输到事件跟踪模块108b，以与监管链模块108c通信，以集成到监管链数据结构中。例如，容纳收集的T细胞的容器用包含患者特异性标识符的条形码标记，然后在提取地点扫描所述条形码——指示收集的T细胞已准备好运输到制造设施。在扫描条形码时，客户端计算装置102b生成跟踪事件，并将该事件传输到事件跟踪模块108b。
然后，提取地点将收集的T细胞传输(206d)到制造装置，该制造装置进行生成经转染的T细胞的规程。既在将收集的T细胞运输到制造设施时又在制造设施处接收收集的T细胞时，用于记录T细胞的运输和收据的一个或多个装置与事件跟踪模块108b进行通信，以传输与特定活动相关的跟踪事件，以与监管链模块108c通信，以集成到监管链中。以此方式，监管链模块108c利用最新信息自动且连续地更新监管链数据结构，并且在由用户界面模块108a生成的一个或多个屏幕中反映该信息。
然后，制造设施使用细胞修饰技术从收集的T细胞创建(206e)经转染的T细胞，并且客户端计算装置(例如，装置102c)基于使用的特定的细胞修饰技术生成一个或多个跟踪事件。例如，细胞修饰技术可以包括几个阶段——例如(i)修饰之前收集的T细胞的质量保证，(ii)T细胞的修饰；(ii)经转染的T细胞的释放测试，和(iv)终止经转染的T细胞以运输回到输注地点。对于这些阶段中的每个阶段，客户端计算装置102c捕获跟踪事件，并将跟踪事件传输到事件跟踪模块108b，以通过监管链模块108c集成到监管链数据结构中。
一旦运输经转染的T细胞，输注地点接收(206f)经转染的T细胞，并且客户端计算装置(例如，装置102d)生成跟踪事件，以传输到事件跟踪模块108b，以通过监管链模块108c集成到监管链数据结构中。例如，客户端计算装置102d可以扫描与运输和/或经转染的T细胞相关的条形码以自动生成跟踪事件并将该事件传输到服务器计算装置106。
接收后，将经转染的T细胞输注(206g)到患者的血流中，从而完成该过程。同时，客户端计算装置102d生成跟踪事件，并将该事件传输到事件跟踪模块108b，以通过监管链模块108c集成到监管链数据结构中。
图5A和5B是由用户界面模块108a生成的示例性屏幕截图，以使客户端计算装置102a-102d能够查看与特定患者、生物材料和细胞修饰过程相关的监管链。如图5A所示，在白细胞单采术过程期间生物材料的监管链(包括安排规程、完成规程以及将提取的T细胞准备好运输的步骤)在屏幕顶部的时间线中捕获，其中白细胞单采术过程的每个步骤都与时间线上的点相关联，并且在屏幕底部的时间线上捕获在递送过程期间生物材料的监管链(例如，从提取地点运输的T细胞、递送到制造设施的T细胞)。当事件跟踪模块108b和监管链模块108c如上所述记录跟踪事件时，用户界面模块108a遍历监管链数据结构以在屏幕上以图形方式表示监管链的当前状态。
如在图5B中所示，在屏幕顶部的时间线中显示了制造过程(包括QA、制造、释放测试和终止以运输)期间生物材料的监管链，并且在屏幕中间显示了在最终产品递送过程(包括运输和递送到输注站点)期间生物材料的监管链。另外，在屏幕底部显示了治疗细节，包括治疗日期。此外，监管链始终与特定患者相关联——从而确保在制造的所有阶段期间患者与生物材料之间的完整身份链。
可以以数字和/或模拟电子电路，或以计算机硬件、固件、软件或它们的组合来实现上述技术。该实现可以作为计算机程序产品，即有形地体现在机器可读存储装置中的计算机程序，以由数据处理装置(例如，可编程处理器、计算机和/或多台计算机)执行或控制数据处理装置(例如，可编程处理器、计算机和/或多台计算机)。可以以任何形式的计算机或编程语言(包括源代码、编译代码、解释性代码和/或机器代码)编写计算机程序，并且可以以任何形式(包括以独立程序或以适用于计算环境的子例程、元件或其他单元)部署计算机程序。可以将计算机规程部署为在一台计算机上或在一个或多个地点的多台计算机上执行。计算机程序可以部署在云计算环境(例如，
Figure BDA0002413049300000341
AWS,
Figure BDA0002413049300000342
Azure,
Figure BDA0002413049300000343
)中。
方法步骤可以由一个或多个处理器进行，所述处理器执行计算机程序以通过对输入数据进行操作和/或生成输出数据来进行本发明的功能。方法步骤也可以由专用逻辑电路进行，并且装置可以作为专用逻辑电路实现，例如FPGA(现场可编程门阵列)、FPAA(现场可编程模拟阵列)、CPLD(复杂可编程逻辑器件)、PSoC(可编程片上系统)、ASIP(专用指令集处理器)或ASIC(专用集成电路)等。子例程可以指所存储的计算机程序和/或处理器和/或实现一个或多个功能的专用电路的部分。
例如，适合于执行计算机程序的处理器包括专用微处理器，该专用微处理器特别编程有可执行以进行本文描述的方法的指令。通常，处理器从只读存储器或随机存取存储器或两者接收指令和数据。计算机的基本元件是用于执行指令的处理器和用于存储指令和/或数据的一个或多个存储装置。诸如高速缓存的存储装置可以用于临时存储数据。存储装置也可以用于长期数据存储。通常，计算机还包括一个或多个用于存储数据的大容量存储装置，例如，磁盘、磁光盘或光盘，或可操作地偶联以从该大容量存储装置接收数据和/或将数据转移到该大容量存储装置。计算机还可以可操作地偶联到通信网络，以便从网络接收指令和/或数据和/或将指令和/或数据转移到网络。适合于体现计算机程序指令和数据的计算机可读存储介质包括所有形式的易失性和非易失性存储器，包括例如半导体存储装置，例如DRAM、SRAM、EPROM、EEPROM和闪存装置；磁盘，例如内部硬盘或可移动磁盘；磁光盘；和光盘，例如CD、DVD、HD-DVD和蓝光盘。处理器和存储器可以由专用逻辑电路补充和/或并入专用逻辑电路。
为了提供与用户的交互，可以在计算装置上实现上述技术，所述计算装置与以下项通信：显示装置，例如CRT(阴极射线管)、等离子体或LCD(液晶显示器)监视器、移动装置显示器或屏幕、全息装置和/或投影仪，用于向用户显示信息，以及用户可以对计算机提供输入(例如，与用户界面元件交互)的键盘和指向装置，例如鼠标、轨迹球、触摸板或运动传感器。也可以使用其他种类的装置来提供与用户的交互；例如，提供给用户的反馈可以是任何形式的感觉反馈，例如视觉反馈、听觉反馈或触觉反馈；并且可以以任何形式接收来自用户的输入，包括声音、语音和/或触觉输入。
可以在包括后端组件的分布式计算系统中实现上述技术。后端组件可以例如是数据服务器、中间件组件和/或应用服务器。可以在包括前端组件的分布式计算系统中实现上述技术。前端组件可以例如是具有图形用户界面的客户端计算机、用户可以与示例性实现进行交互的网络浏览器和/或用于传输装置的其他图形用户界面。可以在包括此类后端、中间件或前端组件的任何组合的分布式计算系统中实现上述技术。
计算系统的组件可以通过传输介质互连，该传输介质可以包括数字或模拟数据通信(例如，通信网络)的任何形式或介质。传输介质可以以任何配置包括一个或多个基于分组的网络和/或一个或多个基于电路的网络。基于分组的网络可以包括例如因特网、运营商因特网协议(IP)网络(例如，局域网(LAN)、广域网(WAN)、校园网(CAN)、城域网(MAN)、家域网(HAN)、专用IP网络、IP专用小交换机(IPBX)、无线网络(例如，无线电访问网络(RAN)、蓝牙、近场通信(NFC)网络、Wi-Fi、WiMAX、通用分组无线服务(GPRS)网络、HiperLAN)和/或其他基于分组的网络。基于电路的网络可以包括例如公共交换电话网络(PSTN)、遗产专用分组交换(PBX)、无线网络(例如，RAN，码分多址(CDMA)网络、时分多址(TDMA)网络、全球移动通信系统(GSM)网络和/或其他基于电路的网络。
通过传输介质的信息传输可以基于一种或多种通信协议。通信协议可以包括例如以太网协议、互联网协议(IP)、IP语音(VOIP)、点对点(P2P)协议、超文本传输协议(HTTP)、会话发起协议(SIP)、H.323、媒体网关控制协议(MGCP)、7号信令系统(SS7)、全球移动通信系统(GSM)协议、按键通话(PTT)协议、蜂窝PTT(PTT over Cellular,POC)、通用移动电信系统(UMTS)、3GPP长期演进(LTE)和/或其他通信协议。
计算系统的装置可以包括例如计算机、具有浏览器装置的计算机、电话、IP电话、移动装置(例如，蜂窝电话、个人数字助理(PDA)装置、智能电话、平板电脑、膝上计算机、电子邮件装置)和/或其他通信装置。浏览器装置包括，例如，具有万维网浏览器的计算机(例如，台式计算机和/或膝上计算机)(例如，来自Google，Inc.的ChromeTM，可从MicrosoftCorporation获得的
Figure BDA0002413049300000361
Internet
Figure BDA0002413049300000362
和/或可从Mozilla Corporation获得的
Figure BDA0002413049300000363
Firefox)。移动计算装置包括，例如来自Research in Motion的
Figure BDA0002413049300000364
来自Apple Corporation的
Figure BDA0002413049300000365
和/或基于AndroidTM的装置。IP电话包括例如可从Cisco Systems,Inc.获得的
Figure BDA0002413049300000366
Unified IP电话7985G和/或
Figure BDA0002413049300000367
Unified无线电话7920。
另外的定义
术语“多肽”或“蛋白质”是指具有蛋白质的氨基酸序列的大分子，包括天然序列的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且优选地其中不超过8个氨基酸取代。优选地，多肽或蛋白质是分离的，如本文定义的。术语“多肽片段”是指与全长天然蛋白相比具有氨基端缺失、羧基端缺失和/或内部缺失的分离的多肽。与天然蛋白质相比，此类片段还可含有经修饰的氨基酸。有用的多肽片段包括抗原结合分子的免疫功能片段。有用的片段包括但不限于一个或多个CDR区、重链和/或轻链的可变域、抗体链的其他部分的部分等。
术语“抗体”是指可以与完整抗体竞争对靶抗原/分子的特异性结合的任何同种型的完整免疫球蛋白或其片段，并且包括例如嵌合的、人源化的、完全人的和双特异性的抗体。“抗体”是如本文定义的抗原结合分子的种类。完整的抗体通常将包含至少两条全长重链和两条全长轻链，但在某些情况下可包含较少的链，例如天然存在于骆驼科动物中的抗体，其仅可包含重链。抗体可以仅源自单一来源，或者可以是嵌合的，即，抗体的不同部分可以源自两种不同的抗体，如下文进一步所述。抗原结合分子、抗体或结合片段可以在杂交瘤中，通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学切割而产生。除非另有说明，除包含两条全长重链和两条全长轻链的抗体外，术语“抗体”还包括其衍生物、变体、片段和突变蛋白，其实例在下文描述。此外，除非明确排除，否则抗体包括单克隆抗体、双特异性抗体、微型抗体、域抗体、合成抗体(在本文中有时称为“抗体模拟物”)、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、抗体融合物(在本文中有时称为“抗体缀合物”)及其片段。
可变区通常表现出由3个高变区(即“CDR”)连接的相对保守的框架区(FR)的相同总体结构。来自每对的两条链的CDR通常通过框架区对齐，这可以使得能够结合特定的表位。从N端到C端，轻链和重链可变区两者通常包含域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。按照惯例，重链中的CDR区通常称为HC CDR1、CDR2和CDR3。轻链中的CDR区通常称为LCCDR1、CDR2和CDR3。对每个域的氨基酸分配通常根据Kabat、Chothia或AbM的定义。
术语“Kabat编号”和类似术语在本领域中是公认的，并且是指对抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，可以根据Kabat编号系统确定抗体的CDR(参见，例如Kabat EA&Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci 190:382-391and Kabat EA et al.,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH PublicationNo.91-3242)。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于第31至35位氨基酸(它们任选地可包含35位之后的一个或两个额外的氨基酸(在Kabat编号方案中称为35A和35B))(CDR1)、第50至65位氨基酸(CDR2)和第95至102位氨基酸(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。在一个具体的实施方案中，已经根据Kabat编号方案确定了本文描述的抗体的CDR。
在某些方面，可以根据Chothia编号方案确定抗体的CDR，所述Chothia编号方案指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如Chothia C&Lesk AM,(1987),J Mol Biol 196:901-917；Al-Lazikani B et al.,(1997)J Mol Biol 273:927-948；Chothia C et al.,(1992)J Mol Biol 227:799-817；Tramontano A et al.,(1990)J Mol Biol 215(1):175-82；和美国专利No.7,709,226)。通常，当使用Kabat编号约定时，Chothia CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，Chothia CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且Chothia CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102，而Chothia CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34，ChothiaCDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56，并且Chothia CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97。使用Kabat编号约定编号时Chothia CDR-HI环的末端在H32和H34之间随环长度而变化(这是因为Kabat编号方案将插入置于H35A和H35B处；若不存在35A和35B，则环在32处结束；若仅存在35A，则环在33处结束；若存在35A和35B两者，则环在34处结束)。
在一个具体的实施方案中，已经根据Chothia编号方案确定了本文描述的抗体的CDR。
通常使用多个CDR的定义：Kabat编号、Chothia编号、AbM编号或接触编号。AbM定义是Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的两者之间的折衷方案。接触定义基于对可用复杂晶体结构的分析。
表2：CDR编号
Figure BDA0002413049300000381
如本文所用，术语“重链”在提及抗体使用时可以指基于恒定域的氨基酸序列的任何不同类型，例如，alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)，它们分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG的亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
如本文所用，术语“轻链”在提及抗体使用时可以指基于恒定域的氨基酸序列的任何不同的类型，例如kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域公知的。在具体的实施方案中，轻链是人轻链。
术语“可变区”或“可变域”是指抗体的轻链和/或重链的一部分，通常包含重链中的氨基端的约120-130个氨基酸和轻链中约100-110个氨基端氨基酸。抗体的可变区通常确定特定抗体对其靶标的特异性。
可变性未在抗体或抗原结合分子的可变域中均匀分布；它集中在重链和轻链可变区中每个的亚域中。如本文进一步描述的，这些亚域称为“高变区”或“互补决定区”(CDR)。可变域的更保守的(即，非高变的)部分称为“框架”区(FRM或FR)，并在三维空间中为六个CDR提供了支架以形成抗原结合表面。天然存在的重链和轻链的可变域各自包含四个FRM区域(FR1、FR2、FR3和FR4)，主要采用β-片层结构，它们由三个高变区连接，所述高变区形成连接β-片层，在某些情况下形成β-片层的一部分的环。每条链中的高变区通过FRM紧密结合在一起，并且与另一条链中的高变区一起促成形成抗原结合位点(参见Kabat等人，在本文中进一步描述)。
通常，CDR形成可以分类为规范结构的环结构。术语“规范结构”是指抗原结合(CDR)环所采用的主链构象。从比较的结构研究中，已经发现六个抗原结合环中的五个仅具有有限的可用构象库。每个规范结构可以通过多肽主链的扭转角来表征。因此，尽管在环的大部分部分中氨基酸序列变异性高，但抗体之间的对应环可以具有非常相似的三维结构(Chothia and Lesk,J.MoI.Biol.,1987,196:901；Chothia et al.,Nature,1989,342:877；Martin and Thornton,J.MoI.Biol,1996,263:800)。此外，所采用的环结构与其周围的氨基酸序列之间存在关系。特定规范类别的构象由环的长度和位于环内以及保守框架内(即环外)关键位置的氨基酸残基决定。因此，可以基于这些关键氨基酸残基的存在来进行特定规范类别的分配。
术语“规范结构”还可以包括关于抗体的线性序列的考虑因素，例如，如Kabat(Kabat等人，本文)所分类的。Kabat编号方案(系统)是用于以一致的方式对抗体可变域的氨基酸残基进行编号的广泛采用的标准，并且是在本发明中应用的优选方案，如本文其他地方所述。还可以使用其他结构考虑因素来确定抗体的规范结构。例如，可以通过Chothia等人的编号系统描述那些未完全由Kabat编号反映的差异和/或通过其他技术(例如，晶体学和二维或三维计算模型)揭示。因此，可以将给定的抗体序列置于规范类别中，该规范类别特别允许鉴定合适的底架序列(例如，基于在文库中包括多种规范结构的需求)。文献中描述了抗体氨基酸序列的Kabat编号和如Chothia等人(本文)所述的结构考虑及其对解释抗体结构的规范方面的意义。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是本领域公知的。有关抗体结构的综述，参见Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory,Harlow等人编,1988。
轻链的CDR3，以及特别是重链的CDR3可以构成轻链和重链可变区内的抗原结合中最重要的决定因素。在一些抗体构建体中，重链CDR3似乎构成抗原和抗体之间的主要接触区域。单独改变CDR3的体外选择方案可用于改变抗体的结合特性或确定哪些残基有助于抗原的结合。因此，CDR3通常是抗体结合位点内分子多样性的最大来源。例如，H3可以短至两个氨基酸残基或大于26个氨基酸。
如本文所用，术语“恒定区”和“恒定域”是可互换的，并且具有本领域中共同的含义。恒定区是抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但是可以表现出各种效应器功能，例如与Fc受体的相互作用。相对于免疫球蛋白可变域，免疫球蛋白分子的恒定区通常具有更保守的氨基酸序列。
“Fc”区包含两个包含抗体的CH1和CH2域的重链片段。两个重链片段通过两个或多个二硫键以及通过CH3域的疏水相互作用保持在一起。
“Fab片段”包含一条轻链和一条重链的CH1和可变区。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fab'”片段”包含一条轻链和一条重链中含有VH域和CH1域及还有CH1和CH2域之间的区域的部分，因此可以在两个Fab’片段的两个重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)2分子。“F(ab’)2片段”含有两条轻链和两条含有CH1和CH2域之间恒定区的部分的重链，因此在两条重链之间形成链间二硫键。因此，F(ab’)2片段由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个Fab’片段构成。
“Fv区”包括来自重链和轻链两者的可变区，但是缺乏恒定区。
“二价抗原结合分子”包含两个抗原结合位点。在某些情况下，两个结合位点具有相同的抗原特异性。二价抗原结合分子可以是双特异性的。“多特异性抗原结合分子”是靶向超过一个抗原或表位的分子。“双特异性”、“双重特异性”或“双功能性”抗原结合分子是分别具有两个不同抗原结合位点的杂合抗原结合分子或抗体。双特异性抗原结合分子的两个结合位点将结合两个不同的表位，它们可以位于相同或不同的蛋白质靶标上。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示。亲和力可以以本领域中已知的多种方式来测量和/或表示，包括但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD从k解离/k缔合的商计算，而KA从k缔合/k解离的商计算。K缔合是指例如抗体与抗原的缔合速率常数，而k解离是指例如抗体与抗原的解离。K缔合和k解离可以通过本领域普通技术人员已知的技术，例如
Figure BDA0002413049300000411
或KinExA来确定。
术语“中和”分别是指与配体结合并防止或降低该配体的生物学效应的抗原结合分子、scFv或抗体。这可以例如通过直接封闭配体上的结合位点或通过与配体结合并通过间接手段(例如配体中的结构或能量改变)改变配体的结合能力来完成。在一些实施方案中，该术语还可以表示防止与其结合的蛋白质进行生物学功能的抗原结合分子。
当在竞争相同表位的抗原结合分子的上下文中使用时，术语“竞争”是指抗原结合分子之间的竞争，如通过如下的测定法测定，在所述测定法中，测试的抗原结合分子(例如抗体或其免疫功能片段)防止或抑制(例如减少)参照抗原结合分子与抗原的特异性结合。多种类型的竞争性结合测定法可用于确定一个抗原结合分子是否与另一种竞争，例如：固相直接或间接放射免疫测定法(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定法(EIA)、三明治式竞争测定法(Stahli et al.,1983,Methods in Enzymology 9:242-253)；固相直接生物素-亲合素EIA(Kirkland et al.,1986,J.Immunol.137:3614-3619)、固相直接标记测定法、固相直接标记三明治式测定法(Harlow and Lane,1988,Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用1-125标记物的固相直接标记RIA(Morel et al.,1988,Molec.Immunol.25:7-15)；固相直接生物素-亲合素EIA(Cheung,et al.,1990,Virology176:546-552)；直接标记的RIA(Moldenhauer et al.,1990,Scand.J.Immunol.32:77-82)。
如本文所用，术语“表位”是指抗体可以特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以例如一起来自一个或多个多肽的两个或多个非连续区域(构象性、非线性、不连续或非连续的表位)。在某些实施方案中，可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定法、氢/氘交换偶联质谱法(例如液相层析电喷雾质谱法)、基于阵列的寡肽扫描测定法和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)来确定抗体结合的表位。对于X射线晶体学，可以使用本领域任何已知方法来完成结晶(例如GiegéR.et al.,(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303)。抗体：抗原晶体可以使用公知的X射线衍射技术来研究，并且可以使用计算机软件改进，所述计算机软件诸如X-PLOR(YaleUniversity,1992,Molecular Simulations,Inc.分配；参见例如Meth Enzymol(1985)volumes 114&115,Wyckoff HW等人.编；U.S.2004/0014194),和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)MethEnzymol 276A:361-423,Carter CW编；Roversi P等人,(2000)Acta Crystallogr D BiolCrystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用本领域技术人员已知的任何方法来完成。关于诱变技术的描述，包括丙氨酸扫描诱变技术，参见例如Champe M et al.,(1995)J Biol Chem 270:1388-1394和Cunningham BC&Wells JA(1989)Science 244:1081-1085。
术语“遗传工程化”或“工程化”是指修饰细胞基因组的方法，包括但不限于删除编码或非编码区或其一部分或插入编码区或其一部分。在一些实施方案中，修饰的细胞是可以自患者或供体获得的淋巴细胞，例如T细胞。可以修饰细胞以表达掺入细胞基因组中的外源构建体，例如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。
“免疫应答”是指免疫系统的细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞和嗜中性粒细胞)和由这些细胞或肝中的任一种产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，其导致选择性靶向、结合、损害、破坏和/或从脊椎动物身体消除侵入病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌性或其它异常细胞、或者在自身免疫或病理学炎症的情况下正常人细胞或组织。
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修改免疫应答的方法来治疗罹患、或有风险染上疾病或者遭受疾病复发的受试者。免疫疗法的实例包括但不限于T细胞疗法。T细胞疗法可以包括过继性T细胞疗法、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT)和同种异体T细胞移植。然而，本领域技术人员将理解，本文公开的调理方法将增强任何移植的T细胞疗法的有效性。T细胞疗法的实例记载于美国专利公开号2014/0154228和2002/0006409、美国专利号5,728,388和国际公开号WO 2008/081035。
免疫疗法的T细胞可以来自本领域已知的任何来源。例如，可以在体外从造血干细胞群体中分化T细胞，或者可以从受试者获得T细胞。T细胞可以获自例如外周血单个核细胞(PBMC)、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。另外，T细胞可以源自本领域可用的一种或多种T细胞系。T细胞也可以使用熟练技术人员已知的许多技术，例如FICOLLTM分离和/或单采血液成分术，从受试者收集的血液单元中获得。在美国专利公开号2013/0287748(其通过引用整体并入本文)中公开分离用于T细胞疗法的T细胞的其他方法。
术语“工程化自体细胞疗法”，可以缩写为“eACTTM”，也称为过继性细胞转移，是收集患者自身的T细胞并随后进行遗传改变以识别和靶向一种或多种特定肿瘤细胞或恶性的细胞表面上表达的一种或多种抗原的过程。可以工程化改造T细胞以表达例如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。将CAR阳性(+)T细胞工程化改造为表达与胞内信号传导部分连接的对特定肿瘤抗原具有特异性的胞外单链可变片段(scFv)，所述胞内信号传导部分包含至少一个共刺激域和至少一个活化域。共刺激域可以源自(或对应于)例如CD28，而活化域可以源自(或对应于)例如CD3-zeta。在某些实施方案中，CAR设计为具有两个、三个、四个或更多个共刺激域。
术语“自体的”是指随后接受其再导入的源自同一个体的任何材料。例如，本文所述的工程化自体细胞疗法(eACTTM)方法涉及从患者收集淋巴细胞，然后将所述淋巴细胞工程化改造以表达例如CAR构建体，然后施用回到同一患者。
术语“同种异体的”是指随后导入相同物种的另一个个体的源自一个个体的任何材料，例如同种异体T细胞移植。
标准技术可以用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如，电穿孔，脂转染)。酶促反应和纯化技术可以根据制造商的说明书或如本领域通常完成或如本文所述进行。前述技术和规程通常可以根据本领域公知的常规方法并且如本说明书通篇所引用和讨论的各种一般性和更具体的参考文献中所述进行。参见例如Sambrook等人,MolecularCloning:A Laboratory Manual(第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.(1989))，其通过引用并入本文用于任何目的。
包含、包括和/或复数形式各自是开放式的，并且包括列出的部分，并且可以包括未列出的其他部分。和/或是开放式的，并且包括一个或多个列出的部分以及列出的部分的组合。
应当理解，本文的描述仅是示例性和说明性的，并且不限制要求保护的本发明。在本申请中，单数的使用包括复数，除非另有明确说明。
本申请中引用的所有文件或文件的一部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和专着在此明确通过引用完整并入用于任何目的。如根据本公开所使用的，除非另外指出，否则以下术语应理解为具有以下含义：
在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用表示“和/或”。此外，术语“包括”以及其他形式的使用不是限制性的。另外，除非另外特别说明，否则诸如“元件”或“组件”的术语涵盖包含一个单元的元件和组件以及包含超过一个亚单元的元件和组件。
本文中对参考文献的引用不应解释为承认此类参考文献是本发明的现有技术。就通过引用并入的参考文献中提供的任何定义或术语与本文提供的术语和讨论不同而言，以本术语和定义为准。
本领域技术人员将意识到，在不脱离本发明的精神或基本特征的情况下，主题可以以其他特定形式来体现。因此，前述实施方案在所有方面都应认为是说明性的，而不是限制本文所述的主题。
以下序列将进一步举例说明本发明：
CD28T DNA胞外、跨膜、胞内
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC(SEQ ID NO.1)
CD28T胞外、跨膜、胞内AA
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO.2)
CD28T DNA-胞外
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCA(SEQ ID NO.3)
CD28T AA-胞外
LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP(SEQ ID NO.4)
CD28 DNA跨膜域
TTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTT(SEQ ID NO.5)
CD28 AA跨膜域
FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWV(SEQ ID NO.6)
CD28 DNA胞内域
AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC(SEQ ID NO.7)
CD28 AA胞内域
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO.8)
CD3 zeta DNA
AGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.9)
CD3 zeta AA
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.10)
CD28 DNA
ATTGAGGTGATGTATCCACCGCCTTACCTGGATAACGAAAAGAGTAACGGTACCATCATTCACGTGAAAGGTAAACACCTGTGTCCTTCTCCCCTCTTCCCCGGGCCATCAAAGCCC(SEQ ID NO.11)
CD28 AA
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP(SEQ ID NO.12)
CD8 DNA胞外和跨膜域
GCTGCAGCATTGAGCAACTCAATAATGTATTTTAGTCACTTTGTACCAGTGTTCTTGCCGGCTAAGCCTACTACCACACCCGCTCCACGGCCACCTACCCCAGCTCCTACCATCGCTTCACAGCCTCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCTTGCCGACCGGCCGCAGGGGGCGCTGTTCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGATATCTATATCTGGGCACCCCTGGCCGGAACCTGCGGCGTACTCCTGCTGTCCCTGGTCATCACGCTCTATTGTAATCACAGGAAC(SEQ IDNO.13)
CD8 AA胞外和跨膜域
AAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN(SEQ ID NO.14)
克隆24C1 HC DNA
CAGGTGCAGCTGCAGGAATCCGGACCGGGGCTGGTGAAGCCCAGCGAGACTCTGAGTCTCACGTGTACAGTTTCTGGAGGTAGCATTAGCTCCTACTATTGGTCATGGATAAGGCAGCCCCCCGGGAAGGGATTGGAATGGATCGGCTATATTTACTACAGTGGGAGCACCAATTACAACCCCTCACTGAAGTCTAGAGTTACAATCAGCGTTGACACCTCAAAGAATCAGTTCAGTTTGAAATTGTCTAGCGTCACAGCAGCTGATACAGCCGTCTATTATTGTGTTTCTCTGGTCTATTGCGGTGGGGATTGTTACAGTGGCTTTGACTATTGGGGGCAGGGTACTCTGGTTACAGTTTCTTCC(SEQ IDNO.15)
克隆24C1 HC AA(CDR加下划线)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.16)
克隆24C1 HC AA CDR1:GGSISSY(SEQ ID NO.17)
克隆24C1 HC AA CDR2:YYSGS(SEQ ID NO.18)
克隆24C1 HC AA CDR3:LVYCGGDCYS GFDY(SEQ ID NO.19)
克隆24C1 LC DNA
GACATCCAGTTGACACAGAGCCCGAGTTCCTTGTCCGCCTCCGTCGGGGATAGAGTGTCATTTACCTGTCAGGCCTCTCAGGATATTAATAACTTTCTGAATTGGTATCAGCAAAAGCCCGGAAAGGCACCCAAGCTGTTGATTTACGACGCCAGTAACCTGGAGACAGGCGTGCCCTCCCGGTTTAGTGGTAGCGGAAGCGGTACGGATTTTACCTTTACTATCAGCTCTCTCCAACCCGAAGACATTGCAACCTACTATTGTCAACAATATGGAAACCTGCCTTTTACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGG(SEQ ID NO.20)
克隆24C1 LC AA(CDR加下划线)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO.21)
克隆24C1 LC CDR1 AA:QASQDINNFLN(SEQ ID NO.22)
克隆24C1 LC CDR2 AA:DASNLET(SEQ ID NO.23)
克隆24C1 LC CDR3 AA:QQYGNLPFT(SEQ ID NO.24)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTCCAACTGCAAGAAAGCGGACCCGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACACTTAGTCTGACGTGCACGGTCAGTGGCGGCTCCATCTCCTCCTATTATTGGTCATGGATACGACAACCCCCAGGTAAGGGCCTGGAATGGATTGGCTATATCTACTATTCAGGAAGCACGAACTACAATCCCAGCCTGAAGTCCCGAGTGACAATTTCAGTAGATACCAGTAAAAACCAGTTCAGTCTTAAACTGTCAAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCTGTGTATTACTGCGTCTCACTGGTGTATTGTGGAGGGGATTGTTATAGCGGGTTCGATTATTGGGGACAGGGAACCCTGGTGACTGTATCTTCCGGCGGCGGCGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGCGGTGGGGGTTCCGATATTCAACTGACACAATCCCCCAGCTCACTCAGCGCCAGCGTGGGGGACAGGGTTAGCTTTACCTGTCAAGCCTCTCAGGATATAAATAACTTTCTGAACTGGTATCAACAGAAGCCTGGGAAGGCGCCCAAACTCCTGATCTATGATGCGTCCAACCTGGAAACTGGCGTGCCTTCACGCTTTAGCGGCTCTGGCAGTGGTACAGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTTCAGCCGGAGGACATCGCCACATATTACTGTCAACAGTACGGAAACTTGCCCTTTACTTTTGGAGGCGGCACCAAAGTTGAAATCAAAAGGGCCGCTGCCCTGGATAACGAAAAGAGCAATGGGACTATAATACATGTTAAAGGAAAACACCTGTGTCCATCTCCCCTGTTCCCTGGACCGTCAAAGCCATTTTGGGTGCTCGTGGTTGTCGGTGGCGTTCTCGCCTGTTATAGCTTGCTGGTGACAGTAGCCTTCATTATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.25)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000461
Figure BDA0002413049300000471
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTCCAACTGCAAGAAAGCGGACCCGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACACTTAGTCTGACGTGCACGGTCAGTGGCGGCTCCATCTCCTCCTATTATTGGTCATGGATACGACAACCCCCAGGTAAGGGCCTGGAATGGATTGGCTATATCTACTATTCAGGAAGCACGAACTACAATCCCAGCCTGAAGTCCCGAGTGACAATTTCAGTAGATACCAGTAAAAACCAGTTCAGTCTTAAACTGTCAAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCTGTGTATTACTGCGTCTCACTGGTGTATTGTGGAGGGGATTGTTATAGCGGGTTCGATTATTGGGGACAGGGAACCCTGGTGACTGTATCTTCCGGCGGCGGCGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGCGGTGGGGGTTCCGATATTCAACTGACACAATCCCCCAGCTCACTCAGCGCCAGCGTGGGGGACAGGGTTAGCTTTACCTGTCAAGCCTCTCAGGATATAAATAACTTTCTGAACTGGTATCAACAGAAGCCTGGGAAGGCGCCCAAACTCCTGATCTATGATGCGTCCAACCTGGAAACTGGCGTGCCTTCACGCTTTAGCGGCTCTGGCAGTGGTACAGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTTCAGCCGGAGGACATCGCCACATATTACTGTCAACAGTACGGAAACTTGCCCTTTACTTTTGGAGGCGGCACCAAAGTTGAAATCAAAAGGGCCGCTGCCCTGGATAACGAAAAGAGCAATGGGACTATAATACATGTTAAAGGAAAACACCTGTGTCCATCTCCCCTGTTCCCTGGACCGTCAAAGCCATTTTGGGTGCTCGTGGTTGTCGGTGGCGTTCTCGCCTGTTATAGCTTGCTGGTGACAGTAGCCTTCATTATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.27)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.28)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGCTGCAGGAATCCGGACCGGGGCTGGTGAAGCCCAGCGAGACTCTGAGTCTCACGTGTACAGTTTCTGGAGGTAGCATTAGCTCCTACTATTGGTCATGGATAAGGCAGCCCCCCGGGAAGGGATTGGAATGGATCGGCTATATTTACTACAGTGGGAGCACCAATTACAACCCCTCACTGAAGTCTAGAGTTACAATCAGCGTTGACACCTCAAAGAATCAGTTCAGTTTGAAATTGTCTAGCGTCACAGCAGCTGATACAGCCGTCTATTATTGTGTTTCTCTGGTCTATTGCGGTGGGGATTGTTACAGTGGCTTTGACTATTGGGGGCAGGGTACTCTGGTTACAGTTTCTTCCGGGGGGGGAGGCTCTGGGGGCGGAGGCTCAGGTGGTGGAGGCAGCGACATCCAGTTGACACAGAGCCCGAGTTCCTTGTCCGCCTCCGTCGGGGATAGAGTGTCATTTACCTGTCAGGCCTCTCAGGATATTAATAACTTTCTGAATTGGTATCAGCAAAAGCCCGGAAAGGCACCCAAGCTGTTGATTTACGACGCCAGTAACCTGGAGACAGGCGTGCCCTCCCGGTTTAGTGGTAGCGGAAGCGGTACGGATTTTACCTTTACTATCAGCTCTCTCCAACCCGAAGACATTGCAACCTACTATTGTCAACAATATGGAAACCTGCCTTTTACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGGGCGGCAGCTATTGAGGTGATGTATCCACCGCCTTACCTGGATAACGAAAAGAGTAACGGTACCATCATTCACGTGAAAGGTAAACACCTGTGTCCTTCTCCCCTCTTCCCCGGGCCATCAAAGCCCTTCTGGGTTCTTGTGGTCGTGGGAGGCGTGCTTGCTTGTTATTCTCTGCTCGTTACCGTGGCGTTTATCATTTTTTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.29)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000481
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGCTGCAGGAATCCGGACCGGGGCTGGTGAAGCCCAGCGAGACTCTGAGTCTCACGTGTACAGTTTCTGGAGGTAGCATTAGCTCCTACTATTGGTCATGGATAAGGCAGCCCCCCGGGAAGGGATTGGAATGGATCGGCTATATTTACTACAGTGGGAGCACCAATTACAACCCCTCACTGAAGTCTAGAGTTACAATCAGCGTTGACACCTCAAAGAATCAGTTCAGTTTGAAATTGTCTAGCGTCACAGCAGCTGATACAGCCGTCTATTATTGTGTTTCTCTGGTCTATTGCGGTGGGGATTGTTACAGTGGCTTTGACTATTGGGGGCAGGGTACTCTGGTTACAGTTTCTTCCGGGGGGGGAGGCTCTGGGGGCGGAGGCTCAGGTGGTGGAGGCAGCGACATCCAGTTGACACAGAGCCCGAGTTCCTTGTCCGCCTCCGTCGGGGATAGAGTGTCATTTACCTGTCAGGCCTCTCAGGATATTAATAACTTTCTGAATTGGTATCAGCAAAAGCCCGGAAAGGCACCCAAGCTGTTGATTTACGACGCCAGTAACCTGGAGACAGGCGTGCCCTCCCGGTTTAGTGGTAGCGGAAGCGGTACGGATTTTACCTTTACTATCAGCTCTCTCCAACCCGAAGACATTGCAACCTACTATTGTCAACAATATGGAAACCTGCCTTTTACATTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGGGCGGCAGCTATTGAGGTGATGTATCCACCGCCTTACCTGGATAACGAAAAGAGTAACGGTACCATCATTCACGTGAAAGGTAAACACCTGTGTCCTTCTCCCCTCTTCCCCGGGCCATCAAAGCCCTTCTGGGTTCTTGTGGTCGTGGGAGGCGTGCTTGCTTGTTATTCTCTGCTCGTTACCGTGGCGTTTATCATTTTTTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.31)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.32)
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAATTGCAAGAGTCCGGCCCCGGACTCGTTAAACCCAGTGAGACGCTTAGCCTGACCTGTACCGTCTCAGGGGGCAGCATCTCCTCTTATTACTGGAGCTGGATCAGGCAGCCTCCAGGAAAAGGCCTTGAATGGATTGGGTACATCTACTACTCTGGCTCAACAAATTATAATCCATCCCTGAAGTCCCGCGTGACTATCTCTGTGGACACCAGCAAGAATCAGTTTTCACTGAAGTTGTCTAGTGTTACCGCGGCCGACACCGCCGTATACTACTGTGTGTCTCTTGTGTACTGTGGCGGCGACTGCTATTCCGGGTTCGACTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTAACCGTGTCCTCAGGCGGCGGCGGGTCAGGAGGAGGCGGCAGTGGAGGTGGCGGCTCCGACATCCAGCTGACACAATCACCATCTTCCCTTTCAGCTTCAGTCGGGGACAGAGTGTCCTTCACATGCCAGGCCAGCCAGGATATCAATAACTTCCTGAACTGGTACCAACAGAAACCCGGAAAGGCTCCAAAGCTCCTGATCTATGATGCTTCCAACCTGGAGACCGGCGTGCCCTCCAGGTTCAGTGGTTCAGGATCAGGCACTGACTTTACGTTCACCATATCCAGTCTTCAGCCCGAAGACATTGCAACCTATTACTGCCAACAATACGGGAACCTTCCCTTTACATTCGGAGGCGGCACCAAGGTGGAAATCAAAAGGGCTGCAGCATTGAGCAACTCAATAATGTATTTTAGTCACTTTGTACCAGTGTTCTTGCCGGCTAAGCCTACTACCACACCCGCTCCACGGCCACCTACCCCAGCTCCTACCATCGCTTCACAGCCTCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCTTGCCGACCGGCCGCAGGGGGCGCTGTTCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGATATCTATATCTGGGCACCCCTGGCCGGAACCTGCGGCGTACTCCTGCTGTCCCTGGTCATCACGCTCTATTGTAATCACAGGAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.33)
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000491
Figure BDA0002413049300000501
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAATTGCAAGAGTCCGGCCCCGGACTCGTTAAACCCAGTGAGACGCTTAGCCTGACCTGTACCGTCTCAGGGGGCAGCATCTCCTCTTATTACTGGAGCTGGATCAGGCAGCCTCCAGGAAAAGGCCTTGAATGGATTGGGTACATCTACTACTCTGGCTCAACAAATTATAATCCATCCCTGAAGTCCCGCGTGACTATCTCTGTGGACACCAGCAAGAATCAGTTTTCACTGAAGTTGTCTAGTGTTACCGCGGCCGACACCGCCGTATACTACTGTGTGTCTCTTGTGTACTGTGGCGGCGACTGCTATTCCGGGTTCGACTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTAACCGTGTCCTCAGGCGGCGGCGGGTCAGGAGGAGGCGGCAGTGGAGGTGGCGGCTCCGACATCCAGCTGACACAATCACCATCTTCCCTTTCAGCTTCAGTCGGGGACAGAGTGTCCTTCACATGCCAGGCCAGCCAGGATATCAATAACTTCCTGAACTGGTACCAACAGAAACCCGGAAAGGCTCCAAAGCTCCTGATCTATGATGCTTCCAACCTGGAGACCGGCGTGCCCTCCAGGTTCAGTGGTTCAGGATCAGGCACTGACTTTACGTTCACCATATCCAGTCTTCAGCCCGAAGACATTGCAACCTATTACTGCCAACAATACGGGAACCTTCCCTTTACATTCGGAGGCGGCACCAAGGTGGAAATCAAAAGGGCTGCAGCATTGAGCAACTCAATAATGTATTTTAGTCACTTTGTACCAGTGTTCTTGCCGGCTAAGCCTACTACCACACCCGCTCCACGGCCACCTACCCCAGCTCCTACCATCGCTTCACAGCCTCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCTTGCCGACCGGCCGCAGGGGGCGCTGTTCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGATATCTATATCTGGGCACCCCTGGCCGGAACCTGCGGCGTACTCCTGCTGTCCCTGGTCATCACGCTCTATTGTAATCACAGGAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.35)克隆24C1 CD8 CD3zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK DTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.36)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGATATCCAGCTCACGCAATCCCCCTCAAGCTTGAGTGCCTCCGTGGGCGACCGGGTGTCCTTCACATGTCAGGCAAGCCAAGACATAAATAATTTCCTGAATTGGTACCAACAAAAACCCGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTTATGATGCCTCCAATCTGGAGACCGGGGTCCCTTCTAGATTCAGCGGAAGTGGCAGCGGCACAGACTTTACATTTACTATCTCTTCTCTGCAACCAGAGGACATCGCCACATACTATTGCCAGCAATACGGCAATCTGCCCTTCACCTTCGGAGGCGGAACCAAGGTAGAAATTAAAAGGGGCGGTGGAGGCTCCGGAGGGGGGGGCTCTGGCGGAGGGGGCTCCCAAGTACAATTGCAGGAGTCAGGGCCTGGACTCGTGAAGCCTTCAGAAACTTTGTCACTGACATGTACAGTGTCCGGCGGAAGCATTTCCAGTTACTATTGGTCCTGGATTAGACAGCCACCCGGCAAAGGACTGGAATGGATTGGATATATCTACTACTCTGGATCTACAAACTATAATCCCAGCCTCAAATCCAGGGTCACTATTAGTGTGGATACATCAAAGAATCAGTTCTCCTTGAAGCTGAGCTCAGTCACTGCTGCCGACACCGCAGTGTACTATTGTGTGAGCCTGGTCTACTGCGGCGGAGATTGCTACAGCGGTTTCGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTTACCGTTAGTTCCGCGGCTGCTCTTGATAACGAGAAGTCCAACGGTACGATTATCCACGTTAAGGGTAAGCACCTTTGCCCTAGCCCGCTGTTCCCAGGCCCCAGTAAGCCCTTTTGGGTCCTCGTTGTGGTAGGTGGGGTACTCGCCTGCTACTCCCTGCTCGTCACTGTCGCATTCATCATCTTCTGGGTCAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.37)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000511
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GATATCCAGCTCACGCAATCCCCCTCAAGCTTGAGTGCCTCCGTGGGCGACCGGGTGTCCTTCACATGTCAGGCAAGCCAAGACATAAATAATTTCCTGAATTGGTACCAACAAAAACCCGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTTATGATGCCTCCAATCTGGAGACCGGGGTCCCTTCTAGATTCAGCGGAAGTGGCAGCGGCACAGACTTTACATTTACTATCTCTTCTCTGCAACCAGAGGACATCGCCACATACTATTGCCAGCAATACGGCAATCTGCCCTTCACCTTCGGAGGCGGAACCAAGGTAGAAATTAAAAGGGGCGGTGGAGGCTCCGGAGGGGGGGGCTCTGGCGGAGGGGGCTCCCAAGTACAATTGCAGGAGTCAGGGCCTGGACTCGTGAAGCCTTCAGAAACTTTGTCACTGACATGTACAGTGTCCGGCGGAAGCATTTCCAGTTACTATTGGTCCTGGATTAGACAGCCACCCGGCAAAGGACTGGAATGGATTGGATATATCTACTACTCTGGATCTACAAACTATAATCCCAGCCTCAAATCCAGGGTCACTATTAGTGTGGATACATCAAAGAATCAGTTCTCCTTGAAGCTGAGCTCAGTCACTGCTGCCGACACCGCAGTGTACTATTGTGTGAGCCTGGTCTACTGCGGCGGAGATTGCTACAGCGGTTTCGATTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTTACCGTTAGTTCCGCGGCTGCTCTTGATAACGAGAAGTCCAACGGTACGATTATCCACGTTAAGGGTAAGCACCTTTGCCCTAGCCCGCTGTTCCCAGGCCCCAGTAAGCCCTTTTGGGTCCTCGTTGTGGTAGGTGGGGTACTCGCCTGCTACTCCCTGCTCGTCACTGTCGCATTCATCATCTTCTGGGTCAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.39)
克隆24C1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.40)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR DNA AA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGATATCCAGCTGACCCAGTCTCCATCCTCTTTGAGTGCCTCCGTGGGTGACCGCGTCTCTTTCACTTGCCAAGCCAGCCAAGACATCAACAACTTTCTGAATTGGTACCAGCAGAAACCAGGCAAAGCACCAAAGCTCCTCATCTACGACGCCTCCAACCTGGAAACCGGGGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGGAGCGGTTCTGGCACGGATTTTACGTTCACCATCTCCTCTCTGCAGCCCGAGGATATAGCTACTTATTACTGTCAGCAGTACGGGAATCTGCCATTTACTTTTGGGGGTGGAACTAAGGTGGAAATCAAAAGGGGCGGCGGGGGAAGCGGGGGCGGGGGCTCAGGTGGCGGAGGGAGCCAGGTGCAACTCCAGGAAAGTGGCCCAGGATTGGTGAAGCCCAGCGAGACCCTTTCCCTTACTTGTACTGTTAGCGGAGGCAGCATAAGCAGCTACTATTGGTCCTGGATCAGACAGCCACCAGGGAAAGGGCTTGAATGGATTGGCTACATTTACTATTCCGGGTCCACCAACTACAACCCATCCCTCAAGTCCCGCGTGACAATTTCCGTCGACACAAGCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTTAGTAGCGTCACTGCTGCAGATACAGCAGTGTACTATTGTGTCAGCCTTGTCTACTGTGGCGGCGACTGCTACAGTGGCTTTGATTACTGGGGACAGGGCACGCTCGTGACAGTGTCCAGCGCTGCGGCTATCGAGGTAATGTATCCGCCACCGTATCTGGACAACGAGAAGTCTAATGGGACAATCATTCACGTGAAGGGGAAGCACCTGTGTCCATCCCCCCTGTTTCCGGGTCCCAGTAAACCCTTCTGGGTGCTTGTTGTCGTTGGCGGGGTGCTGGCCTGCTATTCCCTGCTGGTGACCGTCGCGTTTATTATTTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.41)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000521
Figure BDA0002413049300000531
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GATATCCAGCTGACCCAGTCTCCATCCTCTTTGAGTGCCTCCGTGGGTGACCGCGTCTCTTTCACTTGCCAAGCCAGCCAAGACATCAACAACTTTCTGAATTGGTACCAGCAGAAACCAGGCAAAGCACCAAAGCTCCTCATCTACGACGCCTCCAACCTGGAAACCGGGGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGGAGCGGTTCTGGCACGGATTTTACGTTCACCATCTCCTCTCTGCAGCCCGAGGATATAGCTACTTATTACTGTCAGCAGTACGGGAATCTGCCATTTACTTTTGGGGGTGGAACTAAGGTGGAAATCAAAAGGGGCGGCGGGGGAAGCGGGGGCGGGGGCTCAGGTGGCGGAGGGAGCCAGGTGCAACTCCAGGAAAGTGGCCCAGGATTGGTGAAGCCCAGCGAGACCCTTTCCCTTACTTGTACTGTTAGCGGAGGCAGCATAAGCAGCTACTATTGGTCCTGGATCAGACAGCCACCAGGGAAAGGGCTTGAATGGATTGGCTACATTTACTATTCCGGGTCCACCAACTACAACCCATCCCTCAAGTCCCGCGTGACAATTTCCGTCGACACAAGCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAACTTAGTAGCGTCACTGCTGCAGATACAGCAGTGTACTATTGTGTCAGCCTTGTCTACTGTGGCGGCGACTGCTACAGTGGCTTTGATTACTGGGGACAGGGCACGCTCGTGACAGTGTCCAGCGCTGCGGCTATCGAGGTAATGTATCCGCCACCGTATCTGGACAACGAGAAGTCTAATGGGACAATCATTCACGTGAAGGGGAAGCACCTGTGTCCATCCCCCCTGTTTCCGGGTCCCAGTAAACCCTTCTGGGTGCTTGTTGTCGTTGGCGGGGTGCTGGCCTGCTATTCCCTGCTGGTGACCGTCGCGTTTATTATTTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.43)
克隆24C1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.44)
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGACATTCAATTGACCCAGTCCCCTAGCAGTCTCTCAGCAAGTGTGGGAGATAGGGTGTCATTCACCTGTCAGGCTTCACAGGACATCAACAACTTCCTCAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAGGCACCAAAGCTGCTCATATATGACGCTTCAAACCTTGAAACCGGAGTACCTAGCCGCTTCAGCGGAAGCGGATCAGGGACTGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTGCAGCCCGAAGACATCGCCACATACTACTGCCAGCAGTACGGAAACTTGCCTTTTACATTTGGGGGCGGCACCAAAGTGGAGATTAAGCGAGGGGGAGGCGGCTCAGGAGGCGGTGGCTCCGGAGGCGGGGGTTCCCAGGTCCAGCTCCAGGAATCCGGCCCAGGTCTGGTTAAGCCCAGTGAAACTTTGTCCCTCACGTGTACTGTGAGCGGTGGTTCAATCTCCTCATACTATTGGTCTTGGATACGGCAACCTCCTGGAAAGGGCCTCGAGTGGATCGGCTATATCTACTATAGTGGCTCCACTAATTACAACCCTTCCCTCAAGTCCAGAGTCACCATTTCCGTGGACACATCTAAGAACCAGTTCAGTCTGAAGTTGTCCAGCGTTACAGCCGCAGACACAGCCGTTTATTACTGTGTGTCTCTTGTTTACTGCGGGGGAGACTGTTATAGCGGCTTCGATTACTGGGGCCAGGGCACCTTGGTCACAGTCTCTTCCGCGGCCGCCCTCTCTAACAGTATTATGTACTTTTCTCATTTTGTACCCGTGTTCCTTCCCGCTAAGCCAACTACTACCCCGGCCCCACGGCCGCCTACCCCTGCACCCACAATAGCCAGTCAGCCTTTGAGCCTGAGACCTGAGGCTTGTCGGCCGGCTGCTGGGGGTGCAGTGCACACACGAGGTCTTGATTTTGCTTGCGACATATACATCTGGGCCCCTCTGGCCGGGACCTGTGGGGTGCTGCTTCTGAGCTTGGTCATCACGCTCTATTGCAACCATCGCAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.45)
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000541
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GACATTCAATTGACCCAGTCCCCTAGCAGTCTCTCAGCAAGTGTGGGAGATAGGGTGTCATTCACCTGTCAGGCTTCACAGGACATCAACAACTTCCTCAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAGGCACCAAAGCTGCTCATATATGACGCTTCAAACCTTGAAACCGGAGTACCTAGCCGCTTCAGCGGAAGCGGATCAGGGACTGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTGCAGCCCGAAGACATCGCCACATACTACTGCCAGCAGTACGGAAACTTGCCTTTTACATTTGGGGGCGGCACCAAAGTGGAGATTAAGCGAGGGGGAGGCGGCTCAGGAGGCGGTGGCTCCGGAGGCGGGGGTTCCCAGGTCCAGCTCCAGGAATCCGGCCCAGGTCTGGTTAAGCCCAGTGAAACTTTGTCCCTCACGTGTACTGTGAGCGGTGGTTCAATCTCCTCATACTATTGGTCTTGGATACGGCAACCTCCTGGAAAGGGCCTCGAGTGGATCGGCTATATCTACTATAGTGGCTCCACTAATTACAACCCTTCCCTCAAGTCCAGAGTCACCATTTCCGTGGACACATCTAAGAACCAGTTCAGTCTGAAGTTGTCCAGCGTTACAGCCGCAGACACAGCCGTTTATTACTGTGTGTCTCTTGTTTACTGCGGGGGAGACTGTTATAGCGGCTTCGATTACTGGGGCCAGGGCACCTTGGTCACAGTCTCTTCCGCGGCCGCCCTCTCTAACAGTATTATGTACTTTTCTCATTTTGTACCCGTGTTCCTTCCCGCTAAGCCAACTACTACCCCGGCCCCACGGCCGCCTACCCCTGCACCCACAATAGCCAGTCAGCCTTTGAGCCTGAGACCTGAGGCTTGTCGGCCGGCTGCTGGGGGTGCAGTGCACACACGAGGTCTTGATTTTGCTTGCGACATATACATCTGGGCCCCTCTGGCCGGGACCTGTGGGGTGCTGCTTCTGAGCTTGGTCATCACGCTCTATTGCAACCATCGCAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.47)
克隆24C1 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSAAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPR(SEQ ID NO.48)
克隆24C8重链(HC)DNA
CAGGTACAGCTGCAGGAATCTGGGCCCGGACTTGTCAAGCCAAGTCAGACACTTTCTCTTACATGTACCGTGAGCGGCGGAAGTATAAGCAGTGGAGGCTTTTACTGGTCTTGGATACGGCAGCACCCAGGCAAAGGCTTGGAGTGGATTGGATACATTCATCATTCAGGATCTACACACTATAATCCATCCCTTAAGTCCCGGGTCACCATTAGCATTGATACGTCTAAGAATCTGTTCAGTCTCAGGCTGTCCTCCGTCACTGCTGCCGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCTCCTTGGTTTACTGCGGAGGCGACTGTTATAGCGGCTTTGATTATTGGGGGCAGGGGACCCTCGTAACCGTGAGCTCT(SEQ ID NO.49)克隆24C8 AA HC(CDR加下划线)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGFYWSWIRQHPGKGLEWIGYIHHSGSTHYNPSLKSRVTISIDTSKNLFSLRLSSVTAADTAVYYCASLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.50)
克隆24C8 HC CDR1 AA:GGSISSGGF(SEQ ID NO.51)
克隆24C8 HC CDR2 AA:HHSGS(SEQ ID NO.52)
克隆24C8 HC CDR3 AA:LVYCGGDCYS GFDY(SEQ ID NO.53)
克隆24C8轻链(LC)DNA
GATATCCAGCTCACTCAAAGCCCCTCTAGTCTCTCTGCCTCAGTGGGGGATCGGGTCAGTTTTACTTGTCAAGCTTCACAGGATATCAACAACTTCCTTAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGAAAAGCACCCAAGCTGCTCATCTATGATGCCTCAAATTTGGAGACGGGTGTTCCCAGTCGATTCTCTGGGTCAGGGTCCGGGACCGACTTTACGTTTACGATCTCCTCTCTGCAGCCCGAAGACATCGCCACATACTATTGTCAACAGTACGGCAACTTGCCTTTCACATTTGGGGGCGGGACTAAGGTTGAAATCAAGAGG(SEQ ID NO.54)
克隆24C8 LC AA(CDR加下划线)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO.55)
克隆24C8 LC CDR1 AA:QASQDINNFLN(SEQ ID NO.56)
克隆24C8 LC CDR2 AA:DASNLET(SEQ ID NO.57)
克隆24C8 LC CDR3 AA:QQYGNLPFT(SEQ ID NO.58)
克隆24C8 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTACAGCTGCAGGAATCTGGGCCCGGACTTGTCAAGCCAAGTCAGACACTTTCTCTTACATGTACCGTGAGCGGCGGAAGTATAAGCAGTGGAGGCTTTTACTGGTCTTGGATACGGCAGCACCCAGGCAAAGGCTTGGAGTGGATTGGATACATTCATCATTCAGGATCTACACACTATAATCCATCCCTTAAGTCCCGGGTCACCATTAGCATTGATACGTCTAAGAATCTGTTCAGTCTCAGGCTGTCCTCCGTCACTGCTGCCGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCTCCTTGGTTTACTGCGGAGGCGACTGTTATAGCGGCTTTGATTATTGGGGGCAGGGGACCCTCGTAACCGTGAGCTCTGGAGGGGGTGGGAGCGGGGGAGGAGGTTCAGGGGGGGGCGGCTCCGATATCCAGCTCACTCAAAGCCCCTCTAGTCTCTCTGCCTCAGTGGGGGATCGGGTCAGTTTTACTTGTCAAGCTTCACAGGATATCAACAACTTCCTTAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGAAAAGCACCCAAGCTGCTCATCTATGATGCCTCAAATTTGGAGACGGGTGTTCCCAGTCGATTCTCTGGGTCAGGGTCCGGGACCGACTTTACGTTTACGATCTCCTCTCTGCAGCCCGAAGACATCGCCACATACTATTGTCAACAGTACGGCAACTTGCCTTTCACATTTGGGGGCGGGACTAAGGTTGAAATCAAGAGGGCCGCTGCACTGGACAATGAGAAGTCCAACGGCACCATCATCCACGTGAAGGGCAAGCACCTGTGCCCTAGTCCTCTGTTCCCAGGCCCATCCAAACCTTTTTGGGTTCTTGTTGTGGTCGGGGGGGTGCTGGCCTGCTATTCTCTGCTGGTCACGGTGGCCTTCATAATTTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.59)
克隆24C8 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000561
克隆24C8 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTACAGCTGCAGGAATCTGGGCCCGGACTTGTCAAGCCAAGTCAGACACTTTCTCTTACATGTACCGTGAGCGGCGGAAGTATAAGCAGTGGAGGCTTTTACTGGTCTTGGATACGGCAGCACCCAGGCAAAGGCTTGGAGTGGATTGGATACATTCATCATTCAGGATCTACACACTATAATCCATCCCTTAAGTCCCGGGTCACCATTAGCATTGATACGTCTAAGAATCTGTTCAGTCTCAGGCTGTCCTCCGTCACTGCTGCCGACACAGCCGTGTACTACTGCGCCTCCTTGGTTTACTGCGGAGGCGACTGTTATAGCGGCTTTGATTATTGGGGGCAGGGGACCCTCGTAACCGTGAGCTCTGGAGGGGGTGGGAGCGGGGGAGGAGGTTCAGGGGGGGGCGGCTCCGATATCCAGCTCACTCAAAGCCCCTCTAGTCTCTCTGCCTCAGTGGGGGATCGGGTCAGTTTTACTTGTCAAGCTTCACAGGATATCAACAACTTCCTTAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGAAAAGCACCCAAGCTGCTCATCTATGATGCCTCAAATTTGGAGACGGGTGTTCCCAGTCGATTCTCTGGGTCAGGGTCCGGGACCGACTTTACGTTTACGATCTCCTCTCTGCAGCCCGAAGACATCGCCACATACTATTGTCAACAGTACGGCAACTTGCCTTTCACATTTGGGGGCGGGACTAAGGTTGAAATCAAGAGGGCCGCTGCACTGGACAATGAGAAGTCCAACGGCACCATCATCCACGTGAAGGGCAAGCACCTGTGCCCTAGTCCTCTGTTCCCAGGCCCATCCAAACCTTTTTGGGTTCTTGTTGTGGTCGGGGGGGTGCTGGCCTGCTATTCTCTGCTGGTCACGGTGGCCTTCATAATTTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.61)
克隆24C8 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGFYWSWIRQHPGKGLEWIGYIHHSGSTHYNPSLKSRVTISIDTSKNLFSLRLSSVTAADTAVYYCASLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.62)
克隆24C8 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGCTGCAGGAAAGCGGTCCGGGACTTGTCAAGCCGTCCCAAACGCTGAGTCTGACGTGTACTGTCTCTGGTGGCTCTATTTCTTCCGGGGGCTTTTATTGGTCTTGGATCAGACAACACCCTGGCAAAGGGCTGGAGTGGATAGGGTATATTCACCACTCTGGGTCCACTCACTACAACCCATCATTGAAATCCAGAGTGACTATCTCAATCGACACATCCAAGAACCTTTTCAGCCTGAGGTTGTCATCAGTTACCGCCGCTGACACCGCGGTGTATTATTGCGCCTCTCTCGTGTACTGCGGTGGCGATTGTTATAGTGGCTTTGACTACTGGGGGCAGGGGACATTGGTTACCGTTTCAAGTGGAGGCGGTGGGTCTGGCGGGGGCGGTAGCGGAGGTGGGGGGAGCGACATACAGCTTACGCAGAGCCCCTCCAGCCTTTCAGCCTCCGTGGGGGATAGGGTGTCCTTTACCTGCCAGGCTTCCCAGGACATAAACAACTTCCTCAATTGGTATCAGCAAAAGCCCGGGAAAGCACCAAAGCTGCTCATCTACGATGCCAGCAACCTGGAAACCGGAGTGCCGTCTCGCTTCTCTGGAAGTGGCAGTGGGACCGATTTCACTTTTACAATCTCAAGTTTGCAGCCAGAAGACATTGCAACATACTACTGTCAACAGTACGGCAATCTCCCCTTTACATTTGGGGGGGGAACTAAAGTGGAGATTAAGCGCGCTGCAGCCATTGAAGTTATGTATCCGCCCCCGTATCTGGATAACGAGAAATCTAATGGTACCATAATACATGTGAAGGGGAAGCACCTCTGTCCATCACCGCTGTTCCCCGGCCCTTCAAAACCTTTCTGGGTACTCGTTGTCGTGGGTGGAGTTCTGGCCTGCTATAGTCTGCTGGTGACCGTGGCGTTTATCATCTTCTGGGTAAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.63)
克隆24C8 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000581
克隆24C8 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGCTGCAGGAAAGCGGTCCGGGACTTGTCAAGCCGTCCCAAACGCTGAGTCTGACGTGTACTGTCTCTGGTGGCTCTATTTCTTCCGGGGGCTTTTATTGGTCTTGGATCAGACAACACCCTGGCAAAGGGCTGGAGTGGATAGGGTATATTCACCACTCTGGGTCCACTCACTACAACCCATCATTGAAATCCAGAGTGACTATCTCAATCGACACATCCAAGAACCTTTTCAGCCTGAGGTTGTCATCAGTTACCGCCGCTGACACCGCGGTGTATTATTGCGCCTCTCTCGTGTACTGCGGTGGCGATTGTTATAGTGGCTTTGACTACTGGGGGCAGGGGACATTGGTTACCGTTTCAAGTGGAGGCGGTGGGTCTGGCGGGGGCGGTAGCGGAGGTGGGGGGAGCGACATACAGCTTACGCAGAGCCCCTCCAGCCTTTCAGCCTCCGTGGGGGATAGGGTGTCCTTTACCTGCCAGGCTTCCCAGGACATAAACAACTTCCTCAATTGGTATCAGCAAAAGCCCGGGAAAGCACCAAAGCTGCTCATCTACGATGCCAGCAACCTGGAAACCGGAGTGCCGTCTCGCTTCTCTGGAAGTGGCAGTGGGACCGATTTCACTTTTACAATCTCAAGTTTGCAGCCAGAAGACATTGCAACATACTACTGTCAACAGTACGGCAATCTCCCCTTTACATTTGGGGGGGGAACTAAAGTGGAGATTAAGCGCGCTGCAGCCATTGAAGTTATGTATCCGCCCCCGTATCTGGATAACGAGAAATCTAATGGTACCATAATACATGTGAAGGGGAAGCACCTCTGTCCATCACCGCTGTTCCCCGGCCCTTCAAAACCTTTCTGGGTACTCGTTGTCGTGGGTGGAGTTCTGGCCTGCTATAGTCTGCTGGTGACCGTGGCGTTTATCATCTTCTGGGTAAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.65)
克隆24C8 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGFYWSWIRQHPGKGLEWIGYIHHSGSTHYNPSLKSRVTISIDTSKNLFSLRLSSVTAADTAVYYCASLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.66)
克隆24C8 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGTTGCAGGAAAGCGGGCCTGGCCTTGTGAAACCAAGCCAGACACTGAGCCTGACATGCACTGTGTCCGGCGGGTCCATATCTTCCGGGGGTTTTTATTGGTCCTGGATACGCCAGCATCCCGGGAAAGGACTTGAATGGATTGGATATATCCACCATTCCGGAAGCACCCACTACAATCCAAGCCTTAAATCCCGGGTGACAATCTCCATCGACACCTCAAAGAATCTTTTTTCCCTGCGGTTGTCTTCAGTAACTGCCGCCGATACCGCTGTGTACTACTGTGCCAGCCTCGTCTATTGCGGCGGAGATTGTTATTCTGGGTTCGATTATTGGGGTCAAGGCACACTGGTAACTGTCAGCAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGGGGCGGGGGCAGTGGAGGGGGCGGATCTGACATTCAGCTTACGCAGTCCCCATCTTCACTTAGCGCCAGCGTTGGCGATCGGGTCAGCTTCACGTGTCAAGCAAGTCAGGATATCAACAACTTTCTTAACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCACCCAAGTTGCTGATTTACGATGCTTCTAACCTCGAGACGGGAGTGCCTAGCCGCTTCTCCGGGAGCGGCAGCGGCACAGACTTTACCTTTACGATTTCCAGTCTGCAGCCAGAGGATATAGCAACTTATTACTGTCAGCAGTATGGCAACCTCCCTTTTACCTTCGGTGGTGGCACAAAGGTCGAGATTAAAAGAGCCGCAGCGTTGTCCAACTCCATAATGTATTTTTCTCATTTTGTGCCCGTCTTTCTGCCTGCCAAACCTACCACCACCCCCGCCCCACGACCACCTACTCCAGCCCCCACCATCGCCTCCCAGCCCCTCAGCCTGAGGCCAGAGGCTTGTCGCCCTGCTGCGGGGGGCGCTGTCCATACCAGAGGACTCGACTTCGCCTGCGATATTTATATATGGGCCCCCCTCGCCGGCACCTGCGGAGTCTTGCTCCTGAGCCTTGTGATCACGCTTTATTGTAACCATCGGAATAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.67)
克隆24C8 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000591
克隆24C8 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGTTGCAGGAAAGCGGGCCTGGCCTTGTGAAACCAAGCCAGACACTGAGCCTGACATGCACTGTGTCCGGCGGGTCCATATCTTCCGGGGGTTTTTATTGGTCCTGGATACGCCAGCATCCCGGGAAAGGACTTGAATGGATTGGATATATCCACCATTCCGGAAGCACCCACTACAATCCAAGCCTTAAATCCCGGGTGACAATCTCCATCGACACCTCAAAGAATCTTTTTTCCCTGCGGTTGTCTTCAGTAACTGCCGCCGATACCGCTGTGTACTACTGTGCCAGCCTCGTCTATTGCGGCGGAGATTGTTATTCTGGGTTCGATTATTGGGGTCAAGGCACACTGGTAACTGTCAGCAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGGGGCGGGGGCAGTGGAGGGGGCGGATCTGACATTCAGCTTACGCAGTCCCCATCTTCACTTAGCGCCAGCGTTGGCGATCGGGTCAGCTTCACGTGTCAAGCAAGTCAGGATATCAACAACTTTCTTAACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCACCCAAGTTGCTGATTTACGATGCTTCTAACCTCGAGACGGGAGTGCCTAGCCGCTTCTCCGGGAGCGGCAGCGGCACAGACTTTACCTTTACGATTTCCAGTCTGCAGCCAGAGGATATAGCAACTTATTACTGTCAGCAGTATGGCAACCTCCCTTTTACCTTCGGTGGTGGCACAAAGGTCGAGATTAAAAGAGCCGCAGCGTTGTCCAACTCCATAATGTATTTTTCTCATTTTGTGCCCGTCTTTCTGCCTGCCAAACCTACCACCACCCCCGCCCCACGACCACCTACTCCAGCCCCCACCATCGCCTCCCAGCCCCTCAGCCTGAGGCCAGAGGCTTGTCGCCCTGCTGCGGGGGGCGCTGTCCATACCAGAGGACTCGACTTCGCCTGCGATATTTATATATGGGCCCCCCTCGCCGGCACCTGCGGAGTCTTGCTCCTGAGCCTTGTGATCACGCTTTATTGTAACCATCGGAATAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.69)
克隆24C8 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGFYWSWIRQHPGKGLEWIGYIHHSGSTHYNPSLKSRVTISIDTSKNLFSLRLSSVTAADTAVYYCASLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTA TKDTYDALHM QALPPR(SEQ ID NO.70)
克隆20C5.1 HC DNA
CAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGAGCCGAAGTCAAGAAACCAGGTGCCTCCGTTAAAGTGAGTTGCAAAGTCTCTGGATACACTCTGACCGAGCTCTCTATGCACTGGGTCCGGCAGGCCCCCGGCAAGGGATTGGAATGGATGGGCGGGTTCGATCCTGAGGACGGAGAGACTATCTACGCTCAAAAATTCCAGGGACGAGTGACTGTGACCGAAGACACTAGTACCGACACTGCCTACATGGAACTTTCCTCTCTGCGATCAGAAGATACCGCAGTGTACTACTGTGCTACTGAATCTAGGGGCATTGGATGGCCCTACTTCGATTACTGGGGTCAGGGAACTCTGGTGACTGTCTCCAGC(SEQ IDNO.71)
克隆20C5.1 AA HC(CDR加下划线)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTVTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATESRGIGWPYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.72)
克隆20C5.1 HC AA CDR1:GYTLTEL(SEQ ID NO.73)
克隆20C5.1 HC AA CDR2:DPEDGE(SEQ ID NO.74)
克隆20C5.1 HC AA CDR3:ESRGIGWPYFDY(SEQ ID NO.75)
克隆20C5.1 LC DNA
GATATTCAGATGACTCAATCTCCTTCTTCTCTGTCCGCTTCCGTGGGCGATAGAGTGACCATTACTTGTAGGGCGTCCCAGTCAATCTCCAGTTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGAAAGCACCTAAGCTGTTGATCAGCGGGGCTTCTAGCCTGAAGAGTGGGGTACCTTCACGGTTCAGCGGAAGCGGAAGCGGAACCGATTTCACCCTGACTATCAGCAGCCTGCCACCTGAGGACTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGTCATACAGCACTCCGATCACTTTCGGCCAGGGCACCCGGCTCGAAATCAAGCGC(SEQ ID NO.76)
克隆20C5.1 AA LC(CDR加下划线)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLISGASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLPPEDFATYYCQQSYSTPITFGQGTRLEIKR(SEQ ID NO.77)
克隆20C5.1 AA LC CDR1:RASQSISSYLN(SEQ ID NO.78)
克隆20C5.1 AA LC CDR2:GASSLKS(SEQ ID NO.79)
克隆20C5.1 AA LC CDR3:QQSYSTPIT(SEQ ID NO.80)
克隆20C5.1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGAGCCGAAGTCAAGAAACCAGGTGCCTCCGTTAAAGTGAGTTGCAAAGTCTCTGGATACACTCTGACCGAGCTCTCTATGCACTGGGTCCGGCAGGCCCCCGGCAAGGGATTGGAATGGATGGGCGGGTTCGATCCTGAGGACGGAGAGACTATCTACGCTCAAAAATTCCAGGGACGAGTGACTGTGACCGAAGACACTAGTACCGACACTGCCTACATGGAACTTTCCTCTCTGCGATCAGAAGATACCGCAGTGTACTACTGTGCTACTGAATCTAGGGGCATTGGATGGCCCTACTTCGATTACTGGGGTCAGGGAACTCTGGTGACTGTCTCCAGCGGTGGAGGTGGCAGCGGTGGTGGCGGAAGCGGGGGGGGCGGCTCTGATATTCAGATGACTCAATCTCCTTCTTCTCTGTCCGCTTCCGTGGGCGATAGAGTGACCATTACTTGTAGGGCGTCCCAGTCAATCTCCAGTTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGAAAGCACCTAAGCTGTTGATCAGCGGGGCTTCTAGCCTGAAGAGTGGGGTACCTTCACGGTTCAGCGGAAGCGGAAGCGGAACCGATTTCACCCTGACTATCAGCAGCCTGCCACCTGAGGACTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGTCATACAGCACTCCGATCACTTTCGGCCAGGGCACCCGGCTCGAAATCAAGCGCGCTGCTGCTTTGGACAATGAGAAGTCAAACGGCACCATCATACATGTTAAAGGTAAACATCTGTGTCCCTCCCCGCTGTTCCCCGGCCCTTCCAAACCGTTCTGGGTTCTGGTGGTGGTCGGAGGCGTACTCGCTTGCTATAGTCTGCTGGTAACTGTCGCCTTCATCATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.81)
克隆20C5.1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000611
克隆20C5.1 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTCCAACTGGTGCAGTCCGGAGCCGAAGTCAAGAAACCAGGTGCCTCCGTTAAAGTGAGTTGCAAAGTCTCTGGATACACTCTGACCGAGCTCTCTATGCACTGGGTCCGGCAGGCCCCCGGCAAGGGATTGGAATGGATGGGCGGGTTCGATCCTGAGGACGGAGAGACTATCTACGCTCAAAAATTCCAGGGACGAGTGACTGTGACCGAAGACACTAGTACCGACACTGCCTACATGGAACTTTCCTCTCTGCGATCAGAAGATACCGCAGTGTACTACTGTGCTACTGAATCTAGGGGCATTGGATGGCCCTACTTCGATTACTGGGGTCAGGGAACTCTGGTGACTGTCTCCAGCGGTGGAGGTGGCAGCGGTGGTGGCGGAAGCGGGGGGGGCGGCTCTGATATTCAGATGACTCAATCTCCTTCTTCTCTGTCCGCTTCCGTGGGCGATAGAGTGACCATTACTTGTAGGGCGTCCCAGTCAATCTCCAGTTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGAAAGCACCTAAGCTGTTGATCAGCGGGGCTTCTAGCCTGAAGAGTGGGGTACCTTCACGGTTCAGCGGAAGCGGAAGCGGAACCGATTTCACCCTGACTATCAGCAGCCTGCCACCTGAGGACTTTGCAACTTACTACTGCCAACAGTCATACAGCACTCCGATCACTTTCGGCCAGGGCACCCGGCTCGAAATCAAGCGCGCTGCTGCTTTGGACAATGAGAAGTCAAACGGCACCATCATACATGTTAAAGGTAAACATCTGTGTCCCTCCCCGCTGTTCCCCGGCCCTTCCAAACCGTTCTGGGTTCTGGTGGTGGTCGGAGGCGTACTCGCTTGCTATAGTCTGCTGGTAACTGTCGCCTTCATCATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.83)
克隆20C5.1 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTVTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATESRGIGWPYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLISGASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLPPEDFATYYCQQSYSTPITFGQGTRLEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.84)
克隆20C5.1 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGCTTGTGCAGAGCGGGGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGGGCCAGCGTCAAAGTGTCCTGTAAGGTCAGCGGTTACACCCTCACCGAGCTGAGCATGCACTGGGTACGGCAGGCTCCCGGCAAAGGTCTTGAGTGGATGGGTGGATTTGATCCAGAAGATGGAGAGACTATCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCCGGGTCACCGTAACAGAAGACACCTCAACTGACACCGCTTACATGGAGCTGAGTTCACTGCGGTCCGAGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCCACCGAGAGCCGCGGAATCGGATGGCCTTACTTCGACTACTGGGGACAGGGTACACTTGTTACAGTATCATCCGGGGGTGGCGGCTCTGGTGGGGGCGGCTCCGGAGGGGGTGGATCAGATATCCAAATGACTCAAAGTCCAAGTTCCCTGTCTGCCTCAGTCGGAGATAGAGTCACCATAACCTGCAGGGCAAGTCAGTCCATCTCCTCCTATCTGAACTGGTACCAACAGAAACCTGGAAAGGCGCCTAAGCTCCTGATCTCCGGAGCCTCATCTTTGAAATCCGGTGTCCCATCTCGCTTCAGTGGCTCTGGAAGCGGTACAGATTTTACTTTGACCATTAGCAGCCTCCCACCGGAAGACTTTGCTACATATTACTGCCAGCAGTCTTACTCAACCCCAATCACCTTCGGGCAAGGCACCAGACTCGAAATAAAAAGAGCAGCTGCTATCGAGGTTATGTACCCACCGCCGTACTTGGATAACGAAAAAAGCAATGGGACCATCATTCATGTGAAGGGTAAGCACCTTTGCCCTAGCCCACTGTTTCCTGGCCCGAGTAAACCCTTTTGGGTACTTGTGGTCGTCGGCGGCGTGCTGGCCTGCTACTCACTCCTGGTTACCGTCGCATTCATCATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.85)
克隆20C5.1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000631
克隆20C5.1 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGCTTGTGCAGAGCGGGGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGGGCCAGCGTCAAAGTGTCCTGTAAGGTCAGCGGTTACACCCTCACCGAGCTGAGCATGCACTGGGTACGGCAGGCTCCCGGCAAAGGTCTTGAGTGGATGGGTGGATTTGATCCAGAAGATGGAGAGACTATCTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCCGGGTCACCGTAACAGAAGACACCTCAACTGACACCGCTTACATGGAGCTGAGTTCACTGCGGTCCGAGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCCACCGAGAGCCGCGGAATCGGATGGCCTTACTTCGACTACTGGGGACAGGGTACACTTGTTACAGTATCATCCGGGGGTGGCGGCTCTGGTGGGGGCGGCTCCGGAGGGGGTGGATCAGATATCCAAATGACTCAAAGTCCAAGTTCCCTGTCTGCCTCAGTCGGAGATAGAGTCACCATAACCTGCAGGGCAAGTCAGTCCATCTCCTCCTATCTGAACTGGTACCAACAGAAACCTGGAAAGGCGCCTAAGCTCCTGATCTCCGGAGCCTCATCTTTGAAATCCGGTGTCCCATCTCGCTTCAGTGGCTCTGGAAGCGGTACAGATTTTACTTTGACCATTAGCAGCCTCCCACCGGAAGACTTTGCTACATATTACTGCCAGCAGTCTTACTCAACCCCAATCACCTTCGGGCAAGGCACCAGACTCGAAATAAAAAGAGCAGCTGCTATCGAGGTTATGTACCCACCGCCGTACTTGGATAACGAAAAAAGCAATGGGACCATCATTCATGTGAAGGGTAAGCACCTTTGCCCTAGCCCACTGTTTCCTGGCCCGAGTAAACCCTTTTGGGTACTTGTGGTCGTCGGCGGCGTGCTGGCCTGCTACTCACTCCTGGTTACCGTCGCATTCATCATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.87)
克隆20C5.1 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTVTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATESRGIGWPYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLISGASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLPPEDFATYYCQQSYSTPITFGQGTRLEIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM QALPPR(SEQ ID NO.88)
克隆20C5.1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGTTGGTGCAAAGCGGCGCAGAAGTTAAGAAACCTGGGGCGTCAGTTAAGGTGTCTTGCAAAGTATCTGGCTATACCCTCACTGAGCTGTCCATGCATTGGGTAAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGGCTCGAATGGATGGGAGGATTTGACCCTGAAGACGGAGAGACCATCTACGCCCAGAAATTCCAGGGTAGAGTAACAGTGACTGAGGACACTAGCACTGACACAGCGTACATGGAGCTGAGTTCTCTGAGAAGTGAGGACACAGCCGTTTACTACTGCGCTACCGAGTCCAGAGGTATTGGCTGGCCATACTTCGACTATTGGGGTCAGGGCACCCTGGTTACAGTGAGTTCAGGAGGCGGGGGCTCTGGGGGGGGCGGTTCCGGAGGGGGGGGCTCAGATATACAGATGACGCAGAGTCCATCAAGTCTCTCAGCCAGCGTGGGAGATCGCGTGACTATTACTTGCCGCGCCAGCCAGAGTATTAGCTCCTATCTGAATTGGTACCAGCAAAAGCCCGGGAAGGCCCCTAAGCTTCTGATTTCTGGCGCCTCCTCTTTGAAGTCAGGTGTGCCAAGCAGATTTAGCGGGTCTGGAAGTGGCACTGACTTTACACTTACTATCTCCAGCCTGCCCCCAGAGGATTTTGCCACATATTACTGTCAGCAAAGCTACTCTACTCCAATCACTTTCGGCCAGGGCACAAGATTGGAGATTAAGAGGGCTGCCGCACTTTCAAATTCCATCATGTATTTCAGCCATTTTGTGCCTGTTTTTCTTCCGGCCAAACCTACAACCACTCCCGCCCCACGCCCACCTACTCCCGCCCCTACCATTGCCTCCCAGCCTCTGTCTCTTAGACCTGAGGCTTGTAGACCTGCTGCCGGCGGAGCCGTGCACACTCGCGGTCTGGACTTCGCCTGCGACATCTATATCTGGGCCCCTCTGGCCGGCACCTGCGGCGTTCTCCTTCTCTCACTCGTAATCACACTCTATTGCAATCACAGGAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.89)
克隆20C5.1 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000641
克隆20C5.1 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGTTGGTGCAAAGCGGCGCAGAAGTTAAGAAACCTGGGGCGTCAGTTAAGGTGTCTTGCAAAGTATCTGGCTATACCCTCACTGAGCTGTCCATGCATTGGGTAAGGCAGGCTCCTGGAAAGGGGCTCGAATGGATGGGAGGATTTGACCCTGAAGACGGAGAGACCATCTACGCCCAGAAATTCCAGGGTAGAGTAACAGTGACTGAGGACACTAGCACTGACACAGCGTACATGGAGCTGAGTTCTCTGAGAAGTGAGGACACAGCCGTTTACTACTGCGCTACCGAGTCCAGAGGTATTGGCTGGCCATACTTCGACTATTGGGGTCAGGGCACCCTGGTTACAGTGAGTTCAGGAGGCGGGGGCTCTGGGGGGGGCGGTTCCGGAGGGGGGGGCTCAGATATACAGATGACGCAGAGTCCATCAAGTCTCTCAGCCAGCGTGGGAGATCGCGTGACTATTACTTGCCGCGCCAGCCAGAGTATTAGCTCCTATCTGAATTGGTACCAGCAAAAGCCCGGGAAGGCCCCTAAGCTTCTGATTTCTGGCGCCTCCTCTTTGAAGTCAGGTGTGCCAAGCAGATTTAGCGGGTCTGGAAGTGGCACTGACTTTACACTTACTATCTCCAGCCTGCCCCCAGAGGATTTTGCCACATATTACTGTCAGCAAAGCTACTCTACTCCAATCACTTTCGGCCAGGGCACAAGATTGGAGATTAAGAGGGCTGCCGCACTTTCAAATTCCATCATGTATTTCAGCCATTTTGTGCCTGTTTTTCTTCCGGCCAAACCTACAACCACTCCCGCCCCACGCCCACCTACTCCCGCCCCTACCATTGCCTCCCAGCCTCTGTCTCTTAGACCTGAGGCTTGTAGACCTGCTGCCGGCGGAGCCGTGCACACTCGCGGTCTGGACTTCGCCTGCGACATCTATATCTGGGCCCCTCTGGCCGGCACCTGCGGCGTTCTCCTTCTCTCACTCGTAATCACACTCTATTGCAATCACAGGAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.91)
克隆20C5.1 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTVTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATESRGIGWPYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLISGASSLKSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLPPEDFATYYCQQSYSTPITFGQGTRLEIKRAAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.92)
克隆20C5.2 HC DNA
CAGGTCCAGTTGGTCGAAAGTGGCGGTGGTGTAGTGCAGCCGGGCCGCAGTTTGAGGCTTTCCTGTGCGGCTTCAGGCTTTACTTTTTCCAGCTATGGAATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAAGGACTTGAGTGGGTGGCCGTCATTTCTTATGACGGATCAGATAAGTACTACGTGGACAGCGTCAAGGGCAGATTCACCATCTCTAGGGACAACAGTAAAAATAGACTCTACCTCCAGATGAATAGCCTCAGAGCTGAAGACACGGCCGTCTACTATTGTGCTCGGGAGCGGTATAGTGGCAGAGACTACTGGGGGCAGGGCACACTCGTTACAGTGAGTAGC(SEQ ID NO.93)
克隆20C5.2 AA HC(CDR加下划线)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNSKNRLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYSGRDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.94)
克隆20C5.2 HC AA CDR1:GFTFSSY(SEQ ID NO.95)
克隆20C5.2 HC AA CDR2:SYDGSD(SEQ ID NO.96)
克隆20C5.2 HC AA CDR3:ERYSGRDY(SEQ ID NO.97)
克隆20C5.2 LC DNA
GAGATTGTTATGACCCAGAGTCCTGCGACCCTCTCAGTCAGCCCCGGGGAGCGCGCAACTTTGTCTTGCAGAGCTAGTCAGTCCGTGTCCTCTCTTCTGACATGGTACCAGCAAAAGCCCGGGCAGGCTCCGCGCCTTTTGATCTTTGGGGCTTCAACAAGAGCCACTGGGATTCCCGCACGATTCTCTGGCTCCGGGAGCGGTACTGGTTTCACCCTGACGATTAGCAGTCTCCAGAGCGAGGACTTCGCCGTATACTACTGCCAGCAGTACGATACGTGGCCATTCACTTTTGGACCAGGGACTAAAGTGGATTTTAAGCGC(SEQ ID NO.98)
克隆20C5.2 AA LC(CDR加下划线)
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSLLTWYQQKPGQAPRLLIFGASTRATGIPARFSGSGSGTGFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDTWPFTFGPGTKVDFKR(SEQ ID NO.99)
克隆20C5.2 AA LC CDR1:RASQSVSSLLT(SEQ ID NO.100)
克隆20C5.2 AA LC CDR2:GASTRAT(SEQ ID NO.101)
克隆20C5.2 AA LC CDR3:QQYDTWPFT(SEQ ID NO.102)
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTCCAGTTGGTCGAAAGTGGCGGTGGTGTAGTGCAGCCGGGCCGCAGTTTGAGGCTTTCCTGTGCGGCTTCAGGCTTTACTTTTTCCAGCTATGGAATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAAGGACTTGAGTGGGTGGCCGTCATTTCTTATGACGGATCAGATAAGTACTACGTGGACAGCGTCAAGGGCAGATTCACCATCTCTAGGGACAACAGTAAAAATAGACTCTACCTCCAGATGAATAGCCTCAGAGCTGAAGACACGGCCGTCTACTATTGTGCTCGGGAGCGGTATAGTGGCAGAGACTACTGGGGGCAGGGCACACTCGTTACAGTGAGTAGCGGCGGAGGAGGGAGTGGGGGCGGTGGCTCCGGTGGAGGAGGTTCTGAGATTGTTATGACCCAGAGTCCTGCGACCCTCTCAGTCAGCCCCGGGGAGCGCGCAACTTTGTCTTGCAGAGCTAGTCAGTCCGTGTCCTCTCTTCTGACATGGTACCAGCAAAAGCCCGGGCAGGCTCCGCGCCTTTTGATCTTTGGGGCTTCAACAAGAGCCACTGGGATTCCCGCACGATTCTCTGGCTCCGGGAGCGGTACTGGTTTCACCCTGACGATTAGCAGTCTCCAGAGCGAGGACTTCGCCGTATACTACTGCCAGCAGTACGATACGTGGCCATTCACTTTTGGACCAGGGACTAAAGTGGATTTTAAGCGCGCCGCCGCTCTCGATAACGAAAAGTCAAATGGCACCATAATCCACGTCAAAGGCAAGCACCTGTGCCCTTCCCCGCTCTTCCCCGGACCCAGTAAACCATTTTGGGTGCTGGTTGTTGTGGGGGGCGTGCTGGCCTGCTATAGCCTTTTGGTCACTGTAGCCTTCATTATTTTTTGGGTCAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ IDNO.103)
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000661
Figure BDA0002413049300000671
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTCCAGTTGGTCGAAAGTGGCGGTGGTGTAGTGCAGCCGGGCCGCAGTTTGAGGCTTTCCTGTGCGGCTTCAGGCTTTACTTTTTCCAGCTATGGAATGCACTGGGTGCGGCAGGCCCCCGGCAAAGGACTTGAGTGGGTGGCCGTCATTTCTTATGACGGATCAGATAAGTACTACGTGGACAGCGTCAAGGGCAGATTCACCATCTCTAGGGACAACAGTAAAAATAGACTCTACCTCCAGATGAATAGCCTCAGAGCTGAAGACACGGCCGTCTACTATTGTGCTCGGGAGCGGTATAGTGGCAGAGACTACTGGGGGCAGGGCACACTCGTTACAGTGAGTAGCGGCGGAGGAGGGAGTGGGGGCGGTGGCTCCGGTGGAGGAGGTTCTGAGATTGTTATGACCCAGAGTCCTGCGACCCTCTCAGTCAGCCCCGGGGAGCGCGCAACTTTGTCTTGCAGAGCTAGTCAGTCCGTGTCCTCTCTTCTGACATGGTACCAGCAAAAGCCCGGGCAGGCTCCGCGCCTTTTGATCTTTGGGGCTTCAACAAGAGCCACTGGGATTCCCGCACGATTCTCTGGCTCCGGGAGCGGTACTGGTTTCACCCTGACGATTAGCAGTCTCCAGAGCGAGGACTTCGCCGTATACTACTGCCAGCAGTACGATACGTGGCCATTCACTTTTGGACCAGGGACTAAAGTGGATTTTAAGCGCGCCGCCGCTCTCGATAACGAAAAGTCAAATGGCACCATAATCCACGTCAAAGGCAAGCACCTGTGCCCTTCCCCGCTCTTCCCCGGACCCAGTAAACCATTTTGGGTGCTGGTTGTTGTGGGGGGCGTGCTGGCCTGCTATAGCCTTTTGGTCACTGTAGCCTTCATTATTTTTTGGGTCAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.105)
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNSKNRLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYSGRDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSLLTWYQQKPGQAPRLLIFGASTRATGIPARFSGSGSGTGFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDTWPFTFGPGTKVDFKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.106)
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGCTCGTGGAGTCTGGCGGCGGCGTGGTCCAGCCCGGCCGGTCCCTGCGCCTGTCCTGCGCCGCCAGCGGGTTTACTTTTTCCTCCTACGGCATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCCGGCAAGGGCCTCGAGTGGGTCGCCGTGATCTCATACGATGGGTCAGACAAATACTATGTCGATTCTGTTAAAGGGCGGTTTACCATTTCAAGAGATAACTCTAAGAATAGGCTGTATTTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAAGATACCGCAGTGTACTATTGCGCTAGGGAGCGGTATAGTGGCCGCGATTACTGGGGACAGGGTACACTGGTGACCGTGAGCTCTGGGGGTGGCGGAAGCGGGGGTGGCGGAAGCGGCGGAGGGGGTAGTGAAATTGTGATGACCCAGTCTCCGGCTACACTTTCAGTCTCCCCTGGGGAGAGAGCTACACTGTCATGCAGAGCGTCCCAGTCCGTCTCTTCTCTCCTTACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTCGACTGCTGATCTTCGGTGCCTCCACAAGGGCGACCGGGATTCCAGCCCGCTTCTCAGGTTCTGGGAGCGGAACTGGTTTCACTTTGACAATCAGTTCACTGCAGTCAGAGGATTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAATACGACACATGGCCATTCACTTTCGGACCCGGTACCAAAGTCGATTTCAAGAGAGCCGCGGCCATCGAGGTTATGTACCCACCACCATATCTGGACAATGAAAAAAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAGGGTAAACACCTCTGCCCTAGCCCACTTTTCCCTGGCCCATCAAAGCCCTTCTGGGTCTTGGTGGTCGTGGGGGGTGTGCTGGCCTGTTACAGCCTTCTGGTGACGGTTGCTTTCATTATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.107)
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000681
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGCTCGTGGAGTCTGGCGGCGGCGTGGTCCAGCCCGGCCGGTCCCTGCGCCTGTCCTGCGCCGCCAGCGGGTTTACTTTTTCCTCCTACGGCATGCACTGGGTGCGCCAGGCTCCCGGCAAGGGCCTCGAGTGGGTCGCCGTGATCTCATACGATGGGTCAGACAAATACTATGTCGATTCTGTTAAAGGGCGGTTTACCATTTCAAGAGATAACTCTAAGAATAGGCTGTATTTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAAGATACCGCAGTGTACTATTGCGCTAGGGAGCGGTATAGTGGCCGCGATTACTGGGGACAGGGTACACTGGTGACCGTGAGCTCTGGGGGTGGCGGAAGCGGGGGTGGCGGAAGCGGCGGAGGGGGTAGTGAAATTGTGATGACCCAGTCTCCGGCTACACTTTCAGTCTCCCCTGGGGAGAGAGCTACACTGTCATGCAGAGCGTCCCAGTCCGTCTCTTCTCTCCTTACCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTCGACTGCTGATCTTCGGTGCCTCCACAAGGGCGACCGGGATTCCAGCCCGCTTCTCAGGTTCTGGGAGCGGAACTGGTTTCACTTTGACAATCAGTTCACTGCAGTCAGAGGATTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAATACGACACATGGCCATTCACTTTCGGACCCGGTACCAAAGTCGATTTCAAGAGAGCCGCGGCCATCGAGGTTATGTACCCACCACCATATCTGGACAATGAAAAAAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAGGGTAAACACCTCTGCCCTAGCCCACTTTTCCCTGGCCCATCAAAGCCCTTCTGGGTCTTGGTGGTCGTGGGGGGTGTGCTGGCCTGTTACAGCCTTCTGGTGACGGTTGCTTTCATTATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.109)
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
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克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGTTGGTTGAATCAGGAGGGGGTGTGGTGCAACCCGGTCGGTCACTGCGCCTCAGTTGTGCTGCTTCCGGGTTTACTTTCAGCTCATATGGGATGCACTGGGTACGGCAGGCTCCAGGTAAAGGCTTGGAATGGGTGGCGGTGATCAGCTATGACGGCTCTGACAAATATTATGTGGACTCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCAGTCGAGACAACTCAAAGAATAGACTCTACTTGCAGATGAATAGCCTCCGGGCCGAAGATACTGCAGTCTATTATTGCGCCCGGGAGCGCTACAGTGGAAGAGACTATTGGGGGCAAGGAACTCTTGTCACAGTCTCATCTGGCGGCGGCGGCAGCGGTGGGGGCGGATCTGGCGGGGGCGGCAGCGAAATCGTTATGACTCAGAGTCCTGCCACACTGAGCGTTAGCCCTGGTGAGAGAGCAACACTTAGCTGCAGAGCTAGTCAGAGTGTTTCCAGTCTTTTGACATGGTACCAACAGAAGCCCGGTCAAGCTCCACGACTGCTCATCTTCGGTGCATCCACCCGCGCAACCGGGATACCCGCCCGGTTTTCCGGTTCTGGAAGTGGCACAGGATTCACGCTCACCATTTCTTCTCTGCAGTCTGAAGACTTTGCCGTGTATTACTGCCAGCAGTACGATACCTGGCCCTTTACCTTTGGCCCAGGTACTAAAGTGGATTTTAAACGAGCTGCTGCACTTTCCAATAGTATTATGTACTTTTCACATTTTGTGCCCGTGTTCCTGCCTGCGAAGCCTACGACAACCCCAGCCCCTAGGCCGCCCACACCGGCCCCAACTATTGCCTCCCAGCCATTGTCTCTGAGACCCGAAGCTTGCAGACCTGCTGCTGGAGGCGCCGTTCACACCCGAGGATTGGATTTCGCATGTGACATTTACATCTGGGCCCCTTTGGCCGGAACCTGCGGTGTGCTGCTGCTGTCACTCGTGATTACACTTTACTGCAACCACCGAAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.111)
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000691
Figure BDA0002413049300000701
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
CAGGTGCAGTTGGTTGAATCAGGAGGGGGTGTGGTGCAACCCGGTCGGTCACTGCGCCTCAGTTGTGCTGCTTCCGGGTTTACTTTCAGCTCATATGGGATGCACTGGGTACGGCAGGCTCCAGGTAAAGGCTTGGAATGGGTGGCGGTGATCAGCTATGACGGCTCTGACAAATATTATGTGGACTCCGTGAAAGGCAGATTCACCATCAGTCGAGACAACTCAAAGAATAGACTCTACTTGCAGATGAATAGCCTCCGGGCCGAAGATACTGCAGTCTATTATTGCGCCCGGGAGCGCTACAGTGGAAGAGACTATTGGGGGCAAGGAACTCTTGTCACAGTCTCATCTGGCGGCGGCGGCAGCGGTGGGGGCGGATCTGGCGGGGGCGGCAGCGAAATCGTTATGACTCAGAGTCCTGCCACACTGAGCGTTAGCCCTGGTGAGAGAGCAACACTTAGCTGCAGAGCTAGTCAGAGTGTTTCCAGTCTTTTGACATGGTACCAACAGAAGCCCGGTCAAGCTCCACGACTGCTCATCTTCGGTGCATCCACCCGCGCAACCGGGATACCCGCCCGGTTTTCCGGTTCTGGAAGTGGCACAGGATTCACGCTCACCATTTCTTCTCTGCAGTCTGAAGACTTTGCCGTGTATTACTGCCAGCAGTACGATACCTGGCCCTTTACCTTTGGCCCAGGTACTAAAGTGGATTTTAAACGAGCTGCTGCACTTTCCAATAGTATTATGTACTTTTCACATTTTGTGCCCGTGTTCCTGCCTGCGAAGCCTACGACAACCCCAGCCCCTAGGCCGCCCACACCGGCCCCAACTATTGCCTCCCAGCCATTGTCTCTGAGACCCGAAGCTTGCAGACCTGCTGCTGGAGGCGCCGTTCACACCCGAGGATTGGATTTCGCATGTGACATTTACATCTGGGCCCCTTTGGCCGGAACCTGCGGTGTGCTGCTGCTGTCACTCGTGATTACACTTTACTGCAACCACCGAAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.113)
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
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克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGAGATTGTGATGACCCAGTCCCCTGCTACCCTGTCCGTCAGTCCGGGCGAGAGAGCCACCTTGTCATGCCGGGCCAGCCAGTCCGTCAGCAGTCTCCTGACTTGGTATCAGCAAAAACCAGGGCAGGCACCGCGGCTTTTGATTTTTGGTGCAAGCACACGCGCCACTGGCATTCCAGCTAGGTTTTCTGGAAGTGGATCTGGGACAGGCTTCACTCTGACAATCAGTAGCCTGCAGAGTGAGGACTTTGCTGTTTACTACTGTCAACAGTACGACACCTGGCCATTCACATTCGGGCCCGGCACCAAGGTCGACTTCAAGAGGGGCGGTGGAGGTTCAGGTGGTGGCGGGTCAGGCGGCGGTGGGTCTCAGGTTCAACTGGTGGAATCAGGTGGCGGCGTTGTCCAACCGGGGCGATCACTTCGACTTTCCTGTGCTGCCTCAGGCTTTACTTTTTCATCCTATGGGATGCACTGGGTTCGGCAGGCTCCCGGAAAAGGACTCGAGTGGGTTGCAGTGATCTCTTACGATGGCTCAGACAAGTATTATGTGGACTCAGTCAAGGGGAGATTCACAATAAGCCGAGACAACTCCAAAAACCGGCTTTATCTCCAGATGAACAGCCTTAGAGCGGAAGATACCGCGGTATACTACTGTGCCCGCGAGAGGTATTCCGGCAGAGACTACTGGGGACAGGGCACACTGGTCACCGTGAGTTCTGCCGCAGCGCTCGATAACGAAAAGAGCAACGGAACCATTATCCACGTTAAGGGCAAGCACCTGTGCCCCAGTCCCCTCTTCCCAGGACCATCTAAACCCTTCTGGGTTCTGGTAGTAGTTGGAGGGGTCCTTGCATGTTACTCCCTTTTGGTCACCGTCGCCTTCATTATTTTCTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ IDNO.115)克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000711
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GAGATTGTGATGACCCAGTCCCCTGCTACCCTGTCCGTCAGTCCGGGCGAGAGAGCCACCTTGTCATGCCGGGCCAGCCAGTCCGTCAGCAGTCTCCTGACTTGGTATCAGCAAAAACCAGGGCAGGCACCGCGGCTTTTGATTTTTGGTGCAAGCACACGCGCCACTGGCATTCCAGCTAGGTTTTCTGGAAGTGGATCTGGGACAGGCTTCACTCTGACAATCAGTAGCCTGCAGAGTGAGGACTTTGCTGTTTACTACTGTCAACAGTACGACACCTGGCCATTCACATTCGGGCCCGGCACCAAGGTCGACTTCAAGAGGGGCGGTGGAGGTTCAGGTGGTGGCGGGTCAGGCGGCGGTGGGTCTCAGGTTCAACTGGTGGAATCAGGTGGCGGCGTTGTCCAACCGGGGCGATCACTTCGACTTTCCTGTGCTGCCTCAGGCTTTACTTTTTCATCCTATGGGATGCACTGGGTTCGGCAGGCTCCCGGAAAAGGACTCGAGTGGGTTGCAGTGATCTCTTACGATGGCTCAGACAAGTATTATGTGGACTCAGTCAAGGGGAGATTCACAATAAGCCGAGACAACTCCAAAAACCGGCTTTATCTCCAGATGAACAGCCTTAGAGCGGAAGATACCGCGGTATACTACTGTGCCCGCGAGAGGTATTCCGGCAGAGACTACTGGGGACAGGGCACACTGGTCACCGTGAGTTCTGCCGCAGCGCTCGATAACGAAAAGAGCAACGGAACCATTATCCACGTTAAGGGCAAGCACCTGTGCCCCAGTCCCCTCTTCCCAGGACCATCTAAACCCTTCTGGGTTCTGGTAGTAGTTGGAGGGGTCCTTGCATGTTACTCCCTTTTGGTCACCGTCGCCTTCATTATTTTCTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.117)
克隆20C5.2 CD28T CD3 zeta CAR AA重链和轻链
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克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGAGATCGTCATGACACAGAGTCCAGCTACCCTGAGCGTGTCCCCTGGAGAGAGAGCCACCCTGTCCTGTAGGGCTAGTCAGAGTGTGTCCAGCCTCCTCACCTGGTATCAACAGAAGCCTGGTCAAGCTCCCCGGCTGCTTATCTTCGGGGCCAGCACGCGAGCCACAGGCATCCCGGCCAGATTCTCTGGCTCTGGCAGTGGCACCGGGTTCACTCTCACGATCTCATCCCTGCAGTCAGAGGATTTCGCTGTGTATTACTGTCAGCAGTACGATACATGGCCCTTCACCTTCGGCCCGGGCACAAAAGTAGATTTCAAGCGCGGCGGCGGGGGTAGTGGGGGCGGGGGATCAGGAGGAGGGGGCTCCCAAGTACAGCTGGTTGAGAGCGGCGGCGGGGTGGTTCAGCCCGGGCGCAGCCTCAGGCTGAGTTGCGCAGCATCAGGATTCACATTCAGTTCTTATGGAATGCATTGGGTCAGACAGGCTCCCGGGAAGGGCCTTGAATGGGTGGCAGTCATTAGCTACGACGGAAGCGATAAGTACTATGTGGACTCAGTTAAAGGGAGATTTACTATCAGCCGCGACAATTCCAAAAACAGATTGTATTTGCAGATGAACTCCCTCAGGGCGGAGGACACTGCTGTATATTACTGCGCACGAGAGAGATACTCCGGCCGAGACTATTGGGGCCAAGGAACATTGGTAACTGTGAGCTCCGCCGCAGCTATTGAGGTCATGTACCCCCCACCTTATCTCGATAATGAGAAGAGTAATGGGACTATAATTCACGTAAAGGGCAAACACCTGTGCCCTTCCCCGCTGTTTCCAGGTCCAAGTAAGCCGTTCTGGGTCCTGGTTGTGGTGGGAGGGGTGCTGGCCTGCTATTCTCTGTTGGTTACCGTGGCCTTTATCATTTTCTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.119)
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000721
Figure BDA0002413049300000731
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GAGATCGTCATGACACAGAGTCCAGCTACCCTGAGCGTGTCCCCTGGAGAGAGAGCCACCCTGTCCTGTAGGGCTAGTCAGAGTGTGTCCAGCCTCCTCACCTGGTATCAACAGAAGCCTGGTCAAGCTCCCCGGCTGCTTATCTTCGGGGCCAGCACGCGAGCCACAGGCATCCCGGCCAGATTCTCTGGCTCTGGCAGTGGCACCGGGTTCACTCTCACGATCTCATCCCTGCAGTCAGAGGATTTCGCTGTGTATTACTGTCAGCAGTACGATACATGGCCCTTCACCTTCGGCCCGGGCACAAAAGTAGATTTCAAGCGCGGCGGCGGGGGTAGTGGGGGCGGGGGATCAGGAGGAGGGGGCTCCCAAGTACAGCTGGTTGAGAGCGGCGGCGGGGTGGTTCAGCCCGGGCGCAGCCTCAGGCTGAGTTGCGCAGCATCAGGATTCACATTCAGTTCTTATGGAATGCATTGGGTCAGACAGGCTCCCGGGAAGGGCCTTGAATGGGTGGCAGTCATTAGCTACGACGGAAGCGATAAGTACTATGTGGACTCAGTTAAAGGGAGATTTACTATCAGCCGCGACAATTCCAAAAACAGATTGTATTTGCAGATGAACTCCCTCAGGGCGGAGGACACTGCTGTATATTACTGCGCACGAGAGAGATACTCCGGCCGAGACTATTGGGGCCAAGGAACATTGGTAACTGTGAGCTCCGCCGCAGCTATTGAGGTCATGTACCCCCCACCTTATCTCGATAATGAGAAGAGTAATGGGACTATAATTCACGTAAAGGGCAAACACCTGTGCCCTTCCCCGCTGTTTCCAGGTCCAAGTAAGCCGTTCTGGGTCCTGGTTGTGGTGGGAGGGGTGCTGGCCTGCTATTCTCTGTTGGTTACCGTGGCCTTTATCATTTTCTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.121)
克隆20C5.2 CD28 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSLLTWYQQKPGQAPRLLIFGASTRATGIPARFSGSGSGTGFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDTWPFTFGPGTKVDFKRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNSKNRLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYSGRDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.122)
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGAAATAGTGATGACTCAGTCCCCGGCCACCCTCAGCGTGTCCCCCGGGGAGCGAGCGACCCTGTCATGCAGGGCTTCCCAGAGTGTCAGCTCCCTGCTCACTTGGTATCAGCAAAAGCCGGGGCAGGCTCCCCGCCTCCTCATCTTCGGGGCATCAACTAGGGCCACCGGCATTCCTGCAAGATTTTCCGGGTCTGGCAGCGGCACCGGCTTCACCCTTACCATTAGCTCTCTGCAGTCTGAGGACTTCGCCGTTTACTATTGTCAGCAGTATGATACTTGGCCCTTTACCTTCGGTCCCGGAACTAAGGTGGACTTCAAGCGCGGGGGGGGTGGATCTGGAGGTGGTGGCTCCGGGGGCGGTGGAAGCCAGGTCCAGTTGGTTGAGAGCGGCGGCGGAGTGGTGCAGCCCGGGAGGTCCTTGCGGCTGAGCTGTGCAGCCTCCGGTTTTACTTTTTCTAGCTATGGAATGCATTGGGTAAGACAGGCTCCCGGAAAAGGCCTCGAGTGGGTGGCGGTCATTAGCTATGATGGATCTGATAAATACTATGTGGACTCAGTTAAGGGGCGCTTCACAATCTCAAGAGACAATAGCAAAAATAGACTGTACCTGCAGATGAATAGTCTGCGCGCCGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGAGATACAGCGGACGGGATTACTGGGGCCAGGGTACCCTCGTAACGGTGTCCTCCGCTGCCGCCCTTAGCAACAGCATTATGTACTTTTCTCATTTCGTGCCAGTCTTTCTCCCAGCAAAGCCCACCACTACCCCGGCCCCCAGGCCGCCTACTCCTGCCCCCACTATCGCGTCTCAGCCTCTCTCCTTGCGGCCCGAGGCCTGCCGGCCAGCCGCAGGGGGCGCCGTACATACTCGGGGTTTGGATTTCGCTTGCGACATATATATTTGGGCCCCCCTCGCCGGCACATGTGGAGTGCTGCTCCTGAGTCTCGTTATAACCCTCTATTGCAACCATAGAAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGGTAA(SEQ ID NO.123)
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
(信号肽为粗体)
Figure BDA0002413049300000741
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR DNA重链和轻链
GAAATAGTGATGACTCAGTCCCCGGCCACCCTCAGCGTGTCCCCCGGGGAGCGAGCGACCCTGTCATGCAGGGCTTCCCAGAGTGTCAGCTCCCTGCTCACTTGGTATCAGCAAAAGCCGGGGCAGGCTCCCCGCCTCCTCATCTTCGGGGCATCAACTAGGGCCACCGGCATTCCTGCAAGATTTTCCGGGTCTGGCAGCGGCACCGGCTTCACCCTTACCATTAGCTCTCTGCAGTCTGAGGACTTCGCCGTTTACTATTGTCAGCAGTATGATACTTGGCCCTTTACCTTCGGTCCCGGAACTAAGGTGGACTTCAAGCGCGGGGGGGGTGGATCTGGAGGTGGTGGCTCCGGGGGCGGTGGAAGCCAGGTCCAGTTGGTTGAGAGCGGCGGCGGAGTGGTGCAGCCCGGGAGGTCCTTGCGGCTGAGCTGTGCAGCCTCCGGTTTTACTTTTTCTAGCTATGGAATGCATTGGGTAAGACAGGCTCCCGGAAAAGGCCTCGAGTGGGTGGCGGTCATTAGCTATGATGGATCTGATAAATACTATGTGGACTCAGTTAAGGGGCGCTTCACAATCTCAAGAGACAATAGCAAAAATAGACTGTACCTGCAGATGAATAGTCTGCGCGCCGAGGACACTGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGAGAGATACAGCGGACGGGATTACTGGGGCCAGGGTACCCTCGTAACGGTGTCCTCCGCTGCCGCCCTTAGCAACAGCATTATGTACTTTTCTCATTTCGTGCCAGTCTTTCTCCCAGCAAAGCCCACCACTACCCCGGCCCCCAGGCCGCCTACTCCTGCCCCCACTATCGCGTCTCAGCCTCTCTCCTTGCGGCCCGAGGCCTGCCGGCCAGCCGCAGGGGGCGCCGTACATACTCGGGGTTTGGATTTCGCTTGCGACATATATATTTGGGCCCCCCTCGCCGGCACATGTGGAGTGCTGCTCCTGAGTCTCGTTATAACCCTCTATTGCAACCATAGAAACAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG(SEQ ID NO.125)
克隆20C5.2 CD8 CD3 zeta CAR AA重链和轻链
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSLLTWYQQKPGQAPRLLIFGASTRATGIPARFSGSGSGTGFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDTWPFTFGPGTKVDFKRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNSKNRLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYSGRDYWGQGTLVTVSSAAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.126)
CAR信号肽DNA
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCG(SEQID NO.127)
CAR信号肽:MALPVTALLLPLALLLHAARP(SEQ ID NO.128)
scFv G4S接头DNA
GGCGGTGGAGGCTCCGGAGGGGGGGGCTCTGGCGGAGGGGGCTCC(SEQ ID NO.129)
scFv G4s接头:GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO.130)
scFv Whitlow接头DNA
GGGTCTACATCCGGCTCCGGGAAGCCCGGAAGTGGCGAAGGTAGTACAAAGGGG(SEQ ID NO.131)
scFv Whitlow接头:GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO.132)
CD28 AA胞外域
MLRLLLALNLFPSIQVTGNKILVKQSPMLVAYDNAVNLSCKYSYNLFSREFRASLHKGLDSAVEVCVVYGNYSQQLQVYSKTGFNCDGKLGNESVTFYLQNLYVNQTDIYFCKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP(SEQ ID NO.133)
GX2X3X4X5X6X7X8X9(SEQ ID NO:134)
X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:135)
X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12DY(SEQ ID NO:136)
X1ASQX5X6X7X8X9LX11(SEQ ID NO:137)
X1ASX4X5X6X7(SEQ ID NO:138)
QQX3X4X5X6PX8T(SEQ ID NO:139)
4-1BB核酸序列(胞内域)
AAGCGCGGCAGGAAGAAGCTCCTCTACATTTTTAAGCAGCCTTTTATGAGGCCCGTACAGACAACACAGGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCAGATTTCCCGAGGAGGAGGAAGGTGGGTGCGAGCTG(SEQ ID NO.140)
4-1BB AA(胞内域)
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(SEQ ID NO.141)
OX40 AA
RRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI(SEQ ID NO.142)
前导序列AA
MALPVTALLLPLALLLHAARP(SEQ ID NO:143)
另外的G4S接头:GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO.144)
CD3 zeta变体AA
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO.145)
Axi Cel(KTE-C19)DNA(SEQ ID NO.146)
Atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatcccagacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggactaagttggaaataacaggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggcgaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttgggggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc
Axi Cel(KTE-C19)AA(SEQ ID NO.147)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
人源化抗-CD19 CAR DNA(SEQ ID NO.148)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGGATATTCAAATGACCCAGTCCCCGTCCTCCCTGAGTGCCTCCGTCGGTGACCGTGTTACGATTACCTGCCGTGCGAGCCAAGACATCTCTAAATACCTGAACTGGTATCAGCAAAAACCGGATCAGGCACCGAAACTGCTGATCAAACATACCTCACGTCTGCACTCGGGTGTGCCGAGCCGCTTTAGTGGTTCCGGCTCAGGTACCGATTACACCCTGACGATCAGCTCTCTGCAGCCGGAAGACTTTGCCACGTATTACTGCCAGCAAGGTAATACCCTGCCGTATACGTTCGGCCAAGGTACCAAACTGGAAATCAAAGGCTCGACGAGCGGCTCTGGTAAACCGGGCTCTGGTGAAGGCAGTACCAAAGGTGAAGTGCAGCTGGTTGAAAGCGGTGGTGGTCTGGTTCAACCGGGTCGTTCCCTGCGTCTGTCATGTACGGCGAGTGGTGTCTCCCTGCCGGACTATGGCGTGTCCTGGATTCGTCAGCCGCCGGGTAAAGGCCTGGAATGGATTGGTGTCATCTGGGGCAGTGAAACCACGTATTACAACTCGGCCCTGAAAAGCCGTTTCACCATCTCTCGCGATAACAGTAAAAATACGCTGTACCTGCAGATGAATAGCCTGCGCGCGGAAGACACCGCCGTTTACTACTGCGCAAAACATTACTACTACGGTGGCAGCTATGCTATGGATTACTGGGGTCAAGGCACGCTGGTCACCGTTTCGTCAGCCGCTGCCCTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCAcctagg
人源化抗-CD19 CAR AA(SEQ ID NO.149)
MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISKYLNWYQQKPDQAPKLLIKHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPYTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGVSLPDYGVSWIRQPPGKGLEWIGVIWGSETTYYNSALKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
完全人抗-CD19 CAR DNA(SEQ ID NO.150)
Atggccctgcctgtgacagctctgctgctgcccctggccctgctgctgcatgccgccagacctgagatcgtgctgacccagtctcccggcaccctgtctctcagcccaggagagagagccaccctgagctgcagagccagccagagcgtgtccagcagctacctggcctggtatcagcagaagcccggacaggcccccagactgctgatctacggcgccagctctagagccaccggcatccccgacagattcagcggcagcggcagtggcaccgacttcaccctgaccatcagcagactggaacccgaggacttcgccgtgtactactgccagcagtacggcagcagccggttcaccttcggccctggcaccaaggtggacatcaagggcagcacctccggcagcggcaagcctggctctggcgagggctctaccaagggccaggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaaacccggctctagcgtgaaggtgtcctgcaaggacagcggcggcaccttcagcagctacgccatcagctgggtgcgccaggccccaggacaggggctggaatggatgggcggcatcatccccatcttcggcaccaccaactacgcccagcagttccagggcagagtgaccatcaccgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcgaggacacagccgtgtattactgtgcccgcgaggccgtggccgccgactggctggatccttggggacagggcaccctggtgacagtgtccagcttcgtgcccgtgttcctgcccgccaagcctaccaccacccctgcccctagacctcccaccccagccccaacaatcgccagccagcctctgtccctgcggcccgaagcctgtagacctgctgccggcggagccgtgcacaccagaggcctggacttcgcctgcgatatctacatctgggcccctctggccggcacctgtggcgtgctgctgctgagcctggtgatcaccctgtactgcaaccaccggaacagaagcaagcggagccggctgctgcacagcgactacatgaacatgaccccaagacggcctggccccacccggaagcactaccagccttacgcccctcccagagacttcgccgcctaccggtccagagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctaccagcagggacagaaccagctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggccgggaccccgagatgggcggaaagcccagacggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcgcggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacctacgacgccctgcacatgcaggccctgccccccaga
完全人抗-CD19 CAR AA(SEQ ID NO.151)
MALPVTALLLPLALLLHAARPEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSRFTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKDSGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTTNYAQQFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREAVAADWLDPWGQGTLVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
MAGE A3/A6 TCR DNA(SEQ ID NO.152)
atggcatgccctggcttcctgtgggcacttgtgatctccacctgtcttgaatttagcatggctcagacagtcactcagtctcaaccagagatgtctgtgcaggaggcagagaccgtgaccctgagctgcacatatgacaccagtgagagtgattattatttattctggtacaagcagcctcccagcaggcagatgattctcgttattcgccaagaagcttataagcaacagaatgcaacagagaatcgtttctctgtgaacttccagaaagcagccaaatccttcagtctcaagatctcagactcacagctgggggatgccgcgatgtatttctgtgctctccggagctcaggaacctacaaatacatctttggaacaggcaccaggctgaaggttttagcaaatatccagaaccctgaacctgctgtgtaccagttaaaagatcctcggtctcaggacagcaccctctgcctgttcaccgactttgactcccaaatcaatgtgccgaaaaccatggaatctggaacgttcatcactgacaaaactgtgctggacatgaaagctatggattccaagagcaatggggccattgcctggagcaaccagacaagcttcacctgccaagatatcttcaaagagaccaacgccacctaccccagttcagacgttccctgtgatgccacgttgactgagaaaagctttgaaacagatatgaacctaaactttcaaaacctgtcagttatgggactccgaatcctcctgctgaaagtagccggatttaacctgctcatgacgctgaggctgtggtccagtcgggccaagcggtccggatccggagccaccaacttcagcctgctgaagcaggccggcgacgtggaggagaaccccggccccatgggcaccaggctcctcttctgggtggccttctgtctcctgggggcagatcacacaggagctggagtctcccagtcccccagtaacaaggtcacagagaagggaaaggatgtagagctcaggtgtgatccaatttcaggtcatactgccctttactggtaccgacagagcctggggcagggcctggagtttttaatttacttccaaggcaacagtgcaccagacaaatcagggctgcccagtgatcgcttctctgcagagaggactgggggatccgtctccactctgacgatccagcgcacacagcaggaggactcggccgtgtatctctgtgccagcatccggacagggccttttttctctggaaacaccatatattttggagagggaagttggctcactgttgtagaggacctgagaaacgtgaccccacccaaggtctccttgtttgagccatcaaaagcagagattgcaaacaaacaaaaggctaccctcgtgtgcttggccaggggcttcttccctgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatggcaaggaggtccacagtggggtcagcacggaccctcaggcctacaaggagagcaattatagctactgcctgagcagccgcctgagggtctctgctaccttctggcacaatcctcgaaaccacttccgctgccaagtgcagttccatgggctttcagaggaggacaagtggccagagggctcacccaaacctgtcacacagaacatcagtgcagaggcctggggccgagcagactgtggaatcacttcagcatcctatcatcagggggttctgtctgcaaccatcctctatgagatcctactggggaaggccaccctatatgctgtgctggtcagtggcctggtgctgatggctatggtcaaaagaaagaactcatga
MAGE A3/A6 TCR AA(SEQ ID NO.153)
M A C P G F L W A L V I S T C L E F S M A Q T V T Q S Q P E M S V Q EA E T V T L S C T Y D T S E S D Y Y L F W Y K Q P P S R Q M I L V I R Q E A YK Q Q N A T E N R F S V N F Q K A A K S F S L K I S D S Q L G D A A M Y F C AL R S S G T Y K Y I F G T G T R L K V L A N I Q N P E P A V Y Q L K D P R S QD S T L C L F T D F D S Q I N V P K T M E S G T F I T D K T V L D M K A M D SK S N G A I A W S N Q T S F T C Q D I F K E T N A T Y P S S D V P C D A T L TE K S F E T D M N L N F Q N L S V M G L R I L L L K V A G F N L L M T L R L WS S R A K R S G S G A T N F S L L K Q A G D V E E N P G PM G T R L L F W V AF C L L G A D H T G A G V S Q S P S N K V T E K G K D V E L R C D P I S G H TA L Y W Y R Q S L G Q G L E F L I Y F Q G N S A P D K S G L P S D R F S A E RT G G S V S T L T I Q R T Q Q E D S A V Y L C A SI R T G P F F S G N T I Y FG E G S W L T V V E D L R N V T P P K V S L F E P S K A E I A N K Q K A T L VC L A R G F F P D H V E L S W W V N G K E V H S G V S T D P Q A Y K E S N Y SY C L S S R L R V S A T F W H N P R N H F R C Q V Q F H G L S E E D K W P E GS P K P V T Q N I S A E A W G R A D C G I T S A S Y H Q G V L S A T I L Y E IL L G K A T L Y A V L V S G L V L M A M V K R K N S终止
抗-CLL-1 CAR DNA(SEQ ID NO.154)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTCCAACTGCAAGAAAGCGGACCCGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACACTTAGTCTGACGTGCACGGTCAGTGGCGGCTCCATCTCCTCCTATTATTGGTCATGGATACGACAACCCCCAGGTAAGGGCCTGGAATGGATTGGCTATATCTACTATTCAGGAAGCACGAACTACAATCCCAGCCTGAAGTCCCGAGTGACAATTTCAGTAGATACCAGTAAAAACCAGTTCAGTCTTAAACTGTCAAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCTGTGTATTACTGCGTCTCACTGGTGTATTGTGGAGGGGATTGTTATAGCGGGTTCGATTATTGGGGACAGGGAACCCTGGTGACTGTATCTTCCGGCGGCGGCGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGCGGTGGGGGTTCCGATATTCAACTGACACAATCCCCCAGCTCACTCAGCGCCAGCGTGGGGGACAGGGTTAGCTTTACCTGTCAAGCCTCTCAGGATATAAATAACTTTCTGAACTGGTATCAACAGAAGCCTGGGAAGGCGCCCAAACTCCTGATCTATGATGCGTCCAACCTGGAAACTGGCGTGCCTTCACGCTTTAGCGGCTCTGGCAGTGGTACAGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTTCAGCCGGAGGACATCGCCACATATTACTGTCAACAGTACGGAAACTTGCCCTTTACTTTTGGAGGCGGCACCAAAGTTGAAATCAAAAGGGCCGCTGCCCTGGATAACGAAAAGAGCAATGGGACTATAATACATGTTAAAGGAAAACACCTGTGTCCATCTCCCCTGTTCCCTGGACCGTCAAAGCCATTTTGGGTGCTCGTGGTTGTCGGTGGCGTTCTCGCCTGTTATAGCTTGCTGGTGACAGTAGCCTTCATTATCTTTTGGGTGAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCCGAGTGAAATTTTCTAGATCAGCTGATGCTCCCGCCTATCAGCAGGGACAGAATCAACTTTACAATGAGCTGAACCTGGGTCGCAGAGAAGAGTACGACGTTTTGGACAAACGCCGGGGCCGAGATCCTGAGATGGGGGGGAAGCCGAGAAGGAAGAATCCTCAAGAAGGCCTGTACAACGAGCTTCAAAAAGACAAAATGGCTGAGGCGTACTCTGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGACGAGGCAAGGGTCACGATGGCTTGTATCAGGGCCTGAGTACAGCCACAAAGGACACCTATGACGCCCTCCACATGCAGGCACTGCCCCCACGC抗-CLL-1 CAR AA(SEQ ID NO.155)
MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
抗-BCMA CAR DNA(SEQ ID NO.156)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCGCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTACTGCGTCAAGGGGCCGTTGCAGGAGCCGCCATACGATTATGGAATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCAGGGTCTACATCCGGCTCCGGGAAGCCCGGAAGTGGCGAAGGTAGTACAAAGGGGGAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAGCGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCACCACGTCTGGCCTCTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAACGGGCCGCTGCCCTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGCAGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG
抗-BCMA CAR AA(SEQ ID NO.157)
MALPVTALLLPLALLLHAARPQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR DNA(SEQ ID NO.158)
atgggcaccagactgttcttttatgtggccctgtgtctgctgtggaccggccacatggatgccggaattacacagagccccagacacaaagtgaccgagacaggcacccctgtgacactgagatgccaccagaccgagaaccaccgctacatgtactggtacagacaggatccaggccacggcctgagactgatccactacagctacggcgtgaaggacaccgacaagggcgaagtgtctgacggctacagcgtgtccagaagcaagaccgaggatttcctgctgaccctggaaagcgccacaagcagccagaccagcgtgtacttttgtgccatcagcggctacaagaacaccgaggcctttttcggccaaggcaccaggctgacagtggtggaagatctgaagaacgtgttcccacctgaggtggccgtgtttgagccttctgaggccgagatcagccacacacagaaagccacactcgtgtgcctggccaccggcttttatcccgatcacgtggaactgtcttggtgggtcaacggcaaagaggtgcacagcggcgttagcacagaccctcagcctctgaaagagcagcccgctctgaacgacagcagatactgtctgagcagcagactgagagtgtccgccaccttctggcagaaccccagaaaccacttcagatgccaggtgcagttctacggcctgtccgagaatgacgagtggacccaggatagagccaagccagtgacacagattgtgtctgccgaagcctggggcagagccgattgtggctttacaagcgagagctaccagcagggcgtgctgtctgccacaatcctgtatgagatcctgctgggcaaagccactctgtacgctgtgctggtgtctgccctggtgctgatggccatggtcaagagaaaggacagcagaggcagagccaagagatctggcagcggcgccacaaactttagcctgctgaaacaggccggcgacgtggaagagaaccctggacctatgaagtccctgcgggtgctgctggttattctgtggctgcagctgagctgggtttggagccagggacagcaagtgatgcagatccctcagtaccagcacgtgcaagaaggcgaggacttcaccacctactgcaacagcagcacaaccctgagcaacatccagtggtacaagcagaggcctggcgggcaccctgtgtttctgatccagctggttaagagcggcgaagtgaagaagcagaagcggctgacctttcagttcggcgaggccaagaagaacagcagcctgcacattaccgccacacagaccaccgacgtgggcacatatttttgcgctggcagagaaggcggcagcgagaagctggtttttggcaagggcaccaaactgaccgtgaatcccgacattcagaaccccgatccagccgtgtaccagctgagagacagcaagagcagcgacaagagcgtgtgtctgttcaccgacttcgactcccagaccaatgtgtcccagagcaaggactccgacgtgtacatcaccgataagaccgtgctggacatgcggagcatggacttcaagagcaatagcgccgtggcttggagcaacaagagcgactttgcctgcgccaacgccttcaacaacagcatcatccccgaggacacattcttcccaagtcctgagagcagctgcgacgtgaagctggtggaaaagagcttcgagacagacaccaacctgaacttccagaacctgagcgtgatcggcttcagaatcctgctgctgaaggtggccggcttcaacctgctgatgactctgagactgtggtccagctgaattcggatccaagcttaggcctgctcgctttcttgctgtcccatttctattaaaggttcctttgttc
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR AA(SEQ ID NO.159)
MGTRLFFYVALCLLWTGHMDAGITQSPRHKVTETGTPVTLRCHQTENHRYMYWYRQDPGHGLRLIHYSYGVKDTDKGEVSDGYSVSRSKTEDFLLTLESATSSQTSVYFCAISGYKNTEAFFGQGTRLTVVEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAGREGGSEKLVFGKGTKLTVNPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR DNA(SEQ ID NO.160)
atgggacctggattgctttgttgggccctgctgtgtctgcttggagctggacttgtggatgccggcgtgacacagtctcccacacacctgatcaagaccagaggccagcaagtgaccctgagatgtagccctaagagcggccacgacaccgtgtcttggtatcagcaggctcttggccagggacctcagttcatcttccagtactacgaggaagaggaacggcagcggggcaacttccctgatagattctctggccatcagttccccaactacagcagcgagctgaacgtgaacgctctgctgctgggcgatagcgccctgtatctgtgtgccagttctcttggttggagaggcggcagatacaacgagcagttctttggccctggcaccagactgaccgtgctggaagatctgaagaacgtgttcccacctgaggtggccgtgtttgagccttctgaggccgagatcagccacacacagaaagccacactcgtgtgcctggccaccggcttttatcccgatcacgtggaactgtcttggtgggtcaacggcaaagaggtgcacagcggcgttagcacagaccctcagcctctgaaagagcagcccgctctgaacgacagcagatactgtctgagcagcagactgagagtgtccgccaccttctggcagaaccccagaaaccacttcagatgccaggtgcagttctacggcctgtccgagaatgacgagtggacccaggatagagccaagccagtgacacagattgtgtctgccgaagcctggggcagagccgattgtggctttacaagcgagagctaccagcagggcgtgctgtctgccacaatcctgtatgagatcctgctgggcaaagccactctgtacgctgtgctggtgtctgccctggtgctgatggccatggtcaagagaaaggacagcagaggcagagccaagagatctggcagcggcgccacaaactttagcctgctgaaacaggccggcgacgtggaagagaaccctggacctatgaagtccctgcgggtgctgctggttattctgtggctgcagctgagctgggtttggagccagggacagaacatcgaccagcctaccgagatgacagccaccgaaggcgccatcgtgcagatcaattgcacctaccagaccagcggcttcaacggcctgttctggtatcaacagcatgccggcgaggcccctaccttcctgagctataatgtgctggacggcctggaagaaaagggcagattcagcagcttcctgtccagaagcaagggctacagctacctgctgctgaaagaactccagatgaaggacagcgcctcctacctgtgtgcctccgtggatggaaacaacagactggccttcggcaagggcaaccaggtggtggtcatccccgacattcagaaccccgatccagccgtgtaccagctgagagacagcaagagcagcgacaagagcgtgtgtctgttcaccgacttcgactcccagaccaatgtgtcccagagcaaggactccgacgtgtacatcaccgataagaccgtgctggacatgcggagcatggacttcaagagcaatagcgccgtggcttggagcaacaagagcgactttgcctgcgccaacgccttcaacaacagcatcatccccgaggacacattcttcccaagtcctgagagcagctgcgacgtgaagctggtggaaaagagcttcgagacagacaccaacctgaacttccagaacctgagcgtgatcggcttcagaatcctgctgctgaaggtggccggcttcaacctgctgatgactctgagactgtggtccagctgaattcggatccaagcttaggcctgctcgctttcttgctgtcccatttctattaaaggttcctttgttc
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR AA(SEQ ID NO.161)
MGPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIPDIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
Axi Cel(KTE-C19)前导序列(CSF2RA)DNA(SEQ ID NO.162)
Atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatccca
Axi Cel(KTE-C19)前导序列(CSF2RA)AA(SEQ ID NO.163)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP
Axi Cel(KTE-C19)scFv重链DNA(SEQ ID NO.164)
gacatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaaatatttaaattggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctaccatacatcaagattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattagcaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttccgtacacgttcggaggggggactaagttggaaataaca
Axi Cel(KTE-C19)scFv重链AA(SEQ ID NO.165)
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
Axi Cel(KTE-C19)接头(Whitlow)DNA(SEQ ID NO.166)
ggctccacctctggatccggcaagcccggatctggcgagggatccaccaagggc
Axi Cel(KTE-C19)接头(Whitlow)AA(SEQ ID NO.167)
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
Axi Cel(KTE-C19)scFv轻链DNA(SEQ ID NO.168)
gaggtgaaactgcaggagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccgtcacatgcactgtctcaggggtctcattacccgactatggtgtaagctggattcgccagcctccacgaaagggtctggagtggctgggagtaatatggggtagtgaaaccacatactataattcagctctcaaatccagactgaccatcatcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctgcaaactgatgacacagccatttactactgtgccaaacattattactacggtggtagctatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca
Axi Cel(KTE-C19)scFv轻链AA(SEQ ID NO.169)
EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
Axi Cel(KTE-C19)微型间隔物DNA(SEQ ID NO.170)
gcggccgca
Axi Cel(KTE-C19)微型间隔物AA(SEQ ID NO.171)
AAA
Axi Cel(KTE-C19)CD28间隔物(胞外/CD28的TM区)DNA(SEQ ID NO.172)
attgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttgggggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtg
Axi Cel(KTE-C19)CD28间隔物(胞外/CD28的TM区)AA(SEQ ID NO.173)
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
Axi Cel(KTE-C19)CD28共刺激(CD28的胞内区)DNA(SEQ ID NO.174)
aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcc
Axi Cel(KTE-C19)CD28共刺激(CD28的胞内区)AA(SEQ ID NO.175)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
Axi Cel(KTE-C19)CD3 zeta DNA(SEQ ID NO.176)
agagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc
Axi Cel(KTE-C19)CD3 zeta AA(SEQ ID NO.177)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR1(Chothia)(SEQ ID NO.178)
RASQDISKYLN
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR2(Chothia)(SEQ ID NO.179)
HTSRLHS
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR3(Chothia)(SEQ ID NO.180)
QQGNTLPYT
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR1(Chothia)(SEQ ID NO.181)
GVSLPDY
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR2(Chothia)(SEQ ID NO.182)
WGSET
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR3(Chothia)(SEQ ID NO.183)
HYYYGGSYAMDY
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR1(Kabat)(SEQ ID NO.184)
RASQDISKYLN
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR2(Kabat)(SEQ ID NO.185)
HTSRLHS
Axi Cel(KTE-C19)VL CDR3(Kabat)(SEQ ID NO.186)
QQGNTLPYT
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR1(Kabat)(SEQ ID NO.187)
DYGVS
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR2(Kabat)(SEQ ID NO.188)
VIWGSETTYYNSALKS
Axi Cel(KTE-C19)VH CDR3(Kabat)(SEQ ID NO.189)
HYYYGGSYAMDY
人源化抗-CD19 CAR CD8前导序列DNA(SEQ ID NO.190)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCG
人源化抗-CD19 CAR CD8前导序列AA(SEQ ID NO.191)
MALPVTALLLPLALLLHAARP
人源化抗-CD19 CAR scFv重链DNA(SEQ ID NO.192)
GATATTCAAATGACCCAGTCCCCGTCCTCCCTGAGTGCCTCCGTCGGTGACCGTGTTACGATTACCTGCCGTGCGAGCCAAGACATCTCTAAATACCTGAACTGGTATCAGCAAAAACCGGATCAGGCACCGAAACTGCTGATCAAACATACCTCACGTCTGCACTCGGGTGTGCCGAGCCGCTTTAGTGGTTCCGGCTCAGGTACCGATTACACCCTGACGATCAGCTCTCTGCAGCCGGAAGACTTTGCCACGTATTACTGCCAGCAAGGTAATACCCTGCCGTATACGTTCGGCCAAGGTACCAAACTGGAAATCAAA
人源化抗-CD19 CAR scFv重链AA(SEQ ID NO.193)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISKYLNWYQQKPDQAPKLLIKHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPYTFGQGTKLEIK
人源化抗-CD19 CAR接头(Whitlow)DNA(SEQ ID NO.194)
GGCTCGACGAGCGGCTCTGGTAAACCGGGCTCTGGTGAAGGCAGTACCAAAGGT
人源化抗-CD19 CAR接头(Whitlow)AA(SEQ ID NO.195)
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
人源化抗-CD19 CAR scFv轻链DNA(SEQ ID NO.196)
GAAGTGCAGCTGGTTGAAAGCGGTGGTGGTCTGGTTCAACCGGGTCGTTCCCTGCGTCTGTCATGTACGGCGAGTGGTGTCTCCCTGCCGGACTATGGCGTGTCCTGGATTCGTCAGCCGCCGGGTAAAGGCCTGGAATGGATTGGTGTCATCTGGGGCAGTGAAACCACGTATTACAACTCGGCCCTGAAAAGCCGTTTCACCATCTCTCGCGATAACAGTAAAAATACGCTGTACCTGCAGATGAATAGCCTGCGCGCGGAAGACACCGCCGTTTACTACTGCGCAAAACATTACTACTACGGTGGCAGCTATGCTATGGATTACTGGGGTCAAGGCACGCTGGTCACCGTTTCGTCA
人源化抗-CD19 CAR scFv轻链AA(SEQ ID NO.197)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGVSLPDYGVSWIRQPPGKGLEWIGVIWGSETTYYNSALKSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTLVTVSS
人源化抗-CD19 CAR微型间隔物DNA(SEQ ID NO.198)
GCCGCTGCC
人源化抗-CD19 CAR微型间隔物AA(SEQ ID NO.199)
AAA
人源化抗-CD19 CAR CD28T间隔物(胞外/CD28的TM区)DNA(SEQ ID NO.200)
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTT
人源化抗-CD19 CAR CD28T间隔物(extra/CD28的TM区)AA(SEQ ID NO.201)
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
人源化抗-CD19 CAR CD28共刺激(CD28的胞内区)DNA(SEQ ID NO.202)
AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC
人源化抗-CD19 CAR共刺激(CD28的胞内区)AA(SEQ ID NO.203)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
人源化抗-CD19 CAR CD3 zeta DNA(SEQ ID NO.204)
AGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCAcctagg
人源化抗-CD19 CAR CD3 zeta AA(SEQ ID NO.205)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR1(Chothia)(SEQ ID NO.206)
RASQSVSSSYLA
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR2(Chothia)(SEQ ID NO.207)
GASSRAT
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR3(Chothia)(SEQ ID NO.208)
QQYGSSRFT
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR1(Chothia)(SEQ ID NO.209)
GGTFSSY
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR2(Chothia)(SEQ ID NO.210)
IPIFGT
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR3(Chothia)(SEQ ID NO.211)
EAVAADWLDP
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR1(Kabat)(SEQ ID NO.212)
RASQSVSSSYLA
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR2(Kabat)(SEQ ID NO.213)
GASSRAT
人源化抗-CD19 CAR VL完全人抗-CD19 CDR3(Kabat)(SEQ ID NO.214)
QQYGSSRFT
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR1(Kabat)(SEQ ID NO.215)
SYAIS
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR2(Kabat)(SEQ ID NO.216)
GIIPIFGTTNYAQQFQG
人源化抗-CD19 CAR VH完全人抗-CD19 CDR3(Kabat)(SEQ ID NO.217)
EAVAADWLDP
完全人抗-CD19 CAR前导序列(CD8a)DNA(SEQ ID NO.218)
Atggccctgcctgtgacagctctgctgctgcccctggccctgctgctgcatgccgccagacct
完全人抗-CD19 CAR前导序列(CD8a)AA(SEQ ID NO.219)
MALPVTALLLPLALLLHAARP
完全人抗-CD19 CAR scFv轻链DNA(SEQ ID NO.220)
gagatcgtgctgacccagtctcccggcaccctgtctctcagcccaggagagagagccaccctgagctgcagagccagccagagcgtgtccagcagctacctggcctggtatcagcagaagcccggacaggcccccagactgctgatctacggcgccagctctagagccaccggcatccccgacagattcagcggcagcggcagtggcaccgacttcaccctgaccatcagcagactggaacccgaggacttcgccgtgtactactgccagcagtacggcagcagccggttcaccttcggccctggcaccaaggtggacatcaag
完全人抗-CD19 CAR scFv轻链AA(SEQ ID NO.221)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSRFTFGPGTKVDIK
完全人抗-CD19 CAR接头(Whitlow)DNA(SEQ ID NO.222)
ggcagcacctccggcagcggcaagcctggctctggcgagggctctaccaagggc
完全人抗-CD19 CAR接头(Whitlow)AA(SEQ ID NO.223)
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
完全人抗-CD19 CAR scFv重链DNA(SEQ ID NO.224)
caggtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaaacccggctctagcgtgaaggtgtcctgcaaggacagcggcggcaccttcagcagctacgccatcagctgggtgcgccaggccccaggacaggggctggaatggatgggcggcatcatccccatcttcggcaccaccaactacgcccagcagttccagggcagagtgaccatcaccgccgacgagagcaccagcaccgcctacatggaactgagcagcctgcggagcgaggacacagccgtgtattactgtgcccgcgaggccgtggccgccgactggctggatccttggggacagggcaccctggtgacagtgtccagc
完全人抗-CD19 CAR scFv重链AA(SEQ ID NO.225)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKDSGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTTNYAQQFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREAVAADWLDPWGQGTLVTVSS
完全人抗-CD19 CAR CD8a间隔物和TM区DNA(SEQ ID NO.226)
ttcgtgcccgtgttcctgcccgccaagcctaccaccacccctgcccctagacctcccaccccagccccaacaatcgccagccagcctctgtccctgcggcccgaagcctgtagacctgctgccggcggagccgtgcacaccagaggcctggacttcgcctgcgatatctacatctgggcccctctggccggcacctgtggcgtgctgctgctgagcctggtgatcaccctgtactgcaaccaccggaac
完全人抗-CD19 CAR CD8a间隔物和TM区AA(SEQ ID NO.227)
FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN
完全人抗-CD19 CAR CD28共刺激DNA(SEQ ID NO.228)
agaagcaagcggagccggctgctgcacagcgactacatgaacatgaccccaagacggcctggccccacccggaagcactaccagccttacgcccctcccagagacttcgccgcctaccggtcc
完全人抗-CD19 CAR CD28共刺激AA(SEQ ID NO.229)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
完全人抗-CD19 CAR CD3 zeta DNA(SEQ ID NO.230)
agagtgaagttcagcagatccgccgacgcccctgcctaccagcagggacagaaccagctgtacaacgagctgaacctgggcagacgggaagagtacgacgtgctggacaagcggagaggccgggaccccgagatgggcggaaagcccagacggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcgcggcaagggccacgatggcctgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggacacctacgacgccctgcacatgcaggccctgccccccaga
完全人抗-CD19 CAR CD3 zeta AA(SEQ ID NO.231)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
MAGE A3/A6 TCR构建体–可变alpha链–AV38-2 DNA(SEQ ID NO.232)
atggcatgccctggcttcctgtgggcacttgtgatctccacctgtcttgaatttagcatggctcagacagtcactcagtctcaaccagagatgtctgtgcaggaggcagagaccgtgaccctgagctgcacatatgacaccagtgagagtgattattatttattctggtacaagcagcctcccagcaggcagatgattctcgttattcgccaagaagcttataagcaacagaatgcaacagagaatcgtttctctgtgaacttccagaaagcagccaaatccttcagtctcaagatctcagactcacagctgggggatgccgcgatgtatttctgtgct
MAGE A3/A6 TCR构建体–可变alpha链–AV38-2 AA(SEQ ID NO.233)
M A C P G F L W A L V I S T C L E F S M A Q T V T Q S Q P E M S V Q EA E T V T L S C T Y D T S E S D Y Y L F W Y K Q P P S R Q M I L V I R Q E A YK Q Q N A T E N R F S V N F Q K A A K S F S L K I S D S Q L G D A A M Y F C AL R S S G T Y K Y I F G T G T R L K V L A N
MAGE A3/A6 TCR构建体–TRAJ40 DNA(SEQ ID NO.234)
ctccggagctcaggaacctacaaatacatctttggaacaggcaccaggctgaaggttttagcaaat
MAGE A3/A6 TCR构建体–鼠恒定alpha–鼠CA DNA(SEQ ID NO.235)
atccagaaccctgaacctgctgtgtaccagttaaaagatcctcggtctcaggacagcaccctctgcctgttcaccgactttgactcccaaatcaatgtgccgaaaaccatggaatctggaacgttcatcactgacaaaactgtgctggacatgaaagctatggattccaagagcaatggggccattgcctggagcaaccagacaagcttcacctgccaagatatcttcaaagagaccaacgccacctaccccagttcagacgttccctgtgatgccacgttgactgagaaaagctttgaaacagatatgaacctaaactttcaaaacctgtcagttatgggactccgaatcctcctgctgaaagtagccggatttaacctgctcatgacgctgaggctgtggtccagt
MAGE A3/A6 TCR构建体–鼠恒定alpha–鼠CA AA(SEQ ID NO.236)
I Q N P E P A V Y Q L K D P R S Q D S T L C L F T D F D S Q I N V P KT M E S G T F I T D K T V L D M K A M D S K S N G A I A W S N Q T S F T C Q DI F K E T N A T Y P S S D V P C D A T L T E K S F E T D M N L N F Q N L S V MG L R I L L L K V A G F N L L M T L R L W S S
MAGE A3/A6 TCR构建体–弗林蛋白酶-SG SG-P2A DNA(SEQ ID NO.237)
cgggccaagcggtccggatccggagccaccaacttcagcctgctgaagcaggccggcgacgtggaggagaaccccggcccc
MAGE A3/A6 TCR构建体–弗林蛋白酶-SG SG-P2A AA(SEQ ID NO.238)
R A K R S G S G A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P
MAGE A3/A6 TCR构建体–可变beta链–BV7-2 DNA(SEQ ID NO.239)
atgggcaccaggctcctcttctgggtggccttctgtctcctgggggcagatcacacaggagctggagtctcccagtcccccagtaacaaggtcacagagaagggaaaggatgtagagctcaggtgtgatccaatttcaggtcatactgccctttactggtaccgacagagcctggggcagggcctggagtttttaatttacttccaaggcaacagtgcaccagacaaatcagggctgcccagtgatcgcttctctgcagagaggactgggggatccgtctccactctgacgatccagcgcacacagcaggaggactcggccgtgtatctctgtgccagca
MAGE A3/A6 TCR构建体–可变beta链–BV7-2 AA(SEQ ID NO.240)
M G T R L L F W V A F C L L G A D H T G A G V S Q S P S N K V T E K GK D V E L R C D P I S G H T A L Y W Y R Q S L G Q G L E F L I Y F Q G N S A PD K S G L P S D R F S A E R T G G S V S T L T I Q R T Q Q E D S A V Y L C ASI R T G P F F S G N T I Y F G E G S W L T V V E
MAGE A3/A6 TCR构建体–TRBJ1-3 DNA(SEQ ID NO.241)
tccggacagggccttttttctctggaaacaccatatattttggagagggaagttggctcactgttgtagag
MAGE A3/A6 TCR构建体–鼠恒定beta–鼠CB1 DNA(SEQ ID NO.242)
gacctgagaaacgtgaccccacccaaggtctccttgtttgagccatcaaaagcagagattgcaaacaaacaaaaggctaccctcgtgtgcttggccaggggcttcttccctgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatggcaaggaggtccacagtggggtcagcacggaccctcaggcctacaaggagagcaattatagctactgcctgagcagccgcctgagggtctctgctaccttctggcacaatcctcgaaaccacttccgctgccaagtgcagttccatgggctttcagaggaggacaagtggccagagggctcacccaaacctgtcacacagaacatcagtgcagaggcctggggccgagcagactgtggaatcacttcagcatcctatcatcagggggttctgtctgcaaccatcctctatgagatcctactggggaaggccaccctatatgctgtgctggtcagtggcctggtgctgatggctatggtcaaaagaaagaactcatga
MAGE A3/A6 TCR构建体–鼠恒定beta–鼠CB1 AA(SEQ ID NO.243)
D L R N V T P P K V S L F E P S K A E I A N K Q K A T L V C L A R G FF P D H V E L S W W V N G K E V H S G V S T D P Q A Y K E S N Y S Y C L S S RL R V S A T F W H N P R N H F R C Q V Q F H G L S E E D K W P E G S P K P V TQ N I S A E A W G R A D C G I T S A S Y H Q G V L S A T I L Y E I L L G K A TL Y A V L V S G L V L M A M V K R K N S终止
MAGE A3/A6 TCR Va CDR1(SEQ ID NO.244)
TYDTSESDYYLF
MAGE A3/A6 TCR Va CDR2(SEQ ID NO.245)
QEAYKQQ
MAGE A3/A6 TCR Va CDR3(SEQ ID NO.246)
ALRSSGTYKYI
MAGE A3/A6 TCR Vb CDR1(SEQ ID NO.247)
DPISGHTALY
MAGE A3/A6 TCR Vb CDR2(SEQ ID NO.248)
FQGNSAPDKSG
MAGE A3/A6 TCR Vb CDR3(SEQ ID NO.249)
ASIRTGPFFSGNTIY
抗-CLL-1 CAR CD8前导序列DNA(SEQ ID NO.250)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCG
抗-CLL-1 CAR CD8前导序列AA(SEQ ID NO.251)
MALPVTALLLPLALLLHAARP
抗-CLL-1 CAR scFv重链DNA(SEQ ID NO.252)
CAGGTCCAACTGCAAGAAAGCGGACCCGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACACTTAGTCTGACGTGCACGGTCAGTGGCGGCTCCATCTCCTCCTATTATTGGTCATGGATACGACAACCCCCAGGTAAGGGCCTGGAATGGATTGGCTATATCTACTATTCAGGAAGCACGAACTACAATCCCAGCCTGAAGTCCCGAGTGACAATTTCAGTAGATACCAGTAAAAACCAGTTCAGTCTTAAACTGTCAAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCTGTGTATTACTGCGTCTCACTGGTGTATTGTGGAGGGGATTGTTATAGCGGGTTCGATTATTGGGGACAGGGAACCCTGGTGACTGTATCTTCC
抗-CLL-1 CAR scFv重链AA(SEQ ID NO.253)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCVSLVYCGGDCYSGFDYWGQGTLVTVSS
抗-CLL-1 CAR G4S接头DNA(SEQ ID NO.254)
GGCGGCGGCGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGCGGTGGGGGTTCC
抗-CLL-1 CAR G4S接头AA(SEQ ID NO.255)
GGGGSGGGGSGGGGS
抗-CLL-1 CAR scFv轻链DNA(SEQ ID NO.256)
GATATTCAACTGACACAATCCCCCAGCTCACTCAGCGCCAGCGTGGGGGACAGGGTTAGCTTTACCTGTCAAGCCTCTCAGGATATAAATAACTTTCTGAACTGGTATCAACAGAAGCCTGGGAAGGCGCCCAAACTCCTGATCTATGATGCGTCCAACCTGGAAACTGGCGTGCCTTCACGCTTTAGCGGCTCTGGCAGTGGTACAGACTTCACTTTTACCATCTCTTCACTTCAGCCGGAGGACATCGCCACATATTACTGTCAACAGTACGGAAACTTGCCCTTTACTTTTGGAGGCGGCACCAAAGTTGAAATCAAAAGG
抗-CLL-1 CAR scFv轻链AA(SEQ ID NO.257)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVSFTCQASQDINNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYGNLPFTFGGGTKVEIKR
抗-CLL-1 CAR微型间隔物DNA(SEQ ID NO.258)
GCCGCTGCC
抗-CLL-1 CAR微型间隔物AA(SEQ ID NO.259)
AAA
抗-CLL-1 CAR CD28T(胞外/CD28的TM区)DNA(SEQ ID NO.260)
CTGGATAACGAAAAGAGCAATGGGACTATAATACATGTTAAAGGAAAACACCTGTGTCCATCTCCCCTGTTCCCTGGACCGTCAAAGCCATTTTGGGTGCTCGTGGTTGTCGGTGGCGTTCTCGCCTGTTATAGCTTGCTGGTGACAGTAGCCTTCATTATCTTTTGGGTG
抗-CLL-1 CAR CD28T(胞外/CD28的TM区)AA(SEQ ID NO.261)
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
抗-CLL-1 CAR CD28(CD28的胞内共刺激区)DNA(SEQ ID NO.262)
AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC
抗-CLL-1 CAR CD28(CD28的胞内共刺激区)AA(SEQ ID NO.263)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
抗-CLL-1 CAR CD3 zeta DNA(SEQ ID NO.264)
CGAGTGAAATTTTCTAGATCAGCTGATGCTCCCGCCTATCAGCAGGGACAGAATCAACTTTACAATGAGCTGAACCTGGGTCGCAGAGAAGAGTACGACGTTTTGGACAAACGCCGGGGCCGAGATCCTGAGATGGGGGGGAAGCCGAGAAGGAAGAATCCTCAAGAAGGCCTGTACAACGAGCTTCAAAAAGACAAAATGGCTGAGGCGTACTCTGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGACGAGGCAAGGGTCACGATGGCTTGTATCAGGGCCTGAGTACAGCCACAAAGGACACCTATGACGCCCTCCACATGCAGGCACTGCCCCCACGC
抗-CLL-1 CAR CD3 zeta AA(SEQ ID NO.265)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
CLL scFv(24C1)VL CDR1(SEQ ID NO.266)
QASQDINNFLN
CLL scFv(24C1)VL CDR2(SEQ ID NO.267)
DASNLET
CLL scFv(24C1)VL CDR3(SEQ ID NO.268)
QQYGNLPFT
CLL scFv(24C1)VH CDR1(SEQ ID NO.269)
GGSISSY
CLL scFv(24C1)VH CDR2(SEQ ID NO.270)
YYSGS
CLL scFv(24C1)VH CDR3(SEQ ID NO.271)
LVYCGGDCYSGFDY
抗-BCMA CAR前导序列(CD8a)DNA(SEQ ID NO.272)
ATGGCACTCCCCGTAACTGCTCTGCTGCTGCCGTTGGCATTGCTCCTGCACGCCGCACGCCCG
抗-BCMA CAR前导序列(CD8a)AA(SEQ ID NO.273)
MALPVTALLLPLALLLHAARP
抗-BCMA CAR scFv重链DNA(SEQ ID NO.274)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTACTGCGTCAAGGGGCCGTTGCAGGAGCCGCCATACGATTATGGAATGGACGTATGGGGCCAGGGAACAACTGTCACCGTCTCCTCA
抗-BCMA CAR scFv重链AA(SEQ ID NO.275)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSS
抗-BCMA CAR接头(Whitlow)DNA(SEQ ID NO.276)
GGGTCTACATCCGGCTCCGGGAAGCCCGGAAGTGGCGAAGGTAGTACAAAGGGG
抗-BCMA CAR接头(Whitlow)AA(SEQ ID NO.277)
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
抗-BCMA CAR scFv轻链DNA(SEQ ID NO.278)
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATAGCGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCACCACGTCTGGCCTCTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAACGG
抗-BCMA CAR scFv轻链AA(SEQ ID NO.279)
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKR
抗-BCMA CAR微型间隔物DNA(SEQ ID NO.280)
GCCGCTGCC
抗-BCMA CAR微型间隔物AA(SEQ ID NO.281)
AAA
抗-BCMA CAR CD28T间隔物DNA(SEQ ID NO.282)
CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTT
抗-BCMA CAR CD28T间隔物AA(SEQ ID NO.283)
LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
抗-BCMA CAR CD28共刺激区DNA(SEQ ID NO.284)
AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC
抗-BCMA CAR CD28共刺激区AA(SEQ ID NO.285)
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
抗-BCMA CAR CD3 zeta DNA(SEQ ID NO.286)
AGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG
抗-BCMA CAR CD3 zeta AA(SEQ ID NO.287)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
抗-BCMA CAR VL CDR1(SEQ ID NO.288)
RASQSVSSNLA
抗-BCMA CAR VL CDR2(SEQ ID NO.289)
SASTRAT
抗-BCMA CAR VL CDR3(SEQ ID NO.290)
QQHHVWPLTF
抗-BCMA CAR VH CDR1(SEQ ID NO.291)
GFTFSSY
抗-BCMA CAR VH CDR2(SEQ ID NO.292)
VISYDGSNKYYADSVKG
抗-BCMA CAR VH CDR3(SEQ ID NO.293)
VKGPLQEPPYDYGMDV
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链可变区DNA(SEQ ID NO.294)
atgggcaccagactgttcttttatgtggccctgtgtctgctgtggaccggccacatggatgccggaattacacagagccccagacacaaagtgaccgagacaggcacccctgtgacactgagatgccaccagaccgagaaccaccgctacatgtactggtacagacaggatccaggccacggcctgagactgatccactacagctacggcgtgaaggacaccgacaagggcgaagtgtctgacggctacagcgtgtccagaagcaagaccgaggatttcctgctgaccctggaaagcgccacaagcagccagaccagcgtgtacttttgtgccatcagcggctacaagaacaccgaggcctttttcggccaaggcaccaggctgacagtggtg
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链可变区AA(SEQ ID NO.295)
MGTRLFFYVALCLLWTGHMDAGITQSPRHKVTETGTPVTLRCHQTENHRYMYWYRQDPGHGLRLIHYSYGVKDTDKGEVSDGYSVSRSKTEDFLLTLESATSSQTSVYFCAISGYKNTEAFFGQGTRLTVV
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链恒定区DNA(SEQ ID NO.296)
gaagatctgaagaacgtgttcccacctgaggtggccgtgtttgagccttctgaggccgagatcagccacacacagaaagccacactcgtgtgcctggccaccggcttttatcccgatcacgtggaactgtcttggtgggtcaacggcaaagaggtgcacagcggcgttagcacagaccctcagcctctgaaagagcagcccgctctgaacgacagcagatactgtctgagcagcagactgagagtgtccgccaccttctggcagaaccccagaaaccacttcagatgccaggtgcagttctacggcctgtccgagaatgacgagtggacccaggatagagccaagccagtgacacagattgtgtctgccgaagcctggggcagagccgattgtggctttacaagcgagagctaccagcagggcgtgctgtctgccacaatcctgtatgagatcctgctgggcaaagccactctgtacgctgtgctggtgtctgccctggtgctgatggccatggtcaagagaaaggacagcagaggc
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链恒定区AA(SEQ ID NO.297)
EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–P2A肽(具有弗林蛋白酶切割位点和接头)DNA(SEQ ID NO.298)
agagccaagagatctggcagcggcgccacaaactttagcctgctgaaacaggccggcgacgtggaagagaaccctggacctC185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–P2A肽(具有弗林蛋白酶切割位点和接头)AA(SEQ ID NO.299)
RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链可变区DNA(SEQ ID NO.300)
atgaagtccctgcgggtgctgctggttattctgtggctgcagctgagctgggtttggagccagggacagcaagtgatgcagatccctcagtaccagcacgtgcaagaaggcgaggacttcaccacctactgcaacagcagcacaaccctgagcaacatccagtggtacaagcagaggcctggcgggcaccctgtgtttctgatccagctggttaagagcggcgaagtgaagaagcagaagcggctgacctttcagttcggcgaggccaagaagaacagcagcctgcacattaccgccacacagaccaccgacgtgggcacatatttttgcgctggcagagaaggcggcagcgagaagctggtttttggcaagggcaccaaactgaccgtgaatccc
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链可变区AA(SEQ ID NO.301)
MKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCAGREGGSEKLVFGKGTKLTVNP
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链恒定区DNA(SEQ ID NO.302)
gacattcagaaccccgatccagccgtgtaccagctgagagacagcaagagcagcgacaagagcgtgtgtctgttcaccgacttcgactcccagaccaatgtgtcccagagcaaggactccgacgtgtacatcaccgataagaccgtgctggacatgcggagcatggacttcaagagcaatagcgccgtggcttggagcaacaagagcgactttgcctgcgccaacgccttcaacaacagcatcatccccgaggacacattcttcccaagtcctgagagcagctgcgacgtgaagctggtggaaaagagcttcgagacagacaccaacctgaacttccagaacctgagcgtgatcggcttcagaatcctgctgctgaaggtggccggcttcaacctgctgatgactctgagactgtggtccagctgaattcggatccaagcttaggcctgctcgctttcttgctgtcccatttctattaaaggttcctttgttc
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链恒定区AA(SEQ ID NO.303)
DIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR1(SEQ ID NO.304)
TTLSN
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR2(SEQ ID NO.305)
LVKSGEV
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR3(SEQ ID NO.306)
AGREGGSEKLV
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR1(SEQ ID NO.307)
ENHRY
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR2(SEQ ID NO.308)
SYGVKD
C185 E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR3(SEQ ID NO.309)
AISGYKNTEAF
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链可变区DNA(SEQ ID NO.310)
atgggacctggattgctttgttgggccctgctgtgtctgcttggagctggacttgtggatgccggcgtgacacagtctcccacacacctgatcaagaccagaggccagcaagtgaccctgagatgtagccctaagagcggccacgacaccgtgtcttggtatcagcaggctcttggccagggacctcagttcatcttccagtactacgaggaagaggaacggcagcggggcaacttccctgatagattctctggccatcagttccccaactacagcagcgagctgaacgtgaacgctctgctgctgggcgatagcgccctgtatctgtgtgccagttctcttggttggagaggcggcagatacaacgagcagttctttggccctggcaccagactgaccgtgctg
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链可变区AA(SEQ ID NO.311)
MGPGLLCWALLCLLGAGLVDAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKSGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSLGWRGGRYNEQFFGPGTRLTVL
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链恒定区DNA(SEQ ID NO.312)
gaagatctgaagaacgtgttcccacctgaggtggccgtgtttgagccttctgaggccgagatcagccacacacagaaagccacactcgtgtgcctggccaccggcttttatcccgatcacgtggaactgtcttggtgggtcaacggcaaagaggtgcacagcggcgttagcacagaccctcagcctctgaaagagcagcccgctctgaacgacagcagatactgtctgagcagcagactgagagtgtccgccaccttctggcagaaccccagaaaccacttcagatgccaggtgcagttctacggcctgtccgagaatgacgagtggacccaggatagagccaagccagtgacacagattgtgtctgccgaagcctggggcagagccgattgtggctttacaagcgagagctaccagcagggcgtgctgtctgccacaatcctgtatgagatcctgctgggcaaagccactctgtacgctgtgctggtgtctgccctggtgctgatggccatggtcaagagaaaggacagcagaggc
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR beta链恒定区AA(SEQ ID NO.313)
EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–P2A(具有弗林蛋白酶切割位点和接头)DNA(SEQID NO.314)
agagccaagagatctggcagcggcgccacaaactttagcctgctgaaacaggccggcgacgtggaagagaaccctggacctE711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–P2A(具有弗林蛋白酶切割位点和接头)AA(SEQ ID NO.315)
RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链可变区DNA(SEQ ID NO.316)
atgaagtccctgcgggtgctgctggttattctgtggctgcagctgagctgggtttggagccagggacagaacatcgaccagcctaccgagatgacagccaccgaaggcgccatcgtgcagatcaattgcacctaccagaccagcggcttcaacggcctgttctggtatcaacagcatgccggcgaggcccctaccttcctgagctataatgtgctggacggcctggaagaaaagggcagattcagcagcttcctgtccagaagcaagggctacagctacctgctgctgaaagaactccagatgaaggacagcgcctcctacctgtgtgcctccgtggatggaaacaacagactggccttcggcaagggcaaccaggtggtggtcatcccc
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链可变区AA(SEQ ID NO.317)
MKSLRVLLVILWLQLSWVWSQGQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCASVDGNNRLAFGKGNQVVVIP
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链恒定区DNA(SEQ ID NO.318)
gacattcagaaccccgatccagccgtgtaccagctgagagacagcaagagcagcgacaagagcgtgtgtctgttcaccgacttcgactcccagaccaatgtgtcccagagcaaggactccgacgtgtacatcaccgataagaccgtgctggacatgcggagcatggacttcaagagcaatagcgccgtggcttggagcaacaagagcgactttgcctgcgccaacgccttcaacaacagcatcatccccgaggacacattcttcccaagtcctgagagcagctgcgacgtgaagctggtggaaaagagcttcgagacagacaccaacctgaacttccagaacctgagcgtgatcggcttcagaatcctgctgctgaaggtggccggcttcaacctgctgatgactctgagactgtggtccagctgaattcggatccaagcttaggcctgctcgctttcttgctgtcccatttctattaaaggttcctttgttc
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–TCR alpha链恒定区AA(SEQ ID NO.319)
DIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR1(SEQ ID NO.320)
TSGFNG
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR2(SEQ ID NO.321)
NVLDGL
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–alpha CDR3(SEQ ID NO.322)
ASVDGNNRLA
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR1(SEQ ID NO.323)
SGHDT
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR2(SEQ ID NO.324)
YYEEEE
E711-19/HLA-A*02:01特异性TCR–beta CDR3(SEQ ID NO.325)
ASSLGWRGGRYNEQF

Claims (32)

1.一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法，所述方法包括：
通过计算装置接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求；
通过所述计算装置生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符，所述患者特异性标识符包括患者身份要素、销售订购标识符和细胞订购批号；
通过所述计算装置启动创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：
对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品中收集T细胞，
将收集的T细胞转移到容器；
用所述患者特异性标识符标记所述容器，
将所述收集的T细胞传输到制造设施，
使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞，
从所述制造设施接收所述经转染的T细胞，以及
将所述经转染的T细胞输注到所述患者的血流中，
其中所述计算装置为所述过程中的每个步骤记录跟踪事件，每个跟踪事件包括所述患者特异性标识符，以及
其中所述跟踪事件包括在所述过程期间所述患者的T细胞的监管链。
2.权利要求1的方法，其中通过用编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸转染所述收集的T细胞来创建所述经转染的T细胞，所述CAR包含特异性结合靶分子的抗原结合分子。
3.权利要求2的方法，其中所述抗原结合分子是单链可变片段。
4.权利要求2的方法，其中所述靶分子是血源性癌症相关抗原。
5.权利要求2的方法，其中所述靶分子是病毒感染相关抗原。
6.权利要求2的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含至少一个共刺激域。
7.权利要求2的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含至少一个活化域。
8.权利要求2的方法，其中所述多核苷酸是载体的组分。
9.权利要求1的方法，其中通过用编码T细胞受体(TCR)的多核苷酸转染所述收集的T细胞来创建所述经转染的T细胞。
10.权利要求9的方法，其中所述TCR结合肿瘤相关抗原。
11.权利要求9的方法，其中所述TCR结合病毒感染相关抗原。
12.权利要求9的方法，其中所述多核苷酸是载体的组分。
13.权利要求1的方法，其中启动创建经转染的T细胞的过程进一步包括：
通过所述计算装置接收在创建后已经从第一地点运输所述经转染的T细胞的记号；以及
接收在输注前已经在第二地点接收所述经转染的T细胞的记号，
其中所述计算装置在接收已经运输所述经转染的T细胞的记号时记录跟踪事件，以及
其中所述计算装置在接收已经在第二地点接收所述经转染的T细胞的记号时记录跟踪事件。
14.权利要求1的方法，其中所述患者身份要素包括与所述免疫疗法规程相关的第一患者ID和与实施以下一项或多项的设施相关的第二患者ID：白细胞单采术规程或所述经转染的T细胞的输注。
15.权利要求1的方法，其中所述计算装置以有序顺序存储所述跟踪事件。
16.一种在免疫疗法规程期间跟踪细胞订购的方法，所述方法包括：
通过计算装置接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求；
通过所述计算装置生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符，所述患者特异性标识符包括患者身份要素、销售订购标识符和细胞订购批号；
通过所述计算装置监视创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：
接收已经对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品收集T细胞的记号，
接收已经将收集的T细胞转移到容器的记号，
接收所述容器已经用所述患者特异性标识符标记的记号，
接收已经将所述收集的T细胞传输到制造设施的记号，
接收已经使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞的记号，
接收已经从所述制造设施接收所述经转染的T细胞的记号，以及
接收已经将所述经转染的T细胞输注到所述患者的血流中的记号，
当记号被接收时通过所述计算装置记录跟踪事件，每个跟踪事件包括所述患者特异性标识符，以及
通过存储所述过程期间的所述跟踪事件，通过所述计算装置维护所述患者的T细胞的监管链。
17.权利要求16的方法，其中通过用编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸转染所述收集的T细胞来创建所述经转染的T细胞，所述CAR包含特异性结合靶分子的抗原结合分子。
18.权利要求17的方法，其中所述抗原结合分子是单链可变片段。
19.权利要求17的方法，其中所述靶分子是血源性癌症相关抗原。
20.权利要求17的方法，其中所述靶分子是病毒感染相关抗原。
21.权利要求17的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含至少一个共刺激域。
22.权利要求17的方法，其中所述嵌合抗原受体(CAR)进一步包含至少一个活化域。
23.权利要求17的方法，其中所述多核苷酸是载体的组分。
24.权利要求16的方法，其中通过用编码T细胞受体(TCR)的多核苷酸转染所述收集的T细胞来创建所述经转染的T细胞。
25.权利要求24的方法，其中所述TCR结合肿瘤相关抗原。
26.权利要求24的方法，其中所述TCR结合病毒感染相关抗原。
27.权利要求24的方法，其中所述多核苷酸是载体的组分。
28.权利要求16的方法，其中启动创建经转染的T细胞的过程进一步包括：
通过所述计算装置接收在创建后已经从第一地点运输所述经转染的T细胞的记号；以及
接收在输注前已经在第二地点接收所述经转染的T细胞的记号，
其中所述计算装置在接收已经运输所述经转染的T细胞的记号时记录跟踪事件，以及
其中所述计算装置在接收已经在第二地点接收所述经转染的T细胞的记号时记录跟踪事件。
29.权利要求16的方法，其中所述患者身份要素包括与所述免疫疗法规程相关的第一患者ID和与实施以下一项或多项的设施相关的第二患者ID：白细胞单采术规程或所述经转染的T细胞的输注。
30.权利要求16的方法，其中所述计算装置以有序顺序存储所述跟踪事件。
31.一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法，该方法包括：
接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求；
通过在处理器上执行的事件跟踪模块生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符；
启动创建用于输注到所述患者的血流中的经转染的T细胞的过程，该过程包括：
对所述患者的血液样品进行白细胞单采术规程以从所述样品中收集T细胞，
将收集的T细胞转移到容器；
用所述患者特异性标识符标记所述容器，
将所述收集的T细胞传输到制造设施，
使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞，
从所述制造设施接收所述经转染的T细胞，以及
将所述经转染的T细胞输注到所述患者的血流中，
在所述事件跟踪模块处，从位于所述白细胞单采术规程点处的第一客户端装置接收第一跟踪事件，其确认所述白细胞单采术规程并含有所述患者特异性标识符；
通过所述事件跟踪模块，将所述第一跟踪事件集成在与所述患者特异性标识符有关的数据结构中，其中在数据库中存储所述数据结构，并且集成步骤记录具有所述第一跟踪事件的第一时间戳；
在所述事件跟踪模块处，从位于所述制造设施处的第二客户端装置接收第二跟踪事件，其确认在所述制造设施处收到所述收集的T细胞并含有所述患者特异性标识符；以及
通过所述事件跟踪模块，将所述第二跟踪事件集成在与所述患者特异性标识符有关的所述数据结构中，其中集成步骤记录具有所述第二跟踪事件的第二时间戳。
32.一种进行患者特异性免疫疗法规程的方法，该方法包括：
通过在处理器上执行的跟踪模块，接收创建用于患者的经转染的T细胞的细胞订购请求；
通过所述跟踪模块生成与所述细胞订购请求相关的患者特异性标识符和细胞订购批次，所述患者特异性标识符识别患者。
在数据库中生成用于跟踪所述细胞订购的数据记录，所述数据记录根据所述患者特异性标识符在所述数据库中识别；
通过所述跟踪模块接收第一跟踪事件，所述第一跟踪事件指示收集的T细胞已准备好运输到制造设施；
根据所述第一跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录；
基于容器已经由所述制造设施接收，通过所述跟踪模块接收第二跟踪事件，所述第二跟踪事件指示所述收集的T细胞已经由制造设施接收；
根据所述第二跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录；
基于所述制造设施已经使用细胞修饰技术从所述收集的T细胞创建经转染的T细胞，通过所述跟踪模块接收第三跟踪事件，所述第三跟踪事件指示已经创建所述经转染的T细胞。
根据所述第三跟踪事件更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录；
基于所述经转染的T细胞已经从所述制造设施接收，通过所述跟踪模块接收第四跟踪事件，所述第四跟踪事件指示已经接收所述经转染的T细胞；
根据所述第四跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录；
基于所述经转染的T细胞已经输注到所述患者的血流中，通过所述跟踪模块接收第五跟踪事件，所述第五跟踪事件指示已经将经转染的T细胞输注到所述患者的血流中；以及
根据所述第五跟踪事件，更新与所述患者特异性标识符对应的数据记录；
其中，所述第一、第二、第三、第四和第五跟踪事件中的每个含有所述患者特异性标识符、时间戳和事件标识符，以及
其中当根据相应事件更新所述数据记录时，与所述患者特异性标识符对应的数据记录以有序顺序存储所述第一、第二、第三、第四和第五跟踪事件。
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