CN111296338A - 一种实验室溪蟹感染并殖吸虫的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种实验室条件下溪蟹感染并殖吸虫的方法，其主要包括：收集大鼠感染并殖吸虫镜检有虫卵的粪便，清水融化后带虫卵粪液过五号药筛再过9药号筛，将附着虫卵的9药号筛置于川卷螺饲养水池清洗，让虫卵充分进入川卷螺饲养水池中，每个水池投放川卷螺60‑80个，川卷螺饲养水池水温保持在18‑23℃，虫卵进入川卷螺饲养水池中两周后每天驱赶川卷螺一次；将感染并殖吸虫三周以上的川卷螺转移到溪蟹饲养繁殖箱的水池中，每个饲养繁殖箱投入体重20‑30g溪蟹80‑100只。随着川卷螺成熟尾蚴的逸出，川卷螺与溪蟹在饲养繁殖箱内共栖六周后，溪蟹并殖吸虫感染率可达到90%以上，远远超过目前自然感染率，完全能满足实验室研究感染并殖吸虫溪蟹的需要。
Description
技术领域
本发明涉及实验室条件下溪蟹感染并殖吸虫的方法。
背景技术
目前，并殖吸虫人兽共患病研究、并殖吸虫肝纤维化和肺纤维化动物模型开发、并殖吸虫成虫分泌蛋白研究、以及特殊并殖吸虫种类的保种等工作，都需要大量感染并殖吸虫的溪蟹，随着森林的减少，保虫宿主野生动物群体逐渐缩小；农药化肥的大量使用，以及人类医疗卫生条件的改善，并殖吸虫发病人群减少等因素，直接导致第二中间宿主溪蟹的减少，并且溪蟹并殖吸虫感染率均呈现逐年下降的趋势（自然感染率20%左右），无法满足实验需要。为了解决这一现实问题，科研人员有必要在解决溪蟹繁殖技术的基础上，建立一种提高溪蟹感染并殖吸虫的方法。
并殖吸虫的第一中间宿主为川卷螺（虫卵到尾蚴），溪蟹是并殖吸虫的第二中间宿主（尾蚴到囊蚴），人、犬、猴、家猫、大白鼠等哺乳动物是保虫宿主（囊蚴到成虫）；哺乳动物感染并殖吸虫（囊蚴）后3个月，成虫产生的虫卵便随痰和粪便排出体外。基于并殖吸虫复杂的生活史，课题组进行了实验室条件下溪蟹感染并殖吸虫的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种实验室条件下溪蟹感染并殖吸虫的方法。
本发明的实验室条件下溪蟹感染并殖吸虫方法的步骤为：
1.收集实验室感染并殖吸虫大鼠100天以上的粪便（镜检有虫卵的粪便），每20g粪便加180ml清水融化后轻轻震荡摇匀过五号药筛(180μm±7.6μm)充分过滤粪便颗粒，让虫卵顺利通过五号药筛，通过五号药筛含虫卵的液体再过9号药筛（75±4.1um）保证并殖吸虫的虫卵附着在9号药筛上，附着虫卵的9号药筛及时用保鲜袋密封保存在（16-20℃）闭光环境下保存备用，时间不超过24小时；
2. 川卷螺的并殖吸虫尾蚴感染
2.1建立川卷螺饲养水池；
2.2每个水池投放川卷螺60-80个，水池水面始终保持15-20棵水白菜，保障川卷螺吸附和食用，同时利用水白菜发达的根系消耗水中氮，防止水体富营养化；
2.3将附着有并殖吸虫虫卵的24小时内9药号筛放于川卷螺饲养水池，用毛刷轻轻刷洗，让虫卵充分进入川卷螺饲养水池中；
2.4川卷螺饲养水池水温保持在18-23℃，保证并殖吸虫虫卵充分孵化为毛蚴，并殖吸虫虫卵进入川卷螺饲养水池中两周后每天驱赶川卷螺一次，让川卷螺迁移运动，增加毛蚴侵入川卷螺体的机会；
3.将感染并殖吸虫三周以上的川卷螺转移到溪蟹饲养繁殖箱的水池中，每个饲养繁殖箱投入人工繁殖的体重20-30g溪蟹80-100只，随着川卷螺体内不断成熟尾蚴的逸出，溪蟹并殖吸虫尾蚴感染率逐渐上升，川卷螺与溪蟹在饲养繁殖箱内共栖六周后，溪蟹并殖吸虫感染率可达到90%以上，远远超过目前自然感染率，完全能满足实验室研究感染并殖吸虫溪蟹的需要。
随着川卷螺体内不断成熟尾蚴的逸出，溪蟹并殖吸虫尾蚴感染率逐渐上升，川卷螺与溪蟹在饲养繁殖箱内共栖六周后，溪蟹并殖吸虫感染率可达到90%以上，远远超过目前自然感染率，完全能满足实验室研究感染并殖吸虫溪蟹的需要。
具体实施方式
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1
1.收集实验室感染并殖吸虫大鼠100天以上的镜检有虫卵的粪便，每20g粪便加180ml清水融化后轻轻震荡摇匀过五号药筛(180μm±7.6μm)充分过滤粪便颗粒，让虫卵顺利通过五号药筛，通过五号药筛含虫卵的液体再过9药号药筛（75±4.1um），保证并殖吸虫的虫卵附着在9药号筛上，附着虫卵的9药号筛及时用保鲜袋密封保存在（16-20℃）闭光环境下保存备用，时间不超过24小时。
2. 川卷螺的并殖吸虫尾蚴感染
2.1建立川卷螺饲养水池（1mm不锈钢板制成）长100×宽60×高30cm水深20cm；
2.2每个水池投放川卷螺80个，水池水面始终保持20棵水白菜，保障川卷螺吸附和食用，同时利用水白菜发达的根系消耗水中氮，防止水体富营养化；
2.3将附着有并殖吸虫虫卵的24小时内9药号筛放于川卷螺饲养水池，用毛刷轻轻刷洗，让虫卵充分进入川卷螺饲养水池中；
2.4川卷螺饲养水池水温保持在18-23℃，保证并殖吸虫虫卵充分孵化为毛蚴，并殖吸虫虫卵进入川卷螺饲养水池中两周后每天驱赶川卷螺一次，让川卷螺迁移运动增加毛蚴侵入川卷螺体的机会。
3.将感染并殖吸虫三周以上的川卷螺转移到溪蟹饲养繁殖箱（长100×宽60×高30cm）的水池中，每个饲养繁殖箱投入人工繁殖的体重20-30g溪蟹100只。
实施例2：
1.收集实验室感染并殖吸虫大鼠100天以上的镜检有虫卵的粪便，每20g粪便加180ml清水融化后轻轻震荡摇匀过五号药筛(180μm±7.6μm)充分过滤粪便颗粒，让虫卵顺利通过五号药筛，通过五号药筛含虫卵的液体再过9药号药筛（75±4.1um），保证并殖吸虫的虫卵附着在9药号筛上，附着虫卵的9药号筛及时用保鲜袋密封保存在（16-20℃）闭光环境下保存备用，时间不超过24小时。
2. 川卷螺的并殖吸虫尾蚴感染
2.1建立川卷螺饲养水池（1mm不锈钢板制成）长100×宽60×高30cm水深20cm；
2.2每个水池投放川卷螺60个，水池水面始终保持15棵水白菜，保障川卷螺吸附和食用，同时利用水白菜发达的根系消耗水中氮，防止水体富营养化；
2.3将附着有并殖吸虫虫卵的24小时内9药号筛放于川卷螺饲养水池，用毛刷轻轻刷洗，让虫卵充分进入川卷螺饲养水池中；
2.4川卷螺饲养水池水温保持在18-23℃，保证并殖吸虫虫卵充分孵化为毛蚴，并殖吸虫虫卵进入川卷螺饲养水池中两周后每天驱赶川卷螺一次，让川卷螺迁移运动增加毛蚴侵入川卷螺体的机会。
3.将感染并殖吸虫三周以上的川卷螺转移到溪蟹饲养繁殖箱（长100×宽60×高30cm）的水池中，每个饲养繁殖箱投入人工繁殖的体重20-30g溪蟹80只。
随着川卷螺体内不断成熟尾蚴的逸出，溪蟹并殖吸虫尾蚴感染率逐渐上升，川卷螺与溪蟹在饲养繁殖箱内共栖六周后，溪蟹并殖吸虫感染率可达到90%以上，远远超过目前自然感染率，完全能满足实验室研究感染并殖吸虫溪蟹的需要。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权
利要求书及其等效物界定。
Claims (3)
1.一种实验室溪蟹感染并殖吸虫的方法，其特征在于：按以下步骤进行：
1）收集实验室感染并殖吸虫大鼠100天以上的镜检有虫卵的粪便，每20g粪便加180ml清水融化后轻轻震荡摇匀过五号药筛，充分过滤粪便颗粒，让虫卵顺利通过五号药筛，通过五号药筛的含虫卵液体再过9号药筛，保证并殖吸虫的虫卵附着在9号药筛上，附着虫卵的9号药筛及时用保鲜袋密封保存在16-20℃闭光环境下保存备用，备用时间不超过24小时；
2）川卷螺的并殖吸虫尾蚴感染
（1）建立川卷螺饲养水池；
（2）每个水池投放川卷螺60-80个，水池水面始终保持15-20棵水白菜，保障川卷螺吸附和食用，同时利用水白菜发达的根系消耗水中氮，防止水体富营养化；
（3）将附着有并殖吸虫虫卵的24小时内9药号筛放于川卷螺饲养水池，用毛刷轻轻刷洗，让虫卵充分进入川卷螺饲养水池中；
（4）川卷螺饲养水池水温保持在18-23℃，保证并殖吸虫虫卵充分孵化为毛蚴，并殖吸虫虫卵进入川卷螺饲养水池中两周后每天驱赶川卷螺一次，让川卷螺迁移运动增加毛蚴侵入川卷螺体的机会；
3）将感染并殖吸虫三周以上的川卷螺转移到溪蟹饲养繁殖箱水池中，每个饲养繁殖箱投入人工繁殖的体重2-30g溪蟹80-100只，随着川卷螺体内不断成熟尾蚴的逸出，溪蟹并殖吸虫尾蚴感染率逐渐上升，川卷螺与溪蟹在饲养繁殖箱内共栖六周以上，确保溪蟹并殖吸虫感染率可达到90%以上。
2.根据据权利要求1所述的实验室溪蟹感染并殖吸虫的方法，其特征在于：所述水池用1mm不锈钢板制成，长100×宽60×高30cm，水深20cm。
3.根据据权利要求1所述的实验室溪蟹感染并殖吸虫的方法，其特征在于：所述溪蟹饲养繁殖箱长100×宽60×高30cm。
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