CN1112843C - 香桂组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
香桂组织培养快速繁殖方法Info
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Abstract
一种香桂组织培养快速繁殖方法，采用香桂的茎尖、侧芽及分生组织等为外植体，分别在不定芽分化诱导培养基、芽生长繁殖培养基和生根培养基中培养，快速增殖并获得完整试管苗，将该试管苗移栽在温室的蛭石、珍珠岩、河沙、腐殖质土中，经一个月后便可植入大田。采用本发明方法可快速大量繁殖黄樟油素含量高、材质优良的香桂树苗，实现香桂的工厂化生产。
Description
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术的植物再生，尤其是香桂组织培养快速繁殖方法。
背景技术：
香桂是我国特有的造林树种，原产于我国四川盆地的南部山区、海拨500-1500m的石灰岩山地，其材质优良，枝、叶含有丰富的芳香油，油的主要成份为黄樟油素，可利用其合成洋茉莉醛、新洋茉莉醛、胡椒基丙酮、香兰素等多种公认的名贵花香型、奶香型香料，是外贸畅销物资，也是有关轻工业的重要原料。
采用植物组织培养技术可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖速率极高，而且会因是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广。植物组织培养技术的原理是利用植物细胞的全能性(即组成植物体的每一个细胞都具有发育成为一个完整个体的潜在能力)，采取植物体上的单个细胞、细胞团、分生组织或器官的一部分，通过人工配制不同营养成份和激素的培养基来培养并调节控制其发育，使这些细胞、组织等形成成千上万个小植株，并且保持了母本植株全部的优良性状，这种方法可以在短时间内获得大量的试管苗，并能在人工控制条件的车间内一年四季进行，因而可以实现种苗繁殖的工厂化生产，且可以在较少的面积内进行大规模生产，因而无需占用大量土地。目前，我国利用植物组织培养技术再生植株的种类已达1000多种，其中，木本植物100多种，用现有植物组织培养技术不能直接进行香桂组织的培养及快速繁殖。
香桂是木本植物，且含油量高，其组织培养难度大，至今在国内外尚未见到利用组织培养技术成功繁殖香桂的报道。
发明内容：
本发明的目的是提供一种适合于香桂组织培养的快速繁殖方法，使香桂树苗大大增加，实现香桂苗的大规模生产。
本发明的具体方案是：一种香桂组织培养快速繁殖方法，按如下步聚进行：
(1)外植体制备
选择生长健壮，黄樟油素含量高的优良香桂植株，取其0.5～2.0cm长茎尖或侧芽切段，或取其分生组织切块0.2～3mm，用75％酒精浸泡10～30秒，无菌水冲洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中灭菌3～15分钟，在超净工作台上用无菌水冲洗3～5次，每次5分钟，滤纸吸干后，作为外植体进行培养；
(2)不定芽诱导培养
将外植体接种在下述重量配比的原料制成的不定芽诱导培养基中诱导愈伤组织及不定芽产生
细胞分裂素 0.5～10mg
生长素 0.05～1.0mg
维生素C(或者聚乙烯吡咯烷酮) 0.5～10mg
生物素 1～10mg
香蕉鲜汁 2～30g
蔗糖 30～60g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培养基基本组分2000～5000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度1000～4000lx的条件下培养1～2个月后，将生成的不定芽移入芽生长繁殖培养基中；
(3)芽生长繁殖培养
将上述(2)步所获得的不定芽切下接种在下述重量配比的原料制成的芽生长繁殖培养基中
细胞分裂素 0.05～1.0mg
生长素 0.01～1.0mg
生物素 1～10mg
赤霉素 0～3.0mg
香蕉鲜汁 2～30g
蔗糖 30～60g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培养基基本组分2000～5000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度1000～4000lx的条件下培养20～40天后，小芽可迅速长大，长大后将其切成带芽切段，再接种在芽生长繁殖培养基中扩大繁殖，达到一定数量后再将其转入生根培养基中；
(4)生根形成试管苗
将从基部切下的无根试管苗插入下述重量配比的原料制成的生根培养基中
生长素 0.01～5.0mg
水解酪蛋白 200～1000mg
蔗糖 15～50g
1/2MS(或1/4MS)培养基基本组分 2000～3000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度5000～10000lx的条件下培养20～45天后，试管苗生根成苗；
(5)试管苗驯化移栽
将根系发育良好的试管苗移入温室，驯化1～2周后，再打开瓶盖加少量水，练苗2～3天；或者将试管苗直接进入试管苗驯化移栽过程，试管苗在驯化、练苗的过程中生根；
把经练苗后的试管苗移栽在温室中蛭石或珍珠岩、河沙、腐殖质土等组成的营养钵中，以塑料棚覆盖，2周后再逐渐打开塑料棚，在温室土壤中生长一个月后，定植于大田。
本发明的不定芽诱导培养基中各原料的优选重量配比是：
细胞分裂素 1.0～5.0mg
生长 0.2～0.6mg
维生素C 3～8mg
生物素 3～8mg
香蕉鲜汁 5～15g
蔗糖 30～50g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培养基基本组分2400～4700mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的芽生长繁殖培养基中各原料的优选重量配比是：
细胞分裂素 0.1～0.8mg
生长素 0.05～0.5mg
生物素 3～8mg
香蕉鲜汁 5～20g
蔗糖 30～45g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培养基基本组分2400～4700mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的生根培养基中各原料的优选重量配比是：
生长素 0.1～3.0mg
水解酪蛋白 400～800mg
蔗糖 20～30g
1/2MS(或1/4MS)培养基基本组分 2000～2500mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的不定芽诱导培养基中各原料的最佳重量配比是：
细胞分裂素 5.5mg
生长素 0.2mg
维生素C 5mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的芽生长繁殖培养基中各原料的最佳重量配比是：
细胞分裂素 0.3mg
生长素 0.2mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的生根培养基中各原料的最佳重量配比是：
生长素 0.5mg
水解酪蛋 500mg
蔗糖 25g
1/2MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明的芽生长繁殖培养基也可以是将外植体直接种在下述的芽生长繁殖培养基中：
细胞分裂素 0.3mg
生长素 0.2mg
生物素 4mg
赤霉素 2mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
本发明不定芽诱导培养基和芽生长繁殖培养基配比中的细胞分裂素是6-苄氨基嘌呤或激动素或玉米素或玉米素核苷。
本发明生根培养基配比中的生长素是吲哚丁酸或吲哚乙酸或奈乙酸。
本发明选用MS作为基本培养基，提供香桂种苗生长所需的大量元素、微量元素、铁盐、有机成份；在发明的外植体制备及培养阶段，加入了维生素C或聚乙烯吡咯烷酮，防止了外植体的褐化与死亡，提高了外植体的成活率和培养的成功率。在不定芽诱导培养和芽生长繁殖培养过程中采用的不定芽诱导培养基和芽生长繁殖培养基配比中细胞分裂素与生长素的重量比较高，并在两种培养基中均增加了生物素、香蕉鲜汁，提高了培养基中蔗糖的浓度，从而使得不定芽能早日形成，并迅速生长，以利于获得更多更健壮的试管苗。
在生根形成试管苗过程采用的生根培养基配比中，采用了1/2MS的培养基，将蔗糖浓度降低至2451.430mg，提高光照强度至5000～10000lx，有利于试管苗由异养向自养的转化，大大提高了移栽成活率。
采用本发明提供的方法在不定芽诱导阶段一般20天左右就可开始出现分化，再经5～10天培养，即可出现丛生绿苗。在芽生长阶段，1个小芽经剪切再进一步扦插繁殖，一般20天左右即可长至5～7cm高，具3～8个新芽。在生根培养基上，培养20～25天后，可见有白色短根出现。如果生根 驯化一次性在温室中完成，生根驯化时间可减少在25～30天左右，且整个苗木生长健壮，移栽成活率高。
利用本办法可周年繁殖优良香桂种苗，一个外植体一年可繁殖数千至数万株。在繁殖过程中，利用芽生长，长大的苗再切成带芽切段，再接种于芽生长繁殖培养基中，反复扦插形成大量的试管苗，再诱导其生根，将根系发育良好的试管苗移入温室驯化并移入土壤中，或将试管苗扦插在生根培养基之后，转入温室中驯化并同时生根，可大大缩短培养到成苗的时间，降低生产成本，并提高成活率。
采用上述方案，本发明具有培养速度快、繁殖率高、工艺流程短、试管苗移栽成活率高、繁殖后代不变异、易于操作、生产成本低等优点，可进行大规模生产。
经实验证明，采用组培快繁技术比采用传统的种子育苗方法制得的香桂产品性能指标好。如下表所示：
具体实施方式：
| 性能 项目 | 香桂种子育苗 | 香桂组培快繁 |
| 种苗一致性 | 个体之间分化较大 | 个体间较为一致 |
| 性状遗传性 | 出现遗传变异 | 保持良种优良性状 |
| 所用繁殖材料 | 较多 | 少 |
| 种苗繁殖速度 | 较慢 | 快 |
实施例一
1.外植体制备
取香桂茎尖或侧芽，洗洁精清洗1-2次，流水冲洗干净，滤纸吸干。将取下的茎尖或侧芽在75％酒精中浸泡10-30秒，无菌水冲洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中灭菌8分钟，在超净工作台上用含有5～10mg/L的维生素C的无菌水冲洗3～5次，每次5分钟，滤纸吸干。
2.不定芽诱导培养
在超净工作台上，用常规无菌操作方法将无菌水冲洗干净、滤纸吸干的香桂茎尖或侧芽顶部切下5～15mm，接种在下述重量配比的原料制成的不定芽诱导培养基中。
6-苄氨基嘌呤 2.0mg
吲哚丁酸 0.2mg
维生素C 5mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 25g
1/2MS培养基基本组分 2451.43mg
蒸馏水 加至1000ml
在24±2℃，每日照光14小时、光照强度5000～6000lx的条件下培养1～2个月后，将生成的不定芽移入芽生长繁殖培养基中。
3.芽生长繁殖培养
香桂茎尖、侧芽在不定芽诱导培养基中3天后开始膨长，20-40天后开始形成多个不定芽，当不定芽长大后，将其移入在下述重量配比的芽生长繁殖培养基中：
6-苄氨基嘌呤 1.0mg
吲哚丁酸 0.2mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 35g
1/2MS培养基基本组分 2451.43mg
蒸馏水 加至1000ml
在芽生长繁殖培养基上，经30天培养，不定芽迅速长大成为无根苗，苗高3-8cm，带3-8片叶及多个侧芽，此时将其切下，并切成带芽切段，再转入上述培养基中，可促进芽进一步扩大繁殖。
4.生根形成试管苗
当无根试管苗长至3-5cm高，具4-6片叶片时，将其从基部剪断并插入下述重量配比的原料制成的生根培养基中
吲哚丁酸 0.5mg
水解酪蛋白 500mg
蔗糖 25g
1/2MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml
培养室温度及光照条件：24±2℃，每日照光14小时、光照强度5000～6000lx。
5.试管苗驯化移栽
当试管苗根系发育良好，具5-8片叶片时，将其移入温室驯化2周。移栽前，打开瓶盖2-3天，加少量水以使培养基软化，取出试管苗，将其根系上的培养基洗干净，移栽于蛭石或珍珠岩、河沙、腐殖质土等组成的营养钵中。第一次浇透水，注意保温、保湿，并置于塑料棚下，温度为20±2℃，温度为95～100％。两周后，逐渐打开塑料棚，在温室中继续生长一个月后，定植于大田。
实施例二
先进行外植体制备：取香桂茎尖或侧芽，洗洁精清洗1-2次，流水冲洗干净，滤纸吸干。将取下的茎尖或侧芽在75％酒精中浸泡10-30秒，无菌水冲洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中灭菌10分钟，在超净工作台上用含有5～10mg/L的聚乙烯吡咯烷酮的无菌水冲洗3～5次，每次5分钟，滤纸吸干。然后按实施例一的步聚进行制备，只是各培养基的重量配比和原料成份不同。
本实施例中不定芽诱导培养基中的不定芽诱导培养基为下述重量配比的原料制成：
激动素 0.5mg
吲哚乙酸 0.05mg
0.2～0.6mg
维生素C 0.5mg
生物素 1mg
香蕉鲜汁 2g
蔗糖 30g
LS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
该实施例中芽生长繁殖培养过程中的芽生长繁殖培养基为下述重量配比的原料制成：
激动素 0.05mg
吲哚乙酸 0.01mg0.2～0.6mg
生物素 1mg
香蕉鲜汁 2g
蔗糖 30g
LS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
该实施例中生根形成试管苗培养过程中的生根培养基为下述重量配比的原料制成：
吲哚乙酸 0.01mg
水解酪蛋白 800mg
蔗糖 15g
1/2MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml
其他过程与实施例1相同。
实施例三
先进行外植体制备：取香桂茎尖或侧芽，洗洁精清洗1-2次，流水冲洗干净，滤纸吸干。将取下的茎尖或侧芽在75％酒精中浸泡10-30秒，无菌水冲洗1次，置入0.1％HgCl2溶液中灭菌12分钟，在超净工作台上用含有5～10mg/L的生素C的无菌水冲洗3～5次，每次5分钟，滤纸吸干。然后按实施例一的步聚进行制备，只是各培养基的重量配比和原料成份不同。
本实施例中不定芽诱导培养基中的不定芽诱导培养基为下述重量配比的原料制成：
6-苄氨基嘌呤 10.0mg
吲哚丁酸 1.0mg0.2～0.6mg
聚乙烯吡咯烷酮 10mg
生物素 10mg
香蕉鲜汁 30g
蔗糖 30g
White培养基基本组分 696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
该实施例中芽生长繁殖培养过程中的芽生长繁殖培养基为下述重量配比的原料制成：
6-苄氨基嘌呤 1.0mg
吲哚丁酸 1.0mg0.2～0.6mg
生物素 10mg
香蕉鲜汁 30g
蔗糖 30g
White培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
该实施例中生根形成试管苗培养过程中的生根培养基为下述重量配比的原料制成：
吲哚丁酸 0.2mg
奈乙酸 0.2mg水解酪蛋白 600mg
蔗糖 15g
1/4MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml其他过程与实施例1相同。
实施例四
将外植体制备过程中所制备的外植体直接接种在下述重量配比的原料制成的芽生长繁殖培养基中：
玉米素 0.3mg
奈乙酸 0.5mg
生物素 5mg
赤霉素 0.5mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000ml
该实施例中生根形成试管苗培养过程中的生根培养基为下述重量配比的原料制成：
奈乙酸 1.0mg水解酪蛋白 500mg
蔗糖 20g
1/2MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml
外植体制备、芽生长繁殖培养、生根形成试管苗、驯化移栽过程与实施例相同。
实施例5
将芽繁殖培养过程获得的试管苗转入生根培养基后，直接进入试管苗驯化移栽过程，试管苗在驯化、练苗的过程中生根，然后移栽于蛭石或珍珠岩、河沙、腐殖质土等组成的营养钵中。第一次浇透水，注意保温、保湿，并置于塑料棚下，温度为20±2℃，湿度为95～100％。两周后，逐渐打开塑料棚，在温室中继续生长一个月后，可定植于大田。外植体制备、不定芽诱导培养、芽生长繁殖培养过程与实施例1相同。
为了证明本发明的有益效果，发明人采用了本发明第一个实施例方法以及培养过程中所用的不定芽诱导培养基、芽生长繁殖培养基、生根培养基，进行了实验室和大田实验，实验情况如下：
一、组织培养实验
1.实验材料：香桂枝条。
2.材料提供单位：重庆嘉顿实业股份有限公司。
3.实验方法：
将香桂枝条剪成小段，保证每段上有一个芽，按本发明外植体制备过程制备外植体，把所制备的外植体插植于不定芽诱导培养基中，共接种60瓶，每瓶5个外植体，实验方法以及所用的不定芽诱导培养基与实施例1相同，实验结果见表1
表1 不定芽诱导培养结果表
| 接种外植体数(个) | 出芽外植体数(个) | 诱导出芽率(％) | 总出芽数(％) | 平均每个出芽外植体出芽数(个) |
| 300 | 261 | 87.0 | 939 | 3.6 |
芽生长繁殖培养：将不定芽诱导培养的939个诱导芽转接于芽生长繁殖培养基中，实验方法以及所用的芽生长繁殖培养基与实施例1相同，30天后统计实验结果见表2。
表2 芽生长繁殖培养结果表
| 接种外植体数(个) | 平均苗高(cm) | 平均苗粗(mm) | 有效繁殖芽数(个) | 有效增殖倍数(％) |
| 939 | 3.6 | 2.1 | 4038 | 4.3 |
生根形成试管苗：将芽生长繁殖培养所得的300株苗转接于生根培养基中，共接种50瓶，每瓶接种6个苗，实验方法以及所用的生根培养基与实施例1相同，实验结果见表3。
表3 诱导生根结果表
| 接种苗数(个) | 生根苗数(个) | 诱导生根率(％) | 平均每苗生根数(个) |
| 300 | 283 | 94.03 | 4038 |
4.实验结论
①.取香桂的茎尖及侧芽作为外植体进行组织培养诱导出芽率达87％，每个外植体平均出芽个数达3.6个。
②.在生长繁殖培养基上香桂试管苗有效繁殖指数可达4.3以上。
③.在本发明提供的生根增减基中，香桂试管苗生根率达94％以上。
二、试管苗驯化移栽实验
当试管苗生长至根系发育良好，具5～8片叶片时，将其移入温室中驯化2周。移栽前，打开瓶盖2～3天，加少量水使培养基软化，取出试管苗，将其根系上的培养基洗干净，移栽于蛭石或珍珠岩∶河沙∶腐殖质土＝1∶1∶1组成的营养基质中。第一次浇透水，置于塑料棚下，保持温度为20±2℃，湿度为95～100％。两周后，逐渐打开塑料棚，使湿度由95～100％逐渐降低至与温室中相同，在温室中继续生长一个月后，可定植于大田。在所移栽的200株试管苗中，成活株数186株，成活率93％。
Claims (5)
1.一种香桂组织培养快速繁殖方法，其特征在于按如下步聚进行：
(1)外植体制备
选择生长健壮，黄樟油素含量高的优良香桂植株，取其0.5～2.0cm长茎尖或侧芽切段，或取其分生组织切块0.2～3mm，用75％酒精浸泡10～30秒，无菌水冲洗1次，置入0.1％ HgCl2溶液中灭菌3～15分钟，在超净工作台上用无菌水冲洗3～5次，每次5分钟，滤纸吸干后，作为外植体进行培养；
(2)不定芽诱导培养
将外植体接种在下述重量配比的原料制成的不定芽诱导培养基中诱导愈伤组织及不定芽产生
细胞分裂素 0.5～10mg
生长素 0.05～1.0mg
维生素C(或者聚乙烯吡咯烷酮) 0.5～10mg
生物素 1～10mg
香蕉鲜汁 2～30g
蔗糖 30～60g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培养基基本组分 2000～5000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度1000～4000lx的条件下培养1～2个月后，将生成的不定芽移入芽生长繁殖培养基中；
(3)芽生长繁殖培养
将上述(2)步所获得的不定芽切下接种在下述重量配比的原料制成的芽生长繁殖培养基中
细胞分裂素 0.05～1.0mg
生长素 0.01～1.0mg
生物素 1～10mg
赤霉素 0～3.0mg
香蕉鲜汁 2～30g
蔗糖 30～60g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White或LS)培养基基本组分 2000～5000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度1000～4000lx的条件下培养20～40天后，小芽可迅速长大，长大后将其切成带芽切段，再接种在芽生长繁殖培养基中扩大繁殖，达到一定数量后再将其转入生根培养基中；
(4)生根形成试管苗
将从基部切下的无根试管苗插入下述重量配比的原料制成的生根培养基中
生长素 0.01～5.0mg
水解酪蛋白 200～1000mg
蔗糖 15～50g
1/2MS(或1/4)培养基基本组分 2000～3000mg
蒸馏水 加至1000ml
在17～26℃、每日照光8～14小时、光照强度5000～10000lx的条件下培养20～45天后，试管苗生根成苗；
(5)试管苗驯化移栽
将根系发育良好的试管苗移入温室，驯化1～2周后，再打开瓶盖加少量水，练苗2～3天；或者将试管苗直接进入试管苗驯化移栽过程，试管苗在驯化、练苗的过程中生根；
把经练苗后的试管苗移栽在温室中蛭石或珍珠岩、河沙、腐殖质土等组成的营养钵中，以塑料棚覆盖，2周后再逐渐打开塑料棚，在温室土壤中生长一个月后，定植于大田。
2.按照权利要求1所述的香桂组织培养快速繁殖方法，其特征在于A.所说的不定芽诱导培养基中各原料的重量配比是：
细胞分裂素 1.0～5.0mg
生长素 0.2～0.6mg
维生素C 3～8mg
生物素 3～8mg
香蕉鲜汁 5～15g
蔗糖 30～50g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培养基基本组分 2400～4700mg
蒸馏水 加至1000mlB.所说的芽生长繁殖培养基中各原料的重量配比是：
细胞分裂素 0.1～0.8mg
生长素 0.05～0.5mg
生物素 3～8mg
香蕉鲜汁 5～20g
蔗糖 30～45g
MS(或1/2MS或1/4MS或LS或White)培养基基本组分 2400～4700mg
蒸馏水 加至1000mlC.所说的生根培养基中各原料的重量配比是：
生长素 0.1～3.0mg
水解酪蛋白 400～800mg
蔗糖 20～30g
1/2MS(或1/4MS)培养基基本组分 2000～2500mg
蒸馏水 加至1000ml
3.按照权利要求1所述的香桂组织培养快速繁殖方法，其特征在于A.所说的不定芽诱导培养基中各原料的重量配比是：
细胞分裂素 5.5mg
生长素 0.2mg
维生素C 5mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000mlB.所说的芽生长繁殖培养基中各原料的重量配比是：
细胞分裂素 0.3mg
生长素 0.2mg
生物素 4mg
香蕉鲜汁 10g
蔗糖 45g
MS培养基基本组分 4696.430mg
蒸馏水 加至1000mlC.所说的生根培养基中各原料的重量配比是：
生长素 0.5mg
水解酪蛋白 500mg
蔗糖 25g
1/2MS培养基基本组分 2451.430mg
蒸馏水 加至1000ml
4.按照权利要求1或2或3所述的香桂组织培养快速繁殖方法，其特征在于：细胞分裂素是6-苄氨基嘌呤或激动素或玉米素或玉米素核苷。
5.按照权利要求1或2或3所述的香桂组织培养快速繁殖方法，其特征在于：生长素是吲哚丁酸或吲哚乙酸或奈乙酸。
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