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CN111247131B - 抗HBV的四氢异噁唑并[4,3-c]吡啶类化合物 - Google Patents

抗HBV的四氢异噁唑并[4,3-c]吡啶类化合物 Download PDF

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CN111247131B
CN111247131B CN201880070173.7A CN201880070173A CN111247131B CN 111247131 B CN111247131 B CN 111247131B CN 201880070173 A CN201880070173 A CN 201880070173A CN 111247131 B CN111247131 B CN 111247131B
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Abstract

一类抗HBV的四氢异噁唑并[4,3‑c]吡啶类化合物及其药学上可接受的盐或其异构体被公开，所述化合物由式（I）表示。

Description

抗HBV的四氢异噁唑并[4，3-c]吡啶类化合物
相关申请的交叉引用
本申请主张如下2个优先权：中国专利申请CN201711138922.9，申请日2017年11月16日；中国专利申请CN201810339723.2，申请日2018年04月16日，其全文均以引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及一类新的抗HBV的四氢异噁唑并[4，3-c]吡啶类化合物、其制备方法及其在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
背景技术
据WHO统计，目前全世界约有2.4亿人感染HBV(乙型肝炎病毒)，每年直接或间接地导致约68万人死亡。中国是乙肝大国，感染人口七千多万。长期感染HBV可导致肝衰竭、肝硬化和肝癌等恶性疾病。(World Health Organization，Hepatitis B：World HealthOrganization Fact Sheet(2016).)
目前被许可用于治疗慢性乙肝的常规药物只有核苷(酸)类化合物和干扰素两类。核苷(酸)类药物，如拉米夫定、恩替卡韦、替诺福韦(酯)等，可以抑制HBV DNA复制，但这类药物并不能清除cccDNA，停药后往往出现病情反弹。患者需长期用药，部分患者容易出现耐药现象。干扰素类药物能部分激活病人的免疫系统，通过人体自身免疫作用抑制乙肝病毒，但这类药物副作用较大，患者耐受性不足，更为严重的是不同人群对干扰素治疗的应答率存在显著差异，但总体上看应答率较低(通常低于30％)(Nat.Rev.Gastro.Hepat.8(2011)，275-284)。
HBV感染的病人，在宿主的肝细胞核内形成稳定的共价闭合环状DNA，即cccDNA，作为HBV不断复制的模板。所有次基因组的RNA(sgRNA)和前基因组的RNA(pgRNA)均由cccDNA转录形成。出细胞核后，sgRNA翻译成X蛋白和其他三个包膜蛋白，pgRNA翻译成核心蛋白和病毒聚合酶。pgRNA与核心蛋白在聚合酶的作用下发生自组装，形成包裹了核衣壳的RNA。在核衣壳内，pgRNA逆转录成负链的DNA，并由此进一步合成出DNA正链，形成rcDNA。核衣壳包裹的rcDNA一方面重新脱壳进入细胞核，进一步使cccDNA扩增；另一方面重新与包膜蛋白结合，通过内质网释放出细胞，形成新的HBV。在HBV的复制循环中，核衣壳的的合成是HBV基因组复制过程中的关键一步，病毒DNA的合成只能特异性的发生在核衣壳的内部。核衣壳的组装是限制HBV多样性的一个进化制约过程，即使对细微的分子干扰也非常敏感。对于开发新的针对不同乙肝病毒基因型和耐药菌株的疗法，作用于核衣壳的合成和降解过程的靶标极具前景。一些与核衣壳相关的抗HBV化合物已被报道。NVR 3-778(WO 2015109130A1)、JNJ-56136379、GLS-4JHS等几个相关化合物均处于临床研究阶段。
发明内容
一方面，本发明提供了式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，
Figure GPA0000288043420000041
其中，环A为6-12元芳基或5-6元杂芳基；
各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、-S(＝O)2NRaRb、-S(＝O)2Rc、-C(＝O)ORd、C1-6烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-OCH3、-NH2或-CN的取代基所取代C1-6烷基；
n为0、1、2或3；
T为N或CR3；
R1和R5各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、C1-3烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN或-NO2的取代基所取代C1-3烷基；
R2和R4各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、C1-6烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN或-NO2的取代基所取代C1-6烷基；
R3为F、Br或CN；
Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为H或C1-6烷基；
所述5-6元杂芳基包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、N或-NH-的杂原子或杂原子团。
在本发明的一些方案中，各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、-S(＝O)2NRaRb、-S(＝O)2Rc、-C(＝O)ORd、C1-6烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2或-CN的取代基所取代C1-6烷基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A为苯基或5-6元杂芳基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A为苯基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基或吡啶基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3或-CH2(CH3)2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-NH2、-N(CH3)2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-CH3、-CH2CH3、CF3或-CH2OH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、C1-3烷氧基或C1-3烷基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述各R独立地为F、Cl、CN或甲氧基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述n为0、1或2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R1和R5各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-NH2、-CH3、-CHF、-CHF2或-CF3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R1和R5各自独立地为H，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R2和R4各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NH2、C1-3烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I的取代基所取代C1-3烷基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R2和R4各自独立地为H、F、Cl、CN或任选2个F所取代的甲基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R2和R4各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-NH2、-CH3、-CH2CH3、-CHF、-CHF2或-CF3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000051
为
Figure GPA0000288043420000052
Figure GPA0000288043420000053
R和n及其他变量如本发明所定义；在本发明的一些实施方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000054
为
Figure GPA0000288043420000055
Figure GPA0000288043420000056
R和n及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000057
为
Figure GPA0000288043420000058
Figure GPA0000288043420000059
Figure GPA0000288043420000061
R及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000062
为
Figure GPA0000288043420000063
Figure GPA0000288043420000064
Figure GPA0000288043420000065
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000066
为
Figure GPA0000288043420000067
R1、R2、R3、R4和R5及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000068
为
Figure GPA0000288043420000069
R2、R3和R4及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA00002880434200000610
为
Figure GPA00002880434200000611
R2和R4及其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure GPA0000288043420000071
为
Figure GPA0000288043420000072
Figure GPA0000288043420000073
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(I-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000074
其中，环A、R1、R2、R4、R5、R、n、T或结构单元
Figure GPA0000288043420000075
如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-a)或式(III-a)所示结构：
Figure GPA0000288043420000076
其中，环A、R2、R4、R、n或结构单元
Figure GPA0000288043420000077
如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-a-1)或式(III-a-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000081
其中，环A、R2、R4、R、n或结构单元
Figure GPA0000288043420000082
如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-b)、(II-c)、(III-b)或(III-c)所示结构：
Figure GPA0000288043420000083
其中，T1和T2各自独立地为N或CH；R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-b-1)、(II-c-1)、(III-b-1)或(III-c-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000084
Figure GPA0000288043420000091
其中，T1和T2各自独立地为N或CH；R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-d)、(II-e)、(II-f)、(II-k)、(III-d)、(III-e)、(III-f)或(III-k)所示结构：
Figure GPA0000288043420000092
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-d-1)、(II-e-1)、(II-f-1)、(II-k-1)、(III-d-1)、(III-e-1)、(III-f-1)或(III-k-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000101
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-m)或(III-m)所示结构：
Figure GPA0000288043420000102
其中，R2和R4如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，，其具有式(II-m-1)或(III-m-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000111
其中，R2和R4如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-g)～(II-i)或式(III-g)～(III-i)所示结构：
Figure GPA0000288043420000112
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-j)～(II-n)或式(III-j)～(III-n)所示结构：
Figure GPA0000288043420000121
Figure GPA0000288043420000122
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-g-1)～(II-i-1)或式(III-g-1)～(III-i-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000123
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其具有式(II-j-1)～(II-n-1)或式(III-j-1)～(III-n-1)所示结构：
Figure GPA0000288043420000131
Figure GPA0000288043420000132
其中，R2、R4、R和n如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体选自：
Figure GPA0000288043420000133
Figure GPA0000288043420000141
在本发明的一些方案中，上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体选自：
Figure GPA0000288043420000142
Figure GPA0000288043420000151
Figure GPA0000288043420000161
本发明还有一些方案是由上述变量任意组合而来。
另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，包括作为活性成分的治疗有效量的上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体以及药学上可接受的载体。
另一方面，本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体及其上述药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
另一方面，本发明还提供了上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体及其上述药物组合物在预防或治疗乙型肝炎中的应用。
另一方面，本发明还提供了一种治疗或预防乙型肝炎的方法，包括对需要该治疗或预防的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体及其上述药物组合物。
另一方面，本发明还提供了用于治疗或预防乙型肝炎的上述化合物、其药学上可接受的盐或其异构体及其上述药物组合物。
本发明涉及的一类新的HBV抑制剂，母核结构区别于现有技术。本发明涉及的化合物展现出抑制HBV DNA复制活性。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(-)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure GPA0000288043420000171
和楔形虚线键
Figure GPA0000288043420000172
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure GPA0000288043420000173
和直形虚线键
Figure GPA0000288043420000174
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure GPA0000288043420000175
表示楔形实线键
Figure GPA0000288043420000176
或楔形虚线键
Figure GPA0000288043420000177
或用波浪线
Figure GPA0000288043420000178
表示直形实线键
Figure GPA0000288043420000179
和直形虚线键
Figure GPA00002880434200001710
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
本文中的Cm-n，是该部分具有给定范围中的整数个碳原子。例如“C1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。例如C1-3是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure GPA0000288043420000191
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure GPA0000288043420000192
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure GPA0000288043420000193
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。
除非另有规定，环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子的“环”。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“烃基”指只含碳、氢两种原子的官能团，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C1-C12表示1至12个碳，C1-12选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12；C3-12选自C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施方案中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如-CH2F)或多取代的(如-CF3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。
“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。
除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。例如，术语“杂芳基”是指含有一、二、三、四个杂原子、或含有一、二、三、四形成任意数量区间杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实施方案中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、萘基、联苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、噁唑基、苯基-噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、异喹啉基、喹喔啉基、喹啉基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；Na2CO3代表碳酸钠；K2CO3代表碳酸钾；Cs2CO3代表碳酸铯；CuI代表碘化亚铜；MeI代表碘甲烷；EtOAc代表乙酸乙酯；EA代表乙酸乙酯；THF代表四氢呋喃；LiHMDS代表六甲基二硅基氨基锂；MeOH代表甲醇；DCM代表二氯甲烷；DMSO代表二甲基亚砜；PE代表石油醚；EtOH代表乙醇；IPA代表异丙醇；CH3CN代表乙腈；MTBE代表甲基叔丁基醚；TFA代表三氟乙酸；NH3·H2O代表氨水；TEA代表三乙胺；DIPEA代表N，N-二异丙基乙胺；Boc2O代表二碳酸二叔丁酯；代表Boc代表叔丁氧羰基，是氨基的一种保护基；NH2OH·HCl代表羟胺的盐酸盐；Pd(PPh2)Cl2代表双三苯基磷二氯化钯；DMP代表戴斯-马丁试剂；PIFA代表二(三氟乙酰氧基)碘代苯；EDTA代表乙二胺四乙酸二钠；LCMS代表液质联用色谱；HPLC代表液相色谱；SFC超临界流体色谱；PO代表灌胃给药；IV代表静脉注射给药；QD代表一天一次给药；BID代表一天两次给药；MPK代表毫克/千克；T1/2代表半衰期；Vdss代表稳态表观分布容积；CL代表清除率；AUC0-24h代表给药后0～24小时血药浓度-时间曲线下面积；Cmax代表最大血药浓度；Tmax代表达到最大血药浓度的时间。
附图说明
图1为小鼠接受实施例6给药1～7天，各受试组小鼠单位体积血浆中Log(HBV DNA拷贝数)的变化曲线
图2为小鼠接受实施例6给药第7天，各受试组小鼠单位重量肝脏组织中Log(HBVDNA拷贝数)水平
图3为小鼠接受实施例23给药1～7天，各受试组小鼠单位体积血浆中Log(HBV DNA拷贝数)的变化曲线
图4为小鼠接受实施例23给药第7天，各受试组小鼠单位重量肝脏组织中Log(HBVDNA拷贝数)水平
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
中间体的制备
中间体A-1
Figure GPA0000288043420000211
中间体A-1由下面的方法制备：
Figure GPA0000288043420000221
0摄氏度下将氯甲酸苯酯(58.54克，46.83毫升)缓慢滴加到溶有3，4，5-三氟苯胺(50.00克)和吡啶(29.58克，30.18毫升)的二氯甲烷(300毫升)溶液中。反应混合物在25摄氏度下搅拌3小时后，加入250毫升水淬灭，析出白色沉淀。该沉淀过滤后，减压干燥，得到中间体A-1。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.46-7.39(m，2H)，7.32-7.27(m，1H)，7.21-7.11(m，4H)，4.82(br.s.，1H)；MS(ESI)m/z：268[M+H+]。
中间体A-2
Figure GPA0000288043420000222
中间体A-2的制备可参考中间体A-1的制备方法，将3，4，5-三氟苯胺替换成3-氰基-4-氟苯胺。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.85-7.74(m，1H)，7.67(dd，J＝3.8，8.3Hz，1H)，7.46-7.41(m，2H)，7.31-7.18(m，5H)；MS(ESI)m/z：257[M+H+]。
中间体A-3
Figure GPA0000288043420000223
中间体A-3的制备可参考中间体A-1的制备方法，将3，4，5-三氟苯胺替换成3-氯-4-氟苯胺。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.64(d，J＝4.3Hz，1H)，7.51-7.38(m，3H)，7.32-7.29(m，1H)，7.22-7.10(m，3H)，6.95(br.s.，1H)；MS(ESI)m/z：266[M+H+]。
中间体A-4
Figure GPA0000288043420000224
中间体A-4的制备可参考中间体A-1的制备方法，将3，4，5-三氟苯胺替换成3-甲基-4-氟苯胺。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.49-7.33(m，3H)，7.28-7.15(m，4H)，7.03-6.93(m，1H)，6.96(br.s.，1H)，2.29(s，3H)。MS(ESI)m/z：246[M+H+]。
中间体A-5
Figure GPA0000288043420000225
中间体A-5的制备可参考中间体A-1的制备方法，将3，4，5-三氟苯胺替换成2-氯-4-氨基吡啶。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.19(d，J＝5.6Hz，1H)，7.46(d，J＝1.6Hz，2H)，7.38-7.31(m，2H)，7.25-7.20(m，2H)，7.10(d，J＝7.7Hz，2H)。MS(ESI)m/z：249[M+H+]。
中间体A-6
Figure GPA0000288043420000231
中间体A-6的制备可参考中间体A-1的制备方法，将3，4，5-三氟苯胺替换成3，4-二氟苯胺。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.55-7.47(m，1H)，7.45-7.40(m，2H)，7.32-7.26(m，2H)，7.21-7.20(m，1H)，7.17-7.01(m，3H)。MS(ESI)m/z：250[M+H+]。
实施例1
Figure GPA0000288043420000232
实施例1的制备：
Figure GPA0000288043420000233
步骤A：化合物1-2的合成
0摄氏度下，向化合物1-1(3.00克)的二氯甲烷(30毫升)溶液中加入草酰氯(5.40克，42.52摩尔)，并随后加入1～2滴N，N-二甲基甲酰胺。该反应混合物自然升至室温，继续搅拌14小时后，减压浓缩得到化合物1-2的粗品。
步骤B：化合物1-3的合成
在-70摄氏度，氮气保护下，将N-Boc-(S)-2-甲基-4-哌啶酮(0.50克)溶解在乙醚(8毫升)中，随后加入六甲基二硅基氨基锂(2.34毫升，1摩尔/升)。反应混合物在-70摄氏度下搅拌0.5小时后，向体系中滴加化合物1-2(374.04毫克)的乙醚(2毫升)溶液。反应液自然升至室温，继续搅拌3小时。将反应液倒入1摩尔/升的盐酸(40毫升)中，用乙酸乙酯(25毫升×2)萃取。合并的有机相经饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩得到化合物1-3的粗品。
步骤C：化合物1-4的合成
搅拌下，向2.5毫升乙醇中依次加入化合物1-3(300.00毫克，粗品)，盐酸羟胺(334.69毫克)和吡啶(2.5毫升)。反应混合物逐渐升温至100摄氏度，并在该温度下搅拌1小时。自然冷却后，减压蒸馏，剩余物用乙酸乙酯(30毫升)稀释，然后依次用1摩尔/升盐酸(20毫升)和饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩。剩余物经制备TLC板分离(展开剂：石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得到化合物1-4。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.63-8.48(m，1H)，7.92(dd，J＝4.2，8.6Hz，1H)，7.60-7.45(m，1H)，5.96-4.79(m，1H)，4.58-4.21(m，1H)，3.29-3.05(m，1H)，3.02-2.72(m，2H)，1.59-1.35(m，12H)。MS(ESI)m/z：334[M+H+]。
步骤D：化合物1-5的合成
室温下，将化合物1-4(93.00毫克)加入到盐酸/1，4-二氧六环溶液(4摩尔/升，5毫升)中。该反应混合物在室温下搅拌0.5小时后，减压蒸馏得到粗产品化合物1-5(盐酸盐)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)m/z：234[M+H+]。
步骤E：实施例1的合成
室温下，将化合物1-5(盐酸盐，75.00毫克)溶解在2毫升N，N-二甲基甲酰胺中，随后依次加入N，N-二异丙基乙胺(107.82毫克)和中间体A-1(74.31毫克)。反应混合物在70摄氏度下搅拌1小时后，缓慢倒入30毫升水中，然后用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合并的有机相经饱和食盐水(30毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩。剩余物经过制备高效液相色谱纯化(分离柱：Phenomenex Synergi C18，150×30mm×4μm，流动相：[水(0.225％三氟乙酸)-乙腈]；B％：50％-80％，10.5min)得到实施例1。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：8.63(d，J＝2.8Hz，1H)，8.00-7.96(m，1H)，7.78-7.75(m，1H)，7.34-7.14(m，2H)，5.29(d，J＝17.5Hz，1H)，4.95(quin，J＝6.4Hz，1H)，4.50(d，J＝17.4Hz，1H)，3.06(dd，J＝5.7，16.4Hz，1H)，2.87(dd，J＝1.2，16.3Hz，1H)，1.22(d，J＝7.0Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：407[M+H+]。
实施例2
Figure GPA0000288043420000241
实施例2可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：30％-30％，7.8min)得到实施例2。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.86-7.77(m，2H)，7.69-7.48(m，3H)，7.36-7.21(m，2H)，5.21(d，J＝15.94Hz，1H)，4.65-4.47(m，2H)，3.17-3.02(m，1H)，2.90(dd，J＝1.44，16.38Hz，1H)，1.27(d，J＝6.90Hz，3H)。MS(ESI)m/z：388[M+H+]。
实施例3
Figure GPA0000288043420000251
实施例3可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2-氟苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：20％-20％，4.0min)得到实施例3。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.81(dt，J＝1.63，7.53Hz，1H)，7.67-7.54(m，1H)，7.43-7.20(m，4H)，5.10(d，J＝16.69Hz，1H)，4.92-4.78(m，1H)，4.38(d，J＝16.81Hz，1H)，3.10(dd，J＝5.90，16.56Hz，1H)，2.91(d，J＝16.31Hz，1H)，1.29(d，J＝6.90Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：406[M+H+]。
实施例4
Figure GPA0000288043420000252
实施例4可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成3-氟苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS(规格：250mm×50mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：50％-50％，1.9min)得到实施例4。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.62-7.56(m，2H)，7.52(dd，J＝1.3，8.7Hz，1H)，7.31-7.21(m，3H)，5.16(d，J＝16.1Hz，1H)，4.99(quin，J＝6.3Hz，1H)，4.49(d，J＝16.1Hz，1H)，3.09-3.00(m，1H)，2.92-2.83(m，1H)，1.23(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：406[M+H+]。
实施例5
Figure GPA0000288043420000253
实施例5可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成4-氟苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：30％-30％，4.2min)得到实施例5。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.90-7.80(m，2H)，7.42-7.23(m，4H)，5.24-5.14(m，1H)，5.01(quin，J＝6.3Hz，1H)，4.50(d，J＝16.1Hz，1H)，3.08(dd，J＝5.8，16.3Hz，1H)，2.89(dd，J＝1.2，16.4Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)m/z：406[M+H+]。
实施例6
Figure GPA0000288043420000261
实施例6可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2，4-二氟苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：30％-30％，9min)得到实施例6。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.86-7.75(m，1H)，7.26-7.14(m，4H)，5.05(d，J＝16.4Hz，1H)，4.93(quin，J＝6.4Hz，1H)，4.38-4.27(m，1H)，3.06(dd，J＝5.9，16.4Hz，1H)，2.91-2.82(m，1H)，1.25(d，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)m/z：424[M+H+]。
实施例7
Figure GPA0000288043420000262
实施例7可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2-甲氧基苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：30％-30％，2.5min)得到实施例7。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.60(dd，J＝1.6，7.6Hz，1H)，7.53-7.45(m，1H)，7.25-7.12(m，3H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，4.99(d，J＝16.6Hz，1H)，4.94-4.88(m，1H)，4.24(d，J＝16.6Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.04(dd，J＝5.9，16.4Hz，1H)，2.83(dd，J＝1.0，16.3Hz，1H)，1.26(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：418[M+H+]。
实施例8
Figure GPA0000288043420000271
实施例8可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成3-甲氧基苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：30％-30％，3.0min)得到实施例8。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.51-7.43(m，1H)，7.34-7.23(m，4H)，7.07(dd，J＝2.1，8.2Hz，1H)，5.15(d，J＝16.1Hz，1H)，4.97(quin，J＝6.4Hz，1H)，4.47(d，J＝16.0Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.05(dd，J＝5.7，16.3Hz，1H)，2.86(dd，J＝1.1，16.3Hz，1H)，1.24(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：418[M+H+]。
实施例9
Figure GPA0000288043420000272
实施例9可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成4-甲氧基苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALCEL OD(规格：250mm×50mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：30％-30％，4.2min)得到实施例9。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.75(d，J＝8.9Hz，2H)，7.33-7.25(m，2H)，7.14(d，J＝9.0Hz，2H)，5.16(d，J＝15.8Hz，1H)，5.05-4.97(m，1H)，4.48(d，J＝15.9Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.06(dd，J＝5.6，16.4Hz，1H)，2.87(d，J＝16.3Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：418[M+H+]。
实施例10
Figure GPA0000288043420000273
实施例10可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成3-氰基苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：30％-30％，3.1min)得到实施例10。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：8.17-8.06(m，2H)，7.88(d，J＝7.8Hz，1H)，7.81-7.72(m，1H)，7.33-7.22(m，2H)，5.23(d，J＝16.3Hz，1H)，5.08-4.96(m，1H)，4.62-4.58(m，1H)，3.09(dd，J＝5.7，16.4Hz，1H)，2.91(dd，J＝1.3，16.3Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：413[M+H+]。
实施例11
Figure GPA0000288043420000281
实施例11可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成3-氯苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：35％-35％，5min)得到实施例11。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.71-7.55(m，2H)，7.51-7.38(m，2H)，7.16(dd，J＝6.3，10.3Hz，2H)，5.08(d，J＝16.0Hz，1H)，4.94-4.82(m，1H)，4.50-4.37(m，1H)，3.04-2.91(m，1H)，2.78(br.d，J＝16.4Hz，1H)，1.14(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：422[M+H+]。
实施例12
Figure GPA0000288043420000282
实施例12可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成4-氯苯甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：30％-30％，8.3min)得到实施例12。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.73-7.63(m，2H)，7.52-7.45(m，2H)，7.17(dd，J＝6.36，10.27Hz，2H)，5.08(d，J＝16.14Hz，1H)，4.94-4.84(m，1H)，4.39(d，J＝16.02Hz，1H)，2.96(dd，J＝5.75，16.38Hz，1H)，2.78(dd，J＝1.28，16.32Hz，1H)，1.14(d，J＝6.97Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：422[M+H+]。
实施例13
Figure GPA0000288043420000291
实施例13可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成吡嗪-2-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：60％-60％，4.5min)得到实施例13。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：9.17(d，J＝1.5Hz，1H)，8.81(dd，J＝1.6，2.4Hz，1H)，8.67(d，J＝2.5Hz，1H)，7.32-7.22(m，2H)，5.37(d，J＝17.6Hz，1H)，5.03-4.96(m，1H)，4.57(d，J＝17.7Hz，1H)，3.12(dd，J＝5.8，16.4Hz，1H)，2.94(dd，J＝1.4，16.4Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)m/z：390[M+H+]。
实施例14
Figure GPA0000288043420000292
实施例14可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成噻唑-5-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALCEL OD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：30％-30％，2.3min)得到实施例14。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：9.12(s，1H)，8.26(s，1H)，7.24-7.11(m，2H)，5.03(d，J＝16.38Hz，1H)，4.90(t，J＝6.72Hz，1H)，4.33(d，J＝16.38Hz，1H)，3.02-2.92(m，1H)，2.79(dd，J＝1.41，16.44Hz，1H)，1.14(d，J＝6.85Hz，3H)。MS(ESI)m/z：395[M+H+]。
实施例15
Figure GPA0000288043420000293
实施例15可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成噻唑-4-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：30％-30％，3.0min)得到实施例15。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：9.20(d，J＝2.0Hz，1H)，8.18(d，J＝1.9Hz，1H)，7.37-7.21(m，2H)，5.30(d，J＝16.8Hz，1H)，5.05-4.95(m，1H)，4.52(d，J＝16.8Hz，1H)，3.09(dd，J＝5.7，16.4Hz，1H)，2.90(d，J＝16.3Hz，1H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)m/z：395[M+H+]。
实施例16
Figure GPA0000288043420000301
实施例16可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成噻唑-2-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：35％-35％，6.3min)得到实施例16。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：9.01(s，1H)，7.75(d，J＝4.8Hz，1H)，7.16(dd，J＝6.4，10.3Hz，2H)，5.21(d，J＝17.2Hz，1H)，4.93-4.84(m，1H)，4.50-4.41(m，1H)，3.05-2.95(m，1H)，2.80(d，J＝16.5Hz，1H)，1.14(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：395[M+H+]。
实施例17
Figure GPA0000288043420000302
实施例17可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成异噻唑-4-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，IPA]；B％：30％-30％，30min)得到实施例17。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：9.40(s，1H)，9.00(s，1H)，7.33-7.27(m，2H)，5.18(d，J＝16.0Hz，1H)，5.08-5.00(m，1H)，4.50(d，J＝16.0Hz，1H)，3.08(dd，J＝5.7，16.4Hz，1H)，2.94-2.88(m，1H)，1.25(d，J＝7.0Hz，3H)。MS(ESI)m/z：395[M+H+]。
实施例18
Figure GPA0000288043420000303
实施例18可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成异噻唑-3-甲酸。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD-H(规格：250mm×30mm，粒径：5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：35％-35％，2.1min)得到实施例18。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：8.00(d，J＝3.2Hz，1H)，7.75(d，J＝3.2Hz，1H)，7.20-7.13(m，2H)，5.18(d，J＝17.2Hz，1H)，4.92-4.85(m，1H)，4.51-4.37(m，1H)，3.04-2.96(m，1H)，2.85-2.78(m，1H)，1.14(d，J＝7.0Hz，3H)。MS(ESI)m/z：395[M+H+]。
实施例19
Figure GPA0000288043420000311
实施例19的制备方法可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2，4-二氟苯甲酸；将中间体A-1替换成中间体A-2。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALCEL OJ(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：25％-25％，2.4min)得到实施例19。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.89-7.76(m，2H)，7.72-7.64(m，1H)，7.29-7.16(m，3H)，5.08(d，J＝16.4Hz，1H)，4.96(quin，J＝6.4Hz，1H)，4.36(d，J＝16.6Hz，1H)，3.08(dd，J＝5.8，16.4Hz，1H)，2.93-2.85(m，1H)，1.27(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：413[M+H+]。
实施例20
Figure GPA0000288043420000312
实施例20的制备方法可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2，4-二氟苯甲酸；将中间体A-1替换成中间体A-3。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AS(规格：250mm×50mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：40％-40％，1.9min)得到实施例20。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.85-7.79(m，1H)，7.59(dd，J＝2.6，6.8Hz，1H)，7.36-7.08(m，4H)，5.09(dd，J＝1.1，16.6Hz，1H)，4.97-4.94(m，1H)，4.36(dd，J＝1.5，16.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝5.9，16.4Hz，1H)，2.90(dd，J＝1.3，16.4Hz，1H)，1.28(d，J＝6.9Hz，3H)。
MS(ESI)m/z：422[M+H+]。
实施例21
Figure GPA0000288043420000321
实施例21的制备可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2，4-二氟苯甲酸；将中间体A-1替换成中间体A-4。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×30mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，EtOH]；B％：20％-20％，5.5min)得到实施例21。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：7.87-7.83(m，1H)，7.30-7.10(m，4H)，6.96-6.94(m，1H)，5.09(d，J＝16.6Hz，1H)，5.02-4.94(m，1H)，4.35(d，J＝16.4Hz，1H)，3.16-3.06(m，1H)，2.89(d，J＝16.4Hz，1H)，2.24(s，3H)，1.28(d，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)m/z：402[M+H+]。
实施例22
Figure GPA0000288043420000322
实施例22的制备可参考实施例1的制备流程A至E，将5-氟吡啶-2-甲酸替换成2，4-二氟苯甲酸；将中间体A-1替换成中间体A-5。粗产品经SFC制备分离(SFC分离方法：分离柱：DAICEL CHIRALPAK AD(规格：250mm×50mm，粒径：10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O，MeOH]；B％：30％-30％，1.8min)得到实施例22。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：8.00(d，J＝5.9Hz，1H)，7.77-7.69(m，1H)，7.53(d，J＝1.7Hz，1H)，7.31(dd，J＝1.8，5.7Hz，1H)，7.16-7.06(m，2H)，4.99(d，J＝16.5Hz，1H)，4.90-4.83(m，1H)，4.27(d，J＝16.6Hz，1H)，2.99(dd，J＝5.9，16.5Hz，1H)，2.79(d，J＝16.5Hz，1H)，1.17(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：405[M+H+]。
实施例23
Figure GPA0000288043420000323
实施例23的制备：
Figure GPA0000288043420000331
步骤A：化合物23-2的合成
0摄氏度下，化合物向23-1(50.0克)和碳酸钾(77.53克)的乙腈(500毫升)溶液中滴加3-溴丙炔(66.73克)。该反应混合物自然升至室温，继续搅拌12小时后，减压浓缩得到残余物。该残余物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取，合并的有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩得到化合物23-2的粗品。MS(ESI)m/z：128[M+H+]。
步骤B：化合物23-3的合成
室温下，向化合物23-2(52.0克)的四氢呋喃(500毫升)溶液中加入碳酸钾(26.56克)和Boc2O(41.94克)。该反应液在18摄氏度下搅拌12小时后，过滤除去固体，收集滤液并减压浓缩。将得到的残余物溶解在乙酸乙酯(800毫升)中，该有机相依次用水、饱和柠檬酸溶液和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩得到化合物23-3的粗品。MS(ESI)m/z：228[M+H+]。
步骤C：化合物23-4的合成
0摄氏度下，向化合物23-3(40.0克)的二氯甲烷(400毫升)溶液中分批加入戴斯-马丁试剂(82.10克)。该反应液混合物自然升至室温并搅拌2小时后，用体积比1∶1的饱和碳酸氢钠溶液和饱和硫代硫酸钠溶液洗涤两次，再依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩得到化合物23-4的粗品。MS(ESI)m/z：226[M+H+]。
步骤D：化合物23-5的合成
室温下，向化合物23-4(42.0克)的乙醇(400毫升)和水(40毫升)的混合溶液中加入乙酸钠(22.94克)和盐酸羟胺(16.84克)。该反应混合物在室温下搅拌12小后，减压浓缩除去乙醇得到残余物。将该残余物用乙酸乙酯溶解后，依次用水和饱和食盐水洗涤，再经无水硫酸钠干燥、过滤后，滤液减压浓缩得到化合物23-5的粗品。MS(ESI)m/z：241[M+H+]。
步骤E：化合物23-6的合成
室温下，向化合物23-5(300毫克)和2-碘嘧啶(257.16毫克)的N，N-二甲基甲酰胺(8毫升)溶液中加入碘化亚铜(11.89毫克)，三乙胺(252.66毫克)和双三苯基膦二氯化钯(43.81毫克)。氮气保护下，该反应混合物在12摄氏度下搅拌12小时。将反应液用乙酸乙酯稀释后过滤，滤液减压浓缩，剩余物经制备TLC板分离得到化合物23-6。MS(ESI)m/z：319[M+H+]。
步骤F：化合物23-7的合成
室温下，向化合物23-6(180毫克)的甲醇(4毫升)和水(0.8毫升)的混合溶液中，分批加入二(三氟乙酰氧基)碘代苯(291.76毫克)。该反应混合物在10～20摄氏度下搅拌0.5小时后，用20毫升水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物经制备TLC板分离得到化合物23-7。MS(ESI)m/z：317[M+H+]。
步骤G：化合物23-8的合成
将化合物23-7(90毫克)溶解于盐酸的二氧六环溶液(4摩尔/升，4毫升)中，该反应混合物在20摄氏度下搅拌0.5小时后，减压浓缩得到化合物23-8的粗品。MS(ESI)m/z：217[M+H+]。
步骤H：实施例23的合成
室温下，向化合物23-8(61.52毫克)的N，N-二甲基甲酰胺(2毫升)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(110.31毫克)和中间体A-2(72.90毫克)。该反应混合物在70摄氏度下搅拌1小时。将反应液用20毫升水稀释后，用乙酸乙酯萃取。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩后，剩余物经制备高效液相色谱纯化(分离柱：Phenomenex Synergi C18，150×30mm×4μm，流动相：[水(0.225％三氟乙酸)-乙腈]；B％：35％-65％，10min)得到实施例23。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ：8.97(d，J＝5.0Hz，2H)，7.83(dd，J＝2.8，5.6Hz，1H)，7.75-7.71(m，1H)，7.52(t，J＝5.0Hz，1H)，7.30(t，J＝9.0Hz，1H)，5.42(d，J＝17.9Hz，1H)，5.01(quin，J＝6.4Hz，1H)，4.59(d，J＝17.7Hz，1H)，3.14(dd，J＝5.7，16.4Hz，1H)，2.95(dd，J＝1.2，16.4Hz，1H)，1.27(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：379[M+H+]。
实施例24
Figure GPA0000288043420000341
实施例24的制备可参考实施例23的制备流程A至H，将中间体A-2替换成中间体A-3。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.04(d，J＝4.9Hz，2H)，9.01(s，1H)，7.74(dd，J＝2.4，6.8Hz，1H)，7.60(t，J＝4.9Hz，1H)，7.44-7.40(m，1H)，7.35-7.27(m，1H)，5.36(d，J＝18.0Hz，1H)，4.98-4.83(m，1H)，4.36(d，J＝18.0Hz，1H)，3.12-2.99(m，1H)，2.94-2.83(m，1H)，1.16(d，J＝6.8Hz，3H)。MS(ESI)m/z：388[M+H+]。
实施例25
Figure GPA0000288043420000351
实施例25的制备可参考实施例23的制备流程A至H，将中间体A-2替换成中间体A-1。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：8.86(d，J＝4.89Hz，2H)，7.29(t，J＝4.89Hz，1H)，7.08(dd，J＝6.05，9.48Hz，2H)，6.45(s，1H)，5.07(d，J＝16.75Hz，1H)，5.05-4.94(m，1H)，4.55(d，J＝16.87Hz，1H)，3.10-3.00(m，1H)，2.94-2.85(m，1H)，1.17(d，J＝6.97Hz，3H)。MS(ESI)m/z：390[M+H+]。
实施例26
Figure GPA0000288043420000352
实施例26的制备可参考实施例23的制备流程A至H，将中间体A-2替换成中间体A-6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：9.03(s，3H)，7.60(s，2H)，7.43-7.09(m，2H)，5.36(d，J＝17.9Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.36(d，J＝18.1Hz，1H)，3.06(d，J＝12.1Hz，1H)，2.89(d，J＝16.4Hz，1H)，1.15(d，J＝5.4Hz，3H)。MS(ESI)m/z：372[M+H+]。
活性测试
1.体外抗HBV活性测试
1)将100微升的HepG2.2.15细胞以每孔1.2×105细胞数种在96孔板细胞培养板里，细胞在37℃含5％二氧化碳(CO2)的培养箱里培养过夜。第二天，用DMSO三倍梯度稀释待测化合物，共稀释8个浓度，然后用培养基再将化合物稀释100倍，并取100微升稀释的化合物加入含细胞的培养板，终体积是200微升，DMSO的终浓度是0.5％，双复孔。细胞在37℃含5％CO2的培养箱里培养3天。第五天，用新鲜的含有相同浓度化合物的培养基给细胞培养板换液。当培养到第八天时，收集细胞培养板上清，用于提取HBV DNA。
2)实时定量PCR检测HBV DNA：用QIAamp 96 DNA Blood Kit试剂盒提取上清中总的DNA，通过HBV特异性引物及探针对HBV DNA含量进行定量PCR检测。把20微升的PCR预混液与5微升的HBV DNA样品或HBV质粒标准品加入到定量PCR板进行反应。HBV质粒标准品以10倍梯度从107到10拷贝数每微升稀释7个点。定量PCR反应程序如下：95℃预变性10分钟；95℃变性15秒，60℃反应1分钟，重复该循环40次。按下列公式计算各孔对HBV DNA的抑制率，并使用GraphPad Prism软件对化合物的抑制率数据进行非线性拟合分析，得到化合物的EC50值。
HBV DNA抑制率％＝(1-样品HBV DNA拷贝数/DMSO对照HBV DNA拷贝数)×100％
试验结果如下表1所示。
表1
Figure GPA0000288043420000361
2.小鼠药代动力学研究
本实验旨在评价化合物在小鼠体内单次静脉注射或灌胃给药后的药代动力学行为。静脉注射给药，化合物配制成0.5mg/mL的澄清溶液，溶媒：5％DMSO/5％十二羟基硬脂酸脂(solutol)/90％水；灌胃给药，化合物配制成2mg/mL的混悬液，溶媒：0.5％羧甲基纤维素钠/0.2％吐温80/99.3％水。
化合物在血浆中的浓度由高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行测定。化合物和内标(双氯芬酸)的保留时间、色谱图采集和色谱图的积分采用软件Analyst(AppliedBiosystems)进行处理，数据的统计采用软件Watson LIMS(Thermo Fisher Scientific)或Analyst(Applied Biosystems)进行处理。样品中分析物浓度单位为ng/mL，保留3位有效数字，所有以百分数表示的数值(如：％偏差和％变异系数等)均保留到小数点后一位。每条校正曲线至少包含6个浓度水平。校正标样的配制需采用和质控样品不同来源的储备液。校正标样算得的浓度与标示值的偏差超出±15.0％(定量下限超出±20.0％)回归分析中应拒绝该标样。被拒绝的校正标样应小于25％，且每条校正曲线至少包含6个符合接受标准的校正标样。如定量下限和定量上限校正标样需要拒绝时，该分析批的定量上限和下限将相应的提高和降低。
采用WinNonlinTM Version 6.3(Pharsight，Mountain View，CA)药动学软件的非房室模型处理血浆浓度，使用线性对数梯形法方法计算药动学参数。需计算的药动学参数包含但不局限于(数据允许)静脉注射组的T1/2、Vdss、CL、AUC0-24h；口服灌胃组的Cmax、Tmax、AUC0-24h、生物利用度(F％)。
本发明实施例在小鼠体内的药代动力学相关参数如下表2所示。
表2
Figure GPA0000288043420000362
3.小鼠尾静脉高压水注射HBV DNA质粒模型体内活性测试
此研究的目的是通过高压尾静脉注射的小鼠模型来检测化合物(实施例6)在小鼠体内对HBV的抑制效果。本实验采用雌性BABL/c小鼠，鼠龄6-7周。HBV质粒DNA采用pAAV2-HBV 1.3mer，使用Qiagen EndoFree Plasmid Giga试剂盒提取，浓度为1000ng/μL。使用前用正常生理盐水稀释，保存于4℃直至使用。
3.1动物分组
实验动物分组情况如下表3所示：
表3
Figure GPA0000288043420000371
*：第7天只给药一次。
3.2药物配制
药物配制情况如下表4所示：
表4
Figure GPA0000288043420000372
3.3给药安排
表5
Figure GPA0000288043420000373
*：第7天只给一次药。
3.4非终点取血的血样收集及转运
第1、3、5天，当天第一次给药后约4小时每只小鼠取100μL全血，将全血收集到加有肝素钠的管子中，4℃离心，7000转，离心10分钟，取上清，即得到血浆。血浆保存在-80℃冰箱，干冰冷冻条件下运送至分析实验室进行检测。
3.5定量PCR检测小鼠血浆中HBV DNA的含量
1)提取血浆中DNA，实验步骤参照QIAamp 96 DNA Blood Kit说明书。
2)定量PCR检测小鼠血浆中HBV DNA的含量
配制qPCR反应混合液(见表6)。将qPCR反应混合液、样品和标准品加入到96孔反应板中。其中标准品为含有D型HBV全长序列的质粒DNA，将标准品从107拷贝数/μL，10倍系列稀释，依次得到106～101拷贝数/μL的DNA标准品。PCR反应：95℃，10分钟；95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环。
表6 qPCR反应成份表
Figure GPA0000288043420000381
HBV DNA含量＝HBV引物检测的DNA含量-pAAV2引物检测的DNA含量。
3.6定量PCR检测小鼠肝脏中HBV DNA的含量
1)肝脏总DNA的提取
取肝脏组织，用组织研磨机匀浆。离心后取上清转移到新的离心管中，加入蛋白酶K消化液消化3小时。待冷却后，加入RNA酶A孵育30分钟。将RNA酶A处理后的混合液用等体积的酚氯仿异戊醇抽提两次以去除残余的蛋白。将上清转移到新离心管中，加入异丙醇沉淀DNA。将DNA沉淀用70％乙醇洗两遍。
将沉淀风干，加入TE(10mM Tris-HCl，pH 8.0，1mM EDTA)溶解DNA。
2)定量PCR检测小鼠肝脏中HBV DNA的含量
用Nanodrop测定DNA浓度，将所有样品的DNA浓度调整到10ng/μL。加5μL样品到定量PCR反应体系中，进行定量PCR。
HBV DNA含量＝HBV引物检测的DNA含量-pAAV2引物检测的DNA含量。
3.7实验结果
1)各受试组小鼠分别在给药后第1、3、5、7天采集血样中，HBV DNA浓度的检测值(Log HBV DNA)如下表7所示：
表7
Figure GPA0000288043420000382
LLOQ＝40拷贝数/μL，Log(LLOQ)＝1.60(LLOQ表示最低检测下限)
这一结果如图1所示。
2)给药7天后，各受试组动物肝脏组织中HBV DNA浓度的检测值(Log HBV DNA)如下表8所示：
表8
Figure GPA0000288043420000383
这一结果如图2所示。
4.小鼠尾静脉高压水注射HBV DNA质粒模型体内活性测试
此研究的目的是通过高压尾静脉注射的小鼠模型来检测化合物(实施例23)在小鼠体内对HBV的抑制效果。本实验采用雌性BABL/c小鼠，鼠龄6-7周。HBV质粒DNA采用pAAV2-HBV 1.3mer，使用Qiagen EndoFree Plasmid Giga试剂盒提取，浓度为1000ng/μL。使用前用正常生理盐水稀释，保存于4℃直至使用。
4.1动物分组
实验动物分组情况如下表9所示：
表9
Figure GPA0000288043420000391
*：第7天只给药一次。
4.2药物配制
药物配制情况如下表10所示：
表10
Figure GPA0000288043420000392
4.3给药安排
表11
Figure GPA0000288043420000393
*：第7天只给一次药。
4.4实验结果
1)各受试组小鼠分别在给药后第1、3、5、7天采集血样中，HBV DNA浓度的检测值(Log HBV DNA)如下表12所示：
表12
Figure GPA0000288043420000401
这一结果如图3所示。
2)给药7天后，各受试组动物肝脏组织中HBV DNA浓度的检测值(Log HBV DNA)如下表13所示：
表13
Figure GPA0000288043420000402
这一结果如图4所示。

Claims (25)

1.式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，
Figure FDA0003263450090000011
其中，环A为6-12元芳基或5-6元杂芳基；
各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、-S(＝O)2NRaRb、-S(＝O)2Rc、-C(＝O)ORd、C1-6烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2或-CN的取代基所取代C1-6烷基；
n为0、1、2或3；
T为N或CR3；
R1和R5各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、C1-3烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN或-NO2的取代基所取代C1-3烷基；
R2和R4各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-NRaRb、C1-6烷氧基或任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、-CN或-NO2的取代基所取代C1-6烷基；
R3为F、Br或CN；
Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为H或C1-6烷基；
所述5-6元杂芳基包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、N或-NH-的杂原子或杂原子团。
2.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述环A为苯基或5-6元杂芳基。
3.根据权利要求2所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述环A为苯基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基或吡啶基。
4.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述Ra、Rb、Rc和Rd各自独立地为H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3或-CH2(CH3)2。
5.根据权利要求1或4所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述各R独立地为F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-NH2、-N(CH3)2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-CH3、-CH2CH3、CF3或-CH2OH。
6.根据权利要求1或4所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述R1和R5各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-NH2、-CH3、-CHF、-CHF2或-CF3。
7.根据权利要求1或4所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述R2和R4各自独立地为H、F、Cl、Br、I、CN、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-NH2、-CH3、-CH2CH3、-CHF、-CHF2或-CF3。
8.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000021
为
Figure FDA0003263450090000022
9.根据权利要求8所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000023
为
Figure FDA0003263450090000024
Figure FDA0003263450090000025
10.根据权利要求9所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000026
为
Figure FDA0003263450090000027
Figure FDA0003263450090000028
Figure FDA0003263450090000031
11.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000032
为
Figure FDA0003263450090000033
12.根据权利要求1或11所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000034
为
Figure FDA0003263450090000035
13.根据权利要求12所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，所述结构单元
Figure FDA0003263450090000036
为
Figure FDA0003263450090000037
Figure FDA0003263450090000038
14.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-a)或式(III-a)所示结构：
Figure FDA0003263450090000039
15.根据权利要求14所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-a-1)或式(III-a-1)所示结构：
Figure FDA0003263450090000041
16.根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-b)或(III-b)所示结构：
Figure FDA0003263450090000042
其中，T1和T2各自独立地为N或CH。
17.根据权利要求16所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-b-1)或(III-b-1)所示结构：
Figure FDA0003263450090000043
Figure FDA0003263450090000051
其中，T1和T2各自独立地为N或CH。
18.根据权利要求16所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-d)、(II-e)、(II-f)、(III-d)、(III-e)或(III-f)所示结构：
Figure FDA0003263450090000052
19.根据权利要求18所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-d-1)、(II-e-1)、(II-f-1)、(III-d-1)、(III-e-1)或(III-f-1)所示结构：
Figure FDA0003263450090000061
20.根据权利要求14所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-g)～(II-i)或式(III-g)～(III-i)所示结构：
Figure FDA0003263450090000062
21.根据权利要求20所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其具有式(II-g-1)～(II-i-1)或式(III-g-1)～(III-i-1)所示结构：
Figure FDA0003263450090000071
22.下式化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体：
Figure FDA0003263450090000072
Figure FDA0003263450090000081
23.下式化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体：
Figure FDA0003263450090000091
Figure FDA0003263450090000101
24.一种药物组合物，包括作为活性成分的治疗有效量的根据权利要求1～23任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体以及药学上可接受的载体。
25.根据权利要求1～23任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体或权利要求24所述的药物组合物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
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