CN111206073A - 一种硅珠法核酸提取试剂盒及其使用方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种硅珠法核酸提取试剂盒及其制备方法和应用。所述硅珠法核酸提取试剂盒包括裂解液A、裂解液B、蛋白酶K溶液、吸附液、吸附珠悬液、漂洗液和洗脱液；其中，所述裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液混合形成裂解液。所述裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液按比例配制之后，一方面可加大裂解液的使用体积，有利于完全浸没检材，以使细胞中的核酸能够充分释放；同时，能够解决裂解液A和B之间的相互作用导致的裂解效率低以及见光分解等问题，使裂解液充分有效地裂解细胞，裂解效率高，得到浓度更高的核酸，有利于提高核酸的质量，保证后续操作的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及核酸检测技术，具体涉及一种，尤其涉及一种硅珠法核酸提取试剂盒及其使用方法和应用。
背景技术
随着DNA检验技术的进步，DNA提取已经成为影响DNA检验成功与否的关键环节。而如何从痕量检材中提取足够数量的优质DNA，一直是法医DNA检验领域的重大难题。目前DNA提取的主要方法包括基于吸附解离原理的磁珠法、硅珠法和基于分子量差异的柱法、滤膜法。
硅珠法与磁珠法的原理相近，提取核酸的流程大体相同，基本上分为四个基本步骤：(1)利用硫氰酸胍等强烈蛋白变性剂，破坏检材的细胞膜及核膜蛋白，释放DNA，并使核酸酶失活；(2)加入磁珠或硅珠进行特异性吸附；(3)通过洗涤液酸碱度、离子强度的控制进行漂洗纯化，去除PCR抑制剂；(4)更换溶液环境，在溶解液中进行DNA与磁珠或者硅珠的解离，将DNA重新溶出，从而达到提取纯化的目的。硅珠法在脱落细胞等微量生物检材以及骨骼、牙齿等疑难生物检材中的成功应用得到了很多学者的认可。
然而目前，市场现有硅珠法核酸提取试剂盒较少，且质量参差不齐，因此总体而言磁珠法市场占比大于硅珠法。虽然市场占比较小，但硅珠法在核酸提取方面具备特殊的优势：1、抗抑制能力强，可适用于高度腐败污秽等复杂法医检材；2、可带珠扩增，有效提高提取灵敏度。
CN105462961A公开了一种提取核酸的方法及试剂盒。本发明所述方法向待提取样品中加入裂解液裂解释放核酸分子，然后加入吸附核酸的材料以及结合液对核酸分子进行吸附，获得核酸-吸附材料复合物；将核酸-吸附材料复合物洗涤后，用含有表面活性剂的水溶液作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱下来的溶液，获得目标核酸分子。本发明针对现有提取核酸的方法的缺陷，在洗脱环节中将表面活性剂加入到洗脱液中，进而提高了洗脱核酸的得率，获得更多量的核酸分子，同时提取后的核酸长久保存而不被吸附在管壁或者被核酸酶降解，眼馋了核酸分子的保存时间。
CN109694863A公开了一种用于核酸提取的裂解液、清洗液、核酸提取试剂盒及核酸的提取方法。该核酸提取试剂盒包括裂解液，裂解液包括20-200mmol/L的NaCl、10-50mmol/L的Tris、10-50mmol/L的EDTA、质量百分含量为0.1-0.5％的十二烷基硫酸钠、质量百分含量为2-5％的TritonX-100、0.5-1mol/L的NaBrO3及0.5-1mol/L的异硫氰酸胍。上述核酸提取试剂盒能够提取得到较高浓度的核酸。
因此，提供一种裂解效率高、提取效率高的硅珠法核酸提取试剂盒，能够有效提取法医检材内的DNA，为DNA检验提供基础。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种硅珠法核酸提取试剂盒及其使用方法和应用。所述硅珠法核酸提取试剂盒提取得到的DNA纯度较高，检测精度较好，且制备方法简单，易于保存。
为达此目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述硅珠法核酸提取试剂盒包括：裂解液A、裂解液B、蛋白酶K溶液、吸附液、吸附珠悬液、漂洗液和洗脱液；
其中，所述裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液混合形成裂解液。
本发明中，本发明中提供的裂解液包括裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液，所述溶液按比例配制之后，可加大裂解液的使用体积，有利于完全浸没检材，使裂解液充分有效地裂解细胞，裂解效率高，以使细胞中的核酸能够充分释放，得到浓度更高的核酸，有利于提高核酸的质量，保证后续操作的准确性。
同时，将裂解液A和裂解液B分别配制，能够解决裂解液A和B之间的相互作用导致的裂解效率低的问题，也减少了裂解液B在存储过程中产生的见光分解问题，而且本发明提供的试剂盒易于存储。
所述裂解液A包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠或乙二胺四乙酸二钠二水合物中的任意一种或两种以上的组合。
其中，三羟甲基氨基甲烷为常用核酸溶剂，可稳定溶液pH；氯化钠提供必要的离子环境，为后续核酸DNA与硅珠结合提供钠离子；乙二胺四乙酸二钠作为金属螯合剂，可螯合溶液中可能存在的重金属镁离子、铁离子等，保护DNA完整性。
优选地，所述裂解液A包括摩尔浓度为0.005-0.015M的三羟甲基氨基甲烷、0.05-0.15M的氯化钠和0.005-0.015M的乙二胺四乙酸二钠二水合物。
所述裂解液A中三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为0.005-0.015M，例如可以是0.005M、0.006M、0.008M、0.01M、0.012M、0.014M或0.015M等。
所述裂解液A中氯化钠的摩尔浓度为0.05-0.15M，例如可以是0.05M、0.06M、0.08M、0.1M、0.12M、0.14M或0.015M等。
所述裂解液A中乙二胺四乙酸二钠二水合物(EDTANa2·2H2O)的摩尔浓度为0.005-0.015M，例如可以是0.005M、0.006M、0.008M、0.01M、0.012M、0.014M或0.015M等。
作为本发明优选的技术方案，所述裂解液B包括离子型表面活性剂。离子型表面活性剂可破坏细胞膜结构，使蛋白变性，将核酸DNA释放至溶液中。
优选地，所述离子型表面活性剂为阴离子表面活性剂。
优选地，所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠(SDS)。
优选地，所述裂解液B中十二烷基磺酸钠的质量浓度为8-12％，例如可以是8％、8.2％、8.4％、8.5％、8.8％、9％、9.5％、10％、10.4％、10.5％、10.8％、11％、11.2％、11.5％、11.8％或12％等。
优选地，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为8-12mg/mL，例如可以是8mg/mL、8.5mg/mL、9mg/mL、9.5mg/mL、10mg/mL、10.5mg/mL、11mg/mL、11.5mg/mL或12mg/mL等。
所述蛋白酶K为一类具有强力消化蛋白质的生物制剂，可消化与DNA相结合的蛋白，使DNA释放并溶解于溶液中。
作为本发明优选的技术方案，所述裂解液A、裂解液B与蛋白酶K溶液以体积比为(4-6):1:(0.4-0.6)的比例混合形成裂解液，例如可以是4:1:0.4、4.2:1:0.4、4.4:1:0.4、4.6:1:0.4、4.8:1:0.4、5:1:0.4、5.2:1:0.4、5.4:1:0.4、5.6:1:0.4、5.8:1:0.4、6:1:0.4、4:1:0.42、4:1:0.44、4:1:0.46、4:1:0.48、4:1:0.5、4:1:0.52、4:1:0.55、4:1:0.56、4:1:0.58、4:1:0.6、4.5:1:0.6、5:1:0.5、6:1:0.5或6:1:0.6等。
作为本发明优选的技术方案，所述洗脱液包括三羟甲基氨基甲烷和/或乙二胺四乙酸二钠二水合物。所述洗脱液用于将DNA重新从硅珠上释放至洗脱液中。
优选地，所述洗脱液包括摩尔浓度为8-12mM三羟甲基氨基甲烷和0.08-0.12mM乙二胺四乙酸二钠二水合物。
本发明中所述洗脱液中，乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.08-0.12mM，所述浓度有利于附着在硅珠上的DNA释放至洗脱液当中，便于后续的PCR处理。
所述洗脱液中三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为8-12mM，例如可以是8mM、8.2mM、8.5mM、9mM、9.2mM、9.5mM、10mM、10.2mM、10.5mM、10.8mM、11mM、11.5mM或12mM等。
所述洗脱液中乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.08-0.12mM，例如可以是0.08mM、0.082mM、0.085mM、0.09mM、0.092mM、0.095mM、0.1mM、0.102mM、0.105mM、0.108mM、0.11mM、0.115mM或0.12mM等。
优选地，所述吸附珠为硅羟基修饰的纳米二氧化硅颗粒。
优选地，所述纳米二氧化硅颗粒的粒径为150-250nm，例如可以是150nm、160nm、180nm、190nm、200nm、210nm、220nm、230nm或250nm等。
其中，硅羟基修饰的纳米二氧化硅颗粒较小，比表面积较大，利于DNA的吸附，同时能够避免生物检材中其他的杂质的影响。
作为本发明优选的技术方案，所述吸附液包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠二水合物或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或两种以上的组合。
优选地，所述吸附液包括摩尔浓度为3-5M的异硫氰酸胍、0.04-0.06M的三羟甲基氨基甲烷、0.01-0.03M的乙二胺四乙酸二钠二水合物和质量分数为2-3wt％的聚乙二醇辛基苯基醚。
其中，异硫氰酸胍为强力离液剂和变性剂，在此用于为溶液提供高盐环境，促进DNA与硅珠的特异性结合；聚乙二醇辛基苯基醚为非离子型表面活性剂，用于溶解脂质，解离蛋白。
所述吸附液中异硫氰酸胍的摩尔浓度为3-5M，例如可以是3M、3.2M、3.4M、3.5M、3.6M、3.8M、4M、4.2M、4.5M、4.8M或5M等。
所述吸附液中三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为0.04-0.06M，例如可以是0.04M、0.042M、0.044M、0.045M、0.046M、0.048M、0.05M、0.052M、0.054M、0.056M、0.058M或0.06M等。
所述吸附液中乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.01-0.03M，例如可以是0.01M、0.012M、0.014M、0.015M、0.016M、0.018M、0.02M、0.022M、0.024M、0.026M、0.028M或0.03M等。
所述吸附液中聚乙二醇辛基苯基醚的质量分数为2-3wt％，例如可以是2wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.4wt％、2.5wt％、2.6wt％、2.8wt％或3wt％等。
作为本发明优选的技术方案，所述漂洗液为质量分数为70wt％的乙醇水溶液，漂洗液用于去除吸附步骤所残留的盐离子及其它杂质。
本发明中，所述核酸提取试剂盒中可包含如下溶液：50-100mL裂解液A、20-50mL裂解液B、1-5mL蛋白酶K溶液、吸附液、吸附珠悬液、漂洗液和洗脱液。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的硅珠法核酸提取试剂盒的使用方法，所述使用方法包括如下步骤：
(1)将裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液混合后得到裂解液，将所述裂解液与待测检材混合，裂解；
(2)将步骤(1)得到的溶液离心，再加入吸附液，混匀后加入吸附珠悬液，震荡混匀得到混悬液；
(3)将所述混悬液离心后去除上清液体，再向沉淀物中加入漂洗液，混匀后离心，去除漂洗液；
(4)加入洗脱液，混匀后得到的洗脱物中即含有待测检材的核酸。
优选地，步骤(1)中所述裂解液的体积为350-450μL，例如可以是350μL、360μL、380μL、390μL、400μL、420μL、440μL或450μL等。
优选地，步骤(1)中所述裂解的温度为55-58℃，例如可以是55℃、55.5℃、55.8℃、56℃、56.5℃、57℃、57.5℃或58℃等，优选为56℃；时间为20-30min，例如可以是20min、22min、24min、25min、26min、28min或30min等。
优选地，步骤(2)中所述离心的转速为2500-3500g，例如可以是2500g、2600g、2700g、2800g、2900g、3000g、3100g、3200g、3300g、3400g或3500g等，优选为2800-3200g。
优选地，步骤(2)中所述离心的时间为6-8min，例如可以是6min、6.2min、6.4min、6.5min、6.6min、6.8min、7min、7.2min、7.4min、7.8min或8min等。
优选地，步骤(2)中所述吸附珠悬液与吸附液的体积比为1:(25-30)，例如可以是1:25、1:25.5、1:26、1:27、1:27.5、1:28、1:28.5、1:29、1:29.5或1:30等。
优选地，步骤(3)中两次离心的转速均为2500-3500g，例如可以是2500g、2600g、2700g、2800g、2900g、3000g、3100g、3200g、3300g、3400g或3500g等，优选为2800-3200g。
优选地，步骤(3)中两次离心的时间均为6-10min，例如可以是6min、6.5min、7min、7.5min、8min、8.5min、9min、9.5min或10min等。
优选地，所述吸附珠悬液与漂洗液的体积比为1:(35-40)，例如可以是1:35、1:35.5、1:36、1:37、1:38、1:38.5、1:39或1:40等。
优选地，步骤(4)中所述洗脱液的使用量为15-50μL，例如可以是15μL、18μL、20μL、25μL、30μL、35μL、38μL、40μL、45μL或50μL等。
作为本发明优选的技术方案，所述使用方法包括如下步骤：
(1)将裂解液A、裂解液B和8-12mg/mL蛋白酶K混合形成裂解液，所述裂解液A、裂解液B与蛋白酶K溶液的体积比为(4-6):1:(0.4-0.6)，取350-400μL裂解液与离心套管内的待测检材混合，55-58℃裂解20～30min；
(2)将步骤(1)得到的溶液2500-3500g离心6-8min，加入吸附液，混匀后加入吸附珠悬液，所述吸附珠悬液与吸附液的体积比为1:(25-30)，25-28℃下放置10-15min，期间每隔5min震荡混匀一次；
(3)将步骤(1)得到的溶液2500-3500g离心6-10min，去除上清液体，再向沉淀物中加入漂洗液，所述吸附珠悬液与漂洗液的体积比为1:(35-40)，混匀，2500-3500g离心6-10min，去除所述漂洗液，烘干5-10min至吸附珠表面无液体反光，整体呈白色墙粉状；
(4)加入洗脱液15-50μL，混匀后在55-58℃下保温15-20min，得到的洗脱物中即含有待测检材的核酸。
第三方面，本发明提供如第一方面所述的硅珠法核酸提取试剂盒在提取痕量DNA方面的应用。
本发明所述的数值范围不仅包括上述例举的点值，还包括没有例举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的核酸提取试剂盒中包括裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液，所述溶液按比例配制之后，可加大裂解液的使用体积，有利于完全浸没检材，使裂解液充分有效地裂解细胞，裂解效率高；所述洗脱液中，乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度有利于附着在硅珠上的DNA释放至洗脱液当中，便于后续的PCR处理。且本发明提供的使用方法中，选择了适当的方式分离硅珠，提高了硅珠的分离效率，且提取DNA的灵敏度较高，抗抑制性良好。
附图说明
图1为本发明提供的硅珠法核酸提取试剂盒的使用流程示意图。
具体实施方式
为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制，在不脱离前后所述宗旨的范围下，实施都包含在本发明的技术范围内。
实施例1
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括：
实施例2
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括：
实施例3
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括：
实施例4
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒与实施例1的区别在于：裂解液A中的三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为0.001M；
实施例5
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒与实施例1的区别在于：裂解液A中的三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为0.03M；
实施例6
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒与实施例1的区别在于：裂解液A中的乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.001M；
实施例7
本实施例提供一种硅珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒与实施例1的区别在于：裂解液A中的乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.03M；
实施例8
与实施例1的区别在于：所述试剂盒的洗脱液中乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为1mM。
实施例9
与实施例1的区别在于：所述试剂盒的洗脱液中乙二胺四乙酸二钠二水合物的摩尔浓度为0.05mM。
对比例1
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中裂解液包含0.01M三羟甲基氨基甲烷、0.1M氯化钠、0.01M乙二胺四乙酸二钠二水合物、终浓度为10wt％的十二烷基磺酸钠、10mg/mL的蛋白酶K；即所述裂解液不分为裂解液A、B和蛋白酶K进行储存。
对比例2
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中裂解液和10mg/mL蛋白酶K溶液；
所述裂解液包含0.01M三羟甲基氨基甲烷、0.1M氯化钠、0.01M乙二胺四乙酸二钠二水合物、终浓度为10wt％的十二烷基磺酸钠。
对比例3
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中裂解液A和裂解液B；
所述裂解液A包含0.01M三羟甲基氨基甲烷、0.1M氯化钠、0.01M乙二胺四乙酸二钠二水合物；
所述裂解液B包含终浓度为10wt％的十二烷基磺酸钠、10mg/mL的蛋白酶K。
对比例4
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中裂解液A和裂解液B；
所述裂解液A包含0.01M三羟甲基氨基甲烷、0.1M氯化钠、0.01M乙二胺四乙酸二钠二水合物和10mg/mL的蛋白酶K
所述裂解液B包含终浓度为10wt％的十二烷基磺酸钠。
对比例5
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中裂解液A、裂解液B和10mg/mL的蛋白酶K。
所述裂解液A包含0.01M三羟甲基氨基甲烷、0.1M氯化钠；
所述裂解液B包含终浓度为10wt％的十二烷基磺酸钠、0.01M乙二胺四乙酸二钠二水合物。
对比例6
与实施例1的区别在于：所述试剂盒中将十二烷基苯磺酸钠替换为十二烷基硫酸钠。
试验例1
本试验例使用实施例1提供的检测试剂盒提取生物检材的DNA，所述DNA提取步骤如图1所示：
(1)将10μL稀释1000倍的冻存静脉血样品滴加至棉签头上，放入离心套管内，将裂解液A、裂解液B以及10mg/mL蛋白酶K按5:1:0.5的比例混合后，滴加400μL至检材上，盖上管盖，56℃裂解20min；
(2)3000g离心5min，开盖加入550μL吸附液，盖上管盖，混匀后加入充分悬浮的硅珠悬液20μL，25℃放置15min，期间每5min震荡混匀一次；
(3)3000g离心10min，充分去除上清液体，沉淀物中加入漂洗液750μL，盖上管盖，充分混匀，3000g离心10min，尽量去除漂洗液；
(4)开盖状态下，56℃烘干5min，至硅珠表面无液体反光，整体呈白色墙粉状；
(5)加入洗脱液40μL，盖上管盖，充分混匀后56℃保温15min；洗脱产物可直接带珠进行下游PCR扩增。
试验例2-9
与试验例1的区别在于，所述试验例中分别使用实施例2-9提供的核酸提取试剂盒。
试验例10
与试验例1的区别在于，本试验例中裂解液A、裂解液B以及10mg/mL蛋白酶K的混合比例为6:1:0.6，其余条件及步骤同试验例1。
试验例11
与试验例1的区别在于，本试验例中裂解液A、裂解液B以及10mg/mL蛋白酶K的混合比例为4:1:0.4，其余条件及步骤同试验例1。
试验例12
与试验例1的区别在于，本试验例中裂解液A、裂解液B以及10mg/mL蛋白酶K的混合比例为1:1:1，其余条件及步骤同试验例1。
试验例13
与试验例1的区别在于，本试验例中裂解液A、裂解液B以及10mg/mL蛋白酶K的混合比例为8:1:1，其余条件及步骤同试验例1。
对比试验例1-6
与试验例1的区别在于，所述试验例中分别使用对比例1-6提供的核酸提取试剂盒。
性能测试
本发明通过STR位点数反应试剂盒的提取效率。STR(短串联重复序列，shorttandem repeat)，是一类广泛存在于人类基因组中的DNA多态性基因座，因其基因片段短、扩增效率高、判型准确等特点，已广泛应用于法医学个体识别和亲子鉴定等领域。
STR位点数的具体检测数据(数据由ABI 3500型号毛细管电泳仪检测分析所得)如表1所示。
表1
由上表可知，使用本发明提供的硅珠法核酸提取试剂盒提取得到的DNA的STR位点数较为稳定，由于实施例1和对比例1～5比较可知，本发明中将试剂盒中的裂解液分为裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液，能够充分有效地裂解细胞，裂解效率高，以使细胞中的核酸能够充分释放，有利于提高核酸的质量；且由试验例1与试验例10-13比较可知，在配制裂解液时，所述裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液的比例尤为重要，其比例会影响到提取的稳定性，在其比例接近5:1:0.5时效果较好。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种硅珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述硅珠法核酸提取试剂盒包括：
裂解液A、裂解液B、蛋白酶K溶液、吸附液、吸附珠悬液、漂洗液和洗脱液；
其中，所述裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液混合形成裂解液。
2.根据权利要求1所述的硅珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液A包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠或乙二胺四乙酸二钠二水合物中的任意一种或两种以上的组合；
优选地，所述裂解液A包括摩尔浓度为0.005-0.015M的三羟甲基氨基甲烷、0.05-0.15M的氯化钠和0.005-0.015M的乙二胺四乙酸二钠二水合物。
3.根据权利要求1或2所述的硅珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液B包括离子型表面活性剂；
优选地，所述离子型表面活性剂为阴离子表面活性剂；
优选地，所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠；
优选地，所述裂解液B中十二烷基磺酸钠的质量浓度为8-12％；
优选地，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为8-12mg/mL；
优选地，所述裂解液A、裂解液B与蛋白酶K溶液的以体积比为(4-6):1:(0.4-0.6)混合配制形成裂解液。
4.根据权利要求1-3任一项所述的硅珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括三羟甲基氨基甲烷和/或乙二胺四乙酸二钠二水合物；
优选地，所述洗脱液包括摩尔浓度为8-12mM三羟甲基氨基甲烷和0.08-0.12mM乙二胺四乙酸二钠二水合物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的硅珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述吸附珠为硅羟基修饰的纳米二氧化硅颗粒；
优选地，所述纳米二氧化硅颗粒的粒径为150-250nm；
优选地，所述吸附液包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠二水合物或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或两种以上的组合；
优选地，所述吸附液包括摩尔浓度为3-5M的异硫氰酸胍、0.04-0.06M的三羟甲基氨基甲烷、0.01-0.03M的乙二胺四乙酸二钠二水合物和质量分数为2-3wt％的聚乙二醇辛基苯基醚；
优选地，所述漂洗液为质量分数为70wt％的乙醇水溶液。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的硅珠法核酸提取试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括如下步骤：
(1)将裂解液A、裂解液B和蛋白酶K溶液混合后得到裂解液，将所述裂解液与待测检材混合，裂解；
(2)将步骤(1)得到的溶液离心，再加入吸附液，混匀后加入吸附珠悬液，震荡混匀得到混悬液；
(3)将所述混悬液离心后去除上清液体，再向沉淀物中加入漂洗液，混匀后离心，去除漂洗液；
(4)加入洗脱液，混匀后得到的洗脱物中即含有待测检材的核酸。
7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤(1)中所述裂解液的体积为350-450μL；
优选地，步骤(1)中所述裂解的温度为55-58℃，时间为20-30min；
优选地，步骤(2)中所述离心的转速为2500-3500g，优选为2800-3200g；
优选地，步骤(2)中所述离心的时间为6-8min；
优选地，步骤(2)中所述吸附珠悬液与吸附液的体积比为1:(25-30)。
8.根据权利要求6或7所述的使用方法，其特征在于，步骤(3)中两次离心的转速均为2500-3500g，优选为2800-3200g；
优选地，步骤(3)中两次离心的时间均为6-10min；
优选地，所述使用方法中吸附珠悬液与漂洗液的体积比为1:(35-40)；
优选地，步骤(4)中所述洗脱液的使用量为15～50μL。
9.根据权利要求7或8所述的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括如下步骤：
(1)将裂解液A、裂解液B和8-12mg/mL蛋白酶K混合形成裂解液，所述裂解液A、裂解液B与蛋白酶K溶液的体积比为(4-6):1:(0.4-0.6)，取350-400μL裂解液与离心套管内的待测检材混合，55-58℃裂解20～30min；
(2)将步骤(1)得到的溶液2500-3500g离心6-8min，加入吸附液，混匀后加入吸附珠悬液，所述吸附珠悬液与吸附液的体积比为1:(25-30)，25-28℃下放置10-15min，期间每隔5min震荡混匀一次；
(3)将步骤(1)得到的溶液2500-3500g离心6-10min，去除上清液体，再向沉淀物中加入漂洗液，所述吸附珠悬液与漂洗液的体积比为1:(35-40)，混匀，2500-3500g离心6-10min，去除所述漂洗液，烘干5-10min至吸附珠表面无液体反光，整体呈白色墙粉状；
(4)加入洗脱液15-50μL，混匀后在55-58℃下保温15-20min，得到的洗脱物中即含有待测检材的核酸。
10.如权利要求1-6任一项所述的硅珠法核酸提取试剂盒在提取痕量DNA方面的应用。
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112899132A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-06-04 | 上海金鑫生物科技有限公司 | 一种用于核酸提取与纯化的硅胶过滤吸头 |
| CN115386576A (zh) * | 2022-09-29 | 2022-11-25 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 一种血浆游离核酸共提取试剂组合、试剂盒及提取方法 |
| CN117384897A (zh) * | 2023-09-28 | 2024-01-12 | 广州奕昕生物科技有限公司 | 一种磁珠法水体病毒核酸富集提取试剂盒及其制备方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101608239A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-12-23 | 重庆大学 | 动物衣原体多重套式pcr检测试剂盒及其检测方法 |
| US20110124851A1 (en) * | 2009-11-24 | 2011-05-26 | Omega Bio-Tek, Inc. | Method of Isolation of Nucleic Acids |
| CN105969764A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-09-28 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种动物组织提取dna方法 |
| CN106047868A (zh) * | 2016-08-23 | 2016-10-26 | 厦门基源医疗科技有限公司 | 一种口腔咽拭子细菌宏基因组dna提取方法 |
| CN106153941A (zh) * | 2015-04-28 | 2016-11-23 | 复旦大学 | 一种基于特异抗体的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法 |
| CN107354149A (zh) * | 2017-08-30 | 2017-11-17 | 广州奇辉生物科技有限公司 | 一种提取痕量dna的试剂盒及提取方法 |
| CN108456676A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-08-28 | 黄书琴 | 从骨骼或牙齿中提取dna的提取缓冲液和提取方法 |
| CN108587863A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-09-28 | 山东森芃生物科技有限公司 | 一种差异化裂解提取性侵犯案件检材中精细胞dna的方法及试剂盒 |
| CN109402113A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-03-01 | 广东腾飞基因科技股份有限公司 | 基于聚苯乙烯磁珠的干血片基因组提取试剂盒及提取方法 |
-
2020
- 2020-03-25 CN CN202010217345.8A patent/CN111206073B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101608239A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-12-23 | 重庆大学 | 动物衣原体多重套式pcr检测试剂盒及其检测方法 |
| US20110124851A1 (en) * | 2009-11-24 | 2011-05-26 | Omega Bio-Tek, Inc. | Method of Isolation of Nucleic Acids |
| CN106153941A (zh) * | 2015-04-28 | 2016-11-23 | 复旦大学 | 一种基于特异抗体的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法 |
| CN105969764A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-09-28 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种动物组织提取dna方法 |
| CN106047868A (zh) * | 2016-08-23 | 2016-10-26 | 厦门基源医疗科技有限公司 | 一种口腔咽拭子细菌宏基因组dna提取方法 |
| CN107354149A (zh) * | 2017-08-30 | 2017-11-17 | 广州奇辉生物科技有限公司 | 一种提取痕量dna的试剂盒及提取方法 |
| CN108456676A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-08-28 | 黄书琴 | 从骨骼或牙齿中提取dna的提取缓冲液和提取方法 |
| CN108587863A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-09-28 | 山东森芃生物科技有限公司 | 一种差异化裂解提取性侵犯案件检材中精细胞dna的方法及试剂盒 |
| CN109402113A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-03-01 | 广东腾飞基因科技股份有限公司 | 基于聚苯乙烯磁珠的干血片基因组提取试剂盒及提取方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张振 等: "人外周血基因组DNA提取的影响因素及方案选择", vol. 34, no. 34, pages 1 * |
| 杨暖;刘晓云;黄肖敏;: "龋蛀牙齿DNA检验的分析" * |
| 杨暖;刘晓云;黄肖敏;: "龋蛀牙齿DNA检验的分析", 广东公安科技, vol. 27, no. 04, pages 30 - 32 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112899132A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-06-04 | 上海金鑫生物科技有限公司 | 一种用于核酸提取与纯化的硅胶过滤吸头 |
| CN115386576A (zh) * | 2022-09-29 | 2022-11-25 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 一种血浆游离核酸共提取试剂组合、试剂盒及提取方法 |
| CN115386576B (zh) * | 2022-09-29 | 2025-02-18 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 一种血浆游离核酸共提取试剂组合、试剂盒及提取方法 |
| CN117384897A (zh) * | 2023-09-28 | 2024-01-12 | 广州奕昕生物科技有限公司 | 一种磁珠法水体病毒核酸富集提取试剂盒及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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