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CN111183217A - 用于收获微藻的方法 - Google Patents

用于收获微藻的方法 Download PDF

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CN111183217A
CN111183217A CN201780093089.2A CN201780093089A CN111183217A CN 111183217 A CN111183217 A CN 111183217A CN 201780093089 A CN201780093089 A CN 201780093089A CN 111183217 A CN111183217 A CN 111183217A
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CN
China
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microalgae
water
mixture
flocculant
flue gas
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CN201780093089.2A
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English (en)
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席玮芳
W·于
H·张
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Shenzhen Qianhai Xiaozao Tech Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Qianhai Xiaozao Tech Co ltd
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Publication date
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    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12Unicellular algae; Culture media therefor
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    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
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Abstract

公开了用于收获微藻的方法,其包括:提供含有微藻的水,提供当与所述水混合时形成微藻絮凝物的量的絮凝剂,产生所述水和所述絮凝剂的混合物,以及从所述混合物中分离出所述絮凝物。

Description

用于收获微藻的方法
相关申请的交叉引用
不适用
关于联邦政府资助研究的声明
不适用
联合研究协议的各方
不适用
对在光盘上提交的序列表的引用
不适用
背景技术
本公开文本总体上涉及藻产业,并且更具体地涉及培养和收获微藻。
微藻是单细胞微观藻,其生产可用于许多工业、营养和医学/制药应用的各种碳水化合物、蛋白质和脂质。微藻是用于生产生物燃料、营养补品和药物的重要起始材料。(可访问:www.rsisinternational.org/Issue7/313-317.pdf)生产用于这些应用的藻类生物质的成本效率、高产率且可靠的手段对于藻产业的可持续性和上述材料的生产是至关重要的。
微藻是能够在多样的水生条件下生长的光合生物体并且可以在淡水、盐水和微咸水中找到或培养。尽管微藻可以在多种条件下茁壮成长,但养殖条件会影响其生长速率以及其脂质、蛋白质和碳水化合物的含量。为了增强微藻的生长和微藻的最佳蛋白质/碳水化合物/脂质含量,必须谨慎地维持关于营养素数量和品质、光、pH、湍流、盐度和温度的特定参数。(可访问:www.fao.org/docrep/003/w3732e/w3732e06.htm)
微藻可以在室内和室外两者,在池塘、水道(raceway)或密闭容器中养殖。从液体培养物中分离微藻需要将微藻从大量水中分离和浓缩。这可以通过各种手段来实现。絮凝和凝结会导致单细胞微藻结块并且用于增加微藻的粒度以利于收获。尽管不一定总是需要此步骤,但是可以通过离心、浮选或过滤更容易地从水中分离出微藻团块或絮凝物。(可访问:www.rsisinternational.org/Issue7/313-317.pdf和www.fao.org/docrep/003/w3732e/w3732e06.htm)
用于生产供人食用的提取物的微藻需要尤其严格的培养和收获标准。特别是在开放式系统中室外生长时,微藻可能容易受到其他藻类物种或机会性微生物的生物体(诸如真菌、霉菌和细菌)的污染。此外,还应谨慎地监测无论是来自外部来源还是来自方法本身的化学或外来材料污染(例如,化学絮凝剂),并且采取步骤将此类潜在来源的污染最小化。
除了这些考虑因素之外,用于微藻养殖和收获的任何方法还必须考虑其长期可持续性和经济可行性。养殖和收获供使用的、特别是用于生产供人食用的提取物的高品质微藻需要大量的资源投资。本领域需要用于养殖和收获用于生产藻类提取物和营养品的微藻的高效、成本有效且可靠的方法。
发明内容
当前要求保护的方法提供了一种可靠且高效的培养和收获微藻的手段。所述方法解决了提供养殖和收获条件的特定需求,所述条件促进感兴趣的微藻物种的最佳生长并且增强用于在藻类提取物和营养品的生产中应用的脂质、蛋白质和碳水化合物的含量/组成。
当前要求保护的方法提供了一种收获微藻的成本有效的手段,所述微藻不含有害污染物,诸如化学絮凝剂、微生物污染物或环境杂质。因此,所述方法可用于产生藻类生物质,所述藻类生物质可以加工成微藻衍生的营养品和其他制成品。所述方法是成本有效的,因为它直接利用海水,有利地重新利用烟道气,并且经济地再循环所述水以再用于微藻养殖。此外,通过在开放式容器中养殖微藻,由此不需要专门提供氧气来支持生长,并且还通过在收获前使微藻絮凝来更高效地从微藻中分离出水以允许收获而大大地降低成本。在所要求保护的方法中提供的微藻能够在允许室外培养的宽温度范围内生产二十碳五烯酸(EPA)。鉴于这些因素,当前要求保护的方法提供了一种通过利用上面提及的因素的益处来养殖、分离和收获微藻从而以高产率产生优越品质的微藻的成本有效且高效的手段。
本文描述的实施方案通过提供用于收获微藻的方法来满足以上部分中描述的需求,所述方法通过以下方式进行:提供含有微藻的水,产生所述水和絮凝剂的混合物,以及从所述混合物中分离出所述絮凝物。在某些实施方案中,所述絮凝剂是壳聚糖。在上面提及的方面的一些实施方案中,壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约2%的浓度提供。
在一些实施方案中,所述微藻可以在高于32℃的温度下生产二十碳五烯酸(EPA)。在某些实施方案中,所述微藻是微拟球藻(Nannochloropsis)。
在某些实施方案中,所述水具有在约8.0与约9.0之间的pH。在一些实施方案中,所述水具有约2.2%的盐度。在某些实施方案中,所述水具有浓度在约0.1g/L与约0.2g/L之间的碳酸氢钠。在一些实施方案中,所述水的温度在约10℃与约38℃之间。
在某些实施方案中,所述方法进一步包括添加烟道气或将所述水与烟道气混合。在一些实施方案中,所述烟道气具有在约10%与约14%之间的二氧化碳。在一些实施方案中,所述烟道气具有小于5ppm的二氧化硫。在某些实施方案中,所述水和絮凝剂的混合物是酸性的。在一些实施方案中,所述混合物具有约5.5的pH。
本公开文本的某些方面涉及制备粗微藻提取物的方法。本公开文本的其他方面涉及制备微藻脂质提取物的方法。
附图说明
图1示出了空气泵和过滤设计的设置。
图2展示了光生物反应器和光板的设置,作为放大过程的一部分。
图3绘示了用于微藻养殖的室外池塘的建造。所述池塘完全衬有HDPE薄膜。
图4说明了室外水道的设计,所述室外水道包括壁板、桨轮和电机。
图5绘示了图示所述方法的流程图。
具体实施方式
以下描述阐述了示例性方法、参数等。然而,应认识到,这样的描述并不旨在作为对本公开文本的范围的限制,而是旨在作为示例性实施方案的描述而提供。
定义
如本文所用的术语“絮凝剂”是指引起颗粒聚集的试剂。絮凝剂可以描述引起微藻结块以形成微藻浆料或絮凝物的试剂。
如本文所用的术语“微藻”是指微观的单细胞藻。
如本文所用的术语“烟道气”是指从烟道释放的气体。烟道气包括由发电厂或工厂产生的废气。
收获微藻的方法
本公开文本涉及一种通过以下方式收获微藻的方法:提供含有微藻的水,提供当与水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂,产生所述水和絮凝剂的混合物,其中所述混合物是酸性的;以及从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而收获所述微藻。
在某些实施方案中,所述水是盐水、淡水或微咸水。在其他实施方案中,所述水是海水。在优选的实施方案中,所述水是从海洋抽出的。
在某些实施方案中,所述水具有在约6.0与约10.0之间的pH。在其他实施方案中,所述水具有在约6.0与约6.5、约6.5与约7.0、约7.0与约7.5、约7.5与约8.0、约8.0与约8.5、约8.5与约9.0、约9.0与约9.5、或约9.5与约10.0之间的pH。在某些实施方案中,所述水具有约6.0、约6.5、约7.0、约7.5、约8.0、约8.5、约9.0、约9.5、或约10.0的pH。在优选的实施方案中,所述水具有在约8.0与约9.0之间的pH。
在某些实施方案中,所述水具有在约0.01%与约5%之间的盐度。在其他实施方案中,所述水具有在约0.01%与约0.5%、约0.5%与约1.0%、约1.0%与约1.5%、约1.5%与约2.0%、约2.0%与约2.5%、约2.5%与约3.0%、约3.0%与约3.5%、约3.5%与约4.0%、约4.0%与约4.5%、或约4.5%与约5.0%之间的盐度。在优选的实施方案中,所述水具有约2.2%的盐度。
在某些实施方案中,所述水包含浓度在约0.01g/L与约0.5g/L之间的碳酸氢钠。在一些实施方案中,所述水包含浓度在约0.01g/L与约0.05g/L、约0.5g/L与约1.0g/L、约1.0g/L与约1.5g/L、约1.5g/L与约2.0g/L、约2.0g/L与约2.5g/L、约2.5g/L与约3.0g/L、约3.0g/L与约3.5g/L、约3.5g/L与约4.0g/L、约4.0g/L与约4.5g/L、或约4.5g/L与约5.0g/L之间的碳酸氢钠。在优选的实施方案中,所述水包含浓度在约0.1g/L与约0.2g/L之间的碳酸氢钠。
在某些实施方案中,所述絮凝剂是形成阳离子聚电解质以沉淀所述微藻的多糖。在一些实施方案中,所述絮凝剂是无毒的。在其他实施方案中,所述絮凝剂衍生自甲壳类动物。在又其他实施方案中,所述絮凝剂是壳聚糖。在某些实施方案中,所述壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约0.08%与约3.5%之间的浓度提供。在其他实施方案中,所述壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约0.08%与约0.5%、约0.5%与约1.0%、约1.0%与约1.5%、约1.5%与约2.0%、约2.0%与约2.5%、约2.5%与约3.0%、或约3.0%与约3.5%之间的浓度提供。在优选的实施方案中,所述壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约2%提供。
在某些实施方案中,所述方法包括添加烟道气或将所述水与烟道气混合。在某些实施方案中,所述烟道气包含二氧化碳。在某些实施方案中,所述烟道气包含浓度在约4%与约20%之间的二氧化碳。在某些实施方案中,所述烟道气包含浓度在约4%与约8%、约8%与约12%、约12%与约16%、或约16%与约20%之间的二氧化碳。在其他实施方案中,所述烟道气包含浓度在约6%与约10%、约10%与约14%、或约14%与约18%之间的二氧化碳。在优选的实施方案中,所述烟道气包含浓度在约10%与约14%之间的二氧化碳。在某些实施方案中,所述烟道气具有小于10ppm、9ppm、8ppm、7ppm、6ppm、5ppm、4ppm、3ppm、2ppm、或1ppm的二氧化硫。在优选的实施方案中,所述烟道气具有小于5ppm的氧化硫。
在某些实施方案中,所述混合物是酸性的。在某些实施方案中,所述混合物具有在约4.5与约6.5之间的pH。在一些实施方案中,所述混合物具有在约4.5与约5.0、约5.0与约5.5、约5.5与约6.0、或约6.0与约6.5之间的pH。在优选的实施方案中,所述混合物具有约5.5的pH。
在某些实施方案中,所述含有微藻的水的温度在约10℃与约38℃之间。在其他实施方案中,所述水的温度在约10℃与约15℃、约15℃与约20℃、约20℃与约25℃、约25℃与约30℃、约30℃与约35℃、或约35℃与约38℃之间。
在某些实施方案中,在将大部分水排空以供再循环使用之后,收获池塘中留15%的絮凝物加剩余的水。在其他实施方案中,收获池塘中留10%的絮凝物加上剩余的水或5%的絮凝物加上剩余的水。在优选的实施方案中,收获池塘中留2%的絮凝物加剩余的水。
在某些实施方案中,将絮凝物和剩余的水离心的分离系数在约1800与约3500之间。在优选的实施方案中,将絮凝物和剩余的水离心的分离系数是约2100。在一些实施方案中,所述絮凝物含有约10%的干藻重量(即,100g/L)。在其他实施方案中,所述絮凝物含有1%-2%的干藻重量(即,10-20g/L)或小于1%的干藻重量(即,小于10g/L)。
在某些实施方案中,所述微藻具有高的油含量(>20%)。在其他实施方案中,所述微藻包含10%、15%、20%、25%、30%、或35%的多不饱和脂肪酸。在某些实施方案中,所述微藻可以在高于32℃的温度下生产二十碳五烯酸(EPA)。在某些实施方案中,所述微藻可以生产>1%、>2%、>3%、>4%、>5%、>6%、>7%、>8%、>9%、>10%、>11%、>12%、>13%、>14%、或>15%的EPA。
在某些实施方案中,所述微藻是海洋微藻。在上面提及的实施方案的一个方面,所述微藻可以在直接从海洋提供的海水中生长。在其他实施方案中,所述微藻是淡水微藻或微咸水微藻。在其他实施方案中,所述微藻以单细胞、以群组、或以链存在。在其他实施方案中,所述微藻是等鞭金藻属物种(Isochrysis sp.)、Pseudoisochrysis sp.、叉鞭金藻属物种(Dicrateria sp.)、巴夫金藻属物种(Monochrysis sp.)、四爿藻属物种(Tetraselmissp.)、塔胞藻属物种(Pyramimonas sp.)、微单胞藻属物种(Micromonas sp.)、蓝隐藻属物种(Chroomonas sp.)、隐藻属物种(Cryptomonas sp.)、红胞藻属物种(Rhodomonas sp.)、衣藻属物种(Chlamydomonas sp.)、绿球藻属物种(Chlorococcum sp.)、Olisthodiscussp.、四鞭藻属物种(Carteria sp.)、杜氏藻属物种(Dunaliella sp.)、螺旋藻属物种(Spirulina sp.)、红球藻属物种(Haematococcus sp.)、蔷薇藻属物种(Rhodella sp.)、极大节旋藻(Arthrospira maxima)、或微拟球藻属物种(Nannochloropsis sp)。在优选的实施方案中,所述微藻是加的斯微拟球藻(Nannochloropsis gaditana)、颗粒微拟球藻(Nannochloropsis granulate)、湖泊微拟球藻(Nannochloropsis limnetica)、海洋微拟球藻(Nannochloropsis oceanica)、眼点微拟球藻(Nannochloropsis oculata)、或盐生微拟球藻(Nannochloropsis salina)。在一些实施方案中,所述微拟球藻可以包括与自然界中发现的野生型微拟球藻或微拟球藻的遗传差异。
本公开文本的其他方法
本公开文本还涉及一种通过以下方式制备粗微藻提取物的方法:提供含有微藻的水,提供当与水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂,产生所述水和絮凝剂的混合物,其中所述混合物是酸性的;以及从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而制备粗微藻提取物。
本公开文本进一步涉及一种通过以下方式制备微藻脂质提取物的方法:提供含有微藻的水,提供当与水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂,在足以形成微藻絮凝物的条件下产生所述水和絮凝剂的混合物,从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而收获所述微藻,以及从所述微藻中提取脂质,从而制备微藻脂质提取物。
这些方法的实施方案是如上面针收获微藻的方法所描述的。
实施例
实施例1:室内养殖
1.1纯化过程
在自然界中收集微拟球藻属物种,并且然后将其通过简单的铺板方法纯化,由此形成其中仅具有一个微藻菌株的单一集落。这里是制备1升培养基以制造琼脂板的实施例。首先,如下制备100ml各储备溶液:
表1:储备溶液
储备溶液(100ml) 质量(g)
MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 24.4
KCl 6
尿素 2.5
CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O 3
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·H<sub>2</sub>O 0.35
NaHCO<sub>3</sub> 10
将22g NaCl和15g琼脂粉末添加到800ml di H2O中,然后如下添加各储备溶液。注意,下表中的最终浓度是基于在1升培养基中的每种化合物计算的。
表2:琼脂板培养基
Figure BDA0002363404360000071
Figure BDA0002363404360000081
如下制备P-IV溶液。注意,浓度是1L培养基的最终浓度。
表3:P-IV溶液
Figure BDA0002363404360000082
添加di H2O至1L,并且然后使用HCl或NaOH将pH调节至7。将溶液在115摄氏度下高压灭菌30分钟。如下制备100ml各维生素储备溶液。注意,最终浓度是基于在1升培养基中的每种化合物计算的。
表4:维生素储备溶液
储备溶液(100ml) 质量(g) 最终浓度(mg/L)
维生素B1 0.0335 0.335
维生素B7 0.0025 0.025
维生素B12 0.0135 0.135
在将维生素添加到培养基中之前,将维生素储备溶液用Millipore过滤瓶(Millipore Stericup-GP过滤瓶1000/1000ml,具有0.22μm聚醚砜膜Express pus PER)过滤。将培养基冷却至50-70摄氏度,并且在恒定振荡期间如表4中所指示添加1ml各无污染维生素储备溶液。将培养基转移到培养皿中,并且然后允许其凝结成固态。将接种环浸入微藻溶液中,并且在琼脂培养物上轻轻划不重叠的Z形线。将培养皿用盖封闭,并且然后翻转。将培养皿保持在27摄氏度的培养箱中。用接种环挑取单一集落,并且将其转移到养殖烧杯中。将在下一部分中讨论在烧杯中使用的培养基的组成。当藻积聚在烧杯中时,重复上面的方案。三次后,获得单一菌株。
1.2菌株保藏
收集单一菌株后,将其转移到干净的琼脂培养皿上(关于制备方法,请检查上面的部分)。将盖封闭,将板翻转,并且以4摄氏度保存。
在此类条件下,藻典型地可以储存半年。每三个月,将储存(在4摄氏度储存的具有藻的板)中的藻铺板以将藻从其休眠中激活(其中藻以非常缓慢的速率生长和退化的过程)。这个过程将细胞唤醒,并且这批藻及其谱系随后可以维持其生长和营养生产力。
板储存非常容易受到污染。可能的污染物包括多种微藻菌株、蓝藻细菌菌株、细菌菌株、浮游植物和浮游动物。必须控制来自所有可能来源的污染物,诸如来自原始培养物中的固有外来菌株、由实验室操作带来的任何传入微生物、空气中的污染物、在灭菌过程后仍然存活的污染物等。异质性将导致早期培养物崩溃。因此,将板分为不同批次,并且储存在培养箱中的独立的层上。
出于生产目的,从不同的保藏接种物生产板,以防一种特定的接种物最初在没有注意到的情况下被污染。在整个生产时间段中,严格执行菌株保藏方案。
1.3实验室内培养基制备
在将藻从板放大规模之前,制备足够的培养基。这里是制备1升培养基以用于实验室内培养的实施例。首先,如下制备100ml各储备溶液:
表5:储备溶液
储备溶液(100ml) 质量(g)
MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 24.4
KCl 6
尿素 2.5
CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O 3
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·H<sub>2</sub>O 0.35
NaHCO<sub>3</sub> 10
将30g NaCl添加到800ml di H2O中,然后如下添加各储备溶液。注意,下表中的最终浓度是基于在1升培养基中的每种化合物计算的。
表6:生长培养基
Figure BDA0002363404360000091
Figure BDA0002363404360000101
如下制备P-IV溶液。注意,浓度是在1L培养基中的最终浓度。
表7:P-IV溶液
Figure BDA0002363404360000102
添加di H2O至1L,并且然后使用HCl或NaOH将pH调节至7。将溶液在115摄氏度下高压灭菌30分钟。如下制备100ml各维生素储备溶液。注意,最终浓度是基于在1升培养基中的每种化合物计算的。
表8:维生素储备溶液
储备溶液(100ml) 质量(g) 最终浓度(mg/L)
维生素B1 0.0335 0.335
维生素B7 0.0025 0.025
维生素B12 0.0135 0.135
在将维生素添加到培养基中之前,将维生素储备溶液用具有0.22μm膜的Millipore过滤瓶(Stericup-GP过滤瓶1000/1000ml Express pus PER)过滤。在实验室内养殖期间,不储存培养基。根据需要制备新鲜的培养基。
1.4实验室放大规模
用接种环从保藏的板中捕获藻,并且然后将其转移到125ml烧杯(具有平底的NalgeneTM一次性使用的PETG锥形烧瓶:无菌,具有用于无菌一次性使用的锥形烧瓶的NalgeneTM通气HDPE封盖)中。将培养基添加到烧杯中,直到体积达到50ml。
将这些烧杯储存在培养箱中,在培养箱中温度保持在22-24摄氏度并且旋转速率设定为150rpm。将培养箱内的光强度设定为35-45umol/m2/s。并且将CO2(1%-2%v/v,根据在培养基中的pH和细胞密度)和空气的混合组合以0.1m3/h的流速持续泵入培养箱中。
约一周后,当培养基中在682nm处的光密度达到0.1时,将培养物从125ml烧杯转移到500ml烧杯(具有平底的NalgeneTM一次性使用的PETG锥形烧瓶:无菌,具有用于无菌一次性使用的锥形烧瓶的NalgeneTM通气HDPE封盖)中,并且将大烧杯储存在另一个保持在相同条件下的培养箱中。
一周后,将藻从500ml烧杯转移到5L玻璃瓶中。各玻璃瓶含有4L培养基。将这些玻璃瓶保持在开放式工作台上,其中以0.75L/min的流速持续泵入CO2(1%-2%v/v,根据在培养基中的pH和细胞密度)和空气的混合组合。图1示出了空气泵和过滤设计的设置。在培养箱中5L玻璃瓶与较小烧杯之间的区别在于,在玻璃瓶中,通过橡胶塞和两个连接的过滤器(MTGR05000|
Figure BDA0002363404360000111
-50过滤器单元0.2μm疏水性1/8英寸HB/HB)直接泵入空气,而在烧杯中时,首先将空气泵入培养箱室中并且然后通过通风帽扩散到培养基中。每天在8am、12pm、5pm手动振荡玻璃瓶3次。
在5L玻璃瓶中藻在682nm处的光密度达到0.3后,将藻转移到240L板光生物反应器中。这些有内衬的光生物反应器由玻璃容器和钢制框架构成,所述钢制框架附接有在地面上的移动轮。在各光生物反应器之间悬挂有以54-65μmol/m2/s的强度持续提供光的光板。2m*0.2m*0.6m光生物反应器中的培养基保持在总高度(等于0.6m)的0.5m的水平处。将CO2(1%-2%v/v,根据在培养基中的pH和细胞密度)和空气的混合组合以0.4m3/h的流速泵入各光生物反应器中。将室温保持在22-24摄氏度。
实施例2:分析测量
2.1细胞密度测量
每天取样200ul藻培养基用于细胞密度测量。将样品装载到96孔板上,并且通过酶标仪(Molecular Device SpectraMax M2e)在682nm处测量吸光度。
使用以下关系式通过光密度测量来评价我们的生产菌株的生物质
干细胞重量=OD682*0.687
2.2脂肪酸测量
方案如下:
a.将0.1克(数字计算至小数点后三位)的干藻粉末称入50ml离心管中,并且添加21ml 2:1的氯仿(v)/甲醇(v)溶液。将其在涡旋机上以200r/min的速率振荡12小时。
b.将离心管保持稳定,直到混合物分离成多层。在上层提取上清液,并且将其转移到玻璃瓶中。
c.将21ml 2:1氯仿(v)/甲醇(v)溶液添加到未完成的离心管中。将它们在涡旋机上以200r/min的速率振荡3小时。
d.对离心管重复步骤b。
e.将所有上清液收集在玻璃瓶中。
f.然后将它们用氮气干燥。添加10ml 5%(v/v)H2SO4甲醇溶液,并且将瓶放置在100摄氏度的水浴中持续1小时。
g.允许液体冷却。将其与2ml己烷和一定量的di-H2O混合。用注射器提取上清液,并且将其用0.22um有机膜过滤。将滤液装载在具有FID检测器的气相色谱(Agilent 7890B)上,所述检测器在280摄氏度的温度下工作。
h.使用可编程加热器,以15℃/min的速率从35℃(5min)至160℃(0min),并且然后以3℃/min的速率从160℃(0min)至280℃。样品体积为0.1ul。
以下是对于总脂肪、总脂肪酸、EPA和多不饱和脂肪酸的测量分析。
表9
Figure BDA0002363404360000121
实施例3:室外养殖
3.1培养基制备
在室外养殖期间,直接使用并且从海洋中抽取未污染的海水作为培养基,这可以显著降低成本。首先使用淡水将盐度调节至22(NaCl/培养基=22g/L)。然后将各组分如下添加(将粉末直接倒入池塘中)到培养基中。由于使用天然的海水配方,因此除尿素和NaH2PO4·2H2O之外,通常不向海水中添加任何组分。
表9
化合物 最终浓度(g/L)
尿素 0.25
NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·2H<sub>2</sub>O 0.00572
3.2池塘设计
当生物反应器中的OD682达到0.4时,使用开放式水道池塘来将微藻从室内板光生物反应器放大规模。为建造池塘,首先在土壤地面上挖0.5m的水道形沟槽,然后用HDPE薄膜覆盖。焊接若干张薄膜,以完全覆盖池塘和中脊,而没有任何泄漏。
将连接到电机的桨轮设置在池塘的脊与壁板之间。桨轮持续转动,使得水和气体在池塘中保持循环。在选定位置上设置气体管到达池塘底部。将可含有12%-14%(v/v)CO2的工业烟道气直接泵入水中。将池塘中的水位保持在30cm,并且水中的pH值保持在7。
3.3收获
对于生产池塘,以周为基准收获所有微藻。首先将池塘中的所有液体引导/泵入收获池塘中(通常,收获池塘比生产池塘深得多,因此其可以容纳来自若干个生产池塘的液体)。
收获池塘可以设计得与生产池塘相似,其中唯一的区别是它们深得多,例如1.2m深度。当来自生产池塘的液体流入收获池塘中时,将控制流入池塘中的气体的烟道气开关调至最大,使得池塘中的pH值可以降至低于6。然后添加壳聚糖储备溶液(相对于池塘中所含的生物质1%的壳聚糖)作为无害絮凝剂以诱导自沉淀。在酸性溶液下,它导致水中的微藻絮凝。
例如,如果收获池塘中有1000公吨液体并且其中的OD682读数为0.6,则池塘中所含的生物质为0.6*0.687*1000*1000=412.2kg。因此,在池塘中添加412.2kg*1%=4.12kg壳聚糖。
通过以下方式制备壳聚糖储备溶液:将0.1g壳聚糖粉末添加到10ml 0.1M HCl溶液中,然后用水填充至100ml以使储备溶液中壳聚糖的最终浓度等于1g/L。
絮凝后,将大部分水直接排空以供再循环利用,并且然后仅在收获池塘中留约10%的絮凝物加剩余的水。然后洗涤收获池塘的壁板以便收集已粘附在池塘壁板上的所有絮凝物。将这些絮凝物和剩余的水泵入卧式离心机中。将它们以2100的分离系数离心,容易地从剩余的水中分离出微藻浆料(超过10%的干藻重量)。
Figure BDA0002363404360000141
还使用500目膜(30um孔径),使用压力过滤从剩余的水中分离出微藻絮凝剂。通过过滤收集微藻浆料。将微藻浆料进料到喷雾干燥器中并且干燥。

Claims (21)

1.一种用于收获微藻的方法,所述方法包括:
-提供包含微藻的水,
其中所述水具有在约6.0与约10.0之间的pH和在约0.01%与约5%之间的盐度;
-提供当与所述水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂;
-产生所述水和所述絮凝剂的混合物,其中所述混合物是酸性的;以及
-从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而收获所述微藻。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述水具有在约8.0与约9.0之间的pH。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述水具有约2.2%的盐度。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述水包含浓度在约0.01g/L与约0.5g/L之间的碳酸氢钠。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述水包含浓度在约0.1g/L与约0.2g/L之间的碳酸氢钠。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中所述水的温度在约10℃与约38℃之间。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述絮凝剂是壳聚糖。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述絮凝剂是形成阳离子聚电解质以沉淀所述微藻的多糖。
9.根据权利要求7所述的方法,其中所述壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约0.08%与约3.5%之间的浓度提供。
10.根据权利要求7所述的方法,其中所述壳聚糖以在所述混合物中所述微藻的重量的约2%提供。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法,其中所述方法包括添加烟道气,或者其中将所述水与烟道气混合。
12.根据权利要求11所述的方法,其中所述烟道气包含二氧化碳。
13.根据权利要求11所述的方法,其中所述烟道气具有小于5ppm的氧化硫。
14.根据权利要求11所述的方法,其中所述烟道气包含浓度在约4%与约20%之间的二氧化碳。
15.根据权利要求11所述的方法,其中所述烟道气包含浓度在约10%与约14%之间的二氧化碳。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中所述混合物具有在约4.5与约6.5之间的pH。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述混合物具有约5.5的pH。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法,其中所述微藻可以在高于32℃的温度下生产二十碳五烯酸(EPA)。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法,其中所述微藻是微拟球藻(Nannochloropsis)。
20.一种用于制备粗微藻提取物的方法,所述方法包括:
-提供包含微藻的水,
其中所述水具有在约6.0与约10.0之间的pH和在约0.01%与约5%之间的盐度;
-提供当与所述水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂;
-产生所述水和所述絮凝剂的混合物,其中所述混合物是酸性的;以及
-从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而制备粗微藻提取物。
21.一种用于制备微藻脂质提取物的方法,所述方法包括:
-提供包含微藻的水,
其中所述水具有在约6.0与约10.0之间的pH和在约0.01%与约5%之间的盐度;
-提供当与所述水混合时足以形成微藻絮凝物的量的絮凝剂;
-产生所述水和所述絮凝剂的混合物,其中所述混合物是酸性的;
-从所述混合物中分离出所述絮凝物,从而收获所述微藻;以及
-从所述微藻中提取脂质,从而制备微藻脂质提取物。
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