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CN111110863A - 大黄酸磷脂复合物及其制备方法和应用、大黄酸磷脂复合物长循环脂质体及其制备方法 - Google Patents

大黄酸磷脂复合物及其制备方法和应用、大黄酸磷脂复合物长循环脂质体及其制备方法 Download PDF

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CN111110863A
CN111110863A CN202010068053.2A CN202010068053A CN111110863A CN 111110863 A CN111110863 A CN 111110863A CN 202010068053 A CN202010068053 A CN 202010068053A CN 111110863 A CN111110863 A CN 111110863A
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CN
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rhein
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preparation
complex
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张金洁
李建波
强弘
张振中
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Zhengzhou University
Original Assignee
Zhengzhou University
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Publication date
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Abstract

本发明针对大黄酸临床给药存在的难题，首先提供了一种大黄酸磷脂复合物及其制备方法和应用，大黄酸磷脂复合物的制备方法包括下述步骤：(1)按重量比2:1～1:20称取大黄酸和第一磷脂并分散于有机溶剂中，得到反应液；(2)所述反应液于30～60℃下搅拌反应2～24h；(3)将反应后的溶液减压浓缩，收集得到的固体即为大黄酸磷脂复合物；然后采用所述大黄酸磷脂复合物、第二磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇所组成，制备得到长循环脂质，采用本发明提供的制备方法将大黄酸与磷脂复合后，改善了溶解性，成药性提高，利于制备制剂，进一步制备成长循环脂质体，在保证高效载药量的同时，有效延长了大黄酸的生物半衰期。

Description

大黄酸磷脂复合物及其制备方法和应用、大黄酸磷脂复合物 长循环脂质体及其制备方法
技术领域
本发明属于大黄酸制剂技术领域，具体涉及一种大黄酸磷脂复合物的制备方法，并进一 步将其制备成长循环脂质体。
背景技术
大黄酸(Rhein)是中药大黄的有效成分之一，属于单蒽核类1,8-二羟基蒽醌衍生物，化 学名为1,8-二羟基-3-羧基蒽醌(1,8-Dihydroxy-3-carboxy-anthraquinone)，其结构式如下式：
Figure RE-GDA0002424308000000011
从结构上来看，大黄酸含有平面状的1,8-二羟基蒽醌结构单元，具有电化学氧化还原性质， 赋予了大黄酸抗癌、抗菌消炎、免疫抑制和抗氧化等广泛的药理作用以及极大的临床应用价 值(Sun H,Luo G,Chen D,Xiang Z.AComprehensive and SystemReviewfor the Pharmacological Mechanismof Action of Rhein,an Active AnthraquinoneIngredient.Frontiers in pharmacology.2016；7:247.)。值得一提的是，将大黄酸的两个羟基乙酰化后得到双乙酰大黄 酸(双醋瑞因，Diacerein)，作为治疗骨关节炎的药物已经在意大利上市，可被人体迅速代谢 为大黄酸而发挥作用。但这种特殊的平面结构以及共平面存在的1位羟基、8位羟基和3位 羧基导致该化合物水溶性和脂溶性均很差，成药性非常不好，制剂制备困难，生物半衰期短， 严重限制了其临床应用。
由于以上缺点，导致目前为止文献报道的载大黄酸新型给药系统非常少，而且所得的给 药系统载药量很低，并且还没有相应的剂型上市。中国专利CN201811431853公开了一种具 有肾脏靶向分布特性的大黄酸脂质囊纳米粒及应用，采用聚己内酯-聚乙烯亚胺等阳离子聚合 物包载Rhein后进行药物递送，对Rhein具有较高的包封率和肾脏靶向分布的特性。但是该 专利制备的阳离子聚合物纳米粒，没有长循环作用，而且所用阳离子聚合物具有很强的细胞 毒性和严重的红细胞溶血等副作用，临床应用因而大大受限。
中国专利CN105288648A公开了一种亲水性药物的磷脂化合物、其药物组合物及应用， 其中提供了以大黄酸为活性成分，以磷脂或胆固醇为助剂构成的药物组合物，但是该专利制 备的磷脂化合物是以共价键将药物和磷脂结合，改变了原药的结构，需要通过化学键的断裂 释放出大黄酸发挥药效。此外，化学键的修饰也大大限制了磷脂化合物的载药量。
发明内容
本发明针对大黄酸临床给药存在的难题，首先提供了一种大黄酸磷脂复合物及其制备方 法和应用，采用本发明提供的制备方法将大黄酸与磷脂复合后，改善了溶解性，提高了成药 性，利于制备制剂。
同时本发明还研究了大黄酸磷脂复合物进一步制备成长循环脂质体，并提供了相应的制 备方法，通过制备大黄酸磷脂复合物长循环脂质体，在保证高效载药量的同时，有效延长了 大黄酸的生物半衰期。
本发明采用如下技术方案：
一种大黄酸磷脂复合物的制备方法，包括下述步骤：(1)按重量比2:1～1:20称取大黄酸 和第一磷脂并分散于有机溶剂中，得到反应液；(2)所述反应液于30～60℃下搅拌反应2～ 24h；(3)将反应后的溶液减压浓缩，收集得到的固体即为大黄酸磷脂复合物。
优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂的用量应使大黄酸在反应液中的浓度控制在1～ 50mg/ml。
优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、正己烷、乙醇和甲醇中的一种或多种的混合物，优选氯仿或者无水乙醇。
优选地，所述第一磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、 二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、 二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或多种的混合 物。本发明优选的第一磷脂为大豆磷脂和/或卵磷脂。
采用所述大黄酸磷脂复合物的制备方法制备得到的大黄酸磷脂复合物。
采用所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒，由大黄酸磷脂复合物、第二 磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇所组成，且其组成为，大黄酸磷脂复合物 10份，第二磷脂10～50份，胆固醇10～50份，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1～10份。
优选地，所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中聚乙二醇的分子量为2000-5000。
优选地，所述第二磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、 二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、 二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或多种的混合 物。本发明优选的磷脂为大豆磷脂和/或卵磷脂。
进一步地，所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒的制备方法，包括以下 步骤：
(1)按重量配比取大黄酸磷脂复合物，加入到有机溶剂中，搅拌溶解至透明油状液体状， 得到大黄酸磷脂复合物溶液；其中，所述有机溶剂为氯仿、二氯甲烷等对大黄酸磷脂复合物 有很好溶解能力的溶剂，优选氯仿和二氯甲烷；
(2)向步骤(1)制备的大黄酸磷脂复合物溶液中加入按重量配比取的第二磷脂、胆固 醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇三种脂质材料，搅拌至所有脂质材料完全融化，得澄 清透明的油状溶液；
(3)将步骤(2)制备的油状溶液在真空度为120～150mbar、温度为25～40℃条件下减压浓缩，除去所述有机溶剂后，形成均匀的薄膜；
(4)将去离子水加入到步骤(3)形成的薄膜中并在水浴超声下水化，然后通过探头超 声，即得大黄酸磷脂复合物长循环脂质体。
本发明所述的由大黄酸磷脂复合物，可进一步加上药学上可接受的赋形剂，制成药学上 可接受的各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂或粉针剂等，可通过胃肠 道、口腔、直肠、皮肤等给药途径应用。
本发明的有益效果如下：
磷脂复合物(Phytosome)是药物和磷脂分子通过电荷迁移作用而形成的较为稳定的化合 物或络合物。磷脂结构中磷原子上的氧原子有较强的得电子倾向，而氮原子有较强的失电子 倾向，因此在一定条件下，它可与一定结构的药物分子生成复合物。药物与磷脂形成复合物 后，理化性质、生物学活性等都会发生很大程度的改变，表现出很多与母体药不同的特性。 理化性质的改变如脂溶性明显增强，熔点、吸收系数、光谱特征等也会发生明显变化等，生 物学活性的改变如磷脂复合物的活性一般比母体药物更强、生物利用度更高、毒副作用更小。
本发明通过创造性的研究发现，大黄酸羧基上的氧以及酚羟基上的氧均具有负电性，均 可与卵磷脂中带正电性的季胺氮产生偶极-偶极作用力形成磷脂复合物，从而破坏了大黄酸的 平面状1,8-二羟基蒽醌结构单元，由此可以显著提高大黄酸的脂溶性和水溶性，若将该大黄 酸磷脂复合物进一步包载入脂质体中，可以极大地提高大黄酸的载药量。在制备脂质体的脂 质材料中可进一步加入聚乙二醇修饰的材料，可显著延长大黄酸在血液中的循环时间，从而 显著地提高了大黄酸的药效。
对于大黄酸来说，磷脂是一种适宜的、可以明显改善成药性质的复合材料，主要表现在 以下几个方面：①磷脂结构中存在可与大黄酸复合的功能基团；②本发明所制备的大黄酸磷 脂复合物可破坏大黄酸的刚性平面结构，提高其脂溶性和水溶性，改善成药性，可广泛应用 于新型给药系统；③磷脂无明显毒副作用；④本发明的复合方法简单、易于大规模生产，生 产成本低，具有良好的应用前景。
本发明所制备的大黄酸磷脂复合物能够用于抗癌、抗炎、抗氧化、抗病毒感染、治疗头 痛、冠心病及慢性炎症等，且可制备成大黄酸磷脂复合物长循环脂质体，本发明所做的体内 试验也证明，脂质体可以降低大黄酸的消除速率，延长其体内的作用时间，尤其是在二硬脂 酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的辅助作用下，大黄酸磷脂复合物脂质体能够明显延长大黄酸体 内的半衰期。
附图说明
图1：大黄酸磷脂复合物与物理混合物的DSC分析结果比较(A.大黄酸；B.磷脂； C.复合物；D.物理混合物)；
图2：大黄酸磷脂复合物与物理混合物的IR分析结果比较(A.大黄酸；B.磷脂；C.复合物；D.物理混合物)；
图3：大黄酸磷脂复合物与物理混合物的XRD分析结果比较(A.大黄酸；B.磷脂； C.复合物；D.物理混合物)；
图4：经静脉给与大黄酸，大黄酸磷脂复合物普通脂质体及大黄酸磷脂复合物长循环脂 质体的大鼠体内在不同时间的血药浓度(mean±SD,n＝5)。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
取大黄酸0.3g，大豆卵磷脂0.6g，加入50ml无水乙醇，于45℃搅拌反应24h，得澄清溶 液，50℃减压除去乙醇后，收集固体真空干燥12h，粉碎后即得大黄酸磷脂复合物。
取得到的大黄酸磷脂复合物0.9g溶解在50mL氯仿中，搅拌溶解至透明油状液体状，得 到大黄酸磷脂复合物溶液；再加入1.8g大豆卵磷脂，1.2g胆固醇，0.18g二硬脂酰基磷脂酰 乙醇胺-聚乙二醇，搅拌至溶解形成澄清透明油状溶液。在温度为35℃条件下，减压旋转蒸发 除去溶剂，形成薄膜，再加入10mL去离子水，在水浴超声(80w,3min)作用下水化，然后 再探头超声(200w，2min，设定工作3s，间歇7s，共循环12次)最后得到大黄酸磷脂复合物长循环脂质体。
实施例2
取大黄酸0.2g，蛋黄卵磷脂0.8g，加入40ml二氯甲烷，于40℃搅拌回流反应10h，得澄清溶液，50℃减压除去二氯甲烷后，收集固体真空干燥12h，粉碎后即得大黄酸磷脂复合物。
取得到的大黄酸磷脂复合物1g溶解在50mL二氯甲烷中，搅拌溶解至透明油状液体状， 得到大黄酸磷脂复合物溶液；再加入1.2g卵磷脂，1g胆固醇，0.5g二硬脂酰基磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇，溶解形成澄清透明油状溶液。在30℃减压旋转蒸发除去溶剂，形成薄膜，再 加入去离子水在水浴超声(80w,3min)作用下水化，然后再探头超声(200w，2min,设定工作3s，间歇7s，共循环12次)，最后得到大黄酸磷脂复合物长循环脂质体。
实施例3
取大黄酸0.5g，大豆卵磷脂2g，加入50ml甲醇，于45℃搅拌反应24h，得澄清溶液，50℃减压除去乙醇后，收集固体真空干燥12h，粉碎后即得大黄酸磷脂复合物。
取得到的大黄酸磷脂复合物1.0g溶解在50mL氯仿中，搅拌溶解至透明油状液体状，得 到大黄酸磷脂复合物溶液；再加入2.0g卵磷脂，1.0g胆固醇，0.2g二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 -聚乙二醇，溶解形成澄清透明油状溶液；在30℃减压旋转蒸发除去溶剂，形成薄膜，再加 入5mL去离子水，在水浴超声(60w,5min)作用下水化，然后再探头超声(200w，3min,设 定工作3s，间歇7s，共循环18次)，最后得到大黄酸磷脂复合物长循环脂质体。
实施例4
取由实施例1制备得到的大黄酸磷脂复合物0.9g加入到30ml二氯甲烷中，搅拌溶解至 透明油状液体状，得到大黄酸磷脂复合物溶液；再加入大豆卵磷脂1g，胆固醇0.9g，二硬脂 酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇0.2g，搅拌溶解使脂质材料完全融化，得澄清透明油状溶液。在 温度为35℃条件下减压浓缩，除去低沸点有机溶剂，形成均匀的薄膜，再加入去离子水在水 浴超声(70w,3min)作用下水化，然后再探头超声(200w，2min,设定工作3s，间歇7s，共 循环12次)，即得大黄酸磷脂复合物脂质体。
对比例1
取大黄酸0.3g，大豆卵磷脂0.6g加入研钵中，将两者研磨混合均匀，即得大黄酸与磷脂 的物理混合物。
对比例2
取大黄酸0.3g，大豆卵磷脂0.6g，加入50ml无水乙醇，于45℃搅拌反应24h，得澄清溶 液。50℃减压除去乙醇后，收集固体真空干燥12h，粉碎后即得大黄酸磷脂复合物。将得到 的大黄酸磷脂复合物0.9g溶解在氯仿中，再加入1.8g大豆卵磷脂，1.2g胆固醇，搅拌至溶 解形成澄清透明油状溶液。在温度为35℃条件下，旋转蒸发除去溶剂，形成薄膜，再加入10 mL去离子水水浴超声(80w，3min)作用下水化，然后再探头超声(200w，2min，设定 工作3s，间歇7s，共循环12次)得到大黄酸磷脂复合物普通脂质体。
实施例1与对比例1的DSC分析
以Al2O3为参比物，升温速率：10℃/min，扫描范围：10-400℃，氮气流速为0.2ml/min， 分别取大黄酸、大豆卵磷脂、实施例1的大黄酸磷脂复合物及对比例1的物理混合物10mg 进行分析，结果见附图1。从DSC图谱可以看出，大黄酸有一个明显的吸热峰，在331.12℃ 有很强的吸热，呈现尖峰，另外在370℃左右也有微弱的吸热，有一个钝峰。大豆卵磷脂有 三个明显的吸热峰出现，221.9℃和306.7℃左右分别有一个钝峰，在262.8℃左右出现一锐峰。 对比例1的物理混合物的图谱与大黄酸和磷脂的图谱呈现类似的吸热趋势，且相变温度范围 无明显改变。而在实施例1的大黄酸磷脂复合物的图谱中，磷脂，大黄酸原来的吸热峰均消 失，复合物中仅在315.4℃、357℃左右有微弱的吸热，其他无明显的吸热现象。以上结果说 明在大黄酸和磷脂之间发生了相互作用，比如两者之间形成了氢键或存在范德华力，从而形 成了磷脂复合物。
实施例1与对比例1的IR分析
对大黄酸、大豆卵磷脂、实施例1的大黄酸磷脂复合物及对比例1的物理混合物进行红 外扫描，结果见附图2。从图谱及数据可以看出，大黄酸本身的羧基—COOH的吸收峰在1714.20cm-1，对比例1的物理混合物及实施例1的大黄酸磷脂复合物的形成的图谱中，在该峰位基本没有变化，但峰形均有不同程度的钝化，而实施例1的大黄酸磷脂复合物的图谱上， 该峰钝化程度更大，说明大黄酸的羧基—COOH在对比例1和实施例1的两种条件下均有可 能与磷脂的某些基团发生相互作用，但作用强度存在差异。磷脂本身的C＝O吸收峰在1744.56 cm-1，P＝O的吸收峰在1245.73cm-1，在对比例1的物理混合物的图谱中，两者峰位均基本未 变，但峰形微弱钝化，而实施例1的大黄酸磷脂复合物的图谱中，其C＝O吸收峰移到1735.62 cm-1，钝化很明显，P＝O吸收也有很大程度减弱，猜测可能是大黄酸的酚-OH与磷脂的P＝O 和C＝O发生了一定程度的缔合作用。以上峰位和峰形的变化均说明，实施例1的大黄酸磷脂 复合物的红外光谱不同于其物理混合物，是以一种复合物的形式存在的。
实施例1与对比例1的XRD分析
对大黄酸、大豆卵磷脂、大黄酸磷脂复合物及对比例1的物理混合物进行XRD分析，结 果见附图3。从图谱可以看出，四种样品表现出了不同的衍射特征，对比例1的物理混合物 的图谱与大黄酸相比，仍然有明显的尖峰衍射特征且没有新生成的峰；而实施例1的大黄酸 磷脂复合物图谱则表现出与磷脂特征相似的无定形结构特征，大黄酸的晶体衍射峰完全消失。 以上表明，实施例1的大黄酸磷脂复合物与简单的物理混合物有着明显的区别，形成磷脂复 合物后，由于大黄酸的结构中的某些基团与磷脂极性端发生一定的相互作用，即定向结合， 而使大黄酸和磷脂处于一种高度分散的状态，其自身的颗粒结构与晶体结构受到了破坏。
药动学试验例
本实验考察了大黄酸，对比例2制备得到的大黄酸磷脂复合物普通脂质体，实施例1制 备得到的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰的大黄酸磷脂复合物脂质体在大鼠体内的 生物利用度
1.材料与动物：
大黄酸磷脂复合物(根据实施例1制备)，大黄酸磷脂复合物普通脂质体(根据对比例2 制备)，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰的大黄酸磷脂复合物长循环脂质体(根据实 施例1制备)
大黄酸：从Sigma-aldrich公司购买，纯度>96％(HPLC)
雄性Wistar大鼠15只(体重200～300g)
2.方法：
给药方案：取Wistar大鼠15只，随机分为三组，禁食12h后三组分别静脉给与大黄酸磷 脂复合物(根据实施例1制备)，大黄酸磷脂复合物普通脂质体(根据对比例2制备)，二硬 脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰的大黄酸磷脂复合物长循环脂质体(根据实施例1制备)
给药剂量均相当于大黄酸10mg/kg。样品采集：于各组给药后5、10、30、60、120、240、 360、480min由尾静脉取血0.3ml，置经肝素处理的离心管中，离心分离血浆，于-20℃冰箱 中保存直至分析。血浆样品处理：取出100μl血浆样品加入干净离心管中，后加入300μl甲醇， 旋涡混匀5min后，14000rpm/min离心15min,取上清液100μl进样检测。
色谱条件：色谱柱：Kromasil-C18 column(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-体积 分数为0.1％磷酸水(85:15，v/v)；流速：1ml/min；检测波长：258nm；柱温：25℃；进样量：20μl。
方法建立：以大黄酸考察线性关系，大黄酸线性范围：0.48～48μg/ml(r＝0.9998)。专属 性考察表明血浆中内源性物质并不干扰测定结果，内标与标准品分离度良好。该方法大黄酸 高、中、低三种浓度的回收率分别为98.83％、100.7％、98.7％，日内、日间RSD分别为2.2％、 5.1％、3.7％；2.6％、4.3％、3.1％。
3.结果
血药浓度测定结果如图4所示。
药动学参数计算：
大黄酸磷脂复合物(根据实施例1制备)，大黄酸磷脂复合物普通脂质体(根据对比例2 制备)，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰的大黄酸磷脂复合物长循环脂质体(根据实 施例1制备)的血药浓度-时间数据采用DAS 3.0软件经计算机拟合得到AUC及相关参数， 主要药代动力学参数见表1：
表1大鼠尾静脉给予大黄酸、大黄酸磷脂复合物普通脂质体和大黄酸磷脂复合物长循环脂 质体(均等同于大黄酸剂量2.5mg/kg)的药代动力学参数(n＝5)
Figure BDA0002376548070000081
将上述主要药代动力学参数进行t检验(其中，*p<0.05，与大黄酸组相比；#p<0.05，与 大黄酸磷脂复合物普通脂质体组相比)，结果显示大黄酸磷脂复合物长循环脂质体组的AUC(0-t)(pg/L)*h和MRT(0-t)(h)显著高于大黄酸组(*p<0.05)，说明大黄酸磷脂复合物长循环脂质体可以显著提高大黄酸的血药浓度，显著延长了大黄酸的体内循环时间。此外，大黄酸磷脂复合物长循环脂质体组的t1/2(h)也显著高于大黄酸组(*p<0.05)，说明其可以显著降低 大黄酸在体内的清除速率。同时，我们也发现普通脂质体于大鼠静脉注射后，也可以显著增 加大黄酸血浆中药物浓度，延长体内循环时间。三个给药组的体内半衰期顺序为大黄酸磷脂 复合物长循环脂质体组>普通脂质体组>大黄酸组。因此，大黄酸磷脂复合物普通脂质体和大 黄酸磷脂复合物长循环脂质体均能够明显提高大黄酸体内的半衰期，其中，大黄酸磷脂复合 物长循环脂质体组比大黄酸磷脂复合物普通脂质体的提高效果更好，这也许与DSPE-PEG可 以抑制脂质体与血浆中调理素作用，从而延长脂质体的体内循环时间有关。
最后所应说明的是：上述实施例仅用于说明而非限制本发明的技术方案，任何对本发明 进行的等同替换及不脱离本发明精神和范围的修改或局部替换，其均应涵盖在本发明权利要 求保护的范围之内。

Claims (9)

1.一种大黄酸磷脂复合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)按重量比2:1～1:20称取大黄酸和第一磷脂并分散于有机溶剂中，得到反应液；(2)所述反应液于30～60℃下搅拌反应2～24h；(3)将反应后的溶液减压浓缩，收集得到的固体即为大黄酸磷脂复合物。
2.根据权利要求1所述的大黄酸磷脂复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述有机溶剂的用量应使大黄酸在反应液中的浓度控制在1～50mg/ml。
3.根据权利要求1所述的大黄酸磷脂复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、正己烷、乙醇和甲醇中的一种或多种的混合物。
4.根据权利要求1所述的大黄酸磷脂复合物的制备方法，其特征在于，所述第一磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或多种的混合物。
5.采用权利要求1至5所述大黄酸磷脂复合物的制备方法制备得到的大黄酸磷脂复合物。
6.采用权利要求6所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒，其特征在于，由大黄酸磷脂复合物、第二磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇所组成，且以重量份数计，大黄酸磷脂复合物10份，第二磷脂10～50份，胆固醇10～50份，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇1～10份。
7.根据权利要求7所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒，其特征在于，所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中聚乙二醇的分子量为2000-5000。
8.根据权利要求7所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒，其特征在于，所述第二磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种或多种的混合物。
9.权利要求7至9任一项所述大黄酸磷脂复合物制备得到的长循环脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按重量配比取大黄酸磷脂复合物，加入到有机溶剂中，搅拌溶解至透明油状液体状，得到大黄酸磷脂复合物溶液；
(2)向步骤(1)制备的大黄酸磷脂复合物溶液中加入按重量配比取的第二磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇三种脂质材料，搅拌至所有脂质材料完全融化，得澄清透明的油状溶液；
(3)将步骤(2)制备的油状溶液在真空度为120～150mbar、温度为30～45℃条件下减压浓缩，除去所述有机溶剂后，形成均匀的薄膜；
(4)将去离子水加入到步骤(3)形成的薄膜中并在水浴超声下水化，然后通过探头超声，即得大黄酸磷脂复合物长循环脂质体。
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