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CN111094286B - 1,2-二氢-1,6-萘啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途 - Google Patents

1,2-二氢-1,6-萘啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途 Download PDF

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CN111094286B
CN111094286B CN201880057084.9A CN201880057084A CN111094286B CN 111094286 B CN111094286 B CN 111094286B CN 201880057084 A CN201880057084 A CN 201880057084A CN 111094286 B CN111094286 B CN 111094286B
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Abstract

一种1,2‑二氢‑1,6‑萘啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，涉及一种通式(I)所示的1,2‑二氢‑1,6‑萘啶类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是c‑KIT抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

1，2-二氢-1，6-萘啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的 用途
技术领域
本发明涉及一种新的1，2-二氢-1，6-萘啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为c-KIT抑制剂的用途。
背景技术
c-KIT(也称为KIT、CD117和干细胞因子受体)是充当III型受体的145kDa跨膜酪氨酸激酶蛋白。位于染色体4q11-21上的c-KIT原癌基因编码c-KIT，其配体是干细胞因子。所述受体具有酪氨酸蛋白激酶活性并且与配体SCF的结合导致c-KIT的自磷酸化和其与底物如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的缔合。蛋白质酪氨酸激酶对酪氨酸的磷酸化在细胞信号传导方面特别重要并且可以介导主要细胞过程例如增殖、存活、分化、凋亡、连接、侵袭和迁移的信号。c-KIT突变通常出现在编码近膜区结构域的DNA(外显子11)中。它们还以较低频率出现在外显子7、8、9、11、13、14、17和18中。突变使得c-KIT功能不依赖于由SCF激活，从而导致高细胞分裂速率和可能的基因组不稳定性。c-KIT基因的功能增加性突变和组成性磷酸化c-KIT的表达可见于大部分胃肠间质瘤(GIST)、肥大细胞增多症和急性髓性白血病中。其在不同的外显子处有不同位置的突变，第一代的c-KIT突变和相关药物主要为伊马替尼、舒尼替尼、达沙替尼和PKC412。
c-KIT已在胃肠道间质瘤、急性髓性白血病、黑色素瘤、乳腺瘤、宫颈瘤、多形性胶质母细胞瘤、卵巢瘤、精原细胞瘤或无性细胞瘤的生殖细胞肿瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病等组织中被发现，其蛋白表达水平与肿瘤的发生发展有着密切的关系。其中胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)是胃肠道最常见的间叶来源肿瘤，依照目前的GIST诊断标准，流行病学研究显示发病率0.66～2.20/10万。GIST对传统化学治疗极不敏感，化疗药物有效率不足5％，进展期中位生存率仅约18个月。即使完整切除肿瘤，GIST的5年生存率也仅有35％-65％，2年内复发转移率40％-50％，首诊时多达15％-50％的患者存在转移。研究发现干细胞因子表面的跨膜酪氨酸激酶受体c-KIT和血小板源性生长因子受体PDGFRα基因的功能活化突变是GIST发生发展的关键。血小板源性生长因子受体(PDGF-R)是血小板源性生长因子(PDGF)家族成员的细胞表面酪氨酸激酶受体。PDGF亚基PDGFα和PDGFβ是调控细胞增殖、细胞分化、细胞生长、发育和许多疾病包括癌症的重要调节因子。
随着第一代抑制剂伊马替尼(Imatinib)的临床应用，伊马替尼的获得性耐药问题逐渐成为该类抑制剂临床使用中面临的严重挑战。因此，迫切需要研究开发新的c-KIT抑制剂来满足市场需求。目前已经公开了一系列的c-KIT抑制剂专利，其中包括WO2014039714、WO2014100620、WO2015134536A1和WO2013184119等，c-KIT抑制剂的研究和应用已取得一定的进展，但是提高的空间仍然巨大，仍有必要继续研究和开发新的c-KIT抑制剂。
发明内容
为了克服现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的一类新的1，2-二氢-1，6-萘啶类衍生物，或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，本发明化合物同现有技术中具体公开的化合物具有较大的结构差异，且可以通过调节c-KIT和PDGFα活性来治疗或预防诸如胃肠道间质瘤、急性髓性白血病和系统性肥大细胞增生等疾病。
本发明的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure GPA0000285481840000031
其中：
R1选自氢原子、烷基或-C(O)R5，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环基、-C(O)R5、-OC(O)R5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-S(O)nNR6R7或-NR6C(O)R7的取代基所取代；
R2选自烷基，其中所述的烷基进一步被一个或多个卤素所取代；
R3相同或不同，各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、羟基、氰基、硝基、卤素、环烷基、杂环基、-C(O)R5、-OC(O)R5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-S(O)nNR6R7或-NR6C(O)R7，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R4选自芳基或杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、羟基、氰基、硝基、卤素、环烷基、杂环基、-C(O)R5、-OC(O)R5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-S(O)nNR6R7或-NR6C(O)R7的取代基所取代；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个卤素所取代；
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与相连接的N原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个N、O或S(O)n，并且4～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m选自1，2，3或4；且
n选自0，1或2。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure GPA0000285481840000041
其中：
R3选自氢原子、烷基、烷氧基、羟基、氰基、硝基、卤素、环烷基、杂环基、-C(O)R5、-OC(O)R5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-S(O)nNR6R7或-NR6C(O)R7，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R1、R2、R4～R10和n的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R1选自氢原子或C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基任选进一步被一个或多个C1-6烷氧基所取代；其中所述的C1-6烷氧基优选为甲氧基。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R2选自C1-4烷基，其中所述的C1-4烷基进一步被一个或多个卤素所取代；其中所述的卤素优选为氟、氯或溴；更优选为氟。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2为三氟乙基。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3选自氢原子、C1-4烷基或卤素；
其中所述的C1-4烷基优选为甲基或乙基；且
其中所述的卤素优选为氟、氯或溴。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R4选自苯基或苯并噻吩基，其中所述的苯基或苯并噻吩基任选进一步被一个或多个选自卤素、C1-4烷基或C1-6烷氧基的取代基所取代；
其中所述的C1-4烷基或C1-6烷氧基任选进一步被一个或多个卤素所取代；
其中所述的C1-4烷基优选为甲基或乙基；且
其中所述的卤素优选为氟、氯或溴；更优选为氟。
本发明的优选方案，一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R1选自氢原子或烷基，优选C1-4烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个C1-6烷氧基所取代；其中所述的C1-6烷氧基优选为甲氧基。
R2选自烷基，其中所述的烷基进一步被一个或多个卤素所取代；优选所述烷基为C1-4烷基，更优选乙基；所述卤素优选为氟、氯或溴，更优选为氟。
R3选自氢原子、烷基或卤素，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个卤素所取代；所述烷基优选为C1-4烷基，更优选甲基或乙基；且所述卤素优选为氟、氯或溴。
R4选自苯基或苯并噻吩基，其中所述的苯基或苯并噻吩基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基或烷氧基的取代基所取代；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个卤素所取代；所述烷基优选为C1-4烷基；所述烷氧基优选为C1-6烷氧基；且所述卤素优选为氟、氯或溴；更优选为氟。
本发明的典型化合物包括，但不限于：
Figure GPA0000285481840000051
Figure GPA0000285481840000061
Figure GPA0000285481840000071
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
本发明提供一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000072
将通式(IA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(I)化合物；
其中：R1～R4和m的定义如通式(I)中所述。
上述制备方法中，碱性条件由有机碱或无机碱提供，有机碱选自二异丙基乙胺、吡啶、三乙胺、哌啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨吡啶，优选为二异丙基乙胺或三乙胺；无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢化钠、氢化钾，优选为碳酸铯或碳酸钾。
本发明提供一种通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000081
将通式(IIA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(II)化合物；
其中：R1～R4的定义如通式(II)中所述。
上述制备方法中，碱性条件由有机碱或无机碱提供，有机碱选自二异丙基乙胺、吡啶、三乙胺、哌啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨吡啶，优选为二异丙基乙胺和/或三乙胺；无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢化钠、氢化钾，优选为碳酸铯和/或碳酸钾。
进一步，本发明提供一种通式(IA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure GPA0000285481840000082
其中：R1～R3和m的定义如通式(I)中所述。
本发明提供一种通式(IA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(IIA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure GPA0000285481840000083
其中：R1～R3的定义如通式(II)中所述。
本发明通式(IA)的典型中间体化合物包括，但不限于：
Figure GPA0000285481840000084
Figure GPA0000285481840000091
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
本发明提供一种通式(IA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000092
将通式(Ia)化合物与通式(Ib)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(Ic)化合物；通式(Ic)化合物与通式(Id)化合物在加热条件下进行反应，得到通式(IA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为烷基；且
R1～R3和m的定义如通式(IA)中所述，且R1不为氢原子。
本发明提供一种通式(IA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000101
将通式(Ia)化合物与通式(Ib)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(Ic)化合物；将通式(Ic)化合物与通式(Ie)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(If)化合物；通式(If)化合物在三氟乙酸存在下进行反应，得到通式(IA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Ra为烷基；Rb为烷基；且
R2、R3和m的定义如通式(IA)中所述。
本发明提供一种通式(IIA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000102
将通式(Ia)化合物与通式(IIa)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Id)化合物在加热条件下进行反应，得到通式(IIA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为烷基；且
R1～R3的定义如通式(IIA)中所述，且R1不为氢原子。
本发明提供一种通式(IIA)所述的中间体化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure GPA0000285481840000103
将通式(Ia)化合物与通式(IIa)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Ie)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在三氟乙酸存在下反应，得到通式(IIA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Ra为烷基；Rb为烷基；且
R2、R3的定义如通式(IIA)中所述。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种抑制c-KIT的方法，其中包括将c-KIT受体与通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物相接触。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病；更优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病，最优选为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症；优选所述的突变的c-KIT的突变位于外显子9、11、13、14、17和/或18，或第816位、第670位、第560位和/或第654位氨基酸残基处，其中所述的第816位氨基酸残基处突变优选D816V或D816H；其中所述的第670位氨基酸残基处突变优选T670I；其中所述的第560位氨基酸残基处突变优选V560G；其中所述的第654位氨基酸残基处突变优选V654A。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备c-KIT抑制剂中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备PDFGRα抑制剂中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病；更优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病，最优选为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症；优选所述突变的PDFGRα的突变位于外显子18和/或第842位氨基酸残基处，其中所述的第842位氨基酸残基处突变优选D842V突变。
本发明提供一种治疗由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病的方法，其包括给予患者治疗有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物，其中所述的c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病；更优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病，最优选为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症；其中所述的突变的c-KIT的突变位于外显子9、11、13、14、17和/或18，或第816位、第670位、第560位和/或第654位氨基酸残基处，其中所述的第816位氨基酸残基处突变优选D816V或D816H；其中所述的第670位氨基酸残基处突变优选T670I；其中所述的第560位氨基酸残基处突变优选V560G；其中所述的第654位氨基酸残基处突变优选V654A。
本发明提供一种治疗由PDFGRα或突变的PDFGRα介导的疾病的方法，其包括给予患者治疗有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物，其中所述的PDFGRα或突变的PDFGRα介导的疾病优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病；更优选为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病，最优选为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症；其中所述突变的PDFGRα的突变位于外显子18和/或第842位氨基酸残基处，其中所述的第842位氨基酸残基处突变优选D842V突变。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“烯基”指含有一个碳-碳双键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链，代表性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。烯基可以是任选取代的或未取代的。
“炔基”是指含有一个碳碳三键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链。优先选择的是C2-C10的炔基，更优选C2-C6炔基，最优选C2-C4炔基。炔基基团的实施例包括，但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为C3-C12环烷基，更优选为C3-C8环烷基，最优选为C3-C6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。
“螺环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其一个或多个环可以含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环桥环烷基，优选为双环、三环或吡啶酮，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s，4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s，5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r，5r)-二环[3.3.2]癸基。
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、稠环、桥环和螺环。优选具有5至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，氧杂环丁烷基，硫代吗啉基，四氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和哌嗪基。杂环基可以是取代或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1，7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基和5-氧杂螺[2.4]庚基。
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3，4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1，4]二噁英(dioxine)。
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、吡啶酮或多环桥杂环基，优选为双环、三环或吡啶酮，更有选为双环或三环。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基和2-氮杂二环[3.3.2]癸基。所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的。
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为C6-C10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可与杂芳基、杂环基或环烷基稠合，其中与母体结构连接在一起的为芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure GPA0000285481840000141
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或9至10元双环，其包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并噻吩基、苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基和苯并异噁唑基。杂芳基可以是取代或未取代的。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure GPA0000285481840000151
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“苄基”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-C(O)R5、-OC(O)R5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-S(O)nNR6R7或-NR6C(O)R7。
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与相连接的N原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个N、O、S(O)n原子，并且4～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-S(O)nNR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代。
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；且
n选自0，1或2。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
Figure GPA0000285481840000161
将通式(Ia)化合物与通式(Ib)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(Ic)化合物；通式(Ic)化合物与通式(Id)化合物在加热条件下反应，得到通式(IA)化合物；将通式(IA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(I)化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为烷基；且
R1～R4和m的定义如通式(I)中所述，且R1不为氢原子。
本发明通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
Figure GPA0000285481840000171
将通式(Ic)化合物与通式(Ie)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(If)化合物；通式(If)化合物在三氟乙酸存在下进行反应，得到通式(IA)的中间体化合物；将通式(IA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(I)化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Rb为烷基；且
R2～R4的定义如通式(I)中所述。
上述制备方法中，碱性条件由有机碱或无机碱提供，有机碱选自二异丙基乙胺、吡啶、三乙胺、哌啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨吡啶，优选为二异丙基乙胺或三乙胺；无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢化钠、氢化钾，优选为碳酸铯或碳酸钾。
本发明通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
Figure GPA0000285481840000172
将通式(Ia)化合物与通式(IIa)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Id)化合物在加热条件下进行反应，得到通式(IIA)化合物；将通式(IIA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(II)化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为烷基；且
R1～R4的定义如通式(II)中所述，且R1不为氢原子。
上述制备方法中，碱性条件由有机碱或无机碱提供，有机碱选自二异丙基乙胺、吡啶、三乙胺、哌啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨吡啶，优选为二异丙基乙胺和/或三乙胺；无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢化钠、氢化钾，优选为碳酸铯和/或碳酸钾。
本发明通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
Figure GPA0000285481840000181
通式(IIb)化合物与通式(Ie)化合物在加热条件下进行反应，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在三氟乙酸存在下反应，得到通式(IIA)的中间体化合物；将通式(IIA)化合物与通式(IB)化合物在碱性条件下反应，得到通式(II)化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Rb为烷基；且
R2～R4的定义如通式(II)中所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)
使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH &Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
CD3OD：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲
Figure GPA0000285481840000191
Figure GPA0000285481840000201
第一步
6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟酸乙酯
将4，6-二氯烟酸乙酯1a(10.1g，45.9mmol)、2，2，2-三氟乙胺(15.5g，157mmol)和N，N-二异丙基乙胺(17.8g，138mmol)溶于200mL己二酸二甲酯中，100℃下反应8小时。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟酸乙酯1b(4g，白色固体)，产率：31％。
MS m/z(ESI)：282.9[M+1]
第二步
(6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)甲醇
将6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟酸乙酯1b(4g，14.18mmol)溶于50mL四氢呋喃中，-50℃下分批加入四氢铝锂(1.89g，51mmol)，缓慢升温至0℃，0℃下反应1.5小时。0℃下缓慢滴加20mL 10％氢氧化钠溶液淬灭反应，过滤，滤液以乙酸乙酯(30mL)萃取，分去水层，有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到(6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)甲醇1c(3.4g，黄色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：240.9[M+1]
第三步
6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛
将(6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)甲醇1c(3.4g，14.18mmol)和活性二氧化锰(18.5g，212.7mmol)溶于52mL二氯甲烷中，室温下搅拌过夜。将反应液过滤，减压浓缩滤液，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛1d(2.4g，白色固体)，产率：71％。
MS m/z(ESI)：238.9[M+1]
第四步
3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛1d(1g，4.2mmol)、2-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)乙酸乙酯1e(970mg，4.2mmol，根据公开的专利申请WO2013184119制得)、碳酸钾(1.74g，12.6mmol)溶于70mL N，N-二甲基甲酰胺和甲苯(V∶V＝2∶5)的混合溶剂中，150℃下反应12小时。加入100mL乙酸乙酯，以水(100mL×2)和饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1f(870mg，黄色固体)，产率：48％。
MS m/z(ESI)：405.8[M+1]
第五步
3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1f(300mg，0.74mmol)和甲胺的四氢呋喃溶液(3mL，6mmol)溶于20mL 1，4-二氧六环中，100℃密封管中反应16小时。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1g(150mg，黄色固体)，产率：50％。
MS m/z(ESI)：400.8[M+1]
第六步
1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1g(100mg，0.25mmol)、异氰酸苯酯1h(33mg，0.28mmol，根据公开的专利申请WO2005113626制得)和三乙胺(126mg，1.25mmol)溶于2mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲1(20mg，白色固体)，产率：18％。
MS m/z(ESI)：520.1[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.17(s，1H)，8.76(s，1H)，8.46(s，1H)，8.21(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.56(d，J＝10.8Hz，1H)，7.43(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28(t，J＝7.2Hz，2H)，7.21-7.20(m，1H)，6.99(t，J＝7.6Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.13-5.11(m，2H)，2.87(d，J＝4.8Hz，3H).
实施例2
1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000221
第一步
1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1g(100mg，0.25mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(51mg，0.375mmol)和三乙胺(75mg，0.75mmol)溶于2mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-氯-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲2(13mg，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：537.9[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.35(s，1H)，8.80(s，1H)，8.45(s，1H)，8.19(d，J＝6.8Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.58(d，J＝11.2Hz，1H)，7.48(d，J＝10.8Hz，1H)，7.32-7.29(m，1H)，7.21(s，1H)，7.10-7.08(m，1H)，6.81-6.79(m，1H)，6.37(s，1H)，5.76(s，1H)，5.13-5.09(m，1H)，2.87(d，J＝4.8Hz，3H).
实施例3
1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000222
Figure GPA0000285481840000231
第一步
3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛1d(1g，4.2mmol)、2-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)乙酸乙酯3a(890mg，4.2mmol，根据公开的专利申请专利WO2013184119制得)、碳酸钾(1.74g，12.6mmol)溶于70mL N，N-二甲基甲酰胺和甲苯(V∶V＝2∶5)的混合溶剂中，150℃下反应8小时。加入50mL乙酸乙酯，依次以水(50mL×2)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3b(620mg，黄色固体)，产率：39％。
MS m/z(ESI)：385.8[M+1]
第二步
3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3b(620mg，1.61mmol)和甲胺的四氢呋喃溶液(6mL，12mmol)溶于36mL 1，4-二氧六环中，100℃密封管中反应48小时。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3c(550mg，黄色固体)，产率：89％。
MS m/z(ESI)：380.9[M+1]
第三步
1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3c(183mg，0.48mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(198mg，1.44mmol)和三乙胺(243mg，2.41mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲3(50mg，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：517.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.25(s，1H)，8.57(s，1H)，8.45(s，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.51-7.47(m，1H)，7.33-7.27(m，1H)，7.18-7.13(m，2H)，7.07(d，J＝7.6Hz，1H)，6.79(dt，J＝8.8，2.4Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.14-5.12(m，2H)，2.86(d，J＝4.8Hz，3H)，2.08(s，3H).
实施例4
1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000241
第一步
1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3c(183mg，0.48mmol)、1-氟-4-异氰酸苯酯4a(198mg，1.44mmol)和三乙胺(243mg，2.41mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲4(50mg，白色固体)，产率：20％。
MS m/z(ESI)：517.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，8.50(s，1H)，8.44(s，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.46-7.42(m，2H)，7.17-7.09(m，4H)，6.37(s，1H)，5.14-5.12(m，2H)，2.86(d，J＝4.8Hz，3H)，2.07(s，3H).
实施例5
1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000251
第一步
3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛1d(300mg，1.26mmol)、2-(5-氨基-2，4-二氟苯基)乙酸乙酯5a(271.7mg，1.26mmol，根据公开的专利申请专利WO2013184119制得)和碳酸钾(522mg，3.78mmol)溶于28mL N，N-二甲基甲酰胺和甲苯(V∶V＝2∶5)的混合溶剂中，150℃下反应8小时。加入50mL乙酸乙酯，依次以水(50mL×2)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5b(237mg，淡黄色固体)，产率：48％。
MS m/z(ESI)：389.8[M+1]
第二步
3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5b(237mg，0.61mmol)和甲胺的四氢呋喃溶液(3mL，6mmol)溶于20mL 1，4-二氧六环中，100℃密封管中反应12小时。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5c(168mg，淡黄色固体)，产率：72％。
MS m/z(ESI)：384.9[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43(s，1H)，7.86(s，1H)，7.17(d，J＝4.0Hz，1H)，7.07(t，J＝8.0Hz，1H)，6.82(t，J＝8.0Hz，1H)，6.34(s，1H)，5.11-5.09(m，2H)，5.04(s，2H)，2.85(d，J＝4.0Hz，3H).
第三步
1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5c(168mg，0.44mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(90mg，0.66mmol)和三乙胺(727mg，7.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲5(4.5mg，淡黄色固体)，产率：2％。
MS m/z(ESI)：521.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.32(s，1H)，8.66(s，1H)，8.46(s，1H)，8.13(t，J＝8.5Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.49(d，J＝11.8Hz，1H)，7.41(t，J＝10.3Hz，1H)，7.31(q，J＝7.9Hz，1H)，7.23(d，J＝5.1Hz，1H)，7.10(d，J＝8.2Hz，1H)，6.80(t，J＝8.1Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.14-5.11(m，2H)，2.87(d，J＝4.7Hz，3H).
实施例6
1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000261
第一步
1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5c(300mg，0.78mmol)、1-氟-4-异氰酸苯酯4a(321mg，2.34mmol)和三乙胺(394mg，3.9mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲6(160mg，白色固体)，产率：39％。
MS m/z(ESI)：521.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.58(s，1H)，8.83(s，1H)，8.65(s，1H)，8.40(s，1H)，8.18(t，J＝8.4Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.86-7.45(m，3H)，7.13(t，J＝8.4Hz，2H)，6.76(s，1H)，5.21(s，2H)，3.00(s，3H).
实施例7
1-(4-溴-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲
Figure GPA0000285481840000271
第一步
3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将6-氯-4-((2，2，2-三氟乙基)氨基)烟醛1d(600mg，2.52mmol)、2-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)乙酸乙酯7a(698mg，2.52mmol，根据公开的专利申请WO2013184119制得)和碳酸钾(1.04g，7.56mmol)溶于70mL N，N-二甲基甲酰胺和甲苯(V∶V＝2∶5)的混合溶剂中，150℃下反应12小时。加入100mL乙酸乙酯，以水(100mL×2)、饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮7b(660mg，淡黄色固体)，产率：58％。
MS m/z(ESI)：449.7[M+1]
第二步
3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮7b(160mg，0.35mmol)和甲胺的四氢呋喃溶液(1.5mL，3mmol)溶于5mL 1，4-二氧六环中，100℃密封管中反应8小时。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮7c(123mg，黄色固体)，产率：78％。
MS m/z(ESI)：444.8[M+1]
第三步
1-(4-溴-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲
将3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮7c(114mg，0.26mmol)、异氰酸苯酯1h(34mg，0.28mmol)和三乙胺(130mg，1.28mmol)溶于20mL甲苯和二氯甲烷(V∶V＝1∶1)的混合溶液中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(4-溴-2-氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-苯基脲7(20mg，白色固体)，产率：12％。
MS m/z(ESI)：563.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.16(s，1H)，8.76(s，1H)，8.45(s，1H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.69(d，J＝10.8Hz，1H)，7.43(d，J＝7.6Hz，2H)，7.28(t，J＝7.6Hz，2H)，7.22-7.20(m，1H)，6.99(t，J＝7.2Hz，1H)，6.37(s，1H)，5.14-5.11(m，2H)，2.86(d，J＝4.8Hz，3H).
实施例8
1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲
Figure GPA0000285481840000281
第一步
3-异氰酸苯并[b]噻吩酯
将苯并[b]噻吩-3-甲酸8a(500mg，2.8mmol)和三乙胺(319mg，3.2mmol)溶于10mL甲苯中，室温搅拌至8a全部溶解。加入叠氮磷酸二苯酯(847mg，3.1mmol)，50℃下反应1小时，100℃下继续反应0.5小时。减压浓缩，得到粗品3-异氰酸苯并[b]噻吩酯8b(490mg，无色油状)，产率：100％。
第二步
1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲
将3-(5-氨基-4-氟-2-甲基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮3c(183mg，0.48mmol)、3-异氰酸苯并[b]噻吩酯8b(252mg，1.44mmol)和三乙胺(243mg，2.41mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2-氟-4-甲基-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲8(60mg，黄色固体)，产率：22％。
MS m/z(ESI)：555.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.42(s，1H)，8.86(s，1H)，8.46(s，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.97(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.70(s，1H)，7.51(t，J＝6.4Hz，1H)，7.43(t，J＝8.0Hz，1H)，7.20(d，J＝12Hz，1H)，7.15-7.13(m，1H)，6.38(s，1H)，5.15-5.10(m，2H)，2.87(d，J＝4.8Hz，3H)，2.09(s，3H).
实施例9
1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲
Figure GPA0000285481840000291
第一步
1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5c(200mg，0.52mmol)、3-异氰酸苯并[b]噻吩酯8b(91mg，0.52mmol)和三乙胺(157mg，1.56mmol)溶于5mL四氢呋喃中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(苯并[b]噻吩-3-基)-3-(2，4-二氟-5-(7-(甲基氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)脲9(50mg，白色固体)，产率：17％。
MS m/z(ESI)：559.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.41(s，1H)，8.89(s，1H)，8.48(s，1H)，8.28(t，J＝8.4Hz，1H)，7.99-7.96(m，2H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.51(t，J＝7.6Hz，1H)，7.46-7.41(m，2H)，7.23-7.20(m，1H)，6.37(s，1H)，5.14-5.09(m，2H)，2.87(d，J＝4.8Hz，3H).
实施例10
1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000301
第一步
3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮7b(340mg，0.76mmol)、2-甲氧基乙胺(568mg，7.57mmol)和1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(230mg，1.51mmol)溶于7mL N-甲基吡咯烷酮中，180℃下微波反应1.5小时。加入70mL水，以二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮10a(370mg，黄色油状)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：488.8[M+1]
第二步
1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮10a(100mg，0.21mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(42mg，0.31mmol)和三乙胺(62mg，0.62mmol)溶于3mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲10(30mg，白色固体)，产率：23％。
MS m/z(ESI)：625.7[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.36(s，1H)，8.81(s，1H)，8.45(s，1H)，8.18(d，J＝8.8Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.71(d，J＝10.4Hz，1H)，7.48(d，J＝12.4Hz，1H)，7.31(q，J＝8.4Hz，1H)，7.27-7.23(m，1H)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H)，6.81(t，J＝8.8Hz，1H)，6.51(s，1H)，5.06-5.04(m，2H)，3.53-3.50(m，4H)，3.29(s，3H).
实施例11
1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000311
第一步
1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2-溴-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮10a(100mg，0.21mmol)、1-氟-4-异氰酸苯酯4a(42mg，0.31mmol)和三乙胺(62mg，0.62mmol)溶于3mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-溴-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲11(10mg，白色固体)，产率：8％。
MS m/z(ESI)：625.7[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.21(s，1H)，8.76(s，1H)，8.44(s，1H)，8.19(d，J＝8.4Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.69(d，J＝10.8Hz，1H)，7.46-7.43(m，2H)，7.25-7.24(m，1H)，7.13(t，J＝8.8Hz，2H)，6.50(s，1H)，5.07-5.02(m，2H)，3.53-3.50(m，4H)，3.29(s，3H).
实施例12
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000312
第一步
3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1f(400mg，1mmol)、2-甲氧基乙胺(750mg，10mmol)和1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(304mg，2mmol)溶于8mL N-甲基吡咯烷酮中，180℃下微波反应1小时。加入100mL水，以二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮12a(400mg，黄色油状)，产率：90％。
MS m/z(ESI)：444.9[M+1]
第二步
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮12a(70mg，0.16mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(26mg，0.19mmol)和三乙胺(48mg，0.47mmol)溶于3mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲12(9mg，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：581.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.36(s，1H)，8.80(s，1H)，8.45(s，1H)，8.18(d，J＝8.8Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.58(d，J＝10.8Hz，1H)，7.50-7.43(m，2H)，7.31(q，J＝6.8Hz，1H)，7.08(d，J＝8.4Hz，1H)，6.83-6.79(m，1H)，6.51(s，1H)，5.06-5.03(m，2H)，3.51-3.50(m，4H)，3.29(s，3H).
实施例13
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000321
第一步
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮12a(100mg，0.225mmol)、1-氟-4-异氰酸苯酯4a(37mg，0.27mmol)和三乙胺(68mg，0.675mmol)溶于3mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-氟苯基)脲13(9mg，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：581.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.15(s，1H)，8.71(s，1H)，8.45(s，1H)，8.19(d，J＝8.8Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.57(d，J＝11.2Hz，1H)，7.46-7.43(m，2H)，7.25-7.23(m，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H)，6.51(s，1H)，5.06-5.04(m，2H)，3.53-3.48(m，4H)，3.29(s，3H).
实施例14
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲
Figure GPA0000285481840000331
第一步
1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((2-甲氧基乙基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮12a(100mg，0.225mmol)、1-异氰酸-4-(三氟甲基)苯酯14a(50mg，0.27mmol)和三乙胺(68mg，0.675mmol)溶于3mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到1-(4-氯-2-氟-5-(7-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲14(16mg，白色固体)，产率：11％。
MS m/z(ESI)：631.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.67(s，1H)，8.91(s，1H)，8.45(s，1H)，8.18(d，J＝8.4Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.64(s，4H)，7.59(d，J＝11.2Hz，1H)，7.25-7.24(m，1H)，6.51(s，1H)，5.06-5.04(m，2H)，3.53-3.50(m，4H)，3.29(s，3H).
实施例15
(R)-1-(4-氯-2-氟-5-(7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000341
第一步
(R)-3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮1f(202mg，0.4mmol)、(R)-1-甲氧基丙-2-胺(223mg，2.5mmol)和1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)(152mg，1mmol)溶于4mL N-甲基吡咯烷酮中，180℃下微波反应1.5小时。加入40mL水，以二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(R)-3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮15a(229mg，黄色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：458.9[M+1]
第二步
(R)-1-(4-氯-2-氟-5-(7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将(R)-3-(5-氨基-2-氯-4-氟苯基)-7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮15a(100mg，0.22mmol)、1-氟-3-异氰酸苯酯2a(45mg，0.33mmol)和三乙胺(66mg，0.65mmol)溶于2mL二氯甲烷中，室温反应过夜。减压浓缩，得到的残留物用薄层色谱法(展开剂：A体系)纯化，得到(R)-1-(4-氯-2-氟-5-(7-((1-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-萘啶-3-基)苯基)-3-(3-氟苯基)脲15(12mg，白色固体)，产率：10％。
MS m/z(ESI)：595.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.38(s，1H)，8.81(s，1H)，8.44(s，1H)，8.18(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.58(d，J＝10.8Hz，1H)，7.48(d，J＝11.6Hz，1H)，7.32-7.29(m，1H)，7.11-7.08(m，2H)，6.83-6.79(m，1H)，6.48(m，1H)，5.06-5.034(m，2H)，4.25-4.22(m，1H)，3.53-3.50(m，2H)，3.30(s，3H)，1.16(d，J＝7.2Hz，3H).
实施例16
1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(4-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000351
第一步
3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-((4-甲氧基苄基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-氯-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮5b(500mg，1.28mmol)溶于5mL 4-甲氧基苄胺16a中，130℃下反应过夜。反应结束后，冷却至室温，加入10mL乙酸乙酯和水(V∶V＝1∶1)的混合溶剂，室温下搅拌30分钟。以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-((4-甲氧基苄基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮16b(375mg，淡黄色固体)，产率：60％。
MS m/z(ESI)：490.9[M+1]
第二步
7-氨基-3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮
将3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-7-((4-甲氧基苄基)氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮16b(375mg，0.76mmol)溶于4mL三氟乙酸中，60℃下反应过夜。反应结束后，冷却至室温，减压浓缩，0℃下加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，以饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，以无水硫酸钠干燥，过滤，加压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-氨基-3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮16c(200mg，淡黄色固体)，产率：71％。
MS m/z(ESI)：370.9[M+1]
第三步
1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(4-氟苯基)脲
将三乙胺(40.4mg，0.4mmol)溶于1mL四氢呋喃中，0℃下加入7-氨基-3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮16c(50mg，0.1mmol)，然后滴加1-氟-4-异氰酸苯酯4a(13.7mg，0.1mmol)，室温下反应过夜。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用制备色谱分离纯化，得到1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(4-氟苯基)脲16(9mg，淡黄色固体)，产率：15％。
MS m/z(ESI)：507.8[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.10(s，1H)，8.58(s，1H)，8.42(s，1H)，8.10(t，J＝12.0Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.47-7.37(m，3H)，7.12(t，J＝8.0Hz，2H)，6.78(s，2H)，6.42(s，1H)，5.01(d，J＝8.0Hz，2H).
实施例17
1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(3-氟苯基)脲
Figure GPA0000285481840000361
第一步
1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(3-氟苯基)脲
将三乙胺(54.6mg，0.54mmol)溶于3mL四氢呋喃中，0℃下加入7-氨基-3-(5-氨基-2，4-二氟苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，6-萘啶-2(1H)-酮16c(100mg，0.27mmol)，然后滴加1-氟-3-异氰酸苯酯2a(40.76mg，0.29mmol)，室温下反应过夜。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用制备色谱分离纯化，得到1-(5-(7-氨基-2-氧代-1-(2，2，2-三氟乙基)-1，2-二氢-1，6-二氮萘啶-3-基)-2，4-二氟苯基)-3-(3-氟苯基)脲17(54mg，白色固体)，产率：41％。
MS m/z(ESI)：507.9[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.31(s，1H)，8.68(s，1H)，8.48(s，1H)，8.10(t，J＝8.0Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.51-7.40(m，2H)，7.34-7.28(q，J＝8.0Hz，1H)，7.10(d，J＝8.0Hz，3H)，6.82-6.78(m，1H)，6.53(s，1H)，5.04(d，J＝8.0Hz，2H).
生物学评价
测试例1、本发明化合物对重组人源c-KIT[D816V]激酶活性测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源c-KIT[D816V](D816V突变)的激酶活性的抑制程度。
本方法使用Cisbio公司的
Figure GPA0000285481840000371
酪氨酸激酶试剂盒(货号62TK0PEB)，该试剂盒原理基于时间分辨荧光能量共振转移(TF-FRET)，通过测定蛋白介导的生物素化的多肽底物的磷酸化程度来反映化合物对蛋白激酶活性的抑制强弱。详细实验操作可参考试剂盒说明书。重组人源c-KIT[D816V]蛋白激酶购于Carna bioscience(日本，货号为c-KIT[D816V]#08-505)。
将实验流程简述如下：受试化合物(表1中所列化合物)首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10μM～0.1nM。测试所用的ATP溶液(生工生物工程(上海)股份有限公司，#A600311)的浓度为预先测定的对应每个激酶的ATP Km值浓度，其中c-KIT[D816V]的ATP Km值浓度为30μM。反应在384孔微孔板中进行，首先向空孔中加入待测化合物和0.66ng受试蛋白，并在室温下孵育5分钟，然后向反应液中加入ATP溶液和生物素化的多肽底物溶液，并在室温下振荡孵育50分钟后，向反应中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗体和偶联有修饰化的别藻蓝蛋白XL665的链酶亲和素，并在室温下继续振荡孵育1小时。孵育结束后，在酶标仪以TF-FRET模式测定各孔在激发波长为304nm，发射波长为620nM和665nM的荧光强度值。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，得到化合物的IC50值，见表1。
表1 本发明化合物对c-KIT[D816V]抑制的IC50值
Figure GPA0000285481840000372
Figure GPA0000285481840000381
结论：本发明化合物对c-KIT D816V具有较好的抑制作用。
备注：伊马替尼购买于景颜化工(CAS：152459-95-5，纯度：98.87％，批号1604105，类白色固体)；
参考化合物1、2和3分别为WO2013184119公开的实施例31、实施例59和实施例15所制备的化合物；具体结构如下：
Figure GPA0000285481840000382
其制备方法和结构鉴定分别参见WO2013184119的实施例31、实施例59和实施例15；
参考化合物4的制备方法参考WO2013184119的实施例15制备而成，结构鉴定如下：
MS m/z(ESI)：468.8[M+1]；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.07(s，1H)，8.55(s，1H)，8.45(s，1H)，8.12(t，J＝12.0Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.45-7.35(m，3H)，7.15-7.08(m，3H)，6.25(s，1H)，4.16(q，J＝4.0Hz，2H)，2.88(d，J＝8.0Hz，3H)，1.23(t，J＝4.0Hz，3H)。
测试例2、本发明化合物对重组人源c-KIT[T670I]和c-KIT[V560G/D816V]激酶活性测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源c-KIT[T670I]和c-KIT[V560G/D816V]蛋白激酶的激酶活性的抑制程度。
本方法使用Cisbio公司的
Figure GPA0000285481840000383
酪氨酸激酶试剂盒(货号62TK0PEB)，该试剂盒原理基于时间分辨荧光能量共振转移(TF-FRET)，通过测定蛋白介导的生物素化的多肽底物的磷酸化程度来反应化合物对蛋白激酶活性的抑制强弱。详细实验操作可参考试剂盒说明书。重组人源c-KIT[T670I]蛋白激酶和c-KIT[V560G/D816V]购于Carna bioscience(日本，货号为c-KIT[T670I]#08-195和c-KIT[V560G/D816V#08-535)。
将实验流程简述如下：受试化合物(表2所述化合物)首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10μM～0.1nM。测试所用的ATP溶液(生工生物工程(上海)股份有限公司，#A600311)的浓度为预先测定的对应每个激酶的ATP Km值浓度，其中c-KIT[T670I]的ATP Km值浓度为30μM，c-KIT[V560G/D816V]的ATP Km值浓度为10μM。反应在384孔微孔板中进行，首先向空孔中加入待测化合物和受试蛋白(c-KIT[T670I]0.66ng或c-KIT[V560G/D816V]0.03ng)，并在室温下孵育5分钟，然后向反应液中加入ATP溶液和生物素化的多肽底物溶液，并在室温下振荡孵育50分钟后，向反应中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗体和偶联有修饰化的别藻蓝蛋白XL665的链酶亲和素，并在室温下继续振荡孵育1小时。孵育结束后，在酶标仪以TF-FRET模式测定各孔在激发波长为304nm，发射波长为620nM和665nM的荧光强度值。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，得到化合物的IC50值，见表2。
表2 本发明化合物对c-KIT[T670I]和c-KIT[V560G/D816V]抑制的IC50值
Figure GPA0000285481840000391
结论：本发明化合物对c-KIT T760I和c-KIT V560G/D816V具有较好的抑制作用。
测试例3、本发明化合物对重组人源PDFGRα[D842V]激酶活性测定
以下方法用于测定本申请代表化合物在体外条件下对重组人源PDGFRα[D842V](D842V突变)的激酶活性的抑制作用。
本方法使用Cisbio公司的
Figure GPA0000285481840000392
酪氨酸激酶试剂盒(货号62TK0PEB)，该试剂盒原理基于时间分辨荧光能量共振转移(TF-FRET)，通过测定蛋白介导的生物素化的多肽底物的磷酸化程度来反映化合物对蛋白激酶活性的抑制强弱。详细实验操作可参考试剂盒说明书。重组人源PDGFRα[D842V]蛋白激酶购于Carna bioscience(日本，货号为PDFGRα[D842V]#08-506)。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10μM-0.1nM。测试所用的ATP溶液(生工生物工程(上海)股份有限公司，#A600311)的浓度为预先测定的ATP Km值浓度为30μM。反应在384孔微孔板中进行，首先向空孔中加入待测化合物和0.66ng受试蛋白，并在室温下孵育5分钟，然后向反应液中加入ATP溶液和生物素化的多肽底物溶液，并在室温下振荡孵育50分钟后，向反应中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗体和偶联有修饰化的别藻蓝蛋白XL665的链酶亲和素，并在室温下继续振荡孵育1小时。孵育结束后，在酶标仪以TF-FRET模式测定各孔在激发波长为304nm，发射波长为620nM和665nM的荧光强度值。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，得到化合物的IC50值，见表3。
表3 本申请代表化合物对PDGFRα[D842V]抑制的IC50值
实施例编号 IC<sub>50</sub>(nM)/PDGFRα[D842V]
16 61
17 18
结论：本申请的代表化合物16和17对PDGFRα[D842V]具有较好的抑制作用。
测试例4、本发明化合物对小鼠肥大细胞瘤P815活性测定
以下方法用于测定本发明化合物对肿瘤细胞增殖的影响通过采用Cell CountingKit-8试剂盒(Dojindo，东仁化学科技)来进行测定，具体操作按照其说明书进行。针对c-KIT[D816V]，采用小鼠肥大细胞瘤P815(购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)进行培养。
实验方法简述如下：受试化合物(表3所述化合物)首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以对应细胞的培养基进行梯度稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在30μM～0.01nM。将处于对数生长期的肿瘤细胞以1000个/孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱内过夜后，加入测试化合物样品后继续培养细胞48小时。培养结束后，向每孔加入10μL的CCK-8检测液，并在37℃下孵育1～2小时，随后在酶标仪上读取样品各孔在450nM下的吸光度数值。通过与对照组(0.3％DMSO)的吸光度数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，得到化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表4。
表4 本发明化合物对小鼠肥大细胞瘤活性抑制的IC50值
化合物编号 IC<sub>50</sub>(nM)/P815
伊马替尼 3252
参考化合物1 44
5 25
6 19
9 20
结论：本发明的化合物对小鼠肥大细胞瘤P815的增殖具有显著抑制作用。
测试例5、本发明化合物的药代动力学测试
1、摘要
以SD大鼠为受试动物，采用LC/MS/MS法测定大鼠灌胃给予参考化合物1和本发明化合物6后，其不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学特征。
2、实验方案
2.1实验药品与动物
参考化合物1和本发明化合物6；
健康成年SD雄性大鼠6只，分为3组，购自西普尔-必凯实验动物有限公司。
2.2药物配置与给药
称取适量的实验药品，加入0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，超声至溶解，用移液管吸取100μL用于浓度测定，配置溶液浓度为0.3mg/mL。
健康成年SD雄性大鼠6只，分为3组，禁食过夜后分别灌胃给药，给药剂量为3mg/kg，给药体积为10mL/kg。
2.3操作
于给药前和给药后0.083小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时颈部静脉采血0.25mL，置于肝素化试管中，2-8℃下，8000转/分钟，离心6分钟，于-70℃保存，给药2小时后进食。用LC-MS/MS法测定不同的化合物灌胃给药后SD雄性大鼠血浆中的待测化合物的含量。通过不同时间点的血药浓度数据，运用WinNonlin计算药代动力学参数。
3、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如表5所示。
表5 本发明化合物的药代动力学数据表
Figure GPA0000285481840000411
结论：与参考化合物1相比，本发明化合物6具有较高的血药浓度和药时曲线下面积，同时半衰期延长，具有较好的药代动力学性质。
测试例6、本发明优选化合物ICR小鼠药代动力学测试
1、摘要
以ICR小鼠为受试动物，采用LC/MS/MS法测定小鼠经尾静脉注射和灌胃给予参考化合物1、实施例5和实施例6化合物后，其不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学特征。
2、实验方案
2.1实验药品与动物
参考化合物1、本发明化合物5和化合物6；
健康成年ICR雄性小鼠54只，31.3～35.6g，分为6组，A～F组，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物质量合格证号：11400700310546。
2.2药物配置与给药
2.2.1静脉(IV-A)给药制剂配制
称取适量的实验药品，加入DMSO∶Solutol HS-15∶Saline＝5∶10∶85(v/v/v)，涡旋混匀，使用Nylon过滤膜(0.45μm)过滤，用移液管吸取100μL×2用于浓度测定，配置溶液浓度为0.2mg/mL，2～8℃保存。
2.2.2灌胃(IG-B)给药制剂配制
称取适量的实验药品，加入0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，超声至溶解，用移液管吸取100μL×2用于浓度测定，配置溶液浓度为0.3mg/mL，2～8℃保存。
2.2.3给药
健康成年ICR雄性小鼠54只，31.3～35.6g，分为6组，A～F组，禁食过夜后，A组、C组和E组分别经尾静脉注射给药，给药剂量为1mg/kg，给药体积为5mL/kg；B组、D组和F组分别灌胃给药，给药剂量为3mg/kg，给药体积为10mL/kg。
2.3操作
于静脉注射给药前和给药后0.083小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时或于灌胃给药前和给药后0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时经由眼眶静脉采血80μL，置于EDTA-K2抗凝管中，1500g条件下离心10分钟，于-40至-20℃保存，给药4小时后进食。用LC-MS/MS法测定不同的化合物经尾静脉注射和灌胃给药后ICR雄性小鼠血浆中的待测化合物的含量。通过不同时间点的血药浓度数据，运用WinNonlin计算药代动力学参数。
3、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如表6和表7所示。
表6 本发明化合物小鼠灌胃给药的药代动力学数据表
Figure GPA0000285481840000421
Figure GPA0000285481840000431
结论：与参考化合物1相比，小鼠灌胃给予本发明化合物5和化合物6具有较高的最高血药浓度和药时曲线下面积，具有较好的药代动力学性质。
表7 本发明化合物小鼠静脉注射给药的药代动力学数据表
Figure GPA0000285481840000432
结论：与参考化合物1相比，小鼠静脉注射给予本发明化合物5和化合物6具有较高的药时曲线下面积，具有较好的药代动力学性质。

Claims (27)

1.一种通式(I)所示的化合物或其可药用的盐：
Figure FDA0003609262600000011
其中：
R1选自氢原子或C1-4烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个C1-6烷氧基所取代；
R2为三氟乙基；
R3相同或不同，各自独立地选自氢原子、C1-4烷基或卤素；
R4选自苯基或苯并噻吩基，其中所述的苯基或苯并噻吩基任选进一步被一个或多个选自卤素、C1-4烷基或C1-6烷氧基的取代基所取代；其中所述的C1-4烷基或C1-6烷氧基任选进一步被一个或多个卤素所取代；
m选自1，2，3或4。
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，其中所述R1选自C1-4烷基，其中所述C1-4烷基任选进一步被一个或多个甲氧基所取代。
3.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其可药用的盐，
Figure FDA0003609262600000012
其中：
R3选自氢原子、C1-4烷基或卤素；
R1、R2、R4的定义如权利要求1中所述。
4.根据权利要求1～3任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
R3选自氢原子、甲基、乙基、氟、氯或溴。
5.根据权利要求1～3任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
R4选自苯基或苯并噻吩基，其中所述的苯基或苯并噻吩基任选进一步被一个或多个选自氟、氯、溴、甲基、乙基或C1-6烷氧基的取代基所取代。
6.根据权利要求1～3任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
R4选自苯基或苯并噻吩基，其中所述的苯基或苯并噻吩基任选进一步被一个或多个氟所取代。
7.根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用的盐，其中所述的化合物为：
Figure FDA0003609262600000021
8.一种根据权利要求1或2所述的通式(I)化合物或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure FDA0003609262600000022
通式(IA)化合物与通式(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物；
其中：R1～R4和m的定义如权利要求1或2中所述。
9.一种根据权利要求3所述的通式(II)化合物或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure FDA0003609262600000031
通式(IIA)化合物与通式(IB)化合物反应，得到通式(II)化合物；
其中：R1～R4的定义如权利要求3中所述。
10.一种通式(IA)所述的中间体化合物或其可药用的盐，
Figure FDA0003609262600000032
其中：R1～R3和m的定义如权利要求1或2中所述。
11.根据权利要求10所述的化合物或其可药用的盐，其为通式(IIA)所述的化合物或其可药用的盐，
Figure FDA0003609262600000033
其中：R1～R3的定义如权利要求10中所述。
12.根据权利要求10所述的中间体化合物或其可药用的盐，其中所述的化合物为：
Figure FDA0003609262600000034
Figure FDA0003609262600000041
13.一种根据权利要求10所述的通式(IA)的中间体化合物或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
1)当R1不为氢原子时：
Figure FDA0003609262600000042
将通式(Ia)化合物与通式(Ib)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(Ic)化合物；通式(Ic)化合物与通式(Id)化合物反应，得到通式(IA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为C1-4烷基；且
R1～R3和m的定义如权利要求10中所述，且R1不为H；
2)当R1为氢原子时：
Figure FDA0003609262600000043
将通式(Ia)化合物与通式(Ib)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(Ic)化合物；将通式(Ic)化合物与通式(Ie)化合物反应，得到通式(If)化合物；通式(If)化合物在三氟乙酸存在下进行反应，得到通式(IA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Ra为C1-4烷基；
Rb为C1-4烷基；且
R2、R3和m的定义如权利要求10中所述。
14.一种根据权利要求11所述的通式(IIA)的中间体化合物其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
1)当R1不为氢原子时：
Figure FDA0003609262600000051
将通式(Ia)化合物与通式(IIa)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Id)化合物反应，得到通式(IIA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
Ra为C1-4烷基；且
R1～R3的定义如权利要求11中所述，且R1不为H；
2)当R1为氢原子时：
Figure FDA0003609262600000052
将通式(Ia)化合物与通式(IIa)化合物在加热条件下进行缩合反应，得到通式(IIb)化合物；通式(IIb)化合物与通式(Ie)化合物反应，得到通式(IIc)化合物；通式(IIc)化合物在三氟乙酸存在下反应，得到通式(IIA)的中间体化合物；
其中：
X为卤素；
R1为氢原子；
Ra为C1-4烷基；
Rb为C1-4烷基；且
R2、R3的定义如权利要求11中所述。
15.一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～7中任何一项所述的化合物或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
16.根据权利要求1～7中任何一项所述的化合物或其可药用的盐，或根据权利要求15所述的药物组合物在制备治疗由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病的药物中的用途，所述的突变的c-KIT的突变位于外显子9、11、13、14、17和/或18，或第816位、第670位、第560位和/或第654位氨基酸残基处。
17.根据权利要求16所述的用途，其中所述的由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病。
18.根据权利要求16所述的用途，其中所述的由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病。
19.根据权利要求16所述的用途，其中所述的由c-KIT或突变的c-KIT介导的疾病为为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症。
20.根据权利要求16所述的用途，其中所述的第816位氨基酸残基处突变为D816V或D816H；其中所述的第670位氨基酸残基处突变为T670I；其中所述的第560位氨基酸残基处突变为V560G；其中所述的第654位氨基酸残基处突变为V654A。
21.根据权利要求1～7中任何一项所述的化合物或其可药用的盐，或根据权利要求15所述的药物组合物在制备c-KIT抑制剂中的用途。
22.根据权利要求1～7中任何一项所述的化合物或其可药用的盐，或根据根据权利要求15所述的药物组合物在制备治疗由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病的药物中的用途，所述突变的PDFGRα的突变位于外显子18和/或第842位氨基酸残基处。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述的由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、急性髓性白血病、卵巢癌、黑色素瘤、宫颈癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、畸胎瘤、肥大细胞白血病。
24.根据权利要求22所述的用途，其中所述的由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病为胃肠道间质瘤、系统性肥大细胞增生症、多形性胶质母细胞瘤和急性髓性白血病。
25.根据权利要求22所述的用途，其中所述的由突变的或野生型PDFGRα介导的疾病为胃肠道间质瘤、多形性胶质母细胞瘤和系统性肥大细胞增生症。
26.根据权利要求22所述的用途，其中所述的第842位氨基酸残基处突变为D842V突变。
27.根据权利要求1～7中任何一项所述的化合物或其可药用的盐，或根据权利要求15所述的药物组合物在制备PDFGRα抑制剂中的用途。
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