CN119985977A - 尿液分泌型Ly-6/uPAR相关蛋白(SLURP1)及免疫球蛋白λ变量3-91(IGLV3-9)在前列腺癌诊疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及尿液中尿液分泌型Ly‑6/uPAR相关蛋白（SLURP1）及免疫球蛋白λ变量3‑91（IGLV3‑9）在制备用于前列腺癌诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等试剂的应用。本发明通过研究首次证实，尿液分泌型Ly‑6/uPAR相关蛋白（SLURP1）及免疫球蛋白λ变量3‑91（IGLV3‑9）是前列腺癌发生发展的关键蛋白。与正常人群及前列腺增生疾病相比，他们在前列腺癌患者尿液样本中表达明显增高。利用本发明的蛋白生物标志物及其组合可提高前列腺癌的诊断、鉴别、监测和预后评估的灵敏度和特异性。本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测前列腺癌多种生物标志物。

Description

尿液分泌型Ly-6/uPAR相关蛋白(SLURP1)及免疫球蛋白λ变量 3-91(IGLV3-9)在前列腺癌诊疗中的应用

技术领域

本发明涉及蛋白组学研究领域，具体涉及尿液中分泌型Ly-6/uPAR相关蛋白（SLURP1）及免疫球蛋白λ变量3-91（IGLV3-9）在制备用于前列腺癌诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等试剂的应用。

背景技术

前列腺癌是一种在全球范围内危害男性健康的严重疾病，前列腺癌临床进展缓慢，患者早期多无明显症状，随着前列腺癌发展临床常表现为排尿困难、尿痛、尿频等症状，这与良性前列腺增生表现症状相似。目前PCa的筛查与诊断主要以血液PSA检测、直肠指诊、影像学检查以及前列腺穿刺活检等技术为主。然而良性前列腺增生、前列腺炎症或活检等均会导致PSA升高，并且在病理组织结构上，由于疾病常常导致前列腺形态不规则，导致从分区结构鉴别前列腺癌困难。在我国大部分前列腺癌患者就诊时已经是中晚期，并且上述检查的花费和有创穿刺对患者造成心理和经济负担，所以在临床上寻找相对容易获得且患者容易接受的前列腺癌早期诊断和鉴别诊断指标很有必要，尤其对具有前列腺癌家族史和老年男性人群具有重要的现实意义。

尿液是血液的终末代谢产物，其组成、数量与性状的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的各种信息。与血清等其他体液样本相比，尿液具有获 取无创、收集便利的优势。前列腺癌细胞及其代谢产生的物质可由前列腺进入尿液，对前列腺癌的诊断和鉴别有重要意义。而目前相关的生物标志物较少， 因此，迫切需要开发高效能的前列腺癌疾病诊断、鉴别尿液标志物。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种或两种尿液蛋白标志物SLURP1和IGLV3-9在制备用于前列腺癌诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。

优选地，所述尿液中SLURP1和IGLV3-9的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1 和SEQID NO.2所示

（SEQ ID NO.1 ：MASRWAVQLL LVAAWSVGCG EALKCYTCKE PMTSASCRTI TRCKPEDTACMTTLVTVEAE YPFNQSPVVT RSCSSSCVAT DPDSIGAAHL IFCCFRDLCN SEL）

(SEQ ID NO.2：SYELTQPLSV SVALGQTARI TCGGNNIGSK NVHWYQQKPG QAPVLVIYRDSNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISRAQAG DEADYYCQVW DSSTA）

优选地，所述制剂为前列腺癌患者尿液中SLURP1和 IGLV3-9表达水平检测试剂盒。

优选地，所述制剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒如能够特异性结合SLURP1和 IGLV3-9的适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。

优选地，所述试剂盒还包括选自下组的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。

优选地，所述标准品包括SLURP1和 IGLV3-9标准品、人源化标签抗体标准品；较佳地，所述质控品包括：SLURP1和 IGLV3-9质控品、人源化标签抗体质控品；较佳地，所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体。

优选地，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体。

发明人首先收集了健康人、前列腺增生、前列腺癌患者的尿液标本，通过液相二级质谱技术（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)，建立各组受试者尿液蛋白谱。将前列腺癌组、前列腺增生组和正常对照组在质谱中得到的数据进行定量计算，最终获得差异蛋白SLURP1和 IGLV3-9。

本发明通过研究证实与健康人相比，尿液中SLURP1和 IGLV3-9在前列腺癌患者尿液中呈高表达，可用于疾病的诊断；与前列腺增生相比，SLURP1和 IGLV3-9在前列腺癌患者尿液中也呈高表达，可用于疾病的鉴别。从而提出检测尿液中SLURP1和 IGLV3-9可用于前列腺癌的诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用。

本发明发挥尿液标本获取无创、可大规模重复取样、保存方便的优势，利用尿液标本检测尿液中SLURP1和 IGLV3-9。

为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。

附图说明

图1是尿液中SLURP1和 IGLV3-9在前列腺癌、前列腺增生及健康对照组中含量图。

图2是蛋白免疫印迹和ELISA检测尿液中SLURP1在前列腺癌组、前列腺增生及健康对照组中的表达。

图3是尿液中SLURP1对前列腺癌诊断、鉴别效能评价。

实施方式

实施例1 尿液标本的收集与处理

选取前列腺癌和前列腺增生患者作为前列腺癌组和前列腺增生组，选取同期健康体检者作为正常对照组。收集各组研究对象入院后的新鲜晨尿样本，不能正常排尿者收集其早晨导尿管中尿液，置于干燥、洁净的容器内。

对尿液样品进行蛋白提取及酶解脱盐，对提取的蛋白浓度进行测定。通过先进的液相二级质谱技术（LC-MS/MS)，构建不同组别的尿液蛋白质图谱。

实施例2 差异多肽数据分析

所有实验均进行三次，所有数值以平均值±标准偏差表示。Fold change 1.2倍，得到差异蛋白的分析结果，P<0.05被认为有统计学意义，筛选差异蛋白，对目标蛋白进行全局聚类分析。

与健康人相比，尿液中SLURP1和 IGLV3-9在前列腺癌患者尿液中呈高表达，可用于疾病的诊断；与前列腺增生相比，SLURP1和 IGLV3-9在前列腺癌患者尿液中也呈高表达，可用于疾病的鉴别。其在正常对照组、前列腺增生和前列腺癌患者组中含量如图1所示，表达具有显著性差异。

实施例3 尿液中SLURP1的验证

使用蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)对健康人群及前列腺癌患者尿液中SLURP1进行检测，结果如图2所示。与健康人相比，尿液中SLURP1在前列腺癌患者尿液中呈高表达；与前列腺增生相比，SLURP1在前列腺癌患者尿液中也呈高表达。（p<0.01）。通过ROC曲线分析显示SLURP1对前列腺癌具有较高的诊断、鉴别灵敏度和特异性。

虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与改进，因此本发明的保护范围当视权利要求所界定者为准。

Claims (9)

1.尿液蛋白标志物在制备用于前列腺癌诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究等制剂的应用，其特征在于，所述生物标记物包括以下蛋白中的一种或两种：尿液分泌型Ly-6/uPAR相关蛋白（SLURP1）及免疫球蛋白λ变量3-91（IGLV3-9）。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标记物包括其中的一种、两种；优选的，所述生物标记物至少包括SLURP1，进一步优选的，所述生物标志物包括SLURP1和IGLV3-9。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述尿液SLURP1和 IGLV3-9氨基酸序列如SEQ ID NO:1~2所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂为用于检测SLURP1和 IGLV3-9其中任一项或两项的表达水平。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，其中，

所述制剂用于前列腺癌诊断、鉴别诊断、病情程度判断、治疗效果评价、监测、预后评估及机理研究。和/或，所述制剂包括抗原抗体检测免疫试剂；优选的，包含尿液抗原抗体检测免疫试剂。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂制备的试剂盒包括抗原抗体反应的免疫方法及其试剂盒，能够特异性结合SLURP1和 IGLV3-9适配体抗体或抗体片段中的一种或多种。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括选自以下的成分：固相载体，稀释液，对照品，标准品，质控品，检测抗体，第二抗体、第二抗体稀释液，发光试剂，洗涤液、显色液、终止液中的任意一种或几种的组合。

8.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述标准品包括SLURP1和 IGLV3-9标准品、人源化标签抗体标准品；所述质控品包括：SLURP1和 IGLV3-9质控品、人源化标签抗体质控品；所述固相载体包括：微粒、微球、玻片、试纸条、塑料珠、液相芯片、微孔板或亲和膜等以及同等功能的其他载体。

9.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺、纤维素中的任意一种及具有类似功能的载体。