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CN119923408A - 整合素α10抗体 - Google Patents

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CN119923408A
CN119923408A CN202380037215.8A CN202380037215A CN119923408A CN 119923408 A CN119923408 A CN 119923408A CN 202380037215 A CN202380037215 A CN 202380037215A CN 119923408 A CN119923408 A CN 119923408A
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CN
China
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antibody
binding fragment
antigen
seq
cell
Prior art date
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Pending
Application number
CN202380037215.8A
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English (en)
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E·龙格伦阿克伦
K·赫米拉尔斯卡马苏米
黄晓丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tarkinta Ag
Original Assignee
Tarkinta Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

本发明涉及一种新型整合素α10抗体以及其在医药中的用途。公开了源自已知小鼠mAb365(以登录号DSM ACC2583保藏的杂交瘤)的25种人源化抗体(ab)。选择特异性结合整合素α10β1的人源化抗体。从所述25种人源化变体中选择5种作为先导候选物(命名为TAR‑Ab8、TAR‑Ab9、TAR‑Ab13、TAR‑Ab14和TAR‑Ab23)，因为与命名为TAR‑Ab0的嵌合抗体相比，显示这5种完整抗体具有改善的热稳定性。仅对与mAb365相比具有更高结合亲和力的TAR‑Ab23进行进一步的功能表征。

Description

整合素α10抗体
技术领域
本发明涉及一种新型整合素α10抗体。
背景技术
整合素构成了细胞黏附受体的主要家族，并且对于广泛范围的生理过程(包括组织结构的形成和维持、细胞迁移、增殖和分化)至关重要。整合素在肿瘤生长和转移中也起重要作用。整合素由一个α亚基和一个β亚基组成，并且由18个不同的α亚基和8个不同的β亚基组装，在哺乳动物中形成24种功能不同的整合素异二聚体。整合素具有大的细胞外区域，所述细胞外区域由配体结合球状头部(由α亚基和β亚基两者构成)和两条腿组成，所述两条腿连接至单跨膜螺旋结构域和短的胞质结构域(Hohenester 2014)。一些α亚基(包括整合素α10)在球状头部中插入了I结构域(胶原蛋白结合区域)。
整合素α10β1
整合素α10(基因名称ITGA10)属于胶原蛋白结合整合素亚家族，所述胶原蛋白结合整合素亚家族由α1、α2、α10和α11组成(Gullberg和kerlund 2002)。序列分析显示，α10与α11具有最高的同一性(43％)，并且与α1具有33％的同一性，并且与α2具有31％的同一性。整合素α10β1主要在关节软骨、脊柱、气管和支撑支气管的软骨中的软骨细胞上表达(Camper等人2001)，以及在特化纤维组织(如骨内膜(骨髓与骨之间的细胞衬层)和骨外膜(骨外面的细胞衬层)、骨骼肌和腱的筋膜)中和郎飞(Ranvier)骨化槽中可能代表已知存在于这些组织中的间充质干细胞的一些细胞上表达(Camper等人2001；Gullberg和kerlund 2002；Varas L等人2007；kerlund和Aszòdi 2014)。在分离的间充质干细胞上也发现了整合素α10β1(Varas L等人2007；Uvebrant等人2019)。整合素α10β1与胶原蛋白之间的相互作用介导细胞与周围细胞外基质之间的特异性信号传导，这类似于其他整合素-细胞外基质蛋白相互作用(Frith等人2012，Campbell等人2011，Heino2000，Bondreau和Jones 1999，Hering 1999)。小鼠的敲除研究已证明，在骨骼发育期间，整合素α10β1对生长板形成和长骨的生长是重要的(Bengtsson T等人2005)。最近，对展现出在ITGA10中的截断突变的近交狗品系的分析已证明全面的犬软骨发育不全(等人2013)。
用于癌症疗法的整合素α10β1抗体
已经显示肿瘤细胞上的整合素受体与细胞外基质分子之间的相互作用在肿瘤细胞功能(如细胞迁移、侵袭、增殖和存活)中起关键作用(Kechagia,J.Z等人,2019；Moreno-Layseca,P等人,2019；Malric,L等人,2017)。尽管关于整合素α10β1在癌症中的作用的信息仍然有限，但是最近的研究显示它对肿瘤生长和转移是重要的(Thoren等人2019；Masoumi等人,2021；Ellert-Miklaszewska等人,2020)。此外，由于在某些癌症(如TNBC和胶质母细胞瘤)中的高细胞表面表达，以及在大多数正常组织中的非常低的表达，因此整合素α10β1代表基于抗体的定向癌症疗法的有希望的靶标。一致地，已经显示功能阻断整合素α10β1抗体在CNS的肿瘤(WO 2016/133449)、乳腺癌(特别是三阴性乳腺癌)、前列腺癌、胰腺癌和肺癌(WO 2020/212416)的临床前癌症模型中减少癌细胞的迁移、生长和增殖。虽然已经用靶向人整合素α10β1的小鼠抗体进行了癌症靶标的验证，但是这些抗体由于免疫原性太强产生了人抗小鼠抗体而不能用于临床使用。然而，可以通过小鼠单克隆抗体的人源化来降低免疫原性。另外，人恒定区允许Fc介导的效应子功能和更长的血清半衰期。然而，与原始小鼠抗体相比，人源化抗体的结合亲和力通常降低(Hideaki Sanada等人,2018；ScientificReport；Riechmann L,1988；Nature；Jones PT等人1986；Nature；Foote J等人,1992,J.Mol.Biol)。
本研究的目的是产生功能阻断小鼠抗体mAb365的人源化形式，其具有未来用作治疗癌症的治疗剂的潜力。
发明内容
本发明的诸位发明人已经开发了一种新型人源化整合素α10抗体，与小鼠mAb365相比，所述新型人源化整合素α10抗体具有出乎意料且有利的特征。所述抗体是与整合素α10β1的整合素α10亚基的细胞外I结构域特异性结合的人源化单克隆抗体，其具有抑制癌细胞的黏附、增殖和迁移以及减少肿瘤生长和转移的能力。
因此，在一方面，本发明涉及一种对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成的CDR-L1；
b)含有选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成的CDR-L2；和
c)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成的CDR-L3；
和/或
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)含有选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成的CDR-H1；
b)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成的CDR-H2；和
c)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成的CDR-H3。
在另一方面，本发明涉及一种编码如本文所定义的抗体或其抗原结合片段或者其组分多肽链的多核苷酸。
在又另一方面，本发明涉及一种包含如本文所定义的多核苷酸的载体。
在又另一方面，本发明涉及一种包含如本文所定义的多核苷酸或如本文所定义的载体的重组宿主细胞。
在又另一方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物在药物组合物中包含如本文所定义的抗体或其抗原结合片段、如本文所定义的多核苷酸、如本文所定义的载体和/或如本文所定义的重组宿主细胞，其中所述组合物进一步包含药学上可接受的缓冲液、稀释剂、载剂或赋形剂。
在又另一方面，本发明涉及一种用于产生如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许表达所编码的抗体或其抗原结合片段的条件下，培养包含如本文所定义的多核苷酸或如本文所定义的载体的如本文所定义的宿主细胞。
在又另一方面，本发明涉及一种如本文所定义的抗体或其抗原结合片段、如本文所定义的多核苷酸、如本文所定义的载体、如本文所定义的重组宿主细胞和/或如本文所定义的组合物，所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在医药中使用。
在又另一方面，本发明涉及一种如本文所定义的抗体或其抗原结合片段、如本文所定义的多核苷酸、如本文所定义的载体、如本文所定义的重组宿主细胞和/或如本文所定义的组合物，所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在预防、治疗、缓解、检测和/或诊断对用整合素α10β1的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍中使用，和/或其中所述疾病或障碍与表达整合素α10β1的细胞相关。
在又另一方面，本发明涉及一种如本文所定义的抗体或其抗原结合片段、如本文所定义的多核苷酸、如本文所定义的载体、如本文所定义的重组宿主细胞和/或如本文所定义的组合物，所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在抑制细胞迁移、细胞增殖、细胞生长、细胞存活和/或细胞黏附中使用，其中所靶向的细胞可以是表达整合素α10β1的癌细胞和/或癌症相关细胞。
在又另一方面，本发明涉及一种用于检测受试者中表达整合素α10β1的细胞的体外方法，所述方法包括：
(a)提供来自待测试的受试者的细胞样品，如活检组织或血液样品；
(b)任选地，提取和/或纯化所述样品中存在的细胞；
(c)使如本文所定义的抗体或其抗原结合片段与所述样品中存在的细胞接触；
(d)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与所述细胞结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与所述细胞的结合指示受试者的所述组织中存在与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍。
在又另一方面，本发明涉及一种用于鉴定患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者的体外方法，所述患者将受益于用如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的治疗，所述方法包括：
a)提供样品，如来自待测试的患者的活检组织或血液样品；
b)任选地，提取和/或纯化所述样品中存在的细胞；
c)使如本文所定义的抗体或其抗原结合片段与所述样品接触；
d)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与整合素α10结构域或其片段结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与整合素α10结构域或其片段的结合指示患者将受益于用如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的治疗。
在又另一方面，本发明涉及一种用于治疗患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者的方法，所述方法包括：
a)选择被鉴定为患有如本文所定义的与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者；
b)向所述患者施用有效治疗所述疾病或障碍的治疗剂。
在又另一方面，本发明涉及一种用于检测表达整合素α10β1的细胞的方法，所述方法包括：
a)使如本文所定义的抗体或其抗原结合片段与待分析整合素α10β1的表达的细胞接触；
b)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与所述细胞结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与所述细胞的结合指示受试者的组织中存在与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍。
在又另一方面，本发明涉及一种用于对哺乳动物中整合素α10β1的表达进行体内成像的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供哺乳动物，
b)提供如本文所定义的抗体或其抗原结合片段，
c)将如本文所定义的抗体或其抗原结合片段施用至所述哺乳动物，以允许所述抗体或其片段与所述哺乳动物中细胞的整合素α10β1的细胞外结构域结合，
d)任选地将第二标记抗体或其片段添加至所述样品中，其中所述第二抗体或其片段与c)中的所述抗体或其片段结合，
e)检测c)中的所述细胞的如本文所定义的抗体或其抗原结合片段，或任选地检测d)中与所述抗体或其片段结合的所述第二标记抗体或其片段，以及
f)产生所检测的抗体或其片段的图像，从而对哺乳动物的细胞上整合素α10β1的表达进行体内成像。
附图说明
图1：人源化整合素α10抗体变体抑制C2C12α10细胞的增殖。将C2C12α10细胞接种在用I型胶原蛋白包被的96孔板中，并且用五种人源化整合素α10抗体变体和人同种型对照抗体Th301(各5μg/ml)处理。相对于未处理的细胞(NT)的增殖(其被设置为100％)显示通过BrdU掺入分析的细胞增殖。
图2：人源化整合素α10抗体变体抑制C2C12α10细胞的黏附。将细胞与五种人源化整合素α10抗体变体和人同种型对照Th301(各5μg/ml)一起预孵育。允许细胞黏附至用I型胶原蛋白包被的板上。条形图显示了作为三次独立细胞黏附实验的平均值±SE的数据。相对于未处理的细胞(NT)的黏附(其被设置为100％)呈现细胞黏附。
图3：人源化整合素α10抗体变体抑制C2C12α10细胞的迁移。将由C2C12α10细胞构成的球状体包埋在胶原蛋白I凝胶中，并且用五种人源化整合素α10抗体变体和人同种型对照Th301(各10μg/ml)处理。在24小时后分析来自球状体的细胞的迁移。相对迁移被定量为迁移面积差。数据表示为平均值±SE。相对于未处理的细胞(NT)的迁移(其被设置为100％)呈现细胞迁移。
图4：与mAb365相比，TAR-Ab23的细胞结合亲和力更高。此图示出了在不同浓度下的人源化整合素α10抗体TAR-Ab23和小鼠整合素α10抗体mAb365与C2C12α10细胞(A)、三阴性乳腺癌细胞BT549(B)和患者来源的胶质母细胞瘤U3046MG细胞(C)的结合。在低抗体浓度(0.1nM)下的两种抗体的细胞结合能力的比较在图D中呈现。将细胞与在指定浓度(nM)下的抗体一起孵育，随后与二抗一起孵育。通过流式细胞术分析免疫标记的细胞。
图5：在竞争测定中，与mAb365相比，TAR-Ab23的结合能力更高。此图示出了在流式细胞术竞争测定中的平均荧光强度(MFI)的百分比，所述流式细胞术竞争测定分析人源化整合素α10抗体TAR-Ab23和小鼠整合素α10抗体mAb365对C2C12α10细胞和BT549癌细胞的细胞结合能力。以100nM的终浓度同时添加抗体。将来自单抗体染色的MFI设置为100％。
图6：与mAb365相比，TAR-Ab23对三阴性乳腺癌的黏附、增殖和迁移具有改善的阻断作用。(A)黏附：将BT549细胞用5μg/ml的人整合素α10抗体TAR-Ab23或小鼠整合素α10抗体mAb365(各5μg/ml)处理，然后允许黏附至胶原蛋白IV。相对于未处理的(NT)细胞的黏附(其被设置为100％)显示细胞黏附。数据表示一式三份测量结果的平均值+/-SD。(B)增殖：将BT549癌细胞与5μg/ml的TAR-Ab23、mAb365或对照抗体人Th301和小鼠mIgG2a混合，并且接种在胶原蛋白IV包被的培养皿上。在48h后，通过BrdU掺入来分析细胞增殖。相对于各自的同种型抗体的增殖(其被设置为100％)显示数据。(C)迁移：将由BT549细胞构成的球状体包埋在胶原蛋白I凝胶中，并且用10μg/mL的TARG10、mAb365或对照抗体Th301和mIgG2a处理。在24h后分析细胞的迁移，并且将其定量为迁移面积差。数据表示为三次独立实验的平均值±SE。
图7：TAR-Ab23抑制TNBC细胞的转移。将TNBC细胞MDA-MB-231用Luc/GFP阳性细胞标记，然后静脉内注射(2.0×106个细胞)至NUDE-NMRI小鼠中。然后用5mg/kg的TAR-Ab23或用作为对照的PBS处理小鼠。在肿瘤细胞注射后3天开始处理(每周两次)，持续10周。此图示出了在终止日远处转移至器官(包括肺和肝)的总结。使用生物发光成像分析(总通量(P/S))测量转移。结果来自每组5只小鼠。
图8：通过TAR-Ab23介导的体外ADCC。(A)使用Tar-Ab23在作为靶细胞的A204上用Jurkat-Lucia/NFAT-CD16效应细胞系诱导ADCC。(B)使用Tar-Ab23低岩藻糖在作为靶细胞的A204上用Jurkat-Lucia/NFAT-CD16效应细胞系诱导ADCC。在所有情况下，效应细胞/靶细胞比率都是2:1。数据作为相对光单位(RLU)呈现。
定义
如本文所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外明确说明。因此，例如，提及“一个/一种抗体”包括多个/多种此类抗体。类似地，“一个/一种抗整合素α10抗体”也可以指“多个/多种抗整合素α10抗体”，如例如实施例1至9中所述的抗体变体。
如本文所用，术语“一些实施方案”可以包括一个或多于一个实施方案。
如本文所用的“整合素α10”或“整合素α10亚基”或“整合素α10多肽”是指异二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基。此指示不排除与α10亚基结合从而形成整合素α10β1异二聚体的β1亚基的存在。“alpha”和“α”以及“α10”和“α10”是等效术语。如本文所用的“整合素α10”也可以指编码异二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基及其片段的多核苷酸转录物。
如本文所用的“抗整合素α10抗体”或“整合素α10抗体”或“抗整合素α10亚基抗体”是指能够识别并且至少与异二聚体蛋白整合素α10β1的α10整合素结合的抗体。这些抗体可以是识别异二聚体蛋白整合素α10β1的表位的抗体，其中表位包含α10和β1整合素多肽两者的氨基酸残基。
如本文所用，“本发明的抗体或抗原结合片段”可以称为“本发明的多肽”或“抗体多肽或其抗原结合片段”，因为抗体及其片段是多肽。
如本文所用，术语“抗体或其抗原结合片段”包括基本上完整的抗体以及抗体的片段和衍生物。完整抗体可以被视为包含可变轻链区、可变重链区、恒定轻链区和恒定重链区的抗体。它进一步包括嵌合抗体、人源化抗体、分离的人抗体、单链抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同二聚体和异二聚体，以及它们的抗原结合片段和衍生物。合适的抗原结合片段和衍生物包括但不必限于Fv片段(例如，单链Fv和二硫键键合的Fv)、Fab样片段(例如，Fab片段、Fab'片段和F(ab)2片段)、单一可变结构域(例如，VH和VL结构域)和结构域抗体(dAb，包括单一和双重形式[即，dAb-接头-dAb])。使用抗体片段而不是完整抗体的潜在优点是多方面的。片段的较小尺寸可以导致改善的药理学特性，例如更好地穿透实体组织。此外，抗原结合片段(如Fab、Fv、ScFv和dAb抗体片段)可以在大肠杆菌(E.coli)中表达和由其分泌，从而允许容易地产生大量所述片段。
如本文所用，术语“抗体”或“本发明的抗原结合片段”也旨在涵盖抗体模拟物(例如，具有高度稳定性但允许在某些位置引入变化性的非抗体支架结构)。生物化学领域的技术人员将熟悉许多此类分子，如Gebauer和Skerra,2009,Curr Opin Chem Biol 13(3):245-255(将其披露内容通过引用并入本文)中所讨论的。示例性抗体模拟物包括：亲和体(也称为三连蛋白(Trinectin)；Nygren,2008,FEBS J,275,2668-2676)；CTLD(也称为四连蛋白(Tetranectin)；Innovations Pharmac.Technol.(2006),27-30)；阿德萘汀(adnectin)(也称为单抗体；Meth.Mol.Biol.,352(2007),95-109)；抗运载蛋白(DrugDiscovery Today(2005),10,23-33)；DARPin(锚蛋白；Nat.Biotechnol.(2004),22,575-582)；阿维莫蛋白(avimer)(Nat.Biotechnol.(2005),23,1556-1561)；微体(FEBS J,(2007),274,86-95)；肽适配体(Expert.Opin.Biol.Ther.(2005),5,783-797)；Kunitz结构域(J.Pharmacol.Exp.Ther.(2006)318,803-809)；affilin(Trends.Biotechnol.(2005),23,514-522)；affimer(Avacta Life Sciences，英国韦瑟比)。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指保留与抗原特异性结合的能力的抗体片段。本发明的抗体片段的例子包括选自以下的抗体片段：Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段和Fv片段，如单链可变片段(scFv)和单结构域抗体。
如本文所用的术语“氨基酸”包括标准的二十种遗传编码的氨基酸及其呈“D”形式(与天然的“l”形式相比)的相应立体异构体、ω-氨基酸和其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸等)以及如本文所述的化学衍生化氨基酸。除非另有明确说明，否则当具体地枚举氨基酸如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时，所述术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明的多肽(抗体或其抗原结合片段)的合适组分，只要抗体或抗原结合片段保留所需的功能特性即可。对于所示的氨基酸序列，在适当的情况下，每个编码的氨基酸残基由对应于常规氨基酸的普通名称的单字母名称表示。
如本文所用，“表达载体”或“载体”是指含有如下DNA序列的DNA构建体，所述DNA序列可操作地连接至能够在合适的宿主中实现DNA表达的合适的控制序列。此类控制序列可以例如包括用于实现转录的启动子、用于控制这种转录的任选的操纵子序列、编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列以及控制转录和翻译终止的序列。载体可以例如是质粒、噬菌体或简单地是潜在的基因组插入物。转化到合适的宿主中后，载体可以例如独立于宿主基因组进行复制和发挥作用，或者在一些情况下可以整合到基因组本身中。设计表达载体，例如，如Li等人Construction strategies for developing expression vectors forrecombinant monoclonal antibody production in CHO cells,Mol Biol Rep.2018年12月；45(6):2907-2912中所述。
如本文所用的“受试者”表示哺乳动物，如啮齿类动物、猫科动物、犬科动物、马科动物和灵长类动物。优选地，根据本发明的受试者是人。
如本文所用的“样品”涵盖任何受试者和从任何受试者获得的多种样品类型。可用于所公开的方法的样品的例子包括但不限于受试者、液体组织样品(如血液)或固体组织样品(如活检材料或组织培养物)或源自其的细胞及其后代。例如，生物样品包括从收集自受试者的组织样品获得的细胞。因此，样品涵盖临床样品、培养中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物和组织样品(例如来自乳腺组织、肺组织、前列腺组织、胰腺组织、骨组织、软骨组织、脂肪组织、肌肉组织和结缔组织的组织样品)。
如本文所用的“癌症”是指由异常细胞生长引起的任何恶性和/或浸润性赘生物或肿瘤。如本文所用，“癌症”是指以形成它们的细胞类型命名的肿瘤。癌症或肿瘤由肿瘤细胞或癌细胞构成。癌症或肿瘤还包含癌症或肿瘤微环境，所述癌症或肿瘤微环境还可以包含MSC、成纤维细胞、内皮细胞、周细胞、脂肪细胞、免疫细胞、肿瘤相关巨噬细胞TAM。癌症或肿瘤的一部分可能是基质细胞，例如结缔组织细胞，如成纤维细胞。实体瘤的例子包括但不限于肉瘤和癌。术语“癌症”包括但不限于起源于体内特定部位的原发性癌症、已经从其起始部位扩散到身体其他部位的转移性癌症、从最初的原发性癌症缓解后的复发和第二原发性癌症(即在具有既往癌症病史的人中的与既往癌症不同类型的新的原发性癌症)。
如本文所用的“检测(detection)”、“检测(detect)”、“检测(detecting)”包括涉及或不涉及对照的定性和/或定量检测(测量水平)，并且进一步是指给定靶标(特别是整合素α10亚基的靶标)的存在、不存在或数量的鉴定。
如本文所用，“抑制”意指本发明的抗体的存在全部或部分地抑制配体与受体的结合和/或受体在配体结合后所引发的信号的失能。这包括例如对细胞行为和过程有影响的下游信号传导。“抑制”和“阻断”在本文中用作等效术语。这种抑制应理解为将存在抑制因子(在本发明的情况下，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段)的情况与不存在抑制因子的情况进行比较。本领域技术人员将理解，抑制的程度可以通过本领域熟知的方法来确定，根据待测量的信号传导事件或途径或活性而定。
如本文所用，“信号传导的抑制”被定义为所述信号传导事件的减少，或例如受体或生物途径或分子活性的活性、确认或产生的减少。应当注意，对于例如表述为“抑制(例如)整合素α10β1的信号传导”的短语可与短语“抑制(例如)整合素α10β1信号传导”互换使用。
如本文所用的“ADCC活性”或“抗体依赖性细胞毒性活性”是指通过经由抗体的Fc区与存在于效应细胞(如杀伤细胞、自然杀伤细胞、活化的巨噬细胞等)的表面的Fc受体的结合激活效应细胞来破坏靶细胞(例如，肿瘤细胞)的活性。本发明的抗体的活性包括ADCC活性。ADCC活性测量和抗肿瘤实验可以根据使用本领域已知的任何测定进行。
如本文所用，“药学上可接受的”是指不降低本发明的抗体或抗原结合片段的整合素α10β1结合活性的有效性的无毒材料。药学上可接受的缓冲液、载剂、稀释剂或赋形剂是本领域熟知的。
“治疗”包括患者的治疗性和预防性(prophylactic或preventive)治疗。术语“预防性(preventive)”或“预防性(prophylactic)”用于涵盖如本文所述的抗体或其抗原结合片段或它们的配制品的使用，所述使用预防或减少肿瘤性障碍或障碍的可能性，其还包括预防或减少患者或受试者中肿瘤性细胞的扩散、散播或转移。术语“预防性”还涵盖使用如本文所述的抗体或其抗原结合片段或它们的配制品来预防肿瘤性疾病或障碍在先前已经针对这些疾病或障碍中的任一种进行治疗的患者中的复发。“治疗”和“缓解”在本文中可互换使用。
“诊断”包括体内(即在患者体内)或离体(即在从患者体内取出的组织或细胞样品内)检测与肿瘤性疾病或障碍相关的细胞。
“与表达整合素α10β1的细胞相关的障碍”包括这样的疾病或障碍，其中直接或间接导致障碍的病理细胞在细胞表面上表达整合素α10β1。应当理解，表达整合素α10β1的细胞可以是免疫细胞、结缔组织的细胞(如成纤维细胞)或肿瘤性细胞(癌细胞)(例如肿瘤细胞本身)。另外，此类细胞包括病理干细胞(即，癌症干细胞或CSC)和祖细胞，其直接或间接导致个体中肿瘤性疾病或障碍的发展。在Visvader和Lindeman,2008,Nat Rev Cancer 8:755-768中披露了CSC的例子，将其披露内容通过引用并入本文。
可替代地或另外地，表达整合素α10β1的细胞可能与肿瘤性疾病或障碍间接相关，例如它们可能介导细胞存活所需的细胞过程。
如本文所用，“缓冲液”是指以稳定pH为目的的含有酸碱混合物的水溶液。缓冲液的例子是Trizma、Bicine、Tricine、MOPS、MOPSO、MOBS、Tris、Hepes、HEPBS、MES、磷酸盐、碳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、硼酸盐、ACES、ADA、酒石酸盐、AMP、AMPD、AMPSO、BES、CABS、甲次砷酸盐、CHES、DIPSO、EPPS、乙醇胺、甘氨酸、HEPPSO、咪唑、咪唑乳酸、PIPES、SSC、SSPE、POPSO、TAPS、TABS、TAPSO和TES。
如本文所用，“稀释剂”是指以稀释药物制剂中的抗体或抗原结合片段为目的的水溶液或非水溶液。稀释剂可以是盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇或油(如红花油、玉米油、花生油、棉籽油或芝麻油)中的一种或多种。
如本文所用，“佐剂”是指其与所施用的抗原的混合增加或以其他方式改变对所述抗原的免疫应答的任何物质。合适的佐剂是本领域技术人员熟知的。
如本文所用，“载剂”是指能够与抗原缔合的支架结构，例如多肽或多糖。载剂可以独立于佐剂存在。合适的载剂是本领域技术人员熟知的。
如本文所用，“治疗有效量”或“有效量”或“治疗有效的”是指针对给定病症和施用方案提供治疗效果的量。这是经计算与所需的添加剂和稀释剂(即，载剂或施用媒介物)联合产生期望治疗效果的活性材料的预定量。另外，它旨在意指足以减少并且最优选地预防宿主的活性、功能和反应的临床上显著的缺陷的量。可替代地，治疗有效量足以引起宿主的临床上显著的病症的改善。如本领域技术人员所理解的，化合物的量可以根据其比活性而变化。合适的剂量量可以含有经计算用于与所需稀释剂联合产生期望的治疗效果的活性组合物的预定量。在用于制造本发明的组合物的方法和用途中，提供了治疗有效量的活性组分。如本领域所熟知的，治疗有效量可以由普通的熟练医务人员或兽医工作者基于患者特征(如年龄、体重、性别、病症、并发症、其他疾病等)来确定。药学有效剂量的施用可以通过以单独的剂量单位或几个更小的剂量单位的形式单次施用来进行，并且还可以通过以特定间隔多次施用细分剂量来进行。可替代地，剂量可以在延长的时间段内作为连续输注提供。
具体实施方式
整合素α10抗体
在实施方案中，本发明涉及一种对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成的CDR-L1；
b)含有选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成的CDR-L2；和
c)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成的CDR-L3；
和/或
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)含有选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成的CDR-H1；
b)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成的CDR-H2；和
c)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成的CDR-H3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的CDR-L1；
b)由选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成的CDR-L2；和
c)由SEQ ID NO:5的氨基酸组成的CDR-L3；
和/或
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)由选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成的CDR-H1；
b)由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成的CDR-H2；和
c)由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的CDR-H3。
本发明的抗体或抗原结合片段对整合素α10β1中的α10亚基具有特异性。“特异性”意指抗体或抗原结合片段能够在体内(即，在人体内存在整合素α10β1的生理条件下)与整合素α10β1结合。优选地，抗体或抗原结合片段在体内不结合或仅微小结合任何其他蛋白质。可替代地，这意指抗体或抗原结合片段能够离体或体外结合整合素α10β1。这种结合特异性可以通过本领域熟知的方法(如使用表达整合素α10β1的转染细胞的ELISA、免疫组织化学、免疫沉淀、蛋白质印迹和流式细胞术)来确定。有利的是，抗体或抗原结合片段能够选择性地与整合素α10β1结合，即它与整合素α10β1的结合比与任何其他蛋白质的结合强至少10倍。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是人源化的。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是人抗体。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是去免疫化的。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是人源化的且去免疫化的。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与人整合素α10β1结合。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与非人(如食蟹猴)整合素α10β1结合。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与在细胞表面上表达的整合素α10β1结合。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与整合素α10β1的亚基α10的细胞外结构域I上的表位结合。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与整合素α10β1的亚基α10的细胞外结构域I结合。
在一些实施方案中，如上文所讨论的，本发明的抗体或抗原结合片段包含抗体模拟物或由其组成，所述抗体模拟物选自包含以下的组或由以下组成的组：亲合体、四连蛋白(CTLD)、阿德萘汀(单抗体)、抗运载蛋白、DARPin(锚蛋白)、阿维莫蛋白、iMab、微体、肽适配体、Kunitz结构域和affilin。
本领域技术人员将进一步理解，本发明还涵盖抗体及其抗原结合片段的修饰形式，无论是现在存在的还是将来存在的，例如，通过聚乙二醇或另一种合适的聚合物的共价附接进行修饰(参见下文)。
整合素α10多肽
整合素是由α和β多肽组成的异二聚体。可以通过整合素α10特异性抗体和整合素α10结合肽和蛋白质来检测整合素α10β1异二聚体。
在一些实施方案中，整合素α10多肽是整合素α10β1异二聚体的一部分。
在一些实施方案中，整合素α10多肽在细胞表面上表达。
在1998年，整合素α10β1最初被鉴定为软骨细胞上的II型胶原蛋白结合受体(Camper等人,1998)。体外研究已经证明其与其他胶原蛋白亚型和层粘连蛋白结合(kerlund书籍章节和Thoren等人)。在发育期间和在成人组织中的免疫组织化学分析已经证明了受限地定位至含有软骨的组织和一些纤维组织(Camper等人1998，Camper等人,2001)。缺乏所述标记物的敲除小鼠生长板紊乱、基质中胶原蛋白减少且长骨较短，这进一步支持其细胞结构重要性(Bengtsson等人,2005)。氨基酸序列、变体、异形体和序列注释可以在Uniprot登录号O75578(ITA10_人)中找到。
整合素α10β1受体在与细胞外配体结合后，传递细胞内信号，所述细胞内信号促进细胞黏附、迁移、存活、增殖、肿瘤生长和转移。因此，受体的抑制阻碍黏附、迁移、存活、增殖、肿瘤生长和转移。这对于许多增殖性疾病(如癌症)和炎性疾病的治疗可能是重要的。
在一些实施方案中，整合素α10是整合素α10多肽的天然存在的变体、整合素α10多肽的异形体或整合素α10多肽的剪接变体。
还可以通过分析样品中例如mRNA转录物的存在，在核苷酸水平上检测整合素α10，所述转录物在翻译后产生如上文所定义的整合素α10抗原。
CDR
本发明的抗体由其特征性互补决定区(CDR)序列定义。有几种方法用于定义抗体的CDR序列。本发明的抗体的CDR已经使用根据Kabat的定义来定义。
本领域技术人员将理解，可以根据Kabat来定义一组6个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)。
另外，本领域技术人员将理解，可以通过其他方法来定义本发明的抗体的CDR，例如通过根据Chothia(Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948)、Martin(EnhancedChotia)、Gelfand或Honneger定义CDR。存在其他方法，如AbM定义(由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的Kabat定义和Chothia定义的组合)或contact定义(基于晶体结构的分析)。参见例如，Kabat等人(Sequences of Proteins of Immunological Interest,1987和1991,NIH,Bethesda,Md.)、Lefranc等人(IMGT unique numbering forimmunoglobulin and T cell receptor constant domains and Ig superfamily C-likedomains,Dev Comp Immunol.2005；29(3):185-203)和Dondelinger等人(Understandingthe Significance and Implications of Antibody Numbering and Antigen-BindingSurface/Residue Definition,Front.Immunol.,2018年10月16日)。
当与如本文所呈现的Kabat CDR一起提供时，本领域技术人员可以使用已知信息来列出其他CDR命名惯例或方法(像Chothia)。因此，涵盖所有CDR命名惯例或方法。
在某些情况下，根据一种编号系统(如Kabat)定义CDR可能是有益的。通常，这些CDR序列是短的(短于例如组合编号系统的方法)，因此提供了对于结合至关重要的核心序列。在其他情况下，使用例如IMGT和Kabat CDR序列的组合可能是有益的。
然而，本领域技术人员将理解，可以耐受CDR序列内的低水平突变(典型地，仅一个或两个氨基酸)，而不损失抗体或抗原结合片段对整合素α10的特异性。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成的CDR-L1；
b)含有选自SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成的CDR-L2，和
c)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成的CDR-L3；
和
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)含有选自SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由其组成的CDR-H1，
b)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成的CDR-H2；和
c)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成的CDR-H3；
或者与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10具有至少70％序列同一性，例如至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含如上文所述的CDR(包含选自SEQ ID NO:1至10的氨基酸序列或由其组成)，其中CDR的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，例如条件是不多于2个氨基酸(如1个氨基酸)已经如此改变。
轻链可变区
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下或由以下组成：
a)SEQ ID NO:13的氨基酸序列，
或者与SEQ ID NO:13具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
b)选自SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15具有至少85％序列同一性，例如与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15中的任一个具有至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13的氨基酸序列或与SEQID NO:13具有至少85％序列同一性(例如，至少90％、95％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。
可以通过例如Expasy设施网站(http://www.ch.embnet.org/software/LALIGN_form.html)上的LALIGN程序，使用全局比对选项、评分矩阵BLOSUM62、开放空位罚分-14、扩展空位罚分-4作为参数来确定同一性百分比(或序列同一性)。可替代地，可以使用合适的计算机程序(例如，威斯康星大学遗传计算组(University of Wisconsin GeneticComputing Group)的GAP程序)来确定两个多肽(如抗体的部分)之间的序列同一性百分比，并且应当理解，同一性百分比是相对于其序列已最佳比对的多肽来计算的。
可替代地，可以使用Clustal W程序进行比对。使用的参数可以如下：
-快速配对比对参数：K-元组(字)大小；1，窗口大小；5，空位罚分；3，顶部对角线数量；5。评分方法：x百分比。
-多重比对参数：空位开放罚分；10，空位扩展罚分；0.05。
-评分矩阵：BLOSUM。
可替代地，BESTFIT程序可以用于确定局部序列比对。
本领域技术人员将考虑对上文所述轻链可变区的进一步改变，例如以进一步优化抗体或抗原结合片段。通常，如在人源化和去免疫化程序期间所做的，本领域技术人员将考虑改变框架区中的氨基酸(即，表位结合CDR区之外的氨基酸)，从而通常不改变CDR区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含如上文所述的轻链可变区，其中所述轻链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
重链可变区
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含以下或由以下组成：
a)SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或者与SEQ ID NO:19具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
b)选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20的氨基酸序列；或者与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20具有至少85％序列同一性，例如与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20中的任一个具有至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或与SEQ ID NO:19具有至少85％序列同一性(例如，至少90％、95％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。
本领域技术人员将考虑对上文所述重链可变区的进一步改变，例如以进一步优化抗体或抗原结合片段。通常，如在人源化和去免疫化程序期间所做的，本领域技术人员将考虑改变框架区中的氨基酸(即，表位结合CDR区之外的氨基酸)，从而不改变CDR区。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含如上文所述的重链可变区，其中所述重链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
可变轻链和可变重链的组合
本领域技术人员将理解，任何上文所述的轻链可变区的变体可以与任何上文所述的重链可变区的变体组合。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19或由其组成，
或者与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:19具有至少70％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含：
a)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由其组成；
b)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由其组成；
c)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；
d)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或由其组成；
e)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由其组成；
f)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由其组成；
g)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由其组成；
h)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；
i)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或由其组成；
j)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由其组成；
k)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由其组成；
l)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由其组成；
m)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；
n)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或由其组成；
o)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由其组成；
p)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由其组成；
q)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由其组成；
r)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；
s)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或由其组成；
t)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由其组成；
u)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由其组成；
v)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由其组成；
w)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；
x)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或由其组成；或
y)轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由其组成；
或者与SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:20中的任一个具有至少70％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。
轻链可变区和重链可变区的这些组合是例如如实施例1和2中所述的人源化抗体变体的一部分。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含如上文所述的重链可变区，其中轻链可变区和/或重链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
恒定区和Fc部分
本领域技术人员将理解，本领域已知的任何轻链恒定区可以与任何上文所述的轻链可变区的变体组合，并且本领域已知的任何重链恒定区可以与任何上文所述的重链可变区的变体组合，以形成全抗体。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区或其部分。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区，所述轻链恒定区是κ或λ轻链的恒定区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区或其部分。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区选自α、δ、γ、ε和μ。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区是选自IgA、IgD、IgG、IgE和IgM的人免疫球蛋白同种型的重链恒定区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区是IgG人免疫球蛋白同种型的重链恒定区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是IgG抗体。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，所述重链恒定区是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的人免疫球蛋白亚类的重链恒定区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区和/或重链恒定区或由轻链恒定区和/或重链恒定区组成，其中上文提及的轻链恒定区和/或上文提及的重链恒定区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段包含IgG重链(如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链)的CH1、CH2和/或CH3区。因此，抗体或抗原结合片段可以包含来自IgG1重链的部分或全部恒定区。例如，抗体或抗原结合片段可以是包含分别与任何上文定义的重链可变区和轻链可变区组合的CH1和CL恒定区的Fab片段。
同样，上文定义的本发明的抗体或抗原结合片段可以进一步包含轻链恒定区或其部分。例如，抗体或抗原结合片段可以包含来自κ或λ轻链的CL区。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含以下或由以下组成：
-上文提及的轻链可变区中的任一个；和/或
-上文提及的重链可变区中的任一个；和/或
-上文提及的轻链恒定区中的任一个；和/或
-上文提及的重链恒定区中的任一个。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含Fc区。Fc区也可以称为Fc结构域。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含天然存在的Fc区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含非天然存在的Fc区。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含具有经修饰的(例如，突变的)IgG恒定区的Fc区。
Fc区可以是天然存在的(例如，内源产生的抗体的一部分)或可以是人工的(例如，包含相对于天然存在的Fc区的一个或多个点突变)。
如本领域充分记录的，抗体的Fc区介导其血清半衰期和效应子功能，如补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
将治疗性单克隆抗体或Fc融合蛋白的Fc区工程化允许产生更适合所需的其药理学活性的分子(Strohl,2009,Curr Opin Biotechnol 20(6):685-91，将其披露内容通过引用并入本文)。通过应用某些培养条件(例如，低岩藻糖条件)，也可以获得改善的Fc结合。
生物活性的抑制
在一些实施方案中，本发明的整合素α10抗体是能够抑制整合素α10β1的生物和功能活性的抗体。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制整合素α10β1的信号传导。本领域技术人员将理解，在抗体或抗原结合片段与整合素α10上的抗体表位结合后发生抑制。整合素α10β1参与由外向内和由内向外信号传导两者，并且这两种信号传导都可以通过使用根据本公开文本的抗体来抑制。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够在与整合素α10结合后抑制信号传导。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移或其任何组合。本领域技术人员将理解，在抗体或抗原结合片段与整合素α10上的表位结合后发生抑制。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞存活。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞黏附。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞增殖。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞生长。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞迁移。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的转移。本领域技术人员将理解，在抗体或抗原结合片段与整合素α10上的表位结合后发生抑制。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够抑制在肿瘤本身和/或肿瘤微环境中的包含表达整合素α10的细胞的肿瘤的肿瘤生长。
本领域技术人员将理解，抗体或其抗原结合片段与整合素α10β1的结合可以以不同的方式(例如在直接分子水平上和/或在构象水平上)影响整合素α10β1。例如，抗体或其抗原结合片段与整合素α10β1的结合可以阻断配体结合，并且因此改变整合素α10β1信号传导；这种结合还可以导致抗体或其抗原结合片段的内化。
本领域技术人员将理解，并非所有与整合素α10β1的任一个表位结合的整合素α10结合抗体都可以抑制细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、转移、肿瘤生长、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合。本发明的一个成就是提供了这样的抗体。
本领域技术人员将理解，生物活性(如细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、转移、肿瘤生长、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合)的抑制可以是不同程度的。抑制可以是完全的或基本上完全的。抑制也可以是部分的，如减少的，如非完全的。鉴于评估与用于测量生物活性抑制的方法相关的完整性的不确定性，“基本上完全的”应理解为“完全的”。
例如，相对于在不存在本发明的抗体或抗原结合片段的情况下的生物活性，生物活性(如细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、肿瘤生长、转移、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合)可以被抑制至少10％、20％、30％、50％、60％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多。
在一些实施方案中，相对于在不存在本发明的抗体或抗原结合片段的情况下的生物活性，生物活性(如细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、肿瘤生长、转移、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合)的抑制在10％至100％之间。更优选地，生物活性的抑制在25％至100％之间。甚至更优选地，生物活性的抑制在50％至100％之间。
本发明的抗体或抗原结合片段对生物活性(如细胞存活、细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、肿瘤生长、转移、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合)的抑制程度可以使用本领域熟知的方法(例如，通过实施例7和8中所用的方法)来确定。
在优选的实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够基本上完全抑制转移。
抗体可以进一步在一定程度上抑制转移，这意味着不是基本上完全地抑制，这意味着部分地抑制。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够部分地抑制转移。
本领域技术人员将理解，除了上文所述的指定特性之外，整合素α10抗体可以展现出一种或多种另外的功能。这些功能可以通过抗体的恒定区或Fc区来传达。这些功能的例子是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，从而导致杀伤靶细胞，如表达整合素α10β1的肿瘤细胞。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够诱导对表达整合素α10β1的细胞的ADCC。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是低岩藻糖变体，并且它能够诱导对表达整合素α10β1的细胞的ADCC。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够诱导对表达整合素α10β1的细胞的ADCP。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段能够诱导对表达整合素α10β1的细胞的CDC。
如在下文的描述中详细解释的，可以对抗体进行修饰以优化某些特性。
抗体的修饰
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段进一步包含用于增加药剂的体内半衰期的部分。
在一些实施方案中，用于增加对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段的体内半衰期的部分选自聚乙二醇(PEG)、人血清白蛋白、糖基化基团、脂肪酸和右旋糖酐。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段是PEG化的。
在一些实施方案中，对整合素α10片段具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段直接或间接地共价结合至功能部分，如细胞毒性或可检测部分。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含细胞毒性部分。
在一些实施方案中，细胞毒性部分包含放射性同位素或由其组成。
在一些实施方案中，放射性同位素选自β发射体、俄歇发射体、转换电子发射体、α发射体和低光子能量发射体。
在一些实施方案中，放射性同位素具有在药剂附近产生高剂量吸收的局部吸收能量的发射模式。
在一些实施方案中，放射性同位素选自长程β发射体，如90Y、32P、186Re/186Re；166Ho、76As/77As、153Sm；中程β发射体，如131I、177Lu、67Cu、161Tb；低能量β发射体，如45Ca、35S或14C；转换或俄歇发射体，如51Cr、67Ga、99Tcm、111In、123I、125I、201Tl；以及α发射体，如212Bi、213Bi、223Ac和221At。
在一些实施方案中，对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含细胞毒性部分，所述细胞毒性部分包含细胞毒性药物或由其组成。
在一些实施方案中，细胞毒性药物选自细胞生长抑制药物；抗雄激素药物；可的松及其衍生物；膦酸盐；睾酮-5-α-还原酶抑制剂；硼添加物；细胞因子；毒胡萝卜素及其代谢物；毒素(如皂草毒蛋白或卡奇霉素)；化学治疗剂(如抗代谢物)；或可用于治疗肿瘤性障碍的任何其他细胞毒性药物。
在一些实施方案中，肿瘤性疾病或障碍是本文“临床病症”部分中详细定义的肿瘤性疾病或障碍中的任一种。
在一些实施方案中，细胞毒性部分选自毒素、化学治疗剂和放射性药剂或其组合。
在一些实施方案中，毒素选自微管毒素、DNA毒素和转录毒素。
在一些实施方案中，微管毒素选自基于澳瑞他汀(Auristatin)的毒素、基于类美登素(Maytansinoid)的毒素、基于微管溶素(Tubulysin)的毒素和艾日布林(Eribulin)。
在一些实施方案中，细胞毒性部分是选自以下的DNA毒素：DNA小沟结合剂、DNA小沟结合烷基化剂、DNA烷基化剂和DNA切割剂。例如，在一些实施方案中，细胞毒性部分是选自以下的DNA毒素：吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、倍癌霉素(Duocarmycin)、倍癌霉素类似物、吲哚啉苯并二氮杂卓、卡奇霉素、伊立替康和依喜替康衍生物。
在一些实施方案中，转录毒素是RNA聚合酶II抑制剂。
在一些实施方案中，转录毒素选自多柔比星、多柔比星衍生物和鹅膏蕈碱。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含多柔比星衍生物，所述多柔比星衍生物是3'-去氨基-3”-4'-脱水-[2”(S)-甲氧基-3”(R)-羟基-4”-吗啉基]多柔比星。
在一些实施方案中，细胞毒性部分是化学治疗剂。例如，在一些实施方案中，化学治疗剂可以是烷基化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂或细胞毒性抗生素。例如，在一些实施方案中，化学治疗剂可以选自蒽环类、紫杉烷类和铂剂。例如，在一些实施方案中，化学治疗剂可以选自顺铂、紫杉醇、白蛋白结合的紫杉醇、多西他赛、环磷酰胺、艾日布林、表柔比星、多柔比星、卡铂、吉西他滨、博来霉素、氟尿嘧啶、环磷酰胺、长春瑞滨、卡培他滨、伊沙匹隆和伊沙匹隆或其组合。
在一些实施方案中，转录毒素选自志贺毒素和志贺样毒素、I型核糖体失活蛋白、II型核糖体失活蛋白和皂草毒蛋白或其组合。
在一些实施方案中，I型核糖体失活蛋白是天花粉蛋白和/或丝瓜籽核糖体失活蛋白。
在一些实施方案中，II型核糖体失活蛋白是蓖麻毒素、凝集素和/或相思豆毒蛋白。
在一些实施方案中，细胞毒性药物适用于活化疗法，如光子活化疗法、中子活化疗法、中子诱导的俄歇电子疗法、同步加速器辐照疗法或低能量X射线光子活化疗法。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含可检测部分。
在一些实施方案中，可检测部分选自荧光团、酶和放射性示踪剂或放射性同位素。
在一些实施方案中，可检测部分包含放射性同位素或由其组成。
在一些实施方案中，放射性同位素选自99mTc、111In、67Ga、68Ga、72As、89Zr、123I和201Tl。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含一对可检测的放射性同位素和细胞毒性放射性同位素，如86Y/90Y或124I/211At。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含放射性同位素，所述放射性同位素能够以多模式方式作为可检测部分和作为细胞毒性部分同时起作用。
在一些实施方案中，可检测部分包含顺磁性同位素或由其组成。
在一些实施方案中，顺磁性同位素选自157Gd、55Mn、162Dy、52Cr和56Fe。
在一些实施方案中，可检测部分是通过成像技术(如SPECT、PET、MRI、光学或超声成像)可检测的。
在一些实施方案中，细胞毒性部分和/或可检测部分经由连接部分间接地连接至抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，连接部分是螯合剂。
在一些实施方案中，螯合剂选自1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)的衍生物、去铁胺(DFO)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)的衍生物、S-2-(4-异硫氰酸基苄基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)的衍生物和1,4,8,11-四氮杂环十二烷-1,4,8,11-四乙酸(TETA)的衍生物。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段不包含细胞毒性部分或可检测部分。
抗体的产生
本发明的另一方面涉及一种编码本发明第一方面的抗体或抗原结合片段或者其组分多肽链的多核苷酸。
“多核苷酸”包括DNA(例如，基因组DNA或互补DNA)和mRNA分子，其可以是单链或双链。
在一些实施方案中，多核苷酸是分离的多核苷酸。
在一些实施方案中，多核苷酸是cDNA分子。
本领域技术人员将理解，可以对多核苷酸进行密码子优化以在特定宿主细胞中表达(例如，在人细胞中表达)抗体或抗原结合片段(例如，参见Angov,2011,Biotechnol.J.6(6):650-659，将其披露内容通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，编码本发明的抗体或抗原结合片段的多核苷酸编码抗体轻链或其可变区。
在一些实施方案中，编码本发明的抗体或抗原结合片段的多核苷酸编码抗体重链或其可变区。
本发明的另一方面涉及一种载体，所述载体包含根据本发明另一方面的多核苷酸。
在一些实施方案中，载体是表达载体。
术语“表达载体”在本文中被定义为DNA分子(例如，线性的或环状的)，所述DNA分子包含编码本发明的多肽(抗体或其抗原结合片段)的多核苷酸，并且可操作地连接至提供其表达的另外的核苷酸。术语“质粒”、“表达载体”和“载体”可以互换使用，因为质粒是目前最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括发挥等效功能的此类其他形式的表达载体。
本发明的另一方面涉及一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含根据本发明的另一方面的多核苷酸或根据本发明的另一方面的载体。
在一些实施方案中，重组宿主细胞是细菌细胞。
在一些实施方案中，重组宿主细胞是酵母细胞。
在一些实施方案中，重组宿主细胞是哺乳动物细胞。
在一些实施方案中，重组宿主细胞是人细胞。
本发明的另一方面涉及一种用于产生本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许表达所编码的抗体或其抗原结合片段的条件下培养本发明的另一方面的宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的另一方面的多核苷酸或本发明的第三方面的载体。
整合素α10的检测
本发明的另一方面涉及一种用于检测受试者中表达整合素α10β1的细胞的体外方法，所述方法包括：
(a)提供来自待测试的受试者的细胞样品，如活检组织或血液样品；
(b)任选地，提取和/或纯化样品中存在的细胞；
(c)使本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段与样品中存在的细胞接触；
(d)确定抗体或其抗原结合片段是否与细胞结合，
其中抗体或其抗原结合片段与细胞的结合指示受试者的组织中存在与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍。
在一些实施方案中，抗体共价结合至可检测部分，如选自以下的可检测部分：荧光团、酶、放射性示踪剂或放射性同位素。还可以通过检测除整合素α10多肽以外的肽、蛋白质或多肽来检测整合素α10抗原，其中所述其他肽、蛋白质或多肽能够与整合素α10抗原特异性结合。在一些实施方案中，所述肽、蛋白质或多肽连接至酶、荧光团或放射性示踪剂。放射性示踪剂可以例如选自正电子发射体或γ发射体。抗体与可检测部分的缀合促进并改善所述抗体的检测，这进而可以促进样品中表达整合素α10的细胞的检测，并且因此促进癌症的诊断。
在一些实施方案中，本公开文本的抗体可以用于检测从哺乳动物获得的样品的细胞上、组织中或血液中的整合素α10，如在体外检测，甚至通过使用本文所述的和/或本领域技术人员已知的基于抗体的体内检测技术在体内和/或原位检测。
本领域技术人员能够根据样品的情况和物理状态选择用于检测整合素α10抗体的标准实验室设备。
在一些实施方案中，本领域技术人员将使用流式细胞术(如荧光激活细胞分选(FACS))进行检测步骤。
本领域熟知的典型免疫学方法包括但不限于蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫荧光测定(IF)、荧光原位杂交(FISH)。
可以使用在检测和成像(如临床成像)领域熟知的方法(如常规荧光显微镜、共聚焦显微镜、双光子显微镜、受激发射损耗(STED)等)来实现检测整合素α10。
在一些实施方案中，可检测部分选自荧光团、酶或放射性示踪剂。
用于在体内检测细胞表面抗原的典型方法是本领域熟知的，包括但不限于荧光成像、正电子发射断层扫描、x射线计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)和功能磁共振成像(fMRI)、超声和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。特别地，细胞表面抗原可以使用采用与抗体或其他特异性结合蛋白结合的放射性示踪剂进行免疫标记来在体内成像。
在一些实施方案中，用于体内成像的抗体是抗体片段(如Fab片段)和单链抗体，因为它们的尺寸较小并且不存在效应子功能。
药物组合物及其施用
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物在药物组合物中包含有效量的：
本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体和/或
本发明的另一方面的宿主细胞，
其中组合物进一步包含药学上可接受的缓冲液、稀释剂、载剂或赋形剂。
在一些实施方案中，本公开文本涉及组合物(如药物组合物)，所述组合物包含：
与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，其中所述组合物用于在诊断和/或治疗如本文所定义的癌症形式中使用。
在一些实施方案中，本公开文本涉及组合物(如药物组合物)，
所述组合物用于在诊断和/或治疗选自以下的癌症形式中使用：乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤或所述癌症形式中任一种的转移瘤。可以使用本公开文本的抗体和组合物治疗和/或诊断的癌症形式的详细定义见于本文其他地方，例如在“临床病症”部分中。
在一些实施方案中，用于诊断和/或治疗如本文所定义的癌症形式的组合物包含药学有效量的(如药理学有效浓度的)与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体。
如本文所提及的药理学有效浓度典型地是在接受所述药物组合物的个体中诱导期望的反应的整合素α10抗体的浓度。
在一些实施方案中，用于诊断和/或治疗如本文所定义的癌症形式的组合物包含药理学有效浓度的与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，其中所述抗体或其片段缀合至另外的部分。
例如，所述另外的部分可以是可检测部分。与整合素α10多肽或其片段特异性结合并且缀合至可检测部分的抗体可用于检测细胞上的整合素α10表达，并且因此确定所述细胞可能是恶性细胞和/或肿瘤相关细胞。
例如，所述另外的部分可以是细胞毒性部分。与整合素α10多肽或其片段特异性结合并且缀合至细胞毒性部分的抗体(如包含与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体的抗体药物缀合物(ADC))可用于将某种细胞毒性部分和/或药物特异性引导至表达整合素α10并且是恶性细胞和/或肿瘤相关细胞的细胞。
可以使用公认的缀合方法产生ADC。例如，靶抗体可以通过链间和/或链内二硫键的温和还原缀合至DNA嵌入剂和拓扑异构酶抑制剂类型的有效载荷。
例如，所述另外的部分可以包含生物反应调节剂。生物反应调节剂是通过增强或抑制免疫应答来调节免疫应答的物质。生物反应调节剂可以是内源性的(如通常在体内自然产生的部分)或外源性的。
在一些实施方案中，所述另外的部分可以包含生物反应调节剂，如细胞因子、淋巴因子、干扰素或其组合。
本公开文本的用于所述用途的组合物可以是适于肠胃外施用的药物组合物。此类组合物优选地包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有润湿剂或乳化剂、抗氧化剂、pH缓冲剂、抑菌化合物和使配制品与个体的体液(优选血液)等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包含助悬剂或增稠剂。可以将药物组合物呈现在单位剂量或多剂量容器(例如，密封的安瓿和小瓶)中，并且可以在冷冻干燥条件下储存，仅需要在紧临使用前添加无菌液体载剂。
在一些实施方案中，本公开文本的用于所述用途的组合物进一步包含至少一种药学上可接受的缓冲液、稀释剂、载剂或赋形剂。
优选地，本发明的组合物包含用于与细胞、组织或生物体一起使用的一种或多种合适的药物赋形剂，所述药物赋形剂可以是非无菌的或无菌的，如适于向个体施用的药物赋形剂。此类赋形剂可以包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇以及这些赋形剂以各种量的组合。配制品应适合施用模式。
优选地，本发明的药物组合物以可注射的形式制备，作为液体溶液或悬浮液；此外，适于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式也在本发明的范围内。制剂也可以被乳化或包封在脂质体中。
整合素α10多肽抗体或与编码整合素α10多肽的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸可以单独施用或与其他化合物组合施用，同时或以任何顺序依次施用。
施用可以例如是经由注射或输注肠胃外施用。肠胃外注射可以例如是心室内、鞘内、肿瘤内、静脉内、肌内、皮内或皮下注射。优选地，所述施用是通过注射或输注肠胃外施用。
本领域技术人员将理解，药物组合物中还可以包含另外的化合物，所述另外的化合物包括螯合剂，如EDTA、柠檬酸盐、EGTA或谷胱甘肽。
可以以本领域已知的方式制备药物组合物，所述药物组合物是足够储存稳定的并且适合于施用至人和动物。例如，药物组合物可以是冻干的，例如通过冷冻干燥、喷雾干燥、喷雾冷却，或通过使用来自超临界颗粒形成的颗粒形成。
赋形剂可以是碳水化合物、聚合物、脂质和矿物质中的一种或多种。碳水化合物的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇和环糊精，将其添加至组合物中，例如以用于促进冻干。聚合物的例子是淀粉、纤维素醚、纤维素羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、海藻酸盐、卡拉胶、透明质酸及其衍生物、聚丙烯酸、聚磺酸酯、聚乙二醇/聚氧化乙烯、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯共聚物、不同水解度的聚乙烯醇/聚乙酸乙烯酯、和聚乙烯吡咯烷酮，它们全部具有不同分子量，将它们添加至组合物中，例如以用于黏度控制、以用于实现生物黏附或以用于保护脂质免受化学和蛋白水解降解。脂质的例子是脂肪酸、磷脂、甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯、神经酰胺、鞘脂和糖脂(它们全部具有不同的酰基链长度和饱和度)、蛋卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化蛋卵磷脂和大豆卵磷脂，将其出于与聚合物的那些类似的原因添加至组合物中。矿物质的例子是滑石、氧化镁、氧化锌和氧化钛，将它们添加至组合物中以获得益处，如减少液体积累或有利的颜料特性。
可以将本发明的抗体或抗原结合片段配制成本领域已知的适合于其递送的任何类型的药物组合物。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物可以是脂质体的形式，其中除了其他药学上可接受的载剂之外，抗体或抗原结合片段还与两亲性药剂(如脂质)组合，所述两亲性药剂作为微团、不溶性单层和液晶以聚集形式存在。用于脂质体配制品的合适的脂质包括而不限于甘油单酯、甘油二酯、硫苷脂、溶血卵磷脂、磷脂、皂苷、胆汁酸等。合适的脂质还包括在极性头基中被聚(乙二醇)修饰以延长血流循环时间的上述脂质。此类脂质体配制品的制备可以在例如US 4,235,871中找到，将其披露内容通过引用并入本文。
本发明的药物组合物还可以呈可生物降解的微球体的形式。脂族聚酯(如聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、PLA和PGA的共聚物(PLGA)或聚(己内酯)(PCL)和聚酸酐)已经被广泛用作微球体生产中的可生物降解的聚合物。此类微球体的制备可以在US 5,851,451和EP 0 213 303中找到，将其披露内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物以聚合物凝胶的形式提供，其中聚合物用于增稠含有药剂的溶液，所述聚合物如淀粉、纤维素醚、纤维素羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟乙基纤维素、海藻酸盐、卡拉胶、透明质酸及其衍生物、聚丙烯酸、聚乙烯基咪唑、聚磺酸酯、聚乙二醇/聚氧化乙烯、聚氧化乙烯/聚氧化丙烯共聚物、不同水解度的聚乙烯醇/聚乙酸乙烯酯和聚乙烯吡咯烷酮。聚合物还可以包括明胶或胶原蛋白。
可替代地，抗体或抗原结合片段可以简单地溶解在盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇或油(如红花油、玉米油、花生油、棉籽油或芝麻油)、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。
应当理解，本发明的药物组合物可以包含离子和定义的pH以增强活性抗体或抗原结合片段的作用。另外，可以对组合物进行常规制药操作(如灭菌)和/或组合物可以含有常规佐剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲液、填充剂等)。
根据本发明的药物组合物可以经由本领域技术人员已知的任何合适的途径施用。因此，可能的施用途径包括肠胃外(静脉内、皮下和肌内)、外用、眼部、鼻、肺、颊、口服、肠胃外、阴道和直肠。从植入物施用也是可能的。
在一个优选的实施方案中，肠胃外(例如，静脉内、脑室内、关节内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌内或皮下)施用药物组合物，或者可以通过输注技术施用它们。所述药物组合物便利地以无菌水溶液的形式使用，所述无菌水溶液可以含有其他物质，例如足够的盐或葡萄糖，以使溶液与血液等渗。如果必要，应当适当缓冲水溶液(优选地，缓冲至pH为3至9)。在无菌条件下制备合适的肠胃外配制品可以通过本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地完成。
适用于肠胃外施用的配制品包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使配制品与预期受体的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包含助悬剂和增稠剂。可以将配制品提供在单位剂量或多剂量容器(例如，密封的安瓿和小瓶)中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在即将使用之前添加无菌液体载剂(例如，注射用水)。临时注射溶液和混悬剂可以由前述种类的无菌散剂、颗粒剂和片剂制备。
因此，本发明的药物组合物特别适合于肠胃外(例如，静脉内)施用。
药物组合物将以药理学有效剂量施用至患者。
在本发明的抗体或抗原结合片段的诊断用途的上下文中，如本文所用，“药学有效量”或“药理学有效浓度”或“有效浓度”或“有效量”或“诊断上有效的”是指提供用于诊断(例如，用于体内成像目的)的可检测信号的量。
本领域技术人员将理解，本发明的药物组合物可以单独施用或与用于治疗肿瘤性障碍或疾病的其他治疗剂组合施用。
在一些实施方案中，所述组合物适于肠胃外递送。
在一些实施方案中，所述组合物适于静脉内递送。
在一些实施方案中，所述组合物适于外用递送。
在一些实施方案中，所述组合物适于皮下递送。
在一些实施方案中，所述组合物适于肌内递送。
本领域技术人员将进一步理解，本发明的抗体或抗原结合片段和药物组合物或配制品在医学和兽医领域都具有效用。因此，本发明的方法可以用于治疗人和非人动物两者(如马、狗和猫)。然而，优选地，患者是人。
抗体的适应证和用途
本发明的另一方面涉及
本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物，
所述抗体或抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞和/或所述组合物用于在医药中使用。
本发明的另一方面涉及
本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物，
所述抗体或抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞和/或所述组合物用于在预防和/或治疗和/或缓解和/或检测和/或诊断对用整合素α10β1的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍中使用，和/或
其中疾病或障碍与表达整合素α10β1的细胞相关。
取决于在治疗上是否需要杀死表达整合素α10β1的靶细胞，例如在肿瘤性细胞的情况下，可以使用能够诱导ADCC和/或ADCP和/或CDC的根据本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段。例如，在表达整合素α10β1的靶细胞是癌细胞的情况下，抗体或抗原结合片段能够诱导ADCC以消除此类细胞可能是有利的。
在一个实施方案中，本公开文本的抗体或抗原结合片段激活ADCC反应。
然而，应当理解，使用缺乏ADCC活性的抗体或抗原结合片段也可以实现治疗益处。
在本发明的一个方面，本发明涉及
本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物，
所述抗体或抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞和/或所述组合物用于在预防和/或治疗和/或缓解和/或检测和/或诊断对用整合素α10β1的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍中使用。
在本发明的一个方面，本发明涉及本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物，
所述抗体或抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞和/或所述组合物用于在预防和/或治疗和/或缓解和/或检测和/或诊断疾病或障碍中使用，其中疾病或障碍与表达整合素α10β1的细胞相关。
在一些实施方案中，所述疾病或障碍与整合素α10β1信号传导相关。
关于本发明的治疗和预防方面，本领域技术人员将理解，抗体或其抗原结合片段与存在于与肿瘤性疾病或障碍相关的细胞的表面上的整合素α10的结合可能导致整合素α10β1的生物活性的调节(即增加或减少)。然而，这种调节作用不是必需的；例如，本发明的抗体或其抗原结合片段可以简单地通过以下来引发治疗和预防效果：结合至与疾病或障碍相关的细胞的表面上的整合素α10，这进而可以触发免疫系统以诱导过程，如细胞死亡(例如，通过ADCC和/或通过药剂内细胞毒性/放射性部分的存在)。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段抑制整合素α10β1的生物活性。
“整合素α10β1的生物活性”包括涉及与肿瘤性疾病或障碍相关的细胞上的整合素α10β1的任何相互作用或信号传导事件。可以被本公开文本的抗体、抗原或其片段抑制并且与和肿瘤性疾病或障碍有关的细胞相关的一些生物活性是细胞黏附、细胞增殖、细胞迁移、细胞存活、肿瘤生长和转移、整合素α10β1信号传导和/或其任何组合。这些在本文的“生物活性的抑制”部分中描述。
本发明的另一方面涉及本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物，
所述抗体或抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述宿主细胞和/或所述组合物用于在抑制细胞存活、细胞迁移、细胞增殖、细胞生长和/或细胞黏附、肿瘤生长和转移中使用，其中所靶向的细胞表达整合素α10β1。
本发明的另一方面涉及一种用于对哺乳动物中整合素α10β1的表达进行体内成像的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供哺乳动物，
b)提供如本文所公开的抗体或其抗原结合片段，
c)将抗体或其抗原结合片段施用至哺乳动物，以允许抗体或其片段与所述哺乳动物中细胞的整合素α10β1的细胞外结构域结合，
d)任选地将第二标记抗体或其片段添加至样品中，其中第二抗体或其片段与c)中的抗体或其片段结合，
e)检测c)中所述细胞上的抗体或其抗原结合片段，或任选地检测d)中与抗体或其片段结合的第二标记抗体或其片段，以及
产生所检测的抗体或其片段的图像，从而对哺乳动物的细胞上整合素α10β1的表达进行体内成像。
基于如本文所公开的抗体或其抗原结合片段的体外诊断测定可以用于检测已经离开肿瘤部位的细胞外囊泡(如外泌体)的表面上整合素α10或其片段的存在；此类测定也可以用于检测不再附着于细胞或囊泡的整合素α10或其片段的存在，例如在切碎细胞(如肿瘤细胞)的情况下。例如，如本文所公开的抗体或其抗原结合片段可以用于检测细胞外囊泡(如外泌体)的表面上整合素α10的存在，以及如在血液和/或血浆中发现的整合素α10的片段。
因此，本发明的另一方面涉及一种用于对从哺乳动物获得的样品中的整合素α10或其片段进行体外检测的方法，所述方法包括以下步骤:
a)提供从哺乳动物获得的样品，
b)提供如本文所公开的抗体或其抗原结合片段，
c)使抗体或其抗原结合片段与样品接触，以允许抗体或其片段与所述样品中的整合素α10的细胞外结构域或其片段结合，
d)任选地将第二标记抗体或其片段添加至样品中，其中第二抗体或其片段与c)中的抗体或其片段结合，
e)检测抗体或其抗原结合片段，或任选地检测d)中与抗体或其片段结合的第二标记抗体或其片段，以及
从而确定在从哺乳动物获得的样品中是否发现整合素α10或其片段。
例如，样品可以是哺乳动物体液，如血液、血浆、脑脊液、尿液。
在一些实施方案中，样品包含细胞、细胞外囊泡和/或其片段。
临床病症
在一些实施方案中，待治疗和/或预防和/或检测和/或诊断和/或分类和/或确定预后和/或预防转移的癌症形式选自乳腺癌、脑癌、中枢神经系统(CNS)的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤。
在一些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌形式，并且所述三阴性乳腺癌选自基底样1乳腺癌、基底样2乳腺癌、低密封蛋白乳腺癌、化生型乳腺癌(MBC)、富干扰素乳腺癌、免疫调节型乳腺癌、间叶性乳腺癌、间叶性干细胞样乳腺癌、管腔雄激素受体乳腺癌和不稳定型乳腺癌。
在一些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌形式，并且它具有浸润性导管癌的形态学特征。
在一些实施方案中，乳腺癌是三阴性乳腺癌形式，并且它具有基底样三阴性乳腺癌的形态学特征。
在一些实施方案中，乳腺癌是基底样乳腺癌形式，并且它具有浸润性导管癌的形态学特征。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌，并且前列腺癌是小细胞(神经内分泌)癌(SCNC)或去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。
在一些实施方案中，癌症是肺癌，并且肺癌是鳞状细胞肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌或大细胞肺癌。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，并且胰腺癌是外分泌肿瘤或内分泌肿瘤。
在一些实施方案中，胰腺癌是选自以下的外分泌肿瘤：导管腺癌、腺泡细胞癌、腺鳞癌、导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)和胰腺上皮内瘤变。
在一些实施方案中，胰腺癌是选自以下的内分泌肿瘤：神经内分泌肿瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、生长抑素瘤、舒血管肠肽瘤和无功能性胰岛细胞瘤。在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，并且其中胰腺癌是神经内分泌肿瘤。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，并且胰腺癌是I级、II级或III级胰腺癌。
在一些实施方案中，肉瘤选自软骨肉瘤、骨肉瘤、未分化多形性肉瘤、黏液纤维肉瘤、去分化脂肪肉瘤、非典型脂肪性肿瘤、黏液炎性成纤维细胞肉瘤、低级别纤维黏液样肉瘤、硬化性上皮样纤维肉瘤、假性肌原性血管内皮瘤和间叶性软骨肉瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症选自：
a)选自以下的神经上皮组织的肿瘤：
i)选自以下的星形细胞肿瘤：
毛细胞型星形细胞瘤、毛细胞黏液型星形细胞瘤、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤、多形性黄色瘤型星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤、大脑胶质瘤病，和
ii)选自以下的少突神经胶质肿瘤：少突神经胶质瘤和间变性少突神经胶质瘤，和
iii)选自以下的少突星形细胞肿瘤：少突星形细胞瘤和间变性少突星形细胞瘤，和
iv)选自以下的室管膜肿瘤：室管膜下室管膜瘤、黏液乳头状型室管膜瘤、室管膜瘤、间变性室管膜瘤，和
v)选自以下的脉络丛肿瘤：脉络丛乳头状瘤、非典型脉络丛乳头状瘤和脉络丛癌，和
vi)选自以下的其他神经上皮肿瘤：星形母细胞瘤、第三脑室脊索瘤样胶质瘤和血管中心型神经胶质瘤，和
vii)选自以下的神经元和混合性神经元胶质肿瘤：小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)、婴儿促纤维增生型星形细胞瘤/神经节细胞胶质瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、神经节细胞瘤、神经节细胞胶质瘤、间变性神经节细胞胶质瘤、中枢神经细胞瘤、脑室外神经细胞瘤、小脑脂肪神经细胞瘤、乳头状胶质神经元肿瘤、第四脑室的玫瑰花结形成性胶质神经元肿瘤和副神经节瘤，和
viii)选自以下的松果体区的肿瘤：松果体细胞瘤、中等分化松果体实质肿瘤、松果体母细胞瘤和松果体区乳头状肿瘤，以及
ix)选自以下的胚胎瘤：髓母细胞瘤、具有广泛结节的髓母细胞瘤、间变性髓母细胞瘤、CNS原始神经外胚层肿瘤、CNS神经母细胞瘤和非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤，和
b)选自以下的脑神经肿瘤和椎旁神经肿瘤：
i)神经鞘瘤，ii)神经纤维瘤，iii)神经束膜瘤，和iv)恶性周围神经鞘瘤(MPNST)，和
c)选自以下的脑脊膜肿瘤：
i)选自以下的脑脊膜上皮细胞肿瘤：脑膜瘤、非典型脑膜瘤、间变性脑膜瘤，
ii)选自以下的间叶性肿瘤：脂肪瘤、血管脂肪瘤、冬眠瘤、脂肪肉瘤、孤立性纤维性肿瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、软骨瘤、软骨肉瘤、骨瘤、骨肉瘤、骨软骨瘤、血管瘤、上皮样血管内皮瘤、血管外皮细胞瘤、间变性血管外皮细胞瘤、和血管肉瘤、卡波西肉瘤、尤因肉瘤-PNET，
iii)选自以下的原发性黑色素细胞病变：
弥漫性黑色素细胞增生症、黑色素细胞瘤、恶性黑色素瘤、脑膜黑色素瘤病，以及
iv)与脑脊膜相关的其他肿瘤，如血管母细胞瘤，和
d)选自以下的造血系统肿瘤：
i)恶性淋巴瘤、浆细胞瘤，和ii)粒细胞肉瘤，以及
e)选自以下的鞍区肿瘤：
i)颅咽管瘤，ii)颗粒细胞肿瘤，iii)垂体细胞瘤，和iv)腺垂体的梭形细胞嗜酸细胞腺瘤。
上述CNS肿瘤的列表基于更详细、完整和更新的CNS肿瘤分类，所述CNS肿瘤分类发现于Louis等人.(2021)The WHO Classification of Tumours of the Nervous System:asummary.Neuro-Oncology,第23卷,第8期,2021年8月,第1231-1251页中。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症是神经胶质瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症是II级、III级或IV级神经胶质瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症是星形细胞瘤，如II级星形细胞瘤、III级星形细胞瘤或IV级星形细胞瘤。
在一些实施方案中，神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
在一些实施方案中，神经胶质瘤是原发性胶质母细胞瘤。
在一些实施方案中，神经胶质瘤是继发性胶质母细胞瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症是髓母细胞瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症是神经母细胞瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症选自星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、脑的血管外皮细胞瘤、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型脑膜瘤、成纤维细胞型脑膜瘤、脑膜皮型(meningiothelial)脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星形细胞瘤、间变性少突星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤。
在一些实施方案中，脑癌和/或CNS的癌症选自星形细胞肿瘤、少突神经胶质肿瘤、室管膜细胞肿瘤、混合性神经胶质瘤、不确定起源的神经上皮肿瘤、脉络丛肿瘤、神经元和混合性神经元胶质肿瘤、松果体实质肿瘤和具有成神经细胞或成神经胶质细胞成分的肿瘤(胚胎瘤)、室管膜瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、少突星形细胞瘤、神经上皮肿瘤和神经元和混合性神经元胶质肿瘤。
在一些实施方案中，癌症是转移瘤，例如它可以是乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤中任一种的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌和炎性乳腺癌中任一种的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌的转移瘤，如选自以下的三阴性乳腺癌的转移瘤：基底样1乳腺癌、基底样2乳腺癌、低密封蛋白乳腺癌、化生型乳腺癌(MBC)、富干扰素乳腺癌、免疫调节型乳腺癌、间叶性乳腺癌、间叶性干细胞样乳腺癌、管腔雄激素受体乳腺癌和不稳定型乳腺癌。
在一些实施方案中，癌症是肺癌的转移瘤。在一些实施方案中，癌症形式是鳞状细胞肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌或大细胞肺癌的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是胰腺癌的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是前列腺癌的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是肉瘤的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是脑癌和/或CNS的癌症的转移瘤。
在一些实施方案中，癌症是选自以下的脑癌和/或CNS的癌症的转移瘤：星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、脑的血管外皮细胞瘤、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型脑膜瘤、成纤维细胞型脑膜瘤、脑膜皮型脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星形细胞瘤、间变性少突星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤。
癌症的治疗
本领域技术人员将认识到，本发明的一些实施方案所公开的对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段可以用于治疗癌症。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段对整合素α10具有结合特异性，并且因此结合表达整合素α10β1的细胞，所述细胞是：恶性细胞和/或肿瘤相关细胞，例如癌症相关成纤维细胞(CAF)、基质细胞、干细胞和/或干细胞样细胞，和/或例如肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、免疫细胞、内皮细胞。
在一些实施方案中，对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段用于治疗癌症，其中在受试者的肿瘤中的癌细胞中检测到整合素α10多肽后开始治疗。
在一些实施方案中，将对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段与放射疗法和/或癌症的手术切除组合施用至有需要的个体，如在放射疗法和/或癌症的手术切除之前，如在放射疗法和/或癌症的手术切除之后。
本发明的另一方面涉及本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段用于诱导受试者中与肿瘤性障碍相关的病理细胞或者其干细胞或祖细胞的细胞死亡，和/或抑制这些细胞的生长和/或增殖，其中所述细胞表达整合素α10β1。
本发明的另一方面涉及
本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
本发明的另一方面的多核苷酸、
本发明的另一方面的载体、
本发明的另一方面的宿主细胞和/或
本发明的另一方面的组合物
在制备药物中的用途，所述药物用于预防、治疗、缓解、检测和/或诊断对用整合素α10信号传导的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍，
和/或其中疾病或障碍与表达整合素α10β1的细胞相关。
类似地，本发明的另一方面涉及一种用于预防和/或治疗和/或缓解和/或检测和/或诊断对用整合素α10β1信号传导的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍的方法，和/或其中疾病或障碍与受试者中表达整合素α10的细胞相关，所述方法包括向受试者施用有效量的以下项的步骤：
-本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段、
-本发明的另一方面的多核苷酸、
-本发明的另一方面的载体、
-本发明的另一方面的宿主细胞和/或
-本发明的另一方面的组合物。
本发明的另一方面涉及组合物用于制造治疗癌症的药物的用途，所述组合物包含：
与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，或
与编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸，
其中所述癌症是表达整合素α10的癌症，如其中所述癌症选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤，或其中所述癌症是转移瘤。
本公开文本的另一方面涉及一种治疗癌症的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤，或者其中所述癌症是转移瘤，所述方法包括向有需要的受试者施用药学有效量的组合物，所述组合物包含：
与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，或
与编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸。
本发明的另一方面涉及一种用于治疗患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者的方法，所述方法包括：
a)选择使用根据本发明的另一方面的方法被鉴定为患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者；和
b)向所述患者施用有效治疗所述疾病或障碍的治疗剂。
本公开文本的另一方面涉及一种抑制至少一个癌细胞的整合素α10β1介导的信号传导的方法，所述方法包括使所述至少一个癌细胞与组合物接触，所述组合物包含有效量的：
a)对整合素α10多肽具有特异性的抗体或抗原结合片段；和/或
b)编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物
其中所述至少一个癌细胞选自乳腺癌细胞、脑癌细胞、CNS的癌症的癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、胰腺癌细胞、皮肤癌细胞、淋巴瘤细胞、肉瘤细胞和转移性肿瘤细胞、或本文在“临床病症”下列出的癌症类型中的任一种的癌细胞。
本领域技术人员理解，细胞信号传导包括分子机制，由此细胞检测并且响应于外部刺激。细胞信号传导还包括转录和翻译控制和机制以及信号转导机制。
本公开文本的一个方面涉及抑制至少一个癌细胞的细胞功能的方法，所述方法包括使所述至少一个癌细胞与有效量的组合物接触，所述组合物包含：
含有整合素α10多肽或其片段的抗原；和/或
编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物
其中所述至少一个癌细胞选自乳腺癌细胞、脑癌细胞、CNS的癌症的癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、胰腺癌细胞、皮肤癌细胞、淋巴瘤细胞、肉瘤细胞和转移性肿瘤细胞、或本文在“临床病症”下列出的癌症类型中的任一种的癌细胞。
在一些实施方案中，本发明涉及一种用于抑制表达整合素α10β1的细胞的生长和/或增殖的方法，所述方法包括施用组合物，所述组合物包含有效量的：
与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，或
与编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸。
在本公开文本的一些实施方案中，抑制至少一个癌细胞选自：
抑制所述至少一个癌细胞的增殖；
抑制所述至少一个癌细胞的生长；
抑制所述至少一个癌细胞的自我更新；
抑制所述至少一个癌细胞的非贴壁依赖性生长；
抑制所述至少一个癌细胞的迁移；
抑制所述至少一个癌细胞的侵袭；
抑制所述至少一个癌细胞的存活；
抑制所述至少一个癌细胞的黏附；和/或
其组合。
在另一个实施方案中，通过i)与整合素α10多肽特异性结合的抗体或ii)与编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸抑制至少一个癌细胞来抑制所述至少一个癌细胞的贴壁依赖性生长。
在一些实施方案中，本公开文本涉及一种抑制至少一个癌细胞的方法，其中癌细胞是转移性肿瘤，并且其中所述抑制是以下中的至少一种：
转移性肿瘤的存活；
转移性肿瘤的生长；
转移性肿瘤的增殖；
转移性肿瘤的迁移；
转移性肿瘤的侵袭；
新的转移性肿瘤的开始；
新的转移性肿瘤的浸润；以及
其组合。
细胞可以表达一种或多种如本文所定义的另外的标记物。在一些实施方案中，细胞是恶性细胞和/或肿瘤相关细胞。在另一个实施方案中，细胞是癌症相关成纤维细胞(CAF)、基质细胞、干细胞和/或干细胞样细胞。所述方法可以在体外或在体内进行。
在一些实施方案中，包含有效量的：
与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体，或
与编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物特异性结合的多核苷酸的组合物能够诱导表达整合素α10的细胞的细胞死亡和/或抑制所述细胞的生长和/或抑制所述细胞的增殖和/或抑制所述细胞的迁移。
在一些实施方案中，在所述受试者的肿瘤中的癌细胞中检测到整合素α10多肽和/或多核苷酸转录物后开始治疗。
在一些实施方案中，本文公开的方法靶向在细胞的表面上表达的包含整合素α10多肽或其片段的抗原。
本公开文本的一个方面涉及一种用于预防来自原发性癌症形式的转移瘤的方法，所述原发性癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或本文在“临床病症”下列出的癌症类型中的任一种，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的：
a)抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段对整合素α10多肽具有特异性；和/或
b)编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物。
本领域技术人员将理解，可以在检测到原发性癌症后施用预防来自原发性癌症的转移瘤的方法。
癌症形式的检测和诊断
本公开文本的一个方面涉及一种包含对整合素α10多肽或其片段具有特异性的抗体或由所述抗体组成的药剂，所述药剂用于在检测与哺乳动物的癌症形式相关的细胞中使用，其中细胞表达整合素α10多肽，并且其中所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤或所述癌症形式中任一种的转移瘤。
本发明的另一方面涉及一种用于鉴定患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者的体外方法，所述患者将受益于用本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段治疗，所述方法包括：
a)提供样品，如来自待测试的患者的活检组织或血液样品；
b)任选地，提取和/或纯化样品中存在的细胞；
c)使如本文所定义的抗体或其抗原结合片段与样品接触；
d)确定抗体或其抗原结合片段是否与整合素α10结构域或其片段结合，
其中抗体或其抗原结合片段与整合素α10结构域或其片段的结合指示患者将受益于用如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的治疗。
实际上，表达整合素α10β1的细胞(如表达整合素α10β1的癌细胞)可能经历脱落和/或降解，例如由于肿瘤组织的坏死或作为它们生命周期的一部分，并且这些可能导致部分细胞和在其表面上表达的蛋白质最终进入血流。因此，表达整合素α10的癌细胞或癌症相关的细胞可能被降解和/或脱落，并且整合素α10或其片段最终进入血液中，并且根据本公开文本的方法通过与本公开文本的抗体结合进行检测。
本发明的另一方面涉及一种用于鉴定患有与表达整合素α10β1的细胞相关的疾病或障碍的患者的体内方法，所述患者将受益于用本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段的治疗，所述方法包括：
(a)使本发明的第一方面的抗体或抗原结合片段与样品中存在的细胞接触；
(b)确定抗体或其抗原结合片段是否与细胞结合，
其中抗体或其抗原结合片段与表达整合素α10β1的细胞的结合指示患者将受益于用本发明的另一方面的抗体或抗原结合片段的治疗。
在一些实施方案中，本公开文本涉及一种根据本公开文本的一个方面的组合物，所述组合物用于在诊断选自以下的癌症形式中使用：乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤或所述癌症形式中任一种的转移瘤。癌症形式可以通过使用根据本公开文本的一个方面的组合物检测和/或诊断，并且在“临床病症”部分中详细列出。
本领域技术人员将理解，例如通过分析如本发明中的整合素α10的表达检测疾病的生物标记物(例如，如本发明中的整合素α10)或诊断疾病的过程可以包括将待分析的组织与健康的、非恶性的或未受影响的组织进行比较。例如，可以将乳腺癌样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的乳腺组织样品进行比较。可以将脑癌样品和/或来自CNS的癌症的样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的脑或CNS组织样品进行比较。可以将肺癌样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的肺组织样品进行比较。可以将前列腺癌样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的前列腺组织样品进行比较。可以将胰腺癌样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的胰腺组织样品进行比较。可以将肉瘤样品与在相同组织样品中的未受影响的区域进行比较或与健康的结缔组织样品进行比较。
在诊断癌症的过程中，本领域技术人员将理解将癌细胞的整合素α10多肽或多核苷酸的水平与参考细胞进行比较的可能的有用性。
在一些实施方案中，诊断出的癌症包含展现相等或更高水平的在相同类型的健康和/或良性组织中观察到的i)整合素α10抗原或ii)多核苷酸转录物的细胞。
在一些实施方案中，与诊断出的癌症类型相比，诊断出的癌症包含展现相等或更高水平的在相同组织类型的较少的癌症类型中观察到的i)整合素α10抗原或ii)多核苷酸转录物的细胞。
在一些实施方案中，诊断出的癌症包含展现相等或更高表达水平的整合素α10抗原的细胞。
本领域技术人员将理解，由于这些细胞系与原代细胞相比的基因型和表型稳定性，参考细胞系可以用于标准化诊断程序。参考细胞系可以从健康组织或从癌症组织建立，其中所述癌症可以是侵袭性较高或较低的癌症类型，这取决于所述癌症类型的生长和转移的趋势。已建立的细胞系需要永生化以能够在细胞培养中繁殖。如本文所用的非恶性细胞系被理解为不显示恶性迹象，并且在表型方面与健康组织细胞类似的已建立的细胞系。
在一些实施方案中，在诊断程序期间使用的参考细胞系源自健康组织，如选自源自健康乳腺组织的参考细胞系、源自健康前列腺组织的参考细胞系、源自健康肺组织的参考细胞系、源自健康胰腺组织的参考细胞系和源自健康结缔组织的参考细胞系。
在一些实施方案中，在乳腺癌的诊断程序期间使用的参考细胞系源自健康组织。
本公开文本的另一方面涉及一种用于检测和/或诊断受试者的癌症形式的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供受试者的怀疑包含癌细胞的组织；
b.分析组织中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在；
c.确定整合素α10抗原的表达水平，以及
d.将在c.中确定的表达水平与对照水平进行比较，其中所述对照水平是在相同类型的健康和/或良性组织中观察到的抗原的平均表达水平；并且
其中抗原的表达水平高于对照水平指示样品中存在癌症形式，其中所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或本文在“临床病症”下列出任何癌症类型、或所述癌症类型中的任一种的转移瘤，
从而诊断受试者的癌症形式。
本公开文本的另一方面涉及用于诊断受试者的癌症形式的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供受试者的怀疑包含癌细胞的组织；
b.分析组织中一个或多个具有癌症形态的细胞的存在；
c.分析样品中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在；
任选地确定整合素α10抗原的表达水平，并且
其中一个或多个具有癌症形态的细胞的存在与整合素α10抗原的表达组合指示样品中癌症形式的存在，其中所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或本文在“临床病症”下列出的任何癌症类型、或所述癌症形式中的任一种的转移瘤，
从而诊断受试者的癌症形式。
在一些实施方案中，在步骤b.中分析包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在包括使怀疑包含癌细胞的组织与本公开文本的组合物接触。例如，在一些实施方案中，可以使怀疑包含癌细胞的组织与包含对整合素α10多肽具有特异性的抗体或由其组成的组合物接触。
除了分析样品中包含整合素α10多肽或其片段的抗原；和/或编码整合素α10多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物的存在，以及确定整合素α10表达水平是否高于对照水平之外，用于诊断受试者的癌症的方法和/或用于检测受试者的癌细胞的方法可以进一步包括在形态学上将样品表征为包含属于癌症的癌细胞的步骤，其中所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或本文在“临床病症”下列出的任何癌症类型、或所述癌症形式中的任一种的转移瘤。
另一方面，本公开文本涉及一种用于检测受试者的癌细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供受试者的怀疑包含癌细胞的组织；
b.分析组织中一个或多个具有癌症形态的细胞的存在，
c.分析组织中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在；
d.任选地确定整合素α10抗原的表达水平，
其中一个或多个具有癌症形态的细胞的存在与整合素α10抗原的表达组合指示受试者中癌症形式的存在，并且其中所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或本文在“临床病症”下列出的任何癌症类型、或所述癌症形式中的任一种的转移瘤。
本公开文本的另一方面涉及一种用于确定受试者的癌症形式的预后的方法，所述癌症形式选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或所述癌症形式中的任一种的转移瘤，所述方法包括：
a.提供受试者的癌症肿瘤组织；
b.分析样品中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在；
c.确定整合素α10抗原的表达水平，
d.将在c.中确定的表达水平与对照水平进行比较，其中对照水平是在与样品相同的组织类型的健康和/或良性组织中观察到的整合素α10抗原的平均表达水平；
e.当抗原的表达水平高于对照水平时，确定癌症的不良预后。
本公开文本的另一方面涉及一种用于确定受试者的癌症的预后的方法，所述方法包括：
a.提供受试者的癌症肿瘤组织；
b.分析组织中一个或多个具有癌症形态的细胞的存在；
c.分析样品中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在；
d.任选地确定整合素α10抗原的表达水平，
e.当一个或多个具有癌症形态的细胞与整合素α10抗原的表达的组合存在于组织中时，确定癌症形式的不良预后，
其中癌症选自乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤、或所述癌症中任一种的转移瘤。
用于确定受试者的癌症的预后的方法可以应用于本文所述的癌症形式中的任一种，参见例如“临床病症”部分。
在一些实施方案中，本公开文本涉及一种用于确定受试者的癌症形式的预后的方法，其中预后是总存活率或无复发存活率。
在一些实施方案中，本文公开的方法靶向在细胞的表面上表达的包含整合素α10多肽或其片段的抗原。
本公开文本的方法可以在体内或在体外进行。
在一些实施方案中，如本文所公开的用于检测受试者的癌细胞的方法在体内进行。在一些实施方案中，如本文所公开的用于诊断受试者的癌症的方法在体外进行，并且组织是从受试者获得的组织样品。
在一些实施方案中，如本文所公开的用于诊断受试者的癌症的方法在体内进行。在一些实施方案中，如本文所公开的用于诊断受试者的癌症的方法在体外进行，并且组织是从受试者获得的组织样品。
在一些实施方案中，如本文所公开的用于确定受试者的癌症的预后的方法在体内进行。在一些实施方案中，如本文所公开的用于确定受试者的癌症的预后的方法在体外进行，并且组织是从受试者获得的组织样品。
在一些实施方案中，分析样品中包含整合素α10多肽或其片段的抗原的存在的步骤包括对组织和/或组织样品进行成像。
在一些实施方案中，确定整合素α10抗原的表达水平的步骤包括对组织和/或组织样品进行成像。在一些实施方案中，确定整合素α10抗原的表达水平的步骤包括对组织进行体内成像，如在开脑手术期间。
例如，可以通过向受试者和/或向组织样品施用能够与包含整合素α10多肽或其片段的抗原结合的标记部分来进行成像。例如，可以通过向受试者和/或向组织样品施用如本文所定义的标记的整合素α10抗体来进行成像。
在一些实施方案中，将整合素α10抗体作为抗体-药物缀合(ADC)的一部分施用。在ADC中，抗体连接至部分，例如改善疾病的药物或毒素。在与整合素α10多肽特异性结合后，ADC被内化到细胞中，并且从而将部分递送至细胞中。
在一些实施方案中，本公开文本的用于诊断和/或治疗癌症形式的组合物中包含的抗体是抗体片段。
在一些实施方案中，根据本公开文本的与整合素α10多肽或其片段特异性结合的抗体可以缀合至部分，如另外的部分。缀合可以改善和促进癌症形式的治疗和诊断两者。
实施例
实施例1：抗体产生/人源化
1.1复合人抗体可变区序列的设计
目的：生成人抗体序列区段以产生人源化抗体变体。
材料和方法：产生小鼠抗体mAb365 V区的结构模型。基于结构分析，选择可能对抗体的结合特性至关重要的人源化变体序列，并且对其进行计算机模拟分析。鉴定了人序列区段以用于CDR区和CDR外区域。组装所选择的序列区段以产生完整的人源化C区序列，所述完整的人源化V区序列缺乏或减少显著的T细胞表位以避免免疫原性。
结果：设计产生了用于哺乳动物细胞中的基因合成和表达的六个重链(VH1至VH6)和五个轻链(VK1至VK5)序列(表1)。由于CDR4区的变化可能影响CDR构象的风险，因此作为此区域的一部分的VH4变体被排除。将五个VH与5个VK组合，产生25种不同的人源化变体。
结论：产生了二十五种人源化变体和一种嵌合变体。
表1.包括嵌合体(TAR-Ab0)在内的25种人源化抗体变体的汇总表。由于改变CDR构象的风险，因此避免VH4产生变体。
VH0 VH1 VH2 VH3 VH4 VH5 VH6
VK0 √
VK1 √ √ √ × √ √
VK2 √ √ √ × √ √
VK3 √ √ √ × √ √
VK4 √ √ √ × √ √
VK5 √ √ √ × √ √
1.2嵌合IgG1和人源化IgG1变体的构建和瞬时表达
目的：产生小规模批次的抗体以用于先导候选物选择。
材料和方法：嵌合Tar-Ab0序列和人源化变体用于在CHO细胞中表达IgG1抗体。在转染之后第6天收获培养物上清液并且测量抗体浓度。
结果和结论：与嵌合抗体(TAR-Ab0)相比，17种不同的变体具有改善的产率(数据未示出)。TAR-Ab23的产率是嵌合抗体的3.9倍。
1.3五种先导候选物的选择
目的：基于结合能力从25种人源化变体选择五种先导候选物。
材料和方法：使用过表达人整合素α10β1载体(C2C12α10)或人整合素α11β1(C2C12α11)的小鼠成肌细胞细胞系C2C12来研究抗体结合和特异性。将C2C12细胞(100000个细胞/样品)与1 μg/ml的整合素α10抗体孵育30min，随后与二抗孵育30min，然后通过流式细胞术分析结合。
结果：结果显示，嵌合形式TAR-Ab0以及人源化变体TAR-Ab3、TAR-Ab8、TAR-Ab9、TAR-Ab13、TAR-Ab14和TAR-Ab23对C2C12α10细胞具有最好的结合亲和力(数据未示出)。没有一种抗体显示与对照C2C12α11细胞的结合(数据示出)。另外，来自序列设计过程的风险分析数据表明TAR-Ab3具有最高风险得分(数据未示出)。因此，选择变体TAR-Ab8、TAR-Ab9、TAR-Ab13、TAR-Ab14和TAR-Ab23用于进一步的功能研究。
结论：选择了与整合素α10β1特异性结合的五种人源化抗体先导候选物：TAR-Ab8、TAR-Ab9、TAR-Ab13、TAR-Ab14和TAR-23。
1.4五种抗体先导候选物的功能特性
目的：研究五种先导候选物对表达整合素α10β1的细胞的增殖、黏附和迁移的功能阻断作用。
材料和方法：在功能阻断研究中使用过表达整合素α10β1(C2C12α10)的小鼠成肌细胞细胞系C2C12。
细胞增殖
将与终浓度为5μg/ml的整合素α10抗体混合的C2C12α10细胞接种到用I型胶原蛋白预包被的96孔板(10 000个细胞/孔)中。在用抗体处理24小时后，添加溴脱氧尿苷(BrdU)，持续2小时，并且根据制造商的说明书使用细胞增殖ELISA BrdU试剂盒(RocheDiagnostics GmbH)测量增殖。
细胞黏附
将培养板(48孔)用作为对照的IV型胶原蛋白(10μg/ml)或牛血清白蛋白(BSA)包被过夜。在实验之前，在37℃下将板与0.25％ BSA一起孵育30min以阻断非特异性结合。在存在或不存在整合素α10抗体(5μg/ml)的情况下，将BT549细胞预孵育20分钟，然后在37℃下允许其附着在包被的培养皿上60min。将非贴壁细胞洗去，并且将贴壁细胞用乙醇固定，并且用0.09％结晶紫染色。然后通过10％乙酸提取吸收的染料，并且通过590nm处的光密度(OD)进行定量。
3D胶原蛋白凝胶迁移
通过将I型胶原蛋白(6mg/ml C2124，Sigma Aldrich)与培养基混合至终浓度为1.2mg/ml来制备胶原蛋白凝胶溶液。将胶原蛋白凝胶溶液(100μl体积)添加至96孔板中，并且在37℃下孵育15min。然后用移液器将C2C12α10细胞的球状体置于胶原蛋白溶液中，并且允许胶原蛋白球状体溶液在37℃下聚合60-90min。在聚合后，将含有10μg/ml整合素α10抗体或对照抗体的100μl培养基添加至孔中，以使胶原蛋白凝胶漂浮在抗体溶液中。使用倒置发光显微镜监测C2C12α10细胞从球状体迁移到胶原蛋白凝胶中，并且在不同时间点拍照以用于定量。
结果：结果显示所有5种抗体先导候选物均显著减少C2C12α10细胞的细胞增殖(图1)和黏附(图2)，而同种型对照抗体未显示对C2C12α10细胞的抑制作用(图1-图2)。在3D迁移测定中，除了TAR-Ab14之外，所有人源化变体以及mAb365都显著减少细胞迁移(图3)。
结论：所有五种人源化抗体变体在增殖、黏附和迁移测定中都显示出强的功能阻断特性。
实施例2：热稳定性分析
目的：基于稳定性对前五种人源化抗体变体进行排序。
材料和方法：使用UncleTM生物稳定性平台和软件进行人源化抗体变体的热稳定性分析。在PBS和Sypro Orange中以0.5mg/ml的终浓度配制每种变体的样品。使样品经受从25℃-95℃的热升温，升温速率为0.3℃/分钟，并且在473nm处激发。在473nm处监测静态光散射(SLS)允许检测蛋白质聚集，并且根据所得SLS曲线计算Tagg(聚集开始)。
结果：所有人源化抗体变体均显示出良好的药物特性，包括高热稳性和低聚集倾向，这将有利于制造和储存，并且表明了长血清半衰期。所有人源化变体均显示出比嵌合抗体(Tar-Ab0)更高的计算解链温度(Tm)。最热稳定的变体是TAR-Ab23、TAR-Ab13、TAR-Ab8(表4)。TAR-Ab23的热稳定性比嵌合变体高17.4℃。
结论：与嵌合抗体变体相比，所有五种所选择的人源化抗体变体的热稳定性都更高。这支持人源化抗体的治疗用途。
表4.五种前导变体和嵌合抗体的热稳定性值的总结。
变体 AvTm(℃)
TAR-Ab0 50.0
TAR-Ab8 65.3
TAR-Ab9 55.3
TAR-Ab13 67.3
TAR-Ab14 60.6
TAR-Ab23 67.4
实施例3：等电点
目的：确定与嵌合抗体相比，人源化抗体变体的等电点(PI)。
材料和方法：抗体的等电点(pI)是抗体没有净电荷的pH，并且其值取决于抗体所含有的带电荷的氨基酸。基于DNA/蛋白质序列分析软件计算抗体变体的等电点。
结果：分析显示TAR-Ab23的pI为8.121，而嵌合抗体Tar-Ab0的pI为7.83。这是一个优点，因为更高的pI与肿瘤中更高的药物暴露成比例地相关，因此提高了诱导积极临床效果的潜力。
结论：TAR-Ab23具有比嵌合抗体更高的等电点，这支持更高的治疗潜力。治疗性抗体通常具有高于生物相中的pH的pI。由于乳酸的形成，肿瘤通常是酸性的。因此，与具有更低PI的抗体相比，具有升高的PI的抗体通常具有改善的肿瘤与血液比率。因此，升高的PI被认为是用于癌症疗法的治疗性抗体的优点。
实施例4：TAR-Ab23对整合素α10β1的结合亲和力
目的：确定与mAb365相比，TAR-Ab23的整合素α10结合特异性和亲和力。
材料和方法：使用过表达整合素α10β1的细胞(C2C12α10)、人患者来源的胶质母细胞瘤细胞(U3046MG)和三阴性乳腺癌细胞(BT549)。将细胞与不同浓度(0.1、1、10、100、1000nM)的人源化(TAR-Ab23)或小鼠(mAb365)抗体在4℃下孵育30min，然后通过流式细胞术分析结合。
结果：TAR-Ab23和mAb365两者对所有三种细胞系(C2C12α10、U3046MG和BT549)都具有良好的结合亲和力(图4A-图4C)。然而，与mAb365相比，TAR-Ab23展示出更高的与细胞的结合，尤其是在较低的浓度(例如，0.1nM)下(图4D)。此外，小鼠抗体mAb365的结合能力在较高浓度(高于100nM)下降低，可能是由于聚集，而人源化抗体TAR-Ab23保持高结合(图4)。
结论：
这些发现显示TAR-Ab23比mAb365具有更高的结合亲和力，并且在高浓度(>100nM)下，TAR-Ab23比mAb365更稳定。
实施例5：TAR-Ab23与TNBC组织的特异性结合
目的：证明TAR-Ab23与原代TNBC组织中的癌细胞上的整合素α10β1的特异性结合。
材料和方法：研究了由乳腺腺癌、导管腺癌、转移病例组成的三阴性乳腺癌人组织的整合素α10抗体的免疫组织化学染色。用人源化TAR-Ab23抗体、小鼠mAb365抗体和同种型对照抗体人IgG1和小鼠IgG2a(所有抗体均为3μg/ml)对切片进行染色。
结果：TAR-Ab23抗体显示出TNBC组织中的癌细胞的特异性且强的染色。相比之下，邻近正常组织中的乳腺导管展现出低或无TAR-Ab23染色。除了预期的TNBC细胞的整合素α10染色之外，mAb365抗体在TNBC中显示出非特异性核染色。同种型对照抗体未显示任何可检测的染色。
结论：由于TAR-Ab23与整合素亚基α10的高且特异性结合，因此其可以用于检测和靶向组织中的整合素α10β1。另一方面，抗体mAb365显示对肿瘤和周围组织中细胞的非特异性核染色。这支持使用TAR-Ab23作为TNBC和其他癌症形式的伴随诊断工具和在治疗TNBC和其他癌症形式中作为治疗药物两者。
实施例6：在整合素α10抗体人源化TAR-Ab23与小鼠mAb365之间的结合竞争测定
目的：在定量竞争测定中，使用流式细胞术研究抗体TAR-Ab23和mAb365对整合素α10的亲和力。
材料和方法：用三阴性乳腺癌细胞系BT549、胶质母细胞瘤细胞系U3054MG和C2C12α10细胞进行抗体TAR-Ab23和mAb365的结合竞争测定。将抗体以0.1nM的浓度同时添加至细胞中。在孵育30min后，添加二抗持续另外的30min。将驴抗人Alexa 488用作人抗体TAR-Ab23的二抗。将驴抗小鼠20Alexa 647用作小鼠抗体mAb365的二抗。通过流式细胞术分析抗体的结合。
结果：竞争测定显示TAR-Ab23与大多数C2C12α10细胞(87.6％)和BT549细胞(87.3％)结合，而mAb365仅结合29.1％的C2C12α10细胞和22.9％的BT549细胞(图5)。另外，TAR-Ab23不完全竞争mAb365的结合，这表明两种抗体之间的结合表位有小的重叠。
结论：TAR-Ab23对整合素α10的结合亲和力是mAb365对整合素α10的结合亲和力的超过3倍，并且与mAb365相比，也更快地与整合素α10抗原结合。
实施例7：抗体TAR-Ab23的体外功能阻断特性。在用TAR-Ab23阻断整合素α10β1后，对黏附、增殖和迁移的抑制
7.1黏附
目的：研究与mAb365相比，TAR-Ab23对TNBC细胞的黏附的作用。
材料和方法：将培养板(48孔)用作为对照的IV型胶原蛋白(10μg/ml)或牛血清白蛋白(BSA)包被过夜。在实验之前，在37℃下将板与0.25％ BSA一起孵育30min以阻断非特异性结合。在存在或不存在整合素α10抗体(5μg/ml)的情况下，将BT549细胞预孵育20分钟，然后允许其在37℃下附着在包被的培养皿上60min。将非贴壁细胞洗去，并且将贴壁细胞用乙醇固定，用0.09％结晶紫染色。然后通过10％乙酸提取吸收的染料，并且通过590nm处的光密度(OD)进行定量。
结果：TAR-Ab23显著抑制了BT549细胞对胶原蛋白IV包被的培养皿的黏附(减少86％)。与mAb365(减少70％)相比，TAR-Ab23的作用更显著(图6A)。
结论：TAR-Ab23在抑制整合素α10依赖性黏附至细胞外基质组分IV型胶原蛋白方面比mAb365更有效。
7.2增殖
目的：研究与mAb365相比，TAR-Ab23对TNBC细胞的增殖的作用。
材料和方法：将BT549细胞接种在用IV型胶原蛋白包被的96孔板中，并且用终浓度为5μg/ml的整合素α10抗体或对照抗体处理。在用抗体处理48小时后，添加溴脱氧尿苷(BrdU)，持续3小时，并且使用细胞增殖ELISA BrdU试剂盒(Roche Diagnostics GmbH)测量增殖(BrdU掺入DNA中)。
结果：与用相应的对照抗体(Th301和mIgG2a；图6B)处理相比，用整合素α10抗体TAR-Ab23和mAb365处理BT549细胞降低了细胞增殖。然而，TAR-Ab23比mAb365更有效地抑制细胞增殖。
结论：TAR-Ab23对TNBC细胞具有抑制作用，并且与mAb365相比更有效。
7.3 3D迁移
目的：研究与mAb365相比，TAR-Ab23对胶原蛋白凝胶中TNBC细胞的3D迁移的影响。
材料和方法：通过将I型胶原蛋白(6mg/ml C2124，Sigma Aldrich)与培养基混合至终浓度为1.2mg/ml来制备胶原蛋白凝胶溶液。将胶原蛋白凝胶溶液(100μl)添加至96孔板中，并且在37℃下孵育15min。然后用移液器将BT549细胞的球状体置于胶原蛋白溶液中，并且允许胶原蛋白球状体溶液在37℃下聚合60-90min。在聚合后，将含有10μg/ml整合素α10抗体或对照抗体的100μl培养基添加至孔中，以使胶原蛋白凝胶漂浮在抗体溶液中。使用倒置发光显微镜监测BT549从球状体迁移到胶原凝胶中，并且在不同时间点拍照以用于定量。
结果：抗体TAR-Ab23和mAb365两者都抑制BT549细胞的迁移，而对照抗体(Th301或mIgG2a)没有作用(图6C)。然而，TAR-Ab23的抑制作用比小鼠mAb365更显著。与对照抗体相比，TAR-Ab23使胶原蛋白凝胶中BT549细胞的迁移减少57％，而mAb365使迁移减少45％(图6C)。
结论：结果表明TAR-Ab23比mAb365更有效地抑制整合素α10介导的细胞迁移。
整合素α10抗体在体外的功能阻断特性证明，TAR-Ab23可以显著阻断贴壁依赖性细胞功能，如黏附、增殖和迁移。
实施例8：抗体TAR-Ab23的体内功能阻断特性
目的：研究TAR-Ab23对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231转移的治疗效果。
材料和方法：将萤光素酶/GFP标记的MDA-MB-231细胞(2×106个细胞)通过尾静脉静脉内注射到四周龄NMRI-nu免疫缺陷小鼠(Janvier，法国)中。在接种之后那天，皮下注射D-萤光素底物，并且用IVIS-CT对小鼠进行活体成像，以检查肿瘤进展。基于生物发光图像(总通量读数(光子/秒))，将小鼠随机分类为三个不同的处理组，并且腹膜内注射抗体(5mg/kg)。每周一次通过IVIS-CT对小鼠进行成像，以监测转移。每周两次测量总体重。
结果：成像分析证明，在静脉内注射MDA-MB-231后，TAR-Ab0处理抑制小鼠中的自发转移，包括肺转移和肝转移(图7)。
结论：结果显示TAR-Ab23对异种移植模型中的TNBC具有直接的抗转移作用。这表明细胞表面分子整合素α10β1对TNBC细胞的转移是重要的，并且可能代表治疗性癌症干预的有希望的靶标。
实施例9：治疗性抗体的活性部分地由抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)介导。
目的：研究TAR-Ab23是否具有激活ADCC反应的能力。
已经通过降低岩藻糖基化产生了具有更强ADCC潜力的TAR-Ab23的优化的变体。TAR-Ab23低岩藻糖与TAR-Ab23也用于在基因报告测定中定量ADCC活性。
材料和方法：在ADCC测定之前两天将Jurkat Lucia NFAT-CD16效应细胞进行传代。在测定前一天，根据板布局，基于效应细胞/靶细胞比率，将A204靶细胞接种在平底96孔板(SPL)中的完全培养基中。在ADCC测定当天，从具有附着的靶细胞的96孔板去除细胞培养基，并且添加90ul新鲜的测试培养基(实验编号1-3：RPMI-1640+10％热灭活的FBS、实验编号4-6：RPMI-1640+2％热灭活的低IgG FBS)。向靶细胞中添加20μl抗体稀释系列/孔，并且孵育1小时。在孵育后，根据效应细胞/靶细胞比率(2:1)添加90μl的Jurkat-Lucia NFAT-CD16效应细胞。将板孵育24小时。将20μl的细胞上清液转移到96孔白色(不透明)板中，并且添加50μl的QUANTI-Luc/孔，并且立即在光度计中进行测量。
结果：通过使用Jurkat Lucia/NFAT-CD16细胞确定TAR-Ab23(A)和TAR-Ab23低岩藻糖(B)的ADCC活性。通过显示在A204横纹肌样细胞系中的ADCC活性，与对照抗体相比，TAR-Ab23产生剂量依赖性信号曲线。通过经由去岩藻糖基化降低岩藻糖含量，ADCC活性显著增强。与浓度低得多的亲本抗体相比，TAR-mAb23低岩藻糖导致剂量依赖性ADCC反应。
结论：我们的数据显示TAR-Ab23诱导ADCC。此外，TAR-Ab23低岩藻糖变体显示具有更大的ADCC活性。
实施例10：抗体的序列
SEQ ID NO:1：RASKSVSTSGFSHMH
可变轻链互补决定区1(CDR-L1)，在5种轻链人源化变体之间恒定。
SEQ ID NO:2：LASNLES
VK1、VK2和VK3的可变轻链互补决定区2(CDR-L2)。
SEQ ID NO:3：LGSNLES
VK4的可变轻链互补决定区2(CDR-L2)。
SEQ ID NO:4：GASNLES
VK5的可变轻链互补决定区2(CDR-L2)。
SEQ ID NO:5：QHSRELPRT
可变轻链互补决定区3(CDR-L3)，在5种轻链人源化变体之间恒定。
SEQ ID NO:6：DYNMD
VH1、VH2和VH3的可变重链互补决定区1(CDR-H1)。
SEQ ID NO:7：DYNMN
VH5的可变重链互补决定区1(CDR-H1)。
SEQ ID NO:8：DYNMH
VH6的可变重链互补决定区1(CDR-H1)。
SEQ ID NO:9：DINPNTGGTIYNQKFKG
可变重链互补决定区2(CDR-H2)，在5种重链人源化变体之间恒定。
SEQ ID NO:10：REDWYYFDF
可变重链互补决定区3(CDR-H3)，在5种重链人源化变体之间恒定。
SEQ ID NO:11(可变轻链-VK1)
DIVLTQSPATLALSPGERATLSCRASKSVSTSGFSHMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPSRFSFSGSGTDFTLN IHPVQEEDAATYYCQHSRELPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:12(可变轻链-VK2)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVSTSGFSHMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPSRFSFSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQHSRELPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:13(可变轻链-VK3)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVSTSGFSHMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQHSRELPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:14(可变轻链-VK4)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVSTSGFSHMHWYQQKPGQPPKLLIYLGSNLESGVPSRFSFSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQHSRELPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:15(可变轻链-VK5)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKSVSTSGFSHMHWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFSFSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQHSRELPRTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:16(可变重链-VH1)
EVQLVQSGPELKKPGASVKVPCKASGYTFTDYNMDWVRQPHGKGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTSVYYCARREDWYYFDFWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:17(可变重链-VH2)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQPPGKGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTSVYYCARREDWYYFDFWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:18(可变重链-VH3)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMDWVRQPPGKGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDWYYFDFWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:19(可变重链-VH5)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMNWVRQPPGKGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDWYYFDFWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:20(可变重链-VH6)
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYNMHWVRQPPGKGLEWIGDINPNTGGTIYNQKFKGRATITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDWYYFDFWGQGTTVTVSS
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Claims (91)

1.一种对整合素α10具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成的CDR-L1；
b)含有选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成的CDR-L2；和
c)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成的CDR-L3；
和/或
重链可变区，所述重链可变区包含：
d)含有选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成的CDR-H1；
e)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成的CDR-H2；和
f)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成的CDR-H3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的CDR-L1；
b)由选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成的CDR-L2；和
c)由SEQ ID NO:5的氨基酸组成的CDR-L3；
和/或
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)由选自SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成的CDR-H1；
b)由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成的CDR-H2；和
c)由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的CDR-H3。
3.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中整合素α10β1是人整合素α10β1。
4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述整合素α10多肽是整合素α10β1异二聚体的一部分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述整合素α10β1在细胞表面上表达。
6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与整合素α10β1的细胞外I结构域结合。
7.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下或由以下组成：
a)SEQ ID NO:13的氨基酸序列，
或者与SEQ ID NO:13具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
b)选自SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ IDNO:15具有至少85％序列同一性，例如与SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15中的任一个具有至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:13具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含以下或由以下组成：
a)SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或者与SEQ ID NO:19具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
b)选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20的氨基酸序列；或者与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20具有至少85％序列同一性，例如与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:20中的任一个具有至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或者与SEQ ID NO:19具有至少85％序列同一性，例如至少90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：
a)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成的CDR-L1；
b)含有选自SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成的CDR-L2，和
c)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成的CDR-L3；
和
重链可变区，所述重链可变区包含：
a)含有选自SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由其组成的CDR-H1，
b)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成的CDR-H2；和
c)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成的CDR-H3；
或者与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10具有至少70％序列同一性，例如至少80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13或由其组成，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19或由其组成。
13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够抑制细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、细胞存活或其任何组合。
14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够抑制转移。
15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区和/或所述重链可变区的框架区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
18.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区或其部分。
19.根据权利要求18所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区是κ或λ轻链的恒定区。
20.根据权利要求18至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区是κ轻链的恒定区。
21.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区或其部分。
22.根据权利要求21所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的人免疫球蛋白亚类的重链恒定区。
23.根据权利要求21至22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链恒定区是人免疫球蛋白亚类IgG1的重链恒定区。
24.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链恒定区和/或所述重链恒定区的任一个氨基酸已经改变为另一个氨基酸，条件是不多于5个氨基酸如4个氨基酸、不多于3个氨基酸如2个氨基酸、或不多于1个氨基酸已经如此改变。
25.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含以下或由以下组成：
-根据权利要求18至20或24中任一项所述的轻链可变区；和/或
-根据权利要求21至24中任一项所述的重链可变区。
26.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含Fc区。
27.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含完整抗体或由完整抗体组成。
28.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含选自以下的抗原结合片段或由其组成：Fv片段(例如，单链Fv和二硫键键合的Fv)、Fab样片段(例如，Fab片段、Fab'片段和F(ab)2片段)和结构域抗体(例如，单VH可变结构域或VL可变结构域)。
29.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够抑制整合素α10β1的信号传导。
30.一种对整合素α10β1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞黏附、细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、细胞存活或其任何组合。
31.根据权利要求29至30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中抑制是基本上完全抑制。
32.根据权利要求29至30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中抑制是部分抑制。
33.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段缀合至另外的部分。
34.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述另外的部分包含可检测部分，如选自以下的可检测部分：荧光团、酶和放射性示踪剂或放射性同位素。
35.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述另外的部分包含细胞毒性部分。
36.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞毒性部分选自毒素、化学治疗剂和放射性药剂或其组合。
37.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞毒性部分是毒素。
38.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述毒素选自微管毒素、DNA毒素和转录毒素。
39.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述微管毒素选自基于澳瑞他汀的毒素、基于类美登素的毒素、基于微管溶素的毒素和艾日布林。
40.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述转录毒素是RNA聚合酶II抑制剂。
41.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述转录毒素选自多柔比星、多柔比星衍生物和鹅膏蕈碱。
42.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述多柔比星衍生物是3'-去氨基-3”-4'-脱水-[2”(S)-甲氧基-3”(R)-羟基-4”-吗啉基]多柔比星。
43.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述转录毒素选自志贺毒素和志贺样毒素、I型核糖体失活蛋白、II型核糖体失活蛋白和皂草毒蛋白或其组合。
44.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述I型核糖体失活蛋白是天花粉蛋白和/或丝瓜籽核糖体失活蛋白。
45.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述II型核糖体失活蛋白是蓖麻毒素、凝集素和/或相思豆毒蛋白。
46.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述转录毒素选自志贺毒素和志贺样毒素、I型核糖体失活蛋白、II型核糖体失活蛋白和皂草毒蛋白或其组合。
47.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞是恶性细胞和/或肿瘤相关细胞。
48.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中所述恶性细胞或肿瘤相关细胞是癌症相关成纤维细胞(CAF)、基质细胞、干细胞和/或干细胞样细胞和/或肿瘤微环境的细胞，如肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、免疫细胞、内皮细胞。
49.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中在受试者的肿瘤中的癌细胞中检测到整合素α10多肽后开始所述治疗。
50.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中向有需要的个体施用所述抗体或抗原结合片段与放射疗法和/或癌症的手术切除的组合。
51.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中在放射疗法和/或癌症的手术切除前，向有需要的个体施用所述抗体或抗原结合片段。
52.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段，其中在放射疗法和/或癌症的手术切除后，向有需要的个体施用所述抗体或抗原结合片段。
53.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或其组分多肽链。
54.根据权利要求53所述的多核苷酸，其中所述分子是cDNA分子。
55.根据权利要求53至54中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸编码抗体轻链或其可变区。
56.根据权利要求53至54中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸编码抗体重链或其可变区。
57.根据权利要求53至54中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求11所述的抗体。
58.一种载体，所述载体包含根据权利要求53-57中任一项所述的多核苷酸。
59.根据权利要求58所述的载体，其中所述载体是表达载体。
60.一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求58至59中任一项所述的载体。
61.根据权利要求60所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌细胞。
62.根据权利要求60所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。
63.根据权利要求60所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
64.根据权利要求60所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是人细胞。
65.一种用于产生根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在允许表达所编码的抗体或其抗原结合片段的条件下培养根据权利要求60至64中任一项所述的宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求58至59中任一项所述的载体。
66.一种药物组合物，所述药物组合物在药物组合物中包含：
根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、
根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸、
根据权利要求58至59中任一项所述的载体和/或
根据权利要求60至64中任一项所述的重组宿主细胞，
其中所述组合物进一步包含药学上可接受的缓冲液、稀释剂、载剂或赋形剂。
67.根据权利要求66所述的组合物，其中所述组合物包含有效量的所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体和/或所述重组宿主细胞。
68.根据权利要求66至67中任一项所述的组合物，所述组合物用于在诊断和/或治疗选自以下的癌症形式中使用：乳腺癌、脑癌、中枢神经系统(CNS)的癌症、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤和肉瘤或所述癌症形式中任一种的转移瘤。
69.根据权利要求66至68中任一项所述的组合物，所述组合物适于肠胃外递送。
70.根据权利要求69所述的组合物，其中所述肠胃外递送是静脉内递送、外用递送、皮下递送和/或肌内递送。
71.根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求58至59中任一项所述的载体、根据权利要求60至64中任一项所述的重组宿主细胞和/或根据权利要求66至70中任一项所述的组合物，所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在医药中使用。
72.根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求58至59中任一项所述的载体、根据权利要求60至64中任一项所述的重组宿主细胞和/或根据权利要求66至70中任一项所述的组合物，
所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在预防、治疗、缓解、检测和/或诊断对用整合素α10的抑制剂治疗敏感的疾病或障碍中使用，和/或
其中所述疾病或障碍与表达整合素α10β1的细胞相关。
73.根据权利要求72所述的用于所述用途的抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、载体和/或组合物，其中所述疾病或障碍是肿瘤性疾病或障碍。
74.根据权利要求72至73中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，
其中所述肿瘤性疾病或障碍是选自以下的实体瘤：前列腺癌、乳腺癌、脑癌、CNS的癌症、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、皮肤癌、淋巴瘤、肉瘤或所述癌症形式中任一种的转移瘤。
75.根据权利要求72至74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述乳腺癌选自三阴性乳腺癌和炎性乳腺癌。
76.根据权利要求75所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述三阴性乳腺癌选自基底样1乳腺癌、基底样2乳腺癌、低密封蛋白乳腺癌、化生型乳腺癌(MBC)、富干扰素乳腺癌、免疫调节型乳腺癌、间叶性乳腺癌、间叶性干细胞样乳腺癌、管腔雄激素受体乳腺癌和不稳定型乳腺癌。
77.根据权利要求72至74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述肺癌选自鳞状细胞肺癌、肺腺癌、大细胞肺癌和小细胞肺癌。
78.根据权利要求72至74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述前列腺癌是小细胞神经内分泌癌(SCNC)或去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。
79.根据权利要求72至74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述胰腺癌是外分泌肿瘤或内分泌肿瘤，如其中所述胰腺癌是选自以下的外分泌肿瘤：导管腺癌、腺泡细胞癌、腺鳞癌、导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMN)和胰腺上皮内瘤变。
80.根据权利要求79所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述胰腺癌是选自以下的内分泌肿瘤：神经内分泌肿瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、生长抑素瘤、舒血管肠肽瘤和无功能性胰岛细胞瘤，如其中所述神经内分泌肿瘤是I级、II级或III级胰腺癌。
81.根据权利要求72至74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述脑癌和/或所述CNS的癌症选自：
a)选自以下的神经上皮组织的肿瘤：
ii)选自以下的星形细胞肿瘤：
毛细胞型星形细胞瘤、毛细胞黏液型星形细胞瘤、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤、多形性黄色瘤型星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、神经胶质肉瘤、大脑胶质瘤病，和
ii)选自以下的少突神经胶质肿瘤：少突神经胶质瘤和间变性少突神经胶质瘤，和
iii)选自以下的少突星形细胞肿瘤：少突星形细胞瘤和间变性少突星形细胞瘤，和
iv)选自以下的室管膜肿瘤：室管膜下室管膜瘤、黏液乳头状型室管膜瘤、室管膜瘤、间变性室管膜瘤，和
v)选自以下的脉络丛肿瘤：脉络丛乳头状瘤、非典型脉络丛乳头状瘤和脉络丛癌，和
vi)选自以下的其他神经上皮肿瘤：星形母细胞瘤、第三脑室脊索瘤样胶质瘤和血管中心型神经胶质瘤，和
vii)选自以下的神经元和混合性神经元胶质肿瘤：小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)、婴儿促纤维增生型星形细胞瘤/神经节细胞胶质瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、神经节细胞瘤、神经节细胞胶质瘤、间变性神经节细胞胶质瘤、中枢神经细胞瘤、脑室外神经细胞瘤、小脑脂肪神经细胞瘤、乳头状胶质神经元肿瘤、第四脑室的玫瑰花结形成性胶质神经元肿瘤和副神经节瘤，和
viii)选自以下的松果体区的肿瘤：松果体细胞瘤、中等分化松果体实质肿瘤、松果体母细胞瘤和松果体区乳头状肿瘤，以及
ix)选自以下的胚胎瘤：髓母细胞瘤、具有广泛结节的髓母细胞瘤、间变性髓母细胞瘤、CNS原始神经外胚层肿瘤、CNS神经母细胞瘤和非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤，和
b)选自以下的脑神经肿瘤和椎旁神经肿瘤：
i)神经鞘瘤，ii)神经纤维瘤，iii)神经束膜瘤，和iv)恶性周围神经鞘瘤(MPNST)，和
c)选自以下的脑脊膜肿瘤：
i)选自以下的脑脊膜上皮细胞肿瘤：脑膜瘤、非典型脑膜瘤、间变性脑膜瘤，
ii)选自以下的间叶性肿瘤：脂肪瘤、血管脂肪瘤、冬眠瘤、脂肪肉瘤、孤立性纤维性肿瘤、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、软骨瘤、软骨肉瘤、骨瘤、骨肉瘤、骨软骨瘤、血管瘤、上皮样血管内皮瘤、血管外皮细胞瘤、间变性血管外皮细胞瘤、和血管肉瘤、卡波西肉瘤、尤因肉瘤-PNET，
iii)选自以下的原发性黑色素细胞病变：
弥漫性黑色素细胞增生症、黑色素细胞瘤、恶性黑色素瘤、脑膜黑色素瘤病，以及
iv)与脑脊膜相关的其他肿瘤，如血管母细胞瘤，和
d)选自以下的造血系统肿瘤：
i)恶性淋巴瘤、浆细胞瘤，和ii)粒细胞肉瘤，以及
e)选自以下的鞍区肿瘤：
ii)颅咽管瘤，ii)颗粒细胞肿瘤，iii)垂体细胞瘤，和iv)腺垂体的梭形细胞嗜酸细胞腺瘤。
82.根据权利要求72至或74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述肿瘤性疾病或障碍是实体瘤。
83.根据权利要求72至或74中任一项所述的用于所述用途的抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体、宿主细胞或组合物，其中所述肿瘤性疾病或障碍是淋巴瘤。
84.根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、根据权利要求53至57中任一项所述的多核苷酸、根据权利要求58至59中任一项所述的载体、根据权利要求60至64中任一项所述的重组宿主细胞和/或根据权利要求66至70中任一项所述的组合物，
所述抗体或其抗原结合片段、所述多核苷酸、所述载体、所述重组宿主细胞和/或所述组合物用于在抑制表达整合素α10β1的细胞的细胞迁移、细胞增殖、细胞生长、细胞存活和/或细胞黏附中使用。
85.一种用于检测受试者中表达整合素α10β1的细胞的体外方法，所述方法包括：
(a)提供来自待测试的受试者的细胞样品，如活检组织或血液样品；
(b)任选地，提取和/或纯化所述样品中存在的细胞；
(c)使根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段与所述样品中存在的细胞接触；
(d)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与所述细胞结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与所述细胞的结合指示受试者的所述组织中存在与表达整合素α10的细胞相关的疾病或障碍。
86.一种用于鉴定患有与表达整合素α10的细胞相关的疾病或障碍的患者的体外方法，所述患者将受益于用根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的治疗，所述方法包括：
(a)提供来自待测试的患者的细胞样品，如活检组织或血液样品；
(b)任选地，提取和/或纯化所述样品中存在的细胞；
(c)使根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段与所述样品中存在的细胞接触；
(d)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与所述细胞结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与表达整合素α10的细胞的结合指示患者将受益于用根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的治疗。
87.一种用于治疗患有与表达整合素α10的细胞相关的疾病或障碍的患者的方法，所述方法包括：
a)选择根据权利要求85至86中任一项被鉴定为患有与表达整合素α10的细胞相关的疾病或障碍的患者；
b)向所述患者施用有效治疗所述疾病或障碍的治疗剂。
88.一种用于检测表达整合素α10的细胞的方法，所述方法包括：
a)使根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段与待分析整合素α10表达的细胞接触；
b)确定所述抗体或其抗原结合片段是否与所述细胞结合，
其中所述抗体或其抗原结合片段与所述细胞的结合指示受试者的组织中存在与表达整合素α10的细胞相关的疾病或障碍。
89.根据权利要求88所述的方法，其中所述方法是体内方法或体外方法。
90.一种用于对哺乳动物中整合素α10β1的表达进行体内成像的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供哺乳动物，
b)提供根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，
c)将根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段施用至所述哺乳动物，以允许所述抗体或其片段与所述哺乳动物中细胞的整合素α10β1的细胞外结构域结合，
d)任选地将第二标记抗体或其片段添加至所述样品中，其中所述第二抗体或其片段与c)中的所述抗体或其片段结合，
e)检测c)中所述细胞的根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或任选地检测d)中与所述抗体或其片段结合的所述第二标记抗体或其片段，以及
f)产生所检测的抗体或其片段的图像，从而对哺乳动物的细胞上整合素α10β1的表达进行体内成像。
91.一种用于对从哺乳动物获得的样品中的整合素α10或其片段进行体外检测的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供从哺乳动物获得的样品，
b)提供根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，
c)使所述抗体或其抗原结合片段与所述样品接触，以允许所述抗体或其片段与所述样品中的整合素α10的细胞外结构域或其片段结合，
d)任选地将第二标记抗体或其片段添加至所述样品中，其中所述第二抗体或其片段与c)中的所述抗体或其片段结合，
e)检测所述抗体或其抗原结合片段，或任选地检测d)中与所述抗体或其片段结合的所述第二标记抗体或其片段，以及
从而确定在从所述哺乳动物获得的样品中是否发现整合素α10或其片段。
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