CN119818684B - Ildr1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供ILDR1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用，本发明中ILDR1抑制剂抑制肝癌细胞的增殖，ILDR1是治疗HCC的新靶点和诊断预后相关的生物标志物。体外实验发现在HCC细胞系HCCLM3中，ILDR1的下调后显著抑制了肿瘤的增殖能力，体外实验发现ILDR1的下调抑制谷氨酰胺代谢关键酶谷氨酰胺转氨酶(GLS)的转录并其使其蛋白表达量下调，且ILDR1的下调可能通过抑制AKT信号通路和转录因子MYC的实现对GLS的抑制。

Description

ILDR1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及ILDR1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种常见的原发性肝癌，占所有肝癌病例的约90％。根据世界卫生组织(WHO)的最新统计数据，HCC在全球所有常见癌症中位列第五，且是与癌症相关的第三大死亡原因。这一情况在我国尤为严重，HCC的发病率在所有肿瘤中位居第四，但其死亡率却高居第二，严重威胁着我国人民的生命健康和社会经济发展。

HCC的危险因素在全球范围内存在显著差异，其中乙型肝炎病毒(HBV)感染在亚洲地区占主导地位，丙型肝炎病毒(HCV)感染则在日本更为普遍，而非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)以及长期酗酒则在欧洲和北美地区成为主要的致病因素。近年来，随着我国大规模推广HBV疫苗接种，HBV相关的恶性肿瘤发病率有所下降。然而，NAFLD和NASH相关的肝癌发病率呈上升趋势。NAFLD被认为是代谢综合征在肝脏中的表现，涉及多系统的代谢紊乱。这些变化凸显了代谢紊乱在HCC的发生和发展过程中所扮演的重要角色，提示针对代谢途径的干预可能成为新的治疗策略。

肿瘤细胞的代谢重编程是其显著特征之一，这一过程帮助肿瘤细胞适应快速增殖和高能量需求。为了满足这些需求，肿瘤细胞的代谢途径发生了显著变化，包括增强糖代谢、脂肪酸合成以及氨基酸代谢等。代谢重编程不仅是癌症的标志之一，也是其发生和发展的关键驱动因素。在肿瘤微环境中，由于高压力、低pH值和低氧等物理化学条件，以及肿瘤血管的异质性，局部肿瘤细胞面临着代谢资源的有限性，这加速了营养物质的消耗和代谢产物的积累。为应对这一挑战，肿瘤细胞通过调节自身的代谢途径，包括糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢，不仅重新满足了自身对能量的需求，还调控了基因表达和蛋白质修饰，最终促进了肿瘤细胞的增殖和扩散。

在肿瘤代谢重编程过程中，谷氨酰胺发挥着多重关键作用。首先，谷氨酰胺通过脱氨基生成α-酮戊二酸(α-KG)，进入三羧酸循环(TCA循环)，为高增殖速率的肿瘤细胞提供能量。其次，作为重要的氮源，谷氨酰胺支持核苷酸、氨基酸和脂肪酸的合成，促进肿瘤细胞的生长与增殖。此外，谷氨酰胺代谢生成的谷胱甘肽(GSH)在维持细胞氧化还原平衡方面起关键作用，增强肿瘤细胞对氧化应激和化疗药物的抵抗能力，进一步促进肿瘤的存活和耐药性。谷氨酰胺转氨酶(Glutaminase,GLS)作为谷氨酰胺代谢中的关键酶，负责将谷氨酰胺转化为谷氨酸，参与TCA循环和多种生物合成途径。GLS在肿瘤细胞的谷氨酰胺代谢中至关重要。大量研究表明，抑制肿瘤细胞中GLS的表达可显著延缓肿瘤进展并减少癌症干细胞数量。然而，由于肿瘤代谢异质性和耐药性，GLS抑制剂在临床应用中尚未广泛惠及所有肿瘤患者，仍需进一步研究和优化治疗策略。

ILDR1(Immunoglobulin-like Domain Containing Receptor 1)是一种关键的跨膜蛋白，主要通过维持紧密连接的完整性和调节细胞屏障功能，参与听觉信号传导以及潜在的免疫调节功能。研究表明，ILDR1可能在肝细胞中调节谷氨酰胺代谢，尽管其具体机制尚未完全阐明。ILDR1在维持细胞间紧密连接的过程中，通过调控代谢途径，可能影响肝细胞的生长和代谢状态，进而在HCC的发生和发展中发挥作用。基于此，本发明提供了ILDR1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供ILDR1抑制剂在制备肝细胞癌药物中的应用。

一方面，本发明提供ILDR1抑制剂在制备原发性肝癌的早期诊断、预后评估或靶向治疗药物中的应用。

进一步地，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3细胞系在体外的增殖能力。

进一步地，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3细胞系中的GLS的蛋白表达。

进一步地，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3细胞系中的PI3K-AKT信号通路的活性。

进一步地，所述ILDR1抑制剂通过PI3K-AKT-MYC信号轴抑制了肝癌细胞系HCCLM3细胞系中的GLS的蛋白表达。

有益效果：

本发明表明ILDR1抑制剂抑制肝癌细胞的增殖，ILDR1是治疗HCC的新靶点和诊断预后相关的生物标志物。体外实验表明在HCC细胞系HCCLM3中，ILDR1的下调后显著抑制了肿瘤的增殖能力。进一步的体外实验发现ILDR1的下调抑制谷氨酰胺代谢关键酶谷氨酰胺转氨酶(GLS)的转录并其使其蛋白表达量下解，且ILDR1的下调通过抑制AKT信号通路和转录因子MYC的实现对GLS的抑制。

附图说明

图1是使用TCGA公共数据库探究基因ILDR1对肝癌生存的分析图；

图2是检测转染ILDR1基因小干扰RNA的HCCLM3细胞系的增殖速度图；

图3是TCGA数据库中ILDR1和GLS的相关性探究分析图；

图4是检测使用GLS活性抑制剂作用于HCCLM3细胞系48小时后，基因ILDR1的表达变化的免疫印迹结果图；

图5是检测使用ILDR1敲降后，基因GLS和ILDR1表达变化的免疫印迹结果图；

图6是检测使用ILDR1过表达后，基因GLS和ILDR1表达变化的免疫印迹结果图；

图7是TCGA-LIHC数据库中ILDR1表达高低基因差异分析对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析图；

图8是检测使用ILDR1敲降后，基因ILDR1，AKT，p-AKT，MYC，GLS表达变化的免疫印迹结果图；

图9是检测使用ILDR1过表达后，基因ILDR1，AKT，p-AKT，MYC，GLS表达变化的免疫印迹结果图；

图10使用免疫印迹实验验证ILDR1-PI3K-AKT-cMYC-GLS信号轴的特异性示图。

具体实施方式

下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1TCGA数据库对ILDR1基因进行生存分析

TCGA Liver hepatocellular carcinoma于2024年3月22日从UCSC Xena平台(https://xena.ucsc.edu)下载，使用R语言整理表达矩阵、基因名称和相关生存数据。随后在LIHC数据集中ILDR1表达的高(前75％)低(后25％)进行分组，按照每组的生存时间除以12计算出实际患者生存的月数。使用R语言中survival函数对以上数据进行生存曲线拟合。

结果如图1所示，图1使用TCGA公共数据库探究基因ILDR1对肝癌生存的分析，其中按照月作为时间进行肝癌患者生存时间的分析，如图中蓝色线条(ILDR1低表达组)和黄色线条(ILDR1高表达组)对比发现，ILDR1低表达组患者的生存率显著高于ILDR1高表达组。即ILDR1低表达可以延缓HCC患者的死亡。因此，ILDR1可以作为原发性肝癌预后评估的预后指标基因。

实施例2瞬时转染细胞系的构建

SiRNA瞬时转染实验采用了安徽通用生物技术有限公司提供的带有EGFP的小干扰RNA(siRNA，siRNA通过RNA干扰机制实现对特定基因的沉默)，对HCCLM3细胞进行瞬时转染，具体小干扰RNA的序列见下表1。

具体操作步骤如下：(1)将2×10^5个HCCLM3细胞接种于无菌的6孔培养板中，待细胞贴壁后，更换无血清培养基饥饿细胞2小时；(2)对于每份转染样本，按下列步骤制备复合物：使用250μl不含血清的DMEM培养基稀释质粒。同时轻轻混Lipofectamine 2000，然后取4ul在250μl不含血清的DMEM培养基中稀释。在室温下孵育5分钟。然后将混合稀释的DNA和稀释的Lipofectamine 2000(总体积＝500μL)。轻轻混匀并在室温下孵育20分钟。混匀后将上述中的混合液加入到6孔板中，37℃孵育4小时后将细胞培养液换成细胞完全培养基。孵育细胞24小时后使用免疫印迹实验对ILDR1的蛋白表达进行鉴定。

表1小干扰RNA序列

细胞计数试剂盒检测细胞增殖操作方法包括：首先进行细胞铺板，将稳转细胞系和对照细胞系进行消化后重悬，使用血球计数板进行细胞计数，调整细胞数量，按照96孔板中每孔2000细胞进行接种，采用8字摇匀法将上述中的细胞进行混匀后。使用细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测细胞增殖，将细胞接种于96孔板中，每孔接种2000个细胞。对细胞进行转染后，分别在培养4、24、48、72小时加入CCK-8试剂，培养箱孵育1小时后，使用酶标仪测量450nm处的吸光度，评估细胞增殖。

图2是通过CCK8实验方法对肝癌细胞系HCCLM3进行ILDR1基因对于细胞增殖速度的探究得到。如上述图中siCON(黑色线条)和siILDR1(黄色线条)对比所示，在进行使用小干扰RNA影响ILDR1的表达后，siCON组在450nm处的吸光度显著高于siILDR1组，也就表明siILDR1组的HCCLM3细胞的增殖显著减缓。实验表明，ILDR1抑制可以显著延缓肿瘤细胞增殖。因此，ILDR1抑制可以作为原发性肝癌潜在治疗靶点的应用。

实施例3TCGA数据库中基因之间的关联性分析

将TCGA-LIHC数据中的Tumor数据进行提取，并对其进行标准化，之后将上述中的ILDR1的表达值和GLS的表达值进行pearson相关性分析，ILDR1与GLS的表达显著正相关，其相关性系数为0.42，并使用R语言中ggplot2函数对两个基因在TCGA-LIHC数据库中表达的相关性进行曲线拟合。

将TCGA-LIHC数据中的肿瘤患者的数据进行提取，并对其进行标准化，之后将上述中的ILDR1的表达值和GLS的表达值进行pearson相关性分析，如图3所示，以ILDR1基因的表达值作为X轴，GLS基因的表达值作为Y轴，将两个基因在每个患者中的表达值进行pearson相关性分析，其中以上数据表明ILDR1与GLS的表达显著正相关，其相关性系数为0.42，说明GLS基因和IDLR1基因在肝癌中高度相关。

实施例4

1、使用GLS活性抑制剂Bis-2-(5-苯基乙酰氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙基硫醚(BPTES)处理HCCLM3细胞，BPTES(Bis-2-(5-苯基乙酰氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)乙基硫醚)是一种选择性谷氨酸脱氢酶(Glutaminase,GLS)抑制剂。BPTES能够特异性地结合并抑制GLS的活性，减少谷氨酰胺向谷氨酸的转化。收集细胞后在6孔板中每孔铺板2*10^5个细胞，12小时后细胞贴壁后，每孔加入2ul，10mg/ml的BPTES溶液，等待48小时后，收取蛋白样品进行免疫印迹实验。

2、免疫印迹实验具体实验步骤如下：(1)细胞裂解：将培养皿中的细胞洗涤后，添加NP40细胞裂解液，并在冰上轻柔摇动15-30min；(2)破碎细胞：利用超声波设备对细胞进行处理，并通过高速离心(12,000rpm，15min)获得所需的细胞裂解液；(3)BCA法蛋白定量：将待测样品与蛋白标准品加入96孔板，加入BCA蛋白显色液后，在37℃恒温箱中孵育15-30min，测定吸光度并绘制标准曲线，以计算样品的蛋白浓度；(4)处理蛋白样品：定量完成后，取一定量的蛋白，加入1/4体积的5×SDS，并在100℃加热5min使蛋白变性，随后样品经冰浴2min冷却，即完成制备；(5)进行蛋白电泳操作：制备SDS-PAGE凝胶后，装载样品至垂直电泳槽中并进行电泳分离(恒压120V，90min)；(6)转膜与封闭：电泳结束后，将凝胶转移到NC膜上(按提示刻度加入足够的电转液，以0.23A恒流转膜90min，并进行封闭处理；(7)抗体孵育与检测：清洗NC膜后，在4℃孵育一抗并过夜(或室温2h)，完成孵育后，清洗膜并孵育相应荧光标记的二抗；(8)条带检测：孵育结束后，清洗NC膜，即可在Odyssey荧光扫描仪上进行检测。

图4是检测使用GLS活性抑制剂作用于HCCLM3细胞系48小时后，基因ILDR1的表达变化的免疫印迹结果图。如图所示，在使用GLS抑制剂48小时后，GLS的条带粗细变细，表明GLS基因的蛋白表达水平下降，但是ILDR1基因的条带没有明显变化，说明ILDR1基因的蛋白表达水平变化不大，以上说明，抑制GLS的表达水平对ILDR1基因的表达没有影响，说明GLS不能够调节ILDR1。

实施例5

细胞慢病毒感染以及稳转敲降ILDR1细胞系的构建：shRNA稳定转染实验采用了安徽通用生物技术有限公司提供的带有EGFP的shRNA的慢病毒感染序列，慢病毒感染序列见下表2，对HCCLM3细胞进行稳定转染。具体操作步骤如下：(1)将2×10^5个HCCLM3细胞接种于无菌的6孔培养板中，待细胞贴壁后，更换新鲜培养基并添加1ul，浓度为10mg/ml的聚凝胺(Polybrene)多聚阳离子聚合物；(2)根据预先筛选的病毒滴度确定感染剂量(MOI＝20)，将相应MOI值的慢病毒加入培养皿中，并置于培养箱内孵育12-16h；(3)12小时后，更换新鲜培养基。24h后可利用荧光显微镜观察细胞荧光情况；(4)在感染48h后，加入嘌呤霉素(2μg/mL)进行筛选，细胞经过2周培养稳定后，使用免疫印迹实验进行检验ILDR1蛋白表达，以确保实验所用细胞的转染效果。

表2慢病毒构建shRNA序列

图5是检测使用ILDR1敲降后，基因GLS和ILDR1表达变化的免疫印迹结果图。如图所示，对HCCLM3细胞系进行了慢病毒感染用以敲降ILDR1基因，其中ILDR1的两种敲降方式显著降低了ILDR1的蛋白条带的粗细，即显著降低了ILDR1的表达水平。同时两种敲降方式中GLS的蛋白条带也显著变细，说明GLS基因的蛋白表达水平显著下降。以上说明，抑制ILDR1的表达水平对GLS基因的表达水平有显著影响，说明ILDR1基因可以显著调节GLS的表达水平。

实施例6

细胞慢病毒感染以及稳转过表达ILDR1细胞系的构建：慢病毒感染的实验采用了上海和元生物技术有限公司提供的ILDR1干扰慢病毒以及其对照慢病毒(Control及AAV_ILDR1)。

具体操作步骤如下：(1)将2×10^5个HCCLM3细胞接种于无菌的6孔培养板中，待细胞贴壁后，更换新鲜培养基并添加20ul,1ug/ul聚凝胺加强版(Polybrene Plus)；(2)根据预先筛选的病毒滴度确定感染剂量(MOI＝20)，将相应MOI值的慢病毒加入培养皿中，并置于培养箱内孵育12h；(3)12小时后更换新鲜培养基，24h后可利用荧光显微镜观察细胞荧光情况；(4)在感染48h后，加入嘌呤霉素(2μg/mL)进行筛选，细胞经过2周培养稳定后，使用免疫印迹实验进行检验ILDR1蛋白表达，以确保实验所用细胞的转染效果。

图6是检测使用ILDR1过表达后，基因GLS和ILDR1表达变化的免疫印迹结果图。如图所示，对HCCLM3细胞系进行了慢病毒感染用以过表达ILDR1基因，其中在ILDR1的过表达的细胞模型中，ILDR1的蛋白条带的粗细显著变粗，即显著增加了ILDR1的表达水平。同时两种过表达细胞系中GLS的蛋白条带也显著变粗，说明GLS基因的蛋白表达水平显著上升。结合图5和图6说明，增加ILDR1的表达水平对GLS基因的表达水平有显著影响，说明ILDR1基因可以显著调节GLS的表达水平。

综上，ILDR1是调控GLS蛋白表达的重要调控因子。

实施例7

ILDR1基因在TCGA-LIHC数据库中的表达进行差异分析和富集分析：研究利用TCGA-LIHC数据库，根据ILDR1基因的表达水平将样本分为高表达组(前75％)和低表达组(后25％)。随后，进行基因差异分析并开展KEGG富集分析。KEGG(Kyoto EncyclopediaofGenes and Genomes，京都基因与基因组百科全书)是由日本京都大学开发和维护的综合性生物数据库，旨在系统整合基因组、化学物质及其系统功能信息。KEGG富集分析是一种生物信息学方法，用于识别和解释特定基因集在各类生物通路(Pathways)中的显著富集现象。通过该分析，研究人员能够深入理解所选基因集在生物学过程、信号传导通路及其潜在功能中的作用。

图7TCGA-LIHC数据库中ILDR1表达高低基因差异分析对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析，在TCGA-LIHC数据库中按照ILDR1表达的高(前75％)低(后25％)进行分组，之后进行基因差异分析和KEGG富集分析。如图所示，其中X轴代表差异基因富集在通路上的基因数目，Y轴代表差异基因富集在的信号通路，颜色表示以上通路调整后的P值，其中颜色越深表示P值越小，富集的可能性越大。据上述，ILDR1高表达组和低表达组之间差异基因主要富集在以下通路，神经活性配体-受体相互作用，细胞因子-细胞因子受体相互作用，PI3K-Akt信号通路等。

其中PI3K-AKT信号通路可以通过调节MYC基因进一步调控GLS的表达，符合上述中的ILDR1可以对GLS调控的理论。于是，对ILDR1过表达和敲降的稳转细胞系进行了PI3K-AKT信号通路激活程度的探究，以及MYC基因在ILDR1过表达和敲降的稳转细胞系中的表达情况。

实施例8

参照实施例5中步骤得到图8，图8是检测使用ILDR1敲降后，基因ILDR1，AKT，p-AKT，MYC，GLS表达变化的免疫印迹结果图。如图所示，对HCCLM3细胞系进行了慢病毒感染用以敲降ILDR1基因，其中ILDR1的两种敲降方式显著降低了ILDR1的蛋白条带的粗细，即显著降低了ILDR1的表达水平。同时两种敲降方式中AKT的蛋白条带没有显著变化，说明AKT基因的蛋白表达水平没有显著变化。同时两种敲降方式中p-AKT的蛋白条带显著变细，说明p-AKT基因的蛋白表达水平显著下降，也就是基因AKT被磷酸化的水平显著变少，即PI3K-AKT信号通路显著被磷酸化的程度显著变少，被激活的程度显著下降。同时两种敲降方式中MYC的蛋白条带也显著变细，说明MYC基因的蛋白表达水平显著下降。同时两种敲降方式中GLS的蛋白条带也显著变细，说明GLS基因的蛋白表达水平显著下降。以上说明，抑制ILDR1的表达水平对AKT，p-AKT，MYC，GLS基因的表达水平有显著影响，说明ILDR1基因可以显著调节AKT，p-AKT，MYC，GLS的表达水平。

实施例9

参照实施例6中步骤得到图9，图9是检测使用ILDR1过表达后，基因ILDR1，AKT，p-AKT，MYC，GLS表达变化的免疫印迹结果图。如图9所示，对HCCLM3细胞系进行了慢病毒感染用以过表达ILDR1基因，其中在ILDR1的过表达的细胞模型中，ILDR1的蛋白条带的粗细显著变粗，即ILDR1过表达显著增加了ILDR1的表达水平。同时ILDR1过表达细胞中AKT的蛋白条带没有显著变化，说明AKT基因的蛋白表达水平没有显著变化。同时ILDR1过表达细胞中p-AKT的蛋白条带显著变粗，说明p-AKT基因的蛋白表达水平显著上升，也就是基因AKT被磷酸化的水平显著变多，即PI3K-AKT信号通路显著被磷酸化，即PI3K-AKT信号通路被显著激活。同时ILDR1过表达细胞中MYC的蛋白条带也显著变粗，说明MYC基因的蛋白表达水平显著上升。同时ILDR1过表达细胞中GLS的蛋白条带也显著变粗，说明GLS基因的蛋白表达水平显著上升。以上说明，上调ILDR1的表达水平对AKT，p-AKT，MYC，GLS基因的表达水平有显著影响，说明ILDR1基因可以显著调节AKT，p-AKT，MYC，GLS的表达水平。

结合图8和图9，可以说明ILDR1基因可以显著调节AKT，p-AKT，MYC，GLS的表达水平。

实施例10

参照实施例6中步骤，并使用AKT特异性抑制剂MK2006处理细胞，MK-2206是一种高度选择性的Akt1/2/3抑制剂。MK-2206是变构抑制剂，由pleckstrin同源结构域激活。MK-2206抑制Akt的苏氨酸308位点和丝氨酸473位点的自身磷酸化作用。首先收集细胞，然后在6孔板中每孔铺板2*10^5个细胞，12小时后细胞贴壁后，每孔加入2ul，10mg/ml的MK-2206溶液，等待48小时后，收取蛋白样品进行免疫印迹实验。

MYC特异性抑制剂5-(4-乙基苯亚甲基)绕丹宁(10058-F4)，10058-F4可降低细胞中c-Myc蛋白水平。首先收集细胞，然后在6孔板中每孔铺板2*10^5个细胞，12小时后细胞贴壁后，每孔加入2ul，10mg/ml的MK-2206溶液，等待48小时后，收取蛋白样品进行免疫印迹实验得到图10。

图10为使用免疫印迹实验验证ILDR1-PI3K-AKT-cMYC-GLS信号轴的特异性示图，为了验证ILDR1-PI3K-AKT-cMYC-GLS信号轴的特异性，在ILDR1过表达的细胞系中加入了AKT特异性抑制剂MK2006(货号：碧云天SF2717)和MYC特异性抑制剂10058-F4(货号：爱必信abs810789)。如图所示，在ILDR1过表达的细胞系中ILDR1、p-AKT、MYC和GLS的蛋白表达随着ILDR1基因表达的上升而显著增加，这与上图中的结果一致，再次证明了上述中的结论。然而，在ILDR1过表达的细胞系中加入AKT特异性抑制剂MK2006后，ILDR1对MYC和GLS蛋白表达的正向调节作用消失，表明ILDR1对MYC和GLS的调节依赖于PI3K-AKT信号通路。进一步地，在ILDR1过表达的细胞系中加入MYC抑制剂10058-F4后，ILDR1对GLS蛋白表达的调节作用也消失，提示ILDR1对GLS的调节是通过MYC来实现的。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims (6)

1.ILDR1抑制剂在制备治疗肝细胞癌的药物中的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂为ILDR1小干扰RNA，所述ILDR1小干扰RNA的序列为：

S1 正义链：AGGCAAGAAUAGCAGGAAATT

反义链：UUUCCUGCUAUUCUUGCCUTT；

S2 正义链：GAGCAGAUCUCGUGAUAAATT

反义链：UUUAUCACGAGAUCUGCUCTT；

S3 正义链：CCAAUGGUGUCCUGGAGUATT

反义链：UACUCCAGGACACCAUUGGTT。

2.ILDR1抑制剂在制备治疗原发性肝癌的靶向治疗药物中的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂为ILDR1小干扰RNA，所述ILDR1小干扰RNA的序列为：

S1 正义链：AGGCAAGAAUAGCAGGAAATT

反义链：UUUCCUGCUAUUCUUGCCUTT；

S2 正义链：GAGCAGAUCUCGUGAUAAATT

反义链：UUUAUCACGAGAUCUGCUCTT；

S3 正义链：CCAAUGGUGUCCUGGAGUATT

反义链：UACUCCAGGACACCAUUGGTT。

3.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3在体外的增殖能力。

4.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3中的GLS的蛋白表达。

5.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂抑制了肝癌细胞系HCCLM3中的PI3K-AKT信号通路的活性。

6.根据权利要求1或2任一项所述的应用，其特征在于，所述ILDR1抑制剂通过PI3K-AKT-MYC信号轴抑制了肝癌细胞系HCCLM3中的GLS的蛋白表达。