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CN119816496A - 芳香乙炔类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

芳香乙炔类衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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CN119816496A
CN119816496A CN202380064702.3A CN202380064702A CN119816496A CN 119816496 A CN119816496 A CN 119816496A CN 202380064702 A CN202380064702 A CN 202380064702A CN 119816496 A CN119816496 A CN 119816496A
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CN
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methyl
imidazol
phenyl
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Application number
CN202380064702.3A
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黄贤贵
廖伟伟
邬澄飞
叶成
徐代旺
徐肖杰
周厚江
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Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Shanghai Aryl Pharmtech Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Shanghai Aryl Pharmtech Co Ltd
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Abstract

本发明涉及一种芳香乙炔类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的芳香乙炔类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是LPXC抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同，

Description

芳香乙炔类衍生物及其制备方法和用途 技术领域
本发明涉及一种芳香乙炔类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为LPXC抑制剂的用途。
背景技术
二十世纪三十年代至六十年代是抗生素发展的黄金时期，此后抗生素类药物在全世界范围内广泛使用，但是细菌耐药性问题也相继出现，耐药菌已经成为威胁人类健康的重大问题。而多重耐药革兰氏阴性菌是发生感染的主要病原体之一，目前临床上用来治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的药物严重匮乏，仍然采用毒性较大的药物。近几年，细菌耐药性虽然一直是国际医药界的热门话题，但是研发速度进展缓慢，国内外进入临床研究的化合物寥寥无几，因此，找到一种新型的革兰氏阴性菌抗菌药物是亟需解决的重要问题。
UDP-3-O-(R-3-羟基肉豆蔻酰基)-N-乙酰葡糖胺脱乙酰酶(LPXC)是一种依赖Zn+的金属酶，它是合成类脂A的第一步限速酶，而类脂A则是革兰氏阴性菌细胞外膜的重要组成成分，可以将脂多糖锚定在细胞外膜上，保持自身细胞的完整性，同时作为疏水性的外部屏障，阻碍抗生素等外部因子进入细胞，保护细菌免受侵害。另外，类脂A也是细菌内毒素的活性成分，通过肠粘膜入血，激活人体的免疫反应，甚至造成严重的败血性休克，这也是革兰氏阴性菌具有病原性感染的原因。因此，通过对LPXC的抑制，可以抑制革兰氏阴性菌类脂A的生物合成，从而有效控制革兰氏阴性菌的感染。
目前对LPXC的结构和特性进一步认知，大多通过对大肠杆菌、铜绿假单胞菌和超嗜热菌的LPXC晶体分离纯化和解析鉴定得到。这三种不同来源的LPXC结构高度相似，都含有两个结构域，活性区位于2个结构域的交界处。每个结构域包含α螺旋和β折叠，β折叠包夹着α螺旋，形成“β-α-α-β”的夹心结构。尽管这两个结构域的氨基酸序列有些许差别，但具有相同的空间结构。另外，每个结构域都有与之相应的插入区，由β折叠构成，形成不同的功能区域。研究表明，LPXC在革兰氏阴性菌具有较高的同源性，与哺乳动物各种酶系没有共同的序列，从生物学角度来看，由于其广谱性和低毒性的独特优势，抑制LPXC这一靶点将会是研究抑菌药物的一个理想方向。
现在关于LPXC抑制剂还没有新款药物上市，富山化学株式会社研发的小分子化合物RC-01已经进入临床一期，诺华、台湾大正制药等其它医药公司针对LPXC的研究均在临床前阶段。因此，LPXC抑制剂的研究和应用已取得一定的进展，但是提高的空间仍然巨大，仍有必要继续研究和开发新的LPXC抑制剂。
发明内容
针对上述的技术问题，本发明提供一种通式(I)所示的一种芳香乙炔类衍生物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
其中：
W选自O、S(O)r或N；
环C选自5～10元螺杂环基或单环杂环基，其中所述的单环杂环基含有一个双键；
X、Y、Z、Q各自独立地选自CRA或N原子，且X、Y、Z、Q中至多有两个原子同时为N原子；
RA选自氢原子、卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R1选自不存在、氢原子、羟基、氰基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R3、-C(O)NR6R7或-S(O)rR4；其中所述的烷氧基、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个RB所取代；
R3、R4各自独立地选自氢原子、羟基、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基；其中所述的烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
RB各自独立地选自氰基、卤素、烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，两个RB与相连接的同一个碳原子形成一个-C(＝O)-；
R2相同或不同，各自独立地选自羟基、氰基、卤素、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R5各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、 -C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中所述的4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m为0，1或2；m优选为0；且
r各自独立地为0，1或2。
本发明的优选方案提供一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
环C、R1、R2、W和m的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中W为N。
本发明的优选方案提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环C选自：
本发明的优选方案提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R1选自氢原子、羟基、烷基、环烷基、杂环基、-C(O)R3、-C(O)NR6R7或-S(O)rR4；其中所述的烷基或环烷基任选进一步被一个或多个RB所取代；
RB各自独立地选自氰基、羟基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的杂环基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氰基、烷氧基、卤代烷基、＝O、-C(O)OR8、-C(O)NR9R10的取代基所取代；
或者，两个RB与相连接的同一个碳原子形成一个-C(＝O)-；
R3选自氢原子、烷基、环烷基、杂芳基或杂环基；其中所述的烷基、环烷基、杂芳基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、烷氧基、氰基、杂芳基、＝O、-NR9R10、-C(O)OR8或-C(O)NR9R10的取代基所取代；
R4为氢原子或羟基；
R5各自独立地选自氢原子、烷基或羟基烷基；
R6、R7各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选被一个或多个选自羟基、氰基、卤素或烷氧基的取代基所取代；
R8、R9、R10各自独立地选自氢原子或烷基；所述烷基优选为甲基；
r为2。
在本发明的优选方案中，通式(I)所述的化合物选自：
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
注：如果在画出的结构和给出的该结构的名称之间有差异，则画出的结构将给予更大的权重。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)在制备LPXC抑制剂中的用途。
本发明还提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)在制备治疗由LPXC介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由LPXC介导的疾病优选革兰氏阴性菌导致的细菌感染；其中所述的由LPXC介导的疾病更优选选自大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌等革兰氏阴性菌引起的细菌感染。
本发明进一步提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)在制备治疗革兰氏阴性菌导致的细菌感染的药物中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)在制备抗细菌感染的药物中 的用途，其中所述的细菌感染由大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌等革兰氏阴性菌引起。
本发明提供一种预防和/或治疗由LPXC介导的疾病的方法，包括向患者施用治疗有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐、或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)，其中所述的由LPXC介导的疾病优选革兰氏阴性菌导致的细菌感染；其中所述的由LPXC介导的疾病更优选选自大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌等革兰氏阴性菌引起的细菌感染。
本发明还提供一种预防和/或治疗革兰氏阴性菌导致的细菌感染的方法，包括向患者施用治疗有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐、或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)。
本发明进一步提供一种预防和/或治疗由大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌等革兰氏阴性菌引起的细菌感染的方法，包括向患者施用治疗有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐、或其药物组合物(例如前述技术方案所述的药物组合物)。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指非芳香性环状烷基，其中一个或多个成环的原子是碳原子，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环，优选具有5至7元单环或7至10元双环或三环。“环烷基”的实例包括但不限于环丙基、环戊基、环丁基。环烷基可以是取代或未取代的。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、 4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。
“杂环基”、“杂环烷基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子自氮、氧或S(O)r(其中r选自0、1或2)的杂原子，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环，杂环基可以是取代或未取代的。
“单环杂环基”的实例包括但不限于吗啉基、氧杂环丁烷基、硫代吗啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、1，1-二氧代-硫代吗啉基、哌啶基、2-氧代-哌啶基、吡咯烷基、2-氧代-吡咯烷基、哌嗪-2-酮、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、哌嗪基、六氢嘧啶、1,4-二氧六环、或
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为5至14元，更优选为6至10元，最优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基、5-氧杂螺[2.4]庚基、
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)。
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。“桥杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基、2-氮杂二环[2.2.2]辛基、2-氮杂二环[3.3.2]癸基。
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括单环或双环的芳基，比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为C6-C10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为萘基。芳基可以是取代或未取代的。
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或8至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基、吡啶基、2-氧代-1，2-二氢吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四氮唑基、噻唑基、异噻唑基、1，2，3-噻二唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、1，3-二氧代-异吲哚基、喹啉基、吲唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、1H-1,2,4-三唑基、4H-1,2,4-三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪-2(1H)-酮基、嘧啶-4(3H)-酮基、哒嗪-3(2H)-酮基、1H-吲哚基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、异喹啉基、喹唑啉基、2H-异吲哚基、呋喃[3,2-b]吡啶基、呋喃[2,3-c]吡啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、2H-吡咯并[3,4-c]吡啶基。杂芳基可以是取代或未取代的。
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“硝基”指-NO2基团。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“苄基”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“羟烷基”或“羟基烷基”指羟基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“氨烷基”指氨基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤代烷基”指卤素取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤代烷氧基”指卤素取代的烷氧基，其中烷氧基的定义如上所述。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“BOC”指叔丁氧基羰基。
“Bn”指苄基。
“THP”指2-四氢吡喃基。
“TFA”指三氟醋酸。
“Ts”指对甲苯磺酰基。
“离去基团(leaving group)”，或称离去基，在化学反应中从一较大分子中脱离的原子或官能基，是亲核取代反应与消除反应中应用的术语。在亲核取代反应中，被亲核试剂进攻的反应物称为底物(substrate)，而从底物分子中带着一对电子断裂出去的原子或原子团称为离去基团。易接受电子、承受负电荷能力强的基团是好的离去基团。当离去基团共轭酸的pKa越小，离去基团越容易从其他分子中脱离。原因是因为当其共轭酸的pKa越小，相应离去基团不需和其他原子结合，以阴离子(或电中性离去基团)的形式存在的趋势也就增强。常见的离去基团包括但不限于卤素、甲磺酰基、-OTs或-OH。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5的取代基所取代；
R6选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中所述的4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
r选自0、1或2。
本发明化合物可以含有不对称中心或手性中心，因此以不同的立体异构体形式存在。所预期的是，本发明化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体(atropisomer)和几何(构象)异构体及它们的混合物，如外消旋体混合物，均在本发明的范围内。
除非另外指出，本发明描述的结构还包括此结构的所有异构体(如，非对映异构体、对映异构体和阻转异构体和几何(构象)异构体形式；例如，各不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此本发明化合物的单个立体异构体以及对映体混合物、非对映异构体混合物和几何(构象)异构体混合物均在本发明范围内。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。通式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
当W为N时：
方法1：
通式(I-a)化合物与通式(I-b)化合物在催化剂作用下发生偶联反应，任选进一步进行脱保护基反应，得到通式(I-c)化合物，通式(I-c)化合物任选进一步和通式(I-d)化合物发生取代反应，得到通式(I)化合物。
其中：
X1、X2选自卤素；
PG为氨基保护基，优选为叔丁氧羰基；
PG’为羟基保护基，优选为2-四氢吡喃基；
环C、X、Y、Z、Q、R1、R2和m如通式(I)中所述。
方法2：
通式(I-a)化合物与通式(II-b)化合物在催化剂作用下发生偶联反应，得到通式(II-c)化合物，通式(II-c)化合物进一步行脱保护基反应，得到通式(I)化合物。
其中：
X1选自卤素；
PG’为羟基保护基，优选为2-四氢吡喃基；
环C、X、Y、Z、Q、R1、R2和m如通式(I)中所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱是用Bruker仪器 (400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰，dq＝双四重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷和乙酸乙酯体系；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
(S)-1-(1-((5-(4-((7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
4-(4-碘苯基)-2,4-二氧代丁酸乙酯
将氢化钠(1.63g,40.64mmol,60％油分散)加入甲苯(20mL)中，加入1-(4-碘苯基)乙-1-酮1a(5g,20.32mmol)，加热至50℃，滴加草酸二乙酯1b(4.45g,30.48mmol)的甲苯溶液(20mL)，加热至50℃，反应2小时。冷却，倒入冰水中，用1M盐酸调至酸性，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-(4-碘苯基)-2,4-二氧代丁酸乙酯1c(2.8g)，产率：39.81％。
MS m/z(ESI):347.0[M+1].
第二步
5-(4-碘苯基)异噁唑-3-甲酸乙酯
将4-(4-碘苯基)-2,4-二氧代丁酸乙酯1c(2.8g,8.09mmol)和盐酸羟胺(1.69g,24.27mmol)加入至乙醇(25mL)中，加热回流1小时，反应结束后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(100mL)溶解，有机相用饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-(4-碘苯基)异噁唑-3-甲酸乙酯1d(2.3g)，产率：82.86％。
MS m/z(ESI):343.8[M+1].
第三步
(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲醇
将5-(4-碘苯基)异噁唑-3-甲酸乙酯1d(1.20g,3.50mmol)加入甲醇(25mL)中，分批加入硼氢化钠(198.46mg,5.25mmol)，升温至80℃，反应4小时。反应完全后，加入冰水淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲醇1e(0.36g)，产率：34.19％。
MS m/z(ESI):302.0[M+1].
第四步
(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲磺酸甲酯
将(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲醇1e(0.36g,1.20mmol)和三乙胺(241.99mg,2.39mmol,333.31μL)加入至二氯甲烷(5mL)中，冷却至0℃，滴加甲磺酰氯1f(205.45mg,1.79mmol)，升至室温反应4小时。反应完成后，加水淬灭反应，二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲磺酸甲酯1g(0.45g)，产率：99.26％。
MS m/z(ESI):379.8[M+1].
第五步
5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑
将2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑1h(100mg,509.57μmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，冷却至0℃，分批加入氢化钠(50.96mg,764.35μmol,60％油分散)，升至室温反应1小时，加入(5-(4-碘苯基)异噁唑-3-基)甲磺酸甲酯1g(193.21mg,509.57μmol)，继续室温反应4小时。反应完全后，加水淬灭反应，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(0.12g)，产率：49.13％。
MS m/z(ESI):480.1[M+1].
第六步
tert-butyl 2-ethynyl-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
2-乙炔基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
冰浴下将(1-重氮-2-氧丙基)膦酸二甲酯(1.36g,7.11mmol)加入到碳酸钾(1.64g,11.8mmol)和2-甲酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1j(1.5g,5.92mmol,市售)的甲醇(15mL)溶液中，室温下反应24小时。反应完成后，加入水(50mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-乙炔基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k(1.3g)，产率：88.1％。
MS m/z(ESI):194.1[M+1-56].
第七步
tert-butyl
2-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(1.3g,2.71mmol)、2-乙炔基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k(1.26g,3.53mmol)、双三苯基磷二氯化钯(190mg,271μmol)、碘化亚铜(51.8mg,271μmol)和三乙胺(823mg,8.14mmol,1.13mL)加入到N,N-二甲基甲酰胺(13.87mL)中，置换氩气三次后，室温反应过夜。反应完成后，加入水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l(1.25g)，产率：76.7％。
MS m/z(ESI):601.1[M+1].
第八步
(S)-1-(1-((5-(4-((7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l(1.2g,2.00mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，缓慢加入三氟乙酸(228mg,2.00mmol)，室温下反应4小时。反应完成后，浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(0.85g)，产率：76.2％。
MS m/z(ESI):417.1[M+1].
实施例2
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)butanoic acid
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸
第一步
ethyl
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)butanoate
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸乙酯
将(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(100mg,240μmol)、4-溴丁酸乙酯2a(70.3mg,360μmol,市售)、碳酸钾(332mg,2.40mmol)和碘化钠(119mg,792μmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加热至70℃反应4小时。反应完成后，加入水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸乙酯2b(65mg)，产率：51.0％。
MS m/z(ESI):531.1[M+1].
第二步
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)butanoic acid
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸
将(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸乙酯2b(30mg,56.5μmol)溶于甲醇(0.5mL)、四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(2.26mg,56.5μmol)，加热至70℃反应4小时。反应完成后，加入少量稀盐酸调节pH至4左右，浓缩除去有机溶剂，制备液相分离(分离柱 AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸2(1.8mg)，产率：4.9％。
MS m/z(ESI):503.1[M+1].
实施例3
(S)-1-(1-((5-(4-((6-azaspiro[3.4]octan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
tert-butyl 2-ethynyl-6-azaspiro[3.4]octane-6-carboxylate
2-乙炔基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯
氩气保护中，冰浴下将(1-重氮-2-氧丙基)膦酸二甲酯(241mg,1.25mmol)加入到碳酸钾(289mg,2.09mmol)和2-甲酰基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯3a(250mg,1.04mmol)的甲醇(4mL)溶液中，室温下反应24小时。反应完成后，加入水(20mL)稀释反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-乙炔基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯3b(180mg)，产率：73.2％。
MS m/z(ESI):170.1[M-55].
第二步
tert-butyl
2-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octane-6-carboxylate
2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(0.4g,835μmol)、2-乙炔基-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯3b(365mg,1.08mmol)、双三苯基磷二氯化钯(58.5mg,83.5μmol)、碘化亚铜(15.9mg,83.5μmol)和三乙胺(253mg,2.50mmol,348μL)与N,N-二甲基甲酰胺(4.65mL)混合，置换氩气三次后，室温反应过夜。反应完成后，加入水(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯3c(0.4g)，产率：81.7％。
MS m/z(ESI):587.3[M+1].
第三步
(S)-1-(1-((5-(4-((6-azaspiro[3.4]octan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将2-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸叔丁酯3c(0.3g,511μmol)溶于二氯甲烷(5mL)，缓慢滴加三氟乙酸(58mg,511μmol)，室温下反应4小时。反应完成后，浓缩。制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇3(120mg)，产率：43.2％。
MS m/z(ESI):403.1[M+1].
实施例4
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octan-6-yl)butanoic acid
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸
第一步
ethyl
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octan-6-yl)butanoate
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸乙酯
将(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇3(100mg,248μmol)、4-溴丁酸乙酯2a(72.7mg,373μmol)、碳酸钾(343mg,2.48mmol)和碘化钠(74.5mg,497μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加热至70℃反应4小时。反应完成后，加入水(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸乙酯4a(60mg)，产率：46.7％。
MS m/z(ESI):517.1[M+1].
第二步
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octan-6-yl)butanoic acid
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸
将(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸乙酯4a(60mg,116μmol)溶于甲醇(1mL)、四氢呋喃(1mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(23mg,580μmol)，加热至70℃反应4小时。反应完成后加入少量稀盐酸，调节pH为4左右。浓缩，除去大部分有机溶剂，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丁酸4(30mg)，产率：40.7％。
MS m/z(ESI):489.1[M+1].
实施例5
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propanoic acid
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸
第一步
methyl
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propanoate
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸甲酯
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50mg,120μmol)、3-溴丙酸甲酯5a(30mg,180μmol)、碳酸钾(166mg,1.20mmol)和碘化钠(59.4mg,396μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加热至70℃反应4小时。反应完成后，加入水(20mL)稀释反应，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸甲酯5b(40mg),产率：66.7％。
MS m/z(ESI):503.1[M+1].
第二步
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propanoic acid
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸
将(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸甲酯5b(80mg,159μmol)溶于甲醇(1mL)、四氢呋喃(1mL)和水(1mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(6.4mg,159μmol)，加热至70℃反应4小时。反应完成后，加少量稀盐酸调节pH到4左右，浓缩除去大部分有机溶剂，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸5(20mg)，产率：19.8％。
MS m/z(ESI):489.1[M+1].
实施例6
(S)-1-(1-((5-(4-((2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
tert-butyl 6-ethynyl-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
6-乙炔基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
氩气保护中，冰浴下将(1-重氮-2-氧丙基)膦酸二甲酯(614mg,3.20mmol)缓慢加入到碳酸钾(736mg,5.33mmol)和6-甲酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯6a(0.6g,2.66mmol)的甲醇(8mL)溶液中，室温下反应过夜。反应完成后，加入水(20mL)稀释反应，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留 物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-乙炔基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯6b(0.455g)，产率：77.4％。
MS m/z(ESI):166.1[M-55].
第二步
tert-butyl
6-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxylate
6-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(0.6g,1.25mmol)、6-乙炔基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯6b(455mg,1.44mmol)、双三苯基磷二氯化钯(87.8mg,125μmol)、碘化亚铜(23.9mg,125μmol)和三乙胺(380mg,3.76mmol,522μL)依次加入至N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，置换氩气，室温下反应过夜。反应完成后，加入水(20mL)稀释反应，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到6-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯6c(0.65g)，产率：90.7％。
MS m/z(ESI):573.1[M+1].
第三步
(S)-1-(1-((5-(4-((2-azaspiro[3.3]heptan-6-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将6-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯6c(20mg,34.92μmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，缓慢滴加三氟乙酸(46mg,405μmol)，室温反应3小时。反应完成后，浓缩，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(5mg)，产率：28.5％。
MS m/z(ESI):389.1[M+1].
实施例7
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)butanoic acid
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸
第一步
ethyl
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)butanoate
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸乙酯
将(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(135mg,348μmol)、4-溴丁酸乙酯2a(102mg,521μmol，市售)、碳酸钾(480mg,3.48mmol)和碘化钠(172mg,1.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加热至70℃反应3小时。反应完成后，加入水(20mL)稀释反应，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸乙酯7a(50mg)，产率：28.6％。
MS m/z(ESI):503.1[M+1].
第二步
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)butanoic acid
(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸
将(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸乙酯7a(30mg,59.69μmol)溶于甲醇(0.5mL)、四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(2.4mg,59.7μmol)，升温至70℃反应3小时。反应完成后，加入适量稀盐酸调节pH至4左右，浓缩除去有机溶剂后，经过制备液相分离(分 离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酸7(10mg)，产率：27.0％。
MS m/z(ESI):475.1[M+1].
实施例8
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)butanamide
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酰胺
(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酸乙酯2b(30mg,56.53μmol)溶于乙醇(1.5mL)，滴加氨水(1mL)，室温反应过夜。反应完成后，浓缩。经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-4-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丁酰胺8(5mg)，产率：13.65％。
MS m/z(ESI):502.1[M+1].
实施例9
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propanamide
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酰胺
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酸甲酯5b(60mg,119.38μmol)溶于乙醇(2mL)中，滴加氨水(1mL)，室温反应过夜。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙酰胺9(10mg)，产率：7.18％。
MS m/z(ESI):488.1[M+1].
实施例10
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)acetic acid
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸
第一步
methyl
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)acetate
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸甲酯
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(0.1g,240.09μmol)、2-溴乙酸甲酯10a(55.1mg,360.13μmol,市售)、碳酸钾(332 mg,2.40mmol)依次加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，80℃反应4小时，反应基本完成后，加水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×3)萃取三次后合并有机相，减压浓缩，粗品经过硅胶柱层析(洗脱剂：B体系)得到(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸甲酯10b(20mg)，产率：17.05％。
MS m/z(ESI):489.3[M+1].
第二步
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)acetic acid
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸甲酯10b(15mg,30.70μmol)溶于甲醇(0.5mL)、四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(6.14mg,153.51μmol)，80℃反应8小时。反应完成后，加入1M的稀盐酸(3mL)和水(50ml)，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，减压浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酸10(2.90mg)，产率：18.91％。
MS m/z(ESI):475.0[M+1].
实施例11
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethan-1-ol
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-醇
2-溴乙醇11a(30mg,240.07μmol，市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(100mg,240.07μmol)、碘化钠(216mg,1.44mmol)、碳酸铯(78.2mg,240.07μmol)分别加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，80℃反应6小时后，反应基本完成。加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取三次，合并有机相 用饱和食盐水洗涤(50mL)，减压浓缩，经过硅胶柱层析(洗脱剂：B体系)得到(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-醇11(10mg)，产率：6.89％。
MS m/z(ESI):461.0[M+1].
实施例12
(S)-2-hydroxy-1-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethan-1-one
(S)-2-羟基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-酮
2-羟基乙酸12a(10mg,131.49μmol，市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(54.8mg,131.49μmol)、N,N-二异丙基乙胺(51.0mg,394.47μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(100mg,262.98μmol)依次加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，室温反应16小时。反应基本完成后，加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)三次，然后合并有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-羟基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-酮12(10mg)，产率：12.28％。
MS m/z(ESI):475.1[M+1].
实施例13
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)acetamide
(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酰胺
2-溴乙酰胺13a(10mg,72.48μmol，市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(30.2mg,72.48μmol)、碳酸钾(30.1mg,217.45μmol)、碘化钠(10.9mg,72.48μmol)依次加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，80℃反应4小时。反应基本完成后，加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)三次，后合并有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙酰胺13(5mg)，产率：13.84％。
MS m/z(ESI):474.0[M+1].
实施例14
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-3-oxopropanoic acid
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸
第一步
methyl
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-3-oxopropanoate
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸甲酯
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(100mg,240.09μmol)、3-氯-3-氧代丙酸甲酯14a(32.8mg,240.09μmol，市售)、三乙胺(72.9mg,720.26μmol)分别加入N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，室温反应8小时。反应基本完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸甲酯14b(40mg)，产率：32.25％。
MS m/z(ESI):517.0[M+1].
第二步
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-3-oxopropanoic acid
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸甲酯14b(5mg,9.68μmol)溶于甲醇(0.25mL)、四氢呋喃(0.25mL)和水(0.25mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(1.16mg,29.04μmol)，80℃反应4小时。反应完成后，加入稀盐酸(3mL)和水(50mL)，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，后合并有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸14(2.70mg)，产率：52.73％。
MS m/z(ESI):503.0[M+1].
实施例15
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-3-oxopropanamide
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酰胺
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酸甲酯14b(20mg,38.72μmol)溶于甲醇(1mL)，后面滴加氨水(0.8mL)，室温反应36小时。反应基本完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙酰胺15(2.66mg)，产率：10.60％。
MS m/z(ESI):502.0[M+1].
实施例16
(S)-2-amino-1-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethan-1-one
(S)-2-氨基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-酮
第一步
tert-butyl
(S)-(2-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-oxoethyl)carbamate
(S)-(2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯
将2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸16a(31.54mg,180.07μmol，市售)、N,N-二异丙基乙胺(62.06mg,480.18μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(68.47mg,180.07μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，搅拌5min后加入(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50.00mg,120.04μmol)，室温反应过夜。反应完成后，加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠洗涤(20mL)，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品后制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-(2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯16b(20mg)，产率：29.04％。
MS m/z(ESI):574.3[M+1].
第二步
(S)-2-amino-1-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)ethan-1-one
(S)-2-氨基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-酮
(S)-(2-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯16b(20mg,34.86μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，滴加三氟乙酸(0.3ml,2.63mmol)，室温反应1.5小时。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-氨基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)乙-1-酮16(3mg)，产率：3.91％。
MS m/z(ESI):474.0[M+1].
实施例17
(S)-2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carbaldehyde
(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲醛
将(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(30mg,56.55μmol)溶于甲酰胺(2mL)，滴加三乙胺(28.61mg,282.73μmol)，室温反应6小时。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲醛17(3mg)，产率：9.02％。
MS m/z(ESI):445.2[M+1].
实施例18
(S)-2-amino-3-hydroxy-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propan-1-one
(S)-2-氨基-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-1-酮
第一步
tert-butyl
((S)-3-hydroxy-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phe nyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-1-oxopropan-2-yl)carbamate
((S)-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
(叔丁氧羰基)-L-丝氨酸18a(29.01mg,141.37μmol，市售)、N,N-二异丙基乙胺(60.90mg,471.22μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(53.75mg,141.37μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，搅拌5分钟后加入(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50mg,94.24μmol)，室温反应过夜。反应完成后，加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取三次(50ml×3)，合并有机相，饱和氯化钠水溶液洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化得到((S)-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯18b(20mg)，产率：35.15％。
MS m/z(ESI):604.3[M+1].
第二步
(S)-2-amino-3-hydroxy-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)propan-1-one
(S)-2-氨基-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-1-酮
将((S)-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯18b(20mg,33.13μmol)溶于二氯甲烷(3mL)，滴加三氟乙酸(0.5g,4.39mmol)，室温反应3小时。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-氨基-3-羟基-1-(2-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)丙-1-酮18(5mg)，产率：24.44％。
MS m/z(ESI):504.0[M+1].
实施例19
(S)-2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxamide
(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50mg,120.04μmol)、四氢呋喃(2mL)、三乙胺(36.44mg,360.13μmol)依次加入反应瓶中，最后加入三甲基硅基异氰酸酯19a(17.98mg,156.06μmol，市售)，室温反应过夜。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酰胺19(10mg)，产率：13.80％。
MS(ESI):460.2[M+1].
实施例20
(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)acetamide
(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙酰胺
2-溴乙酰胺13a(30mg,217.45μmol，市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(84.47mg,217.45μmol)、碳酸钾(90.16mg,652.35μmol)、碘化钠(32.62mg,217.45μmol)依次加入N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)，80℃反应4小时。反应基本完成后，加水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取三次，后合并有机相，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙酰胺20(3mg)，产率：2.34％。
MS m/z(ESI):446.1[M+1].
实施例21
(S)-6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carboxamide
(S)-6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺
(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(35mg,90.10μmol)、四氢呋喃(2mL)、三乙胺(27.35mg,270.30μmol)依次加入反应瓶中，再加入三甲基硅基异氰酸酯19a(13.49mg,117.13μmol，市售)，室温反应过夜。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酰胺21(9mg)，产率：17.40％。
MS m/z(ESI):432.0[M+1].
实施例22
(S)-6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptane-2-carbaldehyde
(S)-6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲醛
将(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基) 乙-1-醇6(35mg,90.10μmol)、甲酰胺(2mL)、三乙胺(27.35mg,270.30μmol)依次加入单口瓶中，室温反应过夜。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲醛22(5mg)，产率：9.94％。
MS m/z(ESI):417.2[M+1].
实施例23
(S)-2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octane-6-carbaldehyde
(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲醛
(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇3(10mg,24.85μmol)溶于甲酰胺(2mL)，加入三乙胺(25.14mg,248.45μmol)，室温反应过夜。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲醛23(2.40mg)，产率：15.08％。
MS m/z(ESI):431.3[M+1].
实施例24
(S)-2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octane-6-carboxamide
(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酰胺
(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇3(36.26mg,90.10μmol)溶于四氢呋喃(2mL)，加入三乙胺(27.35mg,270.30μmol)、三甲基硅基异氰酸酯19a(13.49mg,117.13μmol)，室温反应4小时。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酰胺24(3mg)，产率：5.36％。MS m/z(ESI):446.0[M+1].
实施例25
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-pyrazol-5-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-吡唑-5-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
tert-butyl
(S)-5-((2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)methyl)-1H-pyrazole-1-carboxylate
(S)-5-((2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯
将(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基) 乙-1-醇1(50mg,120.04μmol)、3-(溴甲基)吡唑-1-羧酸叔丁酯25a(31.35mg,120.04μmol，市售)、碳酸钾(19.91mg,144.05μmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，75℃反应8小时。反应完成后，加水(50mL)，加入乙酸乙酯(50mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品硅胶柱层析(洗脱剂：B体系)纯化，得到产物(S)-5-((2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯25b(40mg)，产率：55.84％。
MS m/z(ESI):497.3[M-100+1].
第二步
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-pyrazol-5-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-吡唑-5-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将(S)-5-((2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯25b(40mg,67.03μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，慢慢加入三氟乙酸(67.03μmol,0.25mL)，室温反应3小时后反应完成。浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-吡唑-5-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇25(10mg)，产率：23.21％。
MS m/z(ESI):497.3[M+1].
实施例26
(S)-2-hydroxy-1-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)ethan-1-one
(S)-2-羟基-1-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙-1-酮
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.91mg,135.15μmol)、1-羟基苯并三唑(18.26mg,135.15μmol)、N-甲基吗啡啉(20.05mg,198.22μmol)、2-羟基乙酸12a(10.28mg, 135.15μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，反应5分钟后，加入(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(35mg,90.10μmol)，室温反应过夜。反应完成后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-羟基-1-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙-1-酮26(2.80mg)，产率：5.27％。
MS m/z(ESI):447.2[M+1].
实施例27
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-imidazol-2-yl)methyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-咪唑-2-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50mg,120.04μmol)、2-(溴甲基)-1H-咪唑27a(26.14mg,108.04μmol)、碘化钠(1.99mg,12.00μmol)、碳酸钾(36.50mg,264.10μmol)依次加入N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加热至65℃反应8小时。反应基本完成后，过滤，滤液经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-1-(1-((5-(4-((7-((1H-咪唑-2-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇27(10mg)，产率：12.96％。
MS(ESI):497.1[M+1].
实施例28
(S)-2-hydroxy-1-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-6-azaspiro[3.4]octan-6-yl)ethan-1-one
(S)-2-羟基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)乙-1-酮
将2-羟基乙酸12a(14.17mg,186.34μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(35.72mg,186.34μmol)、1-羟基苯并三唑(25.18mg,186.34μmol)、N-甲基吗啡啉(27.64mg,273.30μmol)加入二氯甲烷(2mL)溶液中，反应5分钟后，加入(S)-1-(1-((5-(4-((6-氮杂螺[3.4]辛-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇3(50mg,124.23μmol)，室温反应16小时。反应完成后，加水(50mL)，二氯甲烷(50mL×3)萃取三次后，合并有机相层，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-2-羟基-1-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)乙-1-酮28(5mg)，产率：6.30％。
MS m/z(ESI):461.2[M+1].
实施例29
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-3-oxopropanenitrile
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙腈
将2-氰基乙酸29a(15.32mg,180.07μmol，市售)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(34.52mg,180.07μmol)、1-羟基苯并三唑(24.33mg,180.07μmol)、N-甲基吗啡啉(26.71mg,264.10μmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中，反应5分钟后，加入(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(50mg,120.04μmol)，室温反应16小时。反应完成后，加水(50mL)，二氯甲烷(50mL×3) 萃取三次后，合并有机相，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-3-氧代丙腈29(3mg)，产率：3.97％。
MS m/z(ESI):484.2[M+1].
实施例30
(S)-1-(1-((5-(4-((7-(azetidin-3-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
tert-butyl
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidine-1-carboxylate
(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
室温下，将(S)-1-(1-((5-(4-((7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇1(26.81mg,64.36μmol)、3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯30a(16.53mg,96.53μmol,市售)溶于1,2-二氯乙烷(0.5mL)和甲醇(0.5mL)的混合溶液中，滴加乙酸(20mg,64.36μmol)，50℃反应6小时后，室温下缓慢加入氰基硼氢化钠(12.13mg,193.07μmol)，室温反应16小时。反应完成后，加水(1mL)淬灭，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯30b(25mg)，产率：67.95％。MS m/z(ESI):572.4[M+1].
第二步
(S)-1-(1-((5-(4-((7-(azetidin-3-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
室温下，将(S)-3-(2-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯30b(25mg,43.73μmol)溶于二氯甲烷(2mL)，滴加三氟乙酸(0.5g,4.39mmol)，室温反应4小时。反应完成后，浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(1-((5-(4-((7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇30(9mg)，产率：31.63％。MS m/z(ESI):472.3[M+1].
实施例31
(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)ethan-1-ol
(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙-1-醇
室温下，将(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(25mg,49.75μmol)、2-溴乙醇11a(6.84mg,54.73μmol,市售)、碳酸钾(27.51mg,199.01μmol)加入乙腈(0.5mL)中，60℃反应12小时。反应完成后，过滤，将滤液浓缩，经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-2-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙-1-醇(8mg)，产率：26.48％。
MS m/z(ESI):433.0[M+1].
实施例32
(S)-3-(6-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl)-3-oxopropanenitrile
(S)-3-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)-3-氧代丙腈
室温下，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(57.23mg,298.52μmol)、1-羟基苯并三唑(40.34mg,298.52μmol)、N-甲基吗啡啉(84.55mg,835.85μmol)、2-氰基乙酸32a(30.47mg,358.22μmol,市售)溶于二氯甲烷(2mL)，反应5分钟后，加入(S)-1-(1-((5-(4-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇6(60mg,119.41μmol)，室温反应过夜。反应完成后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-3-(6-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)-3-氧代丙腈32(20mg)，产率：27.94％。
MS m/z(ESI):456.2[M+1].
实施例33
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-4-基)甲酮
第一步
tert-butyl 4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxylate
4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33a(1g,3.02mmol,市售)、乙炔基三甲基硅烷33b(444.68mg,4.53mmol,639.83μL,市售)、双(三苯基膦)二氯化钯(Ⅱ)(352.28mg,452.75μmol)、三乙胺(305.43mg,3.02mmol)、碘化亚铜(57.48mg,301.83μmol)依次加入到甲苯(3mL)溶液中，室温条件下持续搅拌16小时，将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33c(820mg)，产率：97.22％。
MS m/z(ESI):224.1[M+1-56].
第二步
tert-butyl 4-ethynyl-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxylate
4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
将4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33c(800mg,2.86mmol)加入甲醇(2mL)中，随后加入氟化钾(332.65mg,5.73mmol)，室温条件下持续搅拌12小时。将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33d(370mg)，产率：62.36％。
MS m/z(ESI):152.1[M+1-56].
第三步
tert-butyl
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxylate
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(800mg,1.67mmol)、4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33d(363.24mg,1.75mmol)、氯化烯丙基钯(II)二聚体(121.84mg,333.81μmol)、三乙烯二胺(374.44mg,3.34mmol)、三叔丁基膦(10％in甲苯溶液)(67.54mg,333.81μmol)依次加入到乙腈(2mL)中， 室温反应过夜。反应完成后，加入水(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(100mL)，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33e(660mg)，产率：70.78％。MS m/z(ESI):559.2[M+1].
第四步
(S)-1-(1-((5-(4-((1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33e(660mg,1.18mmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。反应完全后，在冰浴下，加入饱和NaHCO3溶液，直到没有气泡产生(pH>7)，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：B体系)纯化，得到(S)-1-(1-((5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇33f(320mg)，产率：72.34％。
MS m/z(ESI):375.2[M+1].
第五步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-4-基)甲酮
将异烟酸33g(32.88mg,267.07μmol,市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇33f(50mg,133.53μmol)、N,N-二异丙基乙胺(34.52mg,267.07μmol)、(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(50.77mg,133.53μmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，室温条件下搅拌16小时。反应完成后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-4-基)甲酮33(13.2mg)，产率：15.99％。
MS m/z(ESI):480.3[M+1].
实施例34
(S)-4-((4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3, 6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methyl)benzoic acid
(S)-4-((4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)苯甲酸
将4-甲酰基苯甲酸34a(24.06mg,160.24μmol,市售)、(S)-1-(1-((5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇33f(50mg,133.53μmol)、乙酸(8.02mg,133.53μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌1小时。随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(28.30mg,133.53μmol)，室温条件下搅拌16小时。反应完成后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-((4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)苯甲酸34(7.35mg)，产率：8.66％。
MS m/z(ESI):509.0[M+1].
实施例35
((1R,5S)-bicyclo[3.1.0]hexan-6-yl)(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
((1R,5S)-双环[3.1.0]己烷-6-基)(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
第一步
3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)-5-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)phenyl)isoxazole
3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯基)异噁唑
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(8g,16.69mmol)、乙炔基三甲基硅烷33b(3.28g,33.38mmol,4.72mL,市售)、氯化烯丙基钯(II)二聚物(609.21mg,1.67mmol)和三乙烯二胺(3.74g,33.38mmol)以及三叔丁基膦(10％的甲苯溶液)(3.38g,1.67mmol)依次加入到乙腈(20mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌12小时。体系减压浓缩至干，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，后减压蒸馏，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯基)异噁唑35a(7.5g)，产率：99.94％。
MS m/z(ESI):450.3[M+1].
第二步
5-(4-ethynylphenyl)-3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazole
5-(4-乙炔基苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑
将3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((三甲基硅基)乙炔基)苯基)异噁唑35a(7.5g,16.68mmol)和氟化钾(1.94g,33.36mmol)依次加入到甲 醇(50mL)中，室温条件下持续搅拌5小时后反应完全，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，后减压蒸馏，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到5-(4-乙炔基苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑35b(5.8g)，产率：92.21％。
MS m/z(ESI):378.2[M+1].
第三步
1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl trifluoromethanesulfonate
1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯
将4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯33a(1.7g,5.13mmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时，反应完全后，向反应液中加入饱和NaHCO3溶液，直到没有气泡产生pH>7，随后加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯35c(1.1g)，产率：92％，将粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):232.1[M+1].
第四步
1-(2,2,2-trifluoroacetyl)-1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl trifluoromethanesulfonate
1-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯
在冰浴下将1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯35c(900mg,3.89mmol)、三乙胺(393.92mg,3.89mmol)依次加入到二氯甲烷(10mL)中，随后三氟乙酸酐(820mg,3.89mmol)逐滴加入到上述混合溶液中，然后逐渐升至室温持续搅拌20分钟，检测反应原料反应完全，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，后减压蒸馏，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到1-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯35d(1.17g)，产率：91％。
MS m/z(ESI):328.0[M+1].
第五步
2,2,2-trifluoro-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
2,2,2-三氟-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
在氩气氛围下将1-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯35d(1.13g,3.44mmol)、5-(4-乙炔基苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑35b(1g,2.65mmol)、碘化亚铜(50.46mg,264.95μmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(Ⅱ)(412.30mg,529.89μmol)、三乙胺(268.10mg,2.65mmol)依次加入到甲苯(5mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到2,2,2-三氟-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2- 基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮35e(400mg)，产率：27.22％。
MS m/z(ESI):555.3[M+1].
第六步
3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)-5-(4-((1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl)ethynyl)phenyl)isoxazole
3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑
将2,2,2-三氟-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮35e(400mg,721.29μmol)、碳酸钾(797.52mg,5.77mmol)依次加入到甲醇(10mL)和水(0.5mL)的混合溶液中，氩气置换三次后，将反应在70℃条件下搅拌2小时，反应完全后，将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，粗品经过硅胶柱层析(洗脱剂：B体系)纯化，得到3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(180mg)，产率：54.42％。
MS m/z(ESI):459.3[M+1].
第七步
bicyclo[3.1.0]hexan-6-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone双环[3.1.0]己-6-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将双环[3.1.0]己烷-6-羧酸35g(16.51mg,130.85μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、N-甲基吗啡啉(19.85mg,196.27μmol)、1-羟基苯并三唑(17.68mg,130.85μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.08mg,130.85μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到双环[3.1.0]己-6-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮35h(37mg)，粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):567.2[M+1].
第八步
((1R,5S)-bicyclo[3.1.0]hexan-6-yl)(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
((1R,5S)-双环[3.1.0]己烷-6-基)(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将双环[3.1.0]己-6-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮35h(37mg,65.29μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌半小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到((1R,5S)-双环[3.1.0]己烷-6-基)(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮35(4.05mg)，产率：9.88％。
MS m/z(ESI):483.2[M+1].
实施例36
(S)-cyclopropyl(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(S)-环丙基(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
第一步
cyclopropyl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
环丙基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将环丙烷羧酸36a(11.26mg,130.85μmol)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、N-甲基吗啡啉(19.85mg,196.27μmol)、1-羟基苯并三唑(17.68mg,130.85μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.08mg,130.85μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌6小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到环丙基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃 -2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮36b(34mg)，产率：98.68％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):527.3[M+1].
第二步
(S)-cyclopropyl(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(S)-环丙基(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将环丙基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮36b(34mg,64.56μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌半小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-环丙基(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮36(25.29mg)，产率：69.68％。
MS m/z(ESI):443.2[M+1].
实施例37
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮
第一步
1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethan-1-one
1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮
将2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙酸37a(16.63mg,130.85μmol)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、N-甲基吗啡啉(19.85mg,196.27μmol)、1-羟基苯并三唑(17.68mg,130.85μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.08mg,130.85μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌16小时，反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮37b(37mg)，产率：99.63％。直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):568.4[M+1].
第二步
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮
将1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮37b(37mg,65.18μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌半小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙-1-酮37(27.39mg)，产率：69.62％。
MS m/z(ESI):484.2[M+1].
实施例38
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyrazin-2-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡嗪-2-基)甲酮
第一步
pyrazin-2-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吡嗪-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将吡嗪-2-羧酸38a(16.24mg,130.85μmol)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、N-甲基吗啡啉(19.85mg,196.27μmol)、1-羟基苯并三唑(17.68mg,130.85μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.08mg,130.85μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌6小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到吡嗪-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮38b(36mg)，产率：97.45％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):565.3[M+1].
第二步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyrazin-2-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡嗪-2-基)甲酮
将吡嗪-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮38b(36mg,63.76μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌半小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡嗪-2-基)甲酮38(14.76mg)，产率：38.12％。
MS m/z(ESI):481.2[M+1].
实施例39
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-d ihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridazin-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(哒嗪-4-基)甲酮
第一步
pyridazin-4-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
哒嗪-4-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将哒嗪-4-羧酸39a(16.24mg,130.85μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、N-甲基吗啡啉(19.85mg,196.27μmol)、1-羟基苯并三唑(17.68mg,130.85μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(25.08mg,130.85μmol)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温条件下持续搅拌6小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到哒嗪-4-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮39b(36mg)，产率：97.45％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):565.3[M+1].
第二步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridazin-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(哒嗪-4-基)甲酮
将哒嗪-4-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮39b(36mg,63.76μmol)加入到二氯甲 烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌半小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(哒嗪-4-基)甲酮39(13.22mg)，产率：33.83％。
MS m/z(ESI):481.2[M+1].
实施例40
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyrimidin-5-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(嘧啶-5-基)甲酮
第一步
pyrimidin-5-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
嘧啶-5-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将嘧啶-5-羧酸40a(21.65mg,174.46μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(40mg,87.23μmol)、1-羟基苯并三唑(23.57mg,174.46μmol)、N-甲基吗啡啉(26.47mg,261.69μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33.44mg,174.46μmol)依次加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到嘧啶-5-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮40b(49mg)，产率：99.48％。直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):565.3[M+1].
第二步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyrimidin-5-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(嘧啶-5-基)甲酮
将嘧啶-5-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮40b(49mg,86.78μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(嘧啶-5-基)甲酮40(22.3mg)，产率：42.36％。
MS m/z(ESI):481.2[M+1].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.94(s,2H),7.88(d,J＝8.2Hz,2H),7.79(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(d,J＝2.1Hz,1H),7.62(d,J＝8.1Hz,2H),7.17(s,1H),6.34(s,1H),5.72(s,2H),5.26(q,J＝6.6Hz,1H),4.27(s,1H),4.13(s,2H),3.81(s,1H),2.41(s,2H),1.49(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例41
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydrofuran-3-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮
第一步
(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydrofuran-3-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮
将四氢呋喃-3-羧酸41a(20.26mg,174.46μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(40mg,87.23μmol)、1-羟基苯并三唑(23.57mg,174.46μmol)、N-甲基吗啡啉(26.47mg,261.69μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33.44mg,174.46μmol)依次加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮41b(48mg)，产率：98.85％，粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):557.3[M+1].
第二步
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydrofuran-3-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮
将(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮41b(48mg,86.23μmol)加入二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢呋喃-3-基)甲酮41(20.51mg)，产率：36.90％。
MS m/z(ESI):473.3[M+1].
实施例42
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(morpholin-3-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉-3-基)甲酮
第一步
morpholin-3-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吗啉-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将吗啉-3-羧酸42a(22.88mg,174.46μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(40mg,87.23μmol)、1-羟基苯并三唑(23.57mg,174.46μmol)、N-甲基吗啡啉(26.47mg,261.69μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33.44mg,174.46μmol)依次加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到吗啉-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮42b(45mg)，产率：90.24％。将粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):572.3[M+1].
第二步
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(morpholin-3-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉-3-基)甲酮
将吗啉-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮42b(45mg,78.72μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉-3-基)甲酮42(10.35mg)，产率：20.33％。
MS m/z(ESI):488.3[M+1].
实施例43
(S)-1-(1-((5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethyl)-1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
第一步
5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethyl)-1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl)ethynyl)phenyl)-3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazole
5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑
将2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基磺酸乙酯43a(25.02mg,130.85μmol)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(30mg,65.42μmol)、碳酸钾(9.04mg,65.42μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，60℃条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑43b(35mg)，产率：96.63％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):554.4[M+1].
第二步
(S)-1-(1-((5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)ethyl)-1,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl)ethynyl)phenyl)isoxazol-3-yl)methyl)-1H-imidazol-2-yl)ethan-1-ol
(S)-1-(1-((5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇
将5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑43b(35mg,63.22μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到 (S)-1-(1-((5-(4-((1-(2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑-3-基)甲基)-1H-咪唑-2-基)乙-1-醇43(10.69mg)，产率：28.98％。
MS m/z(ESI):470.3[M+1].
实施例44
(S)-3-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)propanenitrile
(S)-3-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈
第一步
3-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)propanenitrile
3-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈
将丙烯腈44a(13.89mg,261.69μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(60mg,130.85μmol)、碳酸钾(36.17mg,261.69μmol)依次加入到乙腈(1mL)和水(0.5mL)中，室温条件下持续搅拌持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到3-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈44b(66mg)，产率：98.59％。将粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):512.3[M+1].
第二步
(S)-3-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)propanenitrile
(S)-3-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈
将3-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈44b(66mg,129.00μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-3-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙腈44(32.38mg)，产率：46.35％。MS m/z(ESI):428.2[M+1].
实施例45
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-3-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-3-基)甲酮
第一步
pyridin-3-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吡啶-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将烟酸45a(21.48mg,174.46μmol,市售)、3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)-5-(4-((1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)乙炔基)苯基)异噁唑35f(40mg,87.23μmol)、1-羟基苯并三唑(23.57mg,174.46μmol)、N-甲基吗啡啉(26.47mg,261.69μmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(33.44mg,174.46μmol)依次加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温条件下持续搅拌16小时。反应完全后，加水(50mL)，加入二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到吡啶-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶 -1(2H)-基)甲酮45b(49mg)，产率：99.66％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):564.3[M+1].
第二步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-3-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-3-基)甲酮
将吡啶-3-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮45b(49mg,86.93μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，随后滴加三氟乙酸(0.5mL)，室温条件下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-3-基)甲酮45(37.08mg)，产率：70.42％。
MS m/z(ESI):480.2[M+1].
按照本发明实施例1-45的合成方法合成实施例46-56，结构和表征数据如下表所示：
实施例57
(S)-4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carbaldehyde
(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛
第一步
4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carbaldehyde
4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(250mg,1.16mmol,市售)、三乙胺(468.92mg,4.63mmol,642.35μL)依次加入到甲酰胺(5.13mL)中，室温下持续搅拌12小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，得到4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57b(220mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):208.0[M+1].
第二步
4-ethynyl-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carbaldehyde
4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛
将4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57b(220mg,1.06mmol)、氟化钾(308.23mg,5.31mmol)依次加入到甲醇(5mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干,得到4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57c(140mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):136.0[M+1].
第三步
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carbaldehyde
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(250mg,495.50μmol)、4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57c(118.19mg,743.26μmol)、三乙烯二胺(111.16mg,991.01μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(36.17mg,99.10 μmol)依次加入到乙腈(2.0mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶层析柱(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57d(240mg)，产率89.59％。MS m/z(ESI):487.3[M+1].
第四步
(S)-4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carbaldehyde
(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛
将4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57d(220mg,452.15μmol)、三氟乙酸(0.5mL)加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲醛57(59.7mg)，产率25.05％。
MS m/z(ESI):402.9[M+1].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.91–7.85(m,2H),7.79(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝2.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.18(s,1H),6.32–6.21(m,1H),5.73(s,2H),5.27(q,J＝6.6Hz,1H),4.04(dq,J＝20.9,3.0Hz,2H),3.55(t,J＝5.7Hz,2H),2.36(dq,J＝5.8,2.9Hz,1H),2.26(h,J＝2.7Hz,1H),1.50(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例58
(S)-4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxamide
(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺
第一步
4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxamide
4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、三乙胺(84.64mg,836.43μmol,115.94μL)依次加入四氢呋喃(1.95mL)中，再加入异氰酸根合三甲基硅烷58a(41.76mg,362.45μmol,49.13μL,市售)，室温反应16小时。反应完成后，浓缩得到4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58b(50mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):223.0[M+1].
第二步
4-ethynyl-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxamide
4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺
将4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58b(50mg,224.86μmol)、氟化钾(65.32mg,1.12mmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，减压浓缩得到4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58c(20mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):151.1[M+1].
第三步
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxamide
4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺
在氩气氛围下，将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(50mg,104.32μmol)、4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58c(23.50mg,156.47μmol)、三乙烯二胺(23.40mg,208.63μmol)、氯化烯丙基钯(II)二聚物(7.62mg,20.86μmol)、三叔丁基膦(10％in甲苯溶液)(42.21mg,20.86μmol,10％purity)依次加入到乙腈(2mL)中，氩气置换后，室温条件下持续搅拌4小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶层析柱(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58d(40mg)，产率76.45％。
MS m/z(ESI):502.3[M+1].
第四步
(S)-4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridine-1(2H)-carboxamide
(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺
将4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58d(40mg,79.75μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酰胺58(13.5mg)，产率30.26％。
MS m/z(ESI):418.2[M+1].
实施例59
(S)-2-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)acetamide
(S)-2-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
第一步
2-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)acetamide
2-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
将2-碘乙酰胺59a(123.77mg,669.14μmol,市售)、4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(100mg,557.62μmol)、碳酸铯(363.37mg,1.12mmol)依次加入到乙腈(2mL)中，室温条件下持续搅拌12小时，将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，随后加入乙酸乙酯(50mL)与水(30mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去有机溶剂，得到2-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59b(130mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):237.2[M+1].
第二步
2-(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)acetamide
2-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
将2-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59b(130mg,549.95μmol)、氟化钾(95.86mg,1.65mmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温条件下持续搅拌16小时，将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，得到2-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59c(80mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):165.2[M+1].
第三步
2-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)acetamide
2-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(150mg,312.95μmol)、2-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59c(56.53mg,344.24μmol)、三乙烯二胺(70.21mg,625.90μmol)、氯化烯丙基钯(II)二聚物(22.85mg,62.59μmol)和三叔丁基膦(10％in甲苯溶液)(12.66mg,62.59μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，氩气置换后，室温条件下持续搅拌4小时。将反应液减压蒸馏除去有机溶剂，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到2-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59d(108mg)，产率66.93％。
MS m/z(ESI):516.3[M+1].
第四步
(S)-2-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)acetamide
(S)-2-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺
将2-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59d(50mg,96.97μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温下持续搅拌3小时。浓缩得到粗品经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-2-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酰胺59(26.0mg)，产率43.60％。MS m/z(ESI):431.9[M+1].
实施例60
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(morpholino)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮
第一步
morpholino(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吗啉代(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(62.50mg,278.81μmol)、吗啉60a(48.58mg,557.62μmol,49.07μL)、三光气(99.28mg,334.57μmol)和三乙胺(169.28mg,1.67mmol,235.11μL)依次加入到四氢呋喃(1.72mL)中，室温下搅拌12小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相以饱和氯化钠 溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经过硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到吗啉代(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮60b(40mg)，产率49.06％。
MS m/z(ESI):293.0[M+1].
第二步
(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(morpholino)methanone
(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮
将吗啉代(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮60b(40mg,136.78μmol)、氟化钾(39.73mg,683.88μmol)依次加入到甲醇(1mL)中，室温下持续搅拌4小时。体系减压浓缩至干，向残留物中加入乙腈(10mL)，过滤，滤液再浓缩干，得到(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮60c(20mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):221.0[M+1].
第三步
morpholino(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吗啉代(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(25mg,49.55μmol)、(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮60c(18.19mg,74.33μmol)、三乙烯二胺(11.12mg,99.10μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(3.62mg,9.91μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到吗啉代(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮60d(20mg)，产率70.61％。
MS m/z(ESI):572.0[M+1].
第四步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(morpholino)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮
吗啉代(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮60d(20mg,34.99μmol)、三氟乙酸(0.3mL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基) 甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吗啉代)甲酮60(2.5mg)，产率11.11％。
MS m/z(ESI):487.9[M+1].
实施例61
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-2-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮
第一步
pyridin-2-yl(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吡啶-2-基(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、吡啶甲酸61a(51.49mg,418.22μmol,市售)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2.0mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到吡啶-2-基(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮61b(55mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):285.1[M+1].
第二步
(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-2-yl)methanone
(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮
将吡啶-2-基(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮61b(55mg,193.37μmol)、氟化钾(56.17mg,966.85μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮61c(30mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):213.0[M+1].
第三步
pyridin-2-yl(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
吡啶-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮61c(21.03mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到吡啶-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮61d(25mg)，产率74.59％。
MS m/z(ESI):563.9[M+1].
第四步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(pyridin-2-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮
吡啶-2-基(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮61d(25mg,44.35μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(吡啶-2-基)甲酮61(15.2mg)，产率56.00％。
MS m/z(ESI):480.2[M+1].
实施例62
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
第一步
1-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、乙酸酐(42.70mg,418.22μmol,39.53μL)和三乙胺(84.64mg,836.43μmol,116.26μL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62a(50mg)，产率81.01％。
MS m/z(ESI):222.0[M+1].
第二步
1-(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62a(50mg,225.87μmol)、氟化钾(65.61mg,1.13mmol)依次加入到甲醇(1mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干，得到1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62b(30mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):150.0[M+1].
第三步
1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62b(14.78mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62c(25mg)，产率83.99％。
MS m/z(ESI):500.9[M+1].
第四步
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62c(25mg,49.94μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮62(6.8mg)，产率24.38％。MS m/z(ESI):417.2[M+1].
实施例63
(S)-2-hydroxy-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
(S)-2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
第一步
2-hydroxy-1-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
2-羟基-1-(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、2-羟基乙酸12a(42.41mg,557.62μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2.0mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测反应原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到2-羟基-1-(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮63a(40mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):237.9[M+1].
第二步
1-(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-hydroxyethan-1-one
1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-羟基乙-1-酮
将2-羟基-1-(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮63a(40mg,168.51μmol)、氟化钾(48.95mg,842.57μmol)依次加入到甲醇(1mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-羟基乙-1-酮63b(20mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):166.0[M+1].
第三步
2-hydroxy-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-羟基乙-1-酮63b(16.37mg, 89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮63c(25mg)，产率81.39％。
MS m/z(ESI):516.9[M+1].
第四步
(S)-2-hydroxy-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
(S)-2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮63c(25mg,48.39μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-2-羟基-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮63(1.3mg)，产率4.62％。
MS m/z(ESI):433.2[M+1].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89–7.86(m,2H),7.76–7.75(d,J＝4.0Hz,1H),7.67–7.66(d,J＝4.0Hz,1H),7.62–7.60(m,3H),7.17–7.16(d,J＝4.0Hz,1H),6.27–6.24(m,1H),5.73(s,2H),5.24(q,J＝6.6Hz,1H),4.41–4.04(m,4H),3.64–3.61(m,1H),3.50–3.47(m,1H),2.35–2.28(m,2H),1.50(d,J＝6.6Hz,3H).
实施例64
(1,4-dioxan-2-yl)(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
第一步
(1,4-dioxan-2-yl)(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、1,4-二氧六环-2-羧酸64a(55.25mg,418.22μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2.0mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测反应原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64b(45mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):294.0[M+1].
第二步
(1,4-dioxan-2-yl)(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64b(45mg,153.36μmol)、氟化钾(8.91mg,153.36μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64c(25mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):222.1[M+1].
第三步
(1,4-dioxan-2-yl)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64c(21.93mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64d(25mg)，产率73.42％。
MS m/z(ESI):573.0[M+1].
第四步
(1,4-dioxan-2-yl)(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64d(25mg,43.66μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(1,4-二氧杂环己烷-2-基)(4-((3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮64(3.8mg)，产率14.33％。
MS m/z(ESI):488.9[M+1].
实施例65
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮
第一步
(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、四氢-2H-吡喃-2-羧酸65a(54.43mg,418.22μmol,47.74μL,市售)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)和N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(1.95mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮65b(60mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):292.0[M+1].
第二步
(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanone
(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮
将(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮65b(60mg,205.86μmol)、氟化钾(59.80mg,1.03mmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮65c(30mg)，粗品直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):220.1[M+1].
第三步
(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮65c (21.73mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2mL)中，置换氩气3次，室温下搅拌12小时。体系减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮65d(20mg)，产率58.94％。
MS m/z(ESI):570.9[M+1].
第四步
(4-((4-(3-((2-((S)-1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮
将(四氢-2H-吡喃-2-基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮65d(20mg,35.05μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(4-((4-(3-((2-((S)-1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-2-基)甲酮65(4.9mg)，产率22.44％。
MS m/z(ESI):486.9[M+1].
实施例66
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢2H-吡喃-4-基)甲酮
第一步
(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(四氢-2H-吡喃-4-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、四氢-2H-吡喃-4-羧酸66a(54.43mg,418.22μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(1.85mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测反应原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到(四氢-2H-吡喃-4-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮66b(50mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):292.0[M+1].
第二步
(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methanone
(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮
将(四氢-2H-吡喃-4-基)(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮66b(50mg,171.55μmol)、氟化钾(49.84mg,857.75μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮66c(25mg)，直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):220.0[M+1].
第三步
(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methanone
(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮66c(23.01mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2.0mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基) 乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮66d(25mg)，产率73.68％。
MS m/z(ESI):571.0[M+1].
第四步
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)methanone
(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢2H-吡喃-4-基)甲酮
将(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢-2H-吡喃-4-基)甲酮66d(20mg,35.05μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(四氢2H-吡喃-4-基)甲酮66(15.8mg)，产率71.39％。
MS m/z(ESI):486.9[M+1].
实施例67
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-3-methoxypropan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮
第一步
3-methoxy-1-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)propan-1-one
3-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、3-甲氧基丙酸67a(43.54mg,418.22μmol,39.29μL,市售)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到3-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮67b(50mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):266.0[M+1].
第二步
1-(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-3-methoxypropan-1-one
1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮
将3-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮67b(50mg,188.38μmol)、氟化钾(54.72mg,941.89μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮67c(20mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):194.0[M+1].
第三步
3-methoxy-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)propan-1-one
3-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮67c(20.28mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2.0mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到3-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮67d(25mg)，产率77.20％。
MS m/z(ESI):545.0[M+1].
第四步
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-3-methoxypropan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮
将3-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙-1-酮67d(20mg,36.72μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-甲氧基丙-1-酮67(14.0mg)，产率64.70％。
MS m/z(ESI):461.0[M+1].
实施例68
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-methoxyethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮
第一步
2-methoxy-1-(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
2-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、2-甲氧基乙酸68a(37.67mg,418.22μmol,市售)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测原料反应完全，体系减压浓 缩至干，得到2-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮68b(50mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):252.0[M+1].
第二步
1-(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-methoxyethan-1-one
1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮
将2-甲氧基-1-(4-((三甲基硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮68b(50mg,198.89μmol)、氟化钾(57.78mg,994.45μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮68c(20mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):180.0[M+1].
第三步
2-methoxy-1-(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)ethan-1-one
2-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、1-(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮68c(18.81mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2.0mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到2-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮68d(25mg)，产率79.24％。
MS m/z(ESI):531.0[M+1].
第四步
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)-2-methoxyethan-1-one
(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮
将2-甲氧基-1-(4-(4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙-1-酮68d(20mg,37.69μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min； 流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-1-(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-2-甲氧基乙-1-酮68(13.0mg)，产率58.89％。
MS m/z(ESI):446.9[M+1].
实施例69
(S)-(1-hydroxycyclopropyl)(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(S)-(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
第一步
(1-hydroxycyclopropyl)(4-((trimethylsilyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1-羟基环丙基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将4-((三甲硅基)乙炔基)-1,2,3,6-四氢吡啶57a(50mg,278.81μmol)、1-羟基环丙烷-1-羧酸69a(42.69mg,418.22μmol,市售)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(127.21mg,334.57μmol)、N,N-二异丙基乙胺(108.10mg,836.43μmol,145.69μL)依次加入到二氯甲烷(2mL)中，室温条件下持续搅拌4小时。质谱检测原料反应完全，体系减压浓缩至干，得到(1-羟基环丙基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮69b(50mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):263.9[M+1].
第二步
(4-ethynyl-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)(1-hydroxycyclopropyl)methanone
(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(1-羟基环丙基)甲酮
(1-羟基环丙基)(4-((三甲硅基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮69b(50mg,189.82μmol)、氟化钾(55.14mg,949.10μmol)依次加入到甲醇(2mL)中，室温下持续搅拌3小时。体系减压浓缩至干，加入乙腈(3mL)溶解，过滤，滤液减压浓缩至干得到(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(1-羟基环丙基)甲酮69c(30mg)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):191.9[M+1].
第三步
(1-hydroxycyclopropyl)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将5-(4-碘苯基)-3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑1i(30mg,59.46μmol)、(4-乙炔基-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)(1-羟基环丙基)甲酮69c(20.07mg,89.19μmol)、三乙烯二胺(13.34mg,118.92μmol)和氯化烯丙基钯(II)二聚物(4.34mg,11.89μmol)依次加入到乙腈(2.0mL)中，置换氩气3次，室温下持续搅拌3小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(15mL)，分液，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮69d(25mg)，产率77.48％。
MS m/z(ESI):543.0[M+1].
第四步
(S)-(1-hydroxycyclopropyl)(4-((4-(3-((2-(1-hydroxyethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)isoxazol-5-yl)phenyl)ethynyl)-3,6-dihydropyridin-1(2H)-yl)methanone
(S)-(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
将(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-((1S)-1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮69d(20mg,36.86μmol)、三氟乙酸(0.5mL)依次加入到二氯甲烷(1mL)中，室温下持续搅拌1小时。体系减压浓缩至干，残留物经过制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-(1-羟基环丙基)(4-((4-(3-((2-(1-羟乙基)-1H-咪唑-1-基)甲基)异噁唑-5-基)苯基)乙炔基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮69(2.2mg)，产率9.83％。
MS m/z(ESI):458.9[M+1].
生物学评价
测试例1、本发明化合物对LpxC酶学活性抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组Pseudomonas aeruginosa LpxC酶学活性的抑制程度。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液。反应在96孔微孔板中进行，首先向孔中加入20μL重组Pseudomonas aeruginosa LpxC(购自Signalway Antibody，货号为AP74647-2)，终浓度分别为5nM；加入5μL待测化合物，化合物进行4倍稀释，8个浓度点，浓度范围为0.61-10000nM；加入5μL LpxC底物UDP-3-O-(R-3-hydroxydecanoyl)-GlcNAc(购自Biosynth Carbosynth，货号为mu75071)，底物终浓度为10μM，于25℃孵育120分钟。随后向反应体系中加入20μL的2.0mg/mL荧光胺(购自sigmaaldrich，货号为F9015，溶剂为1:1二甲基甲酰胺/乙腈)，混匀，反应10分钟；最后加入50μL的200mM磷酸钠缓冲液(pH 8.0)终止反应，使用微量板读数仪(BMG)进行读数，激发波长和发射波长分别为390和495nm。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较，计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物的IC50值，具体如下表1所示。
表1本发明化合物对LpxC酶学活性抑制结果
结论：本发明优选化合物对重组Pseudomonas aeruginosa LpxC酶活性抑制的IC50<100nM，对于LpxC酶活性具有显著抑制作用。
测试例2、本发明化合物抗菌活性评价
体外最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定按照CLSI的指南开展，使用微量肉汤稀释法进行测试。
将实验流程简述如下：受试化合物溶解于DMSO中制备为12.8mg/mL贮存液，而后使用DMSO配制成11个两倍稀释的100×高浓度工作液(体系终浓度为64μg/mL-0.06μg/mL)。将-80℃甘油冻存的菌株(K.Pneumoniae ATCC13883、K.Pneumoniae ATCC51504和E.coli ATCC 25922)接种到固体琼脂培养基，放置培养箱35℃培养18～24h，完成菌株准备工作，而后收集适量固体平板培养物重悬于生理盐水，混匀，用浊度仪将菌悬液浊度调节至合适的浊度，约含1×108cfu/mL细菌，然后将调好浊度的菌悬液用测试培养基(种类：CAMHIIB，购自BD公司)稀释至细菌浓度为5×105cfu/mL，完成接种液制备。将198μL的接种液接种于96孔板中，随后加入2μL的化合物的100×高浓度工作液，之后将96孔板置于35℃培养18～24h，培养后，通过肉眼观察测试板，完全抑制菌体生长的最低药物浓度为该化合物的最低抑菌浓度(MIC)，具体如表2所示。
表2本发明化合物的抗菌活性测试结果
结论：本发明优选化合物对于肺炎杆菌(K.Pneumoniae ATCC13883、K.Pneumoniae ATCC51504)和大肠杆菌(E.coli ATCC 25922)的体外最低抑菌度小于50μg/mL；对于肺炎杆菌和大肠杆菌均具有较好的抑制作用。

Claims (10)

  1. 一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    其中：
    W选自O、S(O)r或N；
    环C选自5～10元螺杂环基或单环杂环基，其中所述的单环杂环基含有一个双键；
    X、Y、Z、Q各自独立地选自CRA或N原子，且X、Y、Z、Q中至多有两个原子同时为N原子；
    RA选自氢原子、卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    R1选自不存在、氢原子、羟基、氰基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R3、-C(O)NR6R7或-S(O)rR4；其中所述的烷氧基、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个RB所取代；
    R3、R4各自独立地选自氢原子、羟基、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基；其中所述的烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    RB各自独立地选自氰基、卤素、烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    或者，两个RB与相连接的同一个碳原子形成一个-C(＝O)-；
    R2相同或不同，各自独立地选自羟基、氰基、卤素、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    R5各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、 环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中所述的4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
    m为0，1或2；m优选为0；且
    r各自独立地为0，1或2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    环C、R1、R2、W和m的定义如权利要求1中所述。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中W为N。
  4. 根据权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环C选自：
  5. 根据权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    R1选自氢原子、羟基、烷基、环烷基、杂环基、-C(O)R3、-C(O)NR6R7或-S(O)rR4；其中所述的烷基或环烷基任选进一步被一个或多个RB所取代；
    RB各自独立地选自氰基、羟基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的杂环基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氰基、烷氧基、卤代烷基、＝O、-C(O)OR8或-C(O)NR9R10的取代基所取代；
    或者，两个RB与相连接的同一个碳原子形成一个-C(＝O)-；
    R3选自氢原子、烷基、环烷基、杂芳基或杂环基；其中所述的烷基、环烷基、杂芳基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、烷氧基、氰基、杂芳基、＝O、-NR9R10、-C(O)OR8或-C(O)NR9R10的取代基所取代；
    R4为氢原子或羟基；
    R5各自独立地选自氢原子、烷基或羟基烷基；
    R6、R7各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选被一个或多个选自羟基、氰基、卤素或烷氧基的取代基所取代；
    R8、R9、R10各自独立地选自氢原子或烷基；所述烷基优选为甲基；
    r为2。
  6. 根据权利要求1～5中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的化合物为：
  7. 一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～6中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合物。
  8. 根据权利要求1～6中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求7所述的药物组合物在制备LPXC抑制剂中的用途。
  9. 根据权利要求1～6中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求7所述的药物组合物在制备治疗由LPXC介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由LPXC介导的疾病选自革兰氏阴性菌导致的细菌感染。
  10. 根据权利要求9所述的用途，其中所述的革兰氏阴性菌选自大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌或脑膜炎双球菌。
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