CN119700946A - Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Ryk‑Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明提供了Ryk‑Fc融合蛋白的新应用，所述新应用为Ryk‑Fc融合蛋白在制备治疗癌性疼痛的药物中的应用，Ryk‑Fc融合蛋白通过抑制背根节神经元中的TRPV1蛋白的表达实现治疗癌性疼痛的功能，且在治疗过程中具有很强的针对性，治疗效果显著，副作用低。本发明为研发癌性疼痛的治疗药物提供了理论依据，为制备治疗癌性疼痛的新型药物提供了可行方案。

Description

Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用。

背景技术

癌性疼痛是一种难以治愈的慢性疼痛，疼痛症状严重且伴随患者终生，是长期侵害人类健康的严重疾患之一。随着全球癌症发病率的增加以及癌症慢性化的趋势加重，治疗癌性疼痛的医疗需求及相关财政负担也日益增加。据报道，约60～90％的晚期癌症患者承受着不同程度的疼痛，其中约30％的患者承受着持续、剧烈且无法缓解的疼痛。癌性疼痛的防治是临床疼痛管理的棘手问题，也是需要迫切满足的医疗需求。

临床上尚没有可靠的特效药物。目前，用于治疗癌性疼痛的药物主要包括非甾体类抗炎药、阿片类药物以及双磷酸盐类药物。这些药物对于中、重度的癌性疼痛治疗效果不佳，无法达到充分缓解疼痛的目的，且存在安全性、成瘾性和药物耐受等不良反应和副作用。世界卫生组织推荐的“三阶梯疗法”是最具影响力的针对癌性疼痛的治疗指南，但仍有10％～20％的癌痛患者不能通过这种疗法有效地控制疼痛。因此，提供新的治疗癌性疼痛的药物是至关重要的。

发明内容

本发明的目的是提供Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明技术方案之一，Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用。

本发明技术方案之二，一种抗癌性疼痛药物，包括Ryk-Fc融合蛋白。

本发明技术方案之三，一种药物组合物，包括Ryk-Fc融合蛋白。

基于上述技术方案，本发明具有以下技术效果：

本发明提供了Ryk-Fc融合蛋白的新应用，所述新应用为Ryk-Fc融合蛋白在制备治疗癌性疼痛的药物中的应用，Ryk-Fc融合蛋白通过抑制背根节神经元中的TRPV1蛋白的表达实现治疗癌性疼痛的功能，且在治疗过程中具有很强的针对性，治疗效果显著，副作用低。本发明为研发癌性疼痛的治疗药物提供了理论依据，为制备治疗癌性疼痛的新型药物提供了可行方案。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为单次Ryk-Fc给药可以抑制TCI造模引起的机械痛(A)和热痛行为(B)。

图2为单次Ryk-Fc给药可以抑制TCI造模引起的自发痛行为。其中，A为自发性缩足次数，B为跛行评分。

图3为多次Ryk-Fc给药可以抑制TCI造模引起的疼痛行为。其中，A为机械缩足阈值，B为热缩足阈值。

图4为Ryk的表达水平在骨癌痛大鼠背根节中显著升高。其中，A为背根节中Ryk蛋白表达例图，B为Ryk蛋白FL段表达量统计，C为Ryk蛋白CTF段表达量统计，D为Ryk蛋白ICD段蛋白表达量统计。

图5为鞘内注射Ryk-Fc融合蛋白可调控骨癌痛大鼠背根节神经元中TRPV1的蛋白表达水平。其中，A为背根节中TRPV1蛋白表达例图，B为TRPV1蛋白表达量统计。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所用试剂或原料，如未特别说明，均购自商业渠道或已公开。

本发明实施例提供Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用。

在一些具体的实施方案中，所述癌性疼痛包括由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的中重度疼痛。

在一些具体的实施方案中，所述中重度疼痛的表现形式为触诱发痛、痛觉过敏或自发性疼痛。

本发明实施例还提供一种抗癌性疼痛药物，包括Ryk-Fc融合蛋白。

在一些具体的实施方案中，还包括药学上可接受的辅料。

在一些具体的实施方案中，所述药物的剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、喷雾剂、膜剂、栓剂、滴鼻剂或滴丸剂。

在一些具体的实施方案中，所述药物的给药途径为静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或经皮给药。

本发明实施例还提供一种药物组合物，包括Ryk-Fc融合蛋白。

本发明首次发现Ryk-Fc融合蛋白具有缓解癌性疼痛的作用，可用于制备治疗癌性疼痛的药物。Ryk-Fc融合蛋白通过抑制TRPV1在背根节神经元表达的表达来实现上述功能的，其中，TRPV1为是一种非选择性阳离子通道，在外周伤害性感受器中表达丰富，在骨癌痛的外周敏化中发挥重要作用。肿瘤压迫或者浸润导致的神经损伤，促使TRPV1在背根节神经元表达，引起外周敏化，产生疼痛。因此，Ryk-Fc融合蛋白具有制备治疗癌性疼痛药物的潜力，且对疼痛的治疗具有针对性，疗效显著。

实施例1

1TCI造模

TCI造模，胫骨移植肿瘤细胞诱导骨癌疼痛，产生癌症相关的热痛觉过敏、机械异常性疼痛以及自发和运动诱发的疼痛行为。从先前接受过Walker256乳腺癌细胞的大鼠腹水中提取肿瘤细胞。将肿瘤细胞(1×10⁵个/mL，5mL)注入左胫骨髓内腔诱导大鼠骨癌痛(BCP)。简单地说，用异氟烷(1.2％)麻醉大鼠，在膝盖附近做一个约1厘米长的浅表切口，露出髌骨韧带。将一根23号针头插入胫骨腔，针头连接25毫升显微注射器，注射器中含有5毫升空气、5毫升肿瘤细胞悬浮液(5×10⁵)和5毫升空气的肿瘤细胞。将注射器内容物缓慢注入胫骨腔内，并保持针头2分钟使细胞扩散。然后拔针时用骨蜡封住针孔。用牙骨水泥封闭注射部位骨表面，防止肿瘤细胞渗漏。注射煮沸的肿瘤细胞作为假手术对照。

在TCI和假手术对照治疗大鼠中评估疼痛样行为，包括自发性疼痛、机械和热刺激引起的疼痛。机械性异常性痛是指在每个后爪的足底表面机械压痕的爪撤退阈值显著降低。用von Frey细丝(麻醉，意大利乌戈)测量停药量，方法与前面描述的类似。简而言之，这些动物被单独放置在一个装有金属网地板的倒置通风笼子里。冯弗雷丝从下垂直地应用于每只后爪的足底中部表面，直到爪子被收回。每次刺激持续时间约为1～2秒，刺激间间隔约为10～15秒。热痛觉过敏是由对热刺激反应的足部退缩潜伏期显著缩短决定的。镇痛仪一台(型号390G；IITC生命科学公司(Woodland Hills，CA)被用来提供热源。协议与前面描述的类似简而言之，每只大鼠被单独放在一个倒置的笼子里(22-15厘米)，笼子里有光滑的、温度可控的玻璃地板。热源集中在后爪的一部分，并向该部位提供辐射热刺激。当后爪移动时，刺激会自动关闭(或在25秒后，以防止组织损伤)。在所有实验中，热刺激的强度保持恒定。热刺激每后爪4次，间隔5～8分钟。自发和运动诱发的类疼痛行为也进行了分析自发性攻击行为通过测量2分钟内后腿退缩或舔舐的次数来评估。通过测量自主行走时的肢体使用情况来评估运动诱发性疼痛，其评分范围为0至4分：0-5分正常使用；15轻度跛行；25明显跛行；3.四肢不能动(部分)；45岁，四肢不能使用。

实施例2

考察单次Ryk-Fc融合蛋白鞘内给药对TCI造模引起的疼痛的治疗作用：

随机将12只雌性大鼠分为Ryk-Fc组和Vehcle组，在TCI造模后第7天，按分组鞘内注射Ryk-Fc融合蛋白(2μg/只，Cat#:4649-RK，R&D，Minneapolis,MN)和溶剂对照，检测造模前和造模后第七天24小时内21内天的机械痛敏、热/冷痛敏和自发痛行为改变，明确Ryk-Fc融合蛋白对骨癌痛的短期治疗作用。其中TCI造模和疼痛行为学检测方法见实施例1。

实验结果如图1和2所示，在TCI造模后，与溶剂组相比，在造模早期单次Ryk-Fc鞘内给药可以显著缓解大鼠的机械痛敏、热痛敏和自发痛行为，说明Ryk-Fc融合蛋白显著抑制癌性疼痛的发生和发展。

实施例3

考察多次Ryk-Fc融合蛋白鞘内给药对TCI造模引起的疼痛的治疗作用：

随机将12只雌性大鼠分为Ryk-Fc组和Vehicle组，在TCI造模后第7、8、9天，鞘内注射Ryk-Fc融合蛋白(2μg/只，Cat#:4649-RK，R&D，Minneapolis,MN)和溶剂对照，检测造模前和造模后21内天的机械痛敏、热/冷痛敏行为改变，明确Ryk-Fc融合蛋白对骨癌痛的长期治疗作用。其中TCI造模和疼痛行为学检测方法见实施例1。

实验结果如图3所示，在TCI造模后，与溶剂组相比，连续三次Ryk-Fc鞘内给药可以长期抑制大鼠的机械痛敏、热痛敏和自发痛行为，说明Ryk-Fc融合蛋白连续给药可以长期抑制癌性疼痛的发展。

实施例4

免疫蛋白印迹法检测大鼠背根节中Ryk蛋白的表达

随机将20只雌性大鼠分为假手术组和TCI模型组，并分别在造模后1天、5天、7天和14天时将大鼠脱颈处死，取出大鼠L3-L5脊髓节段对应的背根节组织，用免疫蛋白印迹法检测背根节中Ryk蛋白的表达情况。

实验结果图4所示，与Sham组相比，TCI组大鼠背根节中Ryk蛋白的表达量在TCI造模后显著增加，说明大鼠在接种肿瘤细胞后，其背根节中的Ryk蛋白的表达量会显著增加，而接种灭活的肿瘤细胞不会导致其含量增加。

实施例5

免疫蛋白印迹法检测大鼠背根节中TRPV1的表达

随机将12只雌性大鼠分为Sham+IgG组、TCI+IgG组和TCI+Ryk-Fc组，并在TCI造模后(步骤如上所述)7-9天给TCI+Ryk-Fc组鞘内注射Ryk-Fc融合蛋白(2μg/只，同上)，其余两组注射相同含量IgG，之后将大鼠脱颈处死，取出大鼠L3-L5脊髓节段对应的背根节组织，用免疫蛋白印迹法检测背根节中TRPV1蛋白的表达情况。

实验结果图5所示，与TCI+IgG组相比，TCI+Ryk-Fc组大鼠DRG中TRPV1蛋白的表达量在用药后显著降低，说明向大鼠鞘内注射Ryk-Fc融合蛋白，可以调控背根节中TRPV1蛋白的表达。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为了清楚说明本发明所作的举例，而并非对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术用户来说，在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (8)

1.Ryk-Fc融合蛋白在制备抗癌性疼痛药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述癌性疼痛包括由肿瘤压迫或肿瘤浸润导致的中重度疼痛。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中重度疼痛的表现形式为触诱发痛、痛觉过敏或自发性疼痛。

4.一种抗癌性疼痛药物，其特征在于，包括Ryk-Fc融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的抗癌性疼痛药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求4所述的抗癌性疼痛药物，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、喷雾剂、膜剂、栓剂、滴鼻剂或滴丸剂。

7.根据权利要求4所述的抗癌性疼痛药物，其特征在于，所述药物的给药途径为静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或经皮给药。

8.一种药物组合物，其特征在于，包括Ryk-Fc融合蛋白。