CN119684405A - 花生内源肽Hypogin衍生物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物化学领域，具体涉及花生内源多肽Hypogin衍生物及其应用。本发明首先对Hypogin内源肽进行结构简化，寻找活性片段，设计合成了系列I的Hypogin衍生物。选择系列I中活性较好的Hypogin衍生物与肉桂酸结合，设计合成系列II化合物。研究发现II‑1化合物能够较好的抑制齐整小核菌菌丝生长，同时发现I‑12影响齐整小核菌PI3K的信号通路，潜在靶标为齐整小核菌的GPCR、RTK及PI3K。细胞毒理学试验表明II‑1具有低人源LO2肝细胞毒性，符合绿色杀菌剂的发展方向。本发明的Hypogin衍生物具有抑菌活性，可以用作小肽类抑菌剂开发的基础，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，涉及花生内源肽。
背景技术
花生是世界上最重要的油料作物之一，在全球油脂生产中占有重要地位。近年来，由齐整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.引起的花生白绢病危害严重，严重制约了花生的生产，对花生产业造成了巨大经济损失。目前，防治花生病害主要依赖化学防治，但这种方法存在病菌抗药性、农药残留和环境污染等问题。如今，人们对自身健康和环境保护的意识逐渐提高，农药的选择也发生了改变，日益倾向于选择残留少、对人畜安全且对环境污染小的绿色农药。
近年来，多肽因其广泛的原料来源、优异的活性和理想的环境相容性而成为植物保护领域研究的热点，广泛应用于杀虫、抗菌、除草、免疫激活和植物生长调节等多个方面。开展花生白绢病抗菌肽的研发，符合绿色农药的发展方向。国内外许多专家发现，花生多肽具有多种良好的功能活性，如抗氧化、清除自由基、抗菌抑菌和增强免疫力等。陈贵堂等发现花生多肽具有较强的抗氧化作用(陈贵堂,赵立艳,丛涛,等.花生多肽的制备及其对氧化损伤模型小鼠抗氧化作用的研究[J].食品科学,2007,(03):324-327.)。张宇昊等通过实验表明，分子质量小于1ku的花生短肽能够显著抑制血管紧张素转换酶的活性(张宇昊,马良,王强.花生短肽降血压活性研究[J].食品科学,2008,(06):399-403.)。陈彤等发现，中性蛋白酶A水解产生的多肽Hypogin(HYP)对大肠杆菌和禾谷镰刀菌具有抑制作用，能够抑制真菌的生长，并且能够抑制HIV的逆转录(陈彤,王常青,白云云,等.花生饼粕酶解多肽抑菌作用的研究[J].农产品加工,2015,(07):23-25.)。
随着科学技术的发展，将有更多方法应用于抗菌肽的制备和研发中，应用领域将不断拓展，包括食品防腐、农业发展、医药、化妆品等领域。专利CN202411350080.3中公开了一种花生富半胱氨酸肽及编码基因和抑菌剂和应用，从花生转录组文库中鉴定并提取了一种新型抗菌肽家族成员，命名为花生富半胱氨酸肽。利用固相化学合成方法制备的富半胱氨酸肽展示了广谱抗菌活性，其多肽片段对多种常见致病菌和农作物霉菌表现出强大的抑杀能力。花生抗菌肽未来有望成为一种重要的天然抗菌物质，为人类的健康和生活带来更多的益处，其研究和应用将不断深入和发展。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出一种花生内源肽Hypogin衍生物及其应用。
本发明的技术方案是这样实现的：
一方面，本发明提出一种花生内源肽Hypogin衍生物，上述Hypogin衍生物选自以下任一种的情况：
(1)组成Hypogin多肽的4肽或5肽片段；
(2)结构为情况(1)的化合物经羧酸化形成的多肽-羧酸类化合物。
优选的，上述情况(1)中的Hypogin衍生物为KSPYY-NH2、QKKTE-NH2、NPQAQ-NH2、RQLQS-NH2、DDQEP-NH2、AKLK-NH2、PAKLK-NH2、SDDQE-NH2、QRQLQ-NH2、ENPQA-NH2、YQKKT-NH2和KSPY-NH2中的一种或多种。
优选的，上述情况(2)中的羧酸为肉桂酸。
优选的，上述情况(2)中的多肽-羧酸类化合物为肉桂酸-KSPY-NH2或肉桂酸-RQLQ-NH2。
第二方面，上述的花生内源肽Hypogin衍生物在制备防治白绢病的药物中的应用。
优选的，上述白绢病是由感染齐整小核菌引起的。
第三方面，本发明还提出一种药物，药物的有效成分中含有上述的花生内源肽Hypogin衍生物中的一种或多种。
优选的，上述药物还含有使药物呈相应药剂类型的辅料。
优选的，上述药剂类型为粉剂、可湿性粉剂、可溶性粉剂、粒剂、水乳剂、微乳剂、水剂、悬浮剂、可分散油悬浮剂、微胶囊剂和乳油中的任一种。
第四方面，上述的药物作为防治花生白绢病的药物中的应用。
本发明具有以下有益效果：
1.本发明通过对花生内源性多肽Hypogin的结构进行设计优化，获得高活性Hypogin多肽片段，进一步采用活性亚结构拼接方法，通过引入高活性天然羧酸，改良化合物得到多肽-羧酸类化合物，改良后的化合物的离体活性优于先导化合物。本发明的化合物安全高效，环境友好，合成简便，具有潜在的开发应用前景。
2.本发明提供的Hypogin衍生物系列Ⅰ和系列Ⅱ均表现出对齐整小核菌的抑菌活性，其中化合物I-12和II-1的抑菌效果最优，抑菌率分别为56.61％和50.20％。本发明选取II-1进行非靶标人源肝细胞LO2毒性试验，结果表明Hypogin衍生物具有极低的细胞毒性，本发明提供的Hypogin衍生物是新型绿色杀菌剂候选化合物，其结构特点是含有4-5个氨基酸的小肽片段，对人类和环境低毒或无毒性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为I-1化合物的1H NMR(400M)谱图。
图2为I-1化合物的高分辨质谱(HRMS)图。
图3为II-1化合物的1H NMR(400M)谱图。
图4为II-1化合物的高分辨质谱(HRMS)图。
图5为I-12化合物对齐整小核菌的抑菌活性。
图6为II-1化合物对齐整小核菌的抑菌活性。
图7为3种多肽对齐整小核菌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA相对表达量的影响。
图8为I-12化合物分子对接图；其中(a)为黑胫病菌视紫质，(b)为酵母RET；(c)为酵母PI3K分子对接。
图9为II-1化合物与噻呋酰胺对人LO2细胞的毒性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
本发明以Hypogin作为先导化合物，对花生内源性多肽Hypogin的结构进行设计优化，利用多肽固相合成方法获得高活性Hypogin多肽片段。进一步采用活性亚结构拼接方法，通过引入高活性天然羧酸，改良化合物得到多肽-羧酸类化合物，改良后的化合物的离体活性优于先导化合物。
本发明提供了花生内源性多肽Hypogin及其衍生物，所述Hypogin衍生系列I的结构如下所示：
所述Hypogin衍生系列II结构如下图所示：
系列I和系列II的质谱数据如表1所示：
表1Hypogin衍生物系列I和系列II的质谱数据
本申请的多肽类化合物是利用多肽固相合成的方法，并进一步改进：
1.优化脱保护剂的1，8-二氮杂双环十一碳-7-烯(DBU)的使用比例(体积比)为20％；2.简化后处理，将N2气吹除三氟乙酸，优化为利用旋转蒸发仪蒸出大部分溶剂，避免TFA对实验操作人员呼吸道的损害。
实施例1
本实施例为化合物I-1的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL二氯甲烷(DCM)，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)1，8-二氮杂双环十一碳-7-烯(DBU)的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Tyr-OH，再加入6倍摩尔当量的二异丙基乙胺(DIEA)，加入15mL的二甲基甲酰胺(DMF)溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍,Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Tyr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的二甲基甲酰胺(DMF)溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ser-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：三氟乙酸(TFA)90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-1。
实施例2
本实施例为化合物I-2的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Glu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Thr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-2。
实施例3
本实施例为化合物I-3的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ala-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asn-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-3。
实施例4
本实施例为化合物I-4的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ser-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Leu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Arg-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-4。
实施例5
本实施例为化合物I-5的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Glu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asp-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asp-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-5。
实施例6
本实施例为化合物I-6的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Leu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ala-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.配制切割液：TFA90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
7.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
8.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-6。
实施例7
本实施例为化合物I-7的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Leu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ala-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-7。
实施例8
本实施例为化合物I-8的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Glu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asp-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asp-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ser-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-8。
实施例9
本实施例为化合物I-9的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Leu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Arg-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-9。
实施例10
本实施例为化合物I-10的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ala-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Asn-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Glu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-10。
实施例11
本实施例为化合物I-11的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Thr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Tyr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-11。
实施例12
本实施例为化合物I-12的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Tyr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ser-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
7.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
8.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品I-12。
实施例13
本实施例为化合物Ⅱ-1的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Tyr-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Pro-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Ser-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Lys-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡2小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的肉桂酸，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品Ⅱ-1。
实施例14
本实施例为化合物Ⅱ-2的制备方法：
1.称取取代度为0.69mmol/g的1.0g Rink Amide-AM resin树脂，将树脂放入25mL的多肽合成仪中，加入10mL DCM，振荡30分钟，加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，加入10mL DCM洗3次，通过真空抽滤装置抽滤掉溶剂DCM。
2.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
3.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Leu-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
4.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Gln-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
5.加入3倍摩尔当量的Fmoc-L-Arg-OH，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡3小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
6.加入3倍摩尔当量的肉桂酸，再加入6倍摩尔当量的DIEA，加入15mL的DMF溶解，振荡4小时。反应结束后，用DMF和DCM交替清洗3遍。加入15mL 20％(V/V)DBU的二氯甲烷溶液脱保护20min，用DMF和DCM交替清洗3遍，Kaiser’s试剂监测反应。
7.配制切割液：TFA 90.0％；水10.0％。将含有粗产品的树脂装入50mL的烧瓶中切割2.5h，加入20mL的90.0％TFA水溶液。
8.将裂解液用旋转蒸发仪蒸除溶剂后，用15mL乙醚洗六次，然后置于真空干燥箱中干燥，获得粗品肽序。
9.利用半制备液相色谱分离纯化粗肽，最后将纯化后的溶液进行冷冻干燥，获得目标产品Ⅱ-2。
应用例1
Hypogin衍生物对齐整小核菌菌丝生长的毒力测定：
根据菌丝生长速率法测试系列I和系列II对花生白绢病菌的抑菌活性。先将供试菌株齐整小核菌活化，直至菌丝到达培养皿三分之二处方可接菌；取Hypogin衍生物并加入0.1％DMSO和0.1％吐温80将其溶解，加入无菌水配置成4g/L的母液。系列I化合物含药培养基的终浓度为400mg/L，系列II化合物的含药培养基的终浓度为200mg/L，配置好后倒入无菌的90mm一次性培养皿中。以含0.1％ DMSO和0.1％吐温-80的PDA平板作为对照。将活化好的5mm菌饼接种至含药PDA培养基中，将培养皿放至28℃培养箱中黑暗培养，2天后使用十字交叉法测量各处理的菌落两次直径(mm)，取平均值代表菌圈的大小。每个处理3个重复，试验进行两次。菌丝生长抑制率的计算公式如下：
抑制率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5mm)×100％
试验结果见表2：
表2 400mg/L浓度下系列I离体抑制齐整小核菌菌丝生长活性
注：表中数据为平均值±标准差，不同字母表示不同处理间差异显著(Waller-Duncan,P<0.05)。
由表2的结果可知，在400mg/L的浓度下，部分I系列化合物对齐整小核菌的菌丝生长具有抑制活性。其中，I-12化合物(结构为KSPY-NH2)对齐整小核菌的生长抑制效果最为明显，抑菌率达56.61％，其抑菌活性如图5所示；其次为I-4化合物(结构为RQLQS-NH2)，其抑菌率为41.28％。
表3 200mg/L浓度下系列II离体抑制齐整小核菌菌丝生长活性
由表3可知，以I-12为先导化合物进行改造的化合物Ⅱ-1，在200mg/L的浓度下的抑菌率为50.20％，其抑菌活性如图6所示；化合物Ⅱ-2的抑菌率为27.93％，因此，II-1可以作为二级先导进行进一步的结构优化。
应用例2：
目标化合物的作用机制：
表4酶联免疫法测定PI3K含量(pmol/L，n＝4)
注:数值为平均值±标准偏差，同列数据后小写英文字母不同，表示差异显著。
测试了800mg/L浓度下两种多肽(表4)处理后，齐整小核菌菌丝中的PI3K基因表达量的影响(图7)。由图7可以看出，I-4，I-12处理后，PI3K基因mRNA的相对表达量降低。酶联免疫分析发现，用I-12处理齐整小核菌菌丝后，菌丝中的PI3K含量显著降低(表4)。分子对接实验表明，I-12与真菌的GPCR、RTK及PI3K有较好的对接活性(图8)。说明HYP衍生物I-12的潜在靶标是齐整小核菌的GPCR、RTK及PI3K。
应用例3
Hypogin衍生物II-1的细胞毒性实验：
将生长状态良好的LO2细胞消化后制备单细胞悬液，调整细胞密度为1×105个/mL，接种到96孔板，每孔100μL，细胞培养24h后换用无血清高糖DMEM培养基继续培养24h使细胞饥饿，分裂活动停止，吸弃无血清培养基，每孔加入相应的药物孵育24h，药物作用时间结束后吸弃含有药物的培养基，每孔加入新鲜无血清高糖DMEM培养基100μL、MTT 20μL，置于培养箱中继续培养4h，小心吸除上清，每孔加入100μL DMSO将结晶溶解，微量振荡仪振荡10min，使结晶充分溶解，酶标分析仪检测各孔于492nm处的OD值。
细胞毒性计算公式为：细胞死亡率＝(1-样品吸光度/空白组吸光度)×100％
由图9结果可知：II-1化合物对人体正常肝细胞LO2细胞具有低毒性，经400mg/L的II-1化合物处理后的LO2细胞，其细胞死亡零仅有2.89％；但在同浓度下，经商品化杀菌剂噻呋酰胺处理过后的LO2细胞，死亡率达到了97.33％。这表明本发明的Hypogin衍生物具有低毒性或无毒性，对人畜、环境均无害，符合绿色农业可持续发展的趋势，具有较好的开发应用前景。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.花生内源肽Hypogin衍生物，其特征在于，所述Hypogin衍生物选自以下任一种的情况：
（1）组成Hypogin多肽的4肽或5肽片段；
（2）结构为情况（1）的化合物经羧酸化形成的多肽-羧酸类化合物。
2.根据权利要求1所述的花生内源肽Hypogin衍生物，其特征在于：所述情况（1）中的Hypogin衍生物为KSPYY-NH2、QKKTE-NH2、NPQAQ-NH2、RQLQS-NH2、DDQEP-NH2、AKLK-NH2、PAKLK-NH2、SDDQE-NH2、QRQLQ-NH2、ENPQA-NH2、YQKKT-NH2和KSPY-NH2中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的花生内源肽Hypogin衍生物，其特征在于：所述情况（2）中的羧酸为肉桂酸。
4.根据权利要求3所述的花生内源肽Hypogin衍生物，其特征在于：所述情况（2）中的多肽-羧酸类化合物为肉桂酸-KSPY-NH2或肉桂酸-RQLQ-NH2。
5.权利要求1-4任一项所述的花生内源肽Hypogin衍生物在制备防治白绢病的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述白绢病是由感染齐整小核菌引起的。
7.一种药物，其特征在于：所述药物的有效成分中含有权利要求1-4任一项所述的花生内源肽Hypogin衍生物中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述药物还含有使药物呈相应药剂类型的辅料。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述药剂类型为粉剂、可湿性粉剂、可溶性粉剂、粒剂、水乳剂、微乳剂、水剂、悬浮剂、可分散油悬浮剂、微胶囊剂和乳油中的任一种。
10.权利要求7-9任一项所述的药物作为防治花生白绢病的药物中的应用。
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|---|---|
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