CN119454701A - 一种含西维美林的眼用制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种西维美林及其药学上可接受盐或立体异构体的眼用制剂及其制备方法和用途。所述眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体0.1‑10份和维生素或类维生素物质0‑10份。本发明对预防及治疗老花眼，高眼压症和干眼症等眼部疾病有很好的疗效。该眼用制剂通过对老年猴和青年猴的试验结果显示对年龄具有较好的选择性，可以预防及治疗中老年人的老花眼症状。

Description

一种含西维美林的眼用制剂及其制备方法和应用

本发明是申请日为2023年1月18日、申请号为202310067259.7、发明名称为一种含西维美林的眼用制剂及其制备方法和应用的发明专利的分案申请。

本发明要求2022年1月18日提交的申请号为2022100564047的优先权，通过援引将其全部并入本文。

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种含西维美林(Cevimeline)及其药学上可接受盐或西维美林立体异构体的眼用制剂的制备方法和应用。

背景技术

眼部的房水是由睫状体上皮细胞分泌以及血管渗出而产生的，自眼后房经瞳孔流入眼前房，到达前房角间隙，主要经小梁网(滤帘)流入巩膜静脉窦，最后进入血流。M胆碱受体激动剂可以通过缩瞳作用使虹膜向中心拉紧，增加巩膜突的张力，虹膜根部变薄，从而使处在虹膜周围部分的前房角间隙扩大，房水易于通过小梁网及巩膜静脉窦进入循环，然后使眼内压下降。青光眼的主要特征就是眼内压增高，可引起头痛、视力减退等症状，严重时可致失明。闭角型青光眼(急性或慢性充血性青光眼)患者前房角狭窄，眼内压增高。M胆碱受体激动剂能使眼内压迅速降低，从而缓解或消除青光眼症状。开角青光眼(慢性单纯性青光眼)患者虽然无前房角狭窄和闭塞情况，但是由于小梁网本身及巩膜静脉窦发生变性或硬化，阻碍了房水循环，引起眼内压升高。M胆碱受体激动剂能通过扩张巩膜静脉窦周围的小血管以及收缩睫状肌后，小梁网结构发生改变而使眼内压下降。

老花眼是一种屈光状态，晶状体随着年龄增长逐渐丧失调节近距离视物的能力，无法聚焦位于不同近距离的物体，从而出现老花眼。互联网时代中老年人群也已然成为互联网的主力军，视近需求很大。随着世界人口老龄化，老花眼问题将是一个全球性急需解决的问题。目前治疗老花眼的方式主要依赖于光学镜片、屈光手术和人工晶状体手术等非药物手段，大部分有视觉障碍的患者都是愿意通过多样化的矫治方法来改善视觉困难这一现状，而不是单纯依赖光学镜片和其他类似的机械装置进行治疗和调节。长期以来，老花眼和其他视觉障碍主要是用光学镜片和其他类似的机械装置进行治疗和调节，国内市场上尚未有可以用于治疗老花眼的药物。而目前干眼症作为一种慢性眼表疾病，缺乏有效治疗手段，当下临床上所应用的药物只可缓解干眼的眼干、视疲劳及视力模糊不适症状，很难达到治愈的目的，因此，市场上急需一款更加有效的治疗性产品。

M胆碱受体激动剂可以使环状肌向瞳孔中心方向收缩，使睫状体悬韧带放松，晶状体变凸，屈光度增加，从而适合于视近物，看近物清楚。这种作用称为调节痉挛，使晶状体聚焦，有助于老花眼、屈光不正的治疗。

M胆碱受体激动剂还能够刺激腺体、例如汗腺、泪腺和唾液腺的分泌，若将其作为眼科用药，可以通过刺激副交感神经途径促进自然眼泪的分泌，进而改善或治疗干眼症。M胆碱受体激动剂还能用于治疗比如头颈癌化疗引起的口腔干燥症。

因此将M胆碱受体激动剂作为一个预防及治疗老花眼、高眼压症、干眼症、屈光不正、畏光或闭角型青光眼等眼部疾病的眼科药物，有很大的发展空间。

M胆碱受体激动剂被广泛用作缩瞳和降低眼内压药物，例如毛果芸香碱作为缩瞳药被收录在中国药典和美国药典收录中。然而M胆碱受体激动剂在制备预防及治疗老花眼病症和干眼症药物中的应用，却鲜有报道。艾尔建(Allergan)公司发表专利WO2021209955报道1.0至1.5％w/v的盐酸毛果芸香碱滴眼剂治疗老视、远视、瞳孔放大、瞳孔大小不等、调节性内斜视、近视和散光这些眼部疾病。Allergan公司的美国上市药物Vuity(1.25％盐酸毛果芸香碱)的作用机制主要是通过针孔效应来治疗或改善老花眼的视近情况。然而毛果芸香碱在不同的pH条件下稳定性不同，pH值越高疗效越好，稳定性越差；人眼最适宜的pH为6.5-7.7，由于毛果芸香碱的稳定性不佳，Vuity的pH选择的是5.0，通过优化毛果芸香碱的配方，使用Allergan专有的pHast技术载体，使滴眼液能够快速适应泪膜的生理pH值。Vuity的使用说明书和专利WO2019209955显示Allergan专有的pHast技术使用了辅料硼酸、柠檬酸钠二水合物、氯化钠、盐酸或氢氧化钠，以及防腐剂苯扎氯铵。Vuity的活性成分稳定性欠佳，且使用防腐剂，防腐剂本身会造成眼表损伤，长期使用可能会导致出现干眼症、角膜、结膜上皮损伤等。

目前中国市场上尚未有可以用于治疗老花眼的药物，多采用技术引进方式引进国外技术开展药物研究。进展最快的是极目生物引进美国临床阶段生物制药公司Eyenovia的采用Microline技术的老花眼药物。Eyenovia公司发表的专利WO2020180793报道“微矩阵药膜(MicroLine)”这个技术将相对高浓度的毛果芸香碱递送至眼睛，从而达到低浓度毛果芸香碱治疗老花眼的目的。但“微矩阵药膜(MicroLine)”技术，对于患者使用起来并不便捷，成本也高。

另外一款进展较快的是2022月5月兆科眼科引进的美国Visus Therapeutics公司治疗老花眼的BRIMOCHOL^TM PF及CARBACHOL PF，该药物是以卡巴胆碱为活性成分的药物及其与溴莫尼定的组合药物。专利WO2020252061显示Visus公司使用的是0.2％溴莫尼定，加入溴莫尼定的目的旨在解决缩瞳药物卡巴胆碱可能带来的副作用。毛果芸香碱和卡巴胆碱都是非选择性胆碱受体激动剂，在缩小瞳孔的同时刺激控制晶状体形状的睫状体肌肉的收缩，这可能改变晶状体的形状，导致它的屈光特征发生变化。但该药物虽然使近视力得到了提高，但远视力却会下降。溴莫尼定是一种α2受体激动剂，它可以起到抑制睫状体肌肉收缩的作用，与卡巴胆碱联用，能降低卡巴胆碱的副作用。然而，使用浓度大于或等于0.05％w/v的溴莫尼定会导致充血反弹增加。

还有一款进展较快的是2022月4月箕星药业引进美国LENZ Therapeutics公司的老花眼药物。该老花眼药物是以乙酰克里定为活性成分的药物。但乙酰克里定在溶液中不稳定，保存不便，通常情况下，乙酰克里定储存在两个瓶子的系统中：其中一个瓶子内含有冻干的乙酰克里定，另一个瓶子内含有在局部滴注前使乙酰克里定溶解的稀释液。

西维美林已经获FDA批准治疗一种自身免疫性疾病干燥综合征，作为M3胆碱受体激动剂，所产生的M-样作用表现为心血管活动的抑制、平滑肌的收缩、瞳孔括约肌的收缩、消化腺和涎腺等腺体的分泌作用，其中对眼和腺体的作用最为明显。人瞳孔括约肌以胆碱受体M3为主，因此以西维美林作为活性成分用于制备预防或治疗老花眼药物，在缩小瞳孔的同时减少对睫状肌的刺激，维持了眼部正常调节的屈光度，不会影响到远视力，这将为全球中老年人真正解决视近问题。

目前中国治疗老花眼的药物研究还是一片空白，主要以引进为主，尚未有一款自主研发的老花眼药物进入临床，针对以上老花眼药物所存在的各种问题，当下亟需研发一种稳定性好、疗效好、副作用小、安全性好、使用便捷、可以长期使用且无明显局部及全身毒副作用的药物来治疗老花眼病症。

发明内容

针对现有眼用药物特别是老花眼药物的不足，本发明提供一种稳定性好，安全性高且使用便捷的纯天然绿色无添加眼用制剂及其制备方法。所述眼用制剂含有西维美林为活性成分对预防及治疗老花眼，高眼压症和干眼症等眼部疾病有很好的疗效，可用于不同时期老花眼的预防和治疗；可以引起瞳孔括约肌收缩，使瞳孔缩小而引起前房角之间的间隙扩大，增加房水的回流，从而使眼压下降；可以促进泪液的分泌，有效治疗干眼症。

本发明的眼用制剂可以仅包含西维美林(Cevimeline)活性成分、氯离子和钠离子，不含任何防腐剂、缓冲剂、络合剂和赋型剂等其他辅料，仅需一日一次用药。本发明使用的西维美林是选择性的M3胆碱受体激动剂，对晶状体的调节远弱于非选择性胆碱受体激动剂。动物实验结果显示西维美林滴眼液在预防或治疗老花眼的疗效和安全性方面表现优异，这将填补中国自主研发老花眼药物市场的空白，也将为全球老花眼的治疗带来一种新的安全性好、使用便捷解决方案。

为了实现本发明目的，公开技术方案如下：

一方面，本发明公开了西维美林或其盐或其立体异构体在制备眼用制剂中的应用。

具体地，按重量份数计，所述的眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体0.1-10份和维生素或类维生素物质0-10份。

优选地，所述眼用制剂中西维美林的含量为0.1-10％w/w，所述的西维美林的含量可以是：1％-4％w/w、1％-5％w/w、1.25％-4.5％w/w、1.25％-4％w/w、1.5％-2.5％w/w或1.25％-3.75％w/w。

优选地，所述的盐包括西维美林的无机盐或有机盐；所述的异构体包括西维美林的顺式异构体，反式异构体，非对映异构体或对映异构体。

另一方面，本发明提供了一种眼用制剂。

按重量份数计，所述的眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体0.1-10份和维生素或类维生素物质0-10份。

具体地，所述的盐包括西维美林的无机盐或有机盐，所述立体异构体包括西维美林的顺式异构体、反式异构体或非对映异构体。

所述眼用制剂的剂型包括滴眼剂、眼凝胶剂、眼膏剂、眼贴剂、眼膜剂、洗眼剂或眼内注射剂。

优选地，按重量份数计，所述的眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体1-5份，所述维生素或类维生素物质的份数为0-2份。

进一步优选地，按重量份数计，所述的眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体2-5份，所述维生素或类维生素物质的份数为0.01-0.1份。

优选地，按重量百份数计，所述西维美林眼用制剂中西维美林的浓度为0.1％-10％w/w；所述的西维美林的含量可以是：1％-4％w/w、1％-5％w/w、1.25％-4.5％w/w、1.25-4％w/w、1.5％-2.5％w/w或1.25％-3.75％w/w；优选为1-5％，再优选为1.25-4.5％，进一步优选为1.25-3.75％。

优选地，按重量百份数计，所述维生素或类维生素物质的浓度为0.01％-10％w/w，优选为0.01％-5％w/w，再优选为0.01％-2％w/w，最优选为0.01％-0.1％w/w。

所述维生素或类维生素物质包括但不限于维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E、硫辛酸、泛酸、泛酸钙、泛酸钠、烟酰胺和叶酸中的至少一种。

优选地，所述滴眼液的pH值调节至4.0-9.0。

优选地，所述滴眼液的渗透压值调节至260-350mOsmol/kg。

所述的pH值调节通过pH调节剂完成，所述pH调节剂包括但不限于盐酸、硼酸、磷酸、柠檬酸、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或多种。

所述的渗透压值调节通过渗透压调节剂完成，所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、甘露糖和右旋糖中的一种或多种。

所述西维美林眼用制剂还包括溶剂，所述溶剂选自注射用水或缓冲液。

所述缓冲液为缓冲剂的水溶液，所述缓冲剂包括但不限于碳酸盐类、磷酸盐类、柠檬酸盐类、醋酸盐类、硼酸盐类、巴比妥酸盐类和3-(N-吗啡啉)丙磺酸盐类中的一种或多种。

所述的眼用制剂中维生素或类维生素物质含量可以是0份。

优选地，当所述的眼用制剂中维生素或类维生素物质含量是0份时，所述的眼用制剂包含含量为0.1-10％w/w的西维美林或其盐或西维美林异构体中的至少一种。

进一步优选地，所述的西维美林或其盐或西维美林异构体的含量为0.01-5％w/w，优选为1-4％w/w，进一步优选为1.25-4％w/w，更进一步为1.5-2.5％w/w。

更进一步地，所述的眼用制剂仅由以下成分组成：西维美林或其盐或西维美林异构体中的至少一种、氯离子和钠离子。

优选地，当所述的眼用制剂中维生素或类维生素物质含量是0份时，所述氯离子来源于pH调节剂盐酸和渗透压调节剂氯化钠；所述钠离子来源于pH调节剂氢氧化钠和渗透压调节剂氯化钠。

优选地，所述pH调节剂调节西维美林滴眼液的pH值至4.0-9.0。其中，所述pH调节剂在本发明中的使用量可以根据所希望调节的目标pH来确定，在混合了除注射用水以外的物料之后，在制剂定容之前，用适宜量的pH调节剂对滴眼液进行pH调节，由此可以容易的确定pH调节剂在制剂中的具体用量。在某些优选的实施方案中，根据活性成分的稳定性和滴眼液的刺激性，所述滴眼液pH为4.0-9.0，例如pH＝4.0-4.5、pH＝4.5-5.0、pH＝5.0-5.5、pH＝5.5-6.0、pH＝6.0-7.0、pH＝7.0-8.0或pH＝8.0-9.0。

优选地，所述渗透压调节剂调节西维美林滴眼液的渗透压值至260-350mOsmol/kg。其中，所述渗透压调节剂在本发明中的使用量可以根据所希望调节的目标渗透压来确定。在某些优选的实施方案中，所述滴眼液的为260-350mOsmol/kg，例如260-270mOsmol/kg、270-280mOsmol/kg、280-290mOsmol/kg、290-300mOsmol/kg、300-310mOsmol/kg、310-320mOsmol/kg、320-330mOsmol/kg、330-340mOsmol/kg、340-350mOsmol/kg。

再一方面，本发明还提供了前述眼用制剂在在制备预防或治疗眼部疾病的药物中应用。

优选地，所述眼部疾病包括老花眼、高眼压症、干眼症、屈光不正、畏光或闭角型青光眼。

所述的屈光不正包括但不限于散光和远视。

优选地，所述的眼部疾病包括由于晶状体调节能力下降导致看近处物体时模糊的老花眼病症。

优选地，所述的眼部疾病包括由于前房角狭窄，导致眼内压增高，而引起头痛、视力减退，严重时可致失明的眼部疾病。

优选地，所述的眼部疾病包括累及眼睛角膜、结膜组织的疾病。

优选地，所述的眼部疾病包括由于外界光线不能正常聚集在视网膜上的屈光不正的疾病。

优选地，所述的眼部疾病包括泪道疾病或泪腺疾病。

本发明组合物的针孔原理(缩瞳产生的)能够预防和治疗老花眼和畏光病症；

本发明组合物通过睫状肌对晶状体的调节，能够调节屈光度，够预防和治疗老花眼以及散光和远视等屈光不正的病症；

本发明组合物通过缩瞳作用使虹膜向中心拉紧，增加巩膜突的张力，虹膜根部变薄，从而使处在虹膜周围部分的前房角间隙扩大，房水易于通过小梁网及巩膜静脉窦进入循环，然后使眼内压下降，来治疗高眼压症和闭角型青光眼(急性或慢性充血性青光眼)。

又一方面，本发明的一个目的是提供前述眼用制剂的制备方法。

所述的制备方法可以包括如下步骤：

(1)将西维美林或其盐或其立体异构体加入部分溶剂中，混旋或再加入维生素类或类维生素物质，混旋；

(2)加入眼用制剂辅料，调节pH和渗透压；

(3)加入剩余溶剂定容即得。

优选地，步骤(1)或步骤(2)中所述混旋的速度为50-70rpm。

所述的制备方法也可以包括如下步骤：

(1)配液罐中加入注射用水，按顺序加入处方量氯化钠，搅拌溶解；

(2)加入处方量西维美林或其盐或其立体异构体，搅拌溶解，容器用注射用水荡洗后，荡洗液倒入配液罐中；

(3)溶解完全后，取样检测药液pH，根据药液pH值，不断加入盐酸或氢氧化钠溶液调节药液pH内控标准；

(4)使用注射用水定容至处方量，并搅拌即得西维美林纯天然绿色无添加滴眼液。

优选地，所述的制备方法中还包括：

(5)经微孔滤膜过滤、除菌，在A级风淋的无菌保护下进行吹灌封(Blow/Fill/Seal)无菌灌装成品。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

(1)毛果芸香碱(包括其盐类)属于毒性西药(国家管控制品)，生产、购买、使用和保管措施严格程序复杂；而西维美林并非国家管控制品，通过化学合成和重结晶纯化的方式就可以得到，起始物料价廉易得，合成过程操作简单，成本可控。

(2)本发明研究发现，西维美林稳定性优于毛果芸香碱，温度和pH值等影响小于毛果芸香碱，同时作为简单的滴眼液的方式给药，制剂中不需要过度添加辅料，也不会由于辅料的添加可能带来的眼部刺激作用，更不用担心毛果芸香碱的累积毒副作用，因此本发明具有使用方便，效果显著，副作用小等特点，更易于为患者所接受。在一些情况下，本发明中的西维美林眼用制剂可以不含任何防腐剂、缓冲剂、络合剂和赋型剂等其他辅料，减少了由于辅料对眼部产生的刺激作用，安全性高、副作用少，适合长期使用。

(3)本发明首次发现西维美林和维生素的组合，提高了西维美林在眼内的渗透，协同增加了药物的疗效，并用动物实验发现西维美林和维生素类物质对于老花眼，高眼压症、干眼症、屈光不正、畏光或闭角型青光眼等眼部疾病具有良好的预防和协同治疗效果。

(4)本发明中的西维美林眼用制剂稳定性优于目前在研老花眼药物，温度和pH值等对药物的影响小于在研老花眼药物，且本发明采用BFS灌装技术，按需灌装成单剂量包装，不用担心开封后的污染，取用方便，便于携带，更易于为患者所接受。

(5)本发明中的西维美林眼用制剂仅需一日一次滴眼用药，即可保持长达8小时的作用效果，给药方式简单、操作便捷、作用时间长。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图做简单的介绍。

图1：制剂配方1和配方5给药前后的瞳孔直径对比图。

图2：制剂配方1和配方5给药前后的晶状体厚度对比图。

图3：制剂配方1-4给药前后的瞳孔直径变化对比图。

图4：制剂配方1-4给药前后的晶状体厚度变化对比图。

图5：制剂配方2和配方6-9给药前后的瞳孔直径变化对比图。

图6：制剂配方2和配方6-9给药前后的晶状体厚度变化对比图。

图7：制剂配方2和配方10-13给药前后的瞳孔直径变化对比图。

图8：制剂配方2和配方10-13给药前后的晶状体厚度变化对比图。

图9：制剂配方2-4给药前后的正常眼压变化对比图。

图10：制剂配方2-4给药前后的散瞳眼压变化对比图。

图11：制剂配方17-23给药前后的瞳孔直径对比图。

图12：制剂配方21与配方25-29给药前后的瞳孔直径变化对比图。

图13：制剂配方24与25给药前后年轻食蟹猴和中老年食蟹猴的晶状体变化对比图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，以使本领域技术人员能够更加清楚的理解本发明的方案，但并不因此限制本发明的保护范围。

以下实施例中所使用的实验方法和技术术语如无特殊定义，通常按照与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的常规条件操作。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

其中，pH调节剂采用盐酸、硼酸、磷酸、柠檬酸、氢氧化钠或氢氧化钾等将滴眼剂调节至所需的pH，渗透压调节剂采用氯化钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、甘露糖或右旋糖将滴眼剂调节至所需的渗透压。

以下实施例中所选用的年轻食蟹猴的年龄范围约为3-4岁，来源于防城港康路生物科技有限公司和海南金港生物技术股份有限公司，普通级，雌雄不限，50μL/眼单次双眼滴眼给药。用于安全性和耐受性评估的食蟹猴的年龄范围约为3-5岁，普通级，来源于广东春盛生物科技发展有限公司，雌雄各半，50μL/眼双眼滴眼，tid给药。

以下实施例中所选用的中老年食蟹猴的年龄范围约为8-15岁，来源于广东春盛生物科技发展有限公司，普通级，雌雄不限，50μL/眼单次双眼滴眼给药。

以下实施例中所选用的用于安全性和耐受性评估的新西兰白兔，来源于邳州东方养殖有限公司，50μL/眼双眼滴眼，tid给药。

所有动物到达研究机构之后，兽医人员对所有动物进行体检，对动物进行检疫/适应。动物到达研究机构至给药首日至少间隔7天，并在试验前再进行全面检查一次。

实施例1：滴眼剂配方1(4.5％西维美林)的制备

向配料瓶中加入西维美林适量，再加入部分水用旋转仪以60rpm的速度进行溶解，每隔15min观察一次外观，观察是否溶解；待其全部溶解后测其pH以及渗透压，用pH调节剂和渗透压调节剂，调节其pH以及渗透压至设计值pH＝5.6；渗透压：323mOsmol/kg；之后再加入剩余注射用水至西维美林的浓度为4.5％，然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例2：滴眼剂配方2(2.5％西维美林)的制备

按实施例1的操作步骤，配置2.5％西维美林滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：316mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例3：滴眼剂配方3(1.25％西维美林)的制备

按实施例1的操作步骤，配置1.25％西维美林滴眼液，其pH＝5.9；渗透压：310mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

对比例1：滴眼剂配方4(1.25％盐酸毛果芸香碱)

按实施例1的操作步骤，配置1.25％盐酸毛果芸香碱滴眼液，其pH＝5.3；渗透压：300mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

对比例2：滴眼剂配方5(1％硝酸毛果芸香碱)的制备

按实施例1的操作步骤，配置1％硝酸毛果芸香碱滴眼液，pH＝5.3；渗透压：300mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例4：滴眼剂配方6(2.5％西维美林+0.01％维生素B12)的制备

向配料瓶中加入西维美林，再加入部分水用旋转仪以60rpm的速度进行溶解，每隔15min观察一次外观，观察是否溶解；待其溶解后加入维生素B12，继续用旋转仪以60rpm的速度进行溶解每隔15min观察一次外观，观察是否溶解；待其全部溶解后测其pH以及渗透压，用pH调节剂和渗透压调节剂，调节其pH以及渗透压至设计值pH＝6.0；渗透压：320mOsmol/kg；之后再加入剩余水至西维美林的浓度为2.5％，然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例5:滴眼剂配方7(2.5％西维美林+0.05％硫辛酸)的制备

按实施例4的操作步骤，将0.05％硫辛酸代替0.01％维生素B12，配置2.5％西维美林和0.05％硫辛酸组合物滴眼液，其pH＝5.9；渗透压：320mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和硼酸，渗透压调节剂为硫酸钠。

实施例6：滴眼剂配方8(2.5％西维美林+0.05％泛酸钠)的制备

按实施例4的操作步骤，将0.05％泛酸钠代替0.01％维生素B12，配置2.5％西维美林和0.05％泛酸钠组合物滴眼液，其pH＝5.9；渗透压：322mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钾和磷酸，渗透压调节剂为氯化钾。

实施例7：滴眼剂配方9(2.5％西维美林+0.1％烟酰胺)的制备

按实施例4的操作步骤，将0.1％烟酰胺代替0.01％维生素B12，配置2.5％西维美林和0.1％烟酰胺组合物滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：323mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为甘露糖。

对比例3：滴眼剂配方10(0.01％维生素B12)的制备

向配料瓶中加入维生素B12适量，再加入部分水用旋转仪以60rpm的速度进行溶解，每隔15min观察一次外观，观察是否溶解；待其全部溶解后测其pH以及渗透压，用pH调节剂和渗透压调节剂，调节其pH以及渗透压至设计值pH＝6.0；渗透压：321mOsmol/kg；之后再加入剩余水至维生素B12的浓度为0.01％，然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

对比例4：滴眼剂配方11(0.05％硫辛酸)的制备

按对比例3的操作步骤，将硫辛酸代替维生素B12，配置0.05％硫辛酸滴眼液，其pH＝5.9；渗透压：318mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和硼酸，渗透压调节剂为硫酸钠。

对比例5：滴眼剂配方12(0.05％泛酸钠)的制备

按对比例3的操作步骤，将泛酸钠代替维生素B12，配置0.05％泛酸钠滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：320mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钾和磷酸，渗透压调节剂为氯化钾。

对比例6：滴眼剂配方13(0.1％烟酰胺)的制备

按对比例3的操作步骤，将烟酰胺代替维生素B12，配置0.1％烟酰胺组合物滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：323mOsmol/kg。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为甘露糖。

实施例8:滴眼剂配方14(0.1％西维美林+4％烟酰胺)的制备

按实施例4的操作步骤，将4％烟酰胺代替0.01％维生素B12，配置0.1％西维美林和4％烟酰胺组合物滴眼液，其pH＝4.0。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例9:滴眼剂配方15(4.5％西维美林+0.1％烟酰胺)的制备

按实施例4的操作步骤，将0.1％烟酰胺代替0.01％维生素B12，配置4.5％西维美林和0.1％烟酰胺组合物滴眼液，其pH＝9.0。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实施例10:滴眼剂配方16(2.5％西维美林+2％烟酰胺)的制备

按实施例4的操作步骤，将烟酰胺代替维生素B12，配置2.5％西维美林和2％烟酰胺组合物滴眼液，pH＝6.5。pH调节剂为氢氧化钠和盐酸，渗透压调节剂为氯化钠。

实验一：滴眼剂配方3(实施例3)的稳定性研究：

取新鲜配置的1.25％西维美林滴眼剂配方3(不同pH)的溶液适量，进行HPLC分析，之后将分装的小样进行5℃，25℃和40℃保存90天测其含量，结果见表1。

表1不同温度下本发明西维美林滴眼剂含量变化(以其零时含量为100％计)

结果分析：

从表1可以看出，pH为5和6.5的西维美林溶液保存在5℃，25℃和40℃保存90天都很稳定，含量基本无变化，因此本发明制备的西维美林滴眼液，在室温下储存时被认为是稳定的，可以选择室温保存，外出携带方便。

实验二：滴眼剂配方5(对比例2)的稳定性研究

取新鲜配置的1％硝酸毛果芸香碱滴眼剂配方5的溶液(不同pH)适量，进行HPLC分析，之后取室温保存的小样，定期测定其含量，结果见表2。

表2不同pH值下毛果芸香碱含量变化(以其零时含量为100％计)

结果分析：

从表2可以看出，pH为4.2的硝酸毛果芸香碱溶液比pH为8.0的硝酸毛果芸香碱溶液从化学性质上看稳定，但治疗效果却弱于后者，并且pH4.2超出了药典规定的滴眼剂的pH要求范围。

实验三：滴眼剂配方1和配方5的药效研究：

受试动物：食蟹猴，2只猴/组，双眼/只猴，即4眼/组，每个制剂配方选用1组食蟹猴。

实验前准备：新鲜配置的滴眼剂配方1(4.5％西维美林)和配方5(1％硝酸毛果芸香碱，pH＝4.5)；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μl/眼单次双眼滴眼给药，检测给药前(0h)，给药后0.5h、1h、2h的瞳孔大小(直径)测量和晶状体厚度的测量以及眼部刺激性观察。

制剂配方1和配方5给药前后的瞳孔直径对比结果见图1，由此图分析：配方1和配方5组在动物给药后缩瞳效果明显，两组配方组动物的缩瞳作用最强时间点和缩瞳强度基本一致，在1h时缩瞳作用最显著。配方5组在1h左右瞳孔直径开始逐渐恢复；本发明实施例1组配方1开始发挥缩瞳作用时间较对比例2组配方5短、且缩瞳持续时间长。

制剂配方1和配方5给药前后的晶状体厚度对比结果见图2，由此图分析：配方5组在动物给药后晶状体厚度明显增加，但增加的幅度没有配方1组大。两组配方组动物的晶状体厚度的变化趋势基本一致，在1h时晶状体厚度最厚，1h左右晶状体厚度开始逐渐恢复。本发明实施例1配方1组开始发挥调节晶状体厚度作用时间较对比例2配方5组早、且晶状体厚度维持的时间长。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

实验四：滴眼剂配方1-4与配方6-13的药效研究：

受试动物：食蟹猴，2只猴/组，双眼/只猴，即4眼/组，每个制剂配方选用1组食蟹猴。

实验前准备：新鲜配置的滴眼剂配方1；配方2；配方3；配方4；配方6；配方7；配方8；配方9；配方10；配方11；配方12；配方13；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μl/眼单次双眼滴眼给药，检测给药前(0h)，给药后0.5h、1h、2h、3h、5h、7h的瞳孔大小(直径)测量和晶状体厚度的测量以及眼部刺激性观察。

制剂配方1-4给药前后的瞳孔直径变化对比结果见图3，由此图分析可知：配方1与配方4组在动物给药后缩瞳效果明显，两组配方组动物的缩瞳作用最强时间点和缩瞳强度基本一致，在1h时缩瞳作用最显著。配方4组在1h左右瞳孔直径开始逐渐恢复；配方1组缩瞳持续时间较配方4组长。配方2与配方3组在动物给药后缩瞳效果明显，在0.5h至1h时缩瞳作用最显著，且缩瞳持续时间也基本一致。由此结果分析得出，西维美林的浓度越高，缩瞳效果越显著，缩瞳持续的时间不随浓度的变化而发生显著的变化。

制剂配方1-4给药前后的晶状体厚度变化对比结果见图4，由此图分析：配方1与配方4组在动物给药后晶状体厚度明显增加，配方1在1h时晶状体厚度增加的最多，随后逐渐恢复；配方4的最高点出现在0.5h，随后逐渐恢复。配方2与配方3组在动物给药后晶状体厚度也明显增加。由此结果分析得出，西维美林的浓度越高，晶状体厚度增加的越明显，配方1组的效果要比配方4组的更加突出。

制剂配方2与配方6-9给药前后的瞳孔直径变化对比结果见图5，由此图分析：在配方2的基础上添加不同的维生素或类维生素化合物，能够提高缩瞳效果，其中配方6的作用效果作为明显，因此可见维生素或类维生素化合物能够促进、协同提高西维美林治疗老花眼的疗效。

制剂配方2与配方6-9给药前后的晶状体厚度变化对比结果见图6，在配方2的基础上添加不同的维生素或类维生素化合物，能够增加晶状体的厚度，其中配方6的作用效果最为明显，此结果与瞳孔缩小的结果一致。

制剂配方2与配方10-13给药前后的瞳孔直径变化对比结果见图7，由此图分析：单独维生素或类维生素化合物并不能起到缩瞳效果，结合图5分析显示维生素或类维生素化合物和活性成分起到协同作用，能够提高并延长西维美林治疗老花眼的疗效。

制剂配方2与配方10-13给药前后的晶状体厚度变化对比结果见图8，由此图分析：单独维生素或类维生素化合物并不能引起晶状体的变化，结合图6分析显示维生素或类维生素化合物和活性成分起到协同作用，能够提高并延长西维美林治疗老花眼的疗效。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

实验五：滴眼剂配方2-4的眼压测试研究(正常条件下的研究)：

受试动物：健康新西兰兔，3只兔/组，双眼/只兔，即6眼/组，每个制剂配方选用1组新西兰兔。

实验前准备：新鲜配置的滴眼剂制剂配方2-4；试验前24小时内对每只动物的双眼进行检查，保证兔眼未有红肿、充血等刺激性症状，未有角膜缺陷和结膜损伤；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μl/眼单次双眼滴眼给药，检测给药前(0h)，给药后0.25h、0.5h、1h、2h、3h、4h、5h的眼压测试以及眼部刺激性观察。

制剂配方2-4给药前0h至给药后5h眼压略有波动，变化对比结果见图9，整体与给药前相比未见明显差异，属于正常波动范围内。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。给药期间配方2和3实验组各有一只动物观察到有泪液分泌。

实验六：滴眼剂配方2-4的眼压测试研究(散瞳后的研究)：

受试动物：健康新西兰兔，3只兔/组，双眼/只兔，即6眼/组，每个制剂配方选用1组新西兰兔。

实验前准备：新鲜配置的滴眼剂制剂配方2-4；试验前24小时内对每只动物的双眼进行检查，保证兔眼未有红肿、充血等刺激性症状，未有角膜缺陷和结膜损伤；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：使用复方托吡卡胺滴眼液使动物散瞳并增高眼压，之后将氯化钠滴眼液(作为空白对照)和每个制剂配方50μl/眼单次双眼滴眼给药，检测散瞳前，给药前(0h)，给药后0.25h、0.5h、1h、2h、3h、4h、5h的眼压测试以及眼部刺激性观察。

各组动物散瞳前眼压差别较小，使用复方托吡卡胺滴眼液散瞳后眼压增高，与临床使用散瞳药后眼压略有增高一致。制剂配方2-4给药后整体趋势基本一致，变化对比结果见图10，给药后眼压逐渐开始恢复至散瞳前状态。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

以下实施例中，所选用的pH调节剂采用盐酸或氢氧化钠将滴眼剂调节至所需的pH，渗透压调节剂采用氯化钠将滴眼剂调节至所需的渗透压。

实施例11:滴眼剂配方17(1.75％西维美林，pH 6.0)的制备

制备方法如下：

向配料瓶中加入适量注射用水，按顺序加入处方量氯化钠，搅拌溶解；待其全部溶解后加入处方量西维美林，搅拌溶解；待其全部溶解后测其pH，用氢氧化钠调节pH＝6.0；使用注射用水定容至处方量，并测其渗透压且记录测量值，渗透压：296mOsmol/kg。然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。

实施例12：滴眼剂配方18(2.0％西维美林，pH 6.0)的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.0％西维美林滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：297mOsmol/kg。

实施例13：滴眼剂配方19(2.25％西维美林，pH 5.0)的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝5.0；渗透压：289mOsmol/kg。

实施例14：滴眼剂配方20：2.25％西维美林，pH 6.0的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝6.0；渗透压：280mOsmol/kg。

实施例15：滴眼剂配方21：2.25％西维美林，pH 6.5的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝6.5；渗透压：279mOsmol/kg。

实施例16：滴眼剂配方22：2.25％西维美林，pH 7.0的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝7.0；渗透压：287mOsmol/kg。

实施例17：滴眼剂配方23：2.25％西维美林，pH 7.5的制备

参照实施例11的操作步骤，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝7.5；渗透压：286mOsmol/kg。

对比例7：滴眼剂配方24(1.25％盐酸毛果芸香碱，硼酸/柠檬酸钠体系)的制备

向配料瓶中加入适量注射用水，按顺序加入处方量氯化钠、硼酸和柠檬酸钠，搅拌溶解；待其全部溶解后加入处方量盐酸毛果芸香碱，搅拌溶解；待其全部溶解后测其pH，用氢氧化钠调节pH＝5.0；使用注射用水定容至处方量，并测其渗透压且记录测量值，渗透压：280mOsmol/kg。然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。

对比例8：滴眼剂配方25(1.25％西维美林，硼酸/柠檬酸钠体系)的制备

参照对比例7的操作步骤，配制1.25％西维美林滴眼液，其pH＝6.5；渗透压：279mOsmol/kg。

对比例9：滴眼剂配方26(3％西维美林，硼酸/柠檬酸钠体系)的制备

参照对比例7的操作步骤，配制3％西维美林滴眼液，其pH＝6.5；渗透压：286mOsmol/kg。

对比例10：滴眼剂配方27(2.25％西维美林，柠檬酸钠体系)的制备

参照对比例7的操作步骤，不加入硼酸，配制2.25％西维美林滴眼液，其pH＝6.5；渗透压：296mOsmol/kg。

对比例11：滴眼剂配方28(2.25％西维美林，磷酸体系)的制备

参照对比例7的操作步骤，将磷酸代替硼酸和柠檬酸钠，配置2.25％西维美林滴眼液，其pH＝7.0；渗透压：287mOsmol/kg。

对比例12：滴眼剂配方29(2.25％西维美林，枸橼酸体系)的制备

参照对比例7的操作步骤，将柠檬酸和磷酸氢二钠代替硼酸和柠檬酸钠，配置2.25％西维美林滴眼液，其pH＝7.0；渗透压：281mOsmol/kg。

实施例18：滴眼剂配方30(4％西维美林，pH 6.5)的制备

参照实施例11的操作步骤，配制4％西维美林滴眼液，其pH＝6.5；渗透压：292smol/kg。

实施例19：滴眼剂配方31(0.9％生理盐水)的制备

向配料瓶中加入适量注射用水，按顺序加入处方量氯化钠，搅拌溶解；待其全部溶解后使用注射用水定容至处方量，并测其pH和渗透压且记录测量值，pH＝7.1，渗透压288mOsmol/kg。然后进行无菌过滤，并分装以备后续使用。并对滴眼剂配方进行了物理外观、含量测定、杂质、pH值和渗透压测试。

实验七：滴眼剂配方17-23的药效研究：

受试动物：中老年食蟹猴(8-15岁)，2只猴/组双眼，即4眼/组，每个制剂配方选用1组食蟹猴。

实验前准备：新鲜配制的滴眼剂配方17-23；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μL/眼单次双眼滴眼给药，测量给药前(0h)，

给药后0.25h、1h、2h、4h、6h和8h的瞳孔大小(直径)和晶状体厚度，并观察眼部刺激性。

制剂配方17-23给药前后的瞳孔直径对比结果见图11，由此图分析：7组配方组动物的缩瞳作用最强时间点基本一致，均在给药后15min起效，并在1h时缩瞳作用最显著，缩瞳时间长达8小时。当滴眼液pH为6时，浓度为1.75％、2％和2.25％对瞳孔的收缩作用差别不大，浓度2.25％作用强度略高一些。固定浓度2.25％比较不同pH对瞳孔的收缩作用，结果显示pH 6-7的缩瞳作用相似，因此西维美林滴眼液可以选择与泪液相似的pH值，提高患者的舒适度。由此结果分析得出，西维美林滴眼液耐受性好，起效快，作用时间长，仅需一日一次滴眼用药，即可保持长达8小时的作用效果，给药方式简单、操作便捷、更容易被患者接受。

制剂配方17-23给药前后的晶状体厚度变化对中老年猴不明显，变化约5％左右。由此结果分析得出，西维美林滴眼液对晶状体的调节温和，不会产生痉挛，对晶状体厚度影响很小，不会影响到远距离视力。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、动物烦躁、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

实验八：滴眼剂配方21与配方25-29的药效研究：

受试动物：中老年食蟹猴(8-15岁)，2只猴/组双眼，即4眼/组，每个制剂配方选用1组食蟹猴。

实验前准备：新鲜配制的滴眼剂配方21和配方25-29；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μL/眼单次双眼滴眼给药，测量给药前(0h)，给药后0.25h、1h、2h、4h、6h和8h的瞳孔大小(直径)和晶状体厚度，并观察眼部刺激性。

制剂配方21与配方25-29给药前后的瞳孔直径变化对比结果见图12，由此图分析可知：无论是在哪种缓冲体系下，制剂配方21与配方25-29的6组配方组动物的缩瞳作用与实验一结果相似：最强时间点基本一致，均在给药后15min起效，并在1h时缩瞳作用最显著，缩瞳时间长达8小时。不同缓冲体系对缩瞳作用有着不同的影响，选择人眼最舒适的pH6.5-7的滴眼液，其中绿色无添加滴

眼液配方21的缩瞳效果最为明显。由此结果分析得出，西维美林滴眼液不含任何防腐剂、缓冲剂、络合剂和赋型剂等其他辅料，减少了由于辅料对眼部产生的刺激作用，安全性高、副作用少，适合长期使用。

制剂配方25-29给药前后的晶状体厚度变化与实验一结果相似。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、动物烦躁、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

实验九：滴眼剂配方24与25对年轻食蟹猴和中老年食蟹猴的晶状体调节作用的研究：

受试动物：年轻食蟹猴(3-4岁)，2只猴/组双眼，即4眼/组；中老年食蟹猴(8-15岁)，2只猴/组双眼，即4眼/组；每个制剂配方选用1组年轻食蟹猴和1组中老年食蟹猴。

实验前准备：新鲜配制的滴眼剂配方24和配方25；所有动物试验前检查有无异常情况。

试验方法：将每个制剂配方50μL/眼单次双眼滴眼给药，测量给药前(0h)，年轻猴给药后0.25h、1h、2h、3h、5h和7h的晶状体厚度和中老年猴给药后0.25h、1h、2h、4h、6h和8h的晶状体厚度，并观察眼部刺激性。

制剂配方24与25给药前后年轻食蟹猴和中老年食蟹猴的晶状体变化对比结果见图13，由此图分析可知：无论是年轻猴还是中老年猴，毛果芸香碱对晶状体的调节能力均大于西维美林；且毛果芸香碱对年轻猴和中老年猴晶状体的调节强度基本一致，甚至对中老年猴晶状体的作用时间更长。西维美林对年轻猴和中老年猴晶状体的调节强度略有差异，西维美林对中老年猴晶状体的调节能力比对年轻猴晶状体的调节弱，而且持续时间短。由此结果分析得出，西维美林M3受体激动剂对靶点的选择性更好，几乎不会影响远视力，更适合中老年群体用于预防或治疗老花眼症状。

给药期间动物双眼均未见明显异常，未出现眼睑红肿发炎、动物烦躁、结膜充血、眼表干涩、眼分泌物增多等刺激症状。

实验十：兔子模型中评价西维美林滴眼液的眼部安全性和耐受性：

受试动物：新西兰白兔，普通级，给药开始时年龄大于140天，雄性：2.4-3.0kg；雌性：2.9-3.3kg；雌性动物为未生育、未孕动物。12只(6雄/6雌)新西兰白兔，分成3组，每组雌雄各2只，即8眼/组；每个制剂配方选用1组新西兰白兔。另2只/性别动物作为备库动物保留至给药后5天。

实验前准备：新鲜配制的滴眼剂配方21(中浓度组)、配方30(高浓度组)和配方31(溶媒对照组)；所有动物试验前检查有无异常情况，无健康状况差或有明显身体异常的动物用于试验。随机分组时，所有试验中动物体重差异在同性别平均体重的±20％范围内。涉及到动物管理和使用的试验方案及变更或操作，在开始前均已通过公司动物管理和使用委员会的审核与批准。试验过程中兽医技术员对试验中动物福利问题进行监督，并与专题负责人沟通决定是否采取适合的治疗方案。

试验方法：将每个制剂配方50μL/眼双眼滴眼，tid给药，记录并分析了兔对西维美林滴眼液的眼部安全性和耐受性的情况。

详细临床观察和笼边观察：试验开始前，在Day 1给药前对所有动物(包括备库动物)进行一次详细临床观察，之后在给药期间，每周进行一次详细临床观察。在计划解剖日，对所有实验动物进行一次详细临床观察。试验开始前，从Day-2开始，对所有实验动物每天进行一次笼边观察。之后试验期间每天进行一次笼边观察。在相同时间段安排了详细临床观察的动物未进行笼边观察。整个试验期间未观察到供试品相关症状，在解剖前Day16观察到溶媒对照组和高剂量组均在Day 16右眼均出现轻微结膜充血。认为该症状与西维美林滴眼液无关，因为在溶媒组眼中也观察到该症状。

眼刺激评分：在开始给药前，对所有动物(包括备库动物)双眼进行两次眼部刺激评分。在给药第1-7天，最后一次给药后每天进行一次，给药第2周进行一次。

试验期间，未发现与西维美林滴眼液相关的眼部刺激。在眼刺激评分期间观察到的结膜充血/分泌物与西维美林滴眼液无关，因为在给药眼和溶媒组眼中均观察到，且该症状在各组间发生的比率相近。

体重：试验前期，每只动物(包括备库动物)称量一次体重，在整个In-Life期，每周称量一次体重。计划解剖日当天(禁食后体重)称量一次体重。试验期间，未见西维美林滴眼液相关的体重变化。

摄食量测定：从Day-2开始和整个试验期间(禁食期间除外)每天称重饲料，评估定量摄食量。计划解剖前，动物将过夜禁食。试验期间，未见西维美林滴眼液相关的摄食量变化。

眼科学检查：3组中的所有动物均接受了双眼的完整眼科检查，包括眼部刺激，在开始给药前、给药后1周、2周内各一次。检查包括眼底检查，使用间接检眼镜和聚光镜，以及裂隙灯检查。散瞳之前，在裂隙灯辅助下检查双眼前节。根据McDonald-Shadduck评分系统对眼部结构进行评分。荧光素染色(用无菌生理盐水润湿的荧光素钠无菌眼用试纸)用于评估角膜表面的状况。检查眼后段时，检查前将散瞳剂滴入双眼。借助间接检眼镜检查眼后段(眼底)。

试验期间，未发现与西维美林滴眼液相关的眼科症状。在McDonald-Shadduck评分检查中，在Day 7，Week1和Week 2的3组均有动物观察到单眼轻微结膜充血、少量分泌物和局部小面积的荧光着染，各组发生率较低或与溶媒组相似；动物中剂量组有一眼观察到小的晶体前皮质浑浊，该眼给药前也同样观察到小的晶体前皮质浑浊，动物溶媒组有一眼观察到小的晶体前囊浑浊，改样给药前也观察到小的晶体前囊浑浊，且其他给药动物并未发现；故认为McDonald-Shadduck评分检查结果没有显示西维美林滴眼液相关性。试验前和给药时间的所有其他眼部发现均视为与该种属的年龄和品系一致的常见背景或自发发现。

眼压：在给药开始前适应期间不同的3天，分别使用TonoVet眼压计测量1-3组中所有动物的双眼眼压。在给药开始前、给药后1周、2周内各测量一次。固定动物，使测试眼与TonoVet眼压计的探针垂直，至少测量3次IOP，直至数值稳定。最后三个稳定值的平均值计算为最终IOP。试验期间，未见西维美林滴眼液相关的眼压变化。

泪液分泌量测试：在试验前，对所有动物(包括备库动物)进行两次泪液测试。在Day 2、Day 8、Day 15对所有动物双眼分别进行一次泪液分泌测量。

泪液分泌量测定方法如下：保定动物待情绪稳定后，将泪液检测试纸的一端折叠放入下眼睑1/3结膜囊内。闭合眼睛持续5分钟后，取出试纸，从折叠处测量其湿润长度。如果试纸在5分钟内掉落，应等待30分钟后再进行第二次测量。

试验期间，未见西维美林滴眼液相关的泪液分泌量变化。

视觉电生理(ERG)：在给药前和解剖前对所有动物的双眼各进行一次暗视和明视视网膜电图(ERG)检查。动物适应黑暗环境至少0.5小时。通过滴入散瞳剂散大瞳孔，并在原始数据中进行记录。动物采用氯胺酮(30mg/kg)和噻拉秦(2mg/kg)联合肌肉注射麻醉。并给予盐酸苯噁唑注射液(4.5mg/kg)，确保动物正常苏醒。实际麻醉方法记录在原始数据中。试验期间，未见西维美林滴眼液相关的视网膜电生理变化。潜伏期或者振幅的变化(包括具有统计学显著性的变化)因为其幅度小，无剂量依从性，均视为偶发变化，与西维美林滴眼液无关。

毒代动力学：雌雄兔每天3次，连续14天局部滴眼给予中剂量和高剂量的西维美林滴眼液后，测定各个剂量下西维美林的血浆浓度以确定系统暴露量。在Day1和Day14，采集所有兔子0小时(给药前)，和最后一次给药后0.25、1、2、4、6、12小时血样。对于每个时间点，从清醒兔子的耳中央动脉采集大约0.75-1mL全血。全血将置于以K₂EDTA作为抗凝剂的贴有标签的采血管中。样品管轻轻颠倒数次以确保混匀后，即刻放入湿冰中保存。采血后1小时内在3200×g，4℃，条件下离心10分钟得到血浆。血浆转移至有明确标记的透明聚丙烯管，立即垂直放入干冰，储存在＜60℃的超低温冰箱中，直到运送至生物分析部用于分析。在试验记录中记录全血采集、收集血浆以及储存时间。试验结果显示西维美林起效快，所有剂量组实验动物西维美林达峰时间平均值出现在第一次给药后15min；所有剂量组的系统暴露量均无明显的性别差异；所有剂量组第1天和第14天的系统暴露量随剂量增加而增长；所有剂量组雌雄的系统暴露量未见明显的药物蓄积。

组织病理学：所有试验动物在第16天进行动物解剖。在剖检时，对所有脏器的肉眼病变进行记录，肉眼观察尸体与肌肉骨骼系统；动物体表和天然孔道；颅腔和脑的外表面；胸腔，腹腔和盆腔以及腔内组织器官和肉眼病变。

在计划剖检时，对所有实验动物进行采集肾上腺(双侧)、脑、心脏、肾脏(双侧)、肝脏和胆囊、卵巢(双侧)、脾脏、睾丸(双侧)和胸腺的器官重量。成对器官一起称量，并根据脑重量以及动物终末体重计算出器官相对重量(脑重比和体重比)。此外，所有的肿块及肉眼病变都需采集。将眼球和视神经、睾丸和附睾置于改良的Davidson’s溶液中固定，其他组织均置于10％中性缓冲福尔马林溶液中固定。眼球和视神经、睾丸和附睾在相关固定液中固定24至72小时，然后转移至10％福尔马林中性缓冲溶液。所有眼部组织(眼球和视神经、上下眼睑、泪腺、哈氏腺、眼肌)均按左、右区分。在放入固定液之前，在每个眼球的球结膜大约12点位置进行缝线作为组织学定位标记。

对于所有实验动物，将选取的限定样本如眼部组织(眼球和视神经、上下眼睑、泪腺、哈氏腺、眼部肌肉)、鼻甲和所有肉眼病变和肿块从固定液中移出，进行取材、脱水、石蜡包埋、切片、HE染色和镜检并分析出具病理报告。

结果显示：西维美林滴眼液对新西兰兔的安全性很高，兔连续14天，每天3次滴眼给予低浓度和高浓度剂量，耐受性良好，未产生西维美林相关的动物死亡以及脏器重量变化、未见肉眼观察变化、未见组织病理学变化。

实验十一：猴子模型中评价西维美林滴眼液的眼部安全性和耐受性：

受试动物：食蟹猴，普通级，年龄范围约为3-5岁，体重范围为2.0到3.6千克。雌性动物未生育、未孕动物。6只(3雄/3雌)食蟹猴，分成3组，每组雌雄各1只，即4眼/组；每个制剂配方选用1组食蟹猴。另1只/性别动物作为备库动物保留至给药后5天。

实验前准备和试验方法，以及实验内容参考实验十进行操作。

结果显示：西维美林滴眼液对食蟹猴安全性很高，猴连续14天，每天3次滴眼给予低浓度和高浓度剂量，耐受性良好，未产生西维美林相关的动物死亡以及脏器重量变化；未见肉眼观察变化；未见西维美林相关的眼部刺激性；未见临床观察中的体重、摄食量、眼科检查、体温、眼压、泪液分泌量、视觉电生理检查、眼底照相和组织病理学变化。

上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims (17)

1.西维美林或其盐或其立体异构体在制备眼用制剂中的应用，其特征在于，所述的眼用制剂中包括西维美林活性成分和维生素或类维生素物质，所述的维生素或类维生素物质为硫辛酸、维生素B12、泛酸钠或烟酰胺；

所述的维生素或类维生素物质为硫辛酸时，西维美林添加量为2.5％w/w，硫辛酸添加量为0.05％w/w。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，按重量份数计，所述的眼用制剂包含西维美林或其盐或其立体异构体0.1-10份和维生素或类维生素物质0-10份。

3.一种眼用制剂，其特征在于，按重量份数计，包含西维美林或其盐或其立体异构体0.1-10份和维生素或类维生素物质0-10份；

所述的维生素或类维生素物质为硫辛酸、维生素B12、泛酸钠或烟酰胺；

所述的维生素或类维生素物质为硫辛酸时，西维美林添加量为2.5％w/w，硫辛酸添加量为0.05％w/w。

4.根据权利要求3所述的眼用制剂，其特征在于，按重量份数计，包含西维美林或其盐或其立体异构体1-5份，所述维生素或类维生素物质的份数为0-2份。

5.根据权利要求4所述的眼用制剂，其特征在于，按重量份数计，包含西维美林或其盐或其立体异构体2-5份，所述维生素或类维生素物质的份数为0.01-0.1份。

6.根据权利要求2所述的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂的剂型包括滴眼剂、眼凝胶剂、眼膏剂、眼贴剂、眼膜剂、洗眼剂或眼内注射剂。

7.根据权利要求6所述的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂的pH值调节至4.0-9.0。

8.根据权利要求7所述的眼用制剂，其特征在于，所述眼用制剂的渗透压值调节至260-350mOsmol/kg。

9.根据权利要求7-8任一项所述的眼用制剂，其特征在于，pH值调节通过pH调节剂完成，所述pH调节剂包括盐酸、硼酸、磷酸、柠檬酸、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或多种；所述的渗透压值调节通过渗透压调节剂完成，所述渗透压调节剂包括氯化钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、甘露醇、甘露糖和右旋糖中的一种或多种。

10.根据权利要求9所述的眼用制剂，其特征在于，所述西维美林眼用制剂还包括溶剂，所述溶剂选自注射用水或缓冲液；其中所述缓冲液为缓冲剂的水溶液，所述缓冲剂包括碳酸盐类、磷酸盐类、柠檬酸盐类、醋酸盐类、硼酸盐类、巴比妥酸盐类和3-(N-吗啡啉)丙磺酸盐类中的一种或多种。

11.根据权利要求3所述的眼用制剂，其特征在于，所述的盐包括西维美林的无机盐或有机盐，所述立体异构体包括西维美林的顺式异构体、反式异构体或非对映异构体。

12.根据权利要求3所述的眼用制剂，其特征在于，包含含量为0.1-10％w/w的西维美林或其盐或西维美林异构体中的至少一种。

13.权利要求3-12任一项所述的眼用制剂在制备预防或治疗眼部疾病的药物中的应用。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述眼部疾病包括老花眼、高眼压症、干眼症、屈光不正、畏光或闭角型青光眼中的至少一种。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述眼部疾病包括：

(1)由于晶状体调节能力下降导致看近处物体时模糊的老花眼病症；

(2)由于前房角狭窄，导致眼内压增高，而引起头痛、视力减退，严重时可致失明的眼部疾病；还包括累及眼睛角膜、结膜组织的疾病；

(3)由于外界光线不能正常聚集在视网膜上的屈光不正的疾病；

(4)泪道疾病或泪腺疾病。

16.权利要求3-12任意一项所述的眼用制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将西维美林或其盐或其立体异构体加入部分溶剂中，混旋或再加入维生素类或类维生素物质，混旋；

(2)加入眼用制剂辅料，调节pH和渗透压；

(3)加入剩余溶剂定容即得。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，还包括：

(4)经微孔滤膜过滤、除菌，在A级风淋的无菌保护下进行吹灌封，无菌灌装成品。